Name: Emme Pipet Tekniği kullanılarak Olfaktör Reseptör Nöronlar Kaydedilmiş odorant bağlı Cevapları (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-04-05T12:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 8 s
Description: Öğrenin emme pipet tekniği ile fare olfaktör reseptör nöronlarından reseptör akımları ve aksiyon potansiyelleri kaydetmeyi. Bu yöntem koku sinyal iletimini incelemek için kullanılır.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Bu çalışma NIH DC009613, İnsan Sınır Bilim Programı ve Morley Bakım Bursu (JR) tarafından desteklenmiştir.

1. Kayıt Ayarı Kayıt odasına bir hava masa üzerine takılan ve elektriksel bir Faraday kafesi kullanılarak korumalıdır faz kontrast optik ile Nikon TE2000U Eclipse inverted mikroskop üzerine monte edilir. Pleksiglas kayıt odasına iki bölümden kısmen bir bariyer ile ayrılmış ve bir Silanlanmış cam slayt üzerine yapıştırılmış oluşur. Odasının bir bölümü, diğer odorant için erken yerleşik maruz ancak henüz kullanılmamış hücreleri en aza indirmek için kayıt sırasında uyaran-poz için kullanılan en hücrelere yerleştirmek için kullanılır. Kayıt ayarları bir pelet pipet tutucu ve toprak elektrot monte emme pipet (aşağıya bakınız) oluşmaktadır. Emme pipet mikromanipülatör kullanılarak yerleştirilir. Stimulus çözümler her kare tüp 0,7 mm x 0,7 mm olmak üzere, üçlü-varil cam kare tüp kullanılarak uygulanır. Üçlü varil cam bir manipülatör üzerine monte edilmiş motorlu hızlı adım perfüzyon sistemi (Sut bağlandıter SF-77B, Warner Instruments) ve ~ 45 ° lik bir açı kayıt odasına girdi. Üçlü varil cam uç üçlü-varil cam nihai yüzü (açma) pipetin yakın konumlandırılması izin vermek için dikey olarak bu tür tekrar 45 ° 'lik bir açı ile eğimli edildi. Standart memeli Ringer solüsyonu ve toprak elektrotu ile dolu emme pipet elektrot voltaj kelepçesi modda bir yama klemp amplifikatörü 1 GΩ headstage (PC-501A, Warner Instruments) ile bağlanır. Amplifikatör (düşük geçiş 5 kHz'de süzülmüş) gelen analog sinyal gerçek zamanlı olarak sinyalinin izlenmesi için bir dijital osiloskop gösterilen ve aynı zamanda sinyal geçiş filtre edilmiş düşük olan bir 8-kutuplu Bessel filtresi (Krohn-Hite) bağlanır 50 Hz. Her iki sinyal (5 kHz ve 50 Hz alçak geçiren filtre) veri toplama için bir bilgisayara bağlı bir A / D dönüştürücü (Cambridge Elektronik Tasarım Micro 1401 mkII) beslenir. Veri Sinyal 3 ACQ kullanılarak kaydedilir10 kHz örnekleme frekansında uisition yazılımı (Cambridge Elektronik Tasarım). Sinyali ilk olarak üst üste aksiyon potansiyeli ile birlikte akım reseptörü ve daha sonra tek başına akım reseptörü (bakınız Şek. 2) tespit etmek için iki farklı bant genişlikleri de kaydedilir. Perfüzyon sistemi Ringer (kontrol) çözüm ve odorant uyaranlar veya istediğiniz kompozisyonu herhangi bir çözüm arasında hızla geçiş yapmak için kullanılır ve PC ve Sinyal 3 yazılım tarafından kontrol edilir. Çözümler 60 ml şırınga içinde bulunan ve akış hızı tıbbi dereceli intravenöz akış düzenleyiciler ile kontrol edilir. Tipik olarak, akış hızı 1 ml / dakika olarak ayarlanır. Kayıt pipet üzerinde emme aşağıdaki biçimde kontrol edilir: pipet tutucu yan bağlantı noktası da yüksekliği ayarlanabilir bir yağ rezervuar bağlı olan bir yağ hattı bağlanmıştır. Yükseltilmesi ya da düşürülmesi rezervuar sağlar ki p pipet ucu ile basınç ve bu nedenle Ringer akımipette minimal ve hafif olumlu. İlave ya da emme basıncı kayıt pipet ucu içine izole edilmiş bir ORN bir hücre gövdesi emmek için diğer ucunda ağızlık ile rezervuar sahası bağlı bir tüp aracılığıyla uygulanabilir. Deneyler ° C'ye yakın bir hücrenin doğal fizyolojik durumu simüle etmek amacıyla, 37 gerçekleştirilir. Sıcaklık çözümleri içeren paslanmaz çelik tüpler 10, üzerinden geçirilir seramik direnç oluşan bir ısmarlama bir ısıtıcı birim vasıtasıyla çözüm geçen tarafından kontrol edilir. Sıcaklığı termokupl termometre (Fluke) kullanılarak izlenir. 2. Çözümler Memeli Ringer solüsyonu (mM): NaCI 140, KCI 5, 1 MgCl2, 2 CaCl2, 0.01 EDTA, 10 HEPES, 10 glikoz. PH NaOH ile 7.5 'e ayarlandı. % 10 nispi Ringer çözeltisi birleşme akımı ölçmek için kullanılmıştır. Odorant çözümler: Asetofenon ve eugenol 20 mM DMSO stoklarından Ringer çözeltisi günlük olarak hazırlanmıştır. 3. Elektrotlar Yapımı <ol><li> Bir Sutter P-97 mikropipet çektirmesi kılcal bir unfilamented borosilikat cam yerleştirin ve uzun konik bir mikropipet çekin. </li><li> Mercek ve sahne üzerine monte edilmiş hareketli elmas bıçak bir retikül ile donatılmıştır sırayla bir Nikon E200 Eclipse mikroskop üzerine monte ısmarlama bir mikropipet tutucu pipet aktarın. </li><li> 20x hedefi altında pipet ucu gözlemleyin ve retikül bir kılavuz olarak kullanarak; yavaşça kâtip pipet 10 mikron genişliğinde (dış çap) olduğu ısmarlama elmas bıçak kullanarak 90 ° açıyla pipet. </li><li> Ucuna doğru daha da elmas bıçak taşı ve kademeli elmas bıçakla ucunda basınç uygulayın. Pipet ucu tarif edildi noktada temiz ayrılmalıyız. </li></ol> Alternatif olarak 3.1 adımları3.4 kombine edilebilir ve böyle bir büyük uç çapı ve temiz kesim kenarları ile güvenilir pipetler çekmek için daha zor kanıtlayabilirim rağmen pipetler, doğrudan pipet ucu kesmek zorunda kalmadan istediğiniz boyutları ile çekilebilir. <ol start="5"><li> Bir 40x hedefi kapsamında, bir elektrikle ısıtılan filaman kullanan 5 mikron bir iç çapa pipet ucu lehçe ateş. Bittiği zaman, mikropipet fare ORNs gelen kayıt akımları için kullanılmak üzere hazırdır. Ringer ile dolu olduğunda açık bir pipet direnç 1 MQ civarında olmalıdır. </li></ol> 4. Olfaktör Reseptör Nöronlar İzolasyonu <ol><li> Kurumsal düzenlemeler ve yönetmelikleri takip fare Kurban. , Baş kaldır sıyırın cilt kafatasını örten ve medial orta hat boyunca kafasını ikiye bölmek. </li><li> Diseksiyon stereomikroskop altında iki hemi-kafa yerleştirin, nazal septum koparmak ve koku konkalar çıkarın. Glukoz c ile bir Petri kabındaki tüm doku yerleştirinMemeli Ringer solüsyonu ontaining. </li><li> İki konkalar gelen Altta bulunan kıkırdak kapalı olfaktör epitel soyun ve 250 ul Ringer içeren bir Eppendorf tüp içine doku transferi. Biz kayıt odasının boyutları için hücrelerin sağındaki yoğunluğu elde etmek için 2 konka doku kullanın. ° C daha sonra kullanmak için 4 de kalan doku saklayın. </li><li> Orta hızda 1 saniye boyunca iki kez kısaca olfaktör epitel içeren Vorteks Eppendorf tüp. Bu adım, epitel ORNs mekanik ayrışma yol açar. </li><li> Kayıt odasında ayrışmış ORNs içeren Ringer solüsyonu yerleştirin. Ince forseps kullanarak süspansiyonda da mevcut doku büyük parçalarını çıkarın. </li><li> ORNs Ringer sürekli superfusion başlamadan önce 20 dakika boyunca yerleşmek ve kayıtları devam edelim. </li></ol> 5. Kayıtlar <ol><li> Kayıt odasına ve Regul içine yağ hattına bağlı emme elektrotu Altpipet ucu hafifçe pozitif basınç oluşturmak için yağ haznesinin yüksekliği yedik. Bu pipetle (pozitif basınç) veya (negatif basınç) uzağa doğru hareket eden örneğin hücre artıkları gözlemlenerek yapılmaktadır. Hücre artıkları ile pipet ucu kontamine çalışın. </li><li> 20-40x bir büyütme kullanarak tipik bipolar morfolojisi tarafından kabul edilebilir bir izole ORN için kayıt odasına tarayın. ORN hücre vücudun yakın içine kayıt elektrodu taşıyın. Yavaşça hücre gövdesi pipet ucu girer böylece emmeye başlar. Yavaş ve dikkatli bir bütün hücre gövdesi banyo çözeltisine maruz dendrit ve kirpikler bırakarak, emme pipet ucu içine çekilir kadar emme uygulanmaya devam eder. Sucked ORNs Pipet ve biçimlere ait görüntüler için 7,11 bkz. Emme yok, bir kez uygulandığında, ORN pipet hareket ya da dışarı gelmez emin olun. Bu durumda, buna göre yağ rezervuar yüksekliğini ayarlamak. </li><li> Kullanmamikromanipülatörler, odanın kayıt bölümünde yerleşik ORNs içeren bölüm gelen emme pipet hareket eder. Çözelti değişimi için 3-namlulu tüp önünde emme pipet dikkatli bir şekilde yerleştirin. ORN böylece karıştırma sarsıntıları önleyen bir laminer akış maruz kalmışsa ve hızlı çözüm döviz elde etmek, böylece emiş pipet yeterince yakın 3 namlulu tüpünün açılması konulmalıdır. Çözelti değişimi emme pipet ucu boyunca akan çözelti paralel akış arasındaki ara basamak ile elde edilir. Çözümü değişim zamanı ders genellikle farklı iyonik kompozisyon çözümleri arasındaki hücre (bkz. Şek. 2) atlama tarafından uyarılmış kavşağından mevcut ölçülen yaklaşık 20 ms olduğunu. Çözümler yerçekimi tarafından teslim edilir. </li></ol> &lt;span class = "pdflinebreak"&gt; 6. Temsilcisi Sonuçlar <img alt="Şekil 1." src="/files/ftp_upload/3862/3862fig1.jpg"> Şekil 1. Koku ampul A) Bipolar reseptör nöronları. B) kirpikler içinde sinyal transdüksiyonu amaçlı nihai akım akışı eksitatör yol açar. Izleyen depolarizasyon hücre gövdesinde aksiyon potansiyeli oluşturma tetikler. <img alt="Şekil 2." src="/files/ftp_upload/3862/3862fig2.jpg"> Şekil 2, çözelti değişimi hızı ve güvenilirliği gösterir. Bir pipet 100 ms ve farklı iyon konsantrasyonu kaynaklanan kavşak mevcut kaydedildi% 10 sulandırılmış Ringer içine normalden adım atıldı. Siyah iz ave olduğunu5 çalışmaların öfke, kırmızı onun SD iz. Çözüm değişim sırasında SD küçük bir değişiklik deneme deneme ve çözüm akarsu ya aşırı gürültü olmaması çözüm Döviz güvenilirliğini ispatlıyor. <img alt="Şekil 3,." src="/files/ftp_upload/3862/3862fig3.jpg"> Şekil 3, emme pipet tekniği kullanılarak bir ORN bir öjenol bağlı tepki gösterir. Kayıt üstündeki çubuğu tarafından belirtildiği gibi ORN 1 saniye için 100 mcM eugenol maruz kalmıştır. Şek. Sadece mevcut reseptörüne görüntülemek için 50 Hz Şekil - 3A (siyah iz) reseptör mevcut bant genişliği, 0 süzüldü.. 5000 Hz (kırmızı iz) de aksiyon potansiyelleri (oklarla gösterilen AP), görüntülemek için - 3B şimdi 0 geniş bant aralığında filtre aynı kayıt gösterir. Ilave tepki başlangıcında, daha açık bir şekilde AP görselleştirmek için genişletilmiş bir zaman ölçeği de aynı eser göstermektedir. <img alt="Şekil 4." src="/files/ftp_upload/3862/3862fig4.jpg" files> Bir öjenol-duyarlı ORN Şekil 4. Doz-tepki aile (A). Eugenol 0.3 uM ila 100 uM arasında değişen konsantrasyonlarda kullanılan, uyaran süresi 1 sn oldu ve izleri 0 süzülmüş edildi - 50 Hz. Odorant konsantrasyonu ilerleyen artışa odorant pozlama sonlandırıldı kez de daha yavaş sona daha büyük ve daha hızlı yanıt yol açtı. ORNs ara odorant konsantrasyonları (Şekil 4B) itibariyle uzun uyarımlar esnasında salınımlı yanıtı desenini görüntüleyebilirsiniz. İşte bir acetephenone (3 uM) duyarlı ORN 8 saniye uyarıldı. Stimülasyon başlangıcında hızlı ve geçici pik cevaptan sonra küçük, yinelenen yanıtları bir dizi izlenir. 50 Hz - Kayıt bant genişliği 0 oldu.

<ol><li>Reisert, J., Zhao, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Perspectives+on%3A+Information+and+coding+in+mammalian+sensory+physiology%3A+Response+kinetics+of+olfactory+receptor+neurons+and+the+implications+in+olfactory+coding%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Gen.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Perspectives on: Information and coding in mammalian sensory physiology: Response kinetics of olfactory receptor neurons and the implications in olfactory coding.</a> J. Gen. Physiol. 138, 303-310 (2011).</li>
<li>Kaupp, U. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Olfactory+signalling+in+vertebrates+and+insects%3A+differences+and+commonalities%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Rev.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Olfactory signalling in vertebrates and insects: differences and commonalities.</a> Nat. Rev. Neurosci. 11, 188-200 (2010).</li>
<li>Tirindelli, R., Dibattista, M., Pifferi, S., Menini, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((From+pheromones+to+behavior%5BTitle%5D)+AND+%22Physiol.+Rev%22%5BJournal%5D)">From pheromones to behavior.</a> Physiol. Rev. 89, 921-956 (2009).</li>
<li>Kleene, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+electrochemical+basis+of+odor+transduction+in+vertebrate+olfactory+cilia%5BTitle%5D)+AND+%22Chem.+Senses%22%5BJournal%5D)">The electrochemical basis of odor transduction in vertebrate olfactory cilia.</a> Chem. Senses. 33, 839-859 (2008).</li>
<li>Baylor, D. A., Lamb, T. D., Yau, K. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Responses+of+retinal+rods+to+single+photons%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Responses of retinal rods to single photons.</a> J. Physiol. 288, 613-634 (1979).</li>
<li>Wang, J., Kefalov, V. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Single-cell+Suction+Recordings+from+Mouse+Cone+Photoreceptors%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Vis.+Exp%22%5BJournal%5D)">Single-cell Suction Recordings from Mouse Cone Photoreceptors.</a> J. Vis. Exp. (35), e1681(2010).</li>
<li>Lowe, G., Gold, G. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+spatial+distributions+of+odorant+sensitivity+and+odorant-induced+currents+in+salamander+olfactory+receptor+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Physiol%22%5BJournal%5D)">The spatial distributions of odorant sensitivity and odorant-induced currents in salamander olfactory receptor cells.</a> J. Physiol. 442, 147-168 (1991).</li>
<li>Reisert, J., Matthews, H. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Na%2B-dependent+Ca2%2B+extrusion+governs+response+recovery+in+frog+olfactory+receptor+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Gen.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Na+-dependent Ca2+ extrusion governs response recovery in frog olfactory receptor cells.</a> J. Gen. Physiol. 112, 529-535 (1998).</li>
<li>Reisert, J., Matthews, H. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adaptation+of+the+odour-induced+response+in+frog+olfactory+receptor+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Adaptation of the odour-induced response in frog olfactory receptor cells.</a> J. Physiol. 519, 801-813 (1999).</li>
<li>Matthews, H. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+compact+modular+flow+heater+for+the+superfusion+of+mammalian+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Physiol%22%5BJournal%5D)">A compact modular flow heater for the superfusion of mammalian cells.</a> J. Physiol. 518P, 13(1999).</li>
<li>Reisert, J., Matthews, H. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Simultaneous+recording+of+receptor+current+and+intraciliary+Ca2%2B+concentration+in+salamander+olfactory+receptor+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Simultaneous recording of receptor current and intraciliary Ca2+ concentration in salamander olfactory receptor cells.</a> J. Physiol. 535, 637-645 (2001).</li>
</ol>

Yazarlar ifşa etmek başka bir şey var.

<p class="jove_content"&gt; Emme pipet teknik aynı zamanda bir ORN gelen koku ile endüklenen yavaş reseptör akım ve bifazik hızlı aksiyon potansiyelleri kaydetmek için kullanılan bir elektrofizyolojik yöntemdir. Hücrenin, plazma membranında bozulmaması için, bu yöntem odorant hücre içi tepkileri faktörlerin sitoplazmik iyon konsantrasyonu ya da seyreltme değişikliklere bağlı olarak değiştirilmiş sağlamak yer bozulmamış hücre içi ortamı terk eder. Hücreleri uzun süreler (fare kurbağa ve 1 saat en fazla 4 saat) için kaydı alınabilir. Hücre gövdes...

<table border="1"><tbody><tr><td> Malzeme Adı </td><td> Tip </td><td> Şirket </td><td> Katalog / Model numarası </td><td> Yorumlar </td></tr><tr><td> Hava tablosu </td><td> ekipman </td><td> Newport </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Hava Pompası </td><td> ekipman </td><td> Newport </td><td> ACGP </td><td></td></tr><tr><td> Pipet Çektirme </td><td> ekipman </td><td> Sutter </td><td> P-97 </td><td></td></tr><tr><td> Borosilikat cam </td><td> ekipman </td><td> TEFE </td><td> 1B150-4 </td><td></td></tr><tr><td> Nikon Eclipse Ters mikroskop </td><td> ekipman </td><td> Nikon </td><td> TE2000U </td><td> Hg lambası, GFP filtresi ve hedefleri 20X ve en az 5X ile donatılmış </td></tr><tr><td> Amplifikatör PC-501A </td><td> ekipman </td><td> Warner </td><td> 64-0008 </td><td> Headstage 1 GΩ </td></tr><tr><td> Elmas bıçak </td><td> Ekipman </td><td> Ismarlama </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Sayısallaştırıcı Mikro1401 A / D </td><td> ekipman </td><td> Cambridge Elektronik Tasarım </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Filtre ünitesi 3382 </td><td> ekipman </td><td> Krohn Hite kurumlar </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Sinyal </td><td> yazılım </td><td> Cambridge Elektronik Tasarım </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Ag / AgCl Pelet Molded </td><td> ekipman </td><td> TEFE </td><td> 64-1297 </td><td></td></tr><tr><td> Pipet tutucu </td><td> ekipman </td><td> Warner </td><td> 64-0997 </td><td> Özel uyacak şekilde değiştirilmiş headstage </td></tr><tr><td> Kayıt odası </td><td> Ekipman </td><td> Ismarlama </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Mikromanipülatör MP85-1028 </td><td> ekipman </td><td> Sutter Instrument </td><td> Mikromanipülatör MP85-1028 </td> &lt;td&gt; </td></tr><tr><td> Madeni yağ </td><td> Çözüm </td><td> Sigma </td><td> 330779-1L </td><td></td></tr><tr><td> Osiloskop TDS 1001 </td><td> ekipman </td><td> Tektronix </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Üç namlulu kare cam tüp </td><td> Ekipman </td><td> Warner </td><td> 64-0119 </td><td> 5 cm uzunluğunda 0.6 mm ID, </td></tr><tr><td> Valf </td><td> ekipman </td><td> Lee Şirketi </td><td></td><td></td></tr><tr><td> ValveLink 8.2 </td><td> ekipman </td><td> Bilimsel otomatikleştirin </td><td></td><td></td></tr><tr><td> SF-77B Perfüzyon hızlı adım </td><td> ekipman </td><td> Warner </td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

emme pipet tekniği kullanılarak olfaktör reseptör nöronlar kaydedilmiş odorant bağlı cevapları

Odorant-induced Responses Recorded from Olfactory Receptor Neurons using the Suction Pipette Technique

Hayvanlar burun boşluğunda bulunan kimyasal duyusal sistemleri aracılığıyla çevrelerindeki kokulu ortamda tadabilirsiniz. Kimyasal duyusal sinyaller gibi yiyecek seçimi, yırtıcı, conspecific ve eşini tanıma ve diğer sosyal ilgili ipuçları gibi karmaşık davranışları etkiler. Olfaktör reseptör nöronları (ORNs) olfaktör epitel gömülü nazal kavite dorsal kısmında yer almaktadır. Bunlar bipolar nöronların (bkz. Şek. 1, başlangıçta Genel Fizyoloji Dergisi&#39;nde yayınlanan Reisert &amp; Zhao 1) koku ampul bir akson göndermek ve koku kaplayan mukus içine nereye kirpikler yayar gelen epitelyal sınırına tek bir dendrit uzatmak epitel. Kanal (Şekil 1) - tüyler sonuçta silier transdüksiyonu kanalları, siklik nükleotid-geçiş (CNG) kanal ve bir Ca2 + ile aktive Cl arasından akım akışına neden olmaktadır eksitatör sinyal transdüksiyonu amaçlı içerir. Ensuing depolazasyon hücre gövdesi 2-4 aksiyon potansiyeli oluşturma tetikler. Bu videoda ORNs gelen odorant bağlı yanıtları kaydetmek için &quot;emme pipet tekniği&quot; kullanımını açıklar. Bu yöntem ilk çubuk fotoreseptör 5 kayıt yapmak geliştirilmiş ve bu yöntem bir varyantı fare koni fotoreseptör 6 kaydetmek için modifiye jove.com bulunabilir. Emme pipet tekniği daha sonra da ORNs 7,8 kayedetmek uyarlanmıştır. Kısaca, koku ve epitel hücre izolasyon ayrışma takiben, ORN, tüm hücre gövdesi bir kayıt pipet ucu içine çekilmektedir. Dendrit ve kirpikler banyo solüsyonu maruz ve örneğin odorant veya farmakolojik engelleyici uygulamayı etkinleştirmek için çözüm değişiklikleri böylece erişilebilir kalır. Bu yapılandırmada, intraselüler çevreye hiçbir erişim elde edilir (hayır tam hücreli gerilim kelepçe) ve hücre içi voltajı değişir serbest kalır. Bu, tümkirpikler ve hücre gövdesi 9 tarafından ateş hızlı aksiyon potansiyelleri de kaynaklanır yavaş reseptör akımı eş zamanlı kayıt OWS. Bu iki sinyal arasında kinetikleri farkı da farklı filtre ayarları kullanılarak ayrılması için olanak sağlar. Bu teknik, her vahşi tip ya da knockout farelerde kullanılabilir veya aynı zamanda ORNs belirli alt etiket GFP ifade ORNs dan seçici olarak kaydetmek için, örneğin, belirli bir odorant reseptör veya iyon kanalı eksprese eden.

Olfaktör reseptör nöronları (ORNs) bir reseptör içine ilk sırayla koku ampul içinde ikinci dereceden nöronlara iletilir aksiyon potansiyelleri tetikleyen güncel koku sinyalleri dönüştürmek. Burada aynı anda odorant bağlı reseptör fare ORNs mevcut ve aksiyon potansiyelleri kaydetmek için emme pipet tekniği tarif.

Emme Pipet Tekniği kullanılarak Olfaktör Reseptör Nöronlar Kaydedilmiş odorant bağlı Cevapları

Hayvanlar, burun boşluğunda bulunan kemosensör sistemler aracılığıyla çevrelerindeki kokulu ortamdan örnekleme yaparlar. Kemosensör sinyaller, karmaşık...

Bu prosedürün genel amacı, fare olfaktör reseptör nöronlarından odorant kaynaklı yanıtları kaydetmektir. Bu işlem, öncelikle olfaktör epitelin diseke edilmesi ve fare olfaktör reseptör nöronlarının izole edilmesiyle gerçekleştirilir. İkinci adım, izole edilen olfaktör reseptör nöronlarının evirtilmiş bir mikroskoba monte edilmiş bir kayıt odasına yerleştirilmesidir.Mikromanipülatörler, kayıt elektrodunu ve çözelti değiştiriciyi tutar. Ardından, tanımlanmış bir olfaktor reseptör nöronu, bir vakum pipeti elektrodunun ucuna çekin. Son adım, ucunda çekilmiş hücre bulunan pipeti, nöronu koku maddelerine maruz bırakmak için bir çözelti değiştiricinin önüne yerleştirmektir.Nihayetinde, koku reseptör nöron fonksiyonunu incelemek için vakumlu pipet kayıt yöntemi kullanılır. Bu tekniğin, tüm hücre voltaj klemp tekniği gibi mevcut yöntemlere göre temel avantajı, hızlı ve hassas çözelti değişimleri kullanarak uzun kayıt sürelerine olanak tanımasıdır. Kayıt pipetinin şekli önemli olduğundan ve soket hücrelerin pipet ucuna stabil bir şekilde yerleştirilmesi öğrenilmesi zor bir işlem olduğundan, bu yöntemin görsel gösterimi kritik öneme sahiptir.Bu prosedüre, uzun konik uçlu bir mikro pipet çekic

odorant-induced-responses-recorded-from-olfactory-receptor-neurons

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Sinirbilim

Electroolfactogram (EOG) kayıt koku epiteli düzeyinde koku alma fonksiyonu değerlendiren bir bilgilendirme yapmak için kolay ve güvenilir bir yoldur. Bu protokol bir kayıt kurulum, fare doku hazırlanması, veri toplama ve temel veri analizi açıklar.

Hava-faz Electroolfactogram Kayıt Fare Koku Duyu Nöronlar analizi Yanıtları

Bu video, farelerde koku alma duyusal nöronlarının (OSN'ler) delikli bir yama kelepçesi tekniği kullanılarak elektrofizyolojik kaydını göstermektedir. Florofor etiketli koku reseptörlerine sahip OSN'leri içeren koku alma epiteli, bir fareden izole edilir ve bir kayıt odasında sabitlenir. Bir kayıt pipeti, bir OSN'nin dendritik topuzuna kenetlenir ve pipet içindeki nistatin, hücre ile elektriksel bağlantı oluşturmak için zarı deler. Son olarak, bir koku uyarıcısı vermek için başka bir pipet...

Farelerde Koku Alma Duyu Nöronlarının Delikli Yama-Kelepçe Kaydı

Protokol videosu, farelerde vomeronazal organın (VNO) duyusal nöronlarından elektrofizyolojik kayıt için bir tam hücre yama kelepçesi oluşturmayı açıklar. Floresan olarak işaretlenmiş duyusal nöronlara sahip bir koronal VNO dilimi, bir kayıt kurulumuna yerleştirilir. Etiketli bir nöron, kimyasal uyaranlara yanıt olarak elektrofizyolojik kayıt için tüm hücre konfigürasyonunda bir kayıt pipeti ile yamalanır.

Vomeronazal Duyusal Nöronlardan Elektrofizyolojik Kayıt için Tam Hücre Yama Kelepçesi Oluşturulması

Bu videoda, canlı bir Drosophila sineği elektrofizyolojik çalışmalar için bir tüpe monte edilmiştir. Elektrotlar, sineğin koku alma reseptör nöronları ile feromonlara spesifik nöronal tepkileri kaydetmek için sensillumun tabanına yerleştirilir.

Drosophila Sensilla'dan Uçucu Koku Maddelerine Yanıt Olarak Elektrofizyolojik Kayıtlar

Biz omurgasız koku yolunun ilk üç aşamada koku-uyarılmış yanıtlar karakterize etmek ekstraselüler çoklu ünite kayıt tekniği varyasyonları göstermektedir. Bu teknikler kolayca başka sinir sistemlerinin topluluk etkinliği incelemek için adapte edilebilir.

Locust Sinir Aktivitesi Karakterize Multi-ünite Kayıt Yöntemleri (<em&gt; Schistocerca Americana</em&gt;) Olfaktör Devreler

Koku alma duyusal nöronlarının fizyolojik özelliklerini analiz etmek hala teknik sınırlamalarla karşı karşıyadır. Burada, gen hedefli farelerde koku alma epitelinin sağlam bir preparasyonu içinde delikli yama klempi yoluyla kaydediyoruz. Bu teknik, membran özelliklerinin karakterizasyonuna ve tanımlanmış koku alma reseptörlerini eksprese eden nöronların spesifik ligandlarına verilen yanıtlara izin verir.

Bozulmamış neuroepithelium Fare Koku Duyu Nöronlar Delikli Patch-kelepçe Kayıt: Bir Belirlenen Odorant Reseptör ifade Nöronlar Fonksiyonel Analiz

Tahtakuruları, ortamdaki semiyokimyasalları tespit etmek için anten koku alma duyularında bulunan koku alma reseptörü nöronlarına güvenir. Tek sensillum kaydını kullanarak, tahtakurusunun semiokimyasallara tepkisini değerlendirmek ve ilgili kodlama sürecini keşfetmek için bir yöntem gösteriyoruz.

Semiokimyasallar için yatak hataların Koku Nöron Cevapları Algılama Tek Sensillum Kaydı Kullanma

Işlev propil reseptörlerinin karakterize vazgeçilmez bir parçası deorphanization süreç içinde hizmet vermektedir. Biz gerçek zamanlı bir kamp tahlil kullanarak propil reseptörleri aktivasyonu ölçmek için bir yöntem açıklanmaktadır.

Canlı hücre ölçüm propil reseptörü harekete geçirmek kullanımı gerçek zamanlı bir kamp tahlil

Bu protokolün genel amacı, uzun zincirli kütiküler feromonlara tepki gösteren Drosophila olfaktör reseptör nöronlarından tek duyarlılık kaydı için düşük uçuculukta odorantları nasıl göstereceğini göstermektir.

Elektrofizyolojik Kayıt<em&gt; Drosophila</em&gt; Düşük Volatilite Kokularına Karşı Trikoid Sensilla

Fizyolojik açıdan, propil reseptörleri buharı aşamasında inhale propil moleküller tarafından etkinleştirilir. Ancak, en tüp bebek sistemleri sıvı faz propil stimülasyon yararlanmak. Burada, propil reseptör etkinleştirme propil stimülasyon buharı faz üzerine gerçek zamanlı tüp bebek izleme sağlayan bir yöntem mevcut.

Gerçek zamanlı olarak buharı aşamasında propil reseptör etkinleştirme bir propil tarafından in Vitro izlenmesi

Koku sinirinden ekstrasellüler çok üniteli kayıt, deniz balıklarında koku alma hassasiyetini değerlendirmek için hassas, sağlam ve tekrarlanabilir bir yöntemdir. Birincil duyusal girişi kaydeder ve dış tuzluluktan bağımsızdır.

Teleostların Koku Sinirinden Ekstrasellüler Çok Birimli Kayıt

Öğrenin emme pipet tekniği ile fare olfaktör reseptör nöronlarından reseptör akımları ve aksiyon potansiyelleri kaydetmeyi. Bu yöntem koku sinyal iletimini incelemek için kullanılır.

Emme Pipet Tekniği kullanılarak Olfaktör Reseptör Nöronlar Kaydedilmiş odorant bağlı Cevapları

Daha fazla video keşfet