Name: Farklı soy İnsan Embriyonik Kök Hücreleri (hESC) Yayılması ve Farklılaşma için 3D Platformu olarak aljinat Mikrokapsül (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-03-09T12:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 1 s
Description: Keşfedin, insan embriyonik kök hücrelerinin aljinat mikrokapsüller içinde 3D ortamda dopaminerjik nöronlara farklılaşmasını. Bu yöntem, hücre-hücre etkileşimlerini artırır ve transplantasyon sırasında immün izolasyon sağlar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Bu çalışma Tıp NHMRC Programı Hibe # 568969 (PSS) ve Fakülte, New South Wales Üniversitesi, Kök Hücre Girişimi (KSS) tarafından desteklenmektedir.

Aşağıdaki işlemleri her bir sınıfı II Biyogüvenlik Cabinet içindeki aseptik teknikler kullanılarak yürütülür. Reaktifler ve kullanılan ekipman aşağıdaki tablolarda listelenmektedir. 1. % 1.1 aljinat hazırlanması (w / v) <ol><li> Sodyum alginat saflaştırılmış 0,275 g ekleme (yüksek glukuronik asit içeriği ≥% 60, viskozite&gt; 200 mPa s, endotoksin ≤ 100 AB / g), bir steril 50 ml tüp içinde ve (0.5g daha önce hazırlanmış 25 ml steril% 0.1 jelatin solüsyonu ilave gelatin/500 ml mili-Q H 2 O ve otoklav ile çözünmüş). </li><li> Kısmen aljinat Tozun erimesi için yaklaşık 30 saniye boyunca Vortex tüp sonra gece boyunca 10 xg&#39;de orbital karıştırıcıda tüp yeri (oda sıcaklığı). </li><li> Aljinat çözelti 25 ml steril% 9 NaCl (NaCl/50 ml Milli-Q H2O 4.5 g) ve 2,778 ml ilave edilir. 5 dakika süreyle 95 x g&#39;de santrifüj ile takip yaklaşık 30 saniye boyunca vorteks tüp. </li><li> 4 de aljinat çözüm Mağaza °; Kısa vadeli depolama (1-2 ay) veya -20 ° C&#39;de uzun süreli depolama (bir yıl) C. </li></ol> 2. CaCI2 Yağış Banyo hazırlanması <ol><li> Mili-Q H 2 O 1 litre CaCI2 14.7 g. 2H 2 O ve HEPES 2.38 g eritilir </li><li> 7.4 pH seviyesini ayarlayın. </li><li> 0.22 um bir filtreden kullanarak sterilize çözeltisi. </li><li> Yağış banyo oda sıcaklığında (6-12 ay) saklanabilir. </li></ol> 3. Çözelti Decapsulating hazırlanması <ol><li> Dulbecco fosfat, 500 ml tuzlu (D-PBS) Tamponlu, 0.5 M EDTA ve 50 ml ve 1M HEPES 5 ml ilave edilir. </li><li> 20 dakika boyunca 121 az bir 0.22 um bir filtreden ya ° C&#39;de otoklavda kullanarak sterilize. </li><li> Oda sıcaklığında (6-12 ay) decapsulating çözüm saklayın. </li></ol> 4. Serum Replacement (SR) Orta hazırlanması <ol><li> Önce kapsülleme için de olarak önceden SR orta hazırlamaközel reaktifler ve ekipman Tablo kayıtsız kalamayız. </li></ol> 5.. ROCK İnhibitörü hazırlanması (Y-27632) <ol><li> Insan D-PBS (HSA) serum albümin, 5 mM çözümü için% 0.1 Y-27.632 tozu sulandırınız. </li></ol> 6. Kapsül için hESC hazırlanması <ol><li> 37 ° C (ışıktan korumak) iki saat için ROCK inhibitörü (RI) 10 uM ile desteklenmiş kültür ortamı ile ön-muamele hücreleri. </li><li> RI tedaviden sonra, 37 ° C&#39;de 10 dakika süreyle accutase ile enzimatik olarak iki kez PBS ile D-hücreleri yıkanması ve kültür plakaları ile hücreleri çıkarmak </li><li> Yavaşça pipetle veya hücre sıyırıcı ile hücreleri sıyırmak ve bir 15 ml tüp içinde toplamak. 1:1 oranında SR ortam ile nötralize accutase. </li><li> Tek bir hücre süspansiyonu hazırlamak için, bir 40 um bir filtreden kullanılarak nötralize hücreleri filtre ve yeni bir 50 ml&#39;lik bir santrifüj tüpüne toplayabilir. </li><li> Bir hemasitometre ile çözelti içinde hücrelerin sayısını hesaplamak. </li&gt; <li> Hücre süspansiyonu 5 dakika süreyle 95 x g&#39;de santrifüje ve dikkatli bir şekilde sonradan Süpernatan atılır. Önceden ısıtılmış% 0.9 NaCI ile yıkanır hücreleri. 5 dakika süreyle 95 x g santrifüj ve süpernatant atılır. </li></ol> 7. Hücre Kapsülleme <ol><li> 14G x 2 &quot;IV kateterin yumuşak bir plastik boru bağlı bir 1 ml şırınga hazırlayın. Bu Şekil 1 &#39;de gösterildiği gibi şırınga pompası yüklenecek hücre süspansiyonu aspire için kullanılır. </li><li> 1.250.000 hücre / ml aljinat bir yoğunlukta önceden ısıtılmış aljinat çözeltisi ile tekrar süspansiyon hücreleri. Yavaşça şırınga ile karıştırın ve hava kabarcıkları oluşturarak kaçının. </li><li> Şekil 1 &#39;de gösterildiği gibi boncuk jeneratörü, şırınga pompası ve hava akış ölçer ayarlayın. Bu cihazların daha fazla ayrıntı özel reaktifler ve ekipman Tablo listelenmiştir. </li><li> Enjektöre aspire hücreleri ile, IV kateter plastik boru atmak ve kapsülleme makineye şırınga takın. 10 cm boşluk olacak olmadığından emin olun<html> tween kapsülleme makinenin uç ve toplama merkezine Şekil 1 &#39;de gösterildiği gibi. </li><li> 20 ml / saat, hava akışı 8 L / dak oranı ve 100 kPa (kapsül boyutu havanın akış hızı değiştirilerek edilebilir) arasında bir basınçta şırınga pompası ayarlayarak hücreleri saklanması. </li><li> Kapsüller stabilize etmek 7 dakika boyunca önceden ısıtılmış çöktürme banyosunda 20 ml ile doldurulmuş bir petri çanağı (100 x 15 mm) içine kapsüllenmiş hücreler toplanır. </li><li> % 0.9 NaCl 20 ml ile dolu 50 ml&#39;lik bir santrifüj tüpü içine nazik bir aspirasyon kapsüllenmiş hücreleri transfer edin. </li><li> Kapsül tüpün dibine yerleşmesine izin yavaşça süpernatant atın. % 0.9 NaCl ile yıkama işlemi tekrarlayın. </li><li> Bir kültür balona RI (10 uM), transfer ile desteklenmiş ve 37 ° C /% 5 CO2 inkübe önceden ısıtılmış kültür ortamı içinde kapsüllenmiş hücreleri tekrar süspansiyon. </li></ol> 8. DA Nöronlar için Encapsulated hESC Farklılaşma ve_content &quot;&gt; kapsüllü hESC farklılaşma önce 3 gün boyunca RI ile tedavi edilirler. <ol><li> Tohum fare stromal hücre hattı, 1,0 x 10 4 cm 2 başına% 0.1 jelatin kaplı T75 şişesi ve durumu 24 saat önce farklılaşma DA nöral farklılaşma orta (Malzeme Tablo) PA6 hücreler. Bir yoğunlukta PA6 hücreleri </li><li> 50 ml&#39;lik bir santrifüj tüpüne aktarılır ve bunların kapsüller borusunun alt kısmını çözmek için olanak sağlar. </li><li> Süpernatant atın ve PA6 hücre klimalı DA nöral farklılaşması orta kapsül tekrar süspansiyon. </li><li> Kültür 4. günde bir medya değişim ve her gün ile 28 gün boyunca PA6 hücre tek tabakalı (7.5 x 10 5 PA6 hücre başına 9 x 10 6 hESC) ile kapsüllü hESC sonra (orta her zaman sadece yarısı değiştirin). </li><li> PA6 hücreleri kültürüne 3 hafta sonra, 100 ng / ml SHH ve kalan hafta için 100 ng / ml FGF8a ile DA sinir farklılaşma orta tamamlar. </li&gt; </ol> 9. Encapsulated hESC ve decapsulation <ol><li> Bir 15 ml&#39;lik bir santrifüj tüpüne kapsüller aspire ve tüpün altında getirilmesi için olanak sağlar. Sonra dikkatle süpernatant atın. </li><li> Iki kez D-PBS ile kapsül yıkayın. Daha sonra süpernatan kaldırmak kapsüller borusunun alt kısmında dinlendiriniz. </li><li> Kapsülleri 5 ml decapsulating çözüm ekleyin. 4-5 dakika için oda sıcaklığında önceden inkübasyonu ile aspirasyon yoluyla iyice süspansiyon karıştırılır. </li><li> 3 dakika süreyle 95 x g&#39;de santrifüje decapsulated hücreleri ve süpernatant atılır. </li><li> 3 dakika süreyle 95 x g&#39;de santrifüj ile takip D-PBS ile hücre peleti yıkanır. Tekrarlayın. </li><li> Decapsulated hücreler daha bir tek tabaka olarak kültür veya alt analiz için kullanılan olabilir. </li></ol> 10. Temsilcisi Sonuçlar Aljinat mikrokapsüller çapı 400-500 mikron olduğunu. Kapsül içerisinde hücre sayısı estimat idiçalıştırma başına kapsül toplam sayısı ile bölünür hücrelerin sayısı hesaplayarak ed. Bu nedenle, kapsül başına yaklaşık 5,0 x 10 4 hücre tahmin edilmiştir. Bu, biz kapsül içerebilir hücrelerin sayısı yaklaşık 1.0 x 10 5 olduğunu tahmin. Kapsüllenmiş hESC yaşayabilirliği carboxyfluorescein diasetat succinimidly ester (CFDA) / propidium iyodür (PG) testi kullanılarak kullanılarak belirlenir&gt;% 80 (Şekil 2) gibidir. Biz% 1.1 aşağı 2,2 &#39;den% aljinat konsantrasyonu azaltarak ve baryum klorür kalsiyum klorür yağış banyo değiştirerek hESC encapsulation koşulları optimize etmiş. Bu koşullar, biz% 1.1 kalsiyum aljinat ile kapsüllü, sadece hücrelerin hayatta kaldığını göstermektedir, çoğalmalı ve in vitro 1 EBS oluştururlar. Daha da durumun optimize etmek için, kültür ortamı ve RI etkileri, Y-27.632 incelenmiştir. Şekil 2 ve 3&#39;te gösterildiği gibi veriler, RI prevente göstermekd ayrışma bağlı apoptoz ve hücre canlılığı ve terfi kümelenme oluşumu 1,6 sürdürdü. Ayrıca, HFF-CM + RI kültüre kapsüllü hESC canlılığı RI takviyesi olmadan diğer gruplara göre anlamlı derecede yüksek olduğu, ancak bu SR + RI kültüre kapsüllü hESC önemli ölçüde farklı değildi. Benzer şekilde, BrdU testi kullanılarak hücre çoğalması kümeler (Şekil 3) haline tek hücre olarak% 25 den% 75 e yükselmiştir. TUNEL ile Apopitoz testi HFF-CM alınan kümeleri TUNEL çoğunlukla negatif ise SR besiyerine mikrokapsüller içinde tek hücre (veriler gösterilmemiştir) apoptotik olduğunu ortaya koydu. Belli bir dereceye kadar, bFGF ile takviye HFF-CM ayrıca Y-27.632 yokluğunda hayatta kalma ve kapsüllü hESC proliferasyonu terfi. Ancak, Y-27632 ile tedavi kapsüllenmesinden önce (2 saat) ve sonrasında (ek 4 gün boyunca) belirgin gelişmiş canlılığında, çoğalmasında ve kapsüllü hESC küme oluşumu% 1.1 kalsiyum aljinat mikrokapsüller içinde. Daha önce, kapsüllü hESC başarıyla kesin endoderm 1 ile ayırt edilebileceğini göstermiştir. Burada, DA nöronlarının içine kapsüllü hESC ayırt etmek için bir 3D platform olarak hücre encapsulation uygulamasını inceledi. kapsüller içinde embriyoid organları (EB) oluşan hESC, farklılaşmış doğrudan vardı ve belirtilen koşullarda decapsulation fazla% 90 canlılık ile kültür 2-3 gün sonra (Şekil 4) ilerleyici bir nöronal morfoloji gösterdi. Neuroprogenitor işaretleyici, PAX6 ve DA nöronal marker, TH farklılaşma 7 gün (Şekil 5A) sonra up-regüle iken gen ekspresyon analizi pluripotent marker bir yük atma, OCT4 gösterdi. Immünofloresan boyama farklılaştırılmış hESC gün 7&#39;de PAX6-pozitif (&gt;% 80) ama OCT4-negatif olduğu gözlendi. Ayrıca farklılaştırılmış hESC 21 gün sonra TH-pozitif (&gt;% 90) nöronların (Şekil 5B) gösterdi. Western Blot analizi de gösterdiPAX6 ifadesi iken günde 14 TH ifade bir up-regülasyon (Şekil 5C) 21. gün sonra aşağı düzenlenir. Karşılaştırma olarak, hücre (önceden farklılaşma örneğin RI 3 gün için 2 saat ve RI post-tedavisi için ön-muamele) (&gt; 80 PAX6-pozitif hücreleri arasında yüksek bir oranda muhafaza benzer koşullar altında (2B) iki boyutlu bir ortamda kültüre %) farklılaşma dönemi boyunca ve kapsülleme (Şekil 5A ve C) tarafından sağlanan 3D ortamında olduğu gibi TH-pozitif hücrelerin (&lt;60%) ile ayırmada olarak etkili değildir.

<ol><li>Chayosumrit, M., Tuch, B., Sidhu, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Alginate+microcapsule+for+propagation+and+directed+differentiation+of+hESCs+to+definitive+endoderm%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">Alginate microcapsule for propagation and directed differentiation of hESCs to definitive endoderm.</a> Biomaterials. 31, 505-514 (2010).</li>
<li>Dean, S. K., Yulyana, Y., Williams, G., Sidhu, K. S., Tuch, B. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Differentiation+of+encapsulated+embryonic+stem+cells+after+transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22Transplantation%22%5BJournal%5D)">Differentiation of encapsulated embryonic stem cells after transplantation.</a> Transplantation. 82, 1175-1184 (2006).</li>
<li>Siti-Ismail, N., Bishop, A. E., Polak, J. M., Mantalaris, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+benefit+of+human+embryonic+stem+cell+encapsulation+for+prolonged+feeder-free+maintenance%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">The benefit of human embryonic stem cell encapsulation for prolonged feeder-free maintenance.</a> Biomaterials. 29, 3946-3952 (2008).</li>
<li>Dawson, E., Mapili, G., Erickson, K., Taqvi, S., Roy, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biomaterials+for+stem+cell+differentiation%5BTitle%5D)+AND+%22Adv.+Drug+Deliv.+Rev%22%5BJournal%5D)">Biomaterials for stem cell differentiation.</a> Adv. Drug Deliv. Rev. 60, 215-228 (2008).</li>
<li>Cell encapsulation: promise and progress. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22Nat.+Med%22">Nat. Med</a>. Orive, G. 9, 104-107 (2003).</li>
<li>Watanabe, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+ROCK+inhibitor+permits+survival+of+dissociated+human+embryonic+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">A ROCK inhibitor permits survival of dissociated human embryonic stem cells.</a> Nat. Biotechnol. 25, 681-686 (2007).</li>
<li>Dang, S. M., Gerecht-Nir, S., Chen, J., Itskovitz-Eldor, J., Zandstra, P. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Controlled%2C+scalable+embryonic+stem+cell+differentiation+culture%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells%22%5BJournal%5D)">Controlled, scalable embryonic stem cell differentiation culture.</a> Stem Cells. 22, 275-282 (2004).</li>
<li>Drukker, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+the+expression+of+MHC+proteins+in+human+embryonic+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci.+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Characterization of the expression of MHC proteins in human embryonic stem cells.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U S A. 99, 9864-9869 (2002).</li>
<li>Calafiore, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Standard+Technical+Procedures+for+Microencapsulation+of+Human+Islets+for+Graft+into+Nonimmunosuppressed+Patients+With+Type+1+Diabetes+Mellitus%5BTitle%5D)+AND+%22Transplantation+Proceedings%22%5BJournal%5D)">Standard Technical Procedures for Microencapsulation of Human Islets for Graft into Nonimmunosuppressed Patients With Type 1 Diabetes Mellitus.</a> Transplantation Proceedings. 38, 1156-1157 (2006).</li>
<li>Cho, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Highly+efficient+and+large-scale+generation+of+functional+dopamine+neurons+from+human+embryonic+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci.+U.S.A%22%5BJournal%5D)">Highly efficient and large-scale generation of functional dopamine neurons from human embryonic stem cells.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 105, 3392-3397 (2008).</li>
<li>Vazin, T., Chen, J., Lee, C. T., Amable, R., Freed, W. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Assessment+of+stromal-derived+inducing+activity+in+the+generation+of+dopaminergic+neurons+from+human+embryonic+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells%22%5BJournal%5D)">Assessment of stromal-derived inducing activity in the generation of dopaminergic neurons from human embryonic stem cells.</a> Stem Cells. 26, 1517-1525 (2008).</li>
</ol>

Biz ifşa hiçbir şey yok.

Fare embriyonik kök hücreleri ve hESC kullanıldığı çeşitli çalışmalar biyomalzeme ve doku mühendisliği 2,3 3D kültür sisteminin faydalarını göstermiştir. Biz baryum aljinat fazla kalsiyum aljinat kapsüllenmiş zaman hESC anlamlı düzeyde daha canlılık gösterdi beri baryum aljinat göre hESC yayılması ve farklılaşmayı çalışmak için uygun bir 3D platform olarak kalsiyum aljinat mikrokapsüller kullanılır. Bu kültür sistemi, aynı zamanda yüksek yoğunluklu bir hücre kültürü ve besin ve membran 7 boyunca ok...

<table border="1"><tbody><tr><td> Reaktif Adı </td><td> Şirket </td><td> Katalog numarası </td><td> Notlar </td></tr><tr><td> Aljinat (MVG UP Pronova) </td><td> Novomatrix </td><td> 4200101 </td><td> yüksek glukuronik asit içeriği ≥% 60, viskozite&gt; 200 mPa s, endotoksin &lt;100 AB / g </td></tr><tr><td> Jelatin </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> G1890-100G </td><td></td></tr><tr><td> % 0.9 NaCl </td><td> Baxter sağlık </td><td> AHF7123 </td><td></td></tr><tr><td> Tip J1 boncuk jeneratör </td><td> Nisco Mühendislik A.Ş. </td><td> SPA-0447 </td><td></td></tr><tr><td> Çok Phaser şırınga pompası </td><td> New Era Pompa Sistemleri A.Ş. </td><td> Model KD-1000 </td><td></td></tr><tr><td> EZI-Akış Tıp Debimetre </td><td> Gascon Sistemleri</td><td> G0149 </td><td></td></tr><tr><td> Y-27632 </td><td> Merck </td><td> 688000 </td><td></td></tr><tr><td> Albumin Serum İnsan </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> A4327-1G </td><td></td></tr><tr><td> Accutase </td><td> Millipore </td><td> SCR005 </td><td></td></tr><tr><td> 14G x 2 &quot;IV kateter </td><td> Terumo </td><td> SR-OX1451C </td><td></td></tr><tr><td> Knockout-DMEM </td><td> Invitrogen </td><td> 10829-018 </td><td> SR orta (bazal) için </td></tr><tr><td> GlutaMAX-I </td><td> Invitrogen </td><td> 35050-061 </td><td> SR orta (2 mM) için </td></tr><tr><td> Knockout Serum Değiştirme </td><td> Invitrogen </td><td> 10828-028 </td><td> SR ortamı (% 20) için </td></tr><tr><td> Penisilin-Streptomisin </td><td> Invitrogen </td><td> 15070063 </td><td> SR orta (2.5 U / ml) için </td&gt; </tr><tr><td> İnsülin-Transferrin-Selenyum (ITS) </td><td> Invitrogen </td><td> 41400045 </td><td> SR orta (1x) için </td></tr><tr><td> β-merkaptoetanol </td><td> Invitrogen </td><td> 21985-023 </td><td> SR orta (0.1 mM) için </td></tr><tr><td> MEM NEAA Çözüm </td><td> Invitrogen </td><td> 11140-050 </td><td> SR ortamı (5 mM) için </td></tr><tr><td> Glasgow Minimum Essential Medium </td><td> Invitrogen </td><td> 11710035 </td><td> DA nöral farklılaşma orta (bazal) için </td></tr><tr><td> Knockout Serum Değiştirme </td><td> Invitrogen </td><td> 10828-028 </td><td> DA sinirsel farklılaşma ortamı (% 10) için </td></tr><tr><td> Sodyum piruvat </td><td> Invitrogen </td><td> 11360070 </td><td> DA sinirsel farklılaşma ortamı (1 mM) için </td></tr><tr><td> MEM NEAA Çözüm </td><td> Invitrogen </td><td> 11140-050 </td><td> DA neural farklılaşma ortamı (0.1 mM) </td></tr><tr><td> β-merkaptoetanol </td><td> Invitrogen </td><td> 21985-023 </td><td> DA nöral farklılaşma orta (0.1 mM) için </td></tr><tr><td> Sonic hedgehog (SSH) </td><td> R &amp; D Systems </td><td> 1314-SH-025/CF </td><td> DA nöral farklılaşma (100 ng / ml) için </td></tr><tr><td> Fibroblast büyüme faktörü 8a (FGF8a) </td><td> R &amp; D Systems </td><td> 4745-F8-050 </td><td> DA nöral farklılaşma (100 ng / ml) için </td></tr></tbody></table>

farklı soy İnsan embriyonik kök hücreleri (hesc) yayılması ve farklılaşma için 3d platformu olarak aljinat mikrokapsül

Alginate Microcapsule as a 3D Platform for Propagation and Differentiation of Human Embryonic Stem Cells (hESC) to Different Lineages

Süresiz kültüründe genişletilmiş ve vücutta herhangi bir hücre tiplerinin ayırt edilebilir beri İnsan embriyonik kök hücreleri (hESC) hücre replasman tedavisi için cazip bir alternatif kaynak olarak ortaya çıkmaktadır. Biyomateryallerin Çeşitli türleri de kök hücre niş 1-3 taklit eden bir mikro-çevre sağlamak için kök hücre kültürleri kullanılmıştır. İkinci tür kapsülleme gibi bir üç boyutlu (3B) ortamı 4 sağlayarak spesifik soyları gibi doku kuruluş içinde hücre-hücre etkileşim için-, hücre çoğalması, ve farklılaşmasını teşvik edilmesi için önemlidir. Hücre encapsulation prensibi 3D kültürleri 2 yarı geçirgen membranların sınırları içinde yaşayan hücrelerin tuzak içerir. Antikorlar ve kapsül gözenek boyutu daha büyük olan ana bilgisayardan bağışıklık hücreleri 5 dışlanır ise bu membranlar, besin, oksijen ve membranlar boyunca uyaranların değişimini sağlayacak. Burada, öncedenkültürüne bir yaklaşım gönderilen ve aljinat mikrokapsüller kullanarak 3D mikroçevresindeki hESC DA nöronları ayırt. Biz kapsüllü hESC canlılığı geliştirmek için kültür koşullarında 2 değiştirdiniz. Daha önce de göstermiştir ki, önemli ölçüde geliştirilmiş 3D platforma P160-Rho-bağlantılı sarmal-bobin kinaz (ROCK) inhibitörü, Y-27632 ve insan fetal fibroblast-şartlandırılmış serum değiştirilmesi vasatı (HFF-CM) ilavesiyle kapsüllenmiş hESC canlılığı aldığı hücreler, kesin endoderm işaretleyici gen 1 ifade etti. Şimdi DA nöronlara hESC ve verimli farklılaşma yayılması için bu 3D platformu kullandık. Protein ve gen ekspresyon analizleri DA nöronal farklılaşma son aşamasından sonra tirozin hidroksilaz artan bir ifade (TH), DA nöronlar için bir belirteç, 2 hafta sonra&gt; 100 kıvrımlar gösterdi. Biz aljinat mikrokapsüller kullanarak bizim 3D platformu çoğalması incelemek için yararlı olabilir varsaydık ve farklılaşma yönettiÇeşitli soy için hESC arasında. Bu 3D sistemi ayrıca farklılaşma işlemi sırasında hESC gelen besleme hücrelerinin ayrılması sağlar ve aynı zamanda gelecekte transplantasyon esnasında bağışıklık-izolasyon için potansiyeli vardır.

Biz endoderm ve dopaminerjik (DA) nöronlara yayılması ve embriyonik kök hücrelerin farklılaşması için etkili bir 3D platform olarak bir mikroenkapsülasyon tekniği optimize etmiş. Ayrıca nakli sırasında ana hücreleri bağışıklık izolasyonu için bir fırsat sağlar. Bu platform, diğer hücre türleri için adapte edilebilir.

Farklı soy İnsan Embriyonik Kök Hücreleri (hESC) Yayılması ve Farklılaşma için 3D Platformu olarak aljinat Mikrokapsül

İnsan embriyonik kök hücreleri (hESC), kültürde genişletilebildikleri için hücre yerine koyma tedavisi için cazip bir alternatif kaynak olarak öne çıkmaktadır...

Bu protokol, pluripotent insan embriyonik kök hücrelerini kapsüllemek ve bunları 3D bir sistemde dopaminerjik nöronlara farklılaştırmak için optimize edilmiştir. İlk olarak, kolonileri rock inhibitörü veya RI ile tedavi edin ve sodyum aljinat ile karıştırılmış solüsyonla tekil hücrelere ayırarak kapsülleme cihazından geçirin. RI tedavisine üç gün boyunca devam edin, kapsüllenen hücreleri PA altı hücrelerine aktarın ve 28 gün boyunca farklılaştırın.Sonuç olarak, gen ve protein ekspresyon analizleri, dopaminerjik nöronların oluşturulmasında daha yüksek bir verimlilik olduğunu göstermektedir. Bu özel tekniğin mevcut 2D diferansiyasyon protokolüne göre temel avantajı, bu hücreleri 3D ortam altında çoğaltmaya ve diferansiyate etmeye çalışmamızdır; bu 3D ortam, hücrelerin yüksek yoğunlukta çoğaltılabilmesine imkan tanır. Ayrıca bu durum, diferansiyasyon için daha iyi bir hücreden hücreye etkileşim fırsatı sağlar.Ve üçüncü olarak, ilerleyen aşamalarda size daha iyi bir farklılaşma verimliliği sağlayacaktır. Ayrıca şunu da ekleyebilirim ki, bu özel teknik, 3D ortamda çoğaltabileceğimiz diğer hücre tipleri için de uyarlanabilir. Ayrıca unutmayın, örneğin, bu özel teknik, hücre apoptozunu ve

alginate-microcapsule-as-3d-platform-for-propagation-differentiation

Research

JoVE Journal

Bioengineering

Biyomühendislik

Bu video, üç boyutlu bir yapı iskelesi içinde insan nöral kök hücrelerinin gelişimini ve farklılaşmasını göstermektedir. İskele üzerindeki bir laminin kaplama, hücre bağlanmasını teşvik ederken, büyüme faktörü içermeyen bir nöral ortam, süreçlerini gözenekli bir mimari içinde birden çok yöne uzatan ve üç boyutlu bir kültür oluşturan nöral progenitör hücrelere hücre farklılaşmasını...

İnsan Nöronal Kök Hücrelerinin Gözenekli İskele Kullanılarak 3D Kültüre Ayırt Edilmesi

Bu videoda, İnsan embriyonik kök hücrelerinin nöral organoidlere dönüştürülmesi için aşamalı bir protokol gösterilmektedir. Yöntem, nöronal rozet oluşumunun indüklenmesini, ardından tam gelişmiş nöral organoidler elde etmek için kontrollü olgunlaşmayı ve hidrofobik bir zar üzerinde son kültürlemeyi içerir.

İnsan Embriyonik Kök Hücrelerinin Nöral Organoidlere Farklılaşması ve Olgunlaşması

Protokol bilgilerini, ikinci harmonik üreten nanopartiküller ile in vitro etiketleme insan embriyonik kök hücreleri için temin edilmiştir. Çoklu foton mikroskopi ve kalp kümeler halinde kendi farklılaşma ile HESC soruşturma için metodolojiler de sunulmuştur.

Rejeneratif Araştırma harmonik nanopartiküller

Farklılaşmış insan nöral kök hücreleri (hNSC'ler) üzerindeki miRNA'lardaki değişiklikleri karakterize etmek amacıyla, üç boyutlu bir sistemde hNSC farklılaşmasını, miRNA PCR dizisi ile mikroRNA ekspresyonundaki değişikliklerin değerlendirilmesini ve miRNA hedef tahmini için hesaplamalı analizi ve ikili lusiferaz testi ile doğrulanmasını açıklıyoruz.

Üç Boyutlu Kültürleri, mıkroRNA Analizi ve Putatif Hedef Genler üzerinde bir İnsan Sinir Kök Hücre Hattı Farklılaşma

Pluripotent kök hücreleri (PS hücreleri) bir koaksiyel nozul kullanarak aljinat hidrojel kapsüllerine kapsüllemek için bir yöntem oluşturduk.  Bu, hücrelerin aşırı toplanmasını önler ve süspansiyon kültüründeki hücrelerin yaşadığı kesme stresini sınırlar.  Teknik, PS hücrelerinin seri üretiminin yanı sıra kök hücre nişi üzerine yapılan araştırmalara da uygulanabilir.

Bir Koaksiyel Memesini kullanma Pluripotent Kök Hücre Aljinat Encapsulation

Insan pluripotent kök hücreler (hPSCs) farklılaştırmak ve farklı doku kalıpları içine kendini organize içsel yeteneği var; Bu mekansal çevre geçişlerini sunulmasını gerektirir rağmen. Biz hPSC farklılaşma desenleri kontrol etmek için biyokimyasal ve mekanik geçişlerini oluşturmak için basit ve sağlam bir yöntem olarak şablon micropatterning sunuyoruz.

Farklılaşma Fates Mekansal Organizasyonu Probing İnsan pluripotent kök hücrelerin Stencil micropatterning

Bu protokol, insan pluripotent kök hücrelerden tanımlanan kültür sistemi ve hücre kendi kendine montaj kullanarak hepatospheres üretmek için bir yaklaşım açıklanmaktadır. Bu protokol, hücre çizgilerinin bir dizi tekrarlanabilir, maliyet etkili ve Biyomedikal uygulama için istikrarlı insan hepatospheres üretimi sağlar.

Pluripotent kök hücrelerinden üç boyutlu ınsan Hepatokürlerin serum ücretsiz üretimi

Hücre dışı matriks ligandlar poliakrilamid hidrojeller üzerine uyumlu yüzeyler üzerinde sınırlı kolonilerde insan embriyonik kök hücrelerin kültürünü sağlamak için desenli olabilir. Bu yöntem, doku geometrisi, hücre tarafından oluşturulan kuvvetler ve kader özellikleri arasındaki etkileşimi incelemek için çekiş kuvveti mikroskobu ve biyokimyasal tahlillerle kombine edilebilir.

Doku Seviyesi Mekaniğinin Kontrol Altına Almak İçin Uyumlu Yüzeylerde İnsan Embriyonik Kök Hücre Kolonilerinin Geometrisinin Desenlemi

Burada sunulan insan embriyonik kök hücrelerinin tek hücreli kültür ve nöral progenitor hücrelere sonraki farklılaşma için bir protokoldür. Protokol basit, sağlam, ölçeklenebilir ve ilaç tarama ve rejeneratif tıp uygulamaları için uygundur.

İnsan Embriyonik Kök Hücrelerinin Tek Hücre Kültürünü Kullanarak Etkin Nöral Farklılaşma

Bu makalede, hESC farklılaşması sırasında Activin A ve CHIR99021'in kesin endoderm (DE) olarak sürekli olarak takviye edilmesiyle insan embriyonik kök hücrelerinin (hESC' ler) fonksiyonel hepatosit benzeri hücrelere (HLC) farklılaştırılması için ayrıntılı bir protokol açıklanmaktadır.

İnsan Embriyonik Kök Hücrelerinden Yönlendirilmiş Hepatosit Benzeri Hücre İndüksiyonu İçin Etkili Bir Yöntem

Bu makalede, insan pluripotent kök hücrelerinin (hPSC'ler) koaksiyel akış odaklama cihazı kullanılarak kapsüllenmesi açıklanmaktadır. Bu mikroakışkan kapsülleme teknolojisinin hPSC sferoidlerinin verimli bir şekilde oluşturulmasını sağladığını gösteriyoruz.

İnsan Pluripotent Kök Hücre Sferoidlerini Taşıyan Core-Shell Mikrokapsüllerinin Mikroakışkan İmalatı

Keşfedin, insan embriyonik kök hücrelerinin aljinat mikrokapsüller içinde 3D ortamda dopaminerjik nöronlara farklılaşmasını. Bu yöntem, hücre-hücre etkileşimlerini artırır ve transplantasyon sırasında immün izolasyon sağlar.

Farklı soy İnsan Embriyonik Kök Hücreleri (hESC) Yayılması ve Farklılaşma için 3D Platformu olarak aljinat Mikrokapsül

Daha fazla video keşfet