Name: Kabuklu uzun vadeli Lethal Toksisite Testi Artemia Franciscana /em (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-04-14T14:00:00.000+00:00
Duration: 14 min 40 s
Description: Öğrenin Artemia franciscana üzerinde 14 günlük uzun vadeli ölümcül toksisite testi protokolünü. Bu yöntem kimyasal maddelerin ve endüstriyel atıkların deniz ekosistemleri üzerindeki etkilerini değerlendirmek için kullanılır.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Çevre koruma ve araştırma enstitüsünün Loredana Manfra (Çevre Kalitesi İzleme ISPRA-Bölümü) ve Çevre Koruma Bölge Ajansı (Emilia-Romagna, İtalya) Federica Savorelli tarafından hazırlanmıştır. Tuzlu su / Kuyu Suyu ve UNICHIM Komisyonu Su Kalitesi (kimya sektöründe teknik standardizasyon çalışma için enstitusu) Tortu - Biyolojik Yöntemler Grubu içinde Artemia kabuklu üzerine alt çalışma grubu için referans Üyeleri. ISPRA Marco Pisapia (Web Birimi) tarafından Videography ve düzenleme. Anna Maria Cicero ve ISPRA Erika Magaletti (Çevre Kalitesi İzleme Bölümü) tarafından Üretim Koordinasyonu. Tuzlu su / Acı su - Biz Emilia-Romagna Çevre Koruma, Ferrara Şubesi, Biyolojik Yöntemler Grup Bölgesel Ajansı teşekkür etmek istiyorumRossella Boscolo ve mali destek için ISPRA Massimo Gabellini (Önlenmesi ve Etkilerinin Azaltılması Bölümü);; Fabio Matassa ve Londra Su Kalitesi ve Luciana Migliore, onların işbirliği için Tor Vergata Üniversitesi (Roma) üzerine UNICHIM Komisyonu Su ve Sediment kendi dil desteği için Roma&#39;da Yabancı Diller Yüksekokulu.

1. Yöntem Standart Bizim test organizmaların% 50 ölüm (LC 50) 14 gün boyunca maruz neden olacak konsantrasyonu veya seyreltme düzeylerini belirlemek amacıyla madde konsantrasyonları bir aralık veya bir test örneği için Artemia larvaları teşhir ve belirlenen şartlar içerir Bu yöntem. Gerekli ve mümkün olursa, şu da tespit edilebilir: a) maruz kalan organizmaların% 20 (LC 20) ölümüne sebep konsantrasyon seviyesi, b) daha yüksek bir ölüm oranı belirlemek değil, en yüksek analiz konsantrasyon seviyesi Negatif kontrol (NOEC); 14 gün, negatif kontrol (LOEC) daha yüksek bir ölüm oranı sonra, belirler düşük seviyede test edilen konsantrasyon. 2. Test Malzeme 2.1 Artemia yumurtaları Testi gerçekleştirmek için, Artemia Franciscana </emEski az 48 saat&gt; larvaları (nauplii) yeni yumurtadan yumurta 5 elde, evre II ve III de gereklidir. Test desteklemek için kullanılan Sertifikalı yumurta veya kistler, Kalite Güvence Araştırma Bölümü, ABD Çevre Koruma Ajansı, Cincinnati, OH 45268, USA veya Su Kirliliğinin Biyolojik Araştırmalar, Ghent Üniversitesi, Belçika Laboratuvar örneğin ticari olarak kullanılabilir. 2.2 Su seyreltme Sentetik tuzlu kabul analitik kalite reaktifler veya distile veya deiyonize su içinde ticari olarak satılan bir formülasyon çözülmesiyle hazırlanmıştır, seyreltme suyu olarak kullanılabilir. İdeal tuzlu oluşturmak için tuz karışımlarının, ticari olarak mevcuttur, örneğin Instant Ocean karışımları. Bu, 35 (± 2) eşit olan bir tuz ile seyreltme su tavsiye edilir PSU yanı sıra doymuş değerin% 80&#39;den fazla bir çözünen oksijen konsantrasyonuna ve 25 arasında bir sıcaklıkta (± 2) vedeg C. 48 saat ve en azından 0.45 mikron bir gözenek ile filtre filtrelenmesi için havalandırma sonra, seyreltme 0-4 ° C&#39;lik bir sıcaklıkta karanlıkta 30 gün arasında bir maksimum saklanabilir 2.3 Alg kültürü 2.0x10 6 hücre / ml - Bu test organizmaları katlanarak artacak ve 1.3x10 6 yoğunlukları ulaşmak Dunaliella tertiolecta mikroalg, yem, olduğunu önerilir. Çevresel numuneler üzerinde test 2.0x10 6 hücre / ml 6 daha yüksek yoğunluklarda kültür gerektirir. Bu Dunaliella tertiolecta deniz suyu içeren bir kültür ortamında yetişen ileri sürülmektedir (30 (± 2) PSU ve 20 (± 1) ° C) temel besin, mineral ve vitamin ilavesi ile. Alg medya oluşumu ve hazırlık ilişkin bazı göstergeler Ek bildirilmektedir. İlk hücre yoğunluğu yaklaşık 10 5 hücre / ml olması tavsiye edilir. Alg kültür saklanır20 oda termostatı (± 1) ° C, karanlığın 8 saat ışık 16 saatlik bir periyodu oranı ile floresan lambalar 3000 (± 300) lx ile aydınlatılmıştır. Diğer fitoplankton türlerinin de beslenme için kullanılan olabilir ama Dunaliella tertiolecta için &quot;eşdeğer&quot; türler bulmak için bu fitoplankton türleri ile karşılaştırmalı çalışmalar yapmak için gerekli olacaktır, çünkü deneysel koşullar (örn. başlangıç ​​hücresi yoğunlukları, ışık aydınlatma, sıcaklık, bileşimi kültür ortamı ve maruz kalma süresi) fitoplankton türleri arasında değişir. Farklı kirleticiler için microalglerin tolerans düşünülmesi gereken yanı sıra, çünkü aynı zamanda Artemia için fitoplankton etki büyüme ve gelişme üzerindeki kirletici etkileri. 2.4 Referans madde Bu testte referans madde sodyum dodesil sülfat olduğunu. 2.5 Laboratuar cam <ol><li> 100 ml borosilikat cam bardak (18 çözümler aktarılması için test ve 18 gerçekleştirmek için) dahil test kaplar. </li><li> Standart çözelti hazırlamak için bir şişesi (örneğin 500 ml bir şişede). </li><li> Test çözümleri hazırlamak için altı matara (örneğin 200 ml şişeler). </li><li> Çıkarılabilir ile cam veya polistiren 5 cm çapında Petri kutularına kistler aktive ve test kaplara kuluçka çanağına Artemia aktarılması için kullanılmak üzere kapsar. </li><li> Nauplii aktarmak için Cam Pasteur pipetler (alev yuvarlak uçları ile). </li><li> Cam kanüller ve Artemia aktarmak için Pasteur 3 ml tek kullanımlık plastik pipetler (kesilecek). </li><li> Mikropipetler ve dereceli pipetler test çözümleri hazırlamak. </li><li> T matara gelen test çözümleri aktarmak için Altı dereceli silindir (örneğin 50 ml silindirler)O konteyner test. </li></ol> 3. Kist Etkinleştirme 3.1. Kistleri içeren Petri + su dökerek Test organizmalar üretmek için, kistler, 20 mg 48 saat testten önce seyreltme suyun 12 ml içeren bir Petri tabağına yerleştirilir. 3.2. Işık ve karanlık Kuluçka Petri (± 2) 25 tutulur ° C ve 4000 (± 1000) lüks (metre kare başına lümen) bir saat boyunca ışık şiddeti az. 3.3. Mikroskobu kullanılarak orta değiştirilmesi 24 saat sonra, kuluçka larva yapay su ile doldurulur, yeni bir Petri tabağı içine aktarılır. Transferi kuluçkalık, phototropic larvaları ışık demeti doğru göç böylece yani bir ışık kaynağı kullanarak, mikroskop kullanılarak yapılır. Bir cam Pasteur pipeti sadece olgunlaşmamış larvaların ar sağlanması, transferi yapmak için kullanılıre membranlar hala kist ya da larva transfer değil. 3.4. Karanlıkta Kuluçka Larvalar içeren çanağı 25 C&#39;de 24 saat karanlık termostatik haznesi yerleştirilir (± 2) ° C. 4. Test Çözümleri hazırlanması 4.1. Madde Tartı + şişesi transfer Bu test madde için standart çözelti bir 500 ml&#39;lik şişe içinde madde 0.5 g çözülmesi ile hazırlanır tavsiye edilir. Şişeye de-iyonize edilmiş su veya distile su ile doldurulur ve test madde tamamen eriyene kadar çözelti karıştırılır. Çözümlerin bu maddenin çözelti içinde stabil olup olmadığı bilinmemektedir sürece, kullanım sırasında hazırlanması gerekmektedir. Bu durumda, standart bir test çözeltisi iki gün önce kadar hazırlanabilir. 4.2. Seyreltme suyu ve yosun wi ekleyerek, negatif kontrol hazırlanması10 ml pipetle th Negatif kontrol 10 5 hücre / ml &#39;lik bir yoğunluğa elde edilir, böylece su ile seyreltme alg süspansiyonu bir alikot eklenerek bir şişesi (örneğin 200 ml hacim) içinde hazırlanır. 4.3. Test çözümleri Hazırlanması: seyreltme suyu, yosun ve standart çözüm ekleyerek Bu test çözümleri testleri için istenilen konsantrasyonu elde edilir, böylece belirtilen miktarlarda su ile seyreltme, standart çözeltisinin eklenmesi ile beş 200 ml&#39;lik şişeler içerisinde hazırlanır ileri sürülmektedir. Organizmaların beslemek için bir Dunaliella tertiolecta mikroalg süspansiyon alikotları kullanılır ve test çözümleri hazırlanır olduğunda 10 5 hücre / ml bir yoğunluğa ulaşmak için ilave edilebilir. Ek aşağıdaki sırayla önerilir: seyreltme suyu, alg süspansiyon ve standart çözüm. Test çözeltilerinin hazırlanması sonra, kısa sürede ölçüm içinde kullanılabilir olması gerekir. 4.4. Sonra Petri kutuları için, şişesi test kapları çözümler aktarma Test çözümleri eşit miktarlarda (50 ml) oldu silindir kullanılarak test kaplar içine tanıtılır. Her bir konsantrasyonu için üç kopyaları yapılır. Testler, her seri için, bir kontrol testi kabın çözeltilerinin hacmine eşit bir seyreltme bir miktar su ile hazırlanır. Test solüsyonları eşit hacimleri (12 ml) Petri kutularına sisteme dahil edilir. Testler, her seri için, bir kontrol Petri tabağı kullanılır. 5.. Test için hazırlık 5.1. II-III aşamasında nauplii Kist aktif hale kırk sekiz saat, nauplii II-III larva ulaşmak ve test için daha sonra kullanabiliyorsunuz. 5.2. Mikroskop kullanılarak Petri içine nauplii transferi Kist için kullanılan petri<html> aktivasyon termostatik odasının dışına alınır. Larva küçük bir miktar kontrol ve test çözümleri içeren Petri aktarılır. Bu görev organizmaların zarar kalmamak için yeterince geniş çaplı bir pipet kullanılarak mikroskop ile gerçekleştirilen olmaktır. Test Bu aşamada, transferi bir cam Pasteur pipeti (alev yuvarlak uçlu) ve agrega için Artemia teşvik eden bir yanal olarak yerleştirilmiş ışık kaynağı ile yapılabilir. 5.3. Mikroskop ile test kaplara Petri gelen nauplii transferi On larvaları test kaplara test çözümleri Petri kutularına aktarılır. Ayrıca, bu işlem Pasteur pipet ve mikroskop kullanılarak yapılmalıdır. Bu, 1 mL aşmayan bir hacim test sisteminin genel hacmi etkilemediği larvaların geçiş sırasında transfer edilmesi tavsiye edilir. e_step &quot;&gt; 5.4. Tam konteyner parafilm kaplı Test bardak parafilm (hava geçişi için bir boşluk bırakarak) ile kaplı, ve 25 bir sıcaklık (± 2) ° C testi tüm süresi ve 900 (± 100) lx bir aydınlatma bir periyodu ile de korunur karanlığın 10 saat ışık 14 saat arasındaki orandır. 6. Orta ve Gıda Takviyesi Değiştirilmesi 6.1. Yaşama oranı kontrolü Test başladıktan iki gün sonra, ve daha sonra 5, 7, 9 ve 12 gün sonra, Artemia hayatta kalma oranı doğrulamak için ve orta ve gıda ek yerine mikroskop altında görülmektedir. Canlı organizmaların sayısı her test konteyner sayılır. Mikroskop altında gözlem ve hafif mekanik stimülasyonu (örneğin bir cam Pasteur pipeti ile larva dokunmadan) yaklaşık 10 s için bazı hareket görünmüyor organizmalar sonrasaniye basılı tutun ölü düşünülmelidir. 6.2. Mikropipet ile test edilecek maddenin bir 10 ml pipet ve örnekleme ile yosun örnekleme gösteren bir test solüsyonu hazırlanması. Şişesi test kapları çözümler aktarma Test sırasında, test çözümleri periyodik olarak değiştirilmesi ve bunlar kullanılacaksa aynı gün içinde hazır olmalıdır. Test solüsyonları, önceden hazırlanmış standart bir çözüm yapılır. Üç yeni konteyner eski testi kapları 6.3. Artemia transferi, bir kesim Pasteur pipeti kullanarak, Artemia&#39;nın transferi şekilde organizmalar zarar vermemek için yeterince geniş bir çapa sahip bir pipet kullanılarak gerçekleştirilir. Bu faz esnasında, bir 3 ml plastik Pasteur pipetle (kesilecek) kullanılabilir. 6.4. Ya canlı ya da ölü Artemia içeren bir cam kapta Larva 1 sonra<html> Test sonunda maruz kalma 4 gün, larvaların hayatta kalma sayısı sayılır ve çalışma kaydedilir. LC 50 ve / veya LC 20, NOEC ve 14. günlerde LOEC, hesaplanır ve kaydedilir, yanı sıra güven aralığı% 95, uygun ve hesaplama yöntemleri de. 7. Temsilcisi Sonuçlar Testi (14 gün) sonunda, aşağıdaki formüle göre, her bir konsantrasyonda ölüm yüzdesi hesaplanır: (M s / N) * 100 Nerede: M s analiz örnek ölen kişilerin ortalama sayısı N maruz kalan bireylerin toplam sayısı Tablo 1 Sodyum dodesil sülfat maruz Artemia ile bir test (14d) veri bir örnektir. <table border="1"><tbody><tr><td> Konsantrasyonlar (mg / l) </td>&quot;Her çoğaltma ölen bireylerin&gt; Numara </td><td> Mortalite (%) </td></tr><tr><td></td><td> Ben </td><td> II </td><td> III </td><td></td></tr><tr><td> Negatif kontrol </td><td> 0 </td><td> 2 </td><td> 1 </td><td> 10 </td></tr><tr><td> 1.56 </td><td> 1 </td><td> 2 </td><td> 0 </td><td> 10 </td></tr><tr><td> 3.12 </td><td> 2 </td><td> 0 </td><td> 2 </td><td> 13 </td></tr><tr><td> 6.25 </td><td> 3 </td><td> 2 </td><td> 3 </td><td> 27 </td></tr><tr><td> 12.5 </td><td> 8 </td><td> 9 </td><td> 10 </td><td> 90 </td></tr><tr><td> 25.0 </td><td> 10 </td><td> 10 </td><td> 10 </td><td> 100 </td></tr><tr><td> 50.0 </td><td> 10 </td><td> 10 </td><td> 10 </td><td> 100 </td></tr></tbody></table> Dahası, belirlemekGrafiksel bir Gauss logaritmik arsa veya uygun istatistiksel yöntemler (örneğin Spearman-Karber veya Probit Yöntemi için) kullanılarak LC 50 değeri. Tablo 1 ve veriler için LC 50 hesaplanması 8,18 (7,15-9,37) mg / l&#39;dir. Maksimum konsantrasyon% 50 daha düşük bir ölüm oranı neden Sınanan varsa, o güvenilmez, hatta olmayan hesaplanabilir olurdu LC 50 değeri hesaplamasına devam etmemelisiniz. Bu durumda, bununla birlikte, test edilen konsantrasyon aralığı genişleterek testi tekrarlamak üzere uygun olacaktır. Alternatif olarak, LC 50 değeri daha doğru bir olasılıkla test edilen en yüksek konsantrasyonda ölüm oranı ve bir etkisi yoktur karşılık gelen yüksek konsantrasyon gösteren, test edilen en yüksek konsantrasyonda daha büyük olarak ifade edilir. Aşağıdaki test koşulları sonunda yerine getirildiği takdirde Sonuçlar geçerli kabul edilir: <ol class="lalpha"><li> kontrolü ortalama mortalite oranı≤% 20; </li><li> 14 gün için sodyum dodesil sülfat, LC 50 kullanılarak 8.0 (± 5) mg / l aralığında yer alır burada. </li></ol> Yukarıdaki şartlar yerine getirilmiş değil, organizmaların aynı parti ile elde edilen tüm veriler geçersiz kabul ve test tekrarlanmalıdır.

<ol><li>Togulga, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Short-Term+Toxicity+of+Two+Toxicants+to+Artemia+Nauplii%5BTitle%5D)+AND+%22Tr.+J.+of+Zoology%22%5BJournal%5D)">The Short-Term Toxicity of Two Toxicants to Artemia Nauplii.</a> Tr. J. of Zoology. 22, 259-266 (1998).</li>
<li>Persoone, G., Wells, P. G. Artemia in aquatic toxicology: a review. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aPersoone%2C+G+%22Artemia+Research+and+its+Applications.+Morphology%2C+Genetics%2C+Strain+characterization+Toxicology%22">Artemia Research and its Applications. Morphology, Genetics, Strain characterization Toxicology</a>. Sorgeloos, P. , Universita Press. Belgium. 259-275 (1987).</li>
<li>Nunes, B. S., Carvalho, F. D., Guilhermino, L. M., Stappen, G. V. an <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Use+of+the+genus+Artemia+in+ecotoxicity+testing%5BTitle%5D)+AND+%22Envir.+Poll%22%5BJournal%5D)">Use of the genus Artemia in ecotoxicity testing.</a> Envir. Poll. 144, 453-462 (2006).</li>
<li>APAT IRSA-CNR. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22Metodi+analitici+per+le+acque+Manuali+e+Linee+guida+29%2F2003%22">Metodi analitici per le acque Manuali e Linee guida 29/2003</a>. Terzo Metodo, 8060(2003).</li>
<li>Sorgellos, P., Wielen, C. R. emiche-V. anD. er, Persoone, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+use+of+Artemia+nauplii+for+toxicity+tests+%C3%A2%E2%82%AC%E2%80%9C+a+critical+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Ecotox.+Env.+Saf%22%5BJournal%5D)">The use of Artemia nauplii for toxicity tests â€“ a critical analysis.</a> Ecotox. Env. Saf. 2, 249-255 (1978).</li>
<li>Savorelli, F., Palazzi, D., Gorbi, G., Invidia, M., Sei, S., Magaletti, E., Manfra, L., Gelli, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Set+up+of+a+standard+methodology+for+14-day+bioassay+on+Artemia+franciscana+and+A.+parthenogenetica%5BTitle%5D)+AND+%22Biol.+Amb%22%5BJournal%5D)">Set up of a standard methodology for 14-day bioassay on Artemia franciscana and A. parthenogenetica.</a> Biol. Amb. 21, 27-36 (2007).</li>
<li>Brix, K. V., Cardwell, R. D., Adams, W. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chronic+toxicity+of+arsenic+to+the+Great+Salt+Lake+brine+shrimp%2C+Artemia+franciscana%5BTitle%5D)+AND+%22Ecotox.+Environ.+Saf%22%5BJournal%5D)">Chronic toxicity of arsenic to the Great Salt Lake brine shrimp, Artemia franciscana.</a> Ecotox. Environ. Saf. 54, 169-175 (2003).</li>
<li>Brix, K. V., Deforest, D. K., Cardwell, R. D., Adams, W. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Derivation+of+a+chronic+site-specific+water+quality+standard+for+selenium+in+the+Great+Salt+Lake%2C+Utah%2C+USA%5BTitle%5D)+AND+%22Environ.+Toxicol.+Chem%22%5BJournal%5D)">Derivation of a chronic site-specific water quality standard for selenium in the Great Salt Lake, Utah, USA.</a> Environ. Toxicol. Chem. 23, 606-612 (2004).</li>
<li>Qualitá dell'acqua - Determinazione della tossicitá letale a 14 giorni con Artemia franciscana (Crustacea: Anostraca). <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22Commissione+UNICHIM+%22Qualit%C3%A1+dell%27acqua%22+Gruppo+di+Lavoro+%22Metodi+Biologici%22+Sottogruppo+%22Acque+salate%2Fsalmastre+e+sedimenti%22%22">Commissione UNICHIM "Qualitá dell'acqua" Gruppo di Lavoro "Metodi Biologici" Sottogruppo "Acque salate/salmastre e sedimenti"</a>. , UNICHIM. (2010).</li>
<li>Varo, I., Navarro, J. C., Amat, F., Guilhermino, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterisation+of+cholinesterases+and+evaluation+of+the+inhibitory+potential+of+chlorpyrifos+and+dichlorvos+to+Artemia+salina+and+Artemia+parthenogenetica%5BTitle%5D)+AND+%22Chem%22%5BJournal%5D)">Characterisation of cholinesterases and evaluation of the inhibitory potential of chlorpyrifos and dichlorvos to Artemia salina and Artemia parthenogenetica.</a> Chem. 48, 563-569 (2002).</li>
</ol>

Çıkar çatışması ilan etti.

Artemia bize Toksikoloji ve Ekotoksikoloji içinde Artemia kullanımı ile ilgili çeşitli seçenekler sürdürmek mümkün olduğunu ifade sağlar şimdiye kadar yapılan ecotoxıcıty test ve araştırma için mevcut en değerli test organizmaları biridir. Biyoanalizlerin için uygun bir tür olarak bu organizmanın açmak özellikleri şunlardır: Geniş bir coğrafi dağılımı, olumsuz çevre koşulları ve çeşitli besin maddeleri, nispeten basit laboratuvar kültür ve bakım, manipülasyona karşı direnç, kısa yaşam döngüsü, büyük ya...

Çevre koruma ve araştırma enstitüsünün Loredana Manfra (Çevre Kalitesi İzleme ISPRA-Bölümü) ve Çevre Koruma Bölge Ajansı (Emilia-Romagna, İtalya) Federica Savorelli tarafından hazırlanmıştır. Tuzlu su / Kuyu Suyu ve UNICHIM Komisyonu Su Kalitesi (kimya sektöründe teknik standardizasyon çalışma için enstitusu) Tortu - Biyolojik Yöntemler Grubu içinde Artemia kabuklu üzerine alt çalışma grubu için referans Üyeleri. ISPRA (Bilimsel Danışma ve Dokümantasyon Hizmetleri) Marco Pisapia tarafından Videography ve düzenleme. Anna Maria Cicero ve ISPRA Erika Magaletti (Çevre Kalitesi İzleme Bölümü) tarafından Üretim Koordinasyonu. Biz, Emilia-Romagna Çevre Koruma Bölge Ajansı teşekkür Ferrara Şubesi ve Biolog istiyorumical Yöntemleri Grubu - Tuzlu / Kuyu Suyu ve onların işbirliği için Su Kalitesi Üzerine UNICHIM Komisyonu Tortu; Rossella Boscolo ve mali destek için ISPRA Massimo Gabellini (Önlenmesi ve Etkilerinin Azaltılması Bölümü) ve Roma&#39;da Diller London School of kendi dil desteği. <table border="1"><tbody><tr><td> Reaktif Adı </td><td> Şirket </td><td> Ürün numarası </td></tr><tr><td> Sodyum dodesil sülfat </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> L4390 </td></tr></tbody></table> Ek Alg medya analitik kalite reaktifler kullanılarak hazırlanmalıdır. Besin solüsyonu bir litre NaNO 3, damıtılmış su içinde NH4CI ile KH 2 PO 4 ve 20 g, 30 g, 300 g çözülerek hazırlanır. Dört başlangıç ​​çözümleri (A, B, C, DMineral) şu şekilde hazırlanır: <ul><li> Çözeltisi bir litre &quot;A&quot; CuSO 4 ZnSO 4 H2O, 25 g 5 H2O, COSO 4 7 H2O ile 30 g saf su içinde MnSO 4 H2O ile 20 g, 30 g ihtiva eden; </li><li> Çözeltisi bir litre damıtık su içerisinde FeCl 3 • 6 H2O ile 50 g içeren &quot;B&quot;; </li><li> Çözeltisi bir litre damıtık su içerisinde 2 Na Moo 4 • 2 H2O ile 25 g içeren &quot;C&quot;; </li><li> Çözeltisi distile su içinde 50 g di Na 2 EDTA • 2 H 2 O içeren &quot;D&quot; Bir litre. </li></ul> Minerallerin (solüsyonu &quot;E&quot;) bir nihai çözelti bir litre damıtık su ile yukarıda bahsedilen çözeltilerinin alikotları ekleyerek elde edilir. Ayrıca, aşağıdaki için tavsiye edilir: solüsyonu &quot;D&quot;, 100 ml, çözelti 10 ml &quot;C&quot;, çözelti &quot;B&quot; ve 10 ml ve 10 ml çözelti, &quot;A&quot;. Üç inisiyatifvitaminler l çözeltileri (F, G, H) şu şekilde hazırlanır: <ul><li> Çözeltisi bir litre damıtık su içerisinde biotin 100 mg içeren &quot;F&quot;; </li><li> ; Distile su içinde tiamin 10 g içeren çözelti &quot;G&quot; nin bir litre </li><li> Çözeltisi distile su içinde kobalamin 100 mg içeren &quot;H&quot; bir litre. </li></ul> Vitaminler (solüsyonu &quot;I&quot;) bir nihai çözelti bir litre damıtık su ile üç başlangıç ​​çözeltilerinin 10 ml ekleyerek elde edilir. Alg bir ortam litrelik besin solüsyonu, mineral nihai çözelti (solüsyonu &quot;E&quot;) ve deniz suyu vitamin nihai çözelti (solüsyonu &quot;I&quot;) ve 1 ml 1 ml 1 ml çözülmesiyle hazırlanmıştır. Bu ikinci kabul analitik kalite reaktifler veya distile veya deiyonize su içinde ticari olarak satılan bir formülasyon çözülmesi ile elde edilebilir. İdeal tuzlu oluşturmak için tuz karışımlarının, ticari olarak mevcuttur, örneğin Instant Ocean karışımları. Ülkemizde yapılan bir30 tuzluluk (± 2) PSU ve 20 sıcaklık (± 1) ° C ile deniz suyu kullanarak ded

kabuklu uzun vadeli lethal toksisite testi artemia franciscana</em

Long-term Lethal Toxicity Test with the Crustacean Artemia franciscana

Bizim araştırma faaliyetleri tuzlu / acı su ve tortu özel referans ile, çevre kalitesinin değerlendirilmesi için biyolojik yöntemlerin kullanılmasını hedefliyoruz. Biyolojik göstergelerin seçimi standart prosedürlerin kullanılabilirliği, muhtemelen, güvenilir bilimsel bilgiye dayalı ve olmalıdır. Bu yazıda, kimyasal ve / veya deniz çevresel matrislerin toksisitesini değerlendirmek için deniz kabuklu Artemia kullanılan standart bir protokol mevcut. Bilim adamları, tuzlu su karidesi (artemia) dünya çapında kullanım için standart biyoassay gelişimi için uygun bir aday olduğunu öneriyorum. Kağıtları bir dizi tuzlu su karidesi (artemia) çeşitli kimyasallar ve toksik maddelerin toksik etkileri üzerine yayınlanmıştır. Toksisite çalışmaları için bu canlıya en büyük avantajı, kuru kistler genel durumu ise; bu hemen test kullanılabilir ve zor ekimi talep edilmez <sup&gt; 1,2. Kist tabanlı toksisite testlerinin ucuz, kesintisiz, kolay ve güvenilir ve endüstriyel kontrol gereksinimleri için veya düzenleyici amaçlarla 3, böylece toksisite tarama rutin ihtiyaçlarına önemli bir cevaptır. Önerilen yöntem, bir nokta olarak ölüm içerir. Hayatta kalanların numaraları sayıldı ve ölüm oranı hesaplandı. Gözlem 4 birkaç saniye içinde herhangi bir iç veya dış hareket sergilemek vermedi Larva ölü kabul edildi. Bu işlem bir referans madde (Sodyum dodesil sülfat) standart test idi; bazı sonuçlar bu çalışmada rapor edilmiştir. Bu makale, protokole ilgili tüm adımları gösteren, usul toksisite test performansını açıklayan bir video eşlik eder.

Bu çalışmada, kimyasal maddeler, endüstriyel atık su veya kanalizasyon ve tuzlu kabuklu sıvı çevresel örneklerde tarafından uygulanan uzun vadeli (14 gün) ölümcül toksisite belirlemek için değerli bir metodolojik protokolünün geliştirilmesi ve standardizasyonu ile ilgilidir<em&gt; Artemia Franciscana</em&gt;.

Kabuklu uzun vadeli Lethal Toksisite Testi Artemia Franciscana</em

Araştırma faaliyetlerimiz, özellikle tuzlu/acı suları referans alarak, çevresel kalitenin değerlendirilmesi için biyolojik yöntemlerin kullanımını hedeflemektedir...

Bizler, Çevresel Koruma ve Araştırma Yüksek Enstitüsü (ISRA), Fitoplankton, Ekotoksikoloji ve Ekolojisi Çevresel Kalite İzleme Laboratuvarı bölümünden araştırmacılar Laura Manfra ve Federica Selli'yiz. Araştırma faaliyetlerimiz, özellikle tuzlu su, acı su ve sedimentlere yönelik olarak çevresel kalitenin değerlendirilmesinde biyolojik yöntemlerin kullanımını hedeflemektedir. Son çalışmamız; kimyasal maddeler, endüstriyel atıklar, atık sular, kanalizasyon ve sıvı çevresel örneklerin tuzlu su kabuklusu *Artemia franciscana* üzerinde uyguladığı 14 günlük uzun süreli letal toksisiteyi belirlemek için değerli bir metodolojik protokolün geliştirilmesi ve standardize edilmesi hakkındadır.Bu video, prosedürel toksisite testinin gerçekleştirilmesini açıklamaktadır. Testimiz, 14 gün boyunca maruz kalan organizmaların %50'sinin ölümüne neden olacak konsantrasyon veya dilüsyon seviyelerini ve bu yöntem tarafından tanımlanan koşulların karşılanmasını belirlemek amacıyla, artia larvalarının bir dizi madde konsantrasyonuna veya bir test örneğine maruz bırakılmasını içerir. Gerektiği ve mümkün olduğu durumlarda, aşağıdaki parametreler de belirlenebilir.Organizmaların %20'sinin ölümüne neden olan konsantrasyon seviyesi, negatif kontrolden daha yüksek bir mortalite oranı belirlemeyen analiz edilen en yüksek konsantrasyon seviyesi ile 14 gün sonra negatif kontrolden daha yüksek bir mortalite oranı belirleyen test edilen en düşük konsantrasyon seviyesi arasındaki değerdir. Testlerin gerçekleştirilmesi için ekibimizin, yeni çatlamış yumurtalardan elde edilen, ikinci veya üçüncü evredeki 48 saatten daha küçük Franciscan larvalarına ihtiyacı vardı. Dilüsyon suyu olarak, tanınmış analitik kaliteye sahip reaktifleri veya ticari olarak mevcut bir formülasyonu distile veya deiyonize su içerisinde çözerek hazırlayacağınız sentetik tuzlu suyu kullanabilirsiniz.48 saatlik inkübasyon ve en az 0,45 µm gözenekli filtrelerle filtrasyonun ardından, dilüsyonu karanlıkta maksimum 30 gün boyunca saklayabilirsiniz. 4 °C sıcaklıkta, 1,3 × 10⁶ ile 2,0 × 10⁶ hücre/mL arasındaki yoğunluklarda eksponansiyel olarak büyüyen Ella Ter mikroalglerini test organizmaları olarak beslemelisiniz. Bu testteki referans madde sodyum dodesil sülfattır.Standart laboratuvar ekipmanlarına ek olarak, şu test kaplarına da ihtiyacınız olacaktır: standart çözeltiyi hazırlamak için 100 milimetrelik borosilikat cam beherler, 500 milimetrelik balon joje, test çözeltilerini hazırlamak için altı adet 100 milimetrelik balon joje, kistleri aktive etmek ve artia'ları kuluçka kabından test kaplarına aktarmak için çıkarılabilir kapaklı, beş santimetre çapında cam veya polistiren Petri kapları. Noli'leri aktarmak için uçları alevle yuvarlatılmış cam pasta pipetler veya kesilerek kullanılacak üç milimetrelik tek kullanımlık plastik pipetler; test çözeltilerini hazırlamak için mikropipetler ve dereceli pipetler. Test çözeltilerini balon jojelerden test kaplarına aktarmak için altı adet 50 milimetrelik mezür; test organizmalarını üretmek için.Testten 48 saat önce 20 miligram kisti, 12 mililitre seyreltme suyu içeren bir Petri kabına koyun. Kabı 25 derece sıcaklıkta ve metrekareye 4.000 lümen ışık şiddetinde bir saat boyunca tutun. 24 saat sonra, açılan larvaları yapay suyla doldurulmuş yeni bir Petri kabına aktarın.Kuluçkadan çıkan fototropik larvaların ışık huzmesine doğru göç etmesini sağlamak için transfer işlemini ışık kaynağı kullanan bir mikroskop altında gerçekleştirin. Transferi yaparken sadece yeni çıkan larvaları aktardığınızdan, kistlerin kendisini veya hala membranlar içindeki larvaları aktarmadığınızdan emin olmak için cam pastur pipeti kullanın. Larvaları içeren kabı 25 °C sıcaklıktaki karanlık bir termostatik hazneye 24 saat daha yerleştirin.Test maddesi için standart çözelti, maddeden yarım gramın 500 mililitrelik bir balonda çözülmesiyle hazırlanmalıdır. Deiyonize veya distile su ile tamamlayın ve tamamen çözünene kadar karıştırın. Maddenin çözelti içinde stabil olup olmadığını bilmiyorsanız, çözeltiler kullanım anında hazırlanmalıdır.Bu durumda, standart çözeltiyi testten iki gün öncesine kadar hazırlayabilirsiniz. Negatif kontrolü, seyreltme suyuna uygun miktarda alg süspansiyonu ekleyerek 200 mililitrelik bir balon jojede, 10⁵ hücre/mL yoğunluk elde edecek şekilde hazırlamalısınız. Test çözeltileri, standart çözeltinin seyreltme suyuna belirtilen miktarda eklenmesiyle, test için istenen konsantrasyonlar elde edilecek şekilde 5 ila 100 mililitrelik balon jojelerde hazırlanmalıdır.Organizmaları beslemek için, test çözeltilerini hazırlarken 10⁵ cells/mL yoğunluğa ulaşana kadar duna teta mikroalg süspansiyonu kullanmalısınız. Ancak başlamadan önce, şu ekleme sırasını takip etmenizi öneririz: seyreltme, su, alg süspansiyonu ve ardından standart çözelti. Mezür kullanarak test kaplarına eşit miktarlarda, 50 mL test çözeltisi aktarın.Her bir test serisinin her bir konsantrasyonu için üç replika hazırlayın. Test çözeltilerinin hacmine eşit miktarda seyreltme suyu içeren bir kontrol kabı hazırlayın. Petri kaplarına yaklaşık 12 mililitre olacak şekilde eşit hacimlerde test çözeltileri ekleyin.Her bir test serisi için bir kontrol Petri kabı hazırlayın. Kist aktivasyonundan 48 saat sonra, nly ikinci ve üçüncü larva evrelerine ulaşmış olacak ve artık testler için kullanılabilir hale gelecektir. Kist aktivasyonu için kullandığınız Petri kabını termostatik bölmeden çıkarın.Kontrol ve test çözeltilerini içeren Petri kaplarına küçük miktarda larva aktarın. Testin bu aşamasında, aktarımı ucu alevle yuvarlatılmış bir cam pastur pipeti ve artia'ların kümelenmesini teşvik eden yan konumlandırılmış bir ışık kaynağı ile gerçekleştirebilirsiniz. Test çözeltilerinden 10 larva aktarın.Petri kaplarını test kaplarına aktarın. Ayrıca, bu işlemi önceden kullanılan pipet ve mikroskop lamı ile gerçekleştirin; test beherlerini, hava geçişi için bir boşluk bırakacak şekilde parafilm ile kapatın ve test süresince 25 °C sıcaklıkta tutun. Testin başlangıcından iki gün sonra, 14 saat ışık ve 10 saat karanlık şeklinde belirlenmiş fotoperiyot oranında, metrekare başına 900 lümen aydınlatma sağlayın.Ardından 5, 7, 9 ve 12 gün sonra, artia'ları mikroskop altında gözlemleyin ve hayatta kalma oranlarını doğrulayın. Besiyerini yenileyin ve gıda takviyesi yapın; yaklaşık 10 saniye boyunca herhangi bir hareket sergilemeyen organizmalar test sırasında ölü olarak kabul edilmelidir, test sırasında test çözeltilerini periyodik olarak yenilemeli ve bunları kullanılacakları gün hazırlamalısınız. Test çözeltilerini periyodik olarak yenilemeli ve bunları kullanılacakları gün hazırlamalısınız.Daha önce hazırladığınız standart çözeltiyi kullanarak test çözeltilerini hazırlayın. Bu aşamada organizmalara zarar vermemek adına, yeterince geniş çaplı bir EPI PET ile ARTIA transferini gerçekleştirin. 14 günlük maruziyet süresinden sonra kesilecek şekilde, üç milimetrelik plastik poster boru pett kullanabilirsiniz.Test sonunda hayatta kalan larva sayısını belirleyin ve sonucu çalışma sayfanıza kaydedin. 14. gündeki LC 50 ve/veya LC 20, NOEC ve LOEC değerlerini hesaplayın ve raporlayın. %95 güven sınırları ve hesaplama yöntemleri uygundur.Testlerin sonunda aşağıdaki koşullar karşılanmışsa; kontrol grubunun ortalama mortalite oranı %20'den az veya eşitse, sodyum dodekil sülfat kullanıldığında 14 günlük LC50 değeri 8,0 mg/L aralığında yer alıyorsa test geçerlidir. Eğer belirtilen koşullar karşılanmamışsa, aynı organizma partisiyle elde edilen tüm veriler geçersiz sayılmalı ve test tekrarlanmalıdır.

long-term-lethal-toxicity-test-with-the-crustacean-artemia-franciscana

Research

JoVE Journal

Biology

Biyoloji

Bu video, akut toksisite tedavisini test eden veya genetik bir suşu toksik bir duruma direnç açısından test eden kısa süreli bir sağkalım testini tanıtmaktadır. Örnek protokol, solucanların paraquat (PQ) tarafından indüklenen oksidatif strese direnme yetenekleri açısından test edildiği örnek bir hayatta kalma testini göstermektedir.

C. elegans Hayatta Kalma Testi: Kısa Süreli Bir Toksisite Testi

Model organizma Caenorhabditis elegans'ta mitokondriyal inhibitörlerin etkilerinin in vivo tespiti ve potansiyel arttırıcı bileşiklerin tanımlanması için bir protokol tanımlanmıştır. Bu protokol, mitokondriyal fonksiyonu modüle eden bileşikler için ilaç kütüphanelerini taramak için kullanılabilir.

Bir taranabilir<em&gt; İn Vivo</em&gt; Transjenik biyolojik olarak ışık veren kullanarak Mitokondriyal Modülatörleri için tahlil<em&gt; Caenorhabditis elegans</em

Çevre toxicants maruz akut geliştirme uzun vadeli etkileri ile etkileyebilir. Detaylı iletişim kuralları Bisfenol A. için erken embriyonik pozlama etkisini incelemek için bir etkili lab modelini kullanarak bir strateji göstermek için sağlanan Sağladığımız verimlilik ve bizim yaydıkları pozlama biyo-deneyleri etkinliğini izlemek için davranışsal deneyleri.

Embriyonik maruz kalma düşük doz Toxicants uzun vadeli davranış ve üreme sonuçları

Bu çalışmada, akut, kronik ve multigenerational bir bioassay turkuaz killifish Nothobranchius furzeritek ve kombine stresler etkilerini çalışmaya açıklar. Bu iletişim kuralı hayat-Tarih özellikleri (ölüm, büyüme, verimlilik, ağırlık) ve kritik termal maksimum çalışma için tasarlanmıştır.

Akut ve kronik Ecotoxicity test turkuaz Killifish Nothobranchius furzeri için iletişim kuralı

Bu iletişim kuralı, biz Astyanax mexicanus yetişkin doğurmak, larvalar yükseltmek nasıl gösterir ve bütün Dağı immünhistokimya yüzey fenotipleri karşılaştırmak ve morphotypes mağara sonrası larva balık gerçekleştirin.

Meksika Tetra Astyanax mexicanus analiz Post-larval fenotipleri ve bütün Dağı immünhistokimya için yetiştirme

Zebra balığı embriyoları kimyasal bileşiklerin toksisitesini değerlendirmek için kullanılır. Onlar harici geliştirmek ve kimyasallara duyarlı, ince phenotik değişikliklerin tespitine izin. Deney sadece doğrudan embriyo içeren plaka eklenir bileşik küçük bir miktar gerektirir, test sistemi verimli ve maliyet-etkin hale.

Zebrabalığı Embriyoları Kullanılarak Kimyasal Bileşiklerin Toksisitesinin Hızlı Değerlendirilmesi

Bu çalışma, tuzlu su karides öldürücülük testi olarak da tanımlanan Artemia salina öldürücülük biyotahlil prosedürünü değerlendirmeyi ve gözden geçirmeyi amaçlamaktadır. Bu basit ve ucuz yöntem, numunelerin, yani doğal ürünlerin genel toksisitesi (ön toksisite değerlendirmesi olarak kabul edilir) hakkında bilgi verir.

Artemia salina L. Kullanarak Öldürücülük Biyotahlili

Burada, yaşam boyu fizyolojik parametre takibi ve floresan ölçümü için katı ortam üzerinde izole edilmiş bireysel nematodların kültürlenmesine yönelik bir protokol sunuyoruz. Bu kültür sistemi, hayvanların kaçmasını önlemek için tek solucan kuyularının etrafında bir palmitik asit bariyeri içerir ve patojenik bakteriler ve kimyasal stresörler de dahil olmak üzere önleyici müdahalelerin kullanılmasına izin verir.

Uzunlamasına floresan izleme ve aversif müdahaleler için katı ortam üzerinde bireysel caenorhabditis elegans'ın uzun süreli kültürü

Makale, Mytilus galloprovincialis hemositlerinin motilitesine dayalı olarak kirleticilerin toksisitesinin ve ekotoksisitesinin hızlı ve hassas bir şekilde değerlendirilmesi için yeni bir in vitro yöntem önermektedir. Yöntem, daha etik ve hassas toksikolojik ve ekotoksikolojik maruziyet testlerinin geliştirilmesine katkıda bulunmayı amaçlamaktadır.

Midye (Mytilus galloprovincialis) Hemosit Motilitesine Dayalı Toksikolojik ve Ekotoksikolojik Bir Test

Bu protokol, zebra balığı larvalarında döllenmeden 3-7 gün sonra bir ilaç tarama prosedürünü ve ardından morfolojik değerlendirmeyi tanımlar.

Erken Evre Zebra Balığı Larvalarında Küçük Molekül Taraması ve Toksisite Testi

Öğrenin Artemia franciscana üzerinde 14 günlük uzun vadeli ölümcül toksisite testi protokolünü. Bu yöntem kimyasal maddelerin ve endüstriyel atıkların deniz ekosistemleri üzerindeki etkilerini değerlendirmek için kullanılır.

Kabuklu uzun vadeli Lethal Toksisite Testi Artemia Franciscana

Daha fazla video keşfet