Test için Yöntemler Drosophila Davranış

Bu prosedürün genel amacı, drosophila motor duyusal ve koordinasyon davranışlarını inceleme yöntemlerini göstermektir. Bu, önce lav motoru fonksiyonunu değerlendirerek, tarama testini kullanarak, yetişkin motor fonksiyonunu değerlendirerek, halka testini kullanarak ve kur testi ile yetişkin koordinasyonunu ve duyusal yetenekleri değerlendirerek gerçekleştirilir. Sonuç olarak, bu davranışsal tahliller paneli, ilaç tedavileri gibi genetik ve dış faktörlerin aktivite ve koordinasyonu nasıl etkileyebileceğini gösterebilir.

Sophala içi. Bu testin negatif coğrafi eksen gibi mevcut yöntemlere göre ana avantajı, halka testinin daha yüksek verim ve daha hassas olmasıdır. Bu yöntem, lokomotif kusurlarının erken aşamada tespiti gibi nörodejeneratif hastalıklar alanındaki temel soruların yanıtlanmasına yardımcı olabilir.

Bu tahlili göstermek, laboratuvarım için bir doktora sonrası olan Dr.Jamie Becknell olacak. Larva tarama testi, standart bir şişede 10 ila 15 erkek ve 10 ila 15 bakireden oluşan bir melezleme oluşturmaya başlamak için genetik ve çevresel faktörlerin motilite üzerindeki etkisini ölçmek için kullanılır. 24 saat sonra, sağlıklı yetişkinler, bu popülasyonu 24 saate kadar yaşlı tutmak için şişeyi doldurmaya yetecek kadar yumurta bırakmış olacaktır.

Yetişkinleri taze bir şişeye alın ve işlemi tekrarlayın. Şimdi şişeyi, yıldızda üçüncü larvalar şişeye giden yiyeceklerde gözlenene kadar kuluçkaya yatırın. 50 ila 100 mililitre% 20 sükroz ekleyin ve 20 dakika bekletin.

Larvalar tepeye doğru yüzecek, larvaları ucu kesilmiş 25 mililitrelik serolojik bir pipet kullanarak toplayacak ve bir ağ sepetine yerleştirecektir. Larvaları ağ sepetinde iki kez deiyonize su ile yıkayın. Artık üzerlerinde deney yapılabilir.

Larvaları bir ilaçla tedavi etmek için, istenen sayıda larvayı% 5'lik bir sükroz çözeltisi ve ilgilenilen ilacı içeren beş mililitrelik bir behere taşımak için bir fırça kullanın. 15 dakika boyunca ilaçlanmış şeker çözeltisi ile beslenmelerine izin verin, daha sonra bunları ağ sepetinden geri dökün, durulayın ve ilacın motilite üzerindeki etkisini ölçmeye devam edin. Tek bir lavı %2 aros içeren 15 santimetrelik bir Petri kabına taşımak için bir fırça kullanın.

Bir yaprak greft kağıdının üzerine koyun. Şimdi verileri toplayın. Lavın bir dakika içinde geçtiği ızgara çizgilerinin sayısını sayın.

Daha sonra, lavları bir dakikalık bir süre boyunca bir diseksiyon mikroskobu altında seyreltik bir maya macunu çözeltisi içeren bir cam diseksiyon kabının kuyusuna aktarmak için fırçayı kullanın, Percys kasılmalarını sayın. Tek bir kasılma, tam bir posterior ila anterior hareket olarak sayılır. İstenilen larva sayısı sayılana kadar tekrarlayın.

Halka protokolü, yetişkin hayvanların lokomotif hızını ölçer, hafif anestezi altında yeni çıkan yetişkin erkek sinekleri toplar ve bunları normal veya ilaçlı gıda içeren standart bir dosyaya aktarır. Flakon başına yaklaşık 25 sinek koyun. Tam bir anestezi iyileşmesi ve kararlı durum ilaç seviyelerinin birikmesi için sinekleri iki ila üç gün oda sıcaklığında tutun.

Daha sonra anestezi olmadan yaklaşık 25 sineği kalıplanmış tapalarla polistiren şişelere aktarın ve şişeleri bir veya daha fazla halka aparatına monte edin. Şişeleri yandan görünümden fotoğraflamak için bir dijital kamerayı hizalarken sineklerin 15 ila 20 dakika dinlenmesine izin verin, bir zamanlayıcı hazırlayın ve test için istenen süreye ayarlayın. Testi gerçekleştirmek için tipik olarak üç saniye.

Bir elinizle sinekleri rahatsız etmeden halka aparatını, diğer elinizle kamera zamanlayıcısını keskin bir şekilde tutun. Sinekleri yere sermek ve aynı anda kameranın geri sayım sayacını başlatmak için tezgahın üzerindeki aparata üç kez dokunun. Beş veya altı deneme yapılana kadar makaleyi dakikada bir kez tekrarlayın.

İlk veri setleri toplandıktan sonra polistiren test şişelerinin yeniden kullanılmaması çok önemlidir. Çünkü kullanılmış şişelere yerleştirilen yeni sinekler, taze şişelere yerleştirilen sinekler kadar tırmanmayacaktır. Bir resim görüntüleyici kullanarak verileri toplamak için ortalama yüksekliği puanlayın, farklı gruplara göre tırmanın.

Bu tahlil, tahlil için sinek toplamak için bol miktarda döl üreten şişelerde hazırlanmış genetik melezler gerektirir. Hayvanın öznel hale gelmesinden birkaç saat sonra, şafak tüm yetişkinleri üç ila dört saatlik aralıklarla toplamak için şişeleri temizleyin. Yeni ortaya çıkan cinsel açıdan saf erkek ve dişileri toplayın, erkekleri tek tek şişelerde veya yiyeceklerle dolu tüplerde barındırın, dişileri beş ila altı kişilik gruplar halinde barındırın.

Benzer muhafazalarda, tahlil için eşit sayıda erkek ve dişi gereklidir. Toplanan sinekleri beş gün boyunca izole ettikten sonra, onları bir çiftleşme tekerleğine yüklemeye ve tahlili yapmaya hazırlanın. Daha sonra, bir dişi ve bir erkeği bir diseksiyon mikroskobu altında bir çiftleşme tekerleğinin odasına dikkatlice aktarın.

Çifti 10 dakika boyunca veya bu süre zarfında başarılı bir şekilde çiftleşene kadar gözlemleyin. Birkaç davranışın her birinin ilk kez ne zaman gözlemlendiğini kaydedin. Erkeğin kadın kaydına ilk döndüğü zamanı kaydedin.

Erkek dişiye bacak plağı ile ilk dokunduğunda, erkek ilk kez bir kanat uzatıp titreştirdiğinde rekor erkek ilk kez kadın cinsel organını yaladığında rekor Erkek ilk kez karnını kendi altında kıvırdığında. Erkeğin kadın e-postasını ilk kez ne zaman bağlamaya çalıştığını kaydedin. Son olarak, çiftleşme gerçekleşene kadar kur yapma davranışında bulunan toplam süreyi kaydedin.

Yabani tip hayvanlar için, bu neredeyse her zaman beş ila 10 dakika içinde, üç farklı parametre ile veri toplayın. İlk olarak, bir davranışın gecikmesi, ilk gözlemlenmeden önce geçen süredir. İkincisi, bir davranışın sıklığı, gözlemlenip gözlemlenmediğidir.

Üçüncüsü, kur yapma endeksi, hayvanlarla yapılan bir deneyde kur yapma için harcanan sürenin toplam süreye ve çiftleşmeye bölünmesiyle elde edilen değerdir. F-U-S-T-L-S'de miyotrofik lateral skleroz ile ilişkili mutasyonları barındırır. Bir yerleştirme merkezine sahip gen mutantları, vahşi tip kontrollerin sürünme yeteneğinin yarısını gösterdi ve bir R 5 21 C yanlış anlamlı mutasyon, sürünme hızını dakikada sadece yaklaşık bir santimetreye düşürdü.

Genç yabani tip yetişkin sineklerin halka testi, üç saniyelik bir süre boyunca üç ila beş santimetre arasında tırmanan ortalama bir yükseklikle sonuçlandı. Bu tahlilde, halka tahlili denenirken bir dakika arayla art arda beş denemeye kadar duyarsızlaşma gözlenmedi. Zamanlama konusunda mümkün olduğunca kesin olmayı unutmamak önemlidir.

Bir kez ustalaştıktan sonra, larva kalabalıklaştırma denemesi, uygun şekilde yapılırsa bir genotip için 10 denemeyi gözlemlemek için 30 ila 40 dakika içinde yapılabilir. Bu videoyu izledikten sonra, anında kur yapma davranışlarını nasıl gözlemleyeceğinizi ve puanlayacağınızı da iyi anlamış olmalısınız.