26 Şubat 2012
Bu makale, farelerde öğrenme ve hafıza işlevleri değerlendirmek için bir değiştirilmiş otomatik bir aparat kullanılarak T-labirent test protokolü sunar.
Takip sistemli modifiye edilmiş Otomatik takım arkadaşları uygulaması gösterilmektedir. Bu uygulama, 25 santimetre yüksekliğinde duvarlara sahip beyaz plastik raylar ile inşa edilmiştir. MA, A alanına doğru otomatik iplikle altı bölgeye ayrılmıştır. Bunlardan biri STA bölmesidir.
S iki, takım arkadaşlarının benzerliğidir. A bir ve A iki sırasıyla sol ve sağ kolların altındaki alanlardır. P bir ve P iki alanları, farenin statik bölmeye dönebilmesi için A bir veya A iki alanlarından A bir alanına uzanan bağlantı pasajlarını karşılaştırır.
Bu videoda bir gösterim olarak kapılar otomatik olarak aşağıya doğru açılmaktadır, kapılardan biri ise manuel olarak çalıştırılmaktadır. Bu geliştirilmiş operatörler, ekip arkadaşlarının performansı sırasında moleküler fizyoloji ve genetik tekniklerde INB mikro SSIS kullanmamıza olanak tanır. N, bir dağıtıcı ile dönemlik olarak, gıda ödülü olarak kullanılan çapraz dönemlerle birlikte kullanılır; gıda dağıtıcı şişesini ve ardından atık şişesini iter.
Yem dağıtıcıdan yem tepsisine dökülen ve ardından arazi üzerine atılan peleti görebilirsiniz. Fare sensör tarafından algılanır ve bilgisayar tarafından kaydedilir. Uygulamada, video takip sisteminin programı peletleri otomatik olarak dağıtır, böylece oturum sonuna kadar herhangi bir işlem yapmanıza gerek kalmaz. CCD kamera, bilgisayar tarafından farenin davranışını görüntüyle kaydetmek için operatörün üzerine monte edilmiştir; apparatus %100 ışık düzeyinde aydınlatılmıştır.
Appell'in, çevreyle ilgili başlangıçtaki etnik OID odalarını azaltmak için ses geçirmez bir oda kullanmasını önerdik; operasyon seansları günlük kütle ağırlıklarıyla bir hafta önce başlatıldı ve her fareye döneme alışması için bir skor hızı sağlandı ve standart CHO besleme periyoduyla deney boyunca serbest besleme ağırlığının %80 ila %85'ini korumak için plaka eğitimi verildi. Hedef ağırlığa ulaşıldıktan bir gün sonra, doğrudan oda ışığından kaçınmak için ilk denemenin başlangıcından en az 30 dakika önce, farelerin bulunduğu tüm kafesler ses geçirmez odaya taşındı. Güncel ışıklardan kaçınmak için kafesler üst rafa yerleştirilmemelidir.
Fareleri operatörlere yerleştirmeden önce, ProAct Cues'a dayalı bir yanlılığı önlemek için süper hipokloröz suyu açarak operatörleri bir dil ile silmeniz gerekir. Bugün, her fare için merkezdeki altı yakın ruhu, altı Emir ile birlikte her bir yemek dağıtıcı tepsisine bir adet gelecek şekilde yerleştirin. Tüm fareleri tekli kafesler halinde Perus'a yerleştirin ve serbest kalmalarına izin verin.
Perus'u tüm kapılar kapalıyken veya 30 dakika öncesinden inceleyin. Tahkimden bir gün sonra, fareler tüm kapılar kapalıyken ve peletler yem kanalına yerleştirilmiş haldeyken günlük kan çekim işlemine tabi tutulacaktır. Eğer fare beş dakika içinde peleti tüketirse, fareyi sol kola yerleştirin; aksi takdirde fareyi sağ kola aktarın ve ön eğitime yeniden başlayın. Bu eğitim prosedürü günde beş kez tekrarlanır ve fare peletleri tüketene kadar devam edilir.
Dönemlerin %80'inden fazlasında fare statik bölmeye yerleştirilmiştir. Kapılar açılır ve fareye önce bir kola hızla girme seçeneği sunulur ve fare başlangıç bölmesine kendiliğinden döner. Ardından fareye gelecekte seçim yapma imkanı verilir.
Şimdi dördüncü kolun karşısındaki kol ısırılır. Ardından, fare kendiliğinden statik kutuya döner ve prosedür tekrarlanır. Bu işlem, hem kontrol hem de deney fareleri için günde 10 kez tekrarlanır.
Bu kriterle, ilk seçim ile tam seçim isimleri arasında 3, 10, 30 veya 60 saniyelik gecikmeler ekleyerek fareleri gecikmeli tutma görevinde daha ayrıntılı test edebilirsiniz. Bu; görevle ilgili bilgilerin, benzersiz fare kimliğinin, genotipinin, kulak delme deseninin ve elle uygulama programıyla elde edilen verilerin kaydedilmesi için hazırlanan bir çalışma sayfasıdır. Plug TM çevrimiçi giriş proje kimliğini seçin.
Örneğin, ana hat adı giriş oturumu. Örneğin, test tarihi, C kamerası tarafından yakalanan görüntü ile formül gibi giriş parametreleri, kesme süresi ve operatör boyutu. Ardından deneme kimliği girilir.
Örneğin, referans dosya adı için istasyon numarası veya bu görev ve isim açılır menüden seçilmeli, seçim numarası girilmeli, makine hatası için zaman sınırı ve ceza süresi belirlenmelidir. Ardından, yakalanan görüntüyle beraber parlaklık ve kontrast değerleri ayarlanarak özel kısa bir ikili görüntü oluşturulur. Son olarak, uygun ilgi bölgelerinin toplandığı kontrol edildikten sonra, program test edilmeye hazır hale getirilmesi için desen tamamlanabilir.
Fareyi nazikçe tutun ve başlangıç bölmesine yerleştirin. Başlat düğmesine ve kuvvet seçeneğine tıklayın. Başlattıktan sonra, bağırsaklardaki canlı ve ikili görüntüleri ve lezyonları görebilirsiniz.
Bu durumda, appellate bugün sağ koldayken ED alanındaydı, fare sayfaya girdi ve kapı açıktı. Tam seçimle başlayan süreç sol kola iletildi. Fare sol kola girdiği için yanıt doğru olarak işaretlendi.
Yanıtlara ilişkin sonuçlar, monitörün altındaki ışık penceresinde görüntülenir. Burada, örnek canlı görüntüler geri oynatıldığında, yeşil dairelerin doğru yanıtları, sarı dairelerin ise hatalı yanıtları belirttiği görülmektedir. Bir fareye, günde bir oturumda ardışık 10 deneme uygulanır.
Farelerin günlük eğitimi sonucunda, ortalama %80 doğru yanıt oranı, doğru yanıt gecikme süresi, oturumu tamamlama süresi, seviyeye olan mesafe ve hata sayısı program tarafından otomatik olarak hesaplanır. Her oturumdan sonra fare kendi kafesine geri bırakılır. Dispenser plakasını temizleyin ve plakaları bir kağıt havluyla silin; fabrika kesimlerinden kaynaklanan bir yanlılığı önlemek için suyu temizleyin. Kontrol ve deney fareleri için bu kriterler geçerlidir ve fareleri gecikmeli tutma görevinde daha fazla test etmek isterseniz, program ayarlarından gecikmeli dosyayı seçerek bir sonraki oturuma başlayabilirsiniz.
Prosedür, konumlandırma görevine oldukça benzerdir; ancak sol veya sağ kolun aksine, bu işlem her zaman post-retansiyon görevi ve uygulama programındaki gibi gerçekleştirilir. Bu görev için referans dosya adını seçin ve açılır menüden fare adını belirleyin, fareyi başlangıç bölmesine yerleştirin. Başlat düğmesine tıklayın ve seçilen liderle işlemi başlatın.
Bu durumda, seçilen kol her zaman Period ile eşleştirilir. Bir fare, günde bir oturumda genellikle art arda 10 ila 20 denemeye tabi tutulur. Fareler, ortalama %80 doğru yanıt kriterine ulaşana kadar günlük olarak eğitilir.
Sonuçlar, farelerden sonra otomatik olarak hesaplanır. Bu kriterlere göre, tutma belleğini değerlendirmek için oturumlar arasına gecikme eklenerek veya davranışsal canlılığı değerlendirmek için farelerle ek oturumlar gerçekleştirilebilir. Denemeler ve oturumlar boyunca karaciğeri karşı kola taşıyarak, zorunlu otomasyon görevinde alfa karmaşık hetero M tarafından düzeltilen ve tip LI tarafından kontrol edilen bu süreci videoya alındı.
Sonuçlar, mutantların çalışma belleğinin korunduğunu, ancak disk görevindeki performanslarının bozulduğunu göstermektedir; mutant fareler bu görevi yerine getirirken sorun yaşamışlardır. Buna rağmen, bir aylık bir gecikmeden sonra bile, basit öğrenmede herhangi bir bozulma göstermemişlerdir. Öte yandan, mutantlar performans bozukluğu sergilemişlerdir. Labirent Testi, çalışma ve referans belleğini değerlendirmek için en yaygın kullanılan davranışsal testlerden biridir.
Kemirgenlerde, çeşitli avantajlar sunan test düzeneğini geliştirdik. İlk olarak, sürgülü kapılar otomatik olarak açılmakta ve fare, her denemeden sonra S kutusuna kendi başına girebilmektedir. MA'nın bu otomasyonu, ödül ve yiyecek dağıtıcısını manuel olarak çalıştırmak için gereken zamanı ve çabayı azaltmaktadır.
Laboratuvarımızdaki bir deneyde, aynı anda dört ekip arkadaşı çalışabilmektedir. İkinci olarak, sürgülü kapılar aşağıya doğru açıldığı için cihaz; in vivo mikrodiyaliz, in vivo elektrofizyoloji veya in vivo optogenetik gibi baş kısmından kablolama gerektiren teknikleri kullanmamıza olanak tanır. Son olarak labirent, farenin geri gidememesi ve yalnızca ileriye veya diğer yönlere hareket edebilmesi için tasarlanmıştır; bu da farenin sorunsuz bir şekilde hareket etmesini sağlayabilir.
Bu videoda, modifiye edilmiş otomatik takım arkadaşı aparatını ve protokollerimizi tanıttık; yanımda Dr. Hiro Pash var. Laboratuvarımızda Hirotaka, bu filmde modifiye edilmiş otomatik aparat kullanılarak gerçekleştirilen protokolleri uygulamalı olarak gösterecek. Hirotaka, bu geliştirilmiş aparatla yapılan takım arkadaşı testi hakkındaki ilk izlenimin neydi?
İlk izlenimim, cihazın ve yazılım programının kullanımının çok kolay olduğu ve testin rahatlıkla gerçekleştirilebileceği yönündeydi. Sizce herkes bu operatörleri ve programı kullanabilir mi yoksa herhangi bir özel eğitim gerekir mi? Kısmen katılıyorum.
Operatörleri kontrol etmeyi herkes öğrenebilir. Test prosedürlerini gerçekleştirmek için özel bir eğitim gerekmemektedir. Testi gerçekleştirirken dikkat edilmesi gereken ipuçları veya hususlar var mıdır?
Evet. Vücut ağırlığını günlük olarak kontrol ederek, kütle ile verilen gıdaya yönelik motivasyonu korumaya özen gösteriyorum. Motivasyondaki bireysel farklılıklar, takım arkadaşlarının performansında varyasyonlara neden olabilir.
Bu makale, farelerde öğrenme ve bellek fonksiyonlarını değerlendirmek için modifiye edilmiş otomatik bir aparat kullanan T-labirenti testleri için bir protokol sunmaktadır. Sistem, test süreci boyunca hassas izleme ve ödüllerin otomatik olarak dağıtılmasına olanak tanır.
Otomatik T-labirenti zorunlu alternasyon ve sol-sağ ayrım görevleri, genetiği değiştirilmiş farelerde çalışma ve referans belleğinin güçlü, kantitatif değerlendirmesini sağlar. Bu platform, MSS ilaç keşfinde hedef doğrulama ve mekanistik risk azaltma için kritik olan yüksek kapasiteli, tekrarlanabilir davranışsal fenotiplemeye olanak tanır. In vivo elektrofizyoloji ve optogenetik ile entegrasyon, erken keşif aşamasından preklinik araştırmalara kadar olan translasyonel sürekliliği daha da artırır.
Bu otomatik T-labirent platformu, hedef doğrulama, öncü bileşik belirleme ve MSS ilaç geliştirme süreçlerindeki translasyonel araştırmaları destekleyerek, erken keşiften preklinik aşamaya kadar olan sürece uyum sağlar.