Name: Tek ve Çok hücreli Bağlamlarda Invadopodia aracılı Ekstrasellüler Matriks Proteoliz Kantitatif Ölçümü (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-08-27T13:00:00.000+00:00
Duration: 14 min 23 s
Description: Keşfedin invadopodia aracılı ekstraselüler matriks proteolizinin kantitatif ölçüm yöntemlerini. Floresan jelatin kaplı lameller hazırlayarak hücre davranışlarını ve invazyon mekanizmalarını analiz edin.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Bu eser Batı Virginia Üniversitesi Meryem Babb Randolph Kanser Merkezi&#39;nden bağış fonları tarafından desteklenmiştir. Biz erken tavsiye ve yardım için Susette Mueller (Georgetown Üniversitesi) ve Laura Kelley ederim. Batı Virginia Üniversitesi Mikroskopi Görüntüleme Tesisi kullanımı (Meryem Babb Randolph Kanseri Merkezi, NIH hibe P20 RR16440, P30 ve P30 RR032138 GM103488 tarafından desteklenen) minnetle kabul edilmektedir.

<ol><li>Ridley, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Life+at+the+leading+edge%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Life at the leading edge.</a> Cell. 145, 1012-1022 (2011).</li>
<li>Murphy, D. A., Courtneidge, S. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+%27ins%27+and+%27outs%27+of+podosomes+and+invadopodia%3A+characteristics%2C+formation+and+function%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Rev.+Mol.+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">The 'ins' and 'outs' of podosomes and invadopodia: characteristics, formation and function.</a> Nat. Rev. Mol. Cell Biol. 12, 413-426 (2011).</li>
<li>Linder, S., Wiesner, C., Himmel, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Degrading+Devices%3A+Invadosomes+in+Proteolytic+Cell+Invasion%5BTitle%5D)+AND+%22Annu.+Rev.+Cell.+Dev.+Biol%22%5BJournal%5D)">Degrading Devices: Invadosomes in Proteolytic Cell Invasion.</a> Annu. Rev. Cell. Dev. Biol. , (2010).</li>
<li>Chen, W. T., Chen, J. M., Parsons, S. J., Parsons, J. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Local+degradation+of+fibronectin+at+sites+of+expression+of+the+transforming+gene+product+pp60src%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Local degradation of fibronectin at sites of expression of the transforming gene product pp60src.</a> Nature. 316, 156-158 (1985).</li>
<li>Artym, V. V., Zhang, Y., Seillier-Moiseiwitsch, F., Yamada, K. M., Mueller, S. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dynamic+interactions+of+cortactin+and+membrane+type+1+matrix+metalloproteinase+at+invadopodia%3A+defining+the+stages+of+invadopodia+formation+and+function%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Dynamic interactions of cortactin and membrane type 1 matrix metalloproteinase at invadopodia: defining the stages of invadopodia formation and function.</a> Cancer Res. 66, 3034-3043 (2006).</li>
<li>Ayala, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multiple+regulatory+inputs+converge+on+cortactin+to+control+invadopodia+biogenesis+and+extracellular+matrix+degradation%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Cell+Sci%22%5BJournal%5D)">Multiple regulatory inputs converge on cortactin to control invadopodia biogenesis and extracellular matrix degradation.</a> J. Cell Sci. , (2008).</li>
<li>Ammer, A. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Saracatinib+impairs+head+and+neck+squamous+cell+carcinoma+invasion+by+disrupting+invadopodia+function%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Cancer+Sci.+Ther%22%5BJournal%5D)">Saracatinib impairs head and neck squamous cell carcinoma invasion by disrupting invadopodia function.</a> J. Cancer Sci. Ther. 1, 52-61 (2009).</li>
<li>Seals, D. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+adaptor+protein+Tks5%2FFish+is+required+for+podosome+formation+and+function%2C+and+for+the+protease-driven+invasion+of+cancer+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Cell%22%5BJournal%5D)">The adaptor protein Tks5/Fish is required for podosome formation and function, and for the protease-driven invasion of cancer cells.</a> Cancer Cell. 7, 155-165 (2005).</li>
<li>Yamaguchi, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+mechanisms+of+invadopodium+formation%3A+the+role+of+the+N-WASP-Arp2%2F3+complex+pathway+and+cofilin%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Molecular mechanisms of invadopodium formation: the role of the N-WASP-Arp2/3 complex pathway and cofilin.</a> J. Cell Biol. 168, 441-452 (2005).</li>
<li>Kopp, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+kinesin+KIF1C+and+microtubule+plus+ends+regulate+podosome+dynamics+in+macrophages%5BTitle%5D)+AND+%22Mol.+Biol.+Cell%22%5BJournal%5D)">The kinesin KIF1C and microtubule plus ends regulate podosome dynamics in macrophages.</a> Mol. Biol. Cell. 17, 2811-2823 (2006).</li>
<li>Oser, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cortactin+regulates+cofilin+and+N-WASp+activities+to+control+the+stages+of+invadopodium+assembly+and+maturation%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Cell.+Biol%22%5BJournal%5D)">Cortactin regulates cofilin and N-WASp activities to control the stages of invadopodium assembly and maturation.</a> J. Cell. Biol. 186, 571-587 (2009).</li>
<li>Abramoff, M. D., Magalhaes, P. J., Ram, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Image+Processing+with+ImageJ%5BTitle%5D)+AND+%22Biophotonics+International%22%5BJournal%5D)">Image Processing with ImageJ.</a> Biophotonics International. 11 (7), 36-42 (2004).</li>
<li>Kelley, L. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Oncogenic+Src+requires+a+wild-type+counterpart+to+regulate+invadopodia+maturation%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Cell+Sci%22%5BJournal%5D)">Oncogenic Src requires a wild-type counterpart to regulate invadopodia maturation.</a> J. Cell Sci. 123, 3923-3932 (2010).</li>
<li>Chen, W. T., Singer, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fibronectin+is+not+present+in+the+focal+adhesions+formed+between+normal+cultured+fibroblasts+and+their+substrata%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci.+U.S.A%22%5BJournal%5D)">Fibronectin is not present in the focal adhesions formed between normal cultured fibroblasts and their substrata.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 77, 7318-7322 (1980).</li>
<li>Chen, W. T., Olden, K., Bernard, B. A., Chu, F. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Expression+of+transformation-associated+protease%28s%29+that+degrade+fibronectin+at+cell+contact+sites%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Expression of transformation-associated protease(s) that degrade fibronectin at cell contact sites.</a> J. Cell Biol. 98, 1546-1555 (1984).</li>
<li>Bharti, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Src-dependent+phosphorylation+of+ASAP1+regulates+podosomes%5BTitle%5D)+AND+%22Mol.+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Src-dependent phosphorylation of ASAP1 regulates podosomes.</a> Mol. Cell Biol. 27, 8271-8283 (2007).</li>
<li>Albrechtsen, R., Stautz, D., Sanjay, A., Kveiborg, M., Wewer, U. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Extracellular+engagement+of+ADAM12+induces+clusters+of+invadopodia+with+localized+ectodomain+shedding+activity%5BTitle%5D)+AND+%22Exp.+Cell+Res%22%5BJournal%5D)">Extracellular engagement of ADAM12 induces clusters of invadopodia with localized ectodomain shedding activity.</a> Exp. Cell Res. 317 (10), 195-209 (2011).</li>
<li>Scott, R. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((kinases+are+required+for+invasive+path+generation+by+tumor+and+tumor-associated+stromal+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">kinases are required for invasive path generation by tumor and tumor-associated stromal cells.</a> J. Cell Biol. 191, 169-185 (2010).</li>
<li>Mueller, S. C., Yeh, Y., Chen, W. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tyrosine+phosphorylation+of+membrane+proteins+mediates+cellular+invasion+by+transformed+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Cell.+Biol%22%5BJournal%5D)">Tyrosine phosphorylation of membrane proteins mediates cellular invasion by transformed cells.</a> J. Cell. Biol. 119, 1309-1325 (1992).</li>
<li>Bowden, E. T., Coopman, P. J., Mueller, S. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Invadopodia%3A+unique+methods+for+measurement+of+extracellular+matrix+degradation+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Invadopodia: unique methods for measurement of extracellular matrix degradation in vitro.</a> Methods Cell Biol. 63, 613-627 (2001).</li>
<li>Baldassarre, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dynamin+participates+in+focal+extracellular+matrix+degradation+by+invasive+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Mol.+Biol.+Cell%22%5BJournal%5D)">Dynamin participates in focal extracellular matrix degradation by invasive cells.</a> Mol. Biol. Cell. 14, 1074-1084 (2003).</li>
<li>Alexander, N. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Extracellular+matrix+rigidity+promotes+invadopodia+activity%5BTitle%5D)+AND+%22Curr.+Biol%22%5BJournal%5D)">Extracellular matrix rigidity promotes invadopodia activity.</a> Curr. Biol. 18, 1295-1299 (2008).</li>
<li>Artym, V. V., Yamada, K. M., Mueller, S. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((ECM+degradation+assays+for+analyzing+local+cell+invasion%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol.+Biol%22%5BJournal%5D)">ECM degradation assays for analyzing local cell invasion.</a> Methods Mol. Biol. 522, 211-219 (2009).</li>
<li>Schoumacher, M., Goldman, R. D., Louvard, D., Vignjevic, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Actin%2C+microtubules%2C+and+vimentin+intermediate+filaments+cooperate+for+elongation+of+invadopodia%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Actin, microtubules, and vimentin intermediate filaments cooperate for elongation of invadopodia.</a> J. Cell Biol. 189, 541-556 (2010).</li>
<li>Clark, E. S., Whigham, A. S., Yarbrough, W. G., Weaver, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cortactin+is+an+essential+regulator+of+matrix+metalloproteinase+secretion+and+extracellular+matrix+degradation+in+invadopodia%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Cortactin is an essential regulator of matrix metalloproteinase secretion and extracellular matrix degradation in invadopodia.</a> Cancer Res. 67, 4227-4235 (2007).</li>
<li>Yamaguchi, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Phosphoinositide+3-kinase+signaling+pathway+mediated+by+p110alpha+regulates+invadopodia+formation%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Phosphoinositide 3-kinase signaling pathway mediated by p110alpha regulates invadopodia formation.</a> J. Cell Biol. 193, 1275-1288 (2011).</li>
<li>Li, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+actin-bundling+protein+fascin+stabilizes+actin+in+invadopodia+and+potentiates+protrusive+invasion%5BTitle%5D)+AND+%22Curr.+Biol%22%5BJournal%5D)">The actin-bundling protein fascin stabilizes actin in invadopodia and potentiates protrusive invasion.</a> Curr. Biol. 20, 339-345 (2010).</li>
<li>Yamaguchi, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Phosphatidylinositol+4%2C5-bisphosphate+and+PIP5-kinase+Ialpha+are+required+for+invadopodia+formation+in+human+breast+cancer+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Sci%22%5BJournal%5D)">Phosphatidylinositol 4,5-bisphosphate and PIP5-kinase Ialpha are required for invadopodia formation in human breast cancer cells.</a> Cancer Sci. , (2010).</li>
</ol>

Çıkar çatışması ilan etti.

Ekstrasellüler matriks degrade hücreleri görselleştirmek için yeteneği hücre invazyonu erken adımları istihdam moleküler mekanizmaları keşfetmek yardımcı olmuştur. 1980 başlarında 4,14,15 Wen-Tien Chen öncülüg sonraki mikroskopik analiz için cam lameller üzerine kaplama floresan etiketli dışı proteinler hücre türleri geniş bir yelpazesinde invadopodia fonksiyonu değerlendirmede birincil tekniği olarak ortaya çıkmıştır. Öngörülen protokolü var ne benzer birçok geleneksel floresan ve konfokal mikroskoplar ...

<table border="1"><tbody><tr><td> Reaktif / Enstrüman Adı </td><td> Şirket </td><td> Katalog Numarası </td><td> Yorumlar </td></tr><tr><td> jelâtin </td><td> Sigma </td><td> G1890 </td><td> Domuz derisi </td></tr><tr><td> sakaroz </td><td> Balıkçı </td><td> BP220 </td><td></td></tr><tr><td> 12 mm lamelleri </td><td> Balıkçı </td><td> 50-121-5159 </td><td></td></tr><tr><td> 24 kuyucuğu </td><td> Balıkçı </td><td> 08-772-1 </td><td> BD Falcon </td></tr><tr><td> nitrik asit </td><td> Ricca </td><td> R5326000 </td><td> % 20 çözelti </td></tr><tr><td> poli-L-lizin </td><td> Elektron Mikroskopi Bilimleri </td><td> 19320-B </td><td> 0.1% çözüm </td></tr><tr><td> glutaraldehit </td><td> Sigma </td><td> G7526 </td><td> 8% çözüm </td></tr><tr><td&gt; Oregon Yeşil 488-konjuge jelatin </td><td> Invitrogen </td><td> G-13186 </td><td></td></tr><tr><td> sodyum borohidrid </td><td> Sigma </td><td> 213462 </td><td></td></tr><tr><td> Triton X-100 </td><td> Balıkçı </td><td> BP151 </td><td></td></tr><tr><td> rodamin-phalloidin </td><td> Invitrogen </td><td> R415 </td><td></td></tr><tr><td> Anti-cortactin (klon 4F11) </td><td> Millipore </td><td> 05-180 </td><td></td></tr><tr><td> Anti-BAYRAK antikoru </td><td> Millipore </td><td> MAB3118 </td><td></td></tr><tr><td> Alexa Fluor 647 keçi anti-fare IgG </td><td> Invitrogen </td><td> A21235 </td><td></td></tr><tr><td> Altın antifade uzatmak </td><td> Invitrogen </td><td> P36930 </td><td></td></tr><tr><td> LSM 510 Konfokal Mikroskop </td><td> Zeiss </td><td></td><td></td></tr><tr><td> ImageJ yazılım </td><td> Kamu malı </td><td></td><td> <a href="http://www.macbiophotonics.ca/imagej/" target="_blank">http://www.macbiophotonics.ca/imagej/</a> </td></tr><tr><td> AutoQUANT x2.2 yazılım </td><td> Medya Sibernetik </td><td></td><td></td></tr><tr><td> NIS Elements yazılımı </td><td> Nikon </td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

tek ve Çok hücreli bağlamlarda invadopodia aracılı ekstrasellüler matriks proteoliz kantitatif Ölçümü

Quantitative Measurement of Invadopodia-mediated Extracellular Matrix Proteolysis in Single and Multicellular Contexts 

Lokal doku içine hücresel istila gelişimi homeostazında ve önemli bir işlemdir. Malregulated işgali ve ardından hücre hareketi iltihabı, kalp-damar hastalıkları ve tümör hücrelerinin metastaz 1 de dahil olmak üzere birden fazla patolojik süreçler, özelliğidir. Epitelyal veya endotelyal bazal membranda ekstrasellüler matriks (ECM) bileşenlerinin Focalized proteolitik yıkımı hücresel invazyonu başlatmada kritik bir adımdır. Tümör hücreleri, in vitro analizi kapsamlı ECM ​​yıkımı invadopodia 2,3 adlandırılan ventral aktin zengin membran çıkıntılı yapılar tarafından gerçekleştirilir olduğunu belirlemiştir. Onlar matriks metalloproteinazlar (MMP) ve eylem yoluyla ECM arıza orta ECM, yakın apozisyon yılında Invadopodia formu. Invadopodia oluşturmak için tümör hücrelerinin yeteneği doğrudan yerel stroma ve ilişkili vasküler bileşenleri 3 içine işgal yeteneği ile ilişkilidir. _content &quot;cam lameller üzerine kaplanmış boya etiketli matriks proteinleri kullanarak floresan mikroskobu ile hücrelerin invadopodia aracılı ECM ​​yıkımı&gt; Görselleştirme matrisi proteoliz ve hücresel invaziv potansiyeli 4,5 derecesini değerlendirmek için en yaygın yöntem olarak ortaya çıkmıştır. Burada tarif piyasada bulunan Oregon Yeşil-488 jelatin eşlenik kullanan floresan-etiketli cam lamelleri oluşturmak için standart yöntem bir versiyonu. Bu yöntem kolaylıkla hızla kaplı lamelleri çok sayıda üretmek için ölçeklendirilir. Biz sık sık karşılaşılan yaygın mikroskobik eserlerin bazılarını göstermek Bu işlem sırasında ve bunların nasıl önlenebilir. Nihayet, biz tek tek hücreler tarafından ve tüm hücresel popülasyonlar aracılığıyla etiketli jelatin matriks yıkımı miktarının izin hazır bilgisayar yazılımı kullanılarak standardize yöntemleri açıklanmaktadır. açıklanan prosedürleri doğru ve tekrarlanabilir izleme olanağı sağlar invadopodiaaktivite ve ayrıca modüle protein ekspresyonu veya tek ve çok hücreli ayarları ekstrasellüler matriks yıkımı anti-invaziv bileşiklerin test etkinliğini değerlendirmek için bir platform olarak hizmet verebilir.

Biz invadopodia aracılı matriks yıkımı görselleştirmek için floresan jelatin kaplı mikroskop lamelleri üretmek için prototip yöntem açıklanmaktadır. Mevcut yazılımını kullanarak hesaplama teknikleri karışık bir popülasyon içindeki ve bütün mikroskobik alanı kapsayan çok hücreli grupları için tek hücreler ile matris proteolizin sonuç seviyeleri ölçülmesi için sunulmuştur.

Tek ve Çok hücreli Bağlamlarda Invadopodia aracılı Ekstrasellüler Matriks Proteoliz Kantitatif Ölçümü

Hücrelerin yerel dokulara invazyonu, gelişim ve homeostaz açısından önemli bir süreçtir. Yanlış düzenlenen invazyon ve bunu takip eden hücre hareketi...

Bu standart teknik, kantitatif invadopod matriks degradasyonu analizleri için uygun olan, floresan işaretli jelatin kaplı lameller üretir. Lamelleri floresan işaretli jelatin ile kapladıktan sonra, hücreleri ekimleyin ve matriks degradasyonu için kültüre edin. Ardından, invadopod belirteç proteinleri için hücreleri fikse edin ve floresanla boyayın; görüntüleri elde edin ve matriks degradasyonunu nicelleştirin.Tipik sonuçlar, seçili genlerin farklı manipülasyonuna sahip hücreler veya farmakolojik ajanlarla tedavi edilen hücreler arasında, inve podia aracılı matris degradasyonundaki farkları nicelleştirebilir. Florasan jelatinin düzensiz kaplanması veya jelatin kaplı lamel ile ilgili hatalı işlemler nedeniyle, homojen florasan özellikli jelatin kaplı lameller hazırlamanın zor olması sebebiyle bu yöntemin görsel gösterimi kritik öneme sahiptir. Prosedürü araştırma yardımcı profesörü Karen Martin, doktora sonrası araştırmacı Mandy Ammer ve lisansüstü öğrenciler Elise Walk, Karen Hayes ve Steve Markwell sunacaktır.Etiketsiz %5 jelatin sakkaroz stok çözeltisini hazırlamak için, jelatin ve sakkarozu PBS içerisinde birleştirin ve 37 °C'de tamamen çözünmesini sağlayın. Ardından 4 °C'de sakl

quantitative-measurement-invadopodia-mediated-extracellular-matrix

Research

JoVE Journal

Biology

Biyoloji

Üç boyutlu hücre dışı matriks içine tümör hücresi invazyonu modelleri daha iyi...

Modelleme ve Görüntüleme 3-Boyutlu Toplu Hücre Invasion

Bu videoda, tümör hücresi istilasını incelemek için doğal bir matris kullanma tekniği açıklanmaktadır. Bu tahlilde kullanılan teknik, epitelyal-mezenkimal hücre etkileşimlerini sentetik veya yabancı bir matrise ihtiyaç duymadan 3 boyutlu bir ortamda değerlendirme yeteneği sağlar.

Tümör Hücresi İnvazyon Testi: Epitelyal-mezenkimal Hücre Etkileşimlerini Değerlendirmek için 3D İn Vitro Native Matris Tabanlı Bir Yöntem

Bu videoda, hücre dışı matris sertliğine bağlı Listeria monocytogenes'in endotel hücreleri yoluyla yayılımını değerlendirmek için kantitatif hızlandırılmış mikroskopi gösterilmektedir. Daha yumuşak bir hidrojel, daha sert muadillerine kıyasla endotel hücreleri yoluyla daha hızlı bakteri yayılımını kolaylaştırır ve matris sertliğinin bakteri yayılımı üzerindeki etkisini vurgular.

Hücre Dışı Matriks Sertliğine Bağlı Bakteri Yayılımını Değerlendirmek için Kantitatif Hızlandırılmış Mikroskopi

Parçacık izleme microrheology olmayan yıkıcı ölçmek ve 3 boyutlu uzamsal tümör modellerinde hücre dışı matris mekanik özelliklerinde değişiklikler eşlemek için kullanılabilir.

Partikül izleme Microrheology kullanarak 3D Tümör Modelleri Ekstrasellüler Matriks Rijitliğinin Boyuna Ölçümü

Hücre göçü, bir kanser gibi yara iyileşmesi ve bağışıklık tepkilerinin ve patofizyolojik süreçler gibi, fizyolojik bir bolluk dahil bir biyolojik bir olgudur. 3D-kollajen matris göç deneyi 3D fizyolojik gibi bir ortamda içinde farklı hücre tipleri göç özelliklerini analiz etmek için çok yönlü bir araçtır.

Bir Üç boyutlu Kollajen Matrix içindeki Hücre Göç Analizi

Tümörün mikro mekanik sertliği invadopodia aktivitesini artırarak ve kasılma actomyosin ile malign davranış sürüş önemli bir rol oynar. Kullanma poliakrilamid jelleri (PAAS) invadopodia ve çekiş kuvveti deneyleri bükülmezlik matris yanıt olarak kanser hücrelerinin invaziv ve kasılma özelliklerini incelemek için kullanılabilir.

Kanser Hücreleri üzerindeki Invadopodia ve Çekiş Gücü Tahliller için poliakrilamid jeller

Burada, hücre-substrat empedansı ve canlı hücre görüntüleme analizleri ile hücre adezyonu ve adezyonu giderme süreçlerini invaziv olmayan bir şekilde yüksek zamansal çözünürlükle sürekli olarak ölçmek için bir protokol sunuyoruz. Bu yaklaşımlar, matris modifikasyonu tarafından tetiklenen hücre adezyon/adezyonu kaldırma süreçlerinin dinamiklerini ve bunların adezyona bağlı sinyalleşme olaylarıyla zamansal ilişkisini ortaya koymaktadır.

Matrix Modifikasyon Bağlı Hücresel Yapışma ve De-yapışma Real-time Değişiklikleri Tedbir Hücre-substrat Empedans ve Canlı Hücre Görüntüleme kullanma

Bu protokol, jelatin ve kollajen I'den oluşan bir 2D karışık matristin nasıl hazırlanacağını ve lineer invadozomaları incelemek için bir 3D kolajen I fünyesinin nasıl hazırlandığını açıklamaktadır. Bu protokoller lineer invadozom oluşumunun, matris bozulma aktivitesinin ve birincil hücrelerin ve kanser hücre çizgilerinin invazyon yeteneklerinin incelenmesine izin verir.

Doğrusal Invadozom Oluşumu ve Aktivitesi Çalışmak İçin 2D ve 3D Matrisler

Birçok yukarı regüle edilmiş gen, tümör hücresi göçünü ve invazyonunu uyararak kötü prognoza yol açar. Hangi genlerin tümör hücresi göçünü ve invazyonunu düzenlediğini belirlemek çok önemlidir. Bu protokol, bir genin artan ekspresyonunun tümör hücrelerinin göçü ve invazyonu üzerindeki etkilerini gerçek zamanlı olarak araştırmak için bir yöntem sunar.

Sentetik mRNA Transfeksiyonunu Takiben Tümör Hücresi Migrasyonu ve İnvazyonunun Gerçek Zamanlı Kantitatif Ölçümü

İstila, kanserin gelişiminde ve ilerlemesinde önemli bir biyolojik olgudur. Bu süreç, neoplastik olmayan hücreler ve tümör mikroçevresinin bileşenleri tarafından etkilenir. Bu çalışmanın amacı, üç boyutlu (3D) kültürler kullanarak in vitro olarak tümör hücresi istilasını analiz etmek için alternatif bir yöntemi tanımlamaktır.

3D Kültürlerin İn Vitro Hücre İnvazyonunu Analiz Etmek İçin Alternatif Strateji

Keşfedin invadopodia aracılı ekstraselüler matriks proteolizinin kantitatif ölçüm yöntemlerini. Floresan jelatin kaplı lameller hazırlayarak hücre davranışlarını ve invazyon mekanizmalarını analiz edin.

Tek ve Çok hücreli Bağlamlarda Invadopodia aracılı Ekstrasellüler Matriks Proteoliz Kantitatif Ölçümü

Daha fazla video keşfet