Name: Test için Yöntemler Drosophila Davranış (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-03-07T13:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 14 s
Description: Keşfedin Drosophila motor fonksiyon ve koordinasyon davranışlarını değerlendiren yöntemleri. Sürünme, halka ve kur yapma testleri genetik faktörleri incelemek için kullanılır.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Biz larva tarama verilerinin üretilmesi için Astha Maltare teşekkür etmek istiyorum. Biz el yazması üzerine yaptığı yorum vermek için Dr Nicholas Lanson Jr teşekkür etmek istiyorum. Bu çalışma Johns Hopkins ALS Robert Packard Merkezi (UBP) ve Amyotrofik Lateral Skleroz Derneği (UBP) tarafından desteklenen ve Ruh Sağlığı Ulusal Enstitüsü (CDN) den R01MH083689.

A. Larva sürünüyor Testi 1. Larva Koleksiyonu <ol><li> Sinekler (10-15 erkek + 10-15 kadın) bir 8 ons şişe ayarlayın. </li><li> Sinekler sonra 24 saat boyunca yumurta, sineklerin net şişe inşa edelim. (Yeni bir şişeye aktarın ve yetişkinlerin uygun şekilde tekrarlayınız). </li><li> 3-4 gün inkübe şişe, ya da üçüncü evre larvaları görünür olana kadar. </li><li> Larvaları ile şişeye% 20 sakkaroz, 100 ml ve 20 dakika bekletin - 50 ekleyin. Larva başına yüzer. </li><li> Uçlu bir 25 ml serolojik pipet kullanarak toplayın larva kesti ve bir mesh sepet içine yer. </li><li> Iki kez deiyonize H 2 O ile örgü sepet içinde larva yıkayın Larva artık deneyler için hazır. </li></ol> 2. Ilaç ile larva tedavisi için <ol><li> Bir çözüm% 5 sakkaroz + ilaç içeren 5 ml&#39;lik behere larva İstediğiniz numaraya taşımak için bir fırça kullanın. </li><li> En azından 15 dakika süreyle larvaları besleme sağlar.</li><li> Bir örgü sepet içine ilaç ile tedavi edilen larva dökün ve durulayın. Onlar artık kullanıma hazır. </li></ol> 3. Lokomotor Assay (toplam mesafe ölçme seyahat veya vücut duvarı kasılmaları) <ol><li> Bir tek tek larva taşımak için bir fırça kullanın: <ol><li> 0,2 cm 2 ızgara ile milimetrik kağıt üzerinde% 2 agaroz (daha önce dökülür ve sertleşmesine izin) içeren 15 cm Petri. <ol><li> 1 dakika içinde geçti çizgileri sayısını sayın. </li></ol></li><li> Seyreltilmiş maya hamur çözeltisi içeren bir cam diseksiyon çanağı iyi. <ol><li> Bir diseksiyon mikroskobu altında gözlemlerken bir dakika içinde peristaltizm kasılmalar (posterior hareketi = 1 daralma tam anterior) sayın. </li></ol></li></ol></li><li> Larva istenilen sayıda sayılmış kadar tekrarlayın. </li></ol> B. Hızlı negatif geotaxis (HALKA) Protokol iteratif Bu test aslında kaldırdığımızda edildiGargano ark 5 tarafından tarif edildiği. <ol><li> Standart bir flakon içeren yiyecekler (veya gıda + ilaç) içine ışık CO 2 anesthetization ve yer altında yeni ortaya çıkan yetişkin erkek sinekleri toplayın. </li><li> Oda sıcaklığında sinekler Koru (tezgah üstünde. ~ 22 ° C) CO 2 kurtarma (ve kararlı durum ilaç düzeyleri birikimi uygunsa) izin vermek için 2-3 gün. </li><li> Hazırlanan polistiren şişelere anestezi olmadan 25 sinekler hakkında aktarın. </li><li> HALKA aparatı (Şekil 1) içine sinekler şişeleri birleştirin. </li><li> Sinekler 15-20 dakika boyunca rahatsız edilmeden çevre, gelmesini bekleyin. </li><li> Bu süre yerde dijital kamera sırasında ~ cihazları önünde 1 m (bir platform flakon orta yükseklikte lensin merkezine hizalamak için gerekirse üzerine), odaklanma ve aparat üzerine kamera, zum ve bir zamanlayıcı ayarlamak 3.0 saniye. </li><li> Dikkatle dist için sol elinizle HALKA aygıtının tutun şekilde alamayızurb sinekler ve sağ elinizle zamanlayıcı tutun. </li><li> Keskin musluk şişe altına tüm sinekler yıkmak yeterince zor sağlanması, tezgah yüzeyinin üç kez aparatı aşağı dokunun. </li><li> Aynı zamanda üçüncü kademe tamamlanması ile birlikte, 3 saniyelik geri sayım sayacını başlatmak. </li><li> Üç saniyede bir resim çekin. </li><li> 1 dakika zamanlayıcı sıfırlayın ve başlayın. Bu süre boyunca cihaz üzerindeki kamera ve odak sıfırlamak ve üç saniye sayacı başka bir kanala ayarlayın. </li><li> 1 dakika sonra tekrar 1,7-1,10 adımlar </li><li> 5-6 denemenin toplamı sonra, bir bilgisayara resim yüklemek ve açmak için favori resim görüntüleyici kullanın ve ortalama yüksekliği her flakon için tırmandı puan. </li><li> Tırmandı ortalama yüksekliği karşılaştırırken, farklı grup üzerinde istatistiksel analiz. </li></ol> C. Kur yapma ve çiftleşme Testi <ol><li> Sabah ilk iş, fli net iyi üreten şişeleres kullanılır. </li><li> Gün içerisinde (her 3-4 saat) içinde, yeni ortaya çıkan cinsel naif erkek ve kadın toplamak: <ol><li> Orta şişelerde veya tüpleri tek tek erkeklerde yerleştirin. </li><li> Şişe / tüp başına birlikte 5-6 dişi koyun. </li><li> 5 gün boyunca karanlık 12 saat ışık altında / 25 ° C &#39;de toplanan sinekler kesin. </li><li> Bir çiftleşme tekerleğin odasına bir kadın aktarın. </li><li> Bir çiftleşme tekerleğin odasına bir erkek aktarın. </li><li> Aşağıdaki davranışlardan bir diseksiyon mikroskobu altında çifti gözlemleyin: <ol><li> Oryantasyon (kadın doğru erkek yönlendirir) </li><li> (Erkek kadın yararlanıyor) dokunulduğunda </li><li> Kanat şarkı (erkek genişletir ve bir kanat titreşir) </li><li> (Erkek yalıyor kadın genital organlarının) Licking </li><li> Curling (erkek kendisi altında karnı kıvrılıyor) </li><li> (Kadın monte çalışırken aktivite Curling) birleşme girişimi </li></ol></li></ol></li><li> 1 dikkat0 dakika veya daha başarılı bir birleşme kadar, her davranışın meydana geldiği zaman not (gecikme), kur birleşme kadar davranış (kur endeksi hesaplamak için) yanı sıra, başarılı bir şekilde belirli bir davranışı gerçekleştirmek çiftlerinin numarası yapan toplam süre ( frekans). Vahşi tip çiftlerinin% 100 genellikle 5 dakika içinde çiftleşirler olacaktır. </li><li> Hesaplamak zaman bölerek bir kur endeksine (CI) çiftleşmeye kadar toplam süre bölünmesiyle kur geçirdi. Vahşi tip çiftleri için bu genellikle 0.6-0.8 arasında değişmektedir. </li></ol> D. Örnek Sonuçlar Assay Crawling Normal vahşi tip larva ~ 3 cm / dakika ve sergi ~ bir dakika içinde 40-50 vücut duvarı kasılmaları başıboş dolaşırlar. Biz son zamanlarda larva sürünen, kusur, düşük kullanım ömrü ve değer düşüklüğü 6 tırmanma yetişkin gösterir FUS / TLS ile ilgili Amyotrofik lateral skleroz bir Drosophila modeli geliştirdik. Biz ifadesi o hedefMotor nöronların (OK-371-gal4 sürücü) ve f yabani tip ve FUS / TLS mutant formları bir larva tarama testi yapıldı. Aşağıda görüldüğü gibi vahşi tip FUS ifadesi yaklaşık 6 cm larva tarama yeteneği azalmış ise, vahşi tip larva, en fazla 12 cm sürün. FUS / TLS ALS neden olan mutasyon R521C ifade Hayvanlar sadece yaklaşık 1 cm / dakika, emekleme, onların tarama hareketi çok ciddi bozulma (Şekil 1) göstermektedir. Negatif geotaxis HALKA assay Genç vahşi tip ergin sinek 3 saniyelik bir zaman diliminde ~ 4-5 cm (zaman belirli bir için belirli bir ortalama yüksekliği tanımlamak için farklı suşları veya aktivite seviyelerini karşılamak için 3 saniye arasında ayarlanabilir ortalama tırmanma yükseklikte olmalıdır / tedavi) süzün. Altta kalan sinekler 0 değeri tahsis edilir. Onu daha sonra yüksekliğini ölçmek için her bir sinek yerini belirlemek zor olur, çünkü vialde 25&#39;ten fazla sinek kullanılması tavsiye edilmez. No duyarsızlaştırma istihdam ediyor olması dışında 1 dakika aralıklı 6 ardışık denemeler için yukarı görülmüştür. Bu kullanılan vialler içine yerleştirilen yeni sinekler taze şişeler içerisine aynı ölçüde tırmanmaya çünkü toplanmış veri kümesi başlangıç ​​sonra bu tahlilde test polistiren şişeleri yeniden edilmeyen kritik önem taşır. <img alt="Şekil 1" src="/files/ftp_upload/3795/3795fig1.jpg" /> Şekil 1. HALKA Assay Kur. Odaklanma ve aparat üzerine kamera yakınlaştırmak;; dijital kamera polistiren flakonlarda sinekler içeren cihazları önünde ~ 1 m yerleştirilir ve 3.0 saniye için zamanlayıcıyı ayarlayabilirsiniz. <img alt="Şekil 2" src="/files/ftp_upload/3795/3795fig2.jpg" /> Kullanarak larva tarama testte Şekil 2. Temsilcisi veri ektopik UAS-FUS WT ifade ve motor nöron sürücüsü (OK371-gal4) kontrolü altında UAS-FUS R521C sinekleri. <pclass = &quot;jove_content&quot;&gt;

<ol><li>Pandey, U. B., Nichols, C. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+disease+models+in+Drosophila+melanogaster+and+the+role+of+the+fly+in+therapeutic+drug+discovery%5BTitle%5D)+AND+%22Pharmacol.+Rev%22%5BJournal%5D)">Human disease models in Drosophila melanogaster and the role of the fly in therapeutic drug discovery.</a> Pharmacol. Rev. 63 (2), 411-436 (2011).</li>
<li>Feany, M. B., Bender, W. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+Drosophila+model+of+Parkinson%27s+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Mar%22%5BJournal%5D)">A Drosophila model of Parkinson's disease.</a> Nature Mar. 23 (6776), 394-398 (2000).</li>
<li>Auluck, P. K., Bonini, N. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pharmacological+prevention+of+Parkinson+disease+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Med%22%5BJournal%5D)">Pharmacological prevention of Parkinson disease in Drosophila.</a> Nat. Med. 8 (11), 1185-1186 (2000).</li>
<li>Whitworth, A. J., Theodore, D. A., Greene, J. C., Benes, H., Wes, P. D., Pallanck, L. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Increased+glutathione+Stransferase+activity+rescues+dopaminergic+neuron+loss+in+a+Drosophila+model+of+Parkinson%27s+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci.+U.S.A%22%5BJournal%5D)">Increased glutathione Stransferase activity rescues dopaminergic neuron loss in a Drosophila model of Parkinson's disease.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 102 (22), 8024-8029 (2005).</li>
<li>Gargano, J. W., Martin, I., Bhandari, P., Grotewiel, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rapid+iterative+negative+geotaxis+%28RING%29%3A+a+new+method+for+assessing+age-related+locomotor+decline+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Exp.+Gerontol%22%5BJournal%5D)">Rapid iterative negative geotaxis (RING): a new method for assessing age-related locomotor decline in Drosophila.</a> Exp. Gerontol. 40 (5), 386-395 (2005).</li>
<li>Lanson, N. A., Maltare, A., King, H., Smith, R., Kim, J. H., Taylor, J. P., Lloyd, T. E., Pandey, U. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+Drosophila+model+of+FUS-related+neurodegeneration+reveals+genetic+interaction+between+FUS+and+TDP-43%5BTitle%5D)+AND+%22Hum.+Mol.+Genet%22%5BJournal%5D)">A Drosophila model of FUS-related neurodegeneration reveals genetic interaction between FUS and TDP-43.</a> Hum. Mol. Genet. 20 (13), 2510-2523 (2011).</li>
<li>Batlevi, Y., Martin, D. N., Pandey, U. B., Simon, C. R., Powers, C. M., Taylor, J. P., Baehrecke, E. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dynein+light+chain+1+is+required+for+autophagy%2C+protein+clearance%2C+and+cell+death+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci.+U.S.A%22%5BJournal%5D)">Dynein light chain 1 is required for autophagy, protein clearance, and cell death in Drosophila.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 107 (2), 742-747 (2010).</li>
<li>Sang, T. K., Chang, H. Y., Lawless, G. M., Ratnaparkhi, A., Mee, L., Ackerson, L. C., Maidment, N. T., Krantz, D. E., Jackson, G. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+Drosophila+model+of+mutant+human+parkin-induced+toxicity+demonstrates+selective+loss+of+dopaminergic+neurons+and+dependence+on+cellular+dopamine%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">A Drosophila model of mutant human parkin-induced toxicity demonstrates selective loss of dopaminergic neurons and dependence on cellular dopamine.</a> J. Neurosci. 27 (5), 981-992 (2007).</li>
<li>Stacey, S. M., Muraro, N. I., Peco, E., Labbé, A., Thomas, G. B., Baines, R. A., van Meyel, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Drosophila+glial+glutamate+transporter+Eaat1+is+regulated+by+fringe-mediated+notch+signaling+and+is+essential+for+larval+locomotion%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Drosophila glial glutamate transporter Eaat1 is regulated by fringe-mediated notch signaling and is essential for larval locomotion.</a> J. Neurosci. 30 (43), 14446-14457 (2010).</li>
<li>Repnikova, E., Koles, K., Nakamura, M., Pitts, J., Li, H., Ambavane, A., Zoran, M. J., Panin, V. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sialyltransferase+regulates+nervous+system+function+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Sialyltransferase regulates nervous system function in Drosophila.</a> J. Neurosci. 30 (18), 6466-6476 (2010).</li>
<li>Repnikova, E., Koles, K., Nakamura, M., Pitts, J., Li, H., Ambavane, A., Zoran, M. J., Panin, V. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sialyltransferase+regulates+nervous+system+function+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Sialyltransferase regulates nervous system function in Drosophila.</a> J. Neurosci. 30 (18), 6466-6476 (2010).</li>
<li>Nedelsky, N. B., Pennuto, M., Smith, R. B., Palazzolo, I., Moore, J., Nie, Z., Neale, G., Taylor, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Native+functions+of+the+androgen+receptor+are+essential+to+pathogenesis+in+a+Drosophila+model+of+spinobulbar+muscular+atrophy%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">Native functions of the androgen receptor are essential to pathogenesis in a Drosophila model of spinobulbar muscular atrophy.</a> Neuron. 67 (6), 936-952 (2010).</li>
<li>Lorenzo, D. N., Li, M. G., Mische, S. E., Armbrust, K. R., Ranum, L. P., Hays, T. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spectrin+mutations+that+cause+spinocerebellar+ataxia+type+5+impair+axonal+transport+and+induce+neurodegeneration+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Spectrin mutations that cause spinocerebellar ataxia type 5 impair axonal transport and induce neurodegeneration in Drosophila.</a> J. Cell Biol. 189 (1), 143-158 (2010).</li>
<li>Wang, J. W., Brent, J. R., Tomlinson, A., Shneider, N. A., McCabe, B. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+ALS-associated+proteins+FUS+and+TDP-43+function+together+to+affect+Drosophila+locomotion+and+life+span%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Clin.+Invest%22%5BJournal%5D)">The ALS-associated proteins FUS and TDP-43 function together to affect Drosophila locomotion and life span.</a> J. Clin. Invest. , (2011).</li>
<li>Choi, J. K., Jeon, Y. C., Lee, D. W., Oh, J. M., Lee, H. P., Jeong, B. H., Carp, R. I., Koh, Y. H., Kim, Y. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+Drosophila+model+of+GSS+syndrome+suggests+defects+in+active+zones+are+responsible+for+pathogenesis+of+GSS+syndrome%5BTitle%5D)+AND+%22Hum.+Mol.+Genet%22%5BJournal%5D)">A Drosophila model of GSS syndrome suggests defects in active zones are responsible for pathogenesis of GSS syndrome.</a> Hum. Mol. Genet. 19 (22), 4474-4489 (2010).</li>
<li>Ruan, H., Wu, C. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Social+interaction-mediated+lifespan+extension+of+Drosophila+Cu%2FZn+superoxide+dismutase+mutants%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci.+U.S.A%22%5BJournal%5D)">Social interaction-mediated lifespan extension of Drosophila Cu/Zn superoxide dismutase mutants.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 105 (21), (2008).</li>
<li>Slawson, J. B., Kim, E. Z., Griffith, L. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High-resolution+video+tracking+of+locomotion+in+adult+Drosophila+melanogaster%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Vis.+Exp%22%5BJournal%5D)">High-resolution video tracking of locomotion in adult Drosophila melanogaster.</a> J. Vis. Exp. (24), (2009).</li>
<li>Becnel, J., Johnson, O., Luo, J., Nässel, D. R., Nichols, C. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+serotonin+5-HT7+Dro+receptor+is+expressed+in+the+brain+of+Drosophila%2C+and+is+essential+for+normal+courtship+and+mating%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">The serotonin 5-HT7 Dro receptor is expressed in the brain of Drosophila, and is essential for normal courtship and mating.</a> PLoS One. 6 (6), e20800(2011).</li>
<li>Johnson, O., Becnel, J., Nichols, C. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Serotonin+5-HT%282%29+and+5-HT%281A%29-like+receptors+differentially+modulate+aggressive+behaviors+in+Drosophila+melanoga-+ster%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Serotonin 5-HT(2) and 5-HT(1A)-like receptors differentially modulate aggressive behaviors in Drosophila melanoga- ster.</a> Neuroscience. 158 (2), 1292-1300 (2009).</li>
<li>Bastock, M., Manning, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Courtship+of+Drosophila+Melanogaster%5BTitle%5D)+AND+%22Behaviour%22%5BJournal%5D)">The Courtship of Drosophila Melanogaster.</a> Behaviour. , 85-111 (1955).</li>
<li>Greenspan, R. J., Ferveur, J. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Courtship+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Annu.+Rev.+Genet%22%5BJournal%5D)">Courtship in Drosophila.</a> Annu. Rev. Genet. 34, 205-232 (2000).</li>
<li>Villella, A., Hall, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neurogenetics+of+courtship+and+mating+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Adv.+Genet%22%5BJournal%5D)">Neurogenetics of courtship and mating in Drosophila.</a> Adv. Genet. 62, 67-184 (2008).</li>
</ol>

Biz ifşa hiçbir şey yok.

Drosophila davranış sıkı genetik ve çevresel faktörler tarafından düzenlenir. Biz ve diğerleri, daha önce davranış ve Drosophila 5-19 modellenmiş insan nörodejeneratif hastalıklar uçmak için ilgili genler incelemek için veri toplamak için burada açıklanan testleri kullandılar. Tarama testi için, 3. Larvalar dikkatli seçimi kritik bir adımdır. Bir ilaç ile tedavi etmek, bu da iyi bir erime kabiliyetine sahip olmadığını maksimal etkisi elde etmek için 10-15 dakika (veya daha fazla i...

<table border="1"><tbody><tr><td> Reaktif Adı </td><td> Şirket </td><td> Katalog numarası </td></tr><tr><td> Sakaroz </td><td> Fisher Scientific </td><td> S5-500 </td></tr><tr><td> Agaroz </td><td> Invitrogen </td><td> 16500-500 </td></tr><tr><td> 6 oz Drosophila şişe </td><td> Genesee Bilimsel </td><td> 32-130 </td></tr><tr><td> Boya Fırçası (# 1) </td><td> Ted Pella, Inc </td><td> 11859 </td></tr><tr><td> Gıda bileşenleri Fly </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Mısır unu </td><td> Fisher Scientific </td><td> NC9109741 </td></tr><tr><td> Agar </td><td> Genesee Bilimsel </td><td> 66-104 </td></tr><tr><td> Melas </td><td> Fisher Scientific </td><td> NC9349176 </td></tr><tr><td> Propiyonik asit </td><td> Acros </td><td> 14930-0010 </td></tr><tr><td> Tegosept </td><td> Tepe </td><td> 20-258 </td></tr><tr><td> Etanol </td><td> BalıkçıBilimsel </td><td> BP2818-4 </td></tr><tr><td> Maya </td><td> Genesee Bilimsel </td><td> 62-107 </td></tr></tbody></table>

test için yöntemler drosophila davranış

Methods to Assay Drosophila Behavior

Drosophila melanogaster, meyve sineği, kanser, kardiyovasküler hastalıklar ve bazı nörolojik hastalıklar 1. sıra insan hastalıklarının geniş bir moleküler mekanizmaları incelemek için kullanılmıştır. Biz larva hareket, yetişkin tırmanma yeteneği (HALKA testi), ve Drosophila kur davranışlarının belirlenmesi için basit ve sağlam davranışsal testler optimize edilmiştir. Bu davranış testleri sinek davranışı üzerinde genetik ve çevresel faktörlerin rolünü incelemek için yaygın olarak uygulanabilir. Larva tarama yeteneği güvenilir ve aynı zamanda lokomosyon ilaçlar ya da genetik hastalık etkisi (transgenik sineklerde) incelenmesi için Drosophila larva tarama yetenekleri erken evre değişiklikleri belirlemek için kullanılabilir. Aksi takdirde değerlendirilebilir nerede bu sinekler yetişkinliğe hayatta yok gibi bir genin ifadesi veya kaldırılması, pupa veya ergin dönemlerinde ölümcül neden olursa larva tarama testi daha uygun olur. Bu temel birssay Drosophila larva ek davranışsal tepkileri incelemek için parlak ışık veya stres ile birlikte de kullanılabilir. Kur davranışı yaygın cinsel davranış genetik temeli araştırmak için kullanılmıştır ve aynı zamanda da öğrenme ve bellek gibi, etkinlik ve koordinasyon incelemek için kullanılabilir. Drosophila Kur davranışı görsel, işitsel ve duyusal sinyaller dahil olmak üzere çeşitli uyarımlar değişimi içerir erkek ve başarılı cinsel birleşme sonuçlanan iyi karakterize motor hareketlerin karmaşık bir dizi neden kadınlar arasında. Geleneksel yetişkin tırmanma testler (negatif geotaxis) farklı çalışmalarda 2-4 arasında belirgin bir farklılaşma ile sıkıcı, yoğun emek ve zaman alıcı vardır. Hızlı (HALKA) testi 5 yetişkin lokomotor ve negatif geotaxis b ölçmek için, tekrarlanabilir duyarlı ve yüksek verimlilik yaklaşımı sağlayan, yaygın kullanılan protokolleri üzerinden pek çok avantajı vardır negatif geotaxis iteratifehaviors. HALKA deneyde, birkaç genotiplerinin veya ilaç tedavileri yüksek verimli tarama deneyleri yaklaşımı için daha uygun hale ile birlikte, aynı zamanda hayvanları, çok sayıda kullanılarak test edilebilir.

Drosophila melanogaster bir yüzyıl 1 aşkın süredir birçok önemli biyolojik işlemlerin moleküler ve hücresel temelini anlamak için kullanılan bir genetik ve davranışsal uysal modeli sistemidir. Drosophila iyi sinek davranışının genetik temeli içgörü kazanmak için istismar edilmiştir.

Test için Yöntemler Drosophila Davranış

Meyve sineği olan *Drosophila melanogaster*; kanser, kardiyovasküler ... gibi çok çeşitli insan hastalıklarının moleküler mekanizmalarını incelemek için kullanılmıştır.

Bu prosedürün genel amacı, drosophila motor duyusal ve koordinasyon davranışlarını inceleme yöntemlerini göstermektir. Bu işlem; öncelikle crawling deneyi ile larva motor fonksiyonlarının, ring deneyi ile erişkin motor fonksiyonlarının ve courtship deneyi ile erişkin koordinasyon ve duyusal yeteneklerinin değerlendirilmesiyle gerçekleştirilir. Nihayetinde, bu davranışsal deneyler paneli, genetik faktörlerin ve ilaç uygulamaları gibi dış faktörlerin aktivite ve koordinasyonu nasıl etkileyebileceğini gösterebilir.Intra sophala. Bu analizin, negatif geo aks gibi mevcut yöntemlere karşı temel avantajı, halka analizinin daha yüksek kapasiteli ve daha hassas olmasıdır. Bu yöntem, lokomotor kusurların erken evre tespiti gibi nörodejeneratif hastalıklar alanındaki temel soruların yanıtlanmasına yardımcı olabilir.Bu deneyi, laboratuvarımdaki doktora sonrası araştırmacı Dr. Jamie Becknell gerçekleştirecektir. Larval sürünme deneyi, genetik ve çevresel faktörlerin motilite üzerindeki etkisini ölçmek için kullanılır; kuruluma standart bir şişeye 10 ila 15 erkek ve 10 ila 15 bakire dişinin yerleştirilmesiyle başlanır. 24 saat sonra, sağlıklı yetişkinler şişeyi dolduracak kadar yumurta bırakmış olacak ve böylece popülasyonun yaşı 24 saat ile eşitlenmiş olacaktır.Yetişkinleri temiz bir şişeye aktarın ve işlemi tekrarlayın. Şimdi, şişedeki besin içerisinde üçüncü evre yıldız larvaları gözlemlenene kadar şişeyi inkübe edin. 50 ila 100 mililitre %20 sakaroz ekleyin ve 20 dakika boyunca bekletin.Larvalar üst kısma çıkacaktır; larvaları ucu kesilmiş 25 mililitrelik bir serolojik pipet kullanarak toplayın ve bir ağ sepetine yerleştirin. Ağ sepetindeki larvaları deiyonize su ile iki kez yıkayın. Artık larvalar üzerinde deneyler yapılabilir.Larvaları bir ilaçla tedavi etmek için, istenen sayıdaki larvayı bir fırça yardımıyla %5 sükroz ve ilgili ilaç içeren beş mililitrelik bir behere aktarın. İlaçlı şeker çözeltisiyle 15 dakika boyunca beslenmelerini sağlayın, ardından onları tekrar mesh sepetinden dökerek durulayın ve hareketlilik üzerindeki ilaç etkisinin ölçümüne geçin. Tek bir larvayı, %2 agar içeren 15 santimetrelik bir Petri kabına aktarmak için bir fırça kullanın.Bir kareli kağıt üzerine yerleştirin. Şimdi verileri toplayın. Lavın bir dakika içinde kaç kare çizgisini geçtiğini saymanız yeterlidir.Ardından, bir diseksiyon mikroskobu altında, seyreltilmiş maya macunu çözeltisi içeren cam bir diseksiyon kabının kuyucuğuna lavrayı aktarmak için fırçayı kullanın ve bir dakikalık süre boyunca Percy'nin kasılmalarını sayın. Tek bir kasılma, tam bir posteriordan anteriora harekete olarak sayılır. İstenen sayıda larva sayılana kadar işlemi tekrarlayın.Halk protokolü, yetişkin hayvanların lokomotor hızını ölçer; yeni çıkan yetişkin erkek sinekler hafif anestezi altında toplanır ve normal veya ilaçlı yem içeren standart bir flakona aktarılır. Her flakona yaklaşık 25 sinek yerleştirin. Anestezinin tamamen etkisini kaybetmesi ve kararlı durum ilaç seviyelerinin birikmesi için sinekleri oda sıcaklığında iki ila üç gün boyunca tutun.Ardından, anestezi uygulamadan yaklaşık 25 sineği kalıplanmış tıpalı polistiren tüplere aktarın ve tüpleri bir veya daha fazla halka düzeneği şeklinde birleştirin. Sineklerin 15 ila 20 dakika boyunca dinlenmesini beklerken, tüpleri yandan fotoğraflayacak şekilde bir dijital kamerayı hizalayın, bir zamanlayıcı hazırlayın ve bunu analiz için istenen süreye ayarlayın. Analizi gerçekleştirmek için genellikle üç saniye yeterlidir.Sinekleri rahatsız etmeden halka düzeneğini bir elinizle tutun ve diğer elinizle kamera zamanlayıcısını hazır bulundurun. Sinekleri düşürmek için düzeneği tezgaha üç kez vurun ve aynı anda kameranın geri sayım zamanlayıcısını başlatın. Beş veya altı deneme gerçekleştirilene kadar deneyi her dakika bir kez tekrarlayın.İlk veri setleri toplandıktan sonra polistiren test tüplerinin yeniden kullanılmaması kritik önem taşır. Çünkü kullanılmış tüplere yerleştirilen yeni sinekler, taze tüplere yerleştirilen sinekler kadar yüksek tırmanmayacaktır. Verileri toplamak için bir görüntüleyici kullanarak farklı grupların ortalama tırmanma yüksekliğini puanlayın.Bu analiz, analiz için sinek toplamak amacıyla şişelerde bol miktarda yavru üreten, hazırlanmış genetik çaprazlamalar gerektirir. Hayvanların öznel şafağınale bir iki saat kala, tüm erişkinleri üç ila dört saatlik aralıklarla toplamak için şişeleri temizleyin. Yeni çıkmış, cinsel olarak deneyimsiz erkek ve dişileri toplayın; erkekleri besin içeren tüplere veya viallere tek tek, dişileri ise beş veya altışarlı gruplar halinde yerleştirin.Benzer kafeslerde, analiz için eşit sayıda erkek ve dişi gereklidir. Toplanan sinekler beş gün boyunca izole edildikten sonra, onları bir çiftleşme çarkına yüklemek için hazırlık yapın ve analizi gerçekleştirin. Ardından, bir diseksiyon mikroskobu altında bir dişiyi ve bir erkeği dikkatlice çiftleşme çarkının haznesine aktarın.Çifti 10 dakika boyunca veya bu süre zarfında başarıyla çiftleşene kadar gözlemleyin. Birkaç davranıştan her birinin ilk kez ne zaman gözlemlendiğini kaydedin. Erkeğin ilk kez dişiye doğru döndüğü anı kaydedin.Erkek dişiye bacağıyla ilk dokunduğunda kaydedin, erkek ilk kez kanadını açıp titrettiğinde kaydedin, erkek dişinin genital bölgesini ilk yaladığında kaydedin, erkek karnını ilk kez altına doğru kıvırdığında kaydedin. Erkeğin dişiye çıkmaya ilk çalıştığı anı kaydedin. Son olarak, kopülasyon gerçekleşene kadar kur davranışında geçen toplam süreyi kaydedin.Yaban tipi hayvanlar için bu süre neredeyse her zaman beş ila 10 dakika arasındadır; veriler üç farklı parametre ile toplanır. Birincisi, bir davranışa kadar geçen süre (latans), davranışın ilk kez gözlemlenmesine kadar geçen zamandır. İkincisi, bir davranışın frekansı, bu davranışın gözlemlenip gözlemlenmediğidir.Üçüncü olarak, kur yapma indeksi, hayvanlarla yapılan bir deneyde kur yapmaya ayrılan sürenin, toplam süreye ve kopülasyona kadar geçen süreye bölünmesidir. F-U-S-T-L-S ile ilişkili miyotrofik lateral skleroz mutasyonları taşımaktadır. İnsersiyon merkezli gen mutantları, wild type kontrollerinin yarısı kadar sürünme yeteneği gösterirken, R 5 21 C missense mutasyonu sürünme hızını dakikada sadece yaklaşık bir santimetreye düşürmüştür.Genç yaban tipindeki yetişkin sineklerin halka testi sonucunda, üç saniyelik bir süre zarfında üç ile beş santimetre arasında tırmanma şeklinde ortalama bir yükseklik elde edilmiştir. Bu analizde, halka testi denemeleri sırasında birer dakika arayla gerçekleştirilen beş ardışık denemeye kadar herhangi bir duyarsızlaşma gözlemlenmemiştir. Zamanlama konusunda mümkün olduğunca hassas davranmayı hatırlamak önemlidir.Yöntemye hakim olunduğunda, düzgün bir şekilde uygulandığı takdirde larval crowding deneyi, tek bir genotip için 10 denemeyi gözlemlemek amacıyla 30 ila 40 dakikada tamamlanabilir. Bu videoyu izledikten sonra, sineklerde kur davranışlarının nasıl gözlemleneceği ve puanlanacağı konusunda da yeterli bilgiye sahip olmalısınız.

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Sinirbilim

Davranış testleri, lokomotor fonksiyonları ölçme öğrenme ve hafıza...

Assaying Lokomotor, Öğrenme ve Hafıza Açıkları. Drosophila Nörodejenerasyon, modeller

Saldırganlık doğuştan gelen bir davranıştır ve önceki dövüş deneyimi, sineklerde dövüş stratejisini ve sonraki yarışmaların sonucunu etkiler. Bu video, Drosophila'nın agresif davranışını incelemek için kullanılan bir testi açıklamaktadır. Örnek protokol, sinek işlemeyi ortadan kaldıran ve bu nedenle hayvanlar için stresi azaltan, aksi takdirde deneklerin performansını etkileyecek olan bir kurulumda gerçekleştirilen tahlili içerir.

Drosophila Saldırganlık Testi: Sineklerde Davranışsal Plastisiteyi Test Etmek İçin Bir Yöntem

Bu video makalede, Drosophila melanogaster uçmak yetişkin meyve koku bağımlı gıda arama davranışı üzerine açlık veya tokluk etkisini ölçmek için otomatik bir deneyi açıklar.

Toplayıcılık Davranış için Tek-sinek Deneyi Drosophila

Burada yüksek verimli tarama sağlayan, Drosophila uçuş performans hızlı ve doğru bir ölçümü için bir yöntem tarif eder.

Uçuş Performans Doğru ve hızlı ölçüm için geliştirilmiş Yöntemi<em&gt; Drosophila</em

Burada, stresli bireylerin kaçınma durumunu ölçmek için bir protokol sunuyoruz. Bu paradigma güçlü ancak kullanıcı dostudur ve Drosophila melanogaster'de genlerin ve çevrenin bir tür sosyal etkileşim üzerindeki etkisini değerlendirmek için kullanılabilir.

Sosyal Kaçınma Niceleme için Basit Testi Drosophila melanogaster

Mekanosasyonu etkileyen yeni mutasyonları tanımlamak için, MARCM yöntemi ile üretilen mutant klonlarda sinek kıllarının dokunsal uyarımına davranışsal tepkiyi ölçen bir test tasarladık. Tekniklerin kombinasyonu, aksi takdirde ölümcül olabilecek mekanosensitif mutasyonların tanımlanmasına izin verir.

Arasında Mechanosensation için bir davranış tahlilinde klonlarda MARCM tabanlı<em&gt; Drosophila melanogaster</em

Burada, 100'e kadar sirke sineğinin (Drosophila melanogaster) koku alma tepkilerini test etmek için bir davranış kurulumu ve veri analizi yöntemini açıklıyoruz. Bu sistem, tek veya çoklu koku uyaranlarıyla kullanılabilir ve nöronal alt kümelerin optogenetik aktivasyonu veya susturulması için uyarlanabilir.

Of Bilgisayar İzleme tarafından Analiz Edilmiş Olfaktor Davranışlar<em&gt; Drosophila</em&gt; Dört kadranda olfactometer içinde

Mevcut protokol, Drosophila'nın lokomotor aktivitesini, hız, mesafe vb. parametreleri hesaplamak için yüksek tanımlı video kaydına dayalı olarak her karenin piksellerini segmentlere ayırmak için eklentilerle uyumlu açık kaynaklı yazılım Fiji'yi kullanarak el yapımı bir arenada sineklerin hareketini izleyerek ve analiz ederek değerlendirir.

Drosophila'da Lokomotor Aktiviteyi Test Etmek İçin Basit Bir Teknik

Otizm Spektrum Bozukluğu (OSB), bozulmuş sosyal ve iletişimsel davranış ve tekrarlayan davranışların ortaya çıkması ile ilişkilidir. Drosophila modelinde ASD genleri ve davranışsal eksiklikler arasındaki ilişkiyi incelemek için, bu yazıda sosyal boşluk, saldırganlık, kur yapma, tımar etme ve alışkanlık davranışını test etmek için beş davranışsal paradigma açıklanmaktadır.

Otizm Spektrum Bozukluğunun Drosophila Modelinde Davranışsal Değerlendirme Paradigmaları

Protokol, geleneksel memeli modellerine bir alternatif olarak lokomotor disfonksiyonun nicelleştirilmesi yoluyla meyve sineğindeki nörotoksisiteyi değerlendirmek için yüksek verimli, uygun maliyetli bir yöntem sunar. Farmasötik bileşiklerin, çevresel ajanların veya genetik modifikasyonların nörotoksik etkilerini hassas, tekrarlanabilir ve etik açıdan uygun bir model kullanarak değerlendirmeyi amaçlar.

Drosophila melanogaster'de Lokomotor Disfonksiyonun Nörotoksisite için Bir Okuma Olarak Davranışsal Analizi

Bu protokol, Drosophila melanogaster'de stres kaynaklı davranış değişikliklerini değerlendirmek için bir çerçeve sağlar. Tamamlayıcı testlerin birleştirilmesi, bireysel sinekler için aktivite, keşif ve karar verme süreçlerinin nicelendirilmesini sağlar. Yaklaşım esnektir ve stres biyolojisi, metabolizması ve nörodavranışsal fonksiyonları inceleyen geniş bir çalışma yelpazesine uyarlanabilir.

Drosophila melanogaster'de Stres Kaynaklı Depresyona Benzer Durumların Çok Modlu Davranışsal Fenotiplenmesi

Keşfedin Drosophila motor fonksiyon ve koordinasyon davranışlarını değerlendiren yöntemleri. Sürünme, halka ve kur yapma testleri genetik faktörleri incelemek için kullanılır.

Test için Yöntemler Drosophila Davranış

Daha fazla video keşfet