Retina Bölüm morfometrik Analizleri

Merhaba, ben Hong Kong Üniversitesi Anatomi Bölümü, Nörodejeneratif Hastalıklar laboratuvarından Regina. Bugün size retinal kesitlerin progresyon analizinin nasıl yapılacağını göstereceğim. Başlamadan önce, retinal numune kesitleri mikrostatta hazırlanmış ve H&E boyamasından geçirilmiş olmalıdır.

Ardından, retinal kesit dört bölgeye ayrılır. Bu bölgeler; üst periferik bölge, üst merkezi bölge, alt merkezi bölge ve alt periferik bölgedir. Bölgeler tanımlandıktan sonra, her bir bölgenin görüntüsü decor parlak alan mikroskobunda 10 kat 40 büyütmede alınır.

Şimdi retinal morfometrik bilgileri analiz etmeye hazırız. Bu oturumda, iç nükleer tabakanın retinal kalınlığının nasıl ölçüleceği gösterilecektir. Thorough Investigator adlı yazılımı açın.

40 tipi seçin, ardından ana araç çubuğundan görüntü aç seçeneğini belirleyin. Dosya sekmesi altında, analiz etmek istediğiniz retinal bölgenin görüntüsünü seçin. Ana araç çubuğundaki açılır menüden kontur hattı tipini seçin.

Otomatik hareketin açık olduğundan emin olun. Yakınlaştırma butonuna tıklayarak görüntüyü büyütebilirsiniz. Görüntüleme boyutunu küçültmek için uzaklaştırma butonunu kullanabilirsiniz.

İzleme ve numune, hareket düğmelerine tıklanarak dört farklı yönde hareket ettirilebilir. İzleme penceresinde sağ tıklayın ve basit çatlak izleme seçeneğini seçin. İç katmanın iç sınırı boyunca kontur hattını çizin.

Bir hata yapıldığında, izleme penceresinde işlemi durdurun ve son çizim noktasını silmek için geri al düğmesine basın. Çizginin son noktasına kadar izleme işlemine devam edin. Çizim tamamlandığında, izleme penceresinde işlemi durdurun, açık bir kontur seçin ve yakınlaştır seçeneğine tıklayarak görüntüyü başlatın.

İzleme penceresinde sol tıklama düğmesine basın. Görüntüyü büyütmek için, Marcus'taki iki işaretleyici çubuğunda bulunan bir işaretleyiciyi seçin. Birleşim noktasında.

Tüm işaretleyicileri ekledikten sonra, marker two çubuğu konumundaki işaretleyici simgesini ve imleci seçin. İşaretleyicilerden birinin merkezinde, izleme penceresindeki sağ tıklama sekmesinin altında hızlı açı ölçümünü (quick measure angles) seçin ve ardından sürekli (continuous) seçeneğini belirleyin. Seçilen işaretleyiciye komşu olan bir başka işaretleyicinin merkezine tıklayarak açıyı ölçün.

Bir çizgi segmentinin sonu için, merkez noktasına en yakın konuma taşıyın. İşaretleyici ve çatlak. Lastik bandı çizgisini, inia tabakasının dış sınırına kadar tekrar uzatın ve açıyı 90 derece olana kadar ayarlayın.

İstenen sol çatlağa ulaşın. Tıkladıktan hemen sonra açı ölçümünü gösteren bir diyalog penceresi açılacaktır; bu pencereyi konumlandırın. Fareyi sol tarafta sabit tutarken enter tuşuna basın.

Çizgi bir uçtan yeni seçilen uca doğru çizilecek şekilde izleme penceresine tıklayın. İzleme penceresinde çizgiyi kesin ve açık bir kontrol seçin. Her bölgede, dört çizginin çizileceği iç nükleer tabaka parmaklarından dört ölçüm almamız gerekmektedir.

Kontrol tabanından dik olarak iç çekirdek tabakasının dış sınırına doğru bir çizgi çizin ve sınırı net bir şekilde görebilmek için görüntüyü yakınlaştırın. Eğer çizginin ucu iç çekirdek tabakasının dış sınırında değilse, düzenleme modunda bunları birbirine bağlayabilir veya çizgiyi kısaltabiliriz. Düzenleme modunu seçin ve çizgiyi belirleyin.

Çizim penceresine tıklayın ve elektrik kontrolündeki arama noktasını seçin; noktalar aynı hat boyunca düzenlenirken dış sınıra bir nokta ekleyin. Orijinal noktayı silin. Böylece yeni bir kaldırma hattı ile hizalama elde edilebilir.

Uzaklaştırma düğmesine tıklayarak görüntünün boyutunu küçültün. Düzenleme modunun seçimini kaldırın ve son çizgi segmentini çizin. Sıralama çizgilerini çizdikten sonra düzenleme modunu seçin.

İzleme penceresine sağ tıklayarak dört çizgi segmentini uygun şekilde yerleştiriyoruz. Şimdi CONT ölçüm düğmesine basarak dört ölçümü elde edebiliriz. Bu dört ölçümü seçin ve kopyala seçeneğine tıklayarak bir uzmana yapıştırın.

Dosya sekmesi altındaki farklı kaydet seçeneğine tıklayın. İzleme verileri bir veri dosyası olarak kaydedilebilir. Bu bölümde, kırmızı kuyruklu gagan hücrelerinin sayısını belirleyeceğiz; görüntü aç seçeneğini seçin.

Dosya sekmesi altından, analiz etmek istediğiniz retinal bölgenin uygun bir görüntüsünü seçin. Öncelikle, hangi hücrelerin canlı ve hangilerinin ölü hücreler olduğunu belirlememiz gerekir. Yaklaşık olarak yuvarlak şeklinde olan, belirgin bir sitoplazmaya ve net bir şekilde gözlemlenen bir çekirdeğe sahip hücreler, canlı retinal gangliyon hücreleri olarak kabul edilir.

Küçük ve yoğun hücrelerin olduğu bu bölgeler, ilgili hücre olarak değerlendirilir. Ana araç çubuğundaki açılır menüden kontur çizgisi tipini seçin. Sol fiber tabakasının kenarı boyunca bir çizgi çizin ve "açık kontur" seçeneğiyle iz sürme işlemini gerçekleştirin.

Her bir uca, biri hattın ucuna diğeri ise ekibin yanındaki konuma gelecek şekilde birer işaretleyici ekleyin. İşaretleyici iki çubuğundaki işaretleyici simgesini seçin. İmleci işaretleyicilerin merkezine konumlandırın.

Üst kısımdan, sekme altındaki hızlı açı ölçümünü seçin. Ardından izleme penceresinde sağ tıklayıp sürekli seçeneğini belirleyin; sadece lastik bant çizgilerini kullanarak 19 derecelik bir açı ölçün. Diyalog kutusu çıktıktan hemen sonra enter tuşuna basın.

Ancak farenin aynı anda hâlâ sol tarafta olduğunu unutmayın. Uçtan yeni bir çizginin özellikle uzatılabilmesi için izleme penceresini kırın. İzleme penceresinde kırın ve açık bir kontrol seçin.

Diğer uçta da tam olarak aynı şekilde yeni bir çizgi çizin. İçinde retina gangliyon hücre sayısının sayıldığı iki sınır oluşturmuş olduk. Bir belirteç türü seçin ve her beş hücreye bir tane ekleyin.

Hücrenin temas etmediği bir sınırı dışlama hattı olarak seçin. Ölü hücreler için başka bir işaretleyici türü belirleyin. Her bir işaretleyici türündeki alan sayısı, ilgili işaretleyici simgesinin yanında görüntülenecektir.

Marker iki çubuğunda, düzenleme modunu seçin ve kontur temel çizgisini belirleyin. İzleme penceresinde çizgiyi kesin ve hattı yeniden sonlandırın. Kontur temel çizgisinin adı, kontur ölçüm düğmesine basılarak elde edilebilir.

Hücre sayısı daha sonra membran milimetresi başına ifade edilebilir. Şimdi, "dosya" sekmesi altından kaydedelim. İzleme ve marker verileri bir veri dosyası olarak kaydedilebilir.

Bu bölüm, bir retinal ganglion hücresinin hücre gövdesinin nasıl ölçüleceğini gösterecektir; seçili görüntüyü açın. Dosya (file) sekmesi altında, analiz etmek istediğiniz istenen bir retinal bölgenin görüntüsünü seçin. Önceki bölümde açıklanan kriterlere uygun canlı bir retinal ganglion hücresi seçin.

Ardından canlı hücrede, ana araç çubuğundaki seçim alanından kontur hattı tipini belirleyin. İzleme penceresinin sağ alt köşesindeki hücre çevresi boyunca bir kontur hattı çizin ve "konturu kapat" seçeneğini seçin. Hücrenin alanı, kontrol ölçüm iletişim kutusundaki alan öğesinin altında görüntülenecektir.

Bu video, retinayı objektif olarak analiz edebilecek üç basit yöntemi göstermiştir. Umuyoruz ki bu video faydalı olacaktır.