Astrositlerde Kompartmana Özgü Dinamikler için Spontan Kalsiyum Görüntüleme

0 görüntüleme2:33 dk • June 17th, 2025

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Kayıt odasında nöron-astrosit karışık kültür içeren polimer kaplı bir lamel alın.

Bu transfekte edilmiş hücreler, plazma ve ER membranları üzerinde kalsiyuma duyarlı proteinleri eksprese eder ve hücre altı kalsiyum dinamiklerini izlemek için kalsiyumun bağlanması üzerine floresan verir.

Kalsiyum iyonları içeren ortam ekleyin ve buharlaşmayı önlemek için hazneyi kapatın.

Odayı bir floresan mikroskobu altına yerleştirin.

Kalsiyum iyonları kalsiyuma duyarlı proteinlere bağlanır. Mavi ışıkla ışınlandıktan sonra, ER dış zarındaki kalsiyuma duyarlı proteinler yeşil renkte floresan verir. Astrositleri bulmak için bu yeşil floresansı kullanın.

Ardından, yeşil ışıkla ışınlayın. Plazma zarındaki kalsiyuma duyarlı proteinler kırmızı floresan verir. Yeşil floresan sergileyen aynı astrositte kırmızı floresan varlığını onaylayın.

Plazma zarındaki kalsiyuma duyarlı proteinlerin hızlandırılmış görüntülerini ve ardından ER dış zarındaki kalsiyuma duyarlı proteinlerin görüntülerini kaydedin.

Seçilen astrositte bölmeye özgü spontan kalsiyum aktivitesini gözlemlemek için görüntüleri analiz edin.

Lck-RCaMP2 ve OER-GCaMP6f ile transfekte edilmiş hücreleri içeren lamel mikroskobun kayıt odasına monte edin. 400 mikrolitre görüntüleme ortamı ekleyin ve haznenin üstüne bir kapak yerleştirin. GCaMP6f ve ışık kaynağı için filtre ayarını seçin. OER-GCaMP6f'yi ifade eden astrositleri bulun.

Ardından, RCaMP2 için bir filtre seti ve ışık kaynağı seçin. Ve Lck-RCaMP2'nin aynı astrositlerde ifade edilip edilmediğini onaylayın. Lck-RCaMP2'nin hızlandırılmış görüntülerini iki dakika boyunca 2 hertz'de kaydedin ve görüntüleme verilerini kaydedin.

Bu değişiklikten sonra, filtre GCaMP6f için olana geri ayarlandı. OER-GCaMP6f'nin zaman atlamalı görüntülerini 2 hertz'de iki dakika boyunca kaydedin. Ardından görüntüleme verilerini kaydedin.

09:30

Görüntüleme Yerel Ca 2+ Kültürlenmiş memeli hücrelerinde sinyaller

İlgili videolar

0 Görüntüler

09:34

Kendisinin geçici eşleme ve parçacık analiz teknikleri intrasellüler Ca sinyal2 + in Situ ölçmek için uygulamaları

İlgili videolar

0 Görüntüler

07:14

Nöronal Kalsiyum Kullanımının In Vivo Subsellüler Görüntülemesi

İlgili videolar

0 Görüntüler

12:48

Astrositler Plazma Membran ve Küresel Hücre içi kalsiyum Dynamics civarında Ölçüm

İlgili videolar

0 Görüntüler

16:33

Kortikal Ağları Geliştirme Fonksiyonel Kalsiyum Görüntüleme

İlgili videolar

0 Görüntüler

09:10

Kalsiyum Görüntüleme için akut subventricular dilimi Dilimleri hazırlanması

İlgili videolar

0 Görüntüler

16:38

Akut Hipokampal Dilimler içinde Synaptically-uyarılmış astroglial ve Nöronal Cevaplarının İkili Elektrofizyolojik Kayıtlar

İlgili videolar

0 Görüntüler

12:47

Nöronal Ateşleme Oranlarının Manipülasyon tarafından Astrositik reseptörleri Plastisite Inducing

İlgili videolar

0 Görüntüler

12:19

Görüntüleme hücre içi Ca 2+ Genetik olarak kodlanmış Kalsiyum Göstergelerini Kullanma Yetişkin fareler ile Striatal Astrositler Sinyalleri

İlgili videolar

0 Görüntüler

10:35

Nöronal Dendrites beyin dilimleri içinde iki fotonlu kalsiyum görüntüleme

İlgili videolar

0 Görüntüler

Son güncelleme: 1 Ağustos 2026