Tüm Dağı Muscle Analizi ile tekrarlanabilir Fare Siyatik Sinir Ezilme ve Rejenerasyon daha sonraki Değerlendirme
22 Şubat 2012
Bu yazıda fare siyatik sinir ezmek için bir metodu tanımlar. Bu yöntem, hazır hemostatik forseps kullanır ve kolay ve tekrarlanabilir tam siyatik sinir üretir. Buna ek olarak, siyatik sinir sonra rejenerasyon analizi için uygun kas bütün bağlar hazırlamak için bir yöntem açıklanmaktadır.
Bu prosedürün genel amacı, siyatik sinir ezilmesinin basit bir tekrarlanabilir yöntemini ve siyatik sinir ezilmesinden sonra kas reinnervasyonunun tüm mount analizini göstermektir. Bu, sinire iyi erişim sağlamak için cerrahi ekartörlerin uygun şekilde düzenlenmesi de dahil olmak üzere, önce siyatik sinirin açığa çıkarılmasıyla gerçekleştirilir. Daha sonra, siniri hemostat forseps ile ezin ve siniri odun kömürü ile işaretleyin.
Daha sonra siyatik sinir tarafından innerve edilen bireysel kasları arka bacaktan çıkarın. Son adım, immün boyamadan sonra tüm montaj analizi için tek tek kasları incelemektir. Sonuç olarak, sonuçlar, tekrarlanabilir siyatik sinir ezilmesinin basit bir şekilde gerçekleştirilebileceğini ve sonraki rejenerasyonu analiz etmek için kas deliği montajlarının kullanılabileceğini göstermektedir.
Bu prosedürün temel avantajı, siyatik siniri ezmek ve ardından aksonal rejenerasyonu skorlamak için basit bir tekrarlanabilir teknik sağlamasıdır. Bu prosedüre, ameliyat sonrası ağrıyı en aza indirmek için intraperitoneal enjeksiyon yoluyla kilogram ketamin başına 100 miligram ve kilogram ksilazin başına 10 miligram kokteyl kullanarak fareyi ameliyat için uyuşturarak başlayın. Fare ayrıca kilogram meloksikam başına 10 miligramlık bir deri altı enjeksiyonu alır.
Ardından, cerrahi bir kesme makinesi kullanarak her iki arka tarafı da dikkatlice tıraş edin. Daha sonra tamamen tükenmesi için nare tüy dökücü krem sürün. Cildi steril bir pamuk uçlu aplikatör ve Betadine cerrahi ovma ile temizleyin.
Bundan sonra, steril bir pamuk uçlu aplikatör ile gözlere oftalmik merhem sürün. Fareyi önceden ısıtılmış homeo temalı bir battaniyenin üzerine temiz bir paslanmaz çelik plaka üzerine yerleştirin ve hayvanın sıcaklığını 37 santigrat derecede tutun. Sonra tüm uzuvları bantlayın.
Arka ayağı dikkatlice simetrik olarak konumlandırın, böylece diz eklemi vücutla dik bir açı yapar. Daha sonra, cerrahi alanı mikroskop altında steril bir örtü ile örtün. Orta hat boyunca yarım daire şeklinde bir kesi yapın.
Cildi alttaki kas sisteminden nazikçe ayırın ve zaman zaman katlayın. İşlem sırasında cerrahi bölgeyi nemli tutmak için yaklaşık 0.1 mililitre steril salin uygulayın. Ardından, gluteus maximus ile biceps femoris'in ön başı arasındaki fasiyal düzlemi açın.
Cerrahi kontrol için siyatik siniri ortaya çıkarmak. Kontralateral siyatik sinir açığa çıkarılmalı ve mobilize edilmeli, ancak sağlam bırakılmalıdır. Daha sonra gluteal kas sistemini dinlendirin ve dikin.
Deneysel siyatik siniri ekartörlerle aynı şekilde ortaya çıkarın. Görselleştirmeyi kolaylaştırmak için. Bir çift iridektomi makası kullanarak siyatik siniri çevredeki bağ dokusundan nazikçe serbest bırakın.
Ardından, siniri süper ince hemostatik forsepsin alt çenesine yerleştirmek için ince 5 45 forseps kullanın, üç fasözü, üst üste değil, bitişik olarak hizalayın. Hemostatik forseps, uçlarından 1,5 milimetre uzaklıkta bir işaret ile oyulmuştur. Siyatiğin en dış kısmını ezmeden önce bu işaretle aynı hizaya getirin.
Bu, düzgün genişlikte bir ezilme sağlar ve sinirin, kırma kuvveti nedeniyle düzleştiğinde hemostatik forsepsin çenelerinin ötesine uzanmamasını sağlar. Sinir forseps uçlarının ötesine uzanırsa, sinir sadece kısmen ezilir. Ezilme bölgesini işaretlemek için önceden daldırılmış ve toz karbon haline getirilmiş ikinci bir çift hemostatik forseps kullanın.
Aynı ezilme bölgesinde siniri üç tıklamayla 15 saniye boyunca ezin. Hiçbir karbon işareti, ilk ezilme sınırının ötesine geçmemelidir. Forsepsleri karbona önceden daldırmak ve cerrahi bölgede yaygın karbonu önlemek için ezilme bölgesinin hassas bir şekilde işaretlenmesi gerekiyorsa, bu özellikle önemlidir.
Forsepsleri toz karbonda açın. Sonra yavaşça kapatın. Kanama durdurucuların dışındaki karbonu silmek için steril gazlı bez kullanın.
Kırma yüzeylerinin eşit şekilde toz karbonla kaplandığını doğrulamak için forsepsleri en az üç x büyütme altında kontrol edin. Gerekirse, tekrar daldırılır ve silinir, gluteal kas sistemini karşı tarafla aynı şekilde dinlendirir ve diker. Son olarak, dokuz milimetrelik refleks klipsleri kullanarak cilt kesisini kapatın.
Dokuz milimetrelik refleks klipslerin hareketi kısıtladığı tespit edilirse, daha küçük refleks klipsleri veya altı adet aut sütür kullanılabilir. Bunun yerine, fareyi feda ettikten sonra dört kası çıkarın. Arka bacaktaki tibialar anterior ekstansör digitorum longus, peroneus longus ve soleus, bağ dokularından siyah sard kaplı bir tabağa dikkatlice tutturulur.
Sonra onları PBS'de durulayın. Daha sonra, 30 dakika boyunca% 4 Paraform aldehit içinde sabitleyin. Her bir kası siyah sard kaplı bir Petri kabı üzerinde incelemek için, iridektomi makasını kullanarak tendonları çıkarın.
Bundan sonra, iç kas liflerini soyarak kasları inceltin Uç plaka bantları da dahil olmak üzere kasın dış yüzeyini dikkatlice koruyun. Daha sonra elde edilen kasları vektör kalkanlı artı slaytlara monte edin ve 22 x 40 milimetre cam kapak slipleri iki tarafını şeffaf oje ile kapatın. Kızağa düzgün bir şekilde monte edildiklerinde, nplate bantları kapak kızakları ile temas halinde olmalıdır.
İşte sol arka bacakta yerinde bir ezilme bölgesi örneği. Ezilme bölgesi siyah karbon ile gösterilir. Yıldız işareti, uyluk kaslarını innerve eden ve yararlı bir dönüm noktası görevi gören tibial sinirin bir dalını işaretler.
Ezilme cerrahisi sırasında, siyatik sinirin tibial bölümü mavi, peroneal ve yeşil ve srel ve sarı ile özetlenir. Bu yarı ince kesit, hemostatik forseps ile gerçekleştirilen tam bir ezilmeyi gösterir. Ok uçları burada ezilmiş lifleri gösterir.
Açılı forseps ile gerçekleştirilen eksik bir ezilme, başka bir yarı kanat bölümünde gösterilir. Ok ucu yine ezilmiş lifleri gösterirken, oklar korunmuş aksonları gösterir. Bunlar, tüm montaj kaslarından elde edilen görüntülerdir.
Bağ dokusunun çıkarılmasından ve ardından inceltilmesinden sonra, nplate bantları her kas üzerinde ana hatlarıyla belirtilir. Burada gösterilen sous bütün montaj kasıdır. Siyatik sinir ezilmesinden 14 gün sonra.
Oklar, nöromüsküler kavşağın bir akson tarafından yeniden innerve edilmiş alanlarını gösterir. İşte denerve nöromüsküler kavşağın gösterimi. Boşluk 43 pozitif schwan hücre süreçleri ok uçları ile gösterilir.
Bu denerve nöromusküler kavşakta akson görülmez. Bu videoyu izledikten sonra, statik sinirin tekrarlanabilir bir şekilde nasıl ezileceğini ve rejenerasyon analizi için kas hormonu bağlarının nasıl hazırlanacağını iyi anlamalısınız.
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin
Genel Bakış
Bu rapor, fare siyatik siniri ezip kas yeniden gerilmesini analiz etmek için basit ve tekrarlanabilir bir yöntemi açıklar. Teknik, eksiksiz sinir ezilmesi sağlamak için hazır bulunan hemostatik forseps kullanır ve rejenerasyon analizi için kas tüm montajlarının hazırlanmasını içerir.
Çalışmanın Ana Bileşenleri
Bilim Alanı
- Sinirbilim
- Yenilebilir Tıp
- Kas Fizyolojisi
Arka Plan
- Siyatik sinir yaralanmaları önemli motor eksikliklere yol açabilir.
- Sinir rejenerasyonunu anlamak, terapötik stratejiler geliştirmek için kritik öneme sahiptir.
- Tüm montaj analizi, kas yeniden gerilmesine dair içgörüler sağlar.
- Mevcut yöntemlerin tekrarlanabilirlik ve erişilebilirlik açısından eksiklikleri olabilir.
Çalışmanın Amacı
- Siyatik sinir ezilmesi için tekrarlanabilir bir yöntem göstermek.
- Sinir rejenerasyonunun sonraki analizi için kas tüm montajlarını hazırlamak.
- Araştırmacıların kolayca benimseyebileceği basit bir protokol sağlamak.
Kullanılan Yöntemler
- Cerrahi retraktörler kullanarak siyatik siniri açığa çıkarın.
- Siniri hemostat forseps ile ezin ve kömür ile işaretleyin.
- Arka uzuvdan siyatik sinir tarafından sinirlenen bireysel kasları çıkarın.
- İmmünosar boyama sonrası tüm montaj analizi için kasları açın.
Ana Sonuçlar
- Yöntem, tutarlı ve eksiksiz siyatik sinir ezilmesine izin verir.
- Kas tüm montajları, rejenerasyon için etkili bir şekilde analiz edilebilir.
- Sonuçlar, bu yaklaşımın sinir onarımının incelenmesi için uygulanabilirliğini gösterir.
- Bulgular, kas yeniden gerilme süreçlerinin anlaşılmasına katkıda bulunur.
Sonuçlar
- Bu yöntem, sinir yaralanmalarını inceleyen araştırmacılar için güvenilir bir araç sağlar.
- Tüm montaj analizi, kas yeniden gerilmesinin değerlendirilmesi için değerli bir tekniktir.
- Protokol, çeşitli araştırma ortamlarında kolayca uygulanabilir.
Sıkça Sorulan Sorular
Executive Industry Relevance
This method provides a reproducible model for studying peripheral nerve regeneration, enabling mechanistic de-risking of therapeutic targets in preclinical neuroscience programs. By standardizing sciatic nerve crush and quantifying reinnervation via whole mount muscle analysis, it supports target validation and assay development for neuroprotective or neuroregenerative candidates. The approach enhances predictive confidence in early discovery by linking axonal growth to functional reinnervation readouts.
Strategic Applications in Biopharma R&D
Early Discovery & Target Validation
- Scientific Value: Enables interrogation of therapeutic hypotheses on axonal regeneration and Schwann cell interactions in a genetically tractable model.
- Operational Value: Uses widely available transgenic mouse lines to dissect molecular mechanisms of nerve repair with high reproducibility.
Screening & Assay Development
- Scientific Value: Generates quantitative, imaging-ready outputs (e.g., neuromuscular junction reinnervation) for high-content screening of compound libraries.
- Operational Value: Standardizes crush site marking and muscle preparation to ensure assay consistency across laboratories and timepoints.
Translational & Preclinical Research
- Scientific Value: Bridges discovery to preclinical validation by modeling axonotmesis, a clinically relevant peripheral nerve injury.
- Operational Value: Supports risk-adjusted advancement decisions through longitudinal, structure-function correlation of regeneration.
Pipeline & Workflow Integration
The method fits within the discovery continuum from target hypothesis testing to lead identification, providing a disease-relevant system for evaluating biologics or small molecules aimed at enhancing nerve repair.
- Discovery Biology: Supports pathway clarification and functional target validation by enabling precise measurement of axonal regeneration kinetics.
- Screening: Delivers assay-ready tissue preparations with quantifiable dependent variables (e.g., reinnervated endplate bands) for compound effect assessment.
- Analytics: Generates statistical outputs from whole mount imaging that allow comparison of regeneration efficacy across experimental conditions.
- Translational Research: Aligns with preclinical continuity by using a rodent model predictive of human peripheral nerve lesion responses.
- Enterprise Reuse: Establishes a standardized, scalable platform for repeated use in target de-risking and lead optimization campaigns.
Operational & Enterprise Impact
- Scientific Value: Reduces mechanistic ambiguity in target validation through direct visualization of axonal-Schwann cell-basal lamina interactions.
- Operational Value: Ensures reproducibility via standardized crush force, site marking, and muscle whole mount protocol.
- Strategic Value: Improves go/no-go decisions by providing objective, histology-based regeneration metrics early in the pipeline.
- Portfolio Impact: Enables risk-adjusted prioritization of neuroregenerative candidates based on functional reinnervation data.
Implementation Considerations
- Requires expertise in microsurgery, tissue dissection, and immunofluorescence staining.
- Depends on access to stereomicroscopes, hemostatic forceps, and imaging systems for whole mount analysis.
- Necessitates cross-team standardization of crush duration, marking technique, and muscle fixation timing.
- Involves adaptation considerations when applying the model to different mouse strains or genetic backgrounds.
- Limited by the need for terminal procedures and skilled handling to maintain crush consistency and marking fidelity.
