Name: Intraluminar MCAO Mouse Model: kresil Violet Boyama tarafından Serebral İnfarktı Değerlendirilmesi (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-11-06T12:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 40 s
Description: Öğrenin farelerde geçici orta serebral arter oklüzyonu modeliyle iskemik inme oluşturmayı ve kresil violet boyama ile serebral infarkt hacmini değerlendirmeyi. Bu yöntem nörolojik hasar ve genetik çalışmalar için güvenilir sonuçlar sunar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Bu çalışma CIHR EKİBİ hibe # CTP 82946, bir CIHR hibe # MOP 102741, yanı sıra Kanada sandalye # 216684 ve Strauss Vakfı tarafından desteklenmiştir. ER Kanada Kalp ve İnme Vakfı tarafından burs tarafından desteklenmiştir.

Geçici Orta Serebral Arter Tıkanıklığı (MCAO) 1. Cerrahi Prosedür (Şekil 1) Geçici orta serebral arter tıkanıklığı (tMCAO) 2 yapılır - 3 aylık erkek C57BL / 6 fareler (22-28g) için. Bu protokol IRCM biyoetik komitesi hayvan bakımı tarafından onaylanmıştır. Cerrahi aletler otoklavda (60 dk için 15 psi az 121 ° C) ile sterilize edildi. Her hayvan arasında, onlar sıcak boncuk sterilizatör (15 sn) kullanılarak sterilize edilmiştir. Cerrahi masa ve diğer ekipmanlar% 70 etanol kullanılarak dezenfekte edilir. Ameliyattan önce iki saat, fareler buprenorfin (0.03 mg / kg bwip) ile analgesized edildi. Şekil 1A. <ol><li> Derinden izofluran% 5 ile farelerin uyuşturan ve daha sonra% 2.5 izofluran de anestezi korumak. Farelerin Vücut sıcaklığı bir ısıtma pedi ile ameliyat sırasında sabit tutulur. </li><li> Kürk ve sk Dezenfekte% 70 etanol ya da Betadin ile. Tıraş inme patofizyolojisi etkileyebilecek saç parçası sürüm, microabrasions ve iltihap üretir bu yana, fare kürk tıraş etmeyin. </li><li> Bir orta hat boyun kesi olun ve yavaşça yumuşak dokuların birbirinden çekin. </li><li> Bir stereo mikroskop (Stemi 2000, Zeiss) altında, bir künt diseksiyon karotis arter bulmak için trakea maruz ve kasları geri çekmek için yapılır. </li><li> Sol ana karotis arter (CCA) dikkatli çevreleyen doku disseke ve CCA geçici 20 mm segmente 5-0 ipek sütür kesim kullanarak geçici bir sütür (1) tıkanmasıyla edilir. Büyük bir dikkatle vagal sinir zarar vermeyecek olunmalıdır. </li><li> Sol internal karotis arter (ICA) ve dış karotis arter (ECA) ve çatallanma ayırın. Bir kalıcı sütür (2) olarak distalde mümkün olduğunca, ECA etrafına yerleştirilir ve biraz sıkı başka bir geçici sütür (3) distal ECA üzerine yerleştirilirçatallanma. </li><li> Kanama önlemek için bir ters eylem cımbız kullanarak sol ICA (4) klipsleyin. Büyük bir dikkatle vagal sinir zarar vermeyecek olunmalıdır. </li><li> Sürekli (2) ve geçici (3) dikiş arasında ECA (5) içine bir küçük delik kesin. </li></ol> 1B Şekil. <ol start="9"><li> , 12 mm uzunluğunda 6-0 silikon kaplı (9-10mm hakkında kaplamalı silikon olan) ECA (6) içine monofilament sütür (Doccol Corporation) tanıtılması tamamen kalıcı sütür distal ECA kesip ICA içine tıkayıcı ters . Sütür sıkıca kanamayı önlemek için monofilament etrafında bağlı ve ters eylem cımbız kaldırılır. </li><li> Tıkayıcı Willis daire MCA kökeni tıkanmak üzere tanıtıldı. ECA ve CCA çatallanma ötesinde 9-10 mm çapındaki ekleme durdurun. Tıkayıcı bloke edilir ve artık hareket edemez. Bakım pterigopalatin arter nüfuz edilmesine dikkat edilmelidir. ECA üzerindeki sütür (3) tig olduğunuhtly pozisyonda mono düzeltmek için bağlanmıştır. </li><li> Bir AutoClip yara kapama sistemi ile cilt kapatın. </li><li> Subkutan salin solüsyonu 1 ml enjekte edilir ve tüm post-kapama süresinin (60 dakika) sırasında bir kızılötesi ısıtma lambası altında fareler yerleştirin. </li></ol> 2. Orta Serebral Arter Kan Akım Restorasyonu Reanesthesia önce neuroscore cerrahinin başarısını değerlendirmek için kontrol edilebilir. <ol><li> Daha önce açıklandığı gibi fareler anestezisi ve autoclips çıkarın. </li><li> Biraz monofilament çekilmesi ve kan reperfüzyon izin ECA üzerine sütür (3) açın. </li><li> Sürekli kan kaybını önlemek için ECA üzerindeki geçici dikiş kapalı kravat. Monofilament yeniden kullanım için tutulur. </li><li> Kan sirkülasyonu sağlamak için CCA üzerine geçici sütür (1) sökün. </li><li> Yara kapatın. Farelerde subkütan başka 1 ml serum fizyolojik verilmelidir. </li><li> 1 saat boyunca ısıtma kızılötesi lamba altında fareler yerleştirin. Hayvan hareketliliği kavuşur emin olduktan sonra, fare kafesinden döndürülür ve ısıtma pedi ve 72 saat için havlu altında bıraktı. Kafesin sadece yarısı fareler çevrelerini seçmek için izin ısıtma pedi üzerine yerleştirilir unutmayın. Ameliyat sonrası kilo kaybı genel olarak görülmektedir, çünkü püre yemek yeme teşvik etmek için bir Petri tabağına yerleştirilir. On iki saat ameliyat sonrası, fareler buprenorfin (0.03 mg / kg bwip) başka bir doz verildi. </li></ol> 3. Sham Operasyonu Sham operasyon için tüm prosedürleri tıkayıcı takılı olmadığından haricinde aynıdır. 4. Neuroscore Nörolojik defisit sadece reperfüzyon sonrası ve yaralanma şiddetinin derecesi sonraki tahmini tMCAO başarısının değerlendirilmesine olanak sağlar. Önceden 5 açıklandığı gibi nörolojik defisit atacak &lt;/ Sup&gt; ve 1, 24, 48 ve 72 saat sonrası reperfüzyon gerçekleştirildi. Bir genişletilmiş altı maddelik ölçek kullanılmıştır: <ul><li> 0: Normal. </li><li> 1: hafif kuyruk tarafından yakalandı zaman veya tutarsız rotasyon olmadan davranışı çizerek, karşı tarafa döndürmek için &lt;% 50 girişimleri. </li><li> 2: hafif çizerek tutarlı, karşı tarafa döndürmek için&gt;% 50 girişimleri. </li><li> 3: güçlü, tutarlı ve çizerek acil, fare burnu neredeyse kendi kuyruğunu ulaşan, fazla 1-2 saniye için bir dönüş konumunda tutar. </li><li> 4: barreling içine ilerleyici ağır dönme, refleks yürüme veya düzeltilmesi kaybı. </li><li> 5: komadaki veya ölmek üzere. </li></ul> 5. Kresil Menekşe Boyama (Şekil 2) PBS çözeltisi perfüzyon takiben, beyinleri hızla izopentan dondurulmuş ve -80 ° C&#39;deC. Fare beyinleri de planlanan immünohistokimyasal çalışmalar bağlı olarak,% 4 paraformaldehit (PFA) ile perfüze edilebilir. Koronal beyin kesitleri (17 um) Kriyostat-kesikler yapılmıştır. Her 30 üzerinden bir bölümü temsil eden bir beyin hasarı ile aynı slayt üzerinde toplanır. Hacim ölçümü için, 2 adet kaydırak (Scion Corporation, Frederick, MD) lezyon değerlendirmek için kullanılan cresyl violet boyama ve görüntü analiz sistemi ile boyanmış. Yaralanma ses keyfi birimler (piksel) hesaplanır, ve her bölüm için kontralateral olmayan lezyonlanan alanının bir yüzdesi olarak ifade edildi. Diğer slaytlar immünohistokimyasal çalışmalar için -80 ° C&#39;de tutulur. Alternatif olarak, PFA-sabit beyin vibratome ve gibi Han ve ark. (2009) 6 tarafından önerilen ölçülen infarkt hacmi ile 30-50 mikron de kesilebilir.

<ol><li>Koizumi, J., Yoshida, Y., Nakazawa, T., Ooneda, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Experimental+studies+of+ischemic+brain+edema%2C+I%3A+a+new+experimental+model+of+cerebral+embolism+in+rats+in+which+recirculation+can+be+introduced+in+the+ischemic+area%5BTitle%5D)+AND+%22Jpn.+J.+Stroke%22%5BJournal%5D)">Experimental studies of ischemic brain edema, I: a new experimental model of cerebral embolism in rats in which recirculation can be introduced in the ischemic area.</a> Jpn. J. Stroke. 8, 1-8 (1986).</li>
<li>Chan, P. H., Kamii, H., Yang, G., Gafni, J., Epstein, C. J., Carlson, E., Reola, L. B. rain <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((infarction+is+not+reduced+in+SOD-1+transgenic+mice+after+a+permanent+focal+cerebral+ischemia%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroreport%22%5BJournal%5D)">infarction is not reduced in SOD-1 transgenic mice after a permanent focal cerebral ischemia.</a> Neuroreport. 5, 293-296 (1993).</li>
<li>Yang, G., Chan, P. H., Chen, J., Carlson, E., Chen, S. F., Weinstein, P., Epstein, C. J., Kamii, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+copper-zinc+superoxide+dismutase+transgenic+mice+are+highly+resistant+to+reperfusion+injury+after+focal+cerebral+ischemia%5BTitle%5D)+AND+%22Stroke%22%5BJournal%5D)">Human copper-zinc superoxide dismutase transgenic mice are highly resistant to reperfusion injury after focal cerebral ischemia.</a> Stroke. 25, 165-170 (1994).</li>
<li>Liu, S., Zhen, G., Meloni, B. P., Campbell, K., Winn, H. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rodent+stroke+model+guidelines+for+preclinical+stroke+trials+%281st+edition%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Exp.+Stroke+Transl.+Med%22%5BJournal%5D)">Rodent stroke model guidelines for preclinical stroke trials (1st edition.</a> J. Exp. Stroke Transl. Med. 2, 2-27 (2009).</li>
<li>Jiang, S. X., Lertvorachon, J., Hou, S. T., Konishi, Y., Webster, J., Mealing, G., Brunette, E., Tauskela, J., Preston, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chlortetracycline+and+demeclocycline+inhibit+calpains+and+protect+mouse+neurons+against+glutamate+toxicity+and+cerebral+ischemia%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Biol.+Chem%22%5BJournal%5D)">Chlortetracycline and demeclocycline inhibit calpains and protect mouse neurons against glutamate toxicity and cerebral ischemia.</a> J. Biol. Chem. 280, 33811-33888 (2005).</li>
<li>Han, R. Q., Ouyang, Y. B., Xu, L., Agrawal, R., Patterson, A. J., Giffard, R. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Postischemic+brain+injury+is+attenuated+in+mice+lacking+the+beta2-adrenergic+receptor%5BTitle%5D)+AND+%22Anesth.+Analg%22%5BJournal%5D)">Postischemic brain injury is attenuated in mice lacking the beta2-adrenergic receptor.</a> Anesth. Analg. 108, 280-287 (2009).</li>
<li>Rousselet, E., Marcinkiewicz, J., Kriz, J., Zhou, A., Hatten, M. E., Prat, A., Seidah, N. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((PCSK9+reduces+the+protein+levels+of+the+LDL+receptor+in+mouse+brain+during+development+and+after+ischemic+stroke%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Lipid+Res%22%5BJournal%5D)">PCSK9 reduces the protein levels of the LDL receptor in mouse brain during development and after ischemic stroke.</a> J. Lipid Res. 52, 1383-1391 (2011).</li>
<li>Tamura, A., Graham, D. I., McCulloch, J., Teasdale, G. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Focal+cerebral+ischaemia+in+the+rat%3A+1.+Description+of+technique+and+early+neuropathological+consequences+following+middle+cerebral+artery+occlusion%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Cereb.+Blood+Flow+Metab%22%5BJournal%5D)">Focal cerebral ischaemia in the rat: 1. Description of technique and early neuropathological consequences following middle cerebral artery occlusion.</a> J. Cereb. Blood Flow Metab. 1, 53-60 (1986).</li>
<li>Chen, Y., Ito, A., Takai, K., Saito, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Blocking+pterygopalatine+arterial+blood+flow+decreases+infarct+volume+variability+in+a+mouse+model+of+intraluminal+suture+middle+cerebral+artery+occlusion%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci.+Methods%22%5BJournal%5D)">Blocking pterygopalatine arterial blood flow decreases infarct volume variability in a mouse model of intraluminal suture middle cerebral artery occlusion.</a> J. Neurosci. Methods. 174, 18-24 (2008).</li>
<li>Tsuchiya, D., Hong, S., Kayama, T., Panter, S. S., Weinstein, P. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+suture+size+and+carotid+clip+application+upon+blood+flow+and+infarct+volume+after+permanent+and+temporary+middle+cerebral+artery+occlusion+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Res%22%5BJournal%5D)">Effect of suture size and carotid clip application upon blood flow and infarct volume after permanent and temporary middle cerebral artery occlusion in mice.</a> Brain Res. 970, 131-192 (2003).</li>
<li>Tureyen, K., Vemuganti, R., Sailor, K. A., Dempsey, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Infarct+volume+quantification+in+mouse+focal+cerebral+ischemia%3A+a+comparison+of+triphenyltetrazolium+chloride+and+cresyl+violet+staining+techniques%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci.+Methods%22%5BJournal%5D)">Infarct volume quantification in mouse focal cerebral ischemia: a comparison of triphenyltetrazolium chloride and cresyl violet staining techniques.</a> J. Neurosci. Methods. 139, 203-207 (2004).</li>
</ol>

Yazarlar ifşa etmek çakışan çıkarları var. Bu makalenin Üretim ve Serbest Giriş Zeiss, Inc tarafından desteklenen

Farklı zamanlı modeller hastalarda inme sonuçlarını taklit geliştirilmiştir. Inme modelinde seçimi söz konusu biyolojik bağlıdır. Intraluminal MCAO modeli hastalarda iskemik inme en yaygın türlerinden biri taklit ve Tamura modeli 4,7 daha az invaziv ve daha tutarlıdır. Bu nöroproteksiyon, neurorepair ve hücre ölümüne analizler için gerçekten ilginç bir model. Intraluminal modelinin başarısı kontrol edilmesi gereken bu tür hayvan cinsiyet, yaş ve ağırlık, sıcaklık, anestezi ve cerrahi süresi gibi birçok faktöre bağlıdır. Tıkayıcı (uç çapı, uzunluğu, şekli ve esneklik) fiziksel adap MCAO 4 tutarlılığı için kritik öneme sahiptir. Bu yazıda, Doccol Corporation 9-10 mm silikon ile kaplanmış 12 mm uzunluğundaki 6-0 monofilament kullanın. Uzunluğu tüm ICA kapsamında çünkü bu monofilament büyük avantajı subaraknoid kanama azaltmak veWillis ve PPA Circle anterior ve posterior komünikan arterlerden gelir uzunluğu, rezidüel kan akımı, engelledi ve infarkt hacmi azalır değişkenliği (bizim ellerde değişkenliğin% 15) 8 edilir. CCA sütür de infarkt hacmi 9 değişkenliği azalır. Beyin hasarı aşağıdaki tMCAO ölçüde farklı yollar ile tespit edilebilir. Daha önce de belirtildiği gibi nörolojik hasarlar ölçülebilir. Bununla birlikte, bu arada etkin bir ölçü olması zordur. Enfarkt boyutu genellikle TTC boyama ile gerçekleştirilir. Daha yakın zamanda, manyetik rezonans teknikler, aynı zamanda, nöro-koruyucu tedavisi için özellikle ilginç bir teknoloji kullanılır. Böyle neurorepair, hücre ölümü veya hücre çoğalması olarak inme dahil yatan hücresel mekanizmaları anlamak için, immünohistokimyasal olarak farklı marker çalışması kritik ve çok bilgilendirici. Böylece, bizim protocbeyin bölüm preparatları ol bu analizlerin izin veren büyük bir avantaja sahiptir, ve kullanılan fareler sayısını en aza indirir. Ayrıca, Tureyen ark. 10. cresyl violet boyama ve TTC arasında iyi bir korelasyon olduğunu bildirmişlerdir.

<table border="1"&gt;<tr&gt;<td<strong&gt; Açıklama</strong</td&gt;<td<strong&gt; Şirket</strong</td&gt;<td<strong&gt; Katalog numarası</strong</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; Stereo mikroskop</td&gt;<td&gt; Zeiss</td&gt;<td&gt; Stemi 2000</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; Fiber-Işık Yüksek Yoğunluklu Illuminator</td&gt;<td&gt; Dolan-Jenner Sanayi A.Ş.</td&gt;<td</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<tdIzofluran için&gt; Anestezi sistemi</td&gt;<td</td&gt;<td</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; İzofluran</td&gt;<td&gt; CDMV</td&gt;<td&gt; 108.737</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; Isıtma battaniye</td&gt;<td&gt; Gaymar Medsearch</td&gt;<td&gt; TP22G</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; Kızılötesi ısıtma lambası</td&gt;<td</td&gt;<td</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; Ultra ince cımbız, stili 5</td&gt;<td&gt; Elektron Mikroskobu Bilimleri</td&gt;<td&gt; 78320-5TI</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; Vannas Makas 3 mm Kesme Kenar, Düz</td&gt;<td&gt; Elektron Mikroskobu Bilimleri</td&gt;<td&gt; 72932-01</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; Stil LA-1 ve MPF-1 Tüm düz bıçaklar</td&gt;<td&gt; Elektron Mikroskobu Bilimleri</td&gt;<td&gt; 77926-5S</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; Negatif eylem cımbız, stil KOPINC 5</td&gt;<td&gt; Elektron Mikroskobu Bilimleri</td&gt;<td&gt; 72850-F</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; Makas 5 1/2 &quot;Düz Kesme</td&gt;<td&gt; Cedarlane</td&gt;<td&gt; 72.960</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; AutoClip başlangıç ​​seti</td&gt;<td&gt; Harvard aparatı</td&gt;<td&gt; 34-0557</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; BD AutoClip Kapanış Sist Yara., 9mm Uzun, 100/PK</td&gt;<td&gt; Fisher</td&gt;<td&gt; 01-804-5</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; 5-0 sütür</td&gt;<td&gt; Harvard aparatı</td&gt;<td&gt; 517.763</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; Sütür materyali PDS II monofilament menekşe, 5-0, RB-1; Z303H</td&gt;<td&gt; CDMV</td&gt;<td&gt; 6167</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; 12 mm uzunluğundaki 6-0 silikon kaplı monofilament sütür</td&gt;<td&gt; Doccol Şirketi</td&gt;<td&gt; 60SPRePK5</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; 1ml Seringes</td&gt;<td&gt; Fisher</td&gt;<td&gt; 14-823-2F</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; İğneler 26G1 / 2</td&gt;<td&gt; Fisher</td&gt;<td&gt; BD-305111</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td<em&gt; C57BL / 6</em&gt; Fareler</td&gt;<td&gt; IRCM</td&gt;<td</td&gt;</tr&gt;</table

intraluminar mcao mouse model: kresil violet boyama tarafından serebral İnfarktı değerlendirilmesi

Mouse Model of Intraluminal MCAO: Cerebral Infarct Evaluation by Cresyl Violet Staining

İnme mortalite ve Dünyada sakatlık önde gelen nedeni üçüncü nedenidir. Tüm inmelerin yaklaşık% 80 İskemik inme hesaplar. Ancak, trombolitik doku plazminojen aktivatörü (tPA) mevcutsa akut iskemik inme tek tedavidir. Bu liderliğindeki araştırmacılar türlerde birçok iskemik inme modelleri geliştirmek için. Kemirgen modellerinde iki tip geliştirilmiştir: global serebral iskemi veya fokal serebral iskemi modeli. Kime yaklaşık% 80 trombotik veya embolik inme, orta serebral arter (MCA), model inme çalışmalar için oldukça uygundur intralüminal orta serebral arter tıkanıklığı (MCAO) topraklarında meydana hastalarda iskemik inme taklit etmek. Bu model, ilk olarak Koizumi, ve arkadaşları tarafından sıçanlarda geliştirilmiştir. 1986 1 in. Çünkü farelerde genetik manipülasyon kolaylığı, bu modeller de bu türün 2-3 geliştirilmiştir. content &quot;&gt; Bu yazıda, C57/Bl6 farelerde geçici MCA oklüzyonu prosedürü sunuyoruz. Önceki çalışmalar, uç çapı, uzunluğu, şekli, ve esneklik gibi tıkayıcı fiziksel özellikleri infarkt hacmi 4 tekrarlanabilirliği için önemli olduğunu bildirdi. Burada ticari bir silikon kaplı monofilament (Doccol Corporation) kullanılmıştır. diğer büyük avantajı bu monofilament subaraknoid kanama ikna etmek riskini azaltır olmasıdır. Zeiss stereo-mikroskop Stemi 2000 kullanmak, silikon kaplı monofilament internal karotis arter girmiştir (ICA) monofilament kadar eksternal karotis arter (ECA) bir kesik yoluyla MCA tabanı tıkar. kan akımı bir tromboembolik pıhtı lizis bölgesindeki sonrası kan akımının restorasyonu taklit monofilament çıkarılması ile 1 saat sonra restore edildi İnsanlarda. serebral infarkt ölçüde bir nörolojik skoru ile ve infarkt hacmi ölçümü ile ilk değerlendirilebilir.İskemik farelerin böylece farklı post-reperfüzyon zaman onların nörolojik skoru incelendi. 2,3,5-Triphenyftetrazoliumchlorid (TTC) ile boyanarak, infarkt hacmi değerlendirmek için genellikle yapıldı. Immunhistokimya tarafından birçok kritik belirleyicileri sınamak için bir fırsat sunuyor yana yazıda cresyl violet boyama kullanılır. Bu videoda, biz MCAO prosedürü rapor; nörolojik puanları ve cresyl violet boyama ile infarkt hacminin değerlendirilmesi.

Neuroscore değerlendirme tMCAO inme sonrası başarısını onaylar ve tMCAO post-reperfüzyon verimliliğini belirler. Bizim elimizde, tüm fareler, en azından hafif bir tutarlı kıvırma (neuroscore 2) ve nörolojik kusurların en fazla 72 saat için genel olarak stabil olan sunulan lümen içi prosedürüne tabi tutulmuştur. Çoğu fareler hafif tutarlı curling (neuroscore 2) sergilerler. Kıvrık olmaması gösteren Fare çalışmanın dışında tutulmuştur. Ancak, neuroscore değerlendirilmesi bize yaralı hipokampus ve sağlam bir hipokampus olanlar ile fareler arasında ayrım izin vermez. Mortalite subaraknoid kanama meydana gelmedi düşündüren, ameliyat gün boyunca gözlenmiştir. Subaraknoid kanama bir fare tespit edildiğinde, bu bir sistematik analizi çıkarılmıştır. Ev yapımı monofilamentler daha yumuşak hale Doccol Corporation, gelen silikon kaplı monofilament kullanımı başarısını artırırtMCAO ve subaraknoid kanama azaltır. 24 saat ve 72 saat arasında Mortalite bu model% 14, genel olarak oklüzyon 60 dk Min. Gözlemlenen mortalite muhtemelen bu fare soyu içinde geniş bir enfarktüs hacmini kaynaklanmaktadır. Güçlü bir lezyon tekrarlanabilirliği de onların etki (ler) modeli değişkenliği tarafından gizli olabilir nöro molekülleri okumak için çok ilginç olan (standart sapma% 15) gözlenmiştir. TMCAO sonrasında beyin hasarı ölçüde değerlendirilmesi için, bir malzeme çok uygun bir marker 6 test etmek sahip olmak için oldukça TTC daha cresyl violet boyama (Şekil 2) kullanmayı seçti. Lezyonun boyutu oldukça tutarlıdır. Ancak, bazı farelerde, hipokampus (farelerin yaklaşık% 30) yaralı olduğunu fark ettim. O cresyl violet boyama sonrasında 1 hafta kadar uygulanabilir ilginçtir. Literatürde, beyin enfarktüsü yüzdesi değişir birindendiğer çalışma. Bu fare suşu, anestezi, beyin kesitleri kalınlığı, kullanılan monofilament ya da 6, 7 ikinci boyama seçimine bağlıdır. <img src="/files/ftp_upload/4038/4038fig1.jpg" alt="Şekil 1" fo:content-width="5in" fo:src="/files/ftp_upload/4038/4038fig1highres.jpg" /> Şekil 1. Silikon kaplı intraluminal monofilament kullanarak orta serebral arter oklüzyonu şeması. Fare beyin ve silikon kaplı monofilament tanıtımı hazırlamak için ardışık sütür ve klibi gösteren serebral arterlerin bir. Basitleştirilmiş şeması. B. Willis daire ile monofilament pozisyonu temsil edilmektedir. . Monofilament MCA ACA, anterior serebral arter baz tıkanmak üzere ECA aracılığıyla ICA sokulur; BA, baziler arter; CCA, karotis arter; C. Willis, Willis Circle; ECA, eksternal karotid artery; ICA, internal karotis arter; MCA, orta serebral arter; PCA, posterior komünikan arter; PPA, pterigopalatin arter. <img src="/files/ftp_upload/4038/4038fig2.jpg" alt="Şekil 2," /> Şekil 2. 72 saat sonrası reperfüzyon. İnfarktı alanı (özellikle striatum, korteks ve komşu beyin bölgeleri) sonra cresyl violet ile boyandı fare beyin Temsilcisi koronal bölümleri beyaz (cresyl menekşe tarafından boyanmadan) görünür. Yaralanma hacmi (beyaz kısmı, sağ hemisfer) ayrılmış ve kontralateral olmayan lezyonlanan alanı (sol hemisfer) bir yüzdesi olarak ifade edilir.

Farelerde intraluminal orta serebral oklüzyon modeli sunuldu. Serebral infarkt ölçüde bir nörolojik skoru ve cresyl violet boyama, TTC alternatif boyama, paralel birçok ilgi belirteçleri test etmek büyük avantajı sunarak değerlendirilir.

Intraluminar MCAO Mouse Model: kresil Violet Boyama tarafından Serebral İnfarktı Değerlendirilmesi

İnme, dünyada üçüncü ölüm nedeni ve önde gelen engellilik sebebidir. Tüm inmelerin yaklaşık %80'ini iskemik inme oluşturmaktadır. ...

Bu prosedürün genel amacı, farelerde iskemik inme modelini taklit etmektir. İlk olarak, ortak karotis arteri geçici olarak bağlanırken, dış karotis arteri mümkün olduğunca distalden kalıcı olarak bağlanır. Bifurkasyonun üzerinde, ECA üzerine hafif sıkı başka bir geçici sütür yerleştirilir.İkinci adım, kanamayı önlemek için ters etkili pensler kullanılarak internal karotis arterinin klemplenmesidir. Ardından, kalıcı ve geçici ligatürlerin arasındaki ECA kesilir. Sonrasında, silikon kaplı monofilaman ECA'ya yerleştirilir.Ardından, monofilaman ICA içerisine, orta serebral arterin tabanını kapsayacak şekilde ilerletilmek üzere ECA ters çevrilir. Bir saat sonra, insanlardaki tromboembolik tıkanıklığın lizis sonrası kan akışının yeniden sağlanmasını taklit etmek amacıyla, monofilaman çıkarılarak kan akışı tekrar başlatılır. Nihayetinde, T-M-C-A-O'nun başarısını ve enfarktın şiddetini yansıtan nörolojik defisit, reperfüzyondan hemen sonra ve reperfüzyon sonrası farklı zaman dilimlerinde değerlendirilebilir.Krestal Viyole ile boyanmış temsili beyin kesitlerindeki infarkt hacmini hesaplamak için NIH'den Cyan görüntüleme yazılımı kullanılır. İntralüminal filament tekniği kullanılarak gerçekleştirilen geçici orta serebral arter oklüzyonunun temel avantajlarından biri, kan akışının yeniden sağlanmasıyla birlikte hastalardaki iskemik inme modelini taklit etmesidir; bu prosedürün farelerde geliştirilmesi, hedef bir proteinin rolünü belirlemek için genetik etiketleme araçlarının kullanılmasına olanak tanır. İnme modelinde, geçici orta serebral arter oklüzyonu, 22 ile 28 gram arasında ağırlığa sahip, iki ila üç aylık erkek C 57 black six farelere uygulanır.Bu protokol, enfarkt hacmindeki tekrarlanabilirliği artırmak amacıyla IRCM Biyoetik Bakım Komitesi tarafından onaylanmıştır. Doco Corporation'dan temin edilen, 12 milimetre uzunluğunda, altı sıfır silikon kaplı yeniden kullanılabilir monofilamanlar kullanmaktayız. Cerrahi işlemden iki saat önce.Bir fareye intraperitonal yolla kilogram başına 0,03 miligram dozunda buprenorfin enjekte edin. İşleme başlamak için fareleri %5 izofluran ile anesteziye alın ve anesteziyi %2,5 izofluran ile sürdürün; cerrahi işlem sırasında fare vücut sıcaklığını sabit tutmak için bir ısıtıcı ped kullanın, farenin derisini %70 etanol veya Betadine ile dezenfekte edin. Ardından, boyun bölgesinde orta hat boyunca bir insizyon yapın ve bir stereo mikroskop altında yumuşak dokuları birbirinden ayırın.Trakeyi açığa çıkarmak için fare boynunu küt diseksiyonla kesin. Ardından, karotis arterini bulmak için kasları geri çekin. Sol common carotid arteri çevre dokulardan dikkatlice diseke edin.Arterin çevresine 20 milimetrelik segmentlere ayrılmış geçici bir 5-0 ipek sütür yerleştirin. Vagal sinire zarar vermemeye dikkat edin. Ardından, sol internal karotis arter (ICA) veya internal common carotid artery ve eksternal karotis arter (ECA) veya external common carotid artery bifurkasyonunu ayırın ve ECA'nın mümkün olduğunca distal kısmına kalıcı bir sütür yerleştirin.Ardından bifurkasyonun üzerindeki ECA'ya başka bir geçici sütür atın. Daha sonra, kanamayı önlemek için ters etkili pensler kullanarak sol ICA'yı klipsleyin. Tekrar belirtmek gerekirse, vagus sinirine zarar vermemeye çok dikkat edin.ECA'nın, ECA ve ICA'ya ayrıldığı çatallanma noktasından önce ve daha önce yerleştirilen kalıcı ve geçici dikişlerin arasına küçük bir delik açın. Ardından, ECA'ya 12 mm'lik 6-0 silikon kaplı monofilaman dikiş yerleştirin, ECA'yı tamamen kesin ve monifilamanı ICA'ya doğru ters çevirin. Kanamayı önlemek için dikişi sıkıca bağlayın ve ters işlem cımbızını çıkarın.Ardından, monofilamenti MCA başlangıcı tıkanana kadar Willis halkasına yerleştirin. Yerleştirme işlemi, ECA ve CCA bifurkasyonunun yaklaşık dokuz ila 10 milimetre ötesine kadar yapılmalıdır. Genellikle monofilament engellenecek ve daha fazla ilerleyemeyecektir.Tego palatina arterini delmemeye dikkat edin. Filamenti konumunda sabitlemek için ECA üzerindeki sütürü sıkıca bağlayın. Şimdi cildi bir otomatik klips yara kapatma sistemi ile kapatın.Bir mililitre salin solüsyonunu subkütan olarak enjekte edin ve fareleri, 60 dakika süren oklüzyon sonrası dönem boyunca kızılötesi ısıtıcı lamba altına yerleştirin. Fareleri daha önce yaptığınız gibi anesteziye alın, otoklipleri çıkarın ve monofilamanın geri çekilmesine ve kanın yeniden perfüzyonuna izin vermek için ECA üzerindeki sütürü hafifçe açın. Ardından, kan kaybını önlemek için ECA üzerindeki geçici sütürü kalıcı olarak bağlayın.İnme sonrası bir saat geçince monofilamenti geri çekin ve yeniden kullanım için saklayın. Ardından, kanın yeniden dolaşıma girmesini sağlamak için CCA üzerindeki geçici dikişi kaldırın. Yarayı ve deri altını kapatın.Farelere bir mililitre daha salin solüsyonu enjekte edin. Hayvanın hareket kabiliyetini yeniden kazandığından emin olduktan sonra, farelerin kendi ortamlarını seçebilmeleri için onu kafesine geri koyun ve kafesin yarısını ısıtma pedinin üzerine yerleştirin. Cerrahi işlemden 12 saat sonra, tüm sham operasyonlarındaki farelere bir doz daha buprenorfine uygulanır.Monofilamanın ameliyat sonrası yerleştirilmemesi dışında tüm prosedürler aynıdır. T-M-C-A-O başarısını teyit etmek ve verimlilik skorunu belirlemek için nörolojik defisit değerlendirilir; farelerin nörolojik defisitleri perfüzyon sonrası 1, 24, 48 ve 72. saatlerde aşağıdaki altı puanlık ölçeğe göre belirlenir: sıfır normali, bir ise kuyruktan kaldırıldığında tutarsız kıvrılma ile veya kıvrılma olmadan hafif dönmeyi ifade eder. %50'den fazlası kontralateral tarafa kıvrılmaya çalışır.İki, girişimlerin %50'den fazlasında karşı tarafa doğru kıvrılma eğilimiyle beraber hafif ve tutarlı kıvrılmayı ifade eder. Üç, tutarlı, güçlü ve ani kıvrılmayı ifade eder. Fare, bir ila iki saniyeden daha uzun süre kıvrılmış pozisyonda kalır.Burnu neredeyse kuyruğuna değecek kadar kıvrılmış. Dört puan, şiddetli kıvrılmayı ifade eder. Yürüme veya yazma refleksinin kaybıyla birlikte gelişen "barreling" (fıçı şeklinde dönme) durumunda beş puan, komatöz veya tamamen kıvrılmış (mound) durum anlamına gelir.PBS solüsyonu ile perfüzyondan sonra, beyinleri hızlıca izopentanda dondurun ve eksi 80 derece Celsius'ta saklayın. Planlanan immünohistokimya çalışmalarına bağlı olarak, fare beyinlerinin %4 paraformaldehit ile perfüze edilebileceğini unutmayın. Ardından, bir kriyostat kullanarak 30 lam üzerinde 17 mikron kalınlığında koronal beyin kesitleri alın.Her 30 kesitten birini aynı slayta yerleştirin. Ardından, birinci ve on beşinci slaytları kristal viyole ile boyayın. Daha doğru bir hasar hacmi tahmini için, sol ve sağ beyin hemisferlerinde beyaz görünen infarkt alanını, yani lezyon derinliğini değerlendirmek amacıyla NIH'den Scion image gibi bir görüntü analiz sistemi kullanın.Bu D sınırlamasını tüm beyin kesitlerinde tekrarlayın. İnfarkt hacmini keyfi birimler cinsinden hesaplayın ve her kesit için bunları karşı tarafındaki lezyonsuz alanın yüzdesi olarak ifade edin. Diğer lamları immünohistokimya çalışmaları için -80 °C'de saklayın.Nöro skor değerlendirmesi, intralüminal prosedüre tabi tutulan deneklerimde T-M-C-A-O işleminin başarısını doğrulamaktadır. Burada görüldüğü üzere, tutarlı, güçlü ve orta düzeyde kıvrılma gözlemlenmekte ve fare, burnu neredeyse kuyruğuna değecek şekilde bir ile iki saniyeden fazla süre boyunca kıvrılmış pozisyonunu korumaktadır. Deneyimizde, tüm fareler test süresi boyunca nöro skoru ikiye karşılık gelen, en az hafif düzeyde tutarlı bir kıvrılma sergilemiştir.Beyin enfarktının boyutunu değerlendirmek amacıyla Kressel violet boyaması yapılmıştır. Burada gösterilen T-M-C-A-O işlemini takiben, reperfüzyondan 72 saat sonra Kressel violet ile boyanmış fare beyninin temsili koronal kesitleri sunulmuştur. Etiketlenen enfarkt alanı (esas olarak striatum, korteks ve bitişik beyin bölgeleri), Kressel ile boyanmadığı için beyaz olarak görünmektedir.Burada mor renkle gösterilen kısım, sağ hemisferdeki beyaz alanın, sol hemisferdeki karşı tarafın lezyonsuz alanına yüzde olarak oranıyla ifade edilen hasar hacmidir. İskemik inme sonrası C 57 black six erkek farelerdeki enfarkt hacmi, lezyonsuz hemisferin yaklaşık %70'ini temsil eder. Bu prosedür, güçlü bir lezyon tekrarlanabilirliği sağlar.Bu videoyu izledikten sonra, farelerde geçici iskemik inme nasıl gerçekleştirileceği konusunda iyi bir anlayışa sahip olmalısınız. Ayrıca, beyin infarkt hacminizi ölçmek için kullanılan quiz viol yaklaşımı, ilgili belirteçleri immünokimya ile test etmek için birçok materyale sahip olma avantajını sunar. İzlediğiniz için teşekkürler ve deneylerinizde başarılar dileriz.

mouse-model-intraluminal-mcao-cerebral-infarct-evaluation-cresyl

Research

JoVE Journal

Medicine

Tıp

Biz video intraluminal monofilament kullanarak yetişkin farelerde orta serebral arter oklüzyonu üretmek için bir yöntem ortaya koymaktadır. Ayrıca beyin enfarktüsü ölçüde 2,3,5-triphenyltetrazolium klorür (TTC) ile boyanarak tarafından nasıl değerlendirileceğini gösterir.

Orta Serebral Arter Tıkanıklığı Fare Modeli

Intraluminal orta serebral arter tıkanıklığı (MCAO) modeli deneysel iskemik inme modelleri arasında en sık kullanılan model. Burada Lazer Doppler flowmetre kılavuzu ile ayrıntılı olarak tüm model ve onun temsilcisi sonuçları gösterecektir.

Fare lazer Doppler flowmetre Rehberlik İskemik İnme intraluminal Orta Serebral Arter Tıkanıklığı (MCAO) Model

Serebral perfüzyon izleme iskemik inme modelleri doğruluğunu geliştirmek için gösterilmiştir. Teknik zorluklar sıklıkla serebrovasküler araştırma için bu önemli aracının kullanımını sınırlamak. Bu videoda, optimize edilmiş bir sistem sıçanlarda intraluminal orta serebral arter oklüzyonu sırasında tek veya çoklu-site hemodinamik izleme elde etmek gösterilmiştir.

Intraluminar Orta Serebral Arter Tıkanıklığı ve Sıçan Strok Model Serebral Perfüzyon İzleme için Optimize Sistemi

Fototromboz son derece tekrarlanabilir bir şekilde ilgi alanları küçük ve iyi ayrılmış enfarktüsü uyaran için hızlı, minimal invaziv bir tekniktir. Bu transgenik farelerde beyin plastisitesi oluşturan hücresel ve moleküler okuyan cevapları için özellikle uygundur.

Photothrombotic İskemi: Fare İnme Araştırmalar bir Minimal İnvaziv ve tekrarlanabilir fotokimyasal Kortikal Lezyon Model

Orta serebral arter oklüzyonu (MCAO) çeşitli kemirgen modelleri yaygın deneysel beyin araştırmalarda kullanılır. Burada, insan iskemik strok çoğunluğu tarafından uygulanan zarar tekabül eden bir boyutta tutarlı bir kortikal enfarktüs üreten transkraniyal sürekli uzak MCAO modelini göstermektedir.

Farelerde Modelleme İnme: Distal Orta Serebral Arter Daimi Pıhtılaşma

Inme sonrası beyin miyeloid hücreler karakterizasyonu optik parçalama yöntemi kullanılarak stereolojinin tarafından gerçekleştirilen, ya da beynin bir akım sitometri ile süspansiyonları lökosit olabilir. Her ikisi de iskemik beyin bulundu ana miyeloid hücre alt doğru fenotipik ayrımı gerçekleştirmek için yararlı teknikler vardır.

Geçici veya kalıcı Serebral İskemi Modelinde lökosit alt popülasyonlarının Stereolojik ve Sitometrisi Karakterizasyonu

Bu çalışmada, bir orta serebral arter tıkanıklığı (MCAO) fare modeli kurarak daha tekrarlanabilir sonuçlar elde etmek için varolan deneysel yöntemini değiştirmek. Glycyrrhizae Radix, sözlü yönetimi et köksap (GR) metanol özü (GRex), kontur indüksiyon, takip toplam infarktüsü cilt tedavi edilmemiş kontrol grubuna göre önemli ölçüde azalmıştır.

Glycyrrhizae Radix nöroprotektif etkilerinin değerlendirilmesi et Rhizoma ekstresi kullanarak bir geçici orta serebral arter tıkanıklığı fare modeli

Serebral iskemi-reperfüzyon bir fare modeli kontur Patofizyoloji araştırmak için kuruldu. Klemple sağ orta serebral arter ve şu ortak Karotid arter ligate ve kan akımı iskemi 10-40 dakika sonra geri yükleme.

Serebral iskemi-reperfüzyon iki damar tıkanıklığı fare modeli

Deneysel inme araştırmalarında orta serebral arter tıkanma (MCAo) farklı modelleri kullanılmaktadır. Burada, serebrovasküler trombüsin spontan pıhtı lizisi veya tedavisi nedeniyle çıkarıldığı insan inmesini taklit etmeyi amaçlayan dış karotis arter (ECA) yoluyla geçici MCAo'nun deneysel bir inme modeli tanımlanmıştır.

Farelerde Modelleme İnme: Dış Karotid Arter yoluyla Geçici Orta Serebral Arter Tıkanıklığı

Bu protokol, orta büyüklükte bir enfarktüse ve mükemmel bir hayatta kalma oranına sahip benzersiz bir fare vuruşu modeli gösterir. Bu model, klinik öncesi inme araştırmacılarının iskemi süresini uzatmasına, yaşlı fareleri kullanmasına ve uzun vadeli fonksiyonel sonuçları değerlendirmesine olanak tanır.

Yaşlı Farelerde İnme Sonuçlarını İncelemek için Modifiye Transkraniyal Orta Serebral Arter Oklüzyon Modeli

Burada, C57BL/6J farelerde transkraniyal elektrokoagülasyon yoluyla distal orta serebral arter tıkanıklığı (dMCAO) modeli oluşturmak ve sonraki nörolojik davranışları ve histopatolojik özellikleri değerlendirmek için bir protokol sunuyoruz.

Distal Orta Arter Oklüzyonu Tekniği Kullanılarak Farelerde Akut İskemik İnme İndüksiyonu

Öğrenin farelerde geçici orta serebral arter oklüzyonu modeliyle iskemik inme oluşturmayı ve kresil violet boyama ile serebral infarkt hacmini değerlendirmeyi. Bu yöntem nörolojik hasar ve genetik çalışmalar için güvenilir sonuçlar sunar.

Intraluminar MCAO Mouse Model: kresil Violet Boyama tarafından Serebral İnfarktı Değerlendirilmesi

Daha fazla video keşfet