Name: CD4 İzolasyon Miltenyi MACS Arıtma Fare lenf düğümleri + T hücreleri (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2007-11-01T00:34:55.000+00:00
Duration: 9 min 47 s
Description: Öğrenin, fare lenf düğümlerinden CD4+ T hücrelerini Miltenyi MACS kiti ile izole etme yöntemini. Negatif seleksiyon tekniği sayesinde ≥%96 saflıkta hücre elde edilir ve immünoloji araştırmalarında kullanılır.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Rebecca Paquett MACS tamponunun hazırlanması için teşekkür etmek istiyorum.

Lütfen okuyun ve uygulayın Miltenyi kiti veya çevrimiçi dahil protokol <a href="http://www.miltenyibiotec.com/">http://www.miltenyibiotec.com/</a> .

<ol><li>Miller, M. J., Hejazi, A. S., Wei, S. H., Cahalan, M. D., Parker, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((T+cell+repertoire+scanning+is+promoted+by+dynamic+dendritic+cell+behavior+and+random+T+cell+motility+in+the+lymph+node%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">T cell repertoire scanning is promoted by dynamic dendritic cell behavior and random T cell motility in the lymph node.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 101, 998-1003 (2004).</li>
<li>Matheu, M. P., Deane, J. A., Parker, I., Fruman, D. A., Cahalan, M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Class+IA+phosphoinositide+3-kinase+modulates+basal+lymphocyte+motility+in+the+lymph+node%5BTitle%5D)+AND+%22J+Immunol%22%5BJournal%5D)">Class IA phosphoinositide 3-kinase modulates basal lymphocyte motility in the lymph node.</a> J Immunol. 179, 2261-2269 (2007).</li>
</ol>

Yazarların beyan edilecek herhangi bir çıkar çatışması yoktur.

Birincil kaynak hücrelerin izolasyonu çok daha karmaşık protokoller gerekli bir adımdır. Miltenyi, insanlar, insan olmayan primatlardan, sıçan ve biz burada açıklamak gibi, fare dahil olmak üzere çeşitli organizmalar hücreleri izole etmek için kitleri sunmaktadır. Pozitif seçimi (veya hücre kaybı) yanı sıra olumsuz seçim ya boncuk tabanlı Manyetik hücre ayırma sağlar. Burada, biz, bakir ya da na ve CD4 + yardımcı T hücreleri olumsuz seçim göstermektedir. Biz genellikle ≥% 96 saf CD4 + / CD3 + hücrelerden arındırmak bu standart protokolü kul...

<table><tbody><tr><td>MACS Tamponu</td><td>Reaktif</td><td>Yok</td><td>Yok</td><td>Miltenyi tarafından açıklanan şekilde hazırlayın.</td></tr><tr><td>CD4+ T hücresi İzolasyon Kiti: Temassız İzolasyon</td><td>Reaktif</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-090-860</td><td>Miltenyi sistemi ile kullanım içindir.</td></tr><tr><td>Steril Fosfat Tamponlu Salin (PBS)</td><td>Reaktif</td><td></td><td></td><td>MACS tamponu hazırlığında kullanım içindir.</td></tr><tr><td>Corning 35mm TC İşlemi Görmemiş Kültür Kabı</td><td>Diğer</td><td>Corning</td><td>430588</td><td>Tek hücre süspansiyonu hazırlığında kullanılır.</td></tr><tr><td>70 mikron Hücre Süzgeci</td><td>Araç</td><td>BD Biosciences</td><td>352350</td><td>Tek hücre süspansiyonu hazırlığında kullanılır.</td></tr><tr><td>6 mL Şırınga</td><td>Araç</td><td>Tyco Healthcare, Covidien</td><td>8881516051</td><td>Tek hücre süspansiyonu hazırlığında kullanılır.</td></tr><tr><td>10x Dulbecco&amp;rsquo;s Fosfat Tamponlu Salin (DPBS)</td><td>Reaktif</td><td>Invitrogen</td><td>14200-075</td><td>RBC lizisinde kullanım içindir.</td></tr><tr><td>Steril Su</td><td>Reaktif</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>W4502</td><td>RBC lizisinde kullanım içindir.</td></tr></tbody></table>

cd4 İzolasyon miltenyi macs arıtma fare lenf düğümleri + t hücreleri

Isolation of CD4+ T cells from Mouse Lymph Nodes Using Miltenyi MACS Purification

Birincil kaynak hücrelerin izolasyonu çok daha karmaşık protokoller gerekli bir adımdır. Miltenyi, insanlar, insan olmayan primatlardan, sıçan ve biz burada açıklamak gibi, fare dahil olmak üzere çeşitli organizmalar hücreleri izole etmek için kitleri sunmaktadır. Pozitif seçimi (veya hücre kaybı) yanı sıra olumsuz seçim ya boncuk tabanlı Manyetik hücre ayırma sağlar. Burada, biz, bakir ya da na ve CD4 + yardımcı T hücreleri olumsuz seçim göstermektedir. Biz genellikle ≥% 96 saf CD4 + / CD3 + hücrelerden arındırmak bu standart protokolü kullanarak. Bu protokol, protokol Diseksiyon ve T hücreleri ve diğer hücre tipleri adoptively görüntüleme amaçlı transfer saflaştırılması, Jüpiter 7. sorunu yayınlanan Fare Periferik lenf düğümleri, 2-Foton Görüntüleme ile birlikte kullanılır. Bu protokol video FACS analiz göstermek olmasa da, son derece izole hücrelerinin FACS üzerinden uygun antikorları kullanarak genel saflığını kontrol etmek için tavsiye edilir. Buna ek olarak, T hücre izolasyonu steril olmayan bir yöntem gösterilmektedir. Eğer steril hücreleri belirli bir son kullanıcı uygulaması için gerekli olan, tüm doku kültürü kaputu göstermiştir prosedürleri standart steril koşullar altında yapmak istediğinizden emin olun. Kendi deneyleri ile izlemek ve iyi şans için teşekkür ederiz!

Miltenyi MAC kiti kullanılarak lenfositlerin İzolasyon tüm lenfoid doku homojenatlarında hücreleri arındırmak için güvenilir bir yol. Miltenyi sistemini kullanarak saflaştırılmış Hücreler genellikle ≥% 96 saf. Burada, CD4 + T hücreleri, Miltenyi tarafından sunulan birçok kitleri biri izole etmek için atılan adımları göstermektedir.

CD4 İzolasyon Miltenyi MACS Arıtma Fare lenf düğümleri + T hücreleri

Hücrelerin primer kaynaktan izole edilmesi, daha birçok karmaşık protokolde gerekli bir adımdır. Miltenyi, çeşitli kaynaklardan hücre izole etmek için kitler sunmaktadır...

Bu bir Max MIDI mıknatıstır. Üzerinde, dikkat aşırı güçlü manyetik alanlar yazmaktadır. Merhaba, ben Kaliforniya Üniversitesi Irvine Fizyoloji ve Biyofizik Bölümü'ndeki Mike Collins laboratuvarından Melanie Matthew.Bugün size Milton Biotechnology kitlerini kullanarak CD4 pozitif T hücrelerinin negatif seleksiyon hazırlığını göstereceğiz. Burada Minimax ve MiniMax mıknatısları bulunuyor; Minimax daha büyük ayırmalar için kullanılır. Minimax'e uygun bir kolon aracılığıyla 10⁹ hücreye kadar işlem yapabilirsiniz; MiniMax ise çok daha küçük hücre hacimleri için kullanılır.Böylece, pozitif veya negatif ayrıştırma yapıp yapmadığınıza bağlı olarak, hücrelerinizi uygun antikorla etiketleyeceksiniz. Bunların üzerinde, mıknatısa bağlanacak manyetik boncuklar bulunur. Negatif seçilim durumunda, ilgilendiğiniz hücreler kolondan geçecek ve hücrelerinizi içeren elüatı toplayabileceksiniz.Bu gece size gösterdiğim tekniklerin steril olmadığını belirtmeliyim. Bu nedenle, bu hücreleri hücre kültürü için kullanmak istiyorsanız, her şeyi doku kültürü kabininde steril aletlerle yapmalısınız. CD4 pozitif T hücreleri için bir hazırlık gösteriyor olsam da, bu tekniklerin çoğu Miltenyi Biyoteknoloji kitleri

isolation-cd4-t-cells-from-mouse-lymph-nodes-using-miltenyi-macs

Research

JoVE Journal

Biology

Biyoloji

Fare akciğer dendritik hücreler yüksek oranda saflaştırılmış açıklanmıştır. Özgül ağırlık, geleneksel dendritik hücre alt izolasyon verilir.

Fare Akciğer Dendritik Hücrelerinin İzolasyonu

Bu videoda, manyetik ayırıcı kullanılarak negatif seçilimle farenin dalağından T hücrelerinin zenginleştirilmesi anlatılmaktadır. Teknik, spesifik hücre yüzeyi antijenlerine karşı yönlendirilmiş antikorlar veya ligandlar kullanılarak numunedeki diğer hücrelerin tükenme için hedeflenmesini içerir.

T-Hücresi Zenginleştirme: Manyetik Ayırma ile Karışık Hücre Popülasyonundan T-Hücrelerini İzole Etme Tekniği

Bu videoda, insan periferik kan mononükleer hücrelerinden (PBMC'ler) düşük konsantrasyonlu CD4+Vδ1+γδ T hücreleri popülasyonunun manyetik etiketlemeye dayalı izolasyonu için bir protokol gösterilmektedir. FITC konjuge anti-Vδ1 antikorları, manyetik anti-FITC mikro boncuklar ve anti-CD4 antikor kaplı süperparamanyetik boncukların bir kombinasyonu kullanılarak, CD4 + Vδ1 + T hücreleri PBMC popülasyonundan başarılı bir şekilde saflaştırılabilir.

İnsan Periferik Kan Mononükleer Hücrelerinden CD4+ Vδ1+ γδ T Hücrelerinin Seçici İzolasyonu

Diğer T hücresi alt kümelerinin farklı efektör işlevleri ile, Th17 hücreleri merkezi inflamatuar otoimmün implike edilmiştir. Bu in vitro Th17 farklılaşma protokolü naif CD4 + T lenfositleri Th17 hücrelerine ayırt edebilir, ve daha fazla otoimmün ve konak cevabı rollerini incelemek belirlemek için bir araç sağlar.

İzolasyon ve naif CD4 T Lenfositler Th17 Farklılaşma

Bu protokol, antijen yoğunluğuna tek bir hücre süspansiyonu santrifüj ve ilgi hücre popülasyonlarının son olarak manyetik ve / veya FACS ayıklama, ardından doku enzimatik sindirimi farklı adımları ile insan timus hücreleri sunan izole etmek için bir yöntem göstermektedir.

İnsan Thymus ile myeloid dendritik hücreleri ve epitel hücreleri İzolasyonu

Naif CD4+ T hücreleri, aktivasyon sırasındaki ortama bağlı olarak çeşitli alt kümelere polarize olur.  Naif CD4 + T hücrelerinin çeşitli efektör alt kümelerine farklılaşması, T hücresi reseptör uyaranlarının ve spesifik sitokin sinyallerinin eklenmesiyle in vitro olarak elde edilebilir.

Fare Naif CD4<sup&gt; +</sup&gt; T Hücre İzolasyonu ve<em&gt; In vitro</em&gt; T hücre alt içine Farklılaşma

Farklı dendritik hücre alt kümeleri, lenfoid organlarda nadir popülasyonlar olarak bulunur ve bu nedenle immünolojik deneyler için yeterli sayıda ve saflıkta izole edilmesi zordur. Burada, fare splenik dendritik hücrelerinin şu anda bilinen tüm ana alt kümelerinin izolasyonu için yüksek verimli, yüksek verimli bir yöntem açıklıyoruz.

Fare Dendritik Hücre Alt Grupları İzolasyonunda bir Verimli ve Yüksek Verim Yöntem

Burada biz lenfositler gut ilişkili lenfoid doku Peyer's yamalar ve boşaltma Mezenterik lenf düğümleri de dahil olmak üzere İndüktif sitelerinden ve lamina propria dahil efektör mekanları ekran koruyucu yalıtım için detaylı bir protokol tanımlamak ve bağırsak epitel küçük bağırsak bağışıklık sisteminin.

Lenfositler fare küçük bağırsak bağışıklık sistemi yalıtma

Burada, manyetik hücre sıralama ve içine saf fareler sonraki evlat edinen transfer tarafından fare dalağı dendritik hücreleri izole etmek için bir iletişim kuralı mevcut. Yüksek tuz aktif dendritik hücre modeli evlat edinen transfer ve Akış Sitometresi adım adım yordamlar açıklamak için seçildi.

Yalıtım ve yüksek tuz evlat edinen Transfer dendritik hücreler antijen sunan tedavi

İki foton görüntüleme ve bir bağışıklık yanıtı 1 sırasında bazal koşullar altında lenf nodu içinde lenfosit motilite ve hücresel etkileşimleri ortaya çıkardı. Burada, T hücreleri, lenf düğümleri izolasyon ve görüntüleme motilite CD4 + T hücreleri eksplante lenf nodu evlatlık transferi göstermektedir.

Farelerde Periferik lenf nodu diseksiyonu ve 2-Foton Görüntüleme

Öğrenin, fare lenf düğümlerinden CD4+ T hücrelerini Miltenyi MACS kiti ile izole etme yöntemini. Negatif seleksiyon tekniği sayesinde ≥%96 saflıkta hücre elde edilir ve immünoloji araştırmalarında kullanılır.

CD4 İzolasyon Miltenyi MACS Arıtma Fare lenf düğümleri + T hücreleri

Daha fazla video keşfet