Name: Hücre Survival üzerinde Bakteriler ve Etki Dondurma-kurutma için formülasyonlar (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2013-08-03T14:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 55 s
Description: Keşfedin bakteri hücrelerinin dondurarak kurutma işlemlerinde farklı formülasyonların canlılık üzerindeki etkisini. Bu yöntem, hücre koruma tekniklerini optimize etmek için değerli bilgiler sunar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Çalışma DOM programı ve Avrupa Birliği Topluluk FP7 Çerçeve programından hibe 211.684 (BACSIN) ile Stratejik Çevre Araştırma için İsveç Vakfı (mistra) tarafından desteklenmiştir. Biz kavramsal anlatım ile yardımcı olmak için X-ışını analizi ve L. Tang filme yardım için J. Engstrand teşekkür ederim.

1. P. yetiştirme ve hasat putida <ol><li> P. bir koloni ile triptik soy broth 100 ml (TSB) aşılayarak Pseudomonas putida bir starter kültür hazırlayın putida hücreleri triptik soya suyu (TSA) ile desteklenmiş agar üzerinde kültürlenmiştir. 130 rpm ayarlanmış bir sallayarak gemide 30 ° C de kültür tutun. </li><li> 7 saat taze TSB ortamı için marş kültür eşdeğer ana kültürün son hacminin 1/10 ile bir kısım aktardıktan sonra. 16 saat 130 rpm&#39;de sallayarak gemide 30 ° C hücreleri tutun. </li><li> Büyüme 16 saat sonra hücreler, oda sıcaklığında 20 dakika boyunca 1500 x g&#39;de hücre kültürü iplik ile hasat edilir. Süpernatant süzün ve pellet besiyerine izotonik olan bir NaCl çözeltisi içinde olan hücre yeniden süspanse ederek hücreleri yıkayın. Bu durumda, 150 mM NaCI çözeltisi kullanıldı. , Hücreler daha sonra bir kez daha santrifüje tabi tutulur ve yüzer madde formülasyonu ortam içinde yeniden süspansiyona önce dekante ediliradım 3.2. </li></ol> 2. Diğer türlerin ekimi <ol><li> Diğer bakteri türleri için protokol uyarlamak için yetiştirme ve hasat işlemleri bu türlerin ihtiyaçlarına göre değiştirilmelidir. Hasat ve yıkama adım (lar) ve hücreleri işlerken ozmotik şok önlemek için, çözümlerin ozmolalite hasatta büyüme ortamı uyumlu olması gerekmektedir. </li></ol> 3. Hücre Formülasyon <ol><li> Ilgili matris bileşenleri tartılarak formülasyonu çözümleri hazırlayın ve onları suda çözülür. Izotonik koşulları elde etmek için, ya yardımcı maddenin miktarını ayarlamak veya istediğiniz ozmolalite ulaşmak için NaCl veya başka bir hücre uyumlu çözünen ekleyin. Gibi disakaridler gibi düşük molekül ağırlıklı maddeler için miktarlarda kolayca izotonik koşullarına ulaşmak için ayarlanabilir. Yüksek moleküler ağırlığa sahip olan polimer gibi maddeler için, tonisite çok uyumlu hücre ile ayarlanmalıdırLutes, örneğin NaCl veya disakkaritler. Bir maddenin bir yanı da dondurma-kurutma davranışları ve hücre canlılığı etkileyebilir, formülasyonun fiziksel özelliklerine, etkileyecektir unutmayın. </li><li> Yıkama solüsyonu (bu durumda, NaCl) boşaltacaktır ve ilgili formülasyon dahil edilmesi, hücrelerin yeniden askıya. </li><li> Hücrelerin homojen bir şekilde disperse edilir olduğundan emin olun. Daha yüksek viskoziteler formülasyonlar kullanılarak karıştırılmış ise düşük viskoziteli formülasyonlar, örn., Bir karıştırma çubuğu eklenmesi ve homojen karışım elde edilene kadar kabı çalkalayarak vortekslenmiş. </li><li> Dondurarak kurutma şişeleri içine formülasyonlar bölün. Şişeleri önce ve dondurma-kurutma sırasında çıkarılan su miktarını hesaplamak için dondurularak kurutulduktan sonra numune ile, boş bir seçim yapılması gerekmektedir. </li><li> Şişeleri dondurma-kurutma makinesi içinde imzalanacak istiyorsak şişeleri için lastik tapalar ekle, 4.3 adıma bakın. </li><li> Dondurarak kurutmadan önce, her bir oluşum içinde hücrelerin Numaralandırma, adım 6 bkz. </li> &lt;/ Ol&gt; 4. Dondurma-kurutma <ol><li> Dondurarak kurutma koşulları, formülasyonun fiziksel özelliklerine göre ayarlanması gerekir. En önemli parametre, bu durumda, cam geçiş ısısı Tg, formülasyon, bu su hala mevcut olduğunu belirtmek için donma-konsantre numune için Tg &#39;anlamına gelir. Dondurarak konsantre formülasyonun Tg &#39;kolayca diferansiyel tarama kalorimetresi (DSC) ile ölçülür, adım 7 bkz. </li><li> Dondurarak kurutma işleminin parametrelerini ayarlama dolayısı ile de numunenin sıcaklığı, numunenin Tg altında ve bu her zaman olduğu oda basıncı, yani sekonder, formülasyon içinde bir buz hızlı süblimasyon, yani birincil kurutma ve artık su sağlar kurutulması. Numune sıcaklığı kurutma işlemi sırasında &#39;Tg üzerindeki ise önemli hücresel yaşam azaltabilir numunenin Parçalanmaya büyük bir risk vardır. </li><li> F sonra kuru ürünlerini korumak içinreeze kurutma örnek atmosfer kontrol edilmesi gerekir. Mümkünse vakum dondurarak kurutma döngüsünün sonunda serbest bırakılmadan önce, dondurularak-kurutma örnekleri mühür. Seçenek olarak ise, tercih edilen şişe, atmosfer ile doldurulabilir. Bu depolama atmosferdeki nem ve oksijen mevcut olduğu gibi ortam koşullarına örnekleri maruz kalmasını önlemek için önemli olan hücrelerin hayatta kalma etkileyecektir. </li><li> Şişeleri tartılır. </li></ol> 5. Rehidrasyon <ol><li> Iyonu giderilmiş ve steril su ile örnekleri rehidrate. Ilave edilecek su miktarı, dondurarak kurutma sırasında çıkarılan ve boş bir flakon, dondurarak kurutma öncesi ve sonrası örnek ile aynı flakonun ağırlığı hesaplanır miktarı olarak aynı olmalıdır. Vortex örnekleri şimdi ve sonra tekrar çözümler homojen görünür kadar. </li></ol> 6. Sayım <ol><li> Her bir örnekten 100 ul çizmek ve 10-kat seri dilüsyonları olun. Inte dilüsyonları itibarengeri kalan 100 ul TSA-plakalar üzerinde kaplıdır. Plakalar gerekli olan sıcaklık ve süre inkübe edilir. </li></ol> 7. Donma Davranış formülasyonu karakterizasyonu <ol><li> Küçük bir miktar, Take 5 - 10 mg, örnek ve kapaklı bir DSC-alüminyum tava içine alın. Bir referans olarak boş bir tava hazırlayın. </li><li> DSC sıcaklık tarama programı ayarlayın. Soğutma programı dondurarak kurutma programına dondurma basamağı taklit etmek için ayarlanır. Soğutma kinetik sulu formülasyonların Tg &#39;etkileyebilir olarak bu yapılır. Isıtma tarama de normal olarak incelenmiştir formülasyonların beklenen Tg &#39;, -100 ° C&#39;nin altında bir sıcaklıkta, çökertmek başlamadan önce </li><li> 40 ° C / dak kullanılır - uygun bir ısıtma hızında, 5 normal olarak bir ısıtma hızı seç. Kaydedilen ısı akışı sinyal watt olarak ifade edilir ve ısıtma hızı etkilenir. Daha yüksek ısıtma hızı Tg &#39;daha büyük bir sinyal verecektir. </li><li> Sıcaklık aralığı ayarlayın, böylece it Tg &#39;ve formülasyonun erime kapsar. </li></ol> 8. Sulu Formülasyonlarının Yüzey Gerilimi Ölçümleri <ol><li> Bu deneyde kullanılan deney düzeneği yüzey ölçmek için du Nouy yöntemine göre. </li><li> Dikkatlice platin halkası ve ölçüm kabı temizleyin. Geminin, aseton ile durulanır tüy bırakmayan bir doku ile sildi ve daha sonra renksiz bir alev ile iç yakılır. Halka renksiz bir alev kırmızı renkte yanar. </li><li> Çözüm ile gemi doldurun ve yüzey ölçmeden önce yerleşmek izin. Denge durumu sadece uzun bir süre sonra ulaşıldığında çözümler için, örneğin polimerler, burada kullanılan basit kurulum nitel veriler sağlayacaktır. </li><li> Yüksek viskoziteli,% 2 arasında örneğin, çözeltiler (w / w) olan formülasyonlar için HEC veya HPMC, yüzey gerilimi daha düşük konsantrasyonlarda çözümlerine ölçülmelidir çıkılarak ve daha sonra. Bu gerçeği yararlanarak yapılabilir ki% 0.5 altındaki konsantrasyonlarda (a / a) de yüzey gerilimi seviyeleri kapalı düşüş. </li></ol> 9. Kuru formülasyonlar arasından X-ray Analizi <ol><li> Matris / bakteri az miktarda alın ve bir numune tutucu üzerine yük. </li><li> X-ray difraktometresi içine numune tutucu monte edin. </li><li> Örnek herhangi bir kristal faz analiz etmek üzere Bruker ikinci EVA program paketi kullanılabilir. </li></ol> 10. Elektron Mikroskobu <ol><li> Şişeleri matris / bakteri küçük bir miktar dışarı atın ve bir SEM saplama üzerine sabitleyin. </li><li> Sıçramasına-lak (Bu çalışmada kullanılan Thermo VGScientific Polaron SC7640) ve Au / Pd veya Pt birkaç nm ile kat örnek SEM tutucu yükleyin. Bu deneylerde püskürtme parametreler: Bir ~ 5 için 1.900 V, 20 mA ve 20 sn, - 10 nm Au / Pd kaplama. Kaplama görüntü alımı sırasında elektrik şarj azaltır. Şarj devam ve görüntü neden ise, ince bir kaplama ile başlamak önerilir veeşya, numune tekrar kaplanmalıdır. </li><li> SEM odasında SEM tutucu yükleyin. Uygun görüntüleme parametreleri seçin. Şekil 2 (FEI Strata DB235) kullanılan alet için biz 5 kV hızlandırma gerilimi, spotsize 3, 5 mm ve ikincil elektron dedektörü bir çalışma mesafesi kullanılır. </li><li> İsteğe bağlı olarak, daha fazla ayrıntıları ortaya çıkarmak için, polimer içinde gömülü bakteri çapraz kesitleri için odaklanmış iyon yaygı kullanmak mümkündür. </li></ol>

<ol><li>Wessman, P., Mahlin, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Impact+of+matrix+properties+on+the+survival+of+freeze-dried+bacteria%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Sci.+Food+Agric%22%5BJournal%5D)">Impact of matrix properties on the survival of freeze-dried bacteria.</a> J. Sci. Food Agric. 91 (14), 2518-2528 (2011).</li>
<li>Ablett, S., Izzard, M. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Differential+Scanning+Calorimetric+Study+of+Frozen+Sucrose+and+Glycerol+Solutions%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+the+Chemical+Society-Faraday+Transactions%22%5BJournal%5D)">Differential Scanning Calorimetric Study of Frozen Sucrose and Glycerol Solutions.</a> Journal of the Chemical Society-Faraday Transactions. 88 (6), 789-794 (1992).</li>
<li>Knopp, S. A., Chongprasert, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+relationship+between+type+TMDSC+curve+of+frozen+sucrose+solutions+and+collapse+during+freeze-drying%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Thermal+Analysis+and+Calorimetry%22%5BJournal%5D)">The relationship between type TMDSC curve of frozen sucrose solutions and collapse during freeze-drying.</a> Journal of Thermal Analysis and Calorimetry. 54 (2), 659-672 (1998).</li>
<li>Crowe, J. H., Leslie, S. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Is+Vitrification+Sufficient+to+Preserve+Liposomes+during+Freeze-Drying%5BTitle%5D)+AND+%22Cryobiology%22%5BJournal%5D)">Is Vitrification Sufficient to Preserve Liposomes during Freeze-Drying.</a> Cryobiology. 31 (4), 355-366 (1994).</li>
<li>Jain, P., Sen, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+glass-forming+biopreservatives+on+head+group+rotational+dynamics+in+freeze-dried+phospholipid+bilayers%3A+A+P-31+NMR+study%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Chemical+Physics%22%5BJournal%5D)">Effect of glass-forming biopreservatives on head group rotational dynamics in freeze-dried phospholipid bilayers: A P-31 NMR study.</a> Journal of Chemical Physics. 131 (2), (2009).</li>
<li>Stock, J. B., Rauch, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Periplasmic+Space+in+Salmonella-Typhimurium+and+Escherichia-Coli%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Biological+Chemistry%22%5BJournal%5D)">Periplasmic Space in Salmonella-Typhimurium and Escherichia-Coli.</a> Journal of Biological Chemistry. 252 (21), 7850-7861 (1977).</li>
<li>Crowe, J. H., Hoekstra, F. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Anhydrobiosis%5BTitle%5D)+AND+%22Annual+Review+of+Physiology%22%5BJournal%5D)">Anhydrobiosis.</a> Annual Review of Physiology. 54, 579-599 (1992).</li>
<li>Leslie, S. B., Israeli, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Trehalose+and+Sucrose+Protect+Both+Membranes+and+Proteins+in+Intact+Bacteria+during+Drying%5BTitle%5D)+AND+%22Applied+and+Environmental+Microbiology%22%5BJournal%5D)">Trehalose and Sucrose Protect Both Membranes and Proteins in Intact Bacteria during Drying.</a> Applied and Environmental Microbiology. 61 (10), 3592-3597 (1995).</li>
<li>Nesarikar, V. V., Nassar, M. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+cations+and+anions+on+glass+transition+temperatures+in+excipient+solutions%5BTitle%5D)+AND+%22Pharmaceutical+Development+and+Technology%22%5BJournal%5D)">Effect of cations and anions on glass transition temperatures in excipient solutions.</a> Pharmaceutical Development and Technology. 12 (3), 259-264 (2007).</li>
<li>You, Y., Ludescher, R. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+effect+of+sodium+chloride+on+molecular+mobility+in+amorphous+sucrose+detected+by+phosphorescence+from+the+triplet+probe+erythrosin+B%5BTitle%5D)+AND+%22Carbohydr.+Res%22%5BJournal%5D)">The effect of sodium chloride on molecular mobility in amorphous sucrose detected by phosphorescence from the triplet probe erythrosin B.</a> Carbohydr. Res. 343 (2), 350-363 (2008).</li>
<li>Crowe, J. H., Hoekstra, F. A., Nguyen, K. H. N., Crowe, L. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Is+vitrification+involved+in+depression+of+the+phase+transition+temperature+in+dry+phospholipids%5BTitle%5D)+AND+%22Biochim.+Biophys.+Acta+Biomembr%22%5BJournal%5D)">Is vitrification involved in depression of the phase transition temperature in dry phospholipids.</a> Biochim. Biophys. Acta Biomembr. 1280, 187-196 (1996).</li>
</ol>

Çıkar çatışması ilan etti.

Bu çalışma için itici dondurarak kurutma sırasında hücre hayatta kalmak için önemli olabilecek bazı formülasyon özellikleri araştırmaktır. Içsel kurutma tolerans farklı türler arasında farklılıklar göstermekle beraber, Şekil 1A, farklı formülasyonları destek hücre sağkalım benzer ne kadar iyi eğilim gösterildiği. Bu sakaroz ve Ficoll bir karşılaştırma ile başlamak bilgilendirici. Bu hücre hayatta kalma desteklemek için bir formülasyon için önemli bir faktördür ve böylece de kuru durumda hücrenin protein...

<table><tbody><tr><td>Ficoll PM 400</td><td>GE-healthcare</td><td>17-0300-10</td><td></td></tr><tr><td>HEC (Natrosol-M Farmasötik Derece)</td><td>Ashland</td><td></td><td>Ashland'dan Hediye</td></tr><tr><td>HPMC (Methocel F4M)</td><td>Dow</td><td></td><td>Uppsala Üniversitesi, Eczacılık Bölümü'nden bağışdır</td></tr><tr><td>Sükroz</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S2395</td><td></td></tr><tr><td>NaCl</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>71376</td><td></td></tr><tr><td>Triptik Soya Bulyonu</td><td>Merck</td><td>105459</td><td></td></tr><tr><td>Triptik Soya Agar</td><td>Merck</td><td>105458</td><td></td></tr><tr><td>Lyostar II</td><td>FTS Kinetiği</td><td>Uygulanamaz</td><td></td></tr><tr><td>Pyris Diamond DSC</td><td>Perkin-Elmer</td><td>Uygulanamaz</td><td></td></tr><tr><td>Bruker AXS SMART CCD 1k Difraktometre</td><td>Bruker</td><td>U.A.</td><td></td></tr><tr><td>Çift huzmeli FEI Strata DB235 FIB/SEM</td><td>FEI</td><td>U.A.</td><td></td></tr><tr><td>Kr&amp;#252;Eğitim Amaçlı Tansiyometre</td><td>Kr&amp;#252;ss</td><td>Uygulanamaz</td><td></td></tr></tbody></table>

hücre survival üzerinde bakteriler ve etki dondurma-kurutma için formülasyonlar

Formulations for Freeze-drying of Bacteria and Their Influence on Cell Survival

Hücresel su geri dönüşümlü depolama kolaylaştırmak için mikroorganizmaların inaktive kaldırılabilir. Kaldırma Böyle bir yöntem, hafif bir dehidrasyon yöntemi olarak kabul edilir dondurarak kurutma vardır. Kurutma esnasında hücrenin hayatta kalması kolaylaştırmak için, hücreler, genellikle daha önce formüle edilmektedir. Formülasyon hücreleri katıştırır ve dondurma ve kurutma sırasında hücrelerin üzerine uygulanan çeşitli zararlı stresleri koruyan bir matris oluşturur. Burada ve dondurularak kurutulduktan sonra hücrelerin hayatta kalma oranını değerlendirmek için genel bir yöntem sunmak ve dört farklı formülasyonları ile elde edilen sonuçların karşılaştırılması ile de gösterilmiştir: disakarid sukroz, polimer Ficoll PM400 elde sakaroz ve ilgili polisakkaritler, hidroksietil selüloz (HEC iki bakteri suşları, P.) ve hidroksipropil metil selüloz (HPMC), putida KT2440 ve A. chlorophenolicus A6. Bu çalışmada biz dondurarak kurutma için formülasyonları hazırlamak için nasıl ve mekanik araştırmak için nasıl göstermekdiferansiyel taramalı kalorimetre (DSC), yüzey gerilimi ölçümleri, X-ışını analizi ve elektron mikroskobu kullanarak ve sağkalım oranları için bu verileri ilgili formülasyonu karakterize tarafından rehidrasyon sonra hücre canlılığı izm. Polimerler, değişen derecelerde ilgili polisakarit benzeyen sukroz, monomer cinsi bir yapı elde etmek için seçilmiştir. Bu yöntemi kurulum kullanarak biz formülasyonun bazı fiziksel özellikleri 1 kontrol eğer polimerler disakkaritler kadar etkili hücre sağkalım destekleyebilir gösterdi.

Tablo 1, formülasyon bileşimi verileri, dondurulmuş formülasyonları, kuru numune yapısını ve formülasyonun çözümler yüzey gerilimi ısıtma esnasında DSC tarafından kaydedilen ve termal olay gösterir. Sakaroz T g &#39;-40 ° C de 2, 3 ile tespit edilmiştir ve% 20 ağ / ağ aşağıdaki sukroz konsantrasyonu tespit etmek için zor olabilir. -35 ° C termal olay muhtemelen buz 2 çözünme başlangıcı ile ilgilidir. Kristal yapısı HEC ve HPMC örneklerde X-ışını tarafından tespi...

Dondurma-kurutma genellikle canlı bakteri hücrelerinin kuru ürün elde etmek kolay ve kullanışlı bir yoludur. Sürecin bir sorun hücre hayatta kalabilmek. Burada ayrıntılı dondurarak kurutma esnasında hücre hayatta kullanılan formülasyonunun özelliklerini nasıl etkilediğini araştırmak için bir işlem.

Hücre Survival üzerinde Bakteriler ve Etki Dondurma-kurutma için formülasyonlar

Mikroorganizmaları depolamayı kolaylaştırmak amacıyla, geri dönüşümlü şekilde inaktive etmek için hücresel su uzaklaştırılabilir. Bu uzaklaştırma yöntemlerinden biri, ... olan dondurarak kurutmadır.

Bu deneyin amacı, farklı dondurarak kurutma formülasyonlarının hücre sağkalımı üzerindeki etkisini gözlemlemektir. Başlangıç olarak, hücre kültürünü dondurarak kurutmak için farklı formülasyonlar hazırlanır. Ardından, her bir formülasyon hücre kültürü ile karıştırılır, dondurularak kurutulur ve daha sonra yeniden hidrate edilerek sağkalım oranları ölçülür.Sonuçlar, karakterize edilen özelliklerle ilişkilendirilebilen sağkalım oranlarındaki farklılıkları göstermektedir. Bu yöntem, bir formülasyonun dehidrasyon sırasında hücre sağkalımı için hangi fiziksel ve yapısal özelliklerinin önemli olduğunu anlamanıza yardımcı olabilir. Pseudomonas putter'ın başlangıç kültürünü hazırlamak için, triptik soya soyu veya TSB eklenmiş agar üzerinde kültüre edilmiş bir hücre kolonisi ile 100 mililitre triptik soya soyu veya TSB'yi inoküle ederek başlayın; kültürü 30 °C'de, 130 RPM'de çalkalayarak yedi saat boyunca inkübe edin.Kültürden bir alikotu taze TSB'ye aktarın ve 16 saat boyunca büyütün. Hücreleri, oda sıcaklığında 20 dakika boyunca 1.500 ×g kuvvetinde santrifüj ederek hasat edin. Hücre peletini, 150 mM sodyum klorür içinde süspanse ederek Resus ile yıkayın.Hücreleri pelletleyin ve yeniden sü

formulations-for-freeze-drying-bacteria-their-influence-on-cell

Research

JoVE Journal

Biology

Biyoloji

Kültüre memeli hücrelerinin hücre biyolojisi çalışmalarında yoğun olarak kullanılmaktadır. Bu video hücreleri ve dondurulmuş stokları nasıl kurtarmak için dondurma ve saklamak için gerekli temel becerileri açıklar.

Donma Çözülme ve Ulaştırma Ambalaj Hücreler

Yerli yakın eyalette bakteri hücrelerinin ultrastrüktür çalışma elektron cryotomography (EKT) nasıl kullanılacağı "makromoleküler" (~ 4 nm) çözünürlük, burada göstermektedir.

Bakteriyel Hücre Elektron Cryotomography

Kaynak: Lea-Smith, D. J. ve diğerleri. Model siyanobakteriyel türlerde işaretli ve işaretsiz mutantların üretimi. J. Vis. Exp. (2016)Bu video, konsantre hücre süspansiyonlarını gliserol veya DMSO ile birleştirerek ve düşük sıcaklıklarda depolayarak siyanobakteriyel suşların kriyo-korumasını göstererek fotosentez ve genetik çalışmalar için canlı kültürlerin uzun vadeli korunmasını mümkün kılar.

Gliserol veya dimetil sülfoksit kullanarak siyanobakteriyel suşların uzun süreli kriyokonservası

Bu makale, transmisyon elektron mikroskobu ile süspansiyon hücreleri görselleştirme için bir kullanımı kolay ve düşük maliyetli bir cryofixation yöntemini tarif etmektedir.

Dalma Donma: Transmisyon Elektron Mikroskobu içinde Süspansiyon Hücrelerinin ultrastrüktürel ve immünolokalizasyonu Çalışmaları için Aracı

Kriyojenik sıcaklıklarda sulu karışımların mikro-piko-litre büyüklüğündeki damlacıklarının camsı faz yoğunluklarını belirlemek için bir protokol tarif edilmiştir.

Kriyojenik Sıcaklıklarda Sulu Camların Yoğunluğunun Ölçülmesi

Bu iletişim kuralı canlılık parametre ve düşük basınç plazma ile tedaviden sonra Bacillus subtilis sporlar canlandırıcı olarak DNA onarım işlemleri izleme alaka değerlendirmek için izleme tarafından gereken önemli ardışık adımlar gösterilmektedir Floresans etiketli DNA onarım proteinler confocal mikroskobu zaman karar vermek ve elektron mikroskobu tarama yoluyla.

Zararlı etkileri, düşük basınç plazma sterilizasyon Bacillus subtilis sporlar kullanarak canlı cep mikroskobu sağkalıma soruşturma

Biz bozulma ve proteinlerin denatürasyonu en aza indirgeyen bir kriyojenik dondurucu değirmen kullanarak maya veya diğer hücrelerden tüm hücre özleri hazırlanması için güvenilir bir yöntem açıklar. Hücre ekstreleri fonksiyonel protein komplekslerinin saflaştırılması, proteomik analizler, ko-immünopresipite çalışmaları ve labile protein modifikasyonlarının saptanması için uygundur.

Otomatik Dondurucu Değirmeninde Kriyogrinding ile Hücre Ekstrelerinin Hazırlanması

Burada bakteri, maya, kültürlü hücreler, izole hücreler, hayvan ve insan dokuları ve virüsler de dahil olmak üzere biyolojik örneklerin hızlı donması için sandviç dondurma cihazının nasıl kullanılacağını gösteriyoruz. Ayrıca, hızlı donma işleminden sonra ultra ince kesitler için numunelerin nasıl hazırlanacağını da gösteriyoruz.

Elektron Mikroskopisinde Biyolojik Örneklerin İyi Ultrayapısal Korunması için Sandviç Dondurma Cihazı Kullanılarak Hızlı Dondurma

Diş plaklarını filtre ederek ve konak bakterilerle birlikte kültleştirerek, saccharibacteria adlı yeni bakteriyel fitülümün yetiştirilmede zor olan üyelerini izole etmek için bir yöntem gösteriyoruz.

Ağız Boşluğundan Simbiyotik Sakkarakterinin Kararlı İkili Kültürlerinin Kurulması

Phormidium lacuna , deniz kaya havuzlarından izole edilmiş filamentli bir siyanobakteridir. Bu makalede filamentlerin doğal kaynaklardan izolasyonu, DNA ekstraksiyonu, genom dizilimi, doğal transformasyon, sfGFP ekspresyonu, kriyokonservasyon ve motiliteye yöntemleri anlatılmaktadır.

Filamentöz Cyanobacterium Phormidium lacuna'nın Doğal Transformasyonu, Protein İfadesi ve Kriyokorunumu

Bu protokol, spreyle kurutulmuş bir probiyotik ürünün üretimi ve fizikokimyasal karakterizasyonunda yer alan adımları detaylandırır.

Probiyotik bakterilerin sprey kurutulması için proses geliştirme ve ürün kalitesinin değerlendirilmesi

Keşfedin bakteri hücrelerinin dondurarak kurutma işlemlerinde farklı formülasyonların canlılık üzerindeki etkisini. Bu yöntem, hücre koruma tekniklerini optimize etmek için değerli bilgiler sunar.

Hücre Survival üzerinde Bakteriler ve Etki Dondurma-kurutma için formülasyonlar

Daha fazla video keşfet