JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Sinirbilim
0 görüntülenme • 2:33 dk. • June 17th, 2025
Kayıt odasında nöron-astrosit karışık kültür içeren polimer kaplı bir lamel alın.
Bu transfekte edilmiş hücreler, plazma ve ER membranları üzerinde kalsiyuma duyarlı proteinleri eksprese eder ve hücre altı kalsiyum dinamiklerini izlemek için kalsiyumun bağlanması üzerine floresan verir.
Kalsiyum iyonları içeren ortam ekleyin ve buharlaşmayı önlemek için hazneyi kapatın.
Odayı bir floresan mikroskobu altına yerleştirin.
Kalsiyum iyonları kalsiyuma duyarlı proteinlere bağlanır. Mavi ışıkla ışınlandıktan sonra, ER dış zarındaki kalsiyuma duyarlı proteinler yeşil renkte floresan verir. Astrositleri bulmak için bu yeşil floresansı kullanın.
Ardından, yeşil ışıkla ışınlayın. Plazma zarındaki kalsiyuma duyarlı proteinler kırmızı floresan verir. Yeşil floresan sergileyen aynı astrositte kırmızı floresan varlığını onaylayın.
Plazma zarındaki kalsiyuma duyarlı proteinlerin hızlandırılmış görüntülerini ve ardından ER dış zarındaki kalsiyuma duyarlı proteinlerin görüntülerini kaydedin.
Seçilen astrositte bölmeye özgü spontan kalsiyum aktivitesini gözlemlemek için görüntüleri analiz edin.
Lck-RCaMP2 ve OER-GCaMP6f ile transfekte edilmiş hücreleri içeren lamel mikroskobun kayıt odasına monte edin. 400
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin