Name: İlköğretim İnsan Keratinositler gelen Organotipik Radye Kültürlerin Üretimi (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-02-22T13:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 26 s
Description: Öğrenin, primer insan keratinositlerinden organotipik radye kültürleri üretme yöntemini. Bu teknik, epitel farklılaşmasını taklit ederek virus:konak etkileşimlerini incelemek için değerli bir platform sunar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Yazarlar E1E4 antikor tür hediye için Sally Roberts (University of Birmingham, Birmingham UK) teşekkür etmek istiyorum. Bu çalışma, Ulusal Kanser Enstitüsü (4R00CA137160-03) bir hibe ile desteklenmiştir.

1. Organotipik Raft Kültürler Hazırlık <ol><li> Metal sal ızgaraları kadar ilk farklılaşma sürecine müdahale olabilecek artıkları temizlemek için kromik sülfürik asit ile tedavi edilebilir. Bir saat için sülfürik asit içeren bir cam beher içinde bırakın metal ızgaralar, daha sonra sürekli musluk suyu ile bir gece durulanmalıdır. Durulama gece sonra, radye ızgaraları çift distile su içinde 3-5 saat durulanmalıdır. </li><li> Sal destek sağlamak için, birbirinden eşit mesafede 0.5 cm radye üç tarafı bükün. Metal ızgaraları sonra otoklava edilmelidir. </li><li> 2,2 g NaHCO3 ve 4.8 g Hepes ekleyerek 10X sulandırma tamponu hazırlayın. 0.05 M NaOH 100 ml eritin. Filtre sterilize ve -20 ° C&#39;de 5 ml hacimde depolamak </li><li> Sodyum bikarbonat olmadan 10X DMEM hazırlayın. Filtre sterilize ve -20 ° C&#39;de 5 ml hacimde depolamak </li><li> Fare epidermal büyüme faktörü hazırlayın: EGF 100 mg ve B 10 mg eritilirSA 10 ml her GKD 2 0 deiyonize. EGF ve BSA birleştirin ve 100 ml toplam hacim deiyonize GKD 2 0 80 ml ​​ekleyin. Filtre sterilize, tablet (5 ml) ve -20 ° C&#39;de saklayın E, orta her litre için 1 mg / ml EGF (nihai konsantrasyon 5 ng / ml), 5 ml ilave edilir. </li></ol> 2. Kollajen Jeller hazırlanması <ol><li> Bir kollajen jel her salı için gereklidir. Kollajen katılaşabilme önlemek için buz üzerinde tutulmalıdır. Sıçan soğuk-kuyruk kolajeni tip I (nihai konsantrasyon 3-4 mg / ml), 0.3 ml 10X rekonstitüsyon tamponu, 0.3 ml DMEM 10X AND1-2 X 10 6 fare 2.4 ml: her kollajen jel oluşan kollajen karışımı 3 ml gerektirir besleyici hücreler olarak 3T3 J2 fibroblastlar. Fare kuyruk kolajeni ile yüksek konsantrasyonlu çözümler için, doğru çalışma konsantrasyonu elde etmek için 0.02 M asetik asit içinde tamamlanır. </li><li> Eğer kolajen miktarı, 10X reconstit için bir master miks hesaplamak daha sonra ihtiyacınız olacak kollajen jel (sallar) sayısını belirlemekution tampon, 10X DMEM ve J2 fibroblastlar gereklidir. Kollajen viskozite nedeniyle 3-4 ekstra jeller için her ana karışım yeterli ekleyin. </li><li> Kollajen jel hazırlamak için, J2 fibroblastlar trypsinize ve orta ile nötralize. 50 ml&#39;lik konik flakon tüm fibroblastlar ve yerde birleştirin. Yapılabilir sallar numarasını belirlemek için hücreleri hesaplama. Yine, 1-2x10 6 fibroblastlar sal başına böylece kollajen jel başına gereken ve uygulanır. Düşük hızda hücreleri aşağı Spin. </li><li> 10X rekonstitüsyon tamponu, 10X DMEM ve hesaplanan salları sayısı için kolajen uygun miktarlarda fibroblast pelet ve Pastör pipetiyle gelen ortamı aspire. Hızlı katılaşmayı gelen jel önlemek için kolajen son ekleyin. Kollajen eklendikten sonra, jel içine kabarcıklarının giriş önlemek için hızlı bir şekilde yavaşça karışımı, fakat. Jel Doğru pH göstergesi kırmızımsı portakal rengi, olmalıdır. Jel karışımı aşırı sarı ise, filtre ile sterilize 1N damla bir çift eklemeNaOH ve karışımı yavaşça doğru renk elde etmek. </li><li> Kollajen 3 ml ekleyin: fibroblast karışımı 6 kuyu kültür yemeğin kuyulara. Kollajen karışımı kabarcıklar oluşturarak önlemek için yavaş yavaş her iyi tarafı aşağı pipetlenir edilmelidir. Bir 37 ° C doku kültürü plakası inkübatörde yerleştirin ve 30 dakika boyunca katılaşmaya izin verir. </li><li> 30 dakika sonra, katılaştırılmış kollajen jel üst EGF E orta 3 ml ekleyin ve plaka inkübatöre geri döner. Jeller, en az bir gün boyunca 37 ° C&#39;de tutulur, ancak dört gün içinde kullanılmalıdır. Optimal sonuçlar inkübasyon iki gün sonra ortaya çıkar. </li></ol> 3. Farklılaşma için hazırlık Keratinositler <ol><li> Düşük geçit keratinositler yaklaşık% 70 konfluense büyüdü edilmelidir. Her salı 1-2x10 6 keratinositler gerektirir. Keratinositler Trypsinize ve EGF ile E orta ile nötralize. Yapılabilir sallar numarasını belirlemek için hücreleri hesaplama. Düşük SPE olarak hücreleri aşağı Spined. Hesaplanan her sal kültürü için EGF ile E ortamın 1 ml pelletini. </li><li> Eğerek 6 sıra plaka ile kollajen jel gelen orta aspire. Her jel EGF taze E orta 2 ml ekleyin. Her jel için, dikkatle de zaten mevcut E orta 2 ml süspanse keratinositlerin 1 ml ekleyin. Sonra yavaşça pipet keratinositlerin artı medyanın 2 ml ve sonbahar açılan akıllıca geri jel üzerine izin verin. Çalkalama veya plaka sallanan kollajen jel bir tarafında hücrelerinin düzensiz dağılımı ile sonuçlanabilir. 37 ° C inkübatörde plakası yerleştirin. </li><li> Hücreler günlük E orta yerine, konfluent için yetiştirilen edilmelidir. Hücreler konfluent olduğunda, orta bir değişiklikten sonra sarı bir gün için orta değişir. Bu genellikle 2-4 gün sürer. Orta günde dört tarafından değişmedi, bir sonraki adıma geçin. </li></ol> 4. Radye Kültürler yapma <ol><li> Steril bir metal sal ızgara yerleştirmek için steril forseps kullanma, taraf eğildi, Bir 10 cm çanak içine. Kollajen jelden orta aspire. İyi bir taraftan jel gevşetmek için, hareketli bir yukarı ve aşağı kullanılarak steril bir spatula ile jel çevresi etrafında gider. Kollajen jel kaldırmak için hafifçe eğin plaka ve bir spatula altına koyarak kaldırın. Izgara ve jel arasındaki kabarcıklar oluşturmadan metal ızgara üzerinde kollajen jel yatırın. İki jeller her ızgara üzerine yerleştirilebilir. </li><li> Bir hava-sıvı arayüz hale getirmek için, sal ızgara ortam dokunmadan böylece tabağın tabanına kadar yavaş EGF olmadan E orta ilave fakat kollajen jel değildir. Medya kılavuzunda deliklerden gelmemeli. Bu tip farklılaşmasını önlemek olacak şekilde, kılavuz altında kabarcıkları üretmek önlemek için yavaş yavaş ortam ekleyin. 37 ° C&#39;de inkübe sallar ve hava-sıvı arayüzü koruyarak her geçen gün orta değiştirin. 14 gün sonra hasat sallar. </li></ol> 5.. Temsilcisi Sonuçlar Zaman tO protokolü primer keratinositler ile düzgün bir şekilde gerçekleştirilir, bu işlem cilt katman değişik belirgindir iyi farklılaşmış epitel neden olacaktır. Bu Şekil 1B gösterildiği hematoksilen ve eozin (H &amp; E) sal kültürler, bölümleri boyanarak histolojik inceleme ile elde edilebilir. H &amp; E boyama sallar ve tabakalandırmak ve ayırt hücrelerinin yeteneği üzerinde virüs veya antiviral bileşiklerin etkisi morfolojisini incelemek de faydalıdır. Örneğin, HPV-ölümsüzleştirdi birincil insan keratinositleri (HFK-31) yapılan sallar özellikle kalın çoğalması oranında herhangi bir artış ve farklılaşma hücreleri aktif tutmak için HPV proteinlerin yeteneğini yansıtan, normal insan sünnet derisi keratinositleri (HFK) yapılan sallar karşılaştırıldığında hücre döngüsü içinde (Şekil 1B) 10. Epitel boyunca çekirdeklerin tutulması Bu sonuç, normal keratinositlerin bir arıza ile sonuçlanan farklılaşma üzerine hücre döngüsü çıkmak iseçekirdek zarı. Daha yakından incelemek için farklılaşma, immünhistokimya Sitokeratin yanı sıra involukrin ve filagrin gibi özel farklılaşma belirteçler, incelemek için yapılabilir. Farklı Sitokeratin farklılaşma 7 spesifik aşamaları ile ifade edilir. Şekil 2 de gösterildiği gibi, sitokeratin 10 (K10) taban katmanı olarak ifade değildir ve tek aşamalı olarak ayırt hücreleri içerir suprabasal tabakalar halinde bulunur. HPV pozitif sallar olarak, K10 ifadesi tekrar keratinosit farklılaşma HPV proteinlerinin etkisini yansıtan Normal keratinositler kıyasla gecikir. İmmünohistokimya da viral genlerin ifadesi profili incelemek için kullanılabilir. Şekil 3&#39;te gösterildiği gibi ifade epitelinin üst tabaka ile sınırlıdır geç bir proteindir HPV proteini E1 ^ E4, ifade inceleyerek bir temsilcisi olan boyama. Beklenildiği gibi, herhangi bir boyama, normal huma gelen sal kültürlerinde görülmektedirSünnet derisi keratinositler n. <img alt="Şekil 1" src="/files/ftp_upload/3668/3668fig1.jpg" /> Şekil 1. Primer keratinositler ya epitel hücre hattından organotipik sal kültürler hazırlanması için yöntem A) içeriği. Stably HPV-31 (HFK-31) episomes veya normal insan sünnet derisi keratinositleri (HFK) den korumak, insan sünnet derisi keratinositlerinden oluşturulan organotipik sal kültür B) Hematoksilen ve eozin boyanma. Bireysel epiteliyal tabakalar yanı kollajen tıkaç olarak tespit edilir. <img alt="Şekil 2" src="/files/ftp_upload/3668/3668fig2.jpg" /> Şekil 2. Sitokeratin 10 (K10) ifade epitelin suprabasal katmanları ile sınırlıdır. İmmünohistokimya K10 için bir antikor kullanılarak HFK-31 hücreleri, hem de normal bir HFKs elde organotipik sal kültürlerin kesitleri üzerinde yapıldı. Hücresel DNA DAPI ile zıt edildi. Görüntüler conf kullanılarak çekilenÖcal floresan mikroskobu. Oklar epitelin bazal tabaka göstermektedir. <img alt="Şekil 3" src="/files/ftp_upload/3668/3668fig3.jpg" /> Şekil 3. HPV E1 ^ E4 proteini geç virüs ömrü çevrimi ile verimli bir faz olarak üretilir. İmmünohistokimya E1E4 karşı antikorlar kullanılarak HFK-31 hücreleri, hem de normal bir HFKs elde organotipik sal kültürlerin kesitleri üzerinde yapıldı. Hücresel DNA DAPI ile zıt edildi. Görüntüler konfokal floresan mikroskobu kullanarak ele geçirildi. Oklar epitelin bazal tabaka göstermektedir.

<ol><li>Andrei, G., Duraffour, S., VandenOord, J., Snoeck, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Epithelial+raft+cultures+for+investigations+of+virus+growth%2C+pathogenesis+and+efficacy+of+antiviral+agents%5BTitle%5D)+AND+%22Antiviral+Research%22%5BJournal%5D)">Epithelial raft cultures for investigations of virus growth, pathogenesis and efficacy of antiviral agents.</a> Antiviral Research. 85, 431-449 (2010).</li>
<li>Asselineau, D., Prunieras, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reconstruction+of+%27simplified%27+skin%3A+control+of+fabrication%5BTitle%5D)+AND+%22The+British+Journal+of+Dermatology%22%5BJournal%5D)">Reconstruction of 'simplified' skin: control of fabrication.</a> The British Journal of Dermatology. 111, Suppl . 27. 219-222 (1984).</li>
<li>Bodily, J., Alam, S., Chen, H., Meyers, C. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aBodily%2C+J+%22Organotypic+epithelial+raft+cultures+and+the+study+of+the+natural+history+of+human+papillomavirus%22">Organotypic epithelial raft cultures and the study of the natural history of human papillomavirus</a>. , Caister Academic Press. Norfolk. (2006).</li>
<li>Cheng, S., Schmidt-Grimminger, D. C., Murant, T., Broker, T. R., Chow, L. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Differentiation-dependent+up-regulation+of+the+human+papillomavirus+E7+gene+reactivates+cellular+DNA+replication+in+suprabasal+differentiated+keratinocytes%5BTitle%5D)+AND+%22Genes+%26+Development%22%5BJournal%5D)">Differentiation-dependent up-regulation of the human papillomavirus E7 gene reactivates cellular DNA replication in suprabasal differentiated keratinocytes.</a> Genes & Development. 9, 2335-2349 (1995).</li>
<li>Dollard, S. C., Wilson, J. L., Demeter, L. M., Bonnez, W. R., Reichman, C., Broker, T. R., Chow, L. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Production+of+human+papillomavirus+and+modulation+of+the+infectious+program+in+epithelial+raft+cultures.+OFF%5BTitle%5D)+AND+%22Genes+%26+Development%22%5BJournal%5D)">Production of human papillomavirus and modulation of the infectious program in epithelial raft cultures. OFF.</a> Genes & Development. 6, 1131-1142 (1992).</li>
<li>Frattini, M. G., Lim, H. B., Laimins, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vitro+synthesis+of+oncogenic+human+papillomaviruses+requires+episomal+genomes+for+differentiation-dependent+late+expression%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">In vitro synthesis of oncogenic human papillomaviruses requires episomal genomes for differentiation-dependent late expression.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 93, 3062-3067 (1996).</li>
<li>Kopan, R., Traska, G., Fuchs, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Retinoids+as+important+regulators+of+terminal+differentiation%3A+examining+keratin+expression+in+individual+epidermal+cells+at+various+stages+of+keratinization%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Cell+Biology%22%5BJournal%5D)">Retinoids as important regulators of terminal differentiation: examining keratin expression in individual epidermal cells at various stages of keratinization.</a> The Journal of Cell Biology. 105, 427-440 (1997).</li>
<li>Longworth, M. S., Laimins, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pathogenesis+of+human+papillomaviruses+in+differentiating+epithelia%5BTitle%5D)+AND+%22Microbiology+and+Molecular+Biology+Review%22%5BJournal%5D)">Pathogenesis of human papillomaviruses in differentiating epithelia.</a> Microbiology and Molecular Biology Review. 68, 362-372 (2004).</li>
<li>Meyers, C., Frattini, M. G., Hudson, J. B., Laimins, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biosynthesis+of+human+papillomavirus+from+a+continuous+cell+line+upon+epithelial+differentiation%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Biosynthesis of human papillomavirus from a continuous cell line upon epithelial differentiation.</a> Science. 257, 971-973 (1992).</li>
<li>Wilson, R., Laimins, L. A. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aWilson%2C+R+%22Differentiation+of+HPV-Containing+Cells+Using+Organotypic+Raft+Culture+or+Methylcellulose%22">Differentiation of HPV-Containing Cells Using Organotypic Raft Culture or Methylcellulose</a>. , Humana Press Inc. Totowa. 119-119 (2006).</li>
<li>zur Hausen, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Papillomavirus+infections--a+major+cause+of+human+cancers%5BTitle%5D)+AND+%22Biochimica+et+Biophysica+Acta%22%5BJournal%5D)">Papillomavirus infections--a major cause of human cancers.</a> Biochimica et Biophysica Acta. 1288, F55-F78 (1996).</li>
</ol>

Biz ifşa hiçbir şey yok.

Burada genel olarak epitelyal farklılaşma incelemek için kullanılabilecek bir yöntem tarif eder, fakat, aynı zamanda kolaylıkla viral patogenezine gibi potansiyel terapötik etkinlik incelemek için adapte edilebilir. Birçok virüs herpesvirüslerinin ile olduğu gibi, HPV durumunda olduğu gibi, ya da virüs ömrü çevrimi içinde bir noktada, enfeksiyon primer olarak ya epitel hücreleri hedef. Konak hücre etkileşimleri: organotipik sal kültürler büyüyen zaman alıcı, virüsü incelemek için son derece yararlı bir yöntem sağlar sad...

<table border="1"><tbody><tr><td> Reaktif Adı </td><td> Şirket </td><td> Katalog numarası </td></tr><tr><td> Sıçan Kuyruk Kollajen tip 1 (4-5mg/ml) </td><td> BD Biosciences </td><td> 354236 </td></tr><tr><td> NaHC0 3 olmadan DMEM </td><td> Invitrogen </td><td> 12100-061 </td></tr><tr><td> NaHC0 3 </td><td> Sigma </td><td> S5761 </td></tr><tr><td> Hepes </td><td> Calbiochem </td><td> 391338 </td></tr><tr><td> Paslanmaz çelik metal ızgaralar </td><td> Williams ve hırs A.Ş. </td><td> CR-03063-040-100-S </td></tr><tr><td> E orta 11 </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Epidermal Büyüme Faktörü </td><td> BD Biosciences </td><td> 354010 </td></tr></tbody></table>

İlköğretim İnsan keratinositler gelen organotipik radye kültürlerin Üretimi

Generation of Organotypic Raft Cultures from Primary Human Keratinocytes

Organotipik epitel sal kültürlerin gelişimi vitro sistemde sadakatle özetlediği epitel farklılaşmasında etkili olan araştırmacılar sağlamıştır. Bu sistem için bir çok kullanıma vardır. Örneğin, keratinositlerin üç boyutlu organotipik sal kültürleri yetiştirme yeteneğiyle, insan papilloma virüsü (HPV) 1 çalışmalarında önemli bir kilometre taşı olmuştur. HPV yaşam döngüsü sıkıca skuamöz epitel 2 farklılaşma bağlantılıdır. Olarak Organotipik epitel sal kültürler burada virüs üretimi 3,4,5 dahil olmak üzere, tüm papillomavirus yaşam döngüsü yeniden gösterdi. Ayrıca, bu sal kültürler HPV ile in vivo enfeksiyon üzerine görülenlere benzerdir displastik lezyonlar gösterirler. Böylece bu sistem, aynı zamanda epitel hücre kanserleri, yanı sıra genel olarak epitel hücre farklılaşması üzerinde ilaçların etkisini araştırmak üzere de kullanılabilir. Başlangıçta Asselineau ve Prunieras tarafından geliştirilen <s6&gt; yukarı ve Kopan ve ark. 7 tarafından değiştirilmiş, organotipik epitel sal kültürü sistemi üzerindeki kolajen hücrelerinin büyümesini içeren bir genel olarak, nispeten kolay kültürü modeli, haline geldi bir hava-sıvı arayüzü (Şekil 1A) muhafaza bağlanır. 10-14 gün boyunca, hücrelerin tabakalandırmak ve farklılığı, farklılaşma özgü Sitokeratin üreten bir tam kat epitel oluşturulması. Hasat sal yanı sıra standart moleküler ve biyokimyasal teknikler ile, histolojik olarak kontrol edilebilir. Bu yazıda, birincil insan keratinositlerinden sal kültürlerin üretimi için bir yöntem açıklanmaktadır. Aynı teknik kurulan epitel hücre çizgileri ile birlikte kullanılabilir, ve kolay bir şekilde, normal veya hastalıklı biyopsileri 8 den epiteliyal doku ile kullanım için uyarlanabilir. Birçok virüs hedef ya deri veya mukozal epitelin kendi replikatif yaşam döngüsünün bir parçası olarak. Son birkaç yılda, fizibilite organotipik sal kült kullanarakVirüs-konak hücre etkileşim okuyan bir yöntem olarak ures birkaç herpesvirüslerinin yanı sıra adenovirüsler, parvoviruses ve poxviruses 9 için gösterilmiştir. Organotipik sal kültürler böylece viral patogenez incelemek için uyarlanmış ve kalıcı hücre serilerinde tarıma olmayan bu virüs için antiviral ajanlarla test etmek için tek yöntem olabilir.

Bir<em&gt; In vitro</emTaklit etmek&gt; yöntemi<em&gt; In vivo</em&gt; Epitelyal farklılaşma tarif edilmektedir. Birçok virüs bulaşıcı yaşam döngüsünün bir parçası olarak epitel hücreleri hedef ve bu yöntem, virüsün incelenmesi için bir araç sağlar: konak etkileşimleri daha yakından oluştuğu benzediği<em&gt; In vivo</em&gt;. Bu tekniğin temel keratinositler, oluşturulan hücre çizgileri, aynı zamanda, normal veya hastalıklı biyopsi doku ile birlikte kullanılabilir.

İlköğretim İnsan Keratinositler gelen Organotipik Radye Kültürlerin Üretimi

Organotipik epitel sal raft kültürlerinin geliştirilmesi, araştırmacılara ...'yı aslına uygun şekilde yeniden canlandıran verimli bir in vitro sistem sağlamıştır.

Bu prosedürün genel amacı, primer keratinositlerden veya yerleşmiş epitelyal hücre hatlarından organotipik raft kültürleri oluşturmaktır. Bu işlem, öncelikle fibroblast kolajen tıpaları hazırlayarak gerçekleştirilir. Ardından, epitelyal hücreler tıpaların üzerine katmanlar halinde eklenir.Tıkaçlar daha sonra sal raft ızgaralarına taşınır ve 10 ila 14 gün boyunca hava-sıvı arayüzünde tutulur. Son adımda, raftlar hasat edilir. Nihayetinde, epiteliyal farklılaşmadaki değişiklikler histolojik veya immünohistokimyasal analizle değerlendirilebilir; bu yöntemin epiteliyal farklılaşmaya dair içgörü sağlayabileceği görülmektedir.Bu yöntem, yaşam döngülerinin bir parçası olarak deri veya mukoza epitelyumunu enfekte eden virüsler gibi diğer sistemlere de uygulanabilir. Prosedürü, laboratuvarımdaki lisansüstü öğrencisi Dan Annekerle göstereceğiz. İlk olarak, kromik sülfürik asidi bir cam behere dökün ve metal raft ızgaralarını asidin içinde bir saat boyunca bekletin.Ardından ızgaraları gece boyunca musluk suyu ile sürekli yıkayın. Gece boyu süren durulamanın ardından, ızgaraları çift distile su ile üç ila beş saat daha durulayın ve sal grubu ızgaralarının kurumasını bekleyin. Daha sonra salın

generation-organotypic-raft-cultures-from-primary-human

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

İmmünoloji ve Enfeksiyon

Bu videoda, melanom ilerlemesini incelemek için in vitro 3D organotipik cilt rekonstrüksiyonları oluşturmak için ayrıntılı protokol açıklanmaktadır. Bu cilt modeli, in vivo organların hem mimarisini hem de çok hücreli karmaşıklığını taklit eder.

Organotipik Tam Cilt Rekonstrüksiyonlarının Oluşturulması: İnsan Derisi Örneklerini Kullanarak 3D Cilt Modeli Oluşturma Prosedürü

Bu videoda, insan derisinin epidermal tabakasının en belirgin hücreleri olan keratinositlerin, enzimatik sindirim ve mekanik bozma yöntemlerinin bir kombinasyonu kullanılarak izolasyonu anlatılmaktadır. Bu yöntem, seçici bir büyüme ortamı kullanarak keratinositlerin diğer cilt hücresi tiplerine göre tercihli büyümesine yardımcı olur.

İnsan Derisi Keratinosit İzolasyonu: Deri Örneklerinden Primer Keratinositlerin Kültürlenmesinde Bir Yöntem

Bu videoda, genetik olarak değiştirilmiş primer insan keratinositleri rekombinant retrovirüs üretmek için ayrıntılı bir protokol açıklanmaktadır. Bu yöntem, keratinositlerde gen ekspresyonunu manipüle etmek için kullanılabilir.

Primer İnsan Keratinositlerinin Genetik Modifikasyonu: Rekombinant Retrovirüsler Kullanılarak Keratinositlerin Genetik Olarak Manipüle Edilmesi İçin Bir Yöntem

Bu video protokolü, epidermal keratinositler ve cansızlaştırılmış insan dermisi kullanarak insan organotipik cildi oluşturmak için kaset tabanlı bir in vitro kültür tekniğini açıklar. İn vivo doku muadillerinin işlevini ve fizyolojisini taklit ederler.

Organotipik 3D Cilt Kültürü: Aselüler Dermiste İnsan Epidermisini Yeniden Oluşturmak İçin Kaset Tabanlı İn Vitro Kültür Tekniği

Bu makalenin amacı, epidermal keratinositlerden ve devitalize insan dermisinden genetik olarak değiştirilmiş insan organotipik derisinin nasıl oluşturulacağına dair kapsamlı ve ayrıntılı bir protokol sağlamaktır.

Güçsüz İnsan dermis kullanma Genetiği Değiştirilmiş Organotipik Cilt Kültürlerin Üretimi

İnsan derisi dış ortamda karşı savunma ilk satırı olarak davranır. Biz yetişkin cilt üzerinden birincil insan lenfositi izole bir yöntem mevcut. Bu izole lenfositi çok sayıda deneysel kurulumları yararlıdır ve kutanöz Biyoloji vitro. moleküler mekanizmalar çalışmak için son derece uygun bir model...

Oluşturma ve birincil insan lenfositi yetişkin cilt, kültür

Burada, biz mevcut her iki mimari beyannamedir bir 3D organotypic Melanom küresel Cilt modeli oluşturmak için bir protokol ve bir organ/tümör vivo içinde ama aynı zamanda çok hücreli karmaşıklık barındırır sistematik deneysel müdahale.

3D Organotypic Melanom küresel Cilt modeli

Burada birincil insan Lenfositi yetişkin cilt dokularının üzerinden verimli bir şekilde ayırmak için bir protokol mevcut. Bu yöntem geleneksel yordamı ROCK inhibitörü Y-27632 aşılama ortamda kendiliğinden dermal hücrelerden epidermal hücrelerin ayırarak basitleştirir.

Birincil insan Lenfositi yetişkin cilt dokusundan izole etmek için basit ve etkili bir yöntem

Biz İndüklenmiş pluripotent kök hücre kaynaklı lenfositi ve fibroblastlar ayırt etmek ve bir 3B cilt organoid oluşturmak gösterilmiştir bir protokol bu lenfositi ve fibroblastlar kullanarak öneriyoruz. Bu iletişim kuralı insanlaşmış fareler model oluşturma ek bir adım içerir. Burada sunulan teknik dermatolojik araştırma artıracaktır.

3B cilt Organoid kablosu kan kaynaklı nesil Pluripotent kök hücreler indüklenen

Burada 3D süspansiyon kültüründe epidermal sferoidlerin sistematik olarak yetiştirilmesi için bir protokol açıklıyoruz. Bu protokol, çeşitli epitel doku tiplerinde kullanılmak ve çeşitli insan hastalıklarının ve koşullarının modellenimi için geniş kapsamlı uygulamalara sahiptir.

Keratinosit Kök Hücre Plastisitesini Modellemek için Yüksek Verimli Epidermal Sferoid Kültür Sistemi Kurulması

Bu protokol, canlı hücre görüntülemede kullanılmak üzere taze elde edilen (pasaj 0) keratinositlerin kültürünü ana hatlarıyla belirtir.

Keratinosit Canlı Hücre Görüntüleme için Primer Kültürlerin Oluşturulması

Öğrenin, primer insan keratinositlerinden organotipik radye kültürleri üretme yöntemini. Bu teknik, epitel farklılaşmasını taklit ederek virus:konak etkileşimlerini incelemek için değerli bir platform sunar.

İlköğretim İnsan Keratinositler gelen Organotipik Radye Kültürlerin Üretimi

Daha fazla video keşfet