Name: Zebra balığı Embriyonik Kalp Dissected, immün (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-01-10T12:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 23 s
Description: Öğrenin, Danio rerio embriyonik kalplerinde hücresel yapıları yüksek çözünürlükle görüntülemek için immün boyama yöntemini. Bu teknik, gelişim biyolojisi araştırmalarında hızlı ve etkili sonuçlar sağlar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Biz Beninio Jomok Zebra balığı yetiştiriciliği yaptığı yardım için teşekkür ederim. Bu çalışma Ulusal Sağlık Enstitüsü, HL81753 tarafından finanse edilmektedir.

1. Slayt hazırlanması ve nemlendirilmiş odasına <ol><li> Nemlendirilmiş odası boşaltılmış bir ucu kutusu gibi bir kutu yapılabilir. Odası ve örnekleri ışıktan korumak için alüminyum folyo ile kapağı sarın. </li><li> Odanın içinde, kalbinde örnekleri kurumasını önlemek odanın içinde nem, korumak için bir yığın ıslak kağıt havlu koyun. Slaytlar için bir raf olarak kağıt havlu üstüne küçük bir mikroplak ayarlayın. </li><li> Kalp 5x5 mm boyutunda numuneler için kuyu immEdge kalem kullanarak bir mikroskop lamı yüzeyinde ya çizgiler veya daire çizin. Slaytları kurumasını bekleyin. </li><li> Nemlendirilmiş odasında slaytlar koyun ve her iyi 50ul taze% 4 formaldehit ekleyin. </li></ol> 2. Embriyonik kalp diseksiyonu <ol><li> Balık balık durdurmak vücut hareketleri kadar yaklaşık 1 dakika boyunca% 0.4 tricaine içeren E3 yumurta su 7 embriyo anestezisi ama yine de normal kalpdayak. </li><li> Diseksiyon mikroskobu sahnede içbükey bir mikroskop lamı koyun. Concaved iyi embriyolar transfer. </li><li> Kalp açıkça ortaya çıkarmak için diseksiyon mikroskop ışık kombinasyonu ayarlayın. Kişisel tercihinize bağlı olarak, bu karanlık alan veya DIC gibi polarize ışık durumu olabilir. </li><li> Sonra kuru, iki insülin şırıngaları% 75 etanol ile temizleyin. </li><li> Diseksiyon mikroskobu, kalp yüksek büyütme ve odak ayarlayın. Fiziksel kafasına yakın yumurta sarısı-hücre gruplarının sınır içine bir iğne ucu takarak bir embriyo düzeltin. Başka bir iğne yakın kalp bölgeye yerleştirin ve hızlı bir şekilde kalp çekin. Kalp embriyo tamamen ayrılmış değildir, kalp ve yumurta sarısı arasında kalan bağlı doku kesti. </li><li> Mikroskop ayrılan kalp düşük büyütme ve odak ayarlayın. 10μl pipetteman kullanın ve 1μl hacim olarak ayarlayın. Çizin veya dokunmatik pipetteman ucu uygulaizole kalp içinde veya ucu yüzeye bağlı ya olacak, böylece kalp örnek. </li><li> % 4 formaldehit hazırlanan slaytlar pipet ucu batırın ve çözüm kalp serbest pipetle piston bastırın. Su yüzey gerginliği de pipet çözüm kalp serbest bırakmak için yardımcı olur. Her kuyuda 3 kalpleri daha az koyun. </li></ol> 3. Immün <ol><li> Odasına kapatın ve yumuşak bir sallanan hareketi ile bir çalkalayıcı üzerine koydu. Oda sıcaklığında 20 dakika boyunca kalp örnek sabitleyin. </li><li> Slaytların arka su damlacıklarını ve tampon alışverişi için bir diseksiyon mikroskobu aşamasında slayt koymak. </li><li> Her bir kuyunun boş bir bölgeye, bir 10μl pipetteman ucu batırın ve kalp örneklerinden ucu mümkün olduğunca tutmak. Çözüm ucu içine çekilir kalpleri su akışı ile hareket edebilir, ucuna takılı kalp önlemek için tedbirleri almak. DeğiştirmekGerekirse ucu yerelleştirme. </li><li> Çözüm bir doku üzerine atın ve kalp örnek hava kabarcıklarının varlığı kolayca kayıp olduğundan uç kabarcıkları üreten kaçının. Kalp örnekleri kısa bir süre için kısmen kuru tutulması, kalpleri slaytlar bağlı kalmanıza yardımcı olabilir. </li><li> Kalp örnek kapak ve 5 dakika boyunca yavaş bir sallanan hareketi nemlendirilmiş odasında inkübe 50μl PBST ekleyin. Durulama bir kez daha tekrarlayın. Bu adımdan sonra, kalp örnekleri nemlendirilmiş, 4 oda 1 haftaya kadar ° C saklanabilir </li><li> PBST oda sıcaklığında 1 saat süreyle% 10 oranında koyun serumu ile kalp örnek engelleyin. </li><li> Β-katenin antikor 1:200 seyreltme ve mef2 spesifik antikor 1:200 seyreltme gibi birincil antikorlar, kalp örnek inkübe, oda sıcaklığında 1 saat süreyle% 10 oranında koyun serumu / PBST. </li><li> Oda sıcaklığında PBST üç defa (5 dk. Her biri) ile kalp örnek yıkayın. </li><li> Ikincil örnek inkübePBST 0.5 saat alexa-etiketli anti-fare ve / veya anti-tavşan antikorları 1:1000 dilüsyon gibi antikorlar,. </li><li> PBST üç kez kalp örnekleri ile yıkayın (5 dk.) Oda sıcaklığında. </li></ol> 4. Görüntüleme <ol><li> PBST çıkarın ve her bir kuyuya 10 ul montaj orta ekleyin. Çözelti berrak olana kadar birkaç dakika süreyle odasının Rock. </li><li> Montaj orta çıkarın ve mikroskop kapağı cam (24x50) ile bir slayt tüm kuyuların kapağı. </li><li> Zeiss Axioplan 2 mikroskop kullanarak balık kalp ApoTome (Carl Zeiss) ile donatılmıştır. </li></ol> 5. Temsilcisi Sonuçlar Şekil tüm zebrafish kardiyomiyositlerde membran ve çekirdekler gösteren bir görüntü bir örnek gösterilmiştir. 1. mef2c ve β-katenin antikorları, disseke 52 hpf zebrafish embriyo kalp örnekleri leke birlikte kullanılmıştır. Iken mef2c antikor lekeleri kardiyomiyositlerinin çekirdekleri, β-kateninantikor her hücre 8-10 sınırında ortaya koymaktadır. Bileşik mikroskop sahne ayarlayarak, kalp örnekleri görüntüleri aynı yönde, dış eğrilik ve kalp 11 iç eğrilik gözlem sağlayacak şekilde ayarlanabilir. Toplam kardiyomiyosit numarası, kardiyomiyosit hücre boyutu ve dairesellik sonra ölçülebilir. Şekil embriyonik bir kalbin sarkomerik yapısı ortaya başka bir örnek gösterilmiştir. 2. Biz bir disseke embriyonik kalp F59, miyozin antikor, immün yapıldı. Kalın filament çizgili bir bant, yüksek büyütme (Şekil 2) 6 açıklanacak, bütün bir embriyonik kalp myofibril ağ açıkça daha düşük büyütme açıklanacak. <img alt="Şekil 1" src="/files/ftp_upload/3510/3510fig1.jpg"> Şekil 1 mef2 (kırmızı) ve β-katenin (yeşil) çekirdek ve outl göstermek için immünzebrafish ventrikül kardiyomiyositlerinin ines. Ölçek çubuğu = 10μm <img alt="Şekil 2" src="/files/ftp_upload/3510/3510fig2.jpg"> Şekil 2 ya da düşük büyütme (A) veya daha yüksek büyütme (B) zebrafish ventrikül kalın filament göstermek için miyozin Immnostaining ölçekli bar = 10μm

<ol><li>Shin, J. T., Fishman, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((From+Zebrafish+to+human%3A+modular+medical+models%5BTitle%5D)+AND+%22Annu.+Rev.+Genomics+Hum.+Genet%22%5BJournal%5D)">From Zebrafish to human: modular medical models.</a> Annu. Rev. Genomics Hum. Genet. 3, 311-340 (2002).</li>
<li>Beis, D., Stainier, D. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+cell+biology%3A+following+the+zebrafish+trend%5BTitle%5D)+AND+%22Trends.+Cell.+Biol%22%5BJournal%5D)">In vivo cell biology: following the zebrafish trend.</a> Trends. Cell. Biol. 16, 105-112 (2006).</li>
<li>Schoenebeck, J. J., Yelon, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Illuminating+cardiac+development%3A+Advances+in+imaging+add+new+dimensions+to+the+utility+of+zebrafish+genetics%5BTitle%5D)+AND+%22Semin.+Cell.+Dev.+Biol%22%5BJournal%5D)">Illuminating cardiac development: Advances in imaging add new dimensions to the utility of zebrafish genetics.</a> Semin. Cell. Dev. Biol. 18, 27-35 (2007).</li>
<li>Nasevicius, A., Ekker, S. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effective+targeted+gene+%27knockdown%27+in+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Genet%22%5BJournal%5D)">Effective targeted gene 'knockdown' in zebrafish.</a> Nat. Genet. 26, 216-220 (2000).</li>
<li>Dahme, T., Katus, H. A., Rottbauer, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fishing+for+the+genetic+basis+of+cardiovascular+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Dis.+Model+Mech%22%5BJournal%5D)">Fishing for the genetic basis of cardiovascular disease.</a> Dis. Model Mech. 2, 18-22 (2009).</li>
<li>Huang, W., Zhang, R., Xu, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Myofibrillogenesis+in+the+developing+zebrafish+heart%3A+A+functional+study+of+tnnt2%5BTitle%5D)+AND+%22Dev.+Biol%22%5BJournal%5D)">Myofibrillogenesis in the developing zebrafish heart: A functional study of tnnt2.</a> Dev. Biol. 331, 237-249 (2009).</li>
<li>Westerfield, M. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aWesterfield%2C+M+%22The+Zebrafish+Book%22">The Zebrafish Book</a>. , (2007).</li>
<li>Buckingham, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Muscle%3A+the+regulation+of+myogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Curr.+Opin.+Genet.+Dev%22%5BJournal%5D)">Muscle: the regulation of myogenesis.</a> Curr. Opin. Genet. Dev. 4, 745-751 (1994).</li>
<li>Wheelock, M. J., Knudsen, K. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cadherins+and+associated+proteins%5BTitle%5D)+AND+%22Vivo%22%5BJournal%5D)">Cadherins and associated proteins.</a> Vivo. 5, 505-513 (1991).</li>
<li>Sun, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cardiac+hypertrophy+involves+both+myocyte+hypertrophy+and+hyperplasia+in+anemic+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Cardiac hypertrophy involves both myocyte hypertrophy and hyperplasia in anemic zebrafish.</a> PLoS One. 4, e6596-e6596 (2009).</li>
<li>Auman, H. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Functional+modulation+of+cardiac+form+through+regionally+confined+cell+shape+changes%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Biol%22%5BJournal%5D)">Functional modulation of cardiac form through regionally confined cell shape changes.</a> PLoS Biol. 5, e53-e53 (2007).</li>
<li>Chen, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Depletion+of+zebrafish+essential+and+regulatory+myosin+light+chains+reduces+cardiac+function+through+distinct+mechanisms%5BTitle%5D)+AND+%22Cardiovasc.+Res%22%5BJournal%5D)">Depletion of zebrafish essential and regulatory myosin light chains reduces cardiac function through distinct mechanisms.</a> Cardiovasc. Res. 79, 97-108 (2008).</li>
</ol>

Çıkar çatışması ilan etti.

Klasik tüm montaj immün yöntemleri ile karşılaştırıldığında, yöntem, aşağıdaki avantajları vardır. Öncelikle, çok daha güçlü floresan sinyalleri sürekli olarak geliştirilmiş penetrasyon nedeniyle elde edilebilir. Tüm montaj immün yöntemi, kalp çevresindeki yoğun cilt dokusu, tüm vücut önemli ölçüde yüksek arka planda birçok antikor penetrasyon azalır. Bu sorun özellikle büyük embriyolar için 3 gün sonrası fertilizasyon (dpf) şiddetlidir. Disseke kalpleri aksine, sadece çok daha iyi bir penetrasyon render birkaç hücre ta...

<table border="1"><tbody><tr><td> Reaktifi Adı </td><td> Şirket </td><td> Katalog numarası </td></tr><tr><td> tricaine </td><td> Araştırma organik </td><td> 3007T </td></tr><tr><td> Formaldehit </td><td> Polysciences </td><td> 04018 </td></tr><tr><td> Insülin enjektörü </td><td> Becton Dickinson </td><td> 329461 </td></tr><tr><td> Triton X-100 </td><td> Sigma </td><td> T8532 </td></tr><tr><td> Anti-β-katenin antikor </td><td> Sigma </td><td> C7207 </td></tr><tr><td> Anti-Mef2c antikor </td><td> Santa Cruz Biotech </td><td> SC313 </td></tr><tr><td> F59 </td><td> Zfin </td><td></td></tr><tr><td> Anti-α-aktinin antikor </td><td> Sigma </td><td> A7811 </td></tr><tr><td> Anti-Ilk antikor </td><td> Hücre içi sinyal </td><td> # 3862 </td></tr><tr><td> Alexa Florlu 568 keçi anti-tavşan IgG </<html> td&gt; <td> Invitrogen </td><td> A11011 </td></tr><tr><td> Alexa Florlu 488 keçi anti-fare IgG1 </td><td> Invitrogen </td><td> A21121 </td></tr><tr><td> Montaj orta floresan </td><td> Vektör </td><td> H-1200 </td></tr><tr><td> ImmEdge kalem </td><td> Vektör </td><td> H-4000 </td></tr><tr><td> Poli-L-Lysin kaplı slaytlar </td><td> Elektron mikroskobu bilimleri </td><td> 63410-01 </td></tr><tr><td> Mikroskop kapak cam </td><td> Balıkçı </td><td> 12-543-D </td></tr><tr><td> Concaved mikroskop kızakları </td><td> Balıkçı </td><td> 7-1305-8 </td></tr><tr><td> Diseksiyon mikroskobu </td><td> Leica MZ95 </td><td></td></tr><tr><td> Bileşik mikroskop </td><td> Zeiss </td><td> Axioplan2 </td></tr><tr><td> ApoTome </td><td> Zeiss </td><td></td></tr></tbody></table> PBST: 1 x PBS % 0.5 &#39;lik Triton-X 100 ent &quot;&gt; 25X Tricaine: 400 mg Tricaine 97.9 ml GKD 2 O 2.1 mL (1M Tris pH9) PH 7.0 &#39;a ayarlayın

zebra balığı embriyonik kalp dissected, immün

Immunostaining of Dissected Zebrafish Embryonic Heart 

Zebra balığı embriyo kalp gelişimi ve avantajlı embriyoloji ve genetik 1,2 nedeniyle insan kalp hastalıkları eğitimi için in vivo omurgalı modeli popüler bir hale gelir. Hakkında 100-200 embriyolar tek bir yetişkin balık çifti her hafta hazır. Eski utero geliştiren şeffaf embriyolar kalp kusurları 3 değerlendirmek için ideal. Herhangi bir gen ifadesi morfolino teknoloji veya RNA enjeksiyon 4 üzerinden manipüle edilebilir . Ayrıca, ileri genetik ekranlar zaten cardiogenesis 5 farklı bakış açılarını etkileyen mutant bir liste yarattı. Tüm montaj immün bu hayvan modelinde belli bir doku 6 hedeflenen protein ifade desenini ortaya çıkarmak için önemli bir tekniktir. Ancak, hücre içi veya hücre yapıları ortaya çıkarabilir yüksek çözünürlüklü görüntüleri, özellikle fiziksel locat nedeniyle olarak zor olmuşturkalp ve antikorların zayıf penetrasyon iyon. Burada, ilk kalp diseksiyon ve sonra bir mikroskop lamı yüzey boyama işlemi yapan bu darboğazları gidermek için bir yöntem sunar. Küçük kalp örneklerinin kaybını önlemek için ve çözüm kullanımını kolaylaştırmak için, bir immEdge kalem ile çizilmiş mikroskop slaytlar yüzey üzerinde bir daire içinde kalp örnekleri kısıtlı. Boyama sonra, floresan sinyalleri doğrudan bir bileşik mikroskop ile gözlemlenebilir. Embriyonik bir balık kalp sadece birkaç hücre tabakalarından oluşan antikorları için yeni bir yöntem, penetrasyon önemli ölçüde artırır. Sağlam kalpleri yüksek kaliteli görüntüler gün 2 gün 6 yaş Zebra balığı embriyolarının için çok daha alayı süre içinde elde edilebilir. Bizim metodumuz, potansiyel olarak diğer organlara ya da Zebra balığı veya diğer küçük hayvanlar disseke leke uzatılabilir.

Zebra balığı embriyonik kalp immün yapmak için hızlı bir şekilde açıklanmıştır. Tüm montaj immün yaklaşımı ile karşılaştırıldığında, bu yöntem, çok daha az işlem süresi içinde kalp hücre / hücre içi yapıları ortaya yüksek çözünürlüklü görüntüleri elde sağlayan antikorlar, penetrasyon önemli ölçüde artırır.

Zebra balığı Embriyonik Kalp Dissected, immün

Zebrafish embriyosu, avantajlı embriyolojisi sayesinde kardiyak gelişim ve insan kalp hastalıklarının incelenmesinde popüler bir in vivo omurgalı model haline gelmiştir...

Bu prosedürün genel amacı, hücresel veya hücre altı yapıları yüksek çözünürlükte ortaya çıkarmak için diseke edilmiş zebra balığı embriyonik kalplerinde immün boyama gerçekleştirmektir. Bu işlem, öncelikle immün boyama için nemlendirilmiş bir odada lamların hazırlanmasıyla gerçekleştirilir. Ardından, kalp, anestezi uygulanmış bir zebra balığı embriyosundan diseke edilir ve ardından embriyonik kalp üzerinde spesifik bir antikor ile immün boyama yapılır.Ardından balık kalbi görüntüleri, bir dome ile donatılmış bir mikroskopla kaydedilir. Son olarak, çok daha yüksek penetrasyon sayesinde, bir zebrafish embriyonik kalbindeki hücresel veya alt hücresel yapılar immünofloresan mikroskopi kullanılarak açığa çıkarılır. Bu tekniğin whole mount immün boyama gibi mevcut yöntemlere karşı temel avantajı, standart zebrafish kalbinin yüksek kaliteli görüntülerini elde edebilmektir. Nemlendirilmiş bir hazne hazırlamak ve örnekleri ışıktan korumak için, hazneyi ve boş bir tip kutusunun kapağını sarmak üzere alüminyum folyo kullanın.Kamberin tabanına ıslak kağıt havlu yığınları yerleştirerek örneklerin kurumasını önleyin ve lamlar için bir raf görevi görmesi amacıyla kağıt havluların üzerine küçük bir mikroplaka yerleştirin. Kuyu oluşturmak için bir görüntüleme kalemi kullanarak, mikroskop lamının yüzeyine yaklaşık beş çarpı beş milimetre boyutlarında daireler veya çizgiler çizin. Lamların kurumasını bekleyin.Lamları nemlendirilmiş hazneye yerleştirin ve her bir kuyucuğa 50 µL formaldehit ekleyin. Embriyonik kalbi diseke etmek için, balık embriyosunu %0,4 trica içeren E3 yumurta suyunda, balığın tüm vücut hareketleri durana ancak kalp atışları normal seyretmeye devam edene kadar anesteziye tabi tutun. Bu işlem yaklaşık bir dakika sürer.Embriyoları konkav bir lam üzerine aktarın. Konkav mikroskop lamını, ya karanlık alan ya da DIC benzeri polarize ışık kullanan bir diseksiyon mikroskobunun tablasına yerleştirin. Kalbi net bir şekilde görebilmek için mikroskobun ışığını ayarlayın.Ardından, iki insülin şırıngasını %75 etanol ile temizleyin. Daha sonra kurulayın, kalbe odaklanmak için mikroskobun büyütmesini artırın. Sonrasında, iğne uçlarından birini sarıya yerleştirerek embriyoyu fiziksel olarak sabitleyin; böylece akar sınırı başa yakın hale gelecektir.Ardından kalp bölgesine yakın bir yere başka bir iğne yerleştirin ve kalbi hızlıca dışarı çekin. Kalp embriyodan tamamen ayrılmamışsa, kalp ile vitellus arasındaki kalan bağlantılı dokuyu kesin. Kalbe daha düşük bir büyütmede odaklanın.1 µL hacmine ayarlanmış 10 µL'lik bir pipet kullanın. İzole kalbin pipet ucunun içine girmesini veya ucun yüzeyine yapışmasını sağlamak için pipet ucunu kalp örneğinin üzerine getirerek örneği çekin veya ona dokundurun. Pipet ucunu hazırlanmış lamlar üzerindeki formaldehit çözeltisine daldırın ve kalbi çözeltiye bırakmak için pipet pistonuna basın.Formaldehit içindeki kalpler çökük lamlar üzerindeyken, hazneyi kapatın ve oda sıcaklığında 20 dakika boyunca hafifçe sallayacak şekilde bir çalkalayıcıya yerleştirin; lamların arkasındaki suyu silin ve tampon değişimi için lamları bir diseksiyon mikroskobunun tablasına yerleştirin. Kalpleri yerinden oynatmadan formaldehiti lamdan dikkatlice aspire etmek için 10 µL'lik bir pipet kullanın. Kalp örneklerini kaplamak için 50 µL PBST ekleyin ve nemlendirilmiş hazne içerisinde beş dakika boyunca inkübe edin.Kalpleri ikinci kez PBST ile durulayın. Ardından, kalp örneğini oda sıcaklığında bir saat boyunca PBST içindeki %10 koyun serumu ile bloke edin. Sonrasında kalp örneklerini, %10 koyun serumlu PBST içinde, 1/200 oranında seyreltilmiş beta catenin ve F iki spesifik birincil antikorlar ile oda sıcaklığında bir saat inkübe edin.Kalp örneklerini, oda sıcaklığında beşer dakikalık sürelerle üç kez PBST ile yıkayın. Örnekleri, PBST içinde 1/1000 oranında dilüe edilmiş Alexa etiketli, anti-muse ve/veya anti-rabbit sekonder antikorlar ile 30 dakika boyunca inkübe edin. Örneklerin görüntülenmesi için örnekleri tekrar üç kez PBST ile yıkayın.PBST'yi uzaklaştırın ve her birine bir mikrolitre montaj medyumu ekleyin. Çözelti berraklaşana kadar odağı birkaç dakika boyunca iyice sallayın. Balık kalbinin görüntüsünü, aome ile donatılmış bir Zeiss Axio plan iki mikroskobu kullanarak alın. Bu görüntüde, döllenmeden sonraki 52. saatteki bir zebra balığı embriyosundan alınan zebra balığı kardiyomyositlerinin çekirdekleri ve hücre membranları, sırasıyla MEF iki C ve betaine karşı antikorlar ile tanımlanmıştır.Bileşik mikroskobun tablası ayarlanarak, kalp örneklerinin görüntüleri aynı yöne getirilebilir; bu sayede kalbin dış ve iç kavisleri gözlemlenebilir. Ardından toplam kardiyomiyosit sayısı, kardiyomiyosit hücre boyutu ve dairesellik ölçülebilir. Burada, diseke edilmiş bir embriyonik kalbin sarkomerik yapısı, myosin antikoru F 59 kullanılarak gösterilmektedir. Tüm bir embriyonik kalp ventrikülündeki miyofil ağı düşük büyütmede net bir şekilde görülürken, kalın filamanların çizgili bandı yüksek büyütmede görülmektedir.Bu videoyu izledikten sonra, diseke edilmiş zebra balığı kalbinde immünboyama işleminin nasıl gerçekleştirileceği, özellikle kalp diseksiyonunun nasıl yapılacağı ve immünboyama süreci boyunca kalbin nasıl yönetileceği konusunda kapsamlı bir anlayış kazanmış olmalısınız.

immunostaining-of-dissected-zebrafish-embryonic-heart

Research

JoVE Journal

Biology

Biyoloji

Birden fazla gelişim evreleri zebrafish kalp diseksiyonu ve izolasyon için açık, standart bir yöntem açıklanmıştır. Annotation ve miktar teknikler de tartışılmaktadır.

Larvaların Kalp Diseksiyon, Çocuk ve Yetişkin Zebra balığı, Danio rerio</em

Zebra balığı omurgalılarda kalp rejenerasyon mekanizmaları incelemek için değerli bir modeli temsil eder. Burada, cryoinjury kullanarak yetişkin zebrabalıkları yılında bir kalp infarkt indüksiyonu için bir protokol mevcut. Memeli enfarkt gözlenen benzer ventriküler duvarın 20% içinde büyük hücre ölümü, bu yöntem sonuçlar,.

Yetişkin Zebra balığı Myokard İnfarktüsü İndüksiyon Cryoinjury kullanma

Bu videoda, kardiyak gelişim, olgunlaşma ve yaşlanmayı incelemek için birden fazla gelişim aşamasında kalbi bir zebra balığından izole etme tekniği açıklanmaktadır.

Kalp Diseksiyonu: Zebra Balığı Kardiyak Gelişimini Gözlemlemek İçin Bir Yöntem

Zebra balığı kalp gelişimi sırasında kalp gen ekspresyon profillerini analiz etmek, toplam RNA izole kalpleri elde edilecek olan. Burada, biz kalp-özel mRNA elde etmek Zebra balığı embriyolarının gelen hızlı manuel diseksiyon ile işlevsel / yenerek kalpleri toplamak için bir protokol mevcut.

Transkripsiyonal Analiz Büyük ölçekli Zebra balığı Embriyonik Kalp Diseksiyon

Kardiyovasküler araştırmalar için zebra balığının kullanımı, yetişkin kalpleri üzerinde yapılan araştırmalara doğru genişliyor. Bu uygulamalar için, kalp dokularının hızlı ve basit bir şekilde izole edilmesi, ölüm sonrası değişikliklerden kaçınmak ve yeterli sayıda numune elde etmek için anahtardır. Burada, yetişkin zebra balığı kalplerini incelemek için hızlı ve tekrarlanabilir bir yöntem açıklıyoruz.

Yüksek verim Uygulamaları Yetişkin Zebra Hearts Kurtarma

Konjenital kalp kusurlarına yol açan mutasyonlar, gelişim sırasında kardiyak yapının in vivo araştırılmasından yararlanır, ancak fare embriyonik kalbindeki yüksek çözünürlüklü yapısal çalışmalar teknik olarak zordur. Burada, gelişmekte olan fare kalbindeki kardiyomiyosite özgü yapıları değerlendirmek için sağlam bir immünofloresan ve görüntü analizi yöntemi sunuyoruz.

Embriyonik Fare Heart Immunofluorescence kullanarak kardiyomiyosit Geliştirme Analizi

Bu protokol, erken evre zebrafit embriyoları belirli hücre popülasyonlarında hassas kolokalizasyon analizlerini sağlayarak, krobölümler üzerinde sıralı immünofluoresesans ve immünhistokimyasayı gösterir.

Cryosec, zebrafish embriyo üzerinde sıralı Immünofluorescence ve Immünhistokimya

Burada, zebra balığı embriyoları ve larvalarının tüm preparatlarında floresan antikor aracılı proteinlerin tespiti için bir protokol salıyoruz.

Zebrabalığı Embriyoları ve Larvalarında Tüm Mount Immunohistochemistry

Bu protokol, zebra balığı embriyolarının parçalanmış kalplerinde PM2.5kaynaklı DNA hasarını tespit etmek için bir immünofluoresans testi kullanır.

Zebra Balığı Embriyo Kalplerinde PM2.5kaynaklı DNA Hasarını Tespit Etmek için İmmünofluoresans Kullanma

Zebra balığı kalbinin in vivo ışık tabakası floresan mikroskopisi ile incelenmesi için optimize edilmiş araçlar açıklıyoruz. Özellikle, parlak kardiyak transgenik çizgiler öneriyoruz ve gelişimsel ve kalp kusurlarını önleyen yeni nazik gömme ve hareketsizleştirme teknikleri sunuyoruz. Kardiyak görüntülemeye uyarlanmış olası bir veri toplama ve analiz boru hattı da sağlanmaktadır.

Zebra Balığı Embriyolarında Hızlı Kardiyak Dinamiklerin Işık Tabakası Mikroskopisi

Bu çalışma, bireysel zebrafish embriyonik kalplerinde küresel DNA metilasyonunu nicelikten ölçemek için hassas bir immünoflüoresans tabanlı görüntüleme yöntemi oluşturmaktadır. Bu yaklaşım, sınırlı doku materyali zorluğunu aşar ve bisülfit dönüşümü ihtiyacını atlar.

Zebrafish Larvalarının Kalplerinde Küresel DNA Metilasyonu Tespiti

Öğrenin, Danio rerio embriyonik kalplerinde hücresel yapıları yüksek çözünürlükle görüntülemek için immün boyama yöntemini. Bu teknik, gelişim biyolojisi araştırmalarında hızlı ve etkili sonuçlar sağlar.

Zebra balığı Embriyonik Kalp Dissected, immün

Daha fazla video keşfet