Name: CYP2D6 Hayvan Modeli:, Fare Otoimmün Hepatit indükleyin nasıl (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-02-03T12:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 3 s
Description: Öğrenin farelerde CYP2D6 adenovirüs enfeksiyonu ile otoimmün hepatit modeli oluşturmayı. Karaciğer lenfosit izolasyonu ve immünohistokimya yöntemleriyle kronik karaciğer inflamasyonunu inceleyin.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Bu çalışma, Goethe Üniversitesi Hastanesi Frankfurt ve, UC Alman Araştırma Vakfı Hibe tarafından desteklenmektedir

<ol><li>Manns, M. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Diagnosis+and+management+of+autoimmune+hepatitis%5BTitle%5D)+AND+%22Hepatology%22%5BJournal%5D)">Diagnosis and management of autoimmune hepatitis.</a> Hepatology. 51, 2193-2213 (2010).</li>
<li>Czaja, A. J., Manns, M. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Advances+in+the+Diagnosis%2C+Pathogenesis+and+Management+of+Autoimmune+Hepatitis%5BTitle%5D)+AND+%22Gastroenterology%22%5BJournal%5D)">Advances in the Diagnosis, Pathogenesis and Management of Autoimmune Hepatitis.</a> Gastroenterology. 4, 429-443 (2010).</li>
<li>Christen, U., Hintermann, E., Jaeckel, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((New+animal+models+for+autoimmune+hepatitis%5BTitle%5D)+AND+%22Semin.+Liver+Dis%22%5BJournal%5D)">New animal models for autoimmune hepatitis.</a> Semin. Liver Dis. 29, 262-272 (2009).</li>
<li>Christen, U., Holdener, M., Hintermann, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Animal+models+for+autoimmune+hepatitis%5BTitle%5D)+AND+%22Autoimmun.+Rev%22%5BJournal%5D)">Animal models for autoimmune hepatitis.</a> Autoimmun. Rev. 6, 306-311 (2007).</li>
<li>Czaja, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Animal+models+of+autoimmune+hepatitis%5BTitle%5D)+AND+%22Expert+Rev.+Gastroenterol.+Hepatol%22%5BJournal%5D)">Animal models of autoimmune hepatitis.</a> Expert Rev. Gastroenterol. Hepatol. 4, 429-443 (2010).</li>
<li>Holdener, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Breaking+tolerance+to+the+natural+human+liver+autoantigen+cytochrome+P450+2D6+by+virus+infection%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Exp.+Med%22%5BJournal%5D)">Breaking tolerance to the natural human liver autoantigen cytochrome P450 2D6 by virus infection.</a> J. Exp. Med. 205, 1409-1422 (2008).</li>
<li>Manns, M. P., Griffin, K. J., Sullivan, K. F., Johnson, E. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((LKM-1+autoantibodies+recognize+a+short+linear+sequence+in+P450IID6%2C+a+cytochrome+P-450+monooxygenase%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Clin.+Invest%22%5BJournal%5D)">LKM-1 autoantibodies recognize a short linear sequence in P450IID6, a cytochrome P-450 monooxygenase.</a> J. Clin. Invest. 88, 1370-1378 (1991).</li>
<li>Zanger, U. M., Hauri, H. P., Loeper, J., Homberg, J. C., Meyer, U. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antibodies+against+human+cytochrome+P-450db1+in+autoimmune+hepatitis+type+II%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci.+U.+S.+A%22%5BJournal%5D)">Antibodies against human cytochrome P-450db1 in autoimmune hepatitis type II.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. 85, 8256-8260 (1988).</li>
<li>von Herrath, M. G., Fujinami, R. S., Whitton, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microorganisms+and+autoimmunity%3A+making+the+barren+field+fertile%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Rev.+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Microorganisms and autoimmunity: making the barren field fertile.</a> Nat. Rev. Microbiol. 1, 151-157 (2003).</li>
<li>Yardeni, T., Eckhaus, M., Morris, H. D., Huizing, M., Hoogstraten-Miller, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Retro-orbital+injections+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Lab.+Anim.+%28NY%29%22%5BJournal%5D)">Retro-orbital injections in mice.</a> Lab. Anim. (NY). 40, 155-160 (2011).</li>
<li>Forbes, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Morbidity+and+mortality+rates+associated+with+serial+bleeding+from+the+superficial+temporal+vein+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Lab.+Anim.+%28NY%29%22%5BJournal%5D)">Morbidity and mortality rates associated with serial bleeding from the superficial temporal vein in mice.</a> Lab. Anim. (NY). 39, 236-240 (2010).</li>
<li>Ehser, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+mimicry+rather+than+identity+beaks+T+cell+tolerance+in+the+CYP2D6+mouse+model+for+human+autoimmune+hepatitis%5BTitle%5D)+AND+%22%22%5BJournal%5D)">Molecular mimicry rather than identity beaks T cell tolerance in the CYP2D6 mouse model for human autoimmune hepatitis.</a> , Forthcoming (2011).</li>
<li>Hintermann, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Epitope+spreading+of+the+anti-CYP2D6+antibody+response+in+patients+with+autoimmune+hepatitis+and+in+the+CYP2D6+mouse+model%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Autoimmun%22%5BJournal%5D)">Epitope spreading of the anti-CYP2D6 antibody response in patients with autoimmune hepatitis and in the CYP2D6 mouse model.</a> J. Autoimmun. , Forthcoming (2011).</li>
<li>Ando, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Class+I-restricted+cytotoxic+T+lymphocytes+are+directly+cytopathic+for+their+target+cells+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Immunol%22%5BJournal%5D)">Class I-restricted cytotoxic T lymphocytes are directly cytopathic for their target cells in vivo.</a> J. Immunol. 152, 3245-3253 (1994).</li>
<li>Zierden, M., Kuhnen, E., Odenthal, M., Dienes, H. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+and+regulation+of+autoreactive+CD8%2B+T+cells+in+a+transgenic+mouse+model+of+autoimmune+hepatitis%5BTitle%5D)+AND+%22Gastroenterology%22%5BJournal%5D)">Effects and regulation of autoreactive CD8+ T cells in a transgenic mouse model of autoimmune hepatitis.</a> Gastroenterology. 139, 975-986 (2010).</li>
<li>Limmer, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Failure+to+induce+organ-specific+autoimmunity+by+breaking+of+tolerance%3A+importance+of+the+microenvironment%5BTitle%5D)+AND+%22Eur.+J.+Immunol%22%5BJournal%5D)">Failure to induce organ-specific autoimmunity by breaking of tolerance: importance of the microenvironment.</a> Eur. J. Immunol. 28, 2395-2406 (1998).</li>
<li>Voehringer, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Break+of+T+cell+ignorance+to+a+viral+antigen+in+the+liver+induces+hepatitis%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Immunol%22%5BJournal%5D)">Break of T cell ignorance to a viral antigen in the liver induces hepatitis.</a> J. Immunol. 165, 2415-2422 (2000).</li>
<li>Derkow, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Differential+priming+of+CD8+and+CD4+T-cells+in+animal+models+of+autoimmune+hepatitis+and+cholangitis%5BTitle%5D)+AND+%22Hepatology%22%5BJournal%5D)">Differential priming of CD8 and CD4 T-cells in animal models of autoimmune hepatitis and cholangitis.</a> Hepatology. 46, 1155-1165 (2007).</li>
<li>Lapierre, P., Djilali-Saiah, I., Vitozzi, S., Alvarez, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+murine+model+of+type+2+autoimmune+hepatitis%3A+Xenoimmunization+with+human+antigens%5BTitle%5D)+AND+%22Hepatology%22%5BJournal%5D)">A murine model of type 2 autoimmune hepatitis: Xenoimmunization with human antigens.</a> Hepatology. 39, 1066-1074 (2004).</li>
<li>Djilali-Saiah, I., Lapierre, P., Vittozi, S., Alvarez, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((DNA+vaccination+breaks+tolerance+for+a+neo-self+antigen+in+liver%3A+a+transgenic+murine+model+of+autoimmune+hepatitis%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Immunol%22%5BJournal%5D)">DNA vaccination breaks tolerance for a neo-self antigen in liver: a transgenic murine model of autoimmune hepatitis.</a> J. Immunol. 169, 4889-4896 (2002).</li>
<li>Christen, U., Hintermann, E., Holdener, M., von Herrath, M. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Viral+triggers+for+autoimmunity%3A+is+the+%27glass+of+molecular+mimicry%27+half+full+or+half+empty%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Autoimmun%22%5BJournal%5D)">Viral triggers for autoimmunity: is the 'glass of molecular mimicry' half full or half empty.</a> J. Autoimmun. 34, 38-44 (2010).</li>
<li>Krebs, P., Scandella, E., Odermatt, B., Ludewig, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rapid+functional+exhaustion+and+deletion+of+CTL+following+immunization+with+recombinant+adenovirus%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Immunol%22%5BJournal%5D)">Rapid functional exhaustion and deletion of CTL following immunization with recombinant adenovirus.</a> J. Immunol. 174, 4559-4566 (2005).</li>
<li>Hintermann, E., Bayer, M., Pfeilschifter, J., Christen, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adenoviral+delivery+of+the+liver+autoantigen+cytochrome+P450+2D6+chronically+activates+hepatic+stellate+cells+and+induces+fibrosis%5BTitle%5D)+AND+%22Manuscript+Submitted%22%5BJournal%5D)">Adenoviral delivery of the liver autoantigen cytochrome P450 2D6 chronically activates hepatic stellate cells and induces fibrosis.</a> Manuscript Submitted. , (2011).</li>
</ol>

Yazarlar, ifşa etmek için bir şey var.

Daha önceki çalışmalarda, deneysel Hepatit genellikle otoimmün karaciğer hastalığı için sadece geçici ve birçok güncel modeller oldukça kompleks bir hastalıktır indüksiyon protokolleri (değerlendirmeleri 3,5 bakınız) bağlı olduğu rapor edilmiştir. Örneğin, çeşitli modeller, belirli bir hedef antijenlerini eksprese eden transgenik fareler kullanmak ve adoptively hedef antijene özgü, çoğunlukla TCR-transgenik T hücreleri 14,15 aktarılır. Sıklıkta, livertropic,, virüsler, bakteriler ya da Parazitlerin ile birlikte, bir ek bir bir bir bir enfeksiyon,,, hastalığı 16-18 indüklemek etmek gerekli olan konumundadır. Alternatif olarak,,, CYP2D6&#39;nın 19 de dahil olmak üzere, target antijenleri,, için kodlandığında plazmidler ile birlikte DNA-aşılama,,,, hepatit indüklemek için kullanılan edilir. Bununla birlikte,,,,, bu tür, IL-12, gibi pro-inflamatuvar sitokinlerin,, için kodlandığında plazmidler ile birlikte, bir ek bir bir aşılama (20,) gereklidir edilir. Ne yazık ki, birkaç istisna dışında sadece geçici 15,20 hepatit. CYP2D6 modeli 6,21 basit bir yöntem t kullanıro sadece Adenovirüs hCYP2D6, AİH-2 7,8 büyük otoantijen ifade bir ile enfekte fareler tarafından otoimmün hepatit neden. CYP2D6 bir adenovirüs yapı tarafından teslim etmesi, karaciğer doğrudan hedefleme yanı sıra hoşgörü dökümünü teşvik eden bir lokal inflamasyon garanti eder. Ancak virüs titresi yanı sıra yönetim rota bu model için çok önemli olduğunu not etmek önemlidir. Reklam,, birini elini On,-, 2D6,, böylece,,, bir Replikasyonu noksan virüs konumundadır, virüs of, bir yeterli bir bir bir, yüksek titresinde,, karaciğer mesafede olan, antijen of, bir kritik bir bir bir miktarını üretmek etmek, gereklidir edilir. ., Diğer bir elini On,, yüksek çok, bir titresinde,,,, bir fatal bir,, akut bir karaciğer başarısızlık in sonuçlanabilir gidebilecek. Buna ek In, it,,, adenovirus of, yüksek titreleri kullanıcısı tarafından fareler of enfeksiyon, bağışıklık bir yanıtı (22) of, bir fonksiyonel bir bir bir bitkinlik, etmek yol açar olduğunu, daha önceden göstermiştir olmuştur. Bizim modeli In, biz,, her ikisi de, kronik bir hücresel bir infiltrasyonunu yanı sıra gibi ext ile elde etmek için,, sipariş in,, intravenöz ve intraperitoneal olarak enfeksiyon of, bir kombinasyon kullanılanensive fibrozis. Biz tek başına intravenöz enfeksiyon hala büyük bir hücre infiltrasyonu neden olur, ama subkapsüler bölgede, intraperitoneal nedeniyle peritoneal inflamasyon gösteren hiçbir fibrozis, kollajen sürekli subkapsüler birikimi (Hintermann &amp; Christen, lığa) dahil olabilir gözlemledik. Ancak, Ad-, GFP veya Reklam-Kontrol 23 eşit virüs titresi enfeksiyondan sonra Karaciğer yıldızsı hücreleri ve kollajen depolanması aktivasyonu tespit etmedi bu yana gözlenen karaciğer fibroz, antijen-özel olduğunu not etmek önemlidir. CYP2D6 modeli gibi kalıcı hücre infiltrasyonu ve karaciğer fibrozu 6 ile karakterize kronik hepatit A gibi pek çok açıdan, insan AİH 1,2 yansıtır. Buna ek In,,,,, &#39;e benzer bir epitopunu spesifisite ve, in AIH-2 hastalarda bulundu: LKM-1 antikorlar etmek tıklayınız. Yayılıyor 13 -. Ile birlikte, yüksek-titresinde anti--Toplam CYP2D6&#39;nın antikorlar of varlığında,,,,, pre gösteriryaygın bir kronik otoimmün reaktivite seçilecek eserlerin çalışılmasıdır. CYP2D6&#39;nın,,,, AIH-2 &#39;in major bir antijen konumundadır,, ancak it,, daha fazla sık sık olan type 1 AIH ile birlikte tanısı konulan hastalarda kullanıcısı tarafından tanınan değil edilir. Buna ek olarak, otoimmün etiyoloji ile diğer karaciğer hastalıkları, primer biliyer siroz (PBC) veya primer sklerozan kolanjit (PSC) gibi muzdarip hastalar, damgasını otoantikorlar oluşturmak farklı, karaciğer otoantijenlere ve ciğeri belirleyicilik küçük boyutlu merkezleme farklı patolojik özellikler (PBC göstermektedir ) veya büyük (PSC) safra yolları. Bununla birlikte,, CYP2D6 modelleri, hepatositlerin otoimmün imha sürücü ve hastalığı tedavi etmek mümkün terapötik müdahaleyi değerlendirmek için anahtar oyuncular tanımlamak için, otoimmün karaciğer hastalıkları sırasında ortaya çıkan kronik karaciğer inflamatuar süreçlerde yer immunopathogenic mekanizmalarını analiz etmek bir fırsat sunuyor.

<table border="1"><tbody><tr><td> Ekipman Adı </td><td> Şirket </td><td> Katalog numarası </td><td> Yorumlar </td></tr><tr><td> 23G iğne </td><td> BD Biosciences </td><td> 300800 </td><td></td></tr><tr><td> 27 ½ G iğne </td><td> VWR </td><td> 612-0151 </td><td></td></tr><tr><td> 30 ½ G iğne </td><td> BD Biosciences </td><td> 304000 </td><td></td></tr><tr><td> Alanin aminotransferaz test şeritleri (GPT / ALT) </td><td> Roche Diagnostics </td><td> 10 745 138 202 </td><td></td></tr><tr><td> Aspartat aminotransferaz test şeritleri (GOT / AST) </td><td> Roche Diagnostics </td><td> 10 745 120 202 </td><td></td></tr><tr><td> Anestezi Ünitesi Univentor 400 </td><td> <a href="http://www.agnthos.se" target="_blank" >AgnTho Kullanıcı</a> </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Baz kalıp, tek 37x24x10 mm </td><td> VWR </td><td> 720-0208 </td><td></td></tr><tr><td> Hücre süzgecinden 70mm </td><td> VWR </td><td> 734-0003 </td><td></td></tr><tr><td> Kriyostat </td><td> Leica </td><td> CM1850 UV </td><td></td></tr><tr><td> Heparinize kapiller tüp </td><td> Balıkçı </td><td> 3123987 </td><td></td></tr><tr><td> Mikroskop SuperFrost Plus, slaytlar </td><td> Menzel Gläser </td><td> J1800AMNZ </td><td></td></tr><tr><td> Microtainer SST tüpler </td><td> BD Biosciences </td><td> 365951 </td><td></td></tr><tr><td> Mikrotiter plakaları, V-bottom için </td><td> VWR </td><td> 391-1924 </td><td></td></tr><tr><td> Reflotron Artı </td><td> Roche Diagnostics </td><td></td><td> Serum AST / ALT BELİRLENMESİ </td></tr><tr><td colspan="4"></td></tr><tr><td> O Adf reaktif </td><td> Şirket </td><td> Katalog numarası </td><td> Yorumlar </td></tr><tr><td> Rabbit anti--için fare anti--Collagen İçin türü I IgG, </td><td> Chemicon </td><td> AB765P </td><td></td></tr><tr><td> Tinile keçi anti-tavşan IgG </td><td> Vector (AXXORA) </td><td> VC-BA-1000-MC15 </td><td></td></tr><tr><td> FITC-konjuge anti fare CD8a antikor </td><td> Güney Biyoteknoloji </td><td> 1550-1502 </td><td></td></tr><tr><td> PE-konjuge anti fare IFNγ antikor </td><td> BD Biosciences </td><td> 554412 </td><td></td></tr><tr><td> PE-konjuge anti-fare CD16/CD32 antikor (FCR blok) </td><td> BD Biosciences </td><td> 553141 </td><td></td></tr><tr><td> Aquatex </td><td> VWR </td><td> 1.08562.0050 </td><td></td></tr><tr><td> Avidin / Biotin Engelleme kiti </td><tdVector (AXXORA) </td><td> VC-SP-2001-KI01 </td><td></td></tr><tr><td> Bir Brefeldin </td><td> Sigma </td><td> B6542 </td><td></td></tr><tr><td> Kollajenaz IV </td><td> Sigma </td><td> C5138-100mg </td><td></td></tr><tr><td> DAB substrat kiti 3&#39;3&#39;diaminobenzidine </td><td> Vector (AXXORA) </td><td> VC-SK-4100-KI01 </td><td></td></tr><tr><td> DNaz </td><td> Sigma </td><td> DN-25 </td><td></td></tr><tr><td> Elit ABC Reaktifi </td><td> Vector (AXXORA) </td><td> VC-PK-7100-L050 </td><td></td></tr><tr><td> Eosin G / Y çözeltisi </td><td> Roth </td><td> X883.1 </td><td></td></tr><tr><td> Fetal buzağı serum (FCS) </td><td> Biochrom AG </td><td> G 0115 </td><td></td></tr><tr><td> İsofluran </td><td> Forene </td><td> B506 </td><td></td></tr><tr><td> Meyer Hematoksilen çözümü </td><td> ¸ </td><td> A4840, 1000 </td><td></td></tr><tr><td> Ekim Bileşik </td><td> , Sakura Finetek Avrupa </td><td> 4583 </td><td></td></tr><tr><td> PBS-tamponlu formaldehit,% 10 </td><td> Roth </td><td> A146.3 </td><td></td></tr><tr><td> Percoll </td><td> Amersham </td><td> 17-0891-01 </td><td></td></tr><tr><td> Roti-Histokit </td><td> Roth </td><td> 6638,1 </td><td></td></tr><tr><td> RPMI </td><td> Invitrogen </td><td> 61870 </td><td></td></tr><tr><td> Quillaja kabuğu gelen Saponin </td><td> Sigma </td><td> S7900 </td><td></td></tr></tbody></table>

cyp2d6 hayvan modeli:, fare otoimmün hepatit indükleyin nasıl

The CYP2D6 Animal Model: How to Induce Autoimmune Hepatitis in Mice

Otoimmun hepatit, nedeni bilinmeyen, 1,2 karaciğer nadir fakat hayatı tehdit eden otoimmün bir hastalıktır. , Geçmişte bir pek çok girişimlerine In profilini iyileştiren,,,,,, insan hastalığı (3-5) of karakteristik özellikleri yansıtıp yansıtmadığını, bir hayvansal modeli üretmek etmek Yaptı&gt; edilmiştir&gt; adres. Bununla birlikte olarak,, çeşitli modeller in, hastalığı of indüksiyon daha ziyade karmaşık idi ve: sık sık hepatit 3-5 sadece transient idi. Bu nedenle, Tip 2 otoimmün hepatit (AİH-2), yani hCYP2D6, 6 gibi bir tetikleyici en önemli insan otoantijen kullanan basit bir fare modeli geliştirdik. HCYP2D6 tanıma Tip 1 karaciğer-böbrek mikrozomal antikor (LKM-1) antikorlar AİH-2 7,8 işaretidir. Wild tip FVB veya C57BL / 6 farelerde içine teslim hCYP2D6 karaciğer tetiklenmesi antijen doğrudan teslim edilmesini sağlayan bir Adenovirüs construct (Ad-2D6) oldu. Böylece, takip eden yerel inflamasyon, otoimmünite sonraki gelişmesi için verimli bir alan 9 oluşturur. Bir cAd-2D6 intravenöz ve intraperitoneal ombination karaciğer uzun ömürlü otoimmün hasarı (bölüm 1) ikna etmek için en etkili yoludur. Burada karaciğer hastalığı, CYP2D6 modeli indüklenir ve nasıl karaciğer hasarının farklı yönlerini nasıl tespit edilebilir otoimmün ayrıntılı bir protokol sağlar. Birincisi, hepatosit gibi aminotransferazlar yıkımı, yanı sıra hCYP2D6 antikor titreleri gösteren belirteçlerin serum düzeyleri kan retroorbitaly (bölüm 2) örnekleme yoluyla belirlenir. Second olarak, hCYP2D6-spesifik bir bir, hala devam eden T bir hücre yanıtı,,,, spleen ve karaciğer from lenfositleri toplamaya kullanıcısı tarafından karakterize edilen edilir. Saf karaciğer lenfositler elde etmek için, ciğeri kollajen sindirilir ve bir Percoll degrade (Bölüm 4) üzerinden arıtılmış portal ven (bölüm 3), ile PBS ile perfüze. , HCYP2D6-spesifik bir T hücreleri of frekans,, hCYP2D6 peptidler, ve, flow sitometri tarafından - IFNγ-üreten hücreleri (bölümünde sık kullanılan 5) of tanımlama ile birlikte daha fazla stimülasyon kullanıcısı tarafından analiz edilir. Üçüncü olarak,hücre infiltrasyonu ve fibrozis, karaciğer bölümler (bölüm 6) immünohistokimyasal olarak tespit edilmiştir. Böyle bir analizi bir rejim ile,,,,,,, modeli of, kronik bir bir doğa kanıtlamak etmek sipariş in,,, hastalığı of inisiyasyon sonra birkaç Zamanlar at yürütülmüştür uygulanmaz etmek sahiptir. ,,,,, Frekans ve aktivitesi,, hCYP2D6-, belirli bir T ve / ya da Yatak-hücreleri of ve karaciğer damage gibi mi ve fibrosis of mi derecesi kullanıcısı tarafından karakterize edilen bağışıklık bir yanıtı of magnitude,,,,, önlemek, geciktirmek ya da, autodestructive FESHETME etmek, mümkün olan tedaviler of, bir müteakip bir bir değerlendirmenin için değerlendirilecektir uygulanmaz etmek var , karaciğer of süreç.

Adenovirüs ile temel insan otoantijen ifade farelerin Enfeksiyon, CYP2D6 geniş hepatit, fibrozis ve kuşak tarafından karakterize otoimmün aracılı karaciğer hastalığı kalıcı bir form Tip 2 otoimmün hepatit sonuçları muzdarip hastaların sera tarafından tanınan P450 2D6 (hCYP2D6) sitokrom -belirli bir bağışıklık yanıtı.

CYP2D6 Hayvan Modeli:, Fare Otoimmün Hepatit indükleyin nasıl

Autoimmün hepatit, etiyolojisi bilinmeyen, nadir görülen ancak yaşamı tehdit eden bir karaciğer otoimmün hastalığıdır1,2. Geçmişte ... yapmak için birçok girişimde bulunulmuştur.

Aşağıdaki deneylerin genel amacı, karaciğer arayüzünün kronik inflamasyonu, hepatit, hiper gama globulin ve karakteristik otoantikorların üretimi ile karakterize edilen insani bir otoimmün karaciğer hastalığı olan otoimmün hepatit için bir fare modeli oluşturmak ve doğrulamaktır. Hayvanlara öncelikle karaciğer içinde lokal inflamasyonu tetiklemek için hastalığa neden olan otoantijen CYP 2D six eksprese eden bir adenovirüs konstrüktü ile enfeksiyon uygulanır. Ardından, karaciğer lenfositleri karaciğer perfüzyonu ve diferansiyel yoğunluk santrifüjasyonu ile izole edilir. Son olarak, karaciğer hasarı ve otoantijene özgü T-hücresi tanımlaması sırasıyla immünohistokimya ve hücre içi sitokin boyaması ile değerlendirilebilir.Bu tekniğin mevcut yöntemlere göre temel avantajı, otoimmün hepatit modelimizin, tip iki otoimmün hepatitten muzdarip insanlarda gözlemlenene neredeyse tıpatıp benzeyen kronik bir karaciğer inflamasyonu ve otoantijene özgü immün yanıt ile karakterize olmasıdır. Modelimiz, otoimmün hepatitli hastalarda karaciğerin ilerleyici yıkımının nasıl gerçekleştiği gibi, otoimmün karaciğer hastalıkları alanındaki temel soruların yanıtlanmasına yardımcı olabilir. Genel olarak vials yönteminde, intravenöz enfeksiyon ve oftalmik venöz sinüs yoluyla kan toplamanın yanı sıra, portal ven kanülasyonu pratik gerektirdiğinden karaciğer perfüzyonu konusunda zorluklar yaşamaktayız.Anestezi uygulandıktan sonra, fareyi ensesinden tutun ve başın gevşek derisini başparmak ve orta parmağınızla sıkıştırın. Bu pozisyonda, gözün yanındaki derinin çekilmesi nedeniyle gözün hafifçe dışarı çıktığını gözlemleyin. Şimdi iğneyi, hayvanın burnuna en yakın olan göz kapaklarından birinin birleşme noktasındaki medial kantusa yerleştirin ve 100 µL 80 2D altı virüs çözeltisini yavaşça enjekte edin.Ardından iğneyi hafifçe geri çekin ve göz kapaklarını kapatın. İşleme, önce beş mililitrelik bir şırıngayı soğuk PBS ile doldurup şırıngaya 27 gauge bir iğne takarak başlayın. Daha sonra fareyi ötanize ettikten sonra, hayvanın arka bacaklarının yaklaşık bir santimetre uzağından deri ve kas tabakaları boyunca makasla bir insizyon yapın ve makasla diyaframa doğru her iki taraftan da kesin.Diyaframa ulaşıldığında, deriyi geriye doğru çekin ve diyaframı makasla kaburgalardan ayırıp vena cava'yı diseke edin. Diseksiyonun bu aşamasında, portal veni açığa çıkarmak için mide ve bağırsakları yana kaydırın. Karaciğere perfüzyon yapmak, özellikle karaciğer kronik olarak enflame olduğunda veya fibrotikleştiğinde prosedürün en zor kısmıdır. Fare oldukça küçüktür, bu nedenle portal veni doğru şekilde punktüre etmek için sabit bir el gereklidir.Ayrıca, PBS'nin yavaşça uygulandığından emin olmak önemlidir, aksi takdirde doku zarar görebilir. Önceden hazırlanmış iğneyi portal vene yerleştirin ve ardından, perfüzyon tamamlandığında PBS'nin kanı karaciğerden yavaşça temizlemesini sağlamak için şırınganın pistonuna nazikçe basınç uygulayın. Bir pens yardımıyla diyaframı kavrayıp makasla diyaframı vücuttan ayırarak karaciğeri çıkarın.Son olarak, organı bir Petri kabına aktarın ve diyaframı, safra kesesini ve karaciğere hâlâ bağlı olan diğer tüm dokuları uzaklaştırın. Otoimmün hepatitli hayvandan alınan karaciğerin fibrotik olduğunu ve bireysel lobların birleştiğini dikkate alın. Bir Petri kabını 10 milliliters taze PPS ile doldurarak ve kabı buz üzerine yerleştirerek başlayın.Perfüze edilen karaciğeri kaba aktarın ve makas kullanarak dokuyu küçük parçalara bölün. Ardından, dokuyu ve PBS'yi 70 mikrometre hücre süzgecine dökün ve bir cam havan eli kullanarak karaciğer parçalarını süzgecin içinden geçirin. Şimdi, gerekirse havan elini kullanmaya devam ederek doku parçalarının üzerine dikkatlice 10 mililitre soğuk kollajenaz tamponu dökün.Hücreleri 4 °C'de, 30 ×g hızda üç dakika boyunca santrifüjleyin. Süpernatantı, peletin üzerinde 5 mm sıvı kalacak şekilde yeni bir tüpe aktarın ve 4 °C'de, 650 ×g hızda 10 dakika boyunca santrifüjleyin. Süpernatantın son 3 mm'si hariç geri kalanını atın.Pelleti 20 mililitre per call tamponu içinde yeniden süspande edin ve ardından hücreleri 4 °C'de 20 dakika boyunca 600 ×g'de santrifüj ettikten sonra, süpernatantı uzaklaştırın ve tüpü hafifçe vurarak pelleti yeniden süspande edin; CYP 2D six modelindeki wild type farelerin adenovirüs 2D altı enfeksiyonundan sonra gelişen kalıcı otoimmün hepatit durumunda. Karaciğer, sağdaki şekilde gözlemlendiği gibi belirgin şekilde değişmiş bir morfoloji sergiler. Özellikle, siyah ok uçlarıyla belirtilen karaciğer lobları birleşmiştir ve siyah oklarla belirtilen hiperfajik nodüller tüm karaciğer boyunca dağılmış şekilde görünmekte olup, kontrol enfeksiyonuna kıyasla masif bir kapsüler fibroz görünür durumdadır.İnsan CYP 2D6 eksprese etmeyen adenovirüsün, soldaki şekilde görüldüğü üzere karaciğer morfolojisi üzerinde herhangi bir etkisi yoktur. Adenovirüs 2D6 ile enfekte edilen farelerin karaciğerlerinin periportal ve parenkimal bölgelerinde, adenovirüs kontrol grubuyla enfekte edilen farelerde görülmediği üzere, daha yaygın ve kalıcı hücresel infiltrasyonlar görülmektedir. Buradaki tek siyah oklarla belirtildiği gibi, yalnızca adenovirüs 2D6 ile enfekte edilen farelerde mevcut olan belirgin mononükleer hücre infiltrasyonlarına dikkat ediniz.Üçlü oklar, komşu portal traktları birbirine bağlayan karaciğer parenkimindeki daha geniş hücresel infiltrasyonları göstermektedir. Bu şekilde, fibrozisin ağırlıklı olarak subkapsüler bölgede geliştiği ve bazı kollajen demetlerinin parenkime doğru uzandığı gözlemlenebilir. Üçlü siyah oklarla belirtilen karaciğer kapsülü altındaki çok katmanlı kollajen yerleşimine, tekli oklarla belirtilen parenkime doğru uzanan bazı demetlere ve siyah ok uçlarıyla belirtilen büyük infiltrasyon hücre kümelerinin varlığına dikkat ediniz.Adenovirüs 2D6 ile enfekte edilmiş farelerde kalıcı otoimmün hepatitin üçüncü bir özelliği, hücre içi sitokin boyamasının bu temsili nokta grafikleriyle görüldüğü üzere, karaciğer hedefli insan CYP 2D6'ya özgü CD4 ve CD8 T hücrelerinin baskın şekilde üretilmesidir; karaciğer lenfositlerinin immünodominant CD4 veya CD8 insan CYP 2D6 peptidi ile gece boyunca stimülasyonu, sırasıyla CD4 pozitif veya CD8 pozitif T hücreye özgü interferon gamma ekspresyonunu tetikler. Bu prosedürü uygularken, periferik kan mononükleer hücrelerinin karaciğer lenfositlerini kontamine etmesini önlemek için karaciğerin optimal perfüzyonunun kritik bir adım olduğunu unutmamak önemlidir. Bu prosedürün ardından, T hücrelerinin gelişimi sonrası aktivasyon durumlarını ve migrasyon potansiyellerini incelemek amacıyla primer hepatik steroid hücrelerin izolasyonu gibi diğer yöntemler gerçekleştirilebilir.Bu hayvan modeli, otoimmün karaciğer hastalıkları alanındaki araştırmacıların karaciğerdeki kronik inflamasyonu tetikleyen temel faktörleri keşfetmelerine ve hastalar için olası tedavileri değerlendirmelerine yol açacaktır.

the-cyp2d6-animal-model-how-to-induce-autoimmune-hepatitis-in-mice

Research

JoVE Journal

Medicine

Tıp

Bu video otoimmün hipofizitis SJL fareler ve histopatoloji ile şiddetini değerlendirmek için nasıl ikna etmek için nasıl gösterir.

SJL Farelerde Deneysel Otoimmün hipofizitis İndüksiyon

Video, farelerde hepatit B virüsü (HBV) replikasyonunu inhibe etmek için insan kaynaklı pluripotent kök hücre (iPSC) türevi CD8+ T hücrelerinin kullanıldığı bir testi göstermektedir. HBV'ye özgü reseptörlerle tasarlanan bu T hücreleri, transgenik farelere aktarılır. Replikasyona yetkin HBV genom plazmitleri daha sonra doğrudan karaciğere enjekte edilerek viral DNA alımını sağlar. Viral antijenler hibrid MHC-I molekülleri tarafından eksprese edilip sunulduğunda, tasarlanmış T hücreleri bu...

Viral Antijene Özgü T Hücreleri Kullanılarak Hepatit B Virüsü Replikasyonunun Baskılanması

Bu video, insan bağışıklık sistemi ve karaciğer hücreleri ile ikili insanlaştırılmış bir fare modeli oluşturmak için bir yöntemi göstermektedir. İnsan karaciğer hücrelerinin ve hematopoietik kök ve progenitör hücrelerin intrasplenik enjeksiyon yoluyla transgenik immün yetmezliği olan bir fareye nakledilmesini içerir, bu da karaciğer hücrelerinin aşılanmasına ve insan bağışıklık hücrelerinin gelişmesine yol açar.

İnsan Karaciğer Hücreleri ve Bağışıklık Hücreleri ile İnsanlaştırılmış Bir Fare Modeli Geliştirme

BM12 lenfositlerinin bir C57BL/6 alıcısına transferi, sistemik lupus eritematozusun yerleşik bir modelidir. Burada, bu modeli kullanarak hastalığın nasıl başlatılacağını ve T foliküler yardımcı hücrelerin, germinal merkez B hücrelerinin ve plazma hücrelerinin akış sitometrisi ile nasıl karakterize edileceğini açıklıyoruz.

C57BL / 6 FARELERDE SLE bm12 İndüklenebilir Modeli (SLE)

Burada bir Kolin eksikliği ve ethionine desteklenmiştir (özgür) diyet yedirerek, kronik karaciğer hasarı farelerde ikna etmek için kullanılan genel yöntem açıklanmaktadır. Sağlık izleme, karaciğer perfüzyon, yalıtım ve koruma göstermektedir. Altı hafta bir zaman ders karaciğer hasarı, pathohistology, fibrozis, enflamatuar ve karaciğer progenitör hücre yanıt hakkında bilgilendirebilir.

Fare Kolin eksikliği, Ethionine desteklenmiştir (özgür) diyet kronik karaciğer yaralanma modeli

Burada, ailesel hiperkolesterolemi insan indüklenmiş pluripotent kök hücre kaynaklı tetkikine kullanarak bir insan karaciğer chimeric fare modeli oluşturmak için bir protokol mevcut. Bu yeni tedaviler hiperkolesterolemi için test etmek için değerli bir modeldir.

İndüklenmiş Pluripotent kök hücre kaynaklı tetkikine kullanarak ailesel hiperkolesterolemi insan karaciğer Chimeric fare modeli

Bu çalışmada, BALB/c farelerde, bu hastalıkta görülen cinsiyet farklılıkları da dahil olmak üzere ilaca bağlı otoimmün hepatitin patogenezini incelemek için kullanılabilecek bir in vivo immünizasyon, translasyonel hepatit modeli tanımlanmıştır. Bu modelin in vivo ve in vitro deneysel teknikler kullanarak tekrarlanabilir analizleri nasıl gösterdiğini açıklayacağız.

Patojenik Mekanizmalarının İncelenmesi için BALB/c Farelerde İlaca Bağlı, Otoimmün Hepatitin İndüklenmesi

Burada, hepatosellüler kanserin (HCC) tipik bağışıklık özelliklerini özetlemek için karaciğer kanserinin klinik olarak ilgili bir murine modelinin gelişimini açıklıyoruz.

Hepatik İnflamasyon ve Fibrozis Ortamında Ortaya Çıkan Hepatosellüler Kanserin Onkojenik Hepatositkaynaklı Ortotopik Fare Modeli

Alkolsüz steatohepatiti için basit ve güvenilir bir diyet kaynaklı kemirgen hayvan modeli (NASH) tarif edilir, hayvanlar ve özel bir yüksek yağ diyet uygulanması SPF olmayan konut aracılığıyla elde. Biz karaciğer ve adipoz immün hücre alt kümeleri tanımlamak için insan immünolojik koşulları farları çevresel mikroplar maruz tarafından yeniden tanımlamakta.

Tip 2 diyabet ile Ilişkisi olmayan alkollü steatohepatit için gelişmiş bir Murine modeli

Bu yazıda, araştırmacının göz içi üveitinin fare modelini oluşturmasını sağlayan bir protokol sunuyoruz. Daha yaygın olarak deneysel otoimmün üveit (EAU) olarak adlandırılan bu yerleşik model, insan hastalığının birçok yönünü yakalar. Burada, birkaç okuma kullanarak hastalığın ilerlemesinin nasıl indükleneceğini ve izleneceğini açıklayacağız.

Deneysel Otoimmün Üveit: Göz İçi İnflamatuar Bir Fare Modeli

NOD faresinde spontan otoimmün tiroidit olduğu gibi, Hashimoto tiroiditinin çeşitli hayvan modelleri oluşturulmuştur. H-2h4 fareler, HT indüksiyonu için basit ve güvenilir bir modeldir. Bu makalede SAT murin modelinin daha iyi anlaşılması için bu yaklaşım anlatılmakta ve patolojik süreç değerlendirilmektedir.

Bir Fare Spontan Otoimmün Tiroidit Modelinin Oluşturulması

Öğrenin farelerde CYP2D6 adenovirüs enfeksiyonu ile otoimmün hepatit modeli oluşturmayı. Karaciğer lenfosit izolasyonu ve immünohistokimya yöntemleriyle kronik karaciğer inflamasyonunu inceleyin.

CYP2D6 Hayvan Modeli:, Fare Otoimmün Hepatit indükleyin nasıl

Daha fazla video keşfet