Name: Graft-versus-host hastalığı indüksiyonu ve In Vivo T Hücre İzleme (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-08-29T12:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 29 s
Description: Öğrenin, kemik iliği nakli ve biyolüminesan görüntüleme kullanarak farelerde GVHD sırasında T hücre trafiğini ve birikim desenlerini inceleyin. Bu yöntem bağışıklık mekanizmalarını anlamak için değerlidir.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Biz kimin üstün teknik destek, entelektüel girdi ve manevi destek öncesinde bu çalışmalarda hareket etkili olmuştur Alice Gaughan ve Jiao-Jing Wang borçluyuz. Bu çalışmalar GAH için NIH hibe AI036532 tarafından desteklenmiştir.

1. Öldürücü Işınlama <ol><li> Kullanılacak ışınlayıcılar ile uyumlu bir microisolator kafes içine 10 alıcı fareler kadar yerleştirin. </li><li> Toplam doz (BALB.B alıcılar için toplam doz = 9 cGy) toplanmasıyla 2 eşit dozda ışın tedavisi. İkinci ışınlama birinci sonra 3 saat olmalıdır. Enjeksiyon nihai ışınlama sonrası 4-6 saat arasında meydana gelmelidir. Cs 137 kaynak veya RS2, 000, ışınlayıcı birinde saçmak fareler. </li><li> Nakli saatine kadar asitlendirilmiş su ile microisolator kafesteki ikinci radyasyon dozu, mağaza fareler ardından. </li></ol> 2. Splenocyte Preparasyon <ol><li> Kurumsal kurallarına göre bir donör fare Euthanize. 125x10 6 splenositlerin - Her donör genellikle 75x10 6 verir. 12x10 6 CD8 T hücreleri - CD8 arıtma kitleri kullanılarak her bir fare genellikle 6x10 6 verir. </li><li> Ilk doğrudan doğruya orta hat dikey bir 2 cm&#39;lik kesi 2 cm yaparak dalak çıkarıngöğüs kafesi altında. Kürk, deri ve viseral zarından kesin. </li><li> Dalak çıkarın ve% 5 FBS 1640 RPMI ile bir Petri kabındaki 40 ul örgü ekran dalak koyarak tek hücre süspansiyonu oluşturmak. Tüm dalak örgü ekran geçirilir kadar dalak parçalayın için bir şırınga pistonu kullanın. </li><li> Her WT ve L2G85.B6 donör için bu işlemi tekrarlayın. 1-50 ml konik bir tüp içinde tüm WT tek hücre süspansiyonları toplayın ve ayrı bir 50 ml&#39;lik konik bir tüp içinde tüm L2G85.B6 tek hücre süspansiyonları toplamak. </li><li> 4. 10 dakika için 1200 rpm&#39;de santrifüje hücreleri ° C % 5 FBS ve sayım hücreleri 1640 RPMI süspanse pelet. </li></ol> 3. Kemik İliği Hazırlık <ol><li> Bir donör fare tek bir arka bacak arasından cilt çıkarın. </li><li> Dikkatlice femur ve tibia / fibula mümkün olduğunca çok kas dokusu gibi kesip. </li><li> Kalça eklemi uzakta femur keserek arka bacak kaldırın. Sadece tibia / fibula kesiştiği aşağıda arka pençe kesip. Tüm kemik keser sağlam makas kullanılarak yapılmalıdır. </li><li> Dikkatlice kalan kas dokusu çıkarın. Fibula-nispeten daha az kemik iliği fibula bulunan ve çabaya değmez kesiniz. </li><li> İkinci arka bacak ile soğuk 1.640 RPMI% 5 FBS ve tekrarlama sürecinde arka ekstremite yerleştirin. 40x10 6 kemik iliği hücreleri - Her fare 20x10 6 arasında boyun eğmek zorundadır. </li></ol> 4. Kemik İliği Kaldırma <ol><li> Soğuk ortamı (~ 1 ml), az miktarda büyük olan Petri kabındaki ortam ve bir yerden bir arka uzuv çıkarın. </li><li> Diz eklemi kesip. Tibia içine bir şırınga (hacim&gt; 5 ml), insert subkutan iğne kullanma ve tüm kırmızı malzeme tibianın iç kaldırılana kadar şırınga basın. Femur işlemi tekrarlayın. Kemik iliği yoksun kalan kemikleri atın. İkinci arka bacak ile tekrarlayın. </li><li> Büyük Petri kabı ve kullanım şırınga pistonu ve ul 40 içine kemik iliği içeren pipetleme medya tarafından tek bir hücre süspansiyonu oluşturunekran kafes. Pipet tek hücre 50 ml konik tüp içine süspansiyon ve buz üzerinde tutmak. </li></ol> 5. CD3 tükenmesi Kemik iliğinden CD3 + hücreler tüketmek için çeşitli yollar vardır. Bizim laboratuar Miltenyi Biotec (- 130-093-021 CD3-biotin) tarafından yapılan bir kit kullanır. Üreticinin protokolü takip kemik iliğinden CD3 + hücreler İncelten. Miltenyi kitleri için tampon bundan MACS Tampon (2 mM EDTA, PBS, pH 7.2 &#39;de% 0.5 BSA) olarak adlandırılır. <ol><li> 4. 10 dakika ° C ve sayım hücreleri için 1200 rpm&#39;de dalak ve kemik iliği hücreleri santrifüj hücreleri yıkayın. </li><li> TÜM Süpernatantı. Süspanse kemik iliği MACS tamponu içerisinde 10 milyon kemik iliği hücreleri başına 100 ul hücre. </li><li> Kullanarak CD3 tükenmesi ile devam &#39;protokolü üretmektedir. </li><li> Steril PBS CD3 tüketilmiş kemik iliği hücreleri 3 kere yıkayın. Kont CD3 kemik iliği hücreleri tükenmiş ve 10 7 hücre enjekte etmek uygun bir ses seviyesinde tekrar süspansiyon haline getirin. </li></ol> L2G85.B6 farelerde CD8 T hücreleri arındırmak için çeşitli yollar vardır. Ayrıca, WT splenocyte vericilerden CD8 T hücreleri tüketmek için çeşitli yolları vardır. Bizim laboratuar Miltenyi Biotec (- 130-049-401, CD8 arıtma - 130-095-236 CD8 tükenmesi) dan kitleri kullanır. <ol><li> 10 7 hücre başına 90 ul MACS Tamponunda WT pelletini tekrar. &#39;Protokolü (- 130-049-401 CD8 tükenmesi) üretmektedir göre CD8 T hücre tükenmesi ile devam edin. </li><li> 10 7 hücre başına 40 ul MACS Tamponunda L2G85.B6 pelletini tekrar. &#39;Protokolü (- 130-095-236 CD8 saflaştırma) üretmektedir göre CD8 T hücre saflaştırma ile devam edin. </li><li> Her hücre popülasyonu sayın ve steril PBS ile her nüfusu 3 kere yıkayın. 18x10 6 WT (CD8 tüketilmiş) dalak ve 2x10 6 CD8 T hücreleri arıtılmış L2G85.B6 enjekte etmek uygun miktarda her nüfus süspanse edin. </li></ol>7. Enjeksiyon Hazırlık <ol><li> Bir mikrosantrifüj tüp CD8 T hücreleri arıtılmış 10 7 CD3 tükenmiş kemik iliği hücreleri, 18x10 6 WT (CD8 tüketilmiş) dalak ve 2x10 6 L2G85.B6 birleştirin. 300 ul steril PBS ve tekrar süspansiyon ile yıkayınız. </li><li> Alıcı farelerin kuyruk ven içine hücre hazırlama enjekte. Enjeksiyonlar 28 gauge iğne kullanılarak yapılmalıdır. </li><li> Asitlendirilmiş su ile microisolator kafeste Mağaza fareler. Puan farelerin günlük Cooke ve arkadaşları 1 tarafından geliştirilen skorlama GVHH skorlama sistemi kullanılarak. </li></ol> 8. Bioluminescent Görüntüleme <ol><li> Altı gün transplantasyon sonrası, 4 mg D-luciferase ile alıcı farelere enjekte. Luciferase için 5 dk lusiferaz ile reaksiyona izin verin. </li><li> Küçük binning ile 5 dakika biyolüminesans kamera ve görüntü alıcıların izofluran odasında fare uyuştur. Mümkün olduğunca çok sayıda olaylar olarak toplarken, bu yüksek çözünürlüklü bir görüntü oluşturacaktır. </li><li> Oturma kullanarak verileri analizImage yazılımı. Pseudo-color görüntü ölçeği en iyi sonuçları elde etmek için değiştirilebilir. Bununla birlikte, aynı ölçekli deneyler ile aynı olmaları şarttır. </li><li> Ilgi Bölgeler ilgi her bölgeden yayılan varlık akı (foton / sn) hesaplanarak belirlenebilir Yaşayan Image yazılımı ve ışık emittans kullanılarak oluşturulabilir. </li></ol> 9. Temsilcisi Sonuçlar Yaklaşık 7-10 gün transplantasyon sonrası, fareler GVHH klinik belirtileri gösteren başlar. Fare tımar eksikliği scruffy nedeniyle görünür. Alıcılar da 7-10 gün transplantasyon sonrası arasındaki kilo kaybetmeye başlayacaktır. Alıcı fareler Faaliyet ve duruş yaklaşık günde 12-14 transplantasyon sonrası kadar nispeten normal kalır. Kümülatif GVHH puanları sürekli ilk 2-3 hafta sonrası transplantasyon (Şekil 1A) aracılığıyla artacaktır. Hastalık ders fareler arasında oldukça değişken olmakla birlikte, alıcıların eşit 30-40 d GVHD yenik gerekirays transplantasyon sonrası (Şekil 1B). Şekil 2. 6 gün transplantasyon sonrası görüntülendi alıcı fareler gösterir. Pseudo-renkli ölçek dalak ve bağırsak yayılan varlık yüksek ışık yoğunluğu ile vücut boyunca ışık emittans değişen gösterir. Gut ve CD8 T hücre birikimi önceki bulguları 6 ile tutarlıdır. Alıcı fareler daha sonraki bir zaman noktasında görüntülü ya da ex vivo görüntüleme için ötenazi ile microisolator kafesine geri yerleştirilebilir. <table border="1"><tbody><tr><td> Kriterleri </td><td> Sınıf 0 </td><td> Grade 1 </td><td> Grade 2 </td></tr><tr><td> Kilo kaybı (wkly.) </td><td> &lt;% 10 </td><td> &gt;% 10 - &lt;25% </td><td> &gt; 25% </td></tr><tr><td> Duruş </td><td> Normal </td><td> Kalanı sadece hunching </td><td> Çeşitli hunching; bozar MOVEMEnt </td></tr><tr><td> Etkinlik </td><td> Normal </td><td> Aktivitesinde azalma Hafif ve orta şiddette </td><td> Uyarılmış sürece Kırtasiye </td></tr><tr><td> Kürk doku </td><td> Normal </td><td> Dağıtmıştı Hafif ve orta şiddette </td><td> Şiddetli dağıtmıştı / yoksul tımar </td></tr><tr><td> Cilt dokusu </td><td> Normal </td><td> Pençeleri / kuyruk Ölçekleme </td><td> Soyulmuş deri belirgin alanlar </td></tr></tbody></table> Tablo 1. Cooke ve ark 1996 1 Bu skorlama sistemi geliştirilmiştir. Fare sol kriterleri her günlük atılır gerekmektedir. Her fare her bir kriter için 0-2 arasında bir puan verilir ve toplam puan tüm bireysel puanları toplamı olur. <img alt="Şekil 1" src="/files/ftp_upload/3697/3697fig1.jpg" /> Şekil 1. Lethally ışınlanmış BALB.B 10 7 kemik ile transplante edildiKemik iliği hücreleri tek başına veya L2G85.B6 CD8 T hücreleri arıtılmış 18x10 6 CD8 T hücre tükenmiş WT dalak ve 2x10 6 ile. A) kemik iliği alıcılarının klinik skoru veriler tek başına veya CD8 T hücre ile WT splenositlerin tükenmiş ve L2G85.B6 CD8 T hücreleri saflaştırılmış. B) kemik iliği alıcıları tek başına ya da Survival veri CD8 T hücre WT splenositlerin tükenmiş ve L2G85.B6 CD8 T hücreleri saflaştırılmış. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/3697/3697fig1large.jpg" target="_blank">büyük bir rakam görmek için buraya tıklayın</a> . <img alt="Şekil 2," src="/files/ftp_upload/3697/3697fig2.jpg" /> Şekil 2. Lethally ışınlanmış BALB.B fareler 10 7 kemik iliği hücreleri tek başına veya L2G85.B6 CD8 T hücreleri arıtılmış 18x10 6 CD8 T hücre tükenmiş WT dalak ve 2x10 6 ile birlikte transplante edildi. Alıcılar, intraperitoneal enjeksiyon ile 4 mg D-lusiferin ile enjekte edildi ve küçük binning 5 dakika için Xenogen IVIS kullanılarak görüntülendi. Psmor düşük yoğunluklu temsil eder ve kırmızı ilgi yüksek yoğunluklu bölgeler tüm fare ve toplam akı (foton / sn) etrafında çizildi ölçüldü temsil eder eudo renkli görüntüler gösterilir. <img alt="Şekil 3" src="/files/ftp_upload/3697/3697fig3.jpg" /> Şekil 3. Lethally ışınlanmış BALB.B fareler 10 7 kemik iliği hücreleri tek başına veya L2G85.B6 CD8 T hücreleri arıtılmış 18x10 6 CD8 T hücre tükenmiş WT dalak ve 2x10 6 ile birlikte transplante edildi. Alıcılar, intraperitoneal enjeksiyon ile 4 mg D-lusiferin ile enjekte edildi ve küçük binning 5 dakika için Xenogen IVIS kullanılarak görüntülendi. Mor düşük yoğunluklu temsil eder ve kırmızı yüksek yoğunluk temsil ettiği sözde renkli görüntüler gösterilir. Alıcılar A) günde 4, B) Günlük 6, ve C) 8 gün sonrası transfer görüntülendi.

<ol><li>Cooke, K. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+experimental+model+of+idiopathic+pneumonia+syndrome+after+bone+marrow+transplantation%3A+The+roles+of+minor+H+antigens+and+endotoxin%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">An experimental model of idiopathic pneumonia syndrome after bone marrow transplantation: The roles of minor H antigens and endotoxin.</a> Blood. 88, 3230-3239 (1996).</li>
<li>Berger, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((T+cell+subsets+involved+in+lethal+graft-versus-host+disease+directed+to+immunodominant+minor+histocompatibility+antigens%5BTitle%5D)+AND+%22Transplantation%22%5BJournal%5D)">T cell subsets involved in lethal graft-versus-host disease directed to immunodominant minor histocompatibility antigens.</a> Transplantation. 57, 1095-1102 (1994).</li>
<li>Nimer, S. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Selective+depletion+of+CD8%2B+cells+for+prevention+of+graft-versus-host+disease+after+bone+marrowtransplantation.+A+randomized+controlled+trial%5BTitle%5D)+AND+%22Transplantation%22%5BJournal%5D)">Selective depletion of CD8+ cells for prevention of graft-versus-host disease after bone marrowtransplantation. A randomized controlled trial.</a> Transplantation. 57, 82-87 (1994).</li>
<li>Korngold, R., Sprent, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Surface+markers+of+T+cells+causing+lethal+graft-vs-host+disease+to+class+I+vs+class+II+H-2+differences%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Immunology%22%5BJournal%5D)">Surface markers of T cells causing lethal graft-vs-host disease to class I vs class II H-2 differences.</a> Journal of Immunology. 135, 3004-3010 (1985).</li>
<li>Cao, Y. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+imaging+using+labeled+donor+tissues+reveals+patterns+of+engraftment%2C+rejection%2C+and+survival+in+transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22Transplantation%22%5BJournal%5D)">Molecular imaging using labeled donor tissues reveals patterns of engraftment, rejection, and survival in transplantation.</a> Transplantation. 80, 134-139 (2005).</li>
<li>Asady, R. E. l <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((TGF-%7Bbeta%7D-dependent+CD103+expression+by+CD8%28%2B%29+T+cells+promotes+selective+destruction+of+the+host+intestinal+epithelium+during+graft-versus-host+disease%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Exp.+Med%22%5BJournal%5D)">TGF-{beta}-dependent CD103 expression by CD8(+) T cells promotes selective destruction of the host intestinal epithelium during graft-versus-host disease.</a> J. Exp. Med. 201, 1647-1657 (2005).</li>
<li>Larson, R. S., Springer, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Structure+and+function+of+leukocyte+integrins%5BTitle%5D)+AND+%22Immunol+Rev%22%5BJournal%5D)">Structure and function of leukocyte integrins.</a> Immunol Rev. 114, 181-217 (1990).</li>
<li>Karecla, P. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Recognition+of+E-cadherin+on+epithelial+cells+by+the+mucosal+T+cell+integrin+alpha+M290+beta+7+%28alpha+E+beta+7%29%5BTitle%5D)+AND+%22Eur.+J.+Immunol%22%5BJournal%5D)">Recognition of E-cadherin on epithelial cells by the mucosal T cell integrin alpha M290 beta 7 (alpha E beta 7).</a> Eur. J. Immunol. 25, 852-856 (1995).</li>
<li>Cepek, K. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adhesion+between+epithelial+cells+and+T+lymphocytes+mediated+by+E-cadherin+and+the+alpha+E+beta+7+integrin%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Adhesion between epithelial cells and T lymphocytes mediated by E-cadherin and the alpha E beta 7 integrin.</a> Nature. 372, 190-193 (1994).</li>
<li>Malarkannan, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+molecular+and+functional+characterization+of+a+dominant+minor+H+antigen%2C+H60%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Immunol%22%5BJournal%5D)">The molecular and functional characterization of a dominant minor H antigen, H60.</a> J. Immunol. 161, 3501-3509 (1998).</li>
</ol>

Çıkar çatışması ilan etti.

Burada sunulan farelerde GVHD uyarılacak protokolü murin GVHH klinik açıdan uygun bir modeli temsil eder. Başlangıçta Berger ve arkadaşları tarafından kurulmuştur. 1994 yılında, BALB.B gerginlik kombinasyon içine C57BL / 6 bağımlı CD4, en sık görülen klinik senaryo 3 çok benzer CD8 T etkileyiciler 2, aracılık GVHH mortalite ile, MHC-eşleştirilmiş olduğunu. Tek başına CD8 T hücre nakli bu modelde GVHD neden olmadığı bilinmektedir, ancak hastalığın ilerlemesi yalnız CD4 T hücreleri ...

<table border="1"><tbody><tr><td> Reaktif Adı </td><td> Şirket </td><td> Katalog Numarası </td><td> Yorumlar </td></tr><tr><td> RPMI 1640 </td><td> Invitrogen </td><td> 12633-012 </td><td></td></tr><tr><td> Fötal Buzağı Serumu </td><td> Invitrogen </td><td> 10439016 </td><td></td></tr><tr><td> 40 uM Hücre Süzgeç </td><td> BD Biosciences </td><td> 352340 </td><td></td></tr><tr><td> CD3e-Biotin </td><td> Miltenyi Biotech </td><td> 130-093-021 </td><td></td></tr><tr><td> Anti-Biotin microbeads </td><td> Miltenyi Biotech </td><td> 130-091-147 </td><td></td></tr><tr><td> CD8a microbeads </td><td> Miltenyi Biotech </td><td> 130-049-401 </td><td> Dalak CD8 T hücreleri tüketmek için kullanılır. </td></tr><tr><td> CD8a Arıtma Antikor Kokteyl </td><td> Miltenyi Biotech </td><td> 130-095-236 </td><td> Arındırmak için kullanılırDalak CD8 T hücreleri. </td></tr><tr><td> D-lusiferin </td><td> Kaliper Yaşam Bilimleri </td><td> 122796 </td><td></td></tr></tbody></table>

graft-versus-host hastalığı indüksiyonu ve<em&gt; in vivo</embir mhc-eşlemeli murin model kullanma&gt; t hücre İzleme

Induction of Graft-versus-host Disease and In Vivo T Cell Monitoring Using an MHC-matched Murine Model

Graft-versus-host hastalığı (GVHH) hematolojik eksiklikleri çeşitli için küratif bir tedavi olarak kemik iliği nakli geniş kullanımı sınırlayıcı engeldir. GVHH alıcı infüze edilir kemik iliği greft mevcut olgun alloreactive T hücrelerinin neden olduğu ve ana organlara zarar edilmektedir. Bununla birlikte, farelerde, T hücreleri GVHD neden olduğu kemik iliği inokulum eklenmesi gerekir. Kapsamlı çalışmalar T hücre yanıtlarını transplantasyon sonrası karakterize yapılmış olmasına rağmen, bioluminescent görüntüleme teknolojisi in vivo T hücre trafiğini modellerini izlemek için bir non-invaziv bir yöntemdir. Ölümcül radyasyon ardından, alıcı fareler donör farelerden alınan kemik iliği hücreleri ve dalak ile nakledilmektedir. L2G85.B6 (yapısal olarak ifade eden transgenik farelerde lusiferaz) alınan T-hücre alt nakli dahil edilmiştir. Sadece belirli T hücre alt nakli olarak, bir in vivo özgül T hücre alt izleyebilirve yere göre, değişik zaman noktalarında GVHD teşvik spesifik T hücre alt gruplarının rolü ile ilgili hipotezler geliştirmek. Önceden belirlenen aralıklarla transplantasyon sonrası anda, alıcı fareler bir Xenogen IVIS CCD kamera kullanarak görüntülü. Işık yoğunluğu foton yoğunluğu (kırmızı = yüksek yoğunluklu, mor = düşük yoğunluklu) dayalı bir pseudo-color görüntü oluşturmak için Yaşayan Image yazılımı kullanılarak belirlenebilir. 4-7 gün transplantasyon sonrası arasında, alıcı fareler GVHH klinik belirtileri göstermeye başlayabilir. Cooke ve ark. 1 alıcı fareler kürk, doku, deri bütünlüğü, aktivite, kilo kaybı ve duruş esas hastalığın ilerlemesini ölçmek için bir puanlama sistemi geliştirmiştir. Fare günlük attı, ve can çekişen olunca ötenazi uygulanır. Alıcı fareler genellikle 20-30 gün transplantasyon sonrası can çekişmekte. Sıçan modellerinde GVHH immünoloji incelemek için değerli araçlardır. Seçerek özellikle T hücre alt ark nakliHer bir alt kümeye oynar rolleri dikkatli belirlenmesi için alçak. Non-invaziv in vivo T hücre yanıtları izleme murin GVHH modelleri değeri başka bir katman ekler.

Mürin kemik iliği nakli insanlarda graft-versus-host hastalığı yöneten immünolojik mekanizmalarla çalışmak için yaygın olarak kullanılan bir tekniktir. T hücre trafiğini modellerini izlemek için yeteneği<em&gt; In vivo</em&gt; Graft-versus-host hastalığı sırasında T hücre yanıtlarının geliştirilmesi ve idamesi ayrıntılı analizini sağlar.

Graft-versus-host hastalığı indüksiyonu ve<em&gt; In Vivo</emBir MHC-eşlemeli murin Model Kullanma&gt; T Hücre İzleme

Graft-versus-host hastalığı (GVHH), çeşitli hematolojik hastalıklar için küratif bir tedavi olarak kemik iliği transplantasyonunun yaygın kullanımının önündeki kısıtlayıcı engeldir...

Bu prosedürün amacı, graft versus host hastalığı sırasında T hücresi trafiğini ve birikim modellerini incelemektir. Bu işlem, öncelikle donör farelerden kemik iliği ve sitlerin izole edilmesiyle gerçekleştirilir. İkinci adım ise ilgilenilen hücre popülasyonlarının saflaştırılması ve transplantasyon için hazırlanmasıdır.Ardından, saflaştırılmış hücre popülasyonları birleştirilir ve ışınlanmış alıcı farelere nakledilir. Son adım, alıcı farelerdeki T hücresi trafiğini ve birikim modellerini görselleştirmektir. Nihayetinde, GVHD sırasında T-hücresi trafiğini ve birikim modellerini göstermek için biyolüminesans görüntüleme kullanılır.Biyolüminesans görüntülemenin mevcut teknolojilere göre temel avantajı, mevcut teknolojilerde olduğu gibi belirli bir bölge yerine, lenfositlerin farenin tamamında tespit edilmesine olanak sağlamasıdır. Alıcı fareler, kemik iliği ve hücre transplantasyonu öncesinde letal radyasyona maruz bırakılmalıdır. Kullanılacak ışınlatıcı ile uyumlu bir mikro izolatör kafesine 10 adede kadar alıcı fare yerleştirin.Ardından, fareleri ya bir sezyum 1 37 kaynağıyla ya da başlangıç dozu 4.5 centigrade olan bir radyatör olan RS 2000 ile ışınlayın. Üç saat sonra, toplam doku

induction-graft-versus-host-disease-vivo-t-cell-monitoring-using-an

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

İmmünoloji ve Enfeksiyon

Bu video, allojenik hematopoietik kök hücreler ve GvHD'yi indükleyen splenik alloreaktif T lenfositleri kullanılarak letoral ışınlanmış bir alıcı farede bağırsak greftine karşı konak hastalığının (GvHD) indüksiyonunu göstermektedir. Bu protokol, hastalığın mekanizmasını anlamak ve yenilikçi terapötik seçenekler geliştirmek için ciddi bir akut intestinal GvHD modeli oluşturmaya yardımcı olur.

Allojenik Kemik İliği ve Splenik Hücre Nakli ile Fare Modellerinde Graft Versus Host Hastalığının İndüksiyonu

Kuyruk-deri transplantasyonu, farelerde allojenik immün yanıtlar sırasında T hücresine bağlı reddi ve tolerans indüksiyonunu incelemek için güçlü bir modeldir. Bu protokolün avantajları, minör invaziv cerrahi ve alıcı fareyi feda etmeye gerek kalmadan izleme kolaylığıdır.

Farelerde allojenik CD4 + T hücre Cevapları Eğitim için Kuyruk Cilt Nakli

Burada, sinjeneik CD4 + CD45RByüksek T hücrelerinin T ve B hücresi eksikliği olan alıcılara evlat edinici transferi yoluyla farelerde kolon iltihabını indüklemek için bir protokol sunuyoruz. Klinik ve histopatolojik özellikleri insan inflamatuar barsak hastalıklarını taklit eder. Bu yöntem, kolon iltihabının başlaması ve hastalığın ilerlemesinin incelenmesine izin verir.

Efektör CD4 Evlatlık transferi ile Kemirgen Bağırsak Enflamasyon indüksiyonu<sup&gt; +</sup&gt; CD45RB<sup&gt; Yüksek</sup&gt; Bağışık yetmezliği olan farelere içine T Hücreleri

Farelerde aort interpozisyon greftlemesi için bir protokol açıklıyoruz. Protokolün amacı, arterlerdeki alloimmün reaksiyonlar ve organ nakli başarısızlığına katkıda bulunan ortaya çıkan arteriyel değişikliklerle ilgili patolojik süreçleri ve terapötik stratejileri incelemek için bir model sağlamaktır.

Aloimmün kaynaklı Vasküler Reddi ve Nakli arterioskleroz Fare Modeli

Mürin tam kalınlıkta deri transplantasyonu alloimmun ortamda reddini incelemek için iyi kurulmuş bir modeldir. &gt; C57BL / 6 tam kalınlıkta deri nakli - Burada bir BALB / c performans katılan her adımda bir öğretici sağlar.

Mürin Tam kat Cilt Nakli

Burada, Allojeneik Hematopoietik kök hücre transplantasyonu açıklar ve distal kolonun tekrarlayan mini-endoskopik değerlendirme yerinde varlığı, özellikleri ve canlı içinde kolon iltihabı şiddeti için izin veren bir protokol mevcut bağırsak graft - versus - host hastalığı fareler.

İndüksiyon bağırsak Graft - versus - host hastalığı ve canlı fareler, Mini-endoskopik değerlendirme

Burada, bir xenogeneic Graft-versus-Host hastalığı (xenoGVHD) modelinde hastalığı teşvik etmek ve puan vermek için bir protokol sunuyoruz. xenoGVHD, insan T hücrelerinin bağışıklık bastırılmasını incelemek için bir in vivo modeli sağlar. Ayrıca, immunobastırma ölçmek için bir araç olarak dijital PCR ile dokularda insan T hücrelerinin nasıl algılanmasını açıklar.

Bir Xenogeneic Murine modelinde Graft-versus-Host hastalığının indüksiyon ve skorlama ve dijital PCR kullanarak fare dokularında ınsan T hücrelerinin ölçümü

Biz bir insan periferik kan mononükleer hücre (PBMC) - çeviriimmün-onkoloji araştırma için insanlaşmış ksenogreft fare modeli dayalı açıklar. Bu protokol, I-O terapi değerlendirmesi için benzer modellerin oluşturulması ve karakterizasyonu için genel bir kılavuz görevi görebılabilir.

Çevirisel İmmüno-onkoloji (I-O) Araştırma için İnsani Periferik Kan Mononükleer Hücre (PBMC) Engrafted Humanized Xenograft Modeli

Greft-versus-host hastalığı allojenik kemik iliği transplantasyonu sonrası önemli bir komplikasyondur. Dendritik hücreler greft-versus-host hastalığının patogenezinde kritik bir rol oynarlar. Bu makalede, dendritik hücrelerin greft-versus-host hastalığı nın gelişimindeki rolünü ve greft-versus-lösemi etkisinin araştırılması için yeni bir kemik iliği transplantasyon platformu açıklanmaktadır.

Kemik İliği Transplantasyon Platformu Greft-versus-Host Hastalığında Dendritik Hücrelerin Rolünü Araştırmak Için

Bu protokol, spontan diyabetik NOD farelerinden saflaştırılmış splenositlerle mücadele eden obez olmayan diyabetik (NOD)-şiddetli kombine immün yetmezlikli farelerde NIT-1 hücrelerinin nakli ve görüntülenmesi için basit ve minimal invaziv bir yöntemi tanımlamaktadır.

Farelerde Otoimmün Diyabetin Evlat Edinilen Transfer Modelinde Greft Sağkalımının Biyolüminesan İzlenmesi

Öğrenin, kemik iliği nakli ve biyolüminesan görüntüleme kullanarak farelerde GVHD sırasında T hücre trafiğini ve birikim desenlerini inceleyin. Bu yöntem bağışıklık mekanizmalarını anlamak için değerlidir.

Graft-versus-host hastalığı indüksiyonu ve

Daha fazla video keşfet