Name: Endojen NADH Floresans iki-foton Imaging tarafından Fare Serebral Korteks olarak Microregional Hipoksi Algılama (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-02-21T12:00:00.000+00:00
Duration: 12 min 3 s
Description: Öğrenin fare serebral korteksinde mikrobölgesel hipoksiyi iki-foton görüntüleme ile NADH floresansı kullanarak canlı olarak görselleştirme yöntemini. Bu teknik yüksek çözünürlüklü oksijen arzı analizi sağlar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Biz kafa plaka tasarımı için Dr Maiken Nedergaard (Rochester Üniversitesi Tıp Fakültesi) teşekkür ederim. Iş SD (R01DA026325 ve P30AI078498 ve KK (DANA vakıf Beyin ve Immunoimaging programı, Amerikan Kalp Derneği 0635595T ve ALS Derneği [# 1112)] için vakıf bursları) ile NIH tarafından desteklenen ödül olmuştur.

1. Görüntüleme için hayvan hazırlanması Not: Biz yetişkin C57BL fare kullanın. Farklı transgenik suşları araştırma sorusu bağlı olarak kullanılabilir. Mikrovasküler cerrahi ve pulse oksimetre beyaz kürk fareler (örneğin FVB suşu) de kolaylaşır. <ol><li> Tezgahında cerrahi sitesi hazırlayın. Tüm cerrahi aletler% 70 etanol ile otoklav veya dezenfekte edilmesi gerekir. </li><li> Bir rektal prob takın ve sürekli işlem boyunca hayvanın vücut ısısını ölçmek </li><li> Başlangıçta% 5 izofluran kullanılarak, fare uyuşturmak. 15-30 s, hayvan hareket değilken, bir ısıtma yastığı (37 ° C) üzerine yerleştirin ve izofluran% 1.3-1.5) içeren havanın sürekli teslim için bir yüz maskesi uygulayın. Hayvan bir ağrı uyaran (örneğin kuyruk tutam) yanıt vermiyor emin olun. </li><li> Kuru havaya maruz kalmayı önlemek için, farenin gözleri kapatmak için yapay gözyaşı jeli kullanın. </li><li> Bir elektrik ustura kullanarak, saç f kaldırmakrom baş ve hem de uyluk. 2 dakika uyluk saç çıkartıcı (örneğin Nair) uygulayın ve ardından kalan saç kaldırmak için dikkatlice silin. Bu, uyluk oksimetri için kullanılacaktır. </li><li> Bir 10% povidon-iyot solüsyonu ve% 70 etanol ile kafa derisi dezenfekte. </li></ol> 2. Açık kafatası kafatası pencere hazırlanması <ol><li> Kafatasına kaudal 5 mm başlayarak, makasla saçlı bir kesi yapmak ve bir santimetre ilerlemek. Kafatası açığa taraf için cilt taşıyın. </li><li> Kafatasının üst membranlar kaldırmak için kafatasının üst% 10 demir klorür çözümü uygulayın. Fazla solüsyonun dindiriniz ve 45 ° açı # 5 cımbız ile uzak membranlar kazıyın. Bu baş plakası güvenli bir şekilde (adımları # 4-6) kafatası eklenebilir sağlamak amacıyla, dikkatle sitesi hazırlamak için önemlidir. </li><li> Bir diseksiyon mikroskobu kullanarak, ilgi alanlarını belirlemek. Kraniyal sütürler kaçınılmalıdır unutmayın, çünkü kafatası cBir bu doğrultuda unpredictably bölünürler. </li><li> Kafası plakanın penceresi (Şekil 1) kenarlarında hızlı yapıştırıcı ince bir tabaka (örneğin Locktite 454) uygulayın. Ilgi alanı penceresinde maruz kaldığı şekilde kafası plakası yerleştirin. Kafa plaka üzerinde hafif bir basınç uygulayın. Hızla tutkalın polimerize etmek diş çimento küçük bir miktar geçerlidir. Tutkal polimerize ederken 10 saniye tutun. </li><li> Kafa plakası ve kafatası mühürlemek için pencerenin kenarları hızlı tutkal küçük bir miktar geçerlidir. Diseksiyon kapsamında hayvan sahibine kafa plaka vidalayın. </li><li> 6000 rpm ve bir IRF 005 matkap ayarlanmış Microtorque II matkap kullanarak, kafatası ve kafa plaka tüm ekstra tutkal kaldırın. Aksi Cam örtü eki engel olacağından kafa plaka üzerinde kalan herhangi bir tutkal, çıkarılmalıdır. </li><li> 1000 devirde matkap ayarlayın ve çapı ~ 5 m, kafa plaka penceresi içinde bir daire yaparak kafatası delme başlatmakm. Eğer çok yumuşak kurşun kalem ile çizim sanki ışık süpürme hareketleri kullanın. Basınçlı hava ile kemik tozu almak için her 20-30 saniyede bir delme durdurun. Not: kafa plaka açılış şekli dairesel bir kafa pencere oluşturmak için kolaylaştırır matkap ucu (sol ve sağ elini cerrah için), ek erişim sağlar. Buna ek olarak, iki tek biçimli delikler ilave polarografik ya elektrofizyolojik ölçümler için kafatası penceresi altında beyin doku içine bir Clark-elektrot veya cam elektrot eklemek için gerekli alanı sağlar. </li><li> Delme ilerledikçe, bir yuva merkezinde bozulmadan kafatası etrafında meydana gelir. Inceltilerek kafatası yoluyla poke, ancak bu bile kalınlığı bu yuva yapmak için dikkatli olun. Büyük damar-onlar bozulmaması ve mümkünse, hatta dokunulmaz olmamalıdır çevresinde ekstra dikkatli olun. </li><li> Pencerenin ortasında ("off fiske") kemik kaldırmak için cımbız # 3 biri "bacak" kullanın. Sunni bir damlapenceresinde ial beyin omurilik sıvısı (aCSF). </li><li> Hafifçe yumuşak doku kâğıdın bir köşesine (örneğin Kimwipe) kullanarak aCSF silin. Genellikle dura penceresinin kenarı etrafında bir veya daha fazla yerde bozulmuştur. Bu sitelerden birini başlayarak, hafifçe kaldırın ve sonra 45 ° açılı cımbız # 5 kullanarak, beyin yüzeyindeki dura çıkarın. Dura kaldırarak başlamak için adresinden site seçerken, büyük damar bitişik alanlarda kaçının. Kanama oluşursa, aCSF bir damla uygulamak ve durdurmak için küçük kanama için 2-3 dakika bekleyin. </li><li> % 0.07, düşük erime aCSF içinde çözülmüş agaroz) vücut ısısına eritilmiş agaroz getir hazırlayın. Beynin yüzeyinden aCSF fazlalık dindiriniz. Penceresinde agaroz dökün ve bir cam slayt ile kaplayın. Cam ve kafa plaka arasında bir temas kurmaya hafifçe cam basın ve agaroz katı kadar 10-20 saniye bekleyin. </li><li> Cımbız ve yumuşak doku kağıt kullanarak cam kapak aşırı agaroz çıkarın. </li><li> Küçük bir koyuntutkal kafa plakasına cam cam yerinden hızlı tutkal miktarı. Tutkal (Şekil 1) katılaşmaya diş çimento az miktarda uygulayın. </li></ol> 3. İntravenöz enjeksiyon ve kan oksijenlenme izleme Not: Biz rutin intravenöz Texas kırmızı uygulaması yerine kuyruk veni için femoral ven kullanıldı. Femoral ven enjeksiyonu boya güvenli ve tekrarlanabilir bolus enjeksiyonları sağlamak olmasıdır. <ol><li> Kısmen sol uyluk iç ortaya çıkarmak için aşırı hayvan çevirin. Bu pozisyonda hayvan sabitlemek için bant kullanabilir. </li><li> Antiseptik fırçalama ve sonra cilt% 100 etanol de geçerlidir. </li><li> Diz pubis eklemi için medial uyluk boyunca bir kesi yapmak. Cımbız # 5 kullanarak künt diseksiyon ile ayırın yumuşak dokular. </li><li> Texas Red (2.5 mg / ml), 130 ul 1 ml şırınga doldurun. Yeni bir iğne (gösterge 30) takın ve konik uydurarak, 30 ° dikkatlice kıvırın. Iğne wi doldurunth Texas Kırmızı çözüm. </li><li> Bir diseksiyon mikroskobu altında, femoral ven içine iğne takın ve Texas Kırmızı 100 ul enjekte. İğneyi çıkarın ve hafifçe kanamayı durdurmak için gazlı bez ile ven basın. </li><li> 4-0 sütür kullanarak cilt kapatın. </li><li> Kan SpO2 sürekli izlenmesi (yeterli kan oksijenasyonu sağlamak için) sağ uyluk (hangi saç önceden kaldırıldı) üzerinde oksimetre probu yerleştirmek için. </li></ol> 4. İki foton görüntüleme Not: Bir uyarım kaynağı olarak Sa lazer: Biz bir Spectra-Fizik Maitai HP DeepSee femtosaniye Ti ile Olympus Fluoview1000 multiphoton görüntüleme sistemi (dik) kullanın. Görüntüleme için, biz × 10 NA 0.45 (Zeiss C-Apochromat) veya × 25 NA 1.05 (Olympus XLPlan N) su daldırma hedefleri kullanın. Biz 512 bir çözünürlük × 512 piksel piksel 2 ms'den bekleme süresi de 12-bit derinliğinde görüntüleri çekin. NADH ve Texas-Kırmızı-dekstran aynı anda 740 nm'de uyarıldığı ve flor edilirescence bir dikroik ayna / yakın IR-engelleyici filtre kombinasyonu kullanarak ikaz ışık ayrılır (FF665-DI01; FF01-680/SP, Semrock, Rochester, NY, ABD) bir dikroik ayna kullanarak iki kanal ayrılmıştır (505DCXRU, Chroma , Rockingham, VT, ABD), ve bandpass (NADH-Semrock FF460/80Texas-Red-dextran-Semrock FF607/36) süzülür. Amaç sonra ölçülen Lazer güç katmanı I görüntüleme ve katman II görüntüleme için 20-50 mW için 10-20 mW olarak ölçüldü. <ol><li> Mikroskop sahneye cerrahi hazırlanan fare aktarın. Yüksek büyütme iki foton anjiyografi ile kayıt için bir referans haritası olarak kullanmak 4x büyütme ile aydınlık alan aydınlatma kullanılarak kranyal pencere sitenin bir ilk fotoğrafını çekin. </li><li> × 10 büyütmede kullanarak ilgi alanda yakınlaştırma. Kortikal tabakalar halinde bir ilgi alanı seçin I veya II (pial yüzeyinden 150 mikron). Yüksek büyütmede arzu edilirse, x 25 hedefi kullanımı </li><li> (Figu zaman serisi kayıt Başlat) 2 yeniden. Biz görüntü kalitesini artırmak için 3-5 kare ortalama kullanmanızı öneririz. </li><li> Hayvan solunum olduğu hava 50% N2 ekleyerek hipoksemi indüklemek. Bu% 10 O2 seviyesi getirecektir. Oksimetre verileri izleyerek hipoksemi doğrulayın. </li><li> Hipoksemi (örneğin, 30 saniye) ile zaman serisi kaydetmeye devam edin ve normal O2 seviyesi geri yüklendikten sonra. </li><li> , Tespit ölçme ve kan damarları çevresinde hipoksi ve oksijenli doku silindir alanı miktarının tarafından oksijen dağılımının hesaplanması için veri toplamak. </li></ol> 5.. Veri işleme <ol><li> Krogh doku silindir yarıçapı R. Bu kan damarının merkezi ve yüksek NADH floresans tespit edildiğinde hangi sınırı arasındaki mesafe ölçülerek (Şekil 3) elle de yapılabilir belirleyin. </li><li> Alternatif olarak, doku silindirin yarıçapı R hesaplama araştırmacı bağımsız yarı otomatik belirlenmesi ve merkezi blo kullanınek formu daha önce 1 açıklanan ve bu protokol tartışma bölümünde özetlenmiştir od damar r. </li><li> Açık erişim görüntü analiz yazılımı, örneğin ImageJ kullanılarak hipoksi bölgeyi belirlemek. Bunu yapmak için, yükseltilmiş NADH doku floresans ile alanı ölçmek sonra yüksek NADH yoğunluğu alanı delineates bir eşik tanımlamak, NADH sinyal kullanmak ve. </li></ol> 6. Temsilcisi Sonuçlar Şekil 2 geçici hipoksemi (Bu Şekil PDF versiyonu için, seçilen fotoğraflar kullanılmıştır) sırasında NADH / anjiyografi görüntüleri bir video gösterir. Oksijen konsantrasyonu 3 dakika süreyle% 21 den% 10 'e düşürülmüştür edildi. Deneysel hipoksemi Bu düzeyde serebral korteks şiddetli hipoksi ikna etmek için yeterlidir. Hipoksi arteriyel kan kaynağından uzak olan bölgelerde başlangıçta, NADH floresan bir artışa yol açtı. Keskin NADH doku Notkortikal mikro oksijen difüzyon gözlemlenebilir doku sınırları temsil sınırları. Şekil 3 içinde görüntü serebral damarları çevreleyen oksijen difüzyon sınırların geometrisi gösterir. Bu, daha önce tarif edildiği gibi 1, bu sınırların gelen silindir çapı Krogh anlamak için mümkündür. <img alt="Şekil 1" src="/files/ftp_upload/3466/3466fig1.jpg" data-altupdatedat="1788238805000" data-alt="Şekil 1"> Şekil 1. Görüntüleme için hazırlanan kraniyal pencere ile (A) Fare. (B) baş plaka boyutları. <img alt="Şekil 2" src="/files/ftp_upload/3466/3466fig2.jpg" data-altupdatedat="1788238805000" data-alt="Şekil 2"> Şekil 2. Endojen NADH yeşil floresan yaklaşık 50 um pial yüzeyinin altında, kranial pencereden iki foton görüntüleme ile görüntülendi. Kan damarları Texas Red dekstran görselleştirilmiştir. Solunan havadaki oksijen 3 dk süreyle% 10 düşürüldü, sonra% 21 için restore edildi. Ölçek çubuğu: 50μm. &lt;img alt = "Şekil 3" src = "/ files/ftp_upload/3466/3466fig3.jpg" /&gt; Şekil 3. NADH floresans sınırları Geometri. Sarı anahat fonksiyonel hipoksi sınırı gösterir; mavi daireler tahmin oksijenli (Krogh) silindir göstermektedir. Mavi çizgiler silindir yarıçapları gösteriyor; numaraları mikrometre olarak yarıçapları gösteriyor.

<ol><li>Kasischke, K. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Two-photon+NADH+imaging+exposes+boundaries+of+oxygen+diffusion+in+cortical+vascular+supply+regions%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Cereb.+Blood.+Flow.+Metab%22%5BJournal%5D)">Two-photon NADH imaging exposes boundaries of oxygen diffusion in cortical vascular supply regions.</a> J. Cereb. Blood. Flow. Metab. 31, 68-81 (2011).</li>
<li>Ndubuizu, O., LaManna, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Brain+tissue+oxygen+concentration+measurements%5BTitle%5D)+AND+%22Antioxid.+Redox.+Signal%22%5BJournal%5D)">Brain tissue oxygen concentration measurements.</a> Antioxid. Redox. Signal. 9, 1207-1219 (2007).</li>
<li>Sharan, M., Vovenko, E. P., Vadapalli, A., Popel, A. S., Pittman, R. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Experimental+and+theoretical+studies+of+oxygen+gradients+in+rat+pial+microvessels%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Cereb.+Blood.+Flow.+Metab%22%5BJournal%5D)">Experimental and theoretical studies of oxygen gradients in rat pial microvessels.</a> J. Cereb. Blood. Flow. Metab. 28, 1597-1604 (2008).</li>
<li>Sakadzic, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Two-photon+high-resolution+measurement+of+partial+pressure+of+oxygen+in+cerebral+vasculature+and+tissue%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Methods%22%5BJournal%5D)">Two-photon high-resolution measurement of partial pressure of oxygen in cerebral vasculature and tissue.</a> Nat. Methods. 7, 755-759 (2010).</li>
<li>Vishwasrao, H. D., Heikal, A. A., Kasischke, K. A., Webb, W. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Conformational+dependence+of+intracellular+NADH+on+metabolic+state+revealed+by+associated+fluorescence+anisotropy%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Biol.+Chem%22%5BJournal%5D)">Conformational dependence of intracellular NADH on metabolic state revealed by associated fluorescence anisotropy.</a> J. Biol. Chem. 280, 25119-25126 (2005).</li>
<li>Kleinfeld, D., Mitra, P. P., Helmchen, F., Denk, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fluctuations+and+stimulus-induced+changes+in+blood+flow+observed+in+individual+capillaries+in+layers+2+through+4+of+rat+neocortex%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci.+U.+S.+A%22%5BJournal%5D)">Fluctuations and stimulus-induced changes in blood flow observed in individual capillaries in layers 2 through 4 of rat neocortex.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. 95, 15741-15746 (1998).</li>
<li>Brown, W. R., Thore, C. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Review%3A+cerebral+microvascular+pathology+in+ageing+and+neurodegeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Neuropathol.+Appl.+Neurobiol%22%5BJournal%5D)">Review: cerebral microvascular pathology in ageing and neurodegeneration.</a> Neuropathol. Appl. Neurobiol. 37, 56-74 (2011).</li>
<li>de la Torre, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Impaired+brain+microcirculation+may+trigger+Alzheimer%27s+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Neurosci.+Biobehav.+Rev%22%5BJournal%5D)">Impaired brain microcirculation may trigger Alzheimer's disease.</a> Neurosci. Biobehav. Rev. 18, 397-401 (1994).</li>
<li>Brown, C. E., Boyd, J. D., Murphy, T. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Longitudinal+in+vivo+imaging+reveals+balanced+and+branch-specific+remodeling+of+mature+cortical+pyramidal+dendritic+arbors+after+stroke%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Cereb.+Blood.+Flow.+Metab%22%5BJournal%5D)">Longitudinal in vivo imaging reveals balanced and branch-specific remodeling of mature cortical pyramidal dendritic arbors after stroke.</a> J. Cereb. Blood. Flow. Metab. 30, 783-791 (2010).</li>
<li>Wilson, D. F., Erecinska, M., Drown, C., Silver, I. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+oxygen+dependence+of+cellular+energy+metabolism%5BTitle%5D)+AND+%22Arch.+Biochem.+Biophys%22%5BJournal%5D)">The oxygen dependence of cellular energy metabolism.</a> Arch. Biochem. Biophys. 195, 485-493 (1979).</li>
</ol>

Yazarlar ifşa hiçbir şey yok.

Oksijen difüzyon hakkında yüksek uzaysal çözünürlüğü bilgilerin beyindeki kan akışını beyin hücreleri için oksijen sağlamak, ve metabolik talebi karşılamak için nasıl düzenlendiği anlamak için önemlidir. Clark-tarzı cam elektrotlar kullanılarak Geleneksel polarografik oksijen ölçümleri invaziv ve düşük uzaysal çözünürlüğü 2-3 ve önemli (ikinci aralık) tepki süresine sahip. Şimdiye kadar beyin dokusunda pO 2 ölçmek için sadece non-invaziv yöntem heyecanlı prob çürüme oranı oksijen konsantrasyonu 4 orantılıdır fosforesans su verme vardır. Bu yöntem, doğru oksijen konsantrasyonu sağlar, ancak özel bir boya ve bir teknik olarak gelişmiş fosforesans ömrü görüntüleme sistemi gerektirir. Burada, iki flurescence kanalları ile standart bir iki foton görüntüleme sistemi üzerinde yapılabilecek basit, basit bir yaklaşım göstermektedir. Bizim yaklaşımımız içsel bir doku sinyali 5 yararlanırnd sadece kortikal mikrodolaşımında zıt görselleştirme gerektirir. Çünkü fonksiyonel oksijen konsantrasyonu 1 sınırlamaya NADH floresans doğrusal olmayan, esasen ikili artış, içsel NADH floresan tek anlamlı, metabolik sınırlayıcı hipoksi ile yerlerde görülmektedir arttı. Önemli bir ima kortikal mikrodamarlar oksijen difüzyon doku sınırları doğrudan endojen NADH floresans silindirik şeklindeki yoğunluğu değişiklikler gözlenebilir olmasıdır. Bir kan damarı çevreleyen doku oksijenli hacmi tanımlamak silindirik şeklindeki yapılar kavramı Ağustos Krogh tarafından ortaya atıldı ve son zamanlarda deneysel iki-foton NADH görüntüleme 1 kullanarak gözlenmiştir, çünkü Krogh silindir gibi bu yapıların bakın. Krogh silindir görüntüleri görüntü kareleri bir z-yığını alarak 3D toplanabilir. Bunlar delici arteriyoller çevresinde, özellikle belirgin olup münasip wit olanh tükenmiş periarteriolar doku silindir 1,4 kısımdır. Krogh doku silindirin yarıçapı R objektif bir tespiti (Bölüm 5.2) biz silindir merkezi ve Matlab işlevi &quot;improfile&quot; kullanarak dış sınırı arasındaki iyi tanımlanmış bir kesimi içinde radyal piksel yoğunluk değerleri ölçülür sağlamak. Segmentin dış sınır görünür sınır ötesinde bir güvenlik payı ile genişletmek için tercih edilmelidir. Sinyal-gürültü düzeyini geliştirmek için biz 1 ° adımlarda görünür silindir kesimi kapsayacak şekilde gerekli tüm radyal hatları üzerinden averageed. Segmenti içinde çıkan ortalama radyal yoğunluk profili görünür doku sınır R karşılık dik bir artış sergiledi. Biz ortalama radyal yoğunluk profili için bir sigmoid fonksiyonu (örn. Boltzmann fonksiyonu) uyacak ve R bir tanımı olarak dönüm noktası (ayrıca x 0 olarak da bilinir) kullanılır. Karşılık gelen iki-pHoton microangiography (Texas-kırmızı) silindir merkezinde bir tek merkezi damar ve kesiti göstermektedir. Merkezi damar çapı doğrudan r belirlemek için de uygulanabilir. İki foton NADH görüntüleme kortikal microangiography eş zamanlı yüksek çözünürlüklü görüntüleme aynı uzaysal çözünürlüğü sağlar. Bu yöntemin kantitatif uygulama için önemli bir özelliği, p NADH floresans artış 50 3.4 arasında olduğu ölçülmüştür olmasıdır ± 0.6 mm Hg 1 ve 2 microregional doku pO bir fonksiyonu olarak NADH floresans yoğunluğunu matematiksel olarak tarif edilebilir bir sigmoidal fonksiyonu. . Bu tekniğin bir hipoksi (% 10 havadaki oksijen miktarının azalmasıyla tarafından) en savunmasız olduğu beyin alanları belirlemesine olanak sağlar göstermektedir. Biz de oksijen difüzyon basit bir geometrik perivasküler bir yol izler olduğunu göstermektedir. Bir critBu yöntem için ical adım kraniyal pencere hazırlık kalitesidir. Cerrahi maruz bölgeye kan akışını rahatsız etmemek için asgari zararla üretmek gerekir. Bir endişe bir cerrahi tehlikeye hazırlanmasında, pencerenin altında kortekste anlamlı bir deney engellediği bilgisi, başlamak için hipoksik olabilir olmasıdır. İyi hazırlanmış kafa penceresi tüm gemi tiplerinde canlı kan akımı ve kenarlarında belirgin kanama ile bozulmamış büyük ve küçük kan damarları olmalıdır. Normoksik koşullar altında (PaO2 80-100 mmHg, Sp O2% 97-99) beyin dokusunda yüksek NADH floresan ile göze çarpan, parlak doku yamalar olmadan tek tip, homojen NADH floresan sergilemesi gerekir. Bizim yaklaşım temel bir fiziksel kısıtlama derinlemesine nüfuz sınırlıdır. Beyinde mavi-yeşil NADH floresans bu dalga boylarında hemoglobin emilimi ve doku saçılma hızla azalırlar. Hatta yüksek sayısal açıklık ile (örneğin 1.05) suDaldırma amaçları iki-fotonlu NADH görüntüleme anda kortikal tabakalar I ve II ile sınırlıdır. Ya da beyaz cevher yakınlık enerji metabolizmasını olasılıkla gri madde farklı olacaktır, çünkü bu sınırlama bilimsel olarak geçerlidir. Bununla birlikte, bu tabakalar IV-VI ya da beyaz madde yolları veya striatum olarak subkortikal yapılar gibi derin kortikal yapıların incelenmesi olarak vivo 6 fare korteksi açıklanan özel mikromercekten kullanımını gerektirir. Bu tür fonksiyonel hiperemi ve kapiller akı oranlarının tespiti 7 analizi gibi diğer ölçümler ile bir araya geldiğinde oksijen difüzyon sınırları NADH tabanlı ölçümü özellikle yararlı olabilir. Örneğin, bu teknik felç, Alzheimer hastalığı (AD) modellerinde hipoksi canlandırmak için adapte edilebilir. Oksijen difüzyon basit bir geometri bir kapiller yoğunluk de olduğu koşullarda mikrovasküler yatak oksijen gradiyenti tahmin sağlar8 (örneğin, MS 9) artmış ve azalmış kapiller yoğunluğu ile beyin dokusu bölgelere microstrokes nedeniyle hipoksi hasar riski olup olmadığını incelemek. Dokunun hipoksi ve müteakip nöronal ölüm ya da kılcal remodeling 10 arasındaki görüntü yeteneği microregionally ayrıca bir doku microstrokes geometrisi ve boyutu incelemek ve hipoksi oluştuğu doku hacmi belirlemek için olanak sağlar, hem de ilişki. Endojen NADH floresans artışlar akut mitokondriyal disfonksiyon doğrudan sonucu olduğundan Son olarak, bu yöntem sinir enerji metabolizması 11 ve mitokondriyal disfonksiyon için bir proxy için belirli bir muhabir olarak NADH görüntüleme kullanma fırsatı yaratıyor. Sonuç olarak, endojen NADH floresans iki-fotonlu görüntüleme hem normal altında beyinde oksijen ve tüketim anlamak için kullanılabilecek bir basit, talepkar olmayan bir araçtırve patolojik eyalette.

<table border="1"><tbody><tr valign="top"><td> Reaktif Adı </td><td> Şirket </td><td> Katalog numarası </td><td> Yorumlar (isteğe bağlı) </td></tr><tr><td> Isıtma pedleri </td><td> Bodi Isı Ötesinde </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Oftalmik merhem (suni gözyaşı) </td><td> Pfizer </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Povidon-iyot% 10 çözüm </td><td> Betadine </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Ferrik klorür çözeltisi% 10 </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> Çimento </td><td> Şirket Stoelting </td><td> 51456 </td><td></td></tr><tr><td> Siyanoakrilat 454 </td><td> Loctite&#39;a </td><td></td><td></td></tr><tr><td> aCSF </td><td> Harvard Apparatus </td><td> 597316 </td><td></td></tr><tr><td> Microtorque II başlık seti </td><td> Pearson </td><td> R14-0002 </td><td></td></tr><tr><td> IRF 007 matkap </td><td> Güzel Bilim Araçları </td><td> 19008-07 </td><td></td></tr><tr><td> Forseps # 5 </td><td> Güzel Bilim Araçları </td><td> 11295 </td><td></td></tr><tr><td> Forseps # 5/45 </td><td> Güzel Bilim Araçları </td><td> 11251-35 </td><td></td></tr><tr><td> # 0 cam coverslip </td><td> Elektron Mikroskopi Bilimleri </td><td> 63750-01 </td><td></td></tr><tr><td> Photomultiplier tüp </td><td> Hamamatsu </td><td> HC125-02 </td><td></td></tr><tr><td lang="it-IT" xml:lang="it-IT"> Ti: Safir lazer Mai-Tai </td><td> Spectra-Fizik </td><td> &amp;nbsp; </td><td></td></tr></tbody></table>

endojen nadh floresans iki-foton imaging tarafından fare serebral korteks olarak microregional hipoksi algılama

Detection of Microregional Hypoxia in Mouse Cerebral Cortex by Two-photon Imaging of Endogenous NADH Fluorescence

Metabolik talebin yüksek düzeyde çalışabilmesi için beyin yeteneği kan akımı ve doku oksijen difüzyon yoluyla sürekli oksijen kaynağı bağlıdır. Burada doğrudan microregional doku hipoksisi görselleştirmek için ve fare kortekste perivasküler oksijen gradyanlar anlaması için bir görüntülenmiştir deneysel ve metodolojik protokolü sunarız. Bu nikotinamid adenin dinükleotid (NADH) endojen floresans yoğunluğu ve doku NADH floresans aniden 10 mmHg 1&#39;in altına doku oksijen düzeyleri artar gözlenen doku, oksijen kısmi basıncı arasındaki doğrusal olmayan ilişki dayanmaktadır. Biz Texas-Kırmızı dekstran ile kıyasladı içsel NADH doku floresans ve plazma eşzamanlı uyarım sağlayan 740 nm&#39;de iki foton uyarması kullanın. Mevcut yaklaşımlar üzerindeki bu yöntemin avantajlarını aşağıdakileri içerir: bir iç doku sinyali yararlanır ve in vivo im standart iki-fotonlu kullanılarak yapılabilirekipmanı yaşlanma; bu ~ 50 um arasındaki bir derinliğe sahip çözünürlüğü görüş tüm alan sürekli izleme izin verir. Biz serebral kan damarlarından uzak beyin dokusu alanları vasküler oksijen kaynağı yaşanan düşüşün ardından işlevsel hipoksik olmak için ilk olarak hassas sınır alanlarda karşılık göstermektedir. Bu yöntem, görüntü microregional kortikal oksijen bir sağlar ve dolayısıyla nörovasküler hastalıklar ve inme yetersiz veya kısıtlı doku oksijen kaynağının bir rol incelenmesi için yararlıdır.

Burada doğrudan fare kortekste microregional doku hipoksisi görselleştirmek için bir yöntem tarif<em&gt; In vivo</em&gt;. Bu nikotinamid adenin dinükleotid (NADH) ve kortikal mikrodolaşım eşzamanlı iki-fotonlu görüntüleme dayanmaktadır. Bu yöntem, doku oksijen kaynağının, yüksek çözünürlükte analizi için yararlıdır.

Endojen NADH Floresans iki-foton Imaging tarafından Fare Serebral Korteks olarak Microregional Hipoksi Algılama

Beynin yüksek metabolik talep seviyelerinde işlev görme yeteneği, kan akışı ve doku oksijen difüzyonu yoluyla sağlanan sürekli oksijen kaynağına bağlıdır. ...

Bu prosedürün genel amacı, fare korteksindeki mikro bölgesel doku hipoksisini in vivo olarak doğrudan görselleştirmektir. Bu işlem, öncelikle anestezi altındaki bir farede açık kafatası kraniyal penceresi hazırlanarak gerçekleştirilir. Ardından, serebral kan damarlarını işaretlemek için intravenöz olarak floresan boya enjekte edilir.Son olarak, intrinsik NADH floresansı ve floresanla işaretlenmiş kortikal mikrovaskülatürün foton görüntülemesi eş zamanlı olarak gerçekleştirilir. Nihayetinde, nikotinamid adenin dinükleotidin indirgenmiş formunun varlığının görselleştirilmesi yoluyla, beyin parankiminin mikro bölgelerinde fonksiyonel hipoksiyi gösteren sonuçlar elde edilebilir. Bu tekniğin Clark tipi elektrotlar gibi mevcut yöntemlere göre temel avantajı, geniş bir görüş alanı üzerinde yüksek uzamsal çözünürlük sağlaması ve aynı zamanda daha az invaziv olmasıdır.Bu yöntem, iki floresan kanalına sahip standart bir uygulanan iki fotoğraflı sistemde yürütülebilir. Merhaba, ben Rochester Üniversitesi mikrobiyoloji ve immünoloji bölüm başkanı ve profesörü Steve Hurst; bugün prosedürü gerçekleştirecek olanlar Kishka Laboratuvarı'ndan Anita'nın oğlu ve laboratuvarımdan araştırma yardımcı profesörü Oxana Paulka'dır. NADH görüntüleme tekniğine öncülük eden Dr. Kishka, kısa süre önce Almanya'ya taşındığı için bugün burada olamıyor. Cerrahi bölge, otoklavlanmış veya %70 etanol ile dezenfekte edilmiş gerekli aletlerle hazırlandıktan ve fare %5 isoflurane ile anestezi edildikten sonra, fareyi bir ısıtıcı ped üzerine yerleştirin ve havada %1,3 ile %1,5 isoflurane vermek için bir yüz maskesi uygulayın.Kuyruk sıkma testi yaparak anestezinin düzeyini kontrol edin. Ardından, rektal bir prob yerleştirin ve işlem boyunca hayvanın vücut sıcaklığını sürekli olarak ölçün. Farelerin gözlerinin kurumasını önlemek için gözlere suni gözyaşı jeli uygulayın.Ardından baş bölgesindeki ve her iki uyluktaki tüyler temizlenir; kalan tüyleri temizlemek için uyluk bölgesine iki dakika boyunca tüy dökücü uygulanır, uyluk bölgesi oksimetri için kullanılacaktır. Son olarak, kafa derisi %10'luk povidon iyot çözeltisi ve %70'lik etanol kullanılarak dezenfekte edilir. Kraniyal pencere oluşturmak için kafatasına beş milimetre uzaklıktan makasla başlanır.Kafatasında bir insizyon yapın ve bir santimetre ilerleyin. Kafatasını açığa çıkarmak için deriyi yanlara çekin. Kafatasının üzerindeki membranları temizleyin. %10'luk ferrik klorür çözeltisi uygulayın.Fazla çözeltiyi silin ve membranları 45 derecelik bir açıyla sıyırarak uzaklaştırın. Beş numara, cımbız Kullanarak, bir diseksiyon mikroskobu yardımıyla ilgilenilen bölgeyi belirleyin. Kafa plağının pencere kenarlarına ince bir tabaka hızlı yapıştırıcı uygulayın.İlgi alanı pencerede görünecek şekilde baş plakasını konumlandırın ve baş plakasına hafifçe baskı uygulayın. Yapıştırıcının hızla polimerize olması için az miktarda diş dolgu çimentosu uygulayın. Yapıştırıcı polimerize olurken 10 saniye boyunca basılı tutun.Kafa plakasını ve kafatasını mühürlemek için pencerenin kenarlarına az miktarda hızlı yapıştırıcı uygulayın. Ardından, diseksiyon mikroskobu altında kafa plakasını hayvan tutucuya vidalayın. Bu işlem için 6.000 RPM'e ayarlanmış mikro torklu iki matkap seti ve IRF 0 0 5 matkap ucu kullanın.Kafatasındaki ve baş plakasındaki tüm fazla yapıştırıcıyı temizleyin. Ardından matkabı bin RPM'e ayarlayın ve baş plakası penceresinin içinde yaklaşık beş milimetre çapında bir daire çizerek kafatasını delmeye başlayın. Çok yumuşak bir kalemle çizim yapıyormuşsunuz gibi hafif süpürme hareketleri kullanın.Her 20 ila 30 saniyede bir delme işlemini durdurun ve kemik tozunu temizlemek için basınçlı hava kullanın. Delme işlemi ilerledikçe, merkezdeki sağlam kafatasının etrafında bir kanal oluşur. İnce kafatasını delmemeye dikkat edin, ancak bu kanalın eşit kalınlıkta olduğundan emin olun.Ayrıca, büyük kan damarları çevresinde ekstra dikkatli olun. Bu damarlar zarar görmemeli ve mümkünse onlara hiç dokunulmamalıdır. Bir cımbız ucuyla, pencerenin merkezindeki kemiği kaldırın ve pencerenin üzerine bir damla yapay beyin omurilik sıvısı uygulayın. Bir Kim wipe köşesini kullanarak, yapay beyin omurilik sıvısını 45 derecelik bir açıyla nazikçe silin.Beş numara, cımbız. Pencerenin kenarı boyunca hasar görmüş dura bölgesini bulun ve çıkarmak için yukarı kaldırın. Kanama meydana gelirse, bir damla yapay CSF uygulayın ve hafif kanamanın durması için iki ila üç dakika bekleyin.Ardından, yapay beyin omurilik sıvısında çözülmüş 10 mililitre %0,07'lik düşük erime noktalı agar hazırlayın. Eritilmiş agarı vücut sıcaklığına getirin. Beyin yüzeyindeki fazla yapay beyin omurilik sıvısını silerek temizleyin.Aerosu pencereye dökün ve üzerini bir lam ile kapatın. Ardından, cam ile baş plakası arasında temas sağlamak için camı hafifçe bastırın ve aeros katılaşana kadar 10 ila 20 saniye bekleyin. Cımbız ve yumuşak doku kağıdı kullanarak, cam örtük üzerindeki fazla aerosu temizleyin.Camı kafa plakasına yapıştırmak için camın etrafına az miktarda hızlı yapıştırıcı sürün. Ardından, femoral vene enjeksiyon yapmak için yapıştırıcıyı sabitleyecek az miktarda dental siman uygulayın. Sol uyluğun iç kısmını açığa çıkarmak için hayvanı kısmen yan çevirin.Hayvanı sabitlemek için bant kullanın. Bu konumdayken ciltte antiseptik scrub uygulayın ve ardından %100 etanol sürün. Daha sonra, dizden pubik senteze kadar medial uyluk boyunca bir insizyon yapın.Gerekirse, yumuşak dokuları künt diseksiyonla ayırın. Bir mililitrelik bir şırıngayı 130 µL Texas red ile doldurun. Yeni bir 30 gauge iğne takın ve eğimi yukarıda tutarak iğneyi dikkatlice 30 derecelik bir açıyla bükün.Bir diseksiyon mikroskobu altında iğneyi Texas Red Solüsyonu ile doldurun, iğneyi femoral vene yerleştirin ve yüz mikrolitre Texas red enjekte edin. İğneyi çıkarın ve kanamayı durdurmak için venin üzerine gazlı bezle hafifçe bastırın. Kan oksijen satürasyonunun sürekli izlenmesi için cildi dört sıfır dikişle kapatın.Oksimetre probunu, tüyleri daha önce temizlenmiş olan sağ uyluğa yerleştirin. Görüntülemeye başlamak için cerrahi olarak hazırlanmış fareyi mikroskop tablasına aktarın. Daha yüksek büyütmedeki foton anizleriyle kayıt işlemini gerçekleştirmek için referans harita olarak kullanmak üzere, Bright Field aydınlatması altında dört x büyütmede kranial pencere bölgesinin bir başlangıç fotoğrafını çekin.10 x büyütme kullanarak ilgilenilen alana yakınlaştırın. Kortikal katmanlarda ilgilenilen bir alan seçin. Zaman serisini kaydetmek için bir veya iki kez başlatın.Görüntü kalitesini artırmak için ortalama üç ila beş kare kullanmanızı öneririz. Ardından, hayvanın soluduğu havaya %50 azot ekleyerek hipoksemiyi indükleyin. Bu işlem oksijen seviyesini %10'a düşürecektir. Oksimetre verilerini izleyerek hipoksemiyi doğrulayın.Hipoksemi sırasında ve normal oksijen seviyesi geri kazanıldıktan sonra yaklaşık 30 saniye boyunca zaman serisini kaydetmeye devam edin. Kan damarları etrafındaki hipoksik ve oksijenlenmiş doku silindirlerinin alanını saptayarak, ölçerek ve nicelendirerek oksijen dağılımının hesaplanması için veri toplayın. Kurbağa doku silindir yarıçapı R'yi belirlemek için, kan damarının merkezi ile yüksek NADH floresansının saptandığı sınır arasındaki mesafeyi ölçün.Veri işleme yöntemleri için yazılı protokole bakınız. Bu şekil, geçici hipoksemi sırasında kaydedilen videodan alınan eş zamanlı NADH ve coğrafya görüntülerini göstermektedir; solunan oksijen konsantrasyonu üç dakika boyunca %21'den %10'a düşürülmüştür. Deneysel olarak indüklenen bu hipoksemi seviyesi, serebral kortekste şiddetli hipoksiyi tetiklemek için yeterlidir.Hipoksi, başlangıçta arteriyel kan kaynağına en uzak bölgelerde yeşil ile gösterilen NADH floresansında bir artışa yol açmıştır. Kırmızı ile gösterilen kortikal mikrosirkülasyondan oksijen difüzyonunun gözlemlenebilir doku sınırlarını temsil eden keskin NADH doku sınırlarına dikkat edin. Burada, korteksin floresanla işaretlenmiş mikrodamarlarının kırmızı renkte ve korteks gri maddesinin intrinsik NADH floresansının yeşil renkte olduğu eş zamanlı bir görüntü yer almaktadır; NADH floresans yoğunluğu dağılımı binerdir.NADH floresansının tekdüze olarak düşük olduğu alanlar ve NADH floresansının tekdüze olarak yüksek olduğu alanlar mevcuttur. Sarı çizgiler, düşük ve yüksek NADH floresanslı alanlar arasındaki doku sınırlarını temsil etmektedir. Bu doku sınırları, yakınlardaki mikrodamarlarla mekansal bir ilişki sergilemektedir.Bu ilişki, mikrovasküler yapılardan dokuya doğru gerçekleşen oksijen difüzyonu tarafından belirlenir. Bazı durumlarda, bu doku sınırlarının silindirik yapısı veya CRO doku silindiri, mavi çizgilerle belirtildiği gibi doğrudan tanımlanabilir. Burada, doku sınırı, merkezde eş merkezli bir kan damarı bulunan dairesel bir şekle sahiptir.Bu teknik, düzgün bir şekilde uygulandığında 1,5 saat içinde tamamlanabilir. Bu prosedürü gerçekleştirirken, ödem nedeniyle kortikal yüzeyin dikey hareketini önlemek için lamel camın metal plakaya yapıştırıldığını hatırlamak önemlidir. Bu prosedürün ardından, doku hipoksisi ile serebrovasküler kenetlenme arasındaki ilişki gibi ek soruları yanıtalamak amacıyla fonksiyonel hiperemi ölçümleri gibi ek analizler yapılabilir.Bu videoyu izledikten sonra, fare korteksindeki mikro bölgesel doku hipoksisinin nasıl görselleştirileceği konusunda kapsamlı bir bilgiye sahip olmalısınız.

detection-microregional-hypoxia-mouse-cerebral-cortex-two-photon

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Sinirbilim

Kortikal kan akımı dinamikleri 2-foton mikroskobu ile kemirgen kuyruk damar içine enjekte görüntüleme floresan dekstran boyalar in vivo olarak incelenebilir. Bu video görüntü kan akışını dinamikleri ile farelerin bir cam kaplı kafatası pencere hazırlama neokorteks nasıl gösterir.

Kranial Pencere üzerinden neokorteks Kan Akış 2-Foton Görüntüleme Bir Yöntem

Biz fosforesans oksijen bağımlı ısıl işlem dayalı serebral vasküler yapılarda kısmi oksijen basıncı (pO2) ölçmek için deneysel bir prosedür mevcut. Hayvan hazırlama ve görüntüleme yöntemleri pO2 görüntüle CCD tabanlı görüntüleme büyük alan sıçanlarda ve farelerde pO2 2-foton uyarma bazlı görüntüleme için özetlenen.

Fosforesans Oksijen bağımlı Quenching dayanarak Serebral Kan oksijenasyon Ölçüm

Objektif fizyolojik preload ve afterload baskıların kapsamında izole kalplerin mitokondriyal redoks izlemektir. Bir biventriküler çalışma tavşan kalp modeli sunulmuştur. NADH, yüksek çözünürlükte zamanmekansal floresans görüntüleme epikardiyal doku mitokondriyal redoks izlemek için kullanılır.

İzole Biventriküler ve NADH Floresans Görüntüleme Tavşan Kalpler Çalışma

Source: Nishimura, C.  ve ark. HIV Kaynaklı Nöroinflamasyonun Fare Modelinde İki Foton Mikroskobu Kullanılarak Serebral Vasküler Mimarinin Ölçülmesi. J. Vis. Exp. (2016). Bu video, iki foton mikroskobu kullanılarak fare beynindeki kortikal kılcal damarların in vivo görselleştirmesini göstermektedir. İnce kafatası kortikal pencereli anestezi uygulanmış bir fareye floresan boya enjekte etme, görüntüleme için kurulumu hazırlama ve analiz için beyin mikrovasküler yapılarının ayrıntılı görüntülerini...

 Fare Beyni Mikrovaskülatürünün İn Vivo Görüntülenmesi için İki Foton Mikroskobu 

Kaynak: Ouyang, Y., et al. Fare Serebral Hipoksi-iskemisi Sırasında Eş Zamanlı PET/MRG Görüntüleme. J. Vis. Uzm. (2015)Bu video, eşzamanlı pozitron emisyon tomografisi (PET) ve manyetik rezonans görüntüleme (MRI) yoluyla serebral hipoksi hasarını değerlendirmek için bir teknik göstermektedir. Anestezi uygulanmış bir fare, ortak karotis arter (CCA) ligasyonuna tabi tutulur, bu da bir beyin yarım küresine kan akışını azaltır ve onu hipoksiye bağlı yaralanmaya yatkın hale getirir. PET ve MRG...

Bir fare modelinde serebral hipoksi-iskeminin neden olduğu beyin hasarının görüntülenmesi

Bir yöntem olup, önceden belirlenmiş neokorteks fonksiyonel mikro etki floresan boyalar ile nöronlar etiketleme için açıklanmıştır. İlk olarak, iç sinyal optik görüntüleme fonksiyonel bir harita elde etmek için kullanılır. Sonra iki foton mikroskopi haritanın bir mikro-etki alanı içindeki etiket ve resim nöronlar için kullanılır.

Belirli Fonksiyonel İçsel Sinyal birleştiren tarafından neokorteks Mikro-etki ve İki foton Görüntüleme nöronlar Hedefli Etiketleme

Serebral iskemiden kaynaklanan beyin hasarı, enjekte edilebilir radyoaktif prob, 18F-florodeoksiglukoz ile birleştirilmiş klinik öncesi pozitron emisyon tomografisi kullanılarak sıçanlarda non-invaziv olarak görüntülenebilir ve incelenebilir. Ayrıca, ilgi hacmi (VOI) beyin şablonlarını içeren modern yazılım araçlarının kullanılması, bu çalışmalardan elde edilen nicel bilgileri önemli ölçüde artırmaktadır.

Pozitron Emisyon Tomografi ile kullanma Non-invaziv Görüntüleme ve Serebral iskemi Analizi Yaşam Sıçanlarda<sup&gt; 18</sup&gt; F-FDG

Burada sunulan yöntem, eşzamanlı pozitron emisyon tomografisi ve manyetik rezonans görüntüleme kullanır. Serebral hipoksi-iskemi modelinde, difüzyon ve glukoz metabolizması dinamik değişimler sırasında ve yaralanma sonrası ortaya çıkar. Anlamlı multi-modal görüntüleme verileri elde edilecek iseniz bu modelde gelişen ve 'tekrarı hasar eşzamanlı edinimi gerektirir.

Fare Serebral Hipoksi-iskemi sırasında Eşzamanlı PET / MR Görüntüleme

Bu makale, beyindeki vasküler mimarinin in vivo ve ex vivo iki foton mikroskobu kullanılarak ölçülebileceği bir yöntemi açıklamaktadır.

HIV kaynaklı Nöroinflamasyondan bir Fare Modeli İki foton Mikroskop kullanarak Serebral Vasküler Mimarlık Niceleme

Bu yöntem, yaşayan farelerin Hippocampus optik erişim sağlayan kronik bir hazırlık açıklar. Bu hazırlık, birkaç hafta boyunca nöronal yapısal plastisite ve aktivite-uyarılmış hücresel plastisite uzunlamasına optik görüntüleme gerçekleştirmek için kullanılabilir.

Canlı fareler içinde dorsal hipokampal CA1 uzunlamasına Iki foton görüntüleme

Öğrenin fare serebral korteksinde mikrobölgesel hipoksiyi iki-foton görüntüleme ile NADH floresansı kullanarak canlı olarak görselleştirme yöntemini. Bu teknik yüksek çözünürlüklü oksijen arzı analizi sağlar.

Endojen NADH Floresans iki-foton Imaging tarafından Fare Serebral Korteks olarak Microregional Hipoksi Algılama

Daha fazla video keşfet