Name: Aşılar Fare yanıtlar içinde Nazofaringeal ilişkili lenforetiküler Doku (NALT) Rolü incelenmesi (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-08-01T12:00:00.000+00:00
Duration: 12 min 21 s
Description: Öğrenin farelerde nazofaringeal ilişkili lenforetiküler doku (NALT) ve intranazal aşılara bağışıklık yanıtlarını incelemek için cerrahi modelleme ve ekzivo kültür yöntemlerini. Bu teknik aşı etkinliği araştırmalarına katkı sağlar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Destek Becton Dickinson Technologies tarafından sağlanmıştır. Bu teslimiyet ifade Görüntüleme yazarlara aittir ve ABD hükümetinin resmi politikasını yansıtması iddiasında değildir. Araştırma Hayvan Refahı Yasası hayvanların ve Laboratuvar Hayvanlarının Bakımı ve Kullanımı, Ulusal Araştırma Konseyi, 1996 Kılavuzunda belirtilen esaslara yapışır kapsayan hayvan ve deneyler ile ilgili diğer federal kanun ve yönetmeliklere uygun olarak yapılmıştır. Bu araştırma yapılmıştır tesis Laboratuar Hayvan Bakımı Uluslararası Değerlendirme ve Akreditasyon Derneği tarafından tamamen akredite edilmiştir.

1. NALT Toplanması ve Kültüre Alınması <ol><li> Onaylanmış IACUC rehberlik kullanarak farelerde Euthanize. NALT etkileyebilecek uçucu anestezik maddeler kullanmaktan kaçının. Aseptik bir çalışma alanı veya biyogüvenlik kabini fareler aktarın. Farenin alt çene çıkarın ve alkol ve iyot mendil ile üst damak temizleyin. </li><li> Dikkatli fare kesici ve azı dişlerin iç kontur takip ederek üst damak kesilmiş ve tüketim için cerrahi bıçak sapı bir No 11 cerrahi bıçak kullanın. </li><li> Damak gözyaşı özen forseps ile yavaşça geri soyma damak. </li><li> Bu adımda kültürlerin kirlenme azaltmak için gerekli olan ve çok sayıda damakları işlenmesi için tasarlanmıştır. Yer damakları steril bir 48-kuyulu plakalı tam kültür ortamı 250 uL ile önceden doldurulmuş birinci sütunda bireysel kuyulara (37 ° C)% 10 fetal bovin serumu, 100 ug / ml streptomisin, 100 ile takviye edilmiş RPMI 1640 oluşan UI / mL penisilin, 50 ug / ml gentamisinve 1 mcg / mL fungizone / amfoterisin. Ortam damakları bir% 5 CO2 /% 95 nemli hava inkübatöründe (37 ° C), ya da alternatif olarak non-CO 2 kültürü için 10 mM Hepes pH 7.4, kullanmak kültürlenmiştir halinde tamponlu karbonat olmalıdır. </li><li> Damakları yıkamak için, damak sekiz yıkar toplam uğramıştır kadar dikkatle, yıkar arasındaki plaka dokunarak, arka arkaya birbirini izleyen her kuyuya damakları taşımak için forseps kullanabilir. </li><li> Kuyularda taze, tam kültür ortamı (37 ° C) 250 uL içeren yeni bir steril 48-iyi plakasına damakları aktarın. </li><li> Çalışma süresi boyunca kültür için bir 37 ° C inkübatöre damakları ihtiva eden plakalar yerleştirin. </li><li> Aseptik taze 37 ° C kültür ortamı 100 mcL ile değiştirerek, Eppendorf tüpleri her 24 saat içine kültür kuyulardan orta 100 uL aktararak analiz için numune toplayın. </li><li> Pelet kalıntı ila 10 dakika, 4 ° C&#39;de, 380 x g&#39;de santrifüje kültür ortamı örnekleri. </li><li> Analiz etmek için hazır olana kadar -20 ° C&#39;de taze Eppendorf tüpleri ve mağaza santrifüje örnekten süpernatant aktarın. </li><li> Antijen spesifik IgG, IgM ve IgA, veya salgılanan sitokinler standart enzim bağlı immünosorbent testler (ELISA) ile doku kültürü Süpernatantları ölçülür. </li></ol> 2. NALT Cerrahi Ablasyon <ol><li> Dişi BALB / c farelerine, yaş, 7-9 haftalık, uygun bir konu bulunmaktadır, fakat diğer suşlar da kabul edilebilir. Ameliyat sonrası idare edilecektir yiyecek ve su yerine fare gelmesini üç gün önce ameliyat jel gibi ıslak gıda sağlayın. </li><li> Ameliyat öncesi ağız boşluğuna Metacam ağrı kesici (1.5 mg / ml ya da 0.05 mg / damla) ve bir damla idare. </li><li> Bir ketamin, Acepromazine, ve karışım Xylazine (KAX) ile, örneğin, uygun IACUC yol kullanılarak farelerin uyuşturmak ve kurumasını önlemek için göz üzerine Puralube Vet Merhem uygulanır. NALT etkileyebilecek uçucu anestezik maddeler kullanmaktan kaçının. Anesthesia ayak yumuşak bir kıstırma için refleks yanıtın yokluğunda tarafından teyit edilebilir. </li><li> Subkutan cerrahi sonra fare potansiyel dehidratasyonu önlemek için 22-28 gauge iğne ve şırınga kullanılarak kürek kemikleri arasında 1 ml serum fizyolojik (% 0.9 sodyum klorür enjeksiyonu USP) yönetin. Ayrıca ameliyat sırasında ve sonrasında sağlıklı solunum tanıtmak için 22-28 gauge iğne ve şırınga kullanılarak kürek kemikleri arasında subkütan Respiram 0,1 ml yönetmek. </li><li> Daha sonraki tüm manipülasyonlara sırasında fare termal destek sağlayın. </li><li> Bir yatar pozisyonda anestezi fare yerleştirin ve hafifçe damağın üst açığa ağzı açık gözetlemek alt ve üst dişlerin etrafında cerrahi dikiş iki ayrı döngüler kullanın. </li><li> NALT yerinde üst damağın orta hatta aşağı uzunluğunda bir kesi yaklaşık 3 mm yapmak için bir 11 No&#39;lu cerrahi bıçak kullanın. </li><li> Insizyon içine 0.5 mm microcurette yerleştirin ve hafifçe kenarından kazıyarakNALT bozabilir. </li><li> Bir termal koter ünitesi üzerinde bir düz ince döngü ile kanamayı durdurmak için kesi dağlamak. </li><li> Fare tam bilinç ve aktivite kurtarır ise termal destek devam edin. </li><li> 3 gün sonra ameliyat için günde bir kez gerekli ve ağızdan ağrı kesici ilaç gibi su kaybını önlemek için tuzlu subkutan kadar günde üç kez, kürek kemikleri arasında enjeksiyon başına 1 ml ile fare sağlayın. Derinin turgor kontrol etmek için bir cilt çadır testi tarafından dehidratasyon belirleyin. O kadar tente edilir, böylece kanatlar omuzları ile deri ve kürk kavrayabilir. Cilt hemen normal, önceki konumuna geri döner, fare susuz değildir. Cilt yüksek kalır ve yavaş hareket ederse, fare dehidratasyon bir devlet olduğunu ve tuzlu gerektirir. Kurtarma için yeterli zaman tanımak için ameliyattan sonra en az üç gün ıslak gıda sağlayın. </li><li> Herhangi bir deneysel işlemler öncesinde, kilo takip ederek 8-10 gün süreyle fareler gözlemlemek. Kötü ağırlığı kurtarmagenellikle tamamlanmamış damak iyileşme gösterir ve bu farelerin daha çalışmalardan kesilmelidir. </li></ol> 3. Histoloji için NALT hazırlanması ve NALT Cerrahi Başarı Değerlendirme <ol><li> Aşağıda tarif edildiği gibi NALT cerrahiye histolojik tarafından tespit olmalıdır. Tüm deneysel çalışmalar tamamlandıktan sonra, onaylanan IACUC rehberlik kullanarak euthanizing tarafından kranial koleksiyonları için fareler hazırlamak. NALT etkileyebilecek uçucu anestezik maddeler kullanmaktan kaçının. </li><li> Ötanazi farenin ense kavrayın. Her iki tarafta makas ile kondiler süreçlerle kırpma tarafından kafatası geri kalanından alt çene çıkarın. </li><li> Ense başlayarak, yavaş yavaş soyma ve kafatası ventral tarafına doğru keserek kafatası deri ve kürk çıkarın. </li><li> Dikkatle burun çevresindeki deri kaldırmak ve tamamen kaldırmak için burun ucunun kapalı cilt snip. </li><li> Omurlar zekâ gelen kafatası ayırınmakas ha kelepir. </li><li> Foramen magnum içine makas yerleştirin ve sabitleme sırasında yumuşak dokuların içine formalin nüfuz sağlamak için orta hat boyunca kafatası yarıya kadar kesti. </li><li> Nötr 10% in kafatası sabitlemek oda sıcaklığında 24 saat boyunca (NBF) tamponlu formalin. </li><li> Kirecini çıkarmak için, formik asit karışımı ile şişe içinde, kemik dokunmaktan Rexyn önlemek için gazlı bez sarılmış, örnek ve ayrı bir kaset yerleştirin. Oda sıcaklığında 12 saat boyunca inkübe, ardından yaklaşık 20 dakika boyunca su altında sürekli durulanır. </li><li> Bir jilet ile septum ve geçmişte göz yörünge için örnek kesin. </li><li> Örnek ve kaset% 10 NBF kısa süreli saklanabilir. </li><li> Gecede işleme için bir doku örneği işlemci üzerine yerleştirin. Bu parafine gömme hazırlıkları için numune su kaldırmak için yapılır. </li><li> Aşağı burun ile parafin blok gömmek işlenen doku, çıkarın ve soğumaya bırakın. </li><li> R TrimNALT yaklaşık konumunu yaklaşırken otomatik bir mikrotom ile bloğunun ough 15 mikron kesitleri, sonra 44.3 ° C su banyosunda cam slaytlar monte edilmek üzere 5 mikron bölümlerde kesme devam ediyor. </li><li> Hematoksilen ve eozin (H &amp; E) histoloji boyama NALT ablasyon değerlendirmek için kullanılmalıdır. </li></ol> 4. Fare ile Biyolojik örnekler Koleksiyonu 4.1 Serum <ol><li> Dikkatli bir ısı lambası ile vücut ısısı yükselen kan akışı artar. Bir cerrahi bıçak ile yanal kuyruk veni nicklemek kan toplayın. Kan Microtainer serum ayırıcı tüp içine serbestçe damla izin verin. </li><li> Kan akışını durdurmak için, gazlı bez veya havlu gibi emici bir malzeme ile nick hafifçe basınç uygulayın. </li><li> 30 dakika boyunca Microtainers içinde kan pıhtılaşmasına izin, ardından en az 90 saniye boyunca 6-15 x 1000 g arasında santrifüjlenir. </li><li> Için temiz bir Eppendorf tüpüne Microtainer serum ayrılmış aktarınDepolama -80 ° C&#39;de </li></ol> 4.2 Tükürük <ol><li> 20-30 uL steril fosfat pipetleme yanak ve diş eti çizgisi arasında (PBS) tamponlu ise dikey anestezi fare tutun. Yanak ve diş eti çizgisi arasında pipet yönlendirerek seyreltilmiş tükürük toplayın. </li><li> -20 ° C&#39;de 2x proteaz inhibitörü ve mağaza 10 uL içeren taze bir tüpe seyreltilmiş tükürük aktarın </li></ol> 4.3 Burun salgıları <ol><li> Onaylı IACUC rehberlik kullanarak, burun salgıları toplamaya önce fare Euthanize. NALT etkileyebilecek uçucu anestezik maddeler kullanmaktan kaçının. </li><li> Fare Holding dikey, özenle tek burun deliğine steril PBS 30 uL pipetleme ve diğer burun durulama toplamak. </li><li> -20 ° C&#39;de 2x proteaz inhibitörü ve mağaza 10 uL içeren taze bir tüp ile durulanmalıdır transfer </li></ol> 4.4 vajinal salgıları <ol><li> Th açıklığa mikropipet ucu eklemeBir ötenazi fare e vulva, steril PBS 50 uL ile vajina durulayın ve mikropipet bütün sıvı toplamak. </li><li> -20 ° C&#39;de 2x proteaz inhibitörü ve mağaza 10 uL içeren taze bir tüp ile durulanmalıdır transfer </li></ol> 5.. Toplanan örneklerde antijene spesifik antikorlar ya sitokinler ya da başka bir ELISA metodu kantitatif ile ölçülebilir. 6. Temsilcisi Sonuçlar Şekil 1 ex vivo analiz için NALT içeren doku ile ilgili işlem adım, genel bir şematik sağlar. Şekil 2 (A, B) &#39;de, damağın boyut olarak noktalı çizgi ile gösterildiği gibi, Ablasyon cerrahisi sırasında kesi konumu (A) yanı sıra, gösterilmiştir. NALT yerini paralel dokular gösteren, Şekil 2&#39;de, bir çıkarıldı hematoksilin lekeli damağın (C), üzerine premolar alanda oklarla gösterilmiştir. Şekil 3Üst NALT erişim için damağın (A, B), Ablasyon (C), ve kesi (D) nihai koterizasyon maruz gösteren, NALT bozulması cerrahi aşamaları göstermektedir. Doğrudan ameliyat sonrası microcurette tarafından NALT bozulması bir görüntü Şekil 3F görünür ederken ameliyat öncesi NALT çevreleyen nazal sinüs alanının Tipik H &amp; D kesiti, Şekil 3E &#39;de gösterilmiştir. Ameliyat sonrası iyileşme için yeterli zaman kalması insizyonlar kapatılmalı ve NALT (Şekil 3G) nazal kavite yoksun. Bu teknikler kullanılarak elde Tipik bir deney sonuçlarını stafilokok oian alt birim aşı (STEBVax) ile yapılan bir çalışmada doku kültür yüzer ve biyolojik örnekler karşılaştırılarak, Şekil 4 &#39;de gösterilmiştir. Farelerin burun içi (IN) veya intraperitonal (IP) yolları tarafından STEBVax uygulanmıştır. Aşı Toll benzeri reseptör 4 yolu 3,1 aktive bir adjuvan ile formüle edilmiştir<html> 4 ve kontrolleri sadece serum fizyolojik ya da aşının adjuvansız verildi. Deney gruplarında elde edilen ve kültürü NALT ELISA ile ölçülebilir olduğu ortama antijen spesifik immünglobulin salgılanır. Bu örnekte, (Şekil 4A), sonuç IgA büyük miktarlarda yardımcı maddesi ile birlikte, bir alt birim aşı ile aşılanmış fareler elde NALT tarafından yayımlanmıştır göstermektedir. Kontrol veya NALT free fare alınan biyolojik örnekler (serum, tükürük, burun salgıları, vajinal salgılar gibi) doku kültürü sonuçları ile karşılaştırma için burun antijenlere karşı in vivo immün yanıt profil kullanılabilir. Aşılama IN Şekil 4B olarak, IgA ve IgG yanıtları önemli ölçüde fonksiyonel NALT olmadan azalmıştır. Antijene özel IgA seviyeleri aşılanmış farelerin mukozal salgılar IgG (tükürük, burun yıkamalarından) &#39;den, genellikle daha yüksek olmuştur. upload/3960/3960fig1.jpg &quot;/&gt; Şekil 1. NALT toplama ve ex vivo kültür şematik. <img alt="Şekil 2" src="/files/ftp_upload/3960/3960fig2.jpg" /> Şekil 2. NALT ve cerrahi kesi konumunu gösteren fare damak görselleştirilmesi. Boyut ve noktalı çizgi (A) ile gösterilir cerrahi kesi ile üst damak konumu, üst damak eksize (B) veya damak premolar bölgede (damağın ön tarafında lekeli koyu mor paralel NALT görüntülemek için hematoksilen (C) boyandı ). NALT oklarla gösterilen. <img alt="Şekil 3" src="/files/ftp_upload/3960/3960fig3.jpg" /> Şekil 3. Cerrahi NALT bozulması. NALT bozulması cerrahi Anahtar aşamaları: ameliyattan önce farenin üst damak yatar görünümü (A); NALT (B) erişmek için üst damakta yapılan ensizyon; yılında NALT yapısını bozacak ensizyon yoluyla eklenmiş microcurette probtegrity (C), cerrahi (D) sonuca kesi koterizasyon. Cerrahi (E) önce burun boşlukları, H &amp; E boyalı, mikroskobik görüntüler; hemen cerrahi (F) sonra; ve bir başarıyla iyileşti, NALT-ücretsiz fare (G). <img alt="Şekil 4" src="/files/ftp_upload/3960/3960fig4.jpg" /> Şekil 4. Kültürlü NALT, tükürük ve aşılanmış farelerin toplanan burun salgılarından Aşı özgü antikorların. NALT-ücretsiz ya da normal kontrol fareleri IN veya STEBVax IP aşılandı ve biyolojik örnekleri alındı. Üç nüsha numune antikor düzeyleri ELISA yöntemi ile ölçüldü. (A) NALT kontrol fareleri (cerrahi manipüle değil) kaldırılır ve antikor yanıtları incelemek için kültüre edildi. Aşılanmış farelerde IN için kültür aşısı özgül IgA yanıtı (Student t-testi, p ≤ 0.01, hiç adjuvan ya da hiç aşı ile karşılaştırıldığında) kontrol grubundan istatistiksel olarak farklı değildi. (B) NALT kesinti belirli bir ölçüde azaltılmış antikor tepkisiaşı IN. Spesifik antikor düzeyleri arasında anlamlı bir fark yoktu NALT ve NALT tükürük IgG sonuçları (Student t-testi, p ≤ 0.05) hariç tüm karşılaştırmalar için + grup (hiçbir cerrahi ya da kontrol cerrahisi).

<ol><li>Wiley, J. A., Tighe, M. P., Harmsen, A. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Upper+respiratory+tract+resistance+to+influenza+infection+is+not+prevented+by+the+absence+of+either+nasal-associated+lymphoid+tissue+or+cervical+lymph+nodes%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Immunol%22%5BJournal%5D)">Upper respiratory tract resistance to influenza infection is not prevented by the absence of either nasal-associated lymphoid tissue or cervical lymph nodes.</a> J. Immunol. 175, 3186-3196 (2005).</li>
<li>W, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intranasal+immunisation+with+conjugate+vaccine+protects+mice+from+systemic+and+respiratory+tract+infection+with+Pseudomonas+aeruginosa%5BTitle%5D)+AND+%22Vaccine%22%5BJournal%5D)">Intranasal immunisation with conjugate vaccine protects mice from systemic and respiratory tract infection with Pseudomonas aeruginosa.</a> Vaccine. 24, 4333-4342 (2006).</li>
<li>Fernandez, S., Cisney, E. D., Hall, S. I., Ulrich, R. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nasal+immunity+to+staphylococcal+toxic+shock+is+controlled+by+the+nasopharynx-associated+lymphoid+tissue%5BTitle%5D)+AND+%22Clin.+Vaccine+Immunol%22%5BJournal%5D)">Nasal immunity to staphylococcal toxic shock is controlled by the nasopharynx-associated lymphoid tissue.</a> Clin. Vaccine Immunol. 18, 667-675 (2011).</li>
<li>Asanuma, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+and+characterization+of+mouse+nasal-associated+lymphoid+tissue%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Immunol.+Methods%22%5BJournal%5D)">Isolation and characterization of mouse nasal-associated lymphoid tissue.</a> J. Immunol. Methods. 202, 123-131 (1997).</li>
<li>Casteleyn, C., Broos, A. M., Simoens, P., Van den Broeck, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((NALT+%28nasal+cavity-associated+lymphoid+tissue%29+in+the+rabbit%5BTitle%5D)+AND+%22Vet.+Immunol.+Immunopathol%22%5BJournal%5D)">NALT (nasal cavity-associated lymphoid tissue) in the rabbit.</a> Vet. Immunol. Immunopathol. 133, 212-218 (2010).</li>
<li>Debertin, A. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nasal-associated+lymphoid+tissue+%28NALT%29%3A+frequency+and+localization+in+young+children%5BTitle%5D)+AND+%22Clin.+Exp.+Immunol%22%5BJournal%5D)">Nasal-associated lymphoid tissue (NALT): frequency and localization in young children.</a> Clin. Exp. Immunol. 134, 503-507 (2003).</li>
<li>Csencsits, K. L., Jutila, M. A., Pascual, D. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nasal-associated+lymphoid+tissue%3A+phenotypic+and+functional+evidence+for+the+primary+role+of+peripheral+node+addressin+in+na%C3%AFve+lymphocyte+adhesion+to+high+endothelial+venules+in+a+mucosal+site%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Immunol%22%5BJournal%5D)">Nasal-associated lymphoid tissue: phenotypic and functional evidence for the primary role of peripheral node addressin in naïve lymphocyte adhesion to high endothelial venules in a mucosal site.</a> J. Immunol. 163, 1382-1389 (1999).</li>
<li>Zuercher, A. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nasal-associated+lymphoid+tissue+is+a+mucosal+inductive+site+for+virus-specific+humoral+and+cellular+immune+responses%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Immunol%22%5BJournal%5D)">Nasal-associated lymphoid tissue is a mucosal inductive site for virus-specific humoral and cellular immune responses.</a> J. Immunol. 168, 1796-1803 (2002).</li>
<li>Park, H. S., Francis, K. P., Yu, J., Cleary, P. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Membranous+cells+in+nasal-associated+lymphoid+tissue%3A+a+portal+of+entry+for+the+respiratory+mucosal+pathogen+group+A+streptococcus%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Immunol%22%5BJournal%5D)">Membranous cells in nasal-associated lymphoid tissue: a portal of entry for the respiratory mucosal pathogen group A streptococcus.</a> J. Immunol. 171, 2532-2537 (2003).</li>
<li>Tyrer, P., Foxwell, A. R., Cripps, A. W., Apicella, M. A., Kyd, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microbial+pattern+recognition+receptors+mediate+M-cell+uptake+of+a+gram-negative+bacterium%5BTitle%5D)+AND+%22Infect.+Immun%22%5BJournal%5D)">Microbial pattern recognition receptors mediate M-cell uptake of a gram-negative bacterium.</a> Infect. Immun. 74, 625-631 (2006).</li>
<li>Wu, A. W., Russell, M. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nasal+lymphoid+tissue%2C+intranasal+immunization%2C+and+compartmentalization+of+the+common+mucosal+immune+system%5BTitle%5D)+AND+%22Immunol.+Res%22%5BJournal%5D)">Nasal lymphoid tissue, intranasal immunization, and compartmentalization of the common mucosal immune system.</a> Immunol. Res. 16, 187-201 (1997).</li>
<li>Harmsen, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cutting+edge%3A+organogenesis+of+nasal-associated+lymphoid+tissue+%28NALT%29+occurs+independently+of+lymphotoxin-alpha+%28LT+alpha%29+and+retinoic+acid+receptor-related+orphan+receptor-gamma%2C+but+the+organization+of+NALT+is+LT+alpha+dependent%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Immunol%22%5BJournal%5D)">Cutting edge: organogenesis of nasal-associated lymphoid tissue (NALT) occurs independently of lymphotoxin-alpha (LT alpha) and retinoic acid receptor-related orphan receptor-gamma, but the organization of NALT is LT alpha dependent.</a> J. Immunol. 168, 986-990 (2002).</li>
<li>Rangel-Moreno, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Role+of+CXC+chemokine+ligand+13%2C+CC+chemokine+ligand+%28CCL%29+19%2C+and+CCL21+in+the+organization+and+function+of+nasal-associated+lymphoid+tissue%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Immunol%22%5BJournal%5D)">Role of CXC chemokine ligand 13, CC chemokine ligand (CCL) 19, and CCL21 in the organization and function of nasal-associated lymphoid tissue.</a> J. Immunol. 175, 4904-4913 (2005).</li>
<li>Morefield, G. L., Hawkins, L. D., Ishizaka, S. T., Kissner, T. L., Ulrich, R. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Synthetic+Toll-like+receptor+4+agonist+enhances+vaccine+efficacy+in+an+experimental+model+of+toxic+shock+syndrome%5BTitle%5D)+AND+%22Clin.+Vaccine+Immunol%22%5BJournal%5D)">Synthetic Toll-like receptor 4 agonist enhances vaccine efficacy in an experimental model of toxic shock syndrome.</a> Clin. Vaccine Immunol. 14, 1499-1504 (2007).</li>
</ol>

Çıkar çatışması ilan etti.

Biz biyolojik örnekler ve NALT ilişkili immün yanıtlar 1-4 incelenmesi için testler elde, bir hayvan modeli geliştirmek için ortak yöntemler sundu. Bu yöntemlerin uygulanması sırasında dikkate almanız gereken ek faktörler vardır. Cerrahi ve doku kültürü için standart steril teknikler takip edilmelidir. Izolasyon ve kültür gibi sterilize aletler, çalışma alanı ve dezenfekte damak bakımı sırasında kullanılan antibakteriyel ve antifungal bir kombinasyonu bulaşma riskini azaltacaktır. Serum antikorları genellikle yüksek konsantrasyonlarda bulunur gibi tükürük, burun yıkama ve benzeri mukozal sekresyon örnekleri, kan potansiyel kontaminasyon açısından kontrol edilmelidir. Antikorların daha düşük konsantrasyonlarda serumu ile karşılaştırıldığında, bu örnekler mevcut olduğundan daha fazla, mukozal salgılar sadece hafifçe analizi için seyreltilmiştir edilmelidir. Fareler öncesi doğrudan ameliyattan sonra sıcak tutulmalıdırpotansiyel anestezi bağlı hipotermi için önlem alınmalıdır. Onların yüzüne Alternatif dinlenme fareler ameliyat sonrası iyileşme sırasında düzensiz solunum aza indirmek için. Cerrahi işlem bu görevleri tamamlamak için birlikte çalışan üç kişinin daha verimlidir: fareler anestezi kurtarmak olarak cerrahi tedavi bir, ağız açık tutarak yardımcı olmak için, diğeri de ameliyat sonrası bakım sağlamak. Her fare için ameliyatın başarı doğrulamak için tüm deneysel prosedürleri veya çalışmaların sonunda kraniyal kesitler H &amp; E boyama kullanmak gereklidir. Olası cerrahi sonuçlar şunlardır: eksiksiz ve ikili NALT ablasyon, eksik ablasyon, veya bozulmamış NALT. Tüm cerrahi kalıntı veya bozulmamış NALT ile tam NALT kaybı, hayvanlar neden olur, çünkü iç kontroller olarak kullanılabilir. Başka bir olası sonuç damak burun ve ağız boşlukları bağlayan bir açıklık bırakarak, tamamen iyileşmek için başarısız olur. Eksikdamak iyileşme, düşük ağırlığı ve gelişme geriliği neden olacaktır ve bu kişilerin çalışma çıkarılmalıdır. Fare modeli ile ilk aşı yanıtı incelenmesi amaçlanan çalışma sonucu (antikor yanıtı, hayatta kalma, vb) NALT için bir rol kurmak için görev yapacak. Cerrahi NALT kaldırarak yerel ve sistemik bağışıklık burun katkıların belirlenmesi kolaylaştırır. Burada anlatılan cerrahi yaklaşım NALT yoksun bir fare modeli elde etmek için en doğrudan bir yöntemdir. Knock-out fare modelleri seçin eksikliği NALT bildirilmiş, ancak bu hayvanlar da sitokinler veya diğer ikincil lenfoid dokuların gelişimi için gereklidir kemokinler eksik olduğunu ve ek kusurları 12,13 barındıran olabilir edilmiştir. Ayrıca, burada açıklanan yöntemlerden burun pasajda içinde kaynaklanan bağışıklık yanıtlarını çeşitli yönlerini incelemek için geliştirilmiştir. Bizim deney sonuçları tüm üst palat kullanarak çalışmalarına dayanmaktadırdoku kültürü için fare e, bu bölümlerde kullanılan olasıdır ancak. Son olarak, kültür NALT doku kültürü modeli olarak tamamen deneyler için yararlıdır.

<table border="1"><tbody><tr><td> Reaktif Adı </td><td> Şirket </td><td> Katalog numarası </td><td> Yorumlar </td></tr><tr><td> Paslanmaz Çelik Steril Cerrahi Bıçaklar, No: 11 sayılı </td><td> Miltex </td><td> 4-311 </td><td></td></tr><tr><td> Bıçak Kolu, No: 3 </td><td> Miltex </td><td> 4-7 </td><td></td></tr><tr><td> 48-İyi Hücre Kültür Tabaklar </td><td> Costar </td><td> 3548 </td><td></td></tr><tr><td> RPMI 1640 </td><td> Invitrogen </td><td> 11875-093 </td><td></td></tr><tr><td> Fetal Bovine Serum, İnaktive Isı </td><td> Gibco / Invitrogen </td><td> 16000-044 </td><td> Final Conc: kültür ortamına hacimce% 10 </td></tr><tr><td> Streptomisin Sülfat </td><td> Sigma </td><td> S9137 </td><td> Nihai Conc: 100 ug / ml </td></tr><tr><td> Penisilin </td><td> Sigma </td><td> P7794 </td><td> Final Conc: 100 UI / mL </td></tr><tr><td> Gentamisin </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> G1397-10ML </td><td> Final Conc: 50 mcg / mL </td></tr><tr><td> Fungizone </td><td> Gibco / Invitrogen </td><td> 15290-018 </td><td> Final Conc: 1 mcg / mL </td></tr><tr><td> HEPES </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> H0887 </td><td> Nihai Conc: 10 mM </td></tr><tr><td> Eppendorf Mikrosantrifüj Tüpler </td><td> Eppendorf </td><td> 022364111 </td><td></td></tr><tr><td> Nutra-jel Kiraz Aromalı Fare Islak Gıda </td><td> Bio-Serve </td><td> S4798-TEPSİ </td><td></td></tr><tr><td> Metacam </td><td> Boehringer Ingelheim </td><td> 601531000 </td><td> 1.5 mg / mL Oral Süspansiyon bir damla </td></tr><tr><td> Ketamin </td><td> Pfizer </td><td> 00856440301 </td><td> Final Conc: 6.06 mg / ml </td></tr><tr><td> Acepromazine </td><td> Vedco </td><td> VEDC207 </td><td> Final Conc: 0.061 mg / ml </td></tr><tr><td> Ksilazin </td><td> Lloyd </td><td> 4811 </td><td> Final Conc: 0.667 mg / ml </td></tr><tr><td> Puralube Vet Merhem </td><td> Pharmaderm Hayvan Sağlığı </td><td> 1621 </td><td></td></tr><tr><td> % 0,9 Sodyum Klorür USP </td><td> Baxter </td><td> 2B1302 </td><td></td></tr><tr><td> 0,5 mm Microcurette </td><td> Roboz </td><td> RS-6350 </td><td></td></tr><tr><td> Termal Koter Ünitesi </td><td> Geiger </td><td> 150-S/150A-S </td><td></td></tr><tr><td> TCU Değiştirme İpucu, Düz Güzel Döngü </td><td> Geiger </td><td> 214 </td><td></td></tr><tr><td> Cerrahi Makas </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> Nötr% 10 Formalin Tamponlu </td><td> Sigma </td><td> HT501128 </td><td></td></tr><tr><td> Formik asit </td><td> Balıkçı </td><td> A119P-4 </td><td> 1047 ml musluk suyu içine 426 ml formik asit karıştırın, daha sonra 45 ml Rexyn 101 (H) eklemek </td></tr><tr><td> Rexyn 101 (H) </td><td> Balıkçı </td><td> R231-500 </td><td></td></tr><tr><td> Doku-Tek VIP E150/E300 </td><td> Sakura </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Döner Mikrotom </td><td> Leica </td><td> RM2255 </td><td></td></tr><tr><td> Mayer&#39;in Hematoksilen </td><td> Sigma </td><td> MHS16-500ML </td><td></td></tr><tr><td> Gill No.1 Hematoksilen </td><td> Sigma </td><td> GHS116 </td><td></td></tr><tr><td> Eosin B </td><td> Sigma </td><td> 2853 </td><td></td></tr><tr><td> Microtainer Serum Ayırıcı </td><td> BD Medical </td><td> 365956 </td><td></td></tr><tr><td> Fosfat Tamponlu Salin </td><td></td><td></td><td> 100 mM NaH 2 PO 4, 140 mM NaCl, pH 7.4 </td></tr><tr><td> Proteaz İnhibitör Kokteyl, EDTA-free </td><td> Thermo Scientific </td><td> 78415 </td><td></td></tr></tbody></table>

aşılar fare yanıtlar içinde nazofaringeal ilişkili lenforetiküler doku (nalt) rolü incelenmesi

Examining the Role of Nasopharyngeal-associated Lymphoreticular Tissue (NALT) in Mouse Responses to Vaccines

İnsanlarda, kemirgenlerden ve diğer memelilerde bulunan nazofarenks ilişkili lenforetiküler dokular (NALT), 1-3 nazal sinüslerde bağışıklık katkıda bulunur. NALT sert damak yukarıda burun pasajda bulunan iki paralel çan şeklindeki yapılardır ve genellikle mukoza ilişkili lenfoid sistemin 4-6 ikincil bileşenleri olarak kabul edilir. Dendritik hücreler 4,7,8 antijen sunan serpiştirilmiş B ve T lenfositlerinin ayrık bölümlerdir NALT içinde yer alır. Bu hücreler hava yollarını 9,10 mukoza yüzeylerinden antijen alımı için sorumlu M-hücreleri ile ardalanmalı bir epitel hücre tabakası ile çevrilidir. NALT dolaşan Naif lenfositler solunum patojenleri 7 ile ilk karşılaştığında yanıt gurur duyuyoruz. NALT iki yaş insanlarda yok olurken, Waldeyer Yüzükler ve benzer yapıdaki lenfatik organlarda th devam devamömrü 6 roughout. İnsanlarda aksine, farelerin dolayısıyla nazal sinüslerde 11 içinde kaynaklanan immün yanıtların çalışma için uygun bir hayvan modeli sunan, hayatı boyunca NALT korurlar. NALT tek hücre süspansiyonları kültürleri nedeniyle mononükleer hücrelerden, düşük verimler için pratik değildir. Bununla birlikte, NALT biyolojisi bozulmadan organın ex vivo kültürlenmesi ile incelendi ve bu yöntem, doğal doku yapısı sürdürmenin ilave bir avantajı vardır edilebilir. In vivo çalışmalar için NALT sınırlı kusurları başvuran genetik nakavt modelleri gelişim süreçleri zayıf bir anlayış nedeniyle henüz mevcut değildir. Lenfotoksin-α nakavt fareler NALT körelmiş olurken Örneğin, Peyer en yamalar, periferik lenf düğümleri, foliküler dendritik hücreler ve diğer lenfoid dokularda da bu genetik olarak manipüle farelerde 12,13 ile değiştiği saptanmıştır. Gen knockout farelerde alternatif, cerrahi ablasyon p olarakermanently diğer dokulara etkilemeden nazal pasajdan NALT ortadan kaldırır. Çıkan fare modeli aşılar 1,3 NALT ve immün yanıtı arasındaki ilişkileri kurmak için kullanılmıştır. Serum, tükürük, burun yıkama ve vajinal salgıların Seri toplama NALT doğrudan kaynaklanan bağışıklık yanıtlarını doku kültürü ile teyit edilebilir ise, aşı konakçı tepkileri temelinde kurulması için gereklidir. Aşağıdaki yordamlar gerekli ameliyatları, doku kültürü ve örnek toplama intranazal (IN) aşılama için yerel ve sistemik hümoral yanıtlarda incelemek için özetledik.

Intranazal aşılara farelerin burun ve sistemik immün yanıtlar için nazofaringeal ilişkili lenforetiküler dokular (NALT) katkılarını incelemek için Yöntemler açıklanmıştır. Biz NALT bağımlı fare modeli kurmak için bir cerrahi prosedür göstermek ve<em&gt; Ex vivo</emAyıklanan NALT of&gt; kültürleri.

Aşılar Fare yanıtlar içinde Nazofaringeal ilişkili lenforetiküler Doku (NALT) Rolü incelenmesi

İnsanlarda, kemirgenlerde ve diğer memelilerde bulunan nazofaringeal ilişkili lenforetiküler dokular (NALT), nazal sinüslerdeki bağışıklığa katkıda bulunur1-3. ...

Bu prosedürün amacı, nazofaringeal ilişkili lenforetiküler dokular olan NALT'nın, farelerin intranazal aşılarla oluşturulan nazal ve sistemik bağışıklık yanıtlarına olan katkılarını incelemektir. Bu, sağlam NALT'nın ex vivo kültürleri incelenerek gerçekleştirilir; bir fare modelinde sağlam NALT elde edilir ve seriler halinde yıkanarak temizlenir. Ardından dokular kültüre edilir ve belirli aralıklarla örnekler alınır.Bu örnekler santrifüjlenip saklanır ve daha sonra bir bağışıklık yanıtı kanıtı açısından incelenir. Fare burun pasajlarından Nat'ın cerrahi olarak çıkarılması, çevre dokulara zarar vermemek için dikkatle gerçekleştirilir. Cerrahi olarak modifiye edilen fareler deneylere tabi tutulduktan sonra, cerrahinin başarısı histoloji ile değerlendirilir.Nihayetinde, sonuçlar intranazal aşılama sonrası yerel ve sistemik humoral immün yanıtları değerlendirmek için kullanılır. Null'un gelişimsel yolu en azından kısmen tanımlanmış olsa da, tek gen nakavtlarına dayalı null hikayeleri için fare modelleri şu an için mevcut değildir. Tek gen nakavtına alternatif olarak, cerrahi ablasyon, dokuların hiçbirini etkilemeden null'u burun pasajlarından tamamen uzaklaştırmıştır.Bu fare modeli, alt ile aşılar veya antijenler ile lokal ve sistemik immünite arasındaki ilişkiyi tanımlamak için kullanılmıştır. Bu yöntem, farelerin intranazal aşılamalarına karşı gelişen konak yanıtlarının temeli hakkında bilgi sağlayabilse de, nazal immüniteyi etkileyebilecek adjuvanların veya diğer farmasötik ürünlerin incelenmesinde de uygulanabilir. Cerrahi adımların genel ancak zorlayıcı olması nedeniyle bu yöntemin görselleştirilmesi kritiktir; çünkü görüş alanının kısıtlı olduğu küçük bir bölgede çalışılmakta ve hayvanların sağlıklı kalması için prosedürün tamamlanması gereken zaman aralığı oldukça dardır.Alt dolgu toplanmadan önce, 48 kuyucuklu bir kültür plağının tüm kuyucuklarına 250 microliters ısıtılmış besiyeri ekleyin. İkinci bir 48 kuyucuklu plağın bir sütununa da aynısını yapın; her iki plağı da ihtiyaç duyulana kadar sıcak tutun. Fareyi, onaylanmış IACUC kılavuzuna uygun olarak, inhalasyon yoluyla değil, enjekte edilen anestetikler kullanarak ötanize edin. Aseptik bir çalışma alanında, nalt toplamak için öncelikle farenin alt çenesini çıkarın.Ardından, üst damak bölgesini alkollü ve iyotlu mendillerle temizleyin ve 11 numaralı cerrahi bıçak kullanın. Fare kesici ve azı dişlerinin iç konturunu takip ederek üst damağı dikkatlice kesin ve eksize edin. Damağı pensle nazikçe geriye doğru soyun.Paletleri yırtmamaya dikkat ederek; her bir paleti, besi yeri ile doldurulmuş 48 kuyucuklu plakanın ilk sütunundaki bir kuyucuğa toplayın. Paletleri, sıradaki her bir kuyucuğa sırayla taşıyarak yıkayın.Yıkamalar arasında palete dikkatlice vurun. Sekiz yıkamanın ardından, paletleri ikinci plakanın besiyeri dolu bir kuyucuğuna aktarın. Plakayı 37 °C'de kültüre edin. Çalışma süresi boyunca her 24 saatte bir, her kültürden 100 µL besiyeri örneği toplayın.Plakayı inkübatöre geri yerleştirmeden önce medyayı 100 µL taze ısıtılmış kültür medyumu ile değiştirin. Kalıntıları çöktürmek için kültür medyumu örneklerini santrifüjleyin. Süpernatantı taze tüplere aktarın ve tüm örnekler ELISA ile test edilene kadar -20 °C'de saklayın.Antijene özgü IgG, IgM ve IgA veya salgılanan sitokinler için, ameliyattan üç gün önce, yedi ila dokuz haftalık fareleri anestezi öncesinde operasyon sonrası verilen yiyecek ve su ikamesine alıştırmak amacıyla jel benzeri yaş mama ile besleyin. Yedi ila dokuz haftalık bir fareye ağız boşluğuna ağrı kesici ilaç uygulayın. Fareleri onaylanmış IUC kılavuzuna uygun olarak anesteziye alın.Gözlere para lube veto pomadı uyguladığınızdan ve işlemi tekrarladığınızdan emin olun. Hayvan artık ayak parmak sıkıştırma uyarısına yanıt vermediğinde inhalasyon anesteziklerini kullanmayı bırakın; 22 ila 28 gauge bir iğne kullanarak kürek kemikleri arasına deri altına bir mililitre salin uygulayın. Bu işlem, farenin ameliyat sonrası olası dehidrasyonunu önler; aynı yöntemle, kürek kemikleri arasına deri altına 0,1 mililitre ream uygulayın.Bu, cerrahi sırasında ve sonrasında sağlıklı solunumu destekler. Fareyi termal destekle birlikte sırt üstü pozisyona getirin. Cerrahi boyunca termal desteği sürdürün.Üst ve alt kesici dişlerin etrafına iki ayrı cerrahi sütur döngüsü kullanarak ağzı nazikçe açın ve üst damağı ortaya çıkarın. Üst damağın orta hattı boyunca, K. görüş alanında yaklaşık üç milimetre uzunluğunda bir insizyon yapmak için 11 numara cerrahi bıçak kullanın. Ardından, 0,5 milimetrelik bir mikro küret yerleştirin ve knutu bozmak için insizyonun her iki kenarının altını nazikçe kazıyın. Termal kuarter ünite üzerindeki düz ince bir döngü kullanarak, koterizasyondan sonra kanamayı durdurmak için insizyonu ize edin.Fareyi, tamamen bilinci yerine gelene kadar termal destek ünitesinde dinlenmeye bırakın. Sonraki üç gün boyunca, dehidrasyonu önlemek için fareye bir mililitre salin enjekte edin.Hidrasyonu değerlendirmek için, deri turgorunu kontrol etmek amacıyla bir deri çadır testi yapın. Gerektiğinde bunu günde üç kez tekrarlayın. Benzer şekilde, günde bir kez oral ağrı kesici ilaç sağlayın.Herhangi bir deneysel prosedürden önce en az üç gün boyunca yaş mama sağlanmalıdır. Farelerin kilo alımları takip edilerek sekiz ila 10 gün boyunca gözlemlenmelidir. Yetersiz kilo alımı genellikle damak iyileşmesinin tamamlanmadığını gösterir ve bu fareler sonraki çalışmalardan çıkarılmalıdır.Cerrahi işlemin başarısı histoloji ile doğrulanmalıdır. Deneyler tamamlandıktan sonra fareyi daha önce açıklandığı şekilde ötanize edin ve işlemi servikal dislokasyon ile sonlandırın. Şimdi, kondiler çıkıntıları makasla keserek alt çeneyi kafatasının geri kalanından ayırın.Bunu her iki taraf için de yapın. Ensenin arka kısmından başlayarak, kafatasının ventral tarafına doğru yavaşça soyarak ve keserek deri ve kürkleri kafatasından ayırın. Burun çevresindeki deriyi dikkatlice çıkarın.Ardından burun ucundaki deriyi kesin ve tamamen uzaklaştırın. Şimdi makas kullanarak kraniyumu vertebradan ayırın. Makası kraniyumun foramen magnumuna yerleştirin ve kraniyum orta hattı boyunca yarıya kadar kesin.Bu işlem, tespit sırasında forminin yumuşak dokulara nüfuz etmesini sağlar. Kraniyumu %10 nötral tamponlu formalinde 24 saat boyunca tespit edin. Ertesi gün oda sıcaklığında, örneği bir kasete yerleştirip kaseti gazlı bezle sararak formik asit karışımı içeren bir şişeye koyarak dekalsifiye edin.Numuneyi oda sıcaklığında 12 saat boyunca inkübe edin. Numuneyi temizleyin ve 20 dakika boyunca musluk suyu altında durulayın. Bir jilet kullanarak, numuneyi septum ve göz orbitlerini geçecek şekilde kırpın. Kısa süreli saklama için numune ve kaset %10 NBF içinde tutulabilir.Gömme işlemi sırasında, ssam ucunun parafinin içine gömüldüğünden ve kaset ucunun göz çukuru ucunun üzerine yerleştirildiğinden emin olun. Ardından kasetin üst kısmını parafinle doldurmaya devam edin ve mikrotoma yerleştirmeden önce soğumasını bekleyin. Hazır olduğunda, standart bir histolojik inceleme gerçekleştirin.Burun kısmından beş mikronluk enine kesitler alın ve h ve d boyaması uygulayın. Not ablasyonunun histolojik inceleme ile doğrulanması, sonuçlarınızı yorumlamak için esastır ve her deneyin başarıyla tamamlanmasının ardından gerçekleştirilmelidir. Alt tarafında kümelenmiş mononükleer hücrelerin bulunmaması, ablasyonun başarılı olduğunun bir göstergesidir.KNT'yi çevreleyen nazal sinüs bölgesinin bir H&amp;E kesiti, tipik olarak tek katlı epitelyal hücre tabakasıyla çevrili çekirdekli hücre kümeleri şeklinde görünür. Cerrahi işlemden sonra, üst damakta olduğu kadar NAT'ın bütünlüğünde de belirgin bir bozulma olmalıdır. Cerrahi sonrası iyileşme döneminde, insizyon kapanmış olmalı ve nazal boşluk NAT'tan arınmış olmalıdır. Farelere, toll-benzeri reseptör 4'ü aktive eden bir adjuvan ile formüle edilmiş STX aşısı uygulanır.Yolak kontrollerine yalnızca salin veya adjuvan içermeyen kültürlenmiş aşı verilmiştir. Deneysel gruplardan elde edilen NALT, ELISA ile ölçülebilen antijene özgü immünoglobulinleri ortama salgılamıştır. İki aşı uygulama yolunun karşılaştırılması, en yüksek IgA miktarlarının, bir alt birim aşı ile intranazal olarak aşılanan farelerden elde edilen NALT tarafından salındığını göstermiştir.Kontrol grubundan veya MALT'siz farelerden elde edilen adjuvan biyolojik örneklerle birlikte, nazal antijenlere karşı in vivo immün yanıtın profili çıkarılabilir. Doku kültürü sonuçlarıyla karşılaştırıldığında, intranazal vaksinasyona karşı IgA ve IgG yanıtları, fonksiyonel MALT seviyeleri olmadan anlamlı derecede azalmıştır; vaksinlenen farelerin mukozal salgılarında antijene özgü IgA seviyeleri genellikle IgG'den daha yüksek bulunmuştur. Yönteme hakim olunduğunda, bir düğüm için 24 saatlik bir zaman noktası koleksiyonu dahil olmak üzere, düğüm toplama ve kültürleme işlemi yaklaşık 30 dakikada tamamlanabilir.Doğru şekilde uygulandığında, deneyimli bir çalışan bir günde birkaç nat toplayabilir ve kültüre edebilir. Damak altının kazınması, natı ablate etmek için yeterli olmalıdır. Bu prosedür uygulanırken, kan kaybını önlemek için hızlı çalışmak önemlidir.Bu, insizyonun net bir şekilde görüntülenmesini sağlayacak ve hayvanların sağlıklı kalmasını sağlayacaktır. Bu videoyu izledikten sonra, intranazal aşılama sonrası fare mukoza ilişkili lenfoid dokusunun (MALT) lokal ve sistemik bağışıklık yanıtlarına katkılarının nasıl inceleneceği konusunda iyi bir anlayışa sahip olmalısınız.

examining-role-nasopharyngeal-associated-lymphoreticular-tissue-nalt

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

İmmünoloji ve Enfeksiyon

Bu yazıda, akciğer doğuştan gelen bağışıklık hücreleri ikamet ve polianhidrid nanopartiküller ile ko-kültür tepki olarak aktivasyon inceleyerek murin alveoler makrofaj, hasat için protokoller açıklanmaktadır.

Polianhidrid Nanopartiküller Bağlı Mürin Alveoler Makrofajlar Hasat ve Değerlendirme Hücresel Etkinleştirme

Fare genital lenfosit yalıtmak için verimli bir şekilde tarif edilmiştir. Bu yöntem verimli izolasyonu sağlamak için enzim sindirim ve Percoll degrade ayrılık yararlanır. Bu teknik, diğer tür kullanım için de...

Fare Genital Sistemlerinin Mukozanin gelen Lenfosit İzolasyonu

Kaynak: Zhang, J., et al. P. Dissecting Innate Immune Signaling in Viral Evasion of Cytokine Production. J. Vis. Exp. (2014)Bu video, akciğere özgü bir bağışıklık yanıtı oluşturmak amacıyla farelere murine herpesvirusun intranazal olarak uygulanmasını göstermektedir. Konak bağışıklık yanıtlarının daha sonraki değerlendirmeleri için, sitokin içeren süpernatanlar elde etmek amacıyla akciğer dokusu işlenmektedir.

Konak İmmün Yanıtlarını Değerlendirmek Amacıyla Farelerde İntranazal Murine Herpesvirüs Enfeksiyonu

Profilaktik ve terapötik aşılama çoğu zaman düğümleri ve bağışıklık hücrelerinin dolayısıyla kötü katılımını lenf nedeniyle aşının hafta drenaj güçlü bağışıklık tepkilerini uyarmak için başarısız olur. Lenf düğümlerine aşı doğrudan enjeksiyon ile, sözde lenf sistemi içi enjeksiyon, aşı etkinliği güçlü geliştirilebilir ve aşı doz azaltılabilir.

Fare intralenfatik immünoterapi ve Aşılama

Bir murin aşılama modelinde nanopartiküllerle bağışıklamaya yanıt olarak antijene özgü CD8+ T hücrelerinin genişlemesini izlemek için tüm hayvan görüntüleme ve akış sitometrisi tabanlı teknikleri açıklıyoruz.

Nanopartikül Aşılama sonrası analizi antijene özgü CD8 + T hücresi tepkileri için tüm hayvan Görüntüleme ve Akış Sitometrisi Teknikleri

Aşıların nasıl çalıştığı hakkında genel bir bilgi eksikliği var. Burada, dendritik hücrelere ve T hücresi bağışıklığına özel olarak odaklanarak, aşılara karşı erken konak bağışıklık tepkileri hakkında fikir edinmek için ters genetik ve kemik iliği kimerik farelerin birlikte kullanılmasını öneriyoruz.

Kimerik fare modellerinde Rekombinant Grip aşıların burun içinde yoluyla mukozal bağışıklık Okumak

Burada, fare modelinde BCG ile intranazal ve subkutan bağışıklamanın neden olduğu koruyucu etkinliği ve akciğer immün yanıtını karşılaştırmak için izlenen metodolojiyi detaylandırıyoruz. Sonuçlarımız, pulmoner aşılamanın faydalarını göstermekte ve aşı kaynaklı korumada IL17 aracılı yanıtın rolünü önermektedir.

Koruyucu etkinliği ve Pulmoner Bağışıklık Tepkisi Fare Subkutan ve Burun BCG İdaresi ardından

Burada bir standart immünolojik tekniği için bir uygulama mevcut (CFSE lekeli OT-Ben nükleer silahların yayılmasına karşı) hızla adjuvan-aracılı sitotoksik T lenfosit (CTL) üretimi izlemek amacıyla içinde vivo. Bu hızlı tahmini bir CTL kapasite hücre içi patojenlere karşı koruyucu aşıları aynı zamanda tedavi kanser aşıları gelişimi için yararlıdır.

Adjuvan'ın sitotoksik T lenfositler nesil yeteneklerini hızlı Vivo içinde değerlendirilmesi için aşı geliştirme

Burada etkinliği ve ana bilgisayar bağışıklık yanıtı aşı vivo içinde değerlendirilmesi için zarif bir iletişim kuralı mevcut. Bu iletişim kuralı eğitim viral, bakteriyel aşı modelleri veya paraziter patojenler için adapte edilebilir.

Ana bilgisayar-patojen yanıt ve aşı etkinliği farelerde değerlendirilmesi

Tip 2 inflamasyonda rol oynayan Grup 2 doğuştan gelen lenfoid hücreler (ILC2'ler), esas olarak helmint enfeksiyonuna, alerjik hastalıklara, metabolik homeostaza ve doku onarımına yanıt olarak katılır. Bu çalışmada, ILC2'leri murin burun mukozasından izole etmek ve CD226 ekspresyonunu saptamak için bir prosedür gösterilmiştir.

CD226 Ekspresyonunu Saptamak için Grup 2 Doğuştan Gelen Lenfoid Hücrelerin Fare Burun Mukozasından İzolasyonu

Mevcut protokol, murin nazal lavaj sıvısında (NLF) kan kontaminasyonunu önlemek için yeni bir yöntemi tanımlamaktadır. Bu yöntem, kan kontaminasyonu olmadan NLF toplanmasını sağladığından, immünolojik bileşenlerin ve çeşitli solunum yolu patojenlerinin daha doğru bir şekilde tespit edilmesini sağlar.

Kan Kirliliği Olmadan Murine Nazal Lavaj Sıvısı Toplama

Öğrenin farelerde nazofaringeal ilişkili lenforetiküler doku (NALT) ve intranazal aşılara bağışıklık yanıtlarını incelemek için cerrahi modelleme ve ekzivo kültür yöntemlerini. Bu teknik aşı etkinliği araştırmalarına katkı sağlar.

Aşılar Fare yanıtlar içinde Nazofaringeal ilişkili lenforetiküler Doku (NALT) Rolü incelenmesi

Daha fazla video keşfet