Name: Bir Ortotopik Mesane Tümörü Model ve intravezikal Sarna Tedavisinin Değerlendirilmesi (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-07-28T14:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 43 s
Description: Öğrenin, immün yetmez farelerde ortotopik mesane tümörü modeli oluşturmayı ve küçük çift zincirli RNA ile intravezikal tedavi uygulamayı. Ultrason ve biyolüminesans görüntüleme ile tümör büyümesini izleyin.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Bu araştırma AACR Henry Shepard Mesane Kanseri Araştırma Bursu (09-60-30-LI) tarafından finanse edilmektedir.

Hayvan denekleri Usul Kaliforniya, San Francisco Üniversitesi Kurumsal Hayvan Bakımı ve Kullanımı Komitesi (IACUC) tarafından onaylanmıştır. 1. Hücre Hazırlık <ol><li> İnsan mesane kanseri hücre hattı KU-7-luc2-GFP (Kaliper Yaşam Bilimleri, Hopkinton, MA)% 10 fetal sığır serumu ve 50 mg / ml gentamisin ile takviye edilmiş RPMI-1640 medya yetiştirilir. </li><li> Kültürler 37 ° C&#39;de muhafaza edilir, medya ile CO 2, her iki üç günde bir değişen 5%. </li><li> Hücreler tripsin sindirimi ile toplandı ve bir hemasitometre ile sayıldı. 50 ul içinde 2 x 10 6 hücrelerinin tek bir hücre süspansiyonu fosfat tamponlu tuz hazırlandı ve buz üzerinde tutuldu. </li></ol> 2. Ortotopik Mesane Tümör Modeli <ol><li> 8-10 haftalık kadın çıplak (nu / nu) farelerde (Simonsen Laboratuvarı, Gilory, CA) kullanılmıştır. </li><li> Bir hizmet için bir ısıtma pedi üzerine steril bir drape yerleştirinsa cerrahi platformu. Steril yağlama jöle, stileyi iğneler, gümüş nitrat çözeltisi ve steril su ile 24-dil bilgisi olmalıdır kateterler hazırlanır. </li><li> Genel anestezi inhale izofluran (indüksiyon için% 3, bakım için% 1-2) ve roket ucu konisi ile muhafaza ile farelerde indüklenir. Steril oftalmik merhem hayvanın göze tatbik edilir ve bir ısı pedi vücut ısısını muhafaza etmek için kullanılır. </li><li> Yatar konumda fare yerleştirin. </li><li> Yavaşça stabilizasyonu için forseps ile hayvanın vulva kavramak. </li><li> Kaldırıldı iğne stile sahip 24 dil bilgisi olmalıdır intravenöz kateter kullanarak, fare üretra kateterize edilir. Geniş yağlama kullanılmalıdır. Fare supin ile üretra vulva kıvrımlar ve vajina ön hemen arka yer almaktadır. A 45 derece açı başlangıçta pubis altında üretra kanüle ve geçmek için alınır. Bir daha sığ açı sonra mesane içine üretra geçmesine alınır. Nazik pelvik presüretra genellikle yardımcı olabilir düzeltmek için emin. Bakım Bu üretral veya mesane perforasyonu yol açabilir gibi, dirence karşı çok sert bastırıyor önlemek için alınmalıdır. Kateter içinde görülen idrar kesesi lümeninde konumunu teyit etmektedir. </li><li> Stilenin iğne kullanılarak kateter ve mesane lümeni idrar aspire. Stileyi iğne yerde kateter bırakarak, daha sonraki tüm hedefleri ve enjeksiyon için kullanılır. Bu kateter içinde ölü boşluk ortadan kaldırarak hassas hacimli enjeksiyon için izin verir ve tekrar kateterizasyonlarda gereksiz kılar. </li><li> Mesane ürotelium&#39;un glikozaminoglikan tabakası zarar için 0.5 M gümüş nitrat 10 uL enjekte ve 10 saniye durmak için izin verilir. Bu kalan idrarı ile beyaz bir çökelti meydana gelebilir. </li><li> Aspire ve bir stile iğne ile çökelti ve mesane içeriğini atın. </li><li> 100 uL steril su enjekte edilerek mesanenin yıkayın. Su aspire atın. Repe4 yıkar toplam steril su ile yıkama az 3 kez. </li><li> Kateter hazırlık üretra tıkanmak üzere meatusa etrafında 4-0 ipek kravat yerleştirin. </li><li> Daha önce enjekte stileyi iğne kullanılarak 50 uL içinde 2 x 10 KU 6-7-luc2-GFP hücreleri hazırlandı. </li><li> Aynı anda ipek kravat sıkıştırıldı üretra bırakarak, kateter ve stile iğne çıkarılır. </li><li> Ipek kravat kaldırılır ve hayvan uyanmış önce fare 2 saat için genel anestezi altında muhafaza edilecektir. </li></ol> 3. Ultrason <ol><li> Genel anestezi buharlaşmış izofluran ve burun konisi ile muhafaza ile indüklenir. </li><li> Vivo A VisualSonics VEVO 770 Yüksek Çözünürlük Mikro-Görüntüleme Sistemi (VisualSonics Inc, Toronto, Ontario, Kanada) RMV-704 40 MHz prob kullanıldı. </li><li> Ultrason platform üzerinde yatar pozisyonda fare yerleştirin. </li><li> Hayvanın arka ayakları Güvenlibant ile ultrason probu manipülasyonu sırasında aşırı hareketi önlemek için. </li><li> Fare pelvise ultrason jeli uygulayın. </li><li> Enine ya da boyuna görüntüler elde etmek için fare pelvis üzerine bir RMV-704 (40 MHz) ultrason probu indirin. </li><li> Tümör bulunursa, görüntüler tümör boyutlarının ölçümü için kaydedilebilir. </li></ol> 4. Bioluminescent Görüntüleme <ol><li> 200 uL (150 mg / kg) lusiferin substrat intraperitoneal gerçekleştirmek. </li><li> Izofluran buharlaşmış ile genel anestezi indükleyin ve burun konisi ile korumak. </li><li> Biyolüminesans görüntüleyici içinde yatar pozisyonda fareler yerleştirin. </li><li> Beş dakika lusiferin enjeksiyonundan sonra, saniyede fotonlar içinde hayvan biyolüminesans ölçmek. </li></ol> 5.. Sarna Hazırlık <ol><li> 50-100 mol ölçeğinde oligonükleotidler RNA sentezi. </li><li> Tamamlayan tek iplikli oligonükleotidler tavlama inGoogle&#39;a dubleks saRNAs. </li><li> [1,3]-dioksolanın (DLinKC2-DMA), disteroylphosphatidyl kolin, kolesterol, ve PEG-DMG - lipid-nanoparçacık (LNP)-Sarna iyonize olabilen lipid 1,2-dilinoleyl-4-(- dimetilaminoetil 2) ile hazırlanır Daha önce tarif edildiği gibi bir spontan vesikül oluşumu formülasyon prosedürü kullanarak. 1 </li></ol> 6. Formüle Sarna intravezikal İdaresi <ol><li> Ortotopik mesane tümör modeli oluşturulduktan sonra, farelerin lipid nano partiküller (LNPs) (Tablo 1) formüle intravezikal küçük aktive RNA (Sarna) ile tedavi edilir. </li><li> Genel anestezi kurulmuş ve muhafaza izofluran buharlaştırılmış, ve Steril oftalmik Yağlayıcı maddenin tatbik edilir. </li><li> Yatar konumda hayvan yerleştirin. </li><li> Daha önce açıklandığı gibi üretral kateterizasyon gerçekleştirin. </li><li> Üretra ve kateter etrafında 4-0 ipek kravat yerleştirin. </li><li> Kateter tüm idrar aspire veboş bir şırınga ve iğne kullanılarak stileyi mesane. </li><li> 50 uL (3 mg / kg) toplam dozu için intravesikal LNP-Sarna enjekte edilir. Aynı anda ipek kravat sıkıştırıldı üretra bırakarak, kateter ve stile iğne çıkarılır. </li><li> Fare 2 saat boyunca tıkanmadığı üretra ile anestetize kalacaktır. </li><li> Intravezikal LNP-Sarna ile tedavi tümör implantasyonu sonrası 4. Gün başlanmıştır. Fareler 14 tedaviler olmak üzere toplam, her 3 günde bir, seri tedavi edildi. </li></ol> 7. Temsilcisi Sonuçlar KU-7-luc2-GFP hücrelerinden kaynaklanan mesane tümörleri lusiferaz bioluminescent görüntüleme (Şekil 1A ve C) ve mesane ultrasonu (Şekil 1B ve D) ile izlenebilir. Tümörler Hücre inokülasyonundan sonra 3-5 gün içinde sık sık saptanabilir. Biz farelerin% 90&#39;ında başarılı mesane tümörü implantasyon bulundu. Intravezikal dsRNA ile muamele ensues olarak, tümör ilerlemesi Wi izlenebilirbu yöntemlerin th. Hayvan kurban sonra, tümör büyümesi, aynı zamanda GFP flöresanı kullanılarak teyit edilebilir. Genel olarak, biyolüminesans olarak Şekil 1C ve 1D görsel olarak görülen, mesane tümörleri için ortalama ultrason boyutları ile ilişkili demek. Hayvanlar kurban edildi ve tümör GFP tarafından onaylandıktan sonra Ancak, biz bu biyolüminesans ultrason ölçümleri mi daha canlı tümör varlığı ile daha yakından ilişkili bulundu. Tedavi edilen farelerde rezidüel skar dokusu genellikle ultrason ile görüntülendi ama canlı tümör ayırt edilemedi çünkü bu Sarna (as kontrolleri aksine) ile tedavi edilen farelerde arasında özellikle belirgin oldu. <img src="/files/ftp_upload/4207/4207fig1.jpg" alt="Şekil 1" /> Şekil 1. Mesane tümörlerinin tümör büyüme kinetiği. (A) Bio-ışıldama, görüntüleme konumlarına ve büyüme teyit etmek için mesane tümörleri içinde lüsiferaz faaliyeti ölçülür. (B) &#39;in vivo olarak mesane ultrasond 40 MHz prob ile olan boyutları ölçülebilir tümör görüntüleri üretir. (C) Grafikler biyolüminesans ve ultrason boyutlarda tümörün sürekli artış gösteren. 6 hayvanlardan ölçümleri - Değerler (standart sapma + /) anlamına temsil eder. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/4207/4207fig1large.jpg" target="_blank">büyük rakam görmek için buraya tıklayın</a> .

<ol><li>Semple, S. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rational+design+of+cationic+lipids+for+siRNA+delivery%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Rational design of cationic lipids for siRNA delivery.</a> Nature. 28, 172-176 (2010).</li>
<li>Li, L. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Small+dsRNAs+induce+transcriptional+activation+in+human+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">Small dsRNAs induce transcriptional activation in human cells.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 103, 17337-17342 (2006).</li>
<li>Chen, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antitumor+effect+of+dsRNA-induced+p21%28WAF1%2FCIP1%29+gene+activation+in+human+bladder+cancer+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+cancer+therapeutics%22%5BJournal%5D)">Antitumor effect of dsRNA-induced p21(WAF1/CIP1) gene activation in human bladder cancer cells.</a> Molecular cancer therapeutics. 7, 698-703 (2008).</li>
<li>Chancellor, M. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preliminary+results+of+myoblast+injection+into+the+urethra+and+bladder+wall%3A+a+possible+method+for+the+treatment+of+stress+urinary+incontinence+and+impaired+detrusor+contractility%5BTitle%5D)+AND+%22Neurourology+and+urodynamics%22%5BJournal%5D)">Preliminary results of myoblast injection into the urethra and bladder wall: a possible method for the treatment of stress urinary incontinence and impaired detrusor contractility.</a> Neurourology and urodynamics. 19, 279-287 (2000).</li>
<li>Hadaschik, B. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+validated+mouse+model+for+orthotopic+bladder+cancer+using+transurethral+tumour+inoculation+and+bioluminescence+imaging%5BTitle%5D)+AND+%22BJU+international%22%5BJournal%5D)">A validated mouse model for orthotopic bladder cancer using transurethral tumour inoculation and bioluminescence imaging.</a> BJU international. 100, 1377-1384 (2007).</li>
<li>Fu, C., Apelo, C. A., Torres, B., Thai, K. H., Hsieh, M. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+Bladder+Wall+Injection%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Vis.+Exp%22%5BJournal%5D)">Mouse Bladder Wall Injection.</a> J. Vis. Exp. (53), e2523(2011).</li>
<li>Dobek, G. L., Godbey, W. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+Orthotopic+Model+of+Murine+Bladder%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer.+J.+Vis.+Exp%22%5BJournal%5D)">An Orthotopic Model of Murine Bladder.</a> Cancer. J. Vis. Exp. (48), 2535(2011).</li>
<li>Dinney, C. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+and+characterization+of+metastatic+variants+from+human+transitional+cell+carcinoma+passaged+by+orthotopic+implantation+in+athymic+nude+mice%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+urology%22%5BJournal%5D)">Isolation and characterization of metastatic variants from human transitional cell carcinoma passaged by orthotopic implantation in athymic nude mice.</a> The Journal of urology. 154, 1532-1538 (1995).</li>
</ol>

LCL California San Francisco Üniversitesi tarafından açılan ve Alnylam İlaç için lisans almış Sarna ile ilgili patent başvurularının bekleyen bir adlandırılmış mucididir.

Biz transkripsiyon aktivasyonu için p21 CIP1/WAF1 (p21) yükseltici hedefler LNP formüle Sarna ile tümörlerinin intravezikal tedavisi ardından bir fare ortotopik xenograft mesane tümörü modelinin kurulması için bir protokol mevcut. 2, 3 çıkan tümörler olabilir bioluminescent görüntüleme ve mesane ultrason ile doğrulandı ve izlenmelidir. Ortotopik modelleri idrar ve daha yakından endojen mesane kanseri yakın olduğunu ürotelium&#39;un bir ortam sağlayarak periton, subkutan veya intravenöz modelleri üs...

<table border="1"><tbody><tr><td> Reaktif Adı </td><td> Şirket </td><td> Katalog numarası </td><td> Yorumlar (isteğe bağlı) </td></tr><tr><td> KU-7-luc-GFP hücreleri </td><td> Kaliper </td><td> 128091 </td><td></td></tr><tr><td> timik çıplak farelerde (nu / nu) </td><td> Simonsen Laboratuvarları </td><td> 6-7 haftalık </td><td> Sim: (NCR) nu / nu fisol </td></tr><tr><td> Ultrason ünitesi </td><td> Visualsonics </td><td> VEVO 770 </td><td> RMV-704 prob </td></tr><tr><td> Biyolüminesens ünitesi </td><td> Kaliper </td><td> IVIS Spektrum </td><td></td></tr><tr><td> Exel safelet kateter </td><td> Balıkçı </td><td> 14-841-21 </td><td> 24G X ¾ &quot; </td></tr><tr><td> Gümüş nitrat </td><td> Sigma </td><td> S8157 </td><td></td></tr><tr><td> Hamilton enjektörü </td><td> Hamilton company </td><td> 80301 </td><td></td></tr><tr><td> LNP-Sarna </td><td> Alnylam İlaç </td><td></td><td></td></tr></tbody></table> Tablo 1. Özel reaktifleri ve ekipmanları.

bir ortotopik mesane tümörü model ve intravezikal sarna tedavisinin değerlendirilmesi

An Orthotopic Bladder Tumor Model and the Evaluation of Intravesical saRNA Treatment

Biz, ortotopik xenograft fare mesane tümörü modelinde, intravesikal teslim küçük bir aktive edici RNA (Sarna) ile mesane kanseri tedavisi için yeni bir yöntem sunmaktadır. Fare modeli inhale genel anestezi altında üretral kateterizasyon tarafından kurulmuştur. Kimyasal yanık sonra mesane glikozaminoglikan tabakası bozmaya intravezikal gümüş nitrat çözeltisi kullanılarak mesane mukozasına tanıttı ve hücrelere eklemenizi sağlar edilir. Steril su, mesane kanseri, insan KU-7-luc2-GFP hücreleri ile çok yıkamadan sonra 2 saat süreyle durmak kesesi içine kateter ile aşılanan edilir. Mesane tümörlerinin daha sonraki büyüme vivo mesane ultrasonu ve bioluminescent görüntülemede tarafından onaylandıktan ve izlenir. Tümörler daha sonra Sarna lipid nano partiküller (LNPs) formüle ile intravezikal tedavi edilir. Tümör büyüme ultrason ve biyolüminesans ile izlenir. Bu prosedür her adım, ekli video gösterilmiştir.

Ultrason ve bioluminescent görüntüleme ile intravezikal teslim Sarna ve izleme tümör büyümesinin antitümör etkileri değerlendirmek için ortotopik mesane tümörü modeli oluşturmak.

Bir Ortotopik Mesane Tümörü Model ve intravezikal Sarna Tedavisinin Değerlendirilmesi

Ortotopik ksenogreft fare mesanesinde intravezikal olarak iletilen küçük aktive edici RNA (saRNA) ile mesane kanserini tedavi etmeye yönelik yeni bir yöntem sunuyoruz...

İmmün sistemi baskılanmış farelerde ortotopik mesane tümörü modeli oluşturmak için bir yöntem sunuyoruz. Bu tümörlerin intravasküler olarak iletilen küçük çift zincirli RNA ile tedavi edilmesi ve tümörlerin hem mesane ultrasonu hem de biyolüminesans görüntüleme ile izlenmesi gerçekleştirilmiştir. Genel anestezi, buharlaştırılmış izofluran ile indüklenmiş ve steril oftalmik pomad uygulanmıştır.Fare ardından sırt üstü pozisyona getirilir ve anestezi, burun konisi aracılığıyla isofluorine ile sürdürülür. Sonrasında, fareye kateterizasyon uygulanmalıdır. İğne stiletinin çıkarıldığı 24 gauge intravenöz kateter kullanıyoruz.Kateterizasyon, protokolün genellikle en zor ve öngörülemez adımıdır. KY jeli ile bolca lubrikasyon ve doğru teknik, başarılı kateterizasyonun anahtarlarıdır. Burada farenin vulva bölgesi gösterilmektedir.Üretra, vulvar kıvrımların hemen altında yer alır. Lubrikasyon sonrası, vulvayı ve üretrayı nazikçe kavramak ve sabitlemek için kateter pensi kullanılır. Başlangıçta, üretrayı kanüle etmek için daha dik bir 45 derecelik açı kullanılmıştır; ancak üretraya girildikten sonra, mesaneye sorunsuz bir şekilde geçmek için daha sığ bir açı benimsenir.Bu işlemi burada göstereceğiz. Tekrar belirtmek gerekirse, üretrayı düzeltmek için uygulanan hafif pelvik basınç genellikle yardımcı olabilir; ancak dirence karşı çok sert itmekten kaçınılmalıdır, çünkü bu durum üretra veya mesane perforasyonuna yol açabilir. Kateter içinde burada görülen idrar, mesane lümeni içindeki bu konumu doğrular.Kateter içindeki idrar daha sonra stilet iğnesiyle boşaltılır ve kateter yerinde bırakılır. Kateter ucunun mesane duvarına dayanmaması ve mesane lümeninde kalması için kateterin yaklaşık beş milimetrelik kısmı üretranın dışında görünür halde kalmalıdır. Kateter çok derine yerleştirilirse, uç mesane duvarına gömülebilir ve enjeksiyonları engelleyebilir.Sonraki tüm enjeksiyonlar için, stilet iğneye takılmış bir şırınga kateter aracılığıyla yerleştirilir. Bu işlem, kateter içindeki ölü boşluğu ortadan kaldırarak doğru hacimlerin enjekte edilmesini sağlar ve mesane duvarında yanık hasarı oluşturabilecek tekrarlayan kateterizasyonları gereksiz kılar.10 µL 0.5 M gümüş nitrat enjekte edilir ve 10 saniye boyunca bekletilir. Gümüş nitrat, mesane içindeki kalıntı idrarla beyaz bir çökelek oluşturabilir. Bu çökelek ve kalan tüm solüsyon kateterden uzaklaştırılır.Ardından, her seferinde kateter lümeninden sıvıyı uzaklaştırarak mesaneyi dört kez 100 µL steril su ile yıkarız. Bu ilk yıkamadan sonra, beyaz çökelek kateter içinde hâlâ görünür durumdadır ancak her yıkama ile sıvı daha berrak hale gelecektir. Üretrayı kapatmak için 4-0 ipek bağ kullanılır ve artık kanser hücrelerini enjekte etmeye hazırız.Hücreler, stilett iğneye bağlı bir şırıngaya yüklenir ve mesaneye enjekte edilir. Kateter çıkarılır ve fare anestezi altındayken üretra iki saat boyunca bağlı bırakılır. Önceden belirlenen aralıklarla tümör progresyonu izlenir.In vivo biyolüminesans görüntüleme kullanılarak, farelere önce intraperitonal enjeksiyon yoluyla Lucifer ve substrat enjekte edilir. Buharlaştırılmış isofloran ile genel anestezi sağlandıktan sonra, fareler IVIS cihazı içerisinde sırt üstü pozisyona getirilir. Biyolüminesans, saniye başına foton birimleri cinsinden ölçülür.Fare mesaneleri içindeki KU seven hücrelerinin varlığı kolayca fark edilmekte olup biyolüminesans yoğunluğu zaman içinde takip edilebilmektedir. Mesane tümörlerinin varlığı ve ilerlemesi ayrıca ultrason görüntüleme ile izlenebilir. Buharlaştırılmış izofloran ile genel anestezi uygulandıktan sonra steril oftalmik pomad sürülür.Fare, ultrason masası üzerine sırtüstü pozisyonda yerleştirilir. İdame anestezi, burun konisi aracılığıyla isoflurane ile sağlanır. Ultrason probuyla işlem yaparken vücudun aşırı hareketini önlemek için farenin arka bacakları masaya sabitlenebilir.Bu işlem tamamlandığında, hayvanın pelvisinin orta hattına ultrason jeli uygulanır. Jel uygulandıktan sonra, 40 megahertz'lik bir prob tutucu cihaza sabitlenir ve yavaşça hayvanın vücuduna indirilir. Mesane, orta hatta yer alan yuvarlak, hipoekoik bir yapı olarak kolayca görülebilir.Hayvan anestezi öncesinde belirgin bir irritasyona maruz kalmadıysa, mesane genellikle zaten distande durumdadır ve mesane distansiyonunu sağlamak için fareye kateterize etmenin gereksiz olduğunu gördük. Burada hem transvers hem de longitudinal görüntüler elde edilebilir. Mesane lümeni içerisinde bir tümör kolayca görülebilmektedir.Tümör tespit edilirse, tümör boyutlarının ölçümü için görüntüler kaydedilebilir. Mesane tümörü oluşturulduktan sonra, farelere lipid nanoparçacıklar şeklinde formüle edilmiş küçük çift zincirli RNA ile intravezikal tedavi uygulanır. Genel anestezi sağlanır ve oftalmik pomad tekrar uygulanır.Ardından fare sırt üstü pozisyona getirilir ve üretral kateterizasyon gerçekleştirilir. Daha önce tanımladığımız üzere, kateter etrafındaki üretrayı kapatmak için 4-0 ipek sütür kullanılır. Genellikle burada gösterildiği gibi iki düğüm atılır.Mesaneyi tamamen boşaltmak için stileti olan bir iğneye takılmış boş bir şırınga kullanılır. Kilogram başına toplam üç miligram doz olacak şekilde, 50 mikrolitre küçük çift zincirli RNA intravezikal olarak uygulanır. Ardından iğne ve kateter çıkarılır.Fare, üretra tıkanmış halde toplam iki saat boyunca anestezi altında tutulacaktır. Bu videoyu izledikten sonra, biyolüminesans görüntüleme ve ultrason ile tümörün izlendiği ve intravezikal olarak iletilen küçük RNA ile tümörün tedavi edildiği ortotopik fare mesane tümör modeli oluşturma yöntemine dair kapsamlı bir anlayışa sahip olmalısınız. Özellikle kateterizasyon aşamasında pratik gerektiren bazı teknik detaylar olsa da, genel olarak kolayca tekrarlanabilecek bir protokoldür.Mesane tümörlerini farelere nakletme konusunda iyi bir başarı elde ettik ve küçük RNA ile tedavi etkileri oldukça gelecek vadediyor. Ancak, bu protokolün en heyecan verici yanı, biz fareleri küçük RNA ile tedavi etmiş olsak da aynı tekniğin mesane kanseri için herhangi bir intravezikal tedaviyi test etmek amacıyla kullanılabilecek olmasıdır.I.

an-orthotopic-bladder-tumor-model-evaluation-intravesical-sarna

Research

JoVE Journal

Medicine

Tıp

Kateterizasyon, yerel koterizasyon ve yanık sitelerine karsinom hücreleri sonraki yapışma ile minimal invaziv bir moda dişi farelerde mesane tümörleri kurulur.

Murin Mesane Kanseri bir Ortotopik Model

Bu videoda, organ ortamının gelişmekte olan tümörler üzerindeki rolünü incelemek için kültürlenmiş mesane tümörü organoidlerinin murin mesanesine ortotopik transplantasyonunu açıklıyoruz.

Mesane Tümörü Organoid Modeli: Mesane Organoidlerinin Alıcı Murin Mesanesine Ortotopik Transplantasyonu İçin Bir Yöntem

Bu videoda, kanser hücrelerini bir fare modelinin mesanesine iletmenin intravezikal prosedürünü açıklıyoruz. Bu prosedür, terapötik stratejiler geliştirmek için kullanılabilecek bir ortotopik mesane tümörü modeli oluşturmaya yardımcı olur.

Ortotopik Mesane Tümörünün Fare Modelinde Modellenmesi: Kanser Hücrelerinin Murin Mesanesine İntravezikal Uygulanması İçin Bir Prosedür

Kaynaklı organ içine kanser hücrelerinin implantasyonu yeni tedaviler değerlendirmek için yararlı bir ön-klinik modeli olarak hizmet edebilir. MB49 mesane karsinom hücreleri intravezikal Damla damla akıtma sonrası mesane içinde yetiştirilebilir. Bu protokol, tümör implantasyonu ve adenoviral teslimat amacıyla fare mesane kateterizasyon gösterir.

Gene Teslim Çalışmaları Ortotopik Mesane Kanseri Modeli

Birincil invaziv kadavradan mesane kanseri zenograftlarını aşılamak için kurulan teknik laparotomi ve mesane seferberlik gerektirir. Bu prosedür, fareler üzerinde önemli morbidite uğratan teknik açıdan zor ve zaman alıcıdır. Bu nedenle perkütan yaklaşım ultrason rehberlik kullanarak, yüksek hassasiyet geliştirdi.

Kemirgen Ortotopik Mesane ksenogratflarının Minimal İnvaziv kurulması

Burada, bakteriyel protein HP-NAP'ın anti-tümör etkinliğini değerlendirmek için ortotopik mesane tümörünün sinjeneik bir fare modeli oluşturma yöntemi açıklanmaktadır.

Etkinliğinin Değerlendirilmesi<em&gt; H. pylori</emOrtotopik Fare Modelinde Mesane Kanseri Tedavisinde Terapötik Aracı Olarak&gt; Protein HP-NAP

Bu protokol, dişi C57BL / 6J fareler, tümör büyümesi izlenmesinde sıçangil ortotopik mesane tümörlerinin üretimini tarif eder.

Bir Fare Ortotopik Mesane Tümör Modeli ve Tümör Tespit Sistemi

Fare mesane tümörleri N-butyl-N-(4-hydroxybutyl) nitrosamine kanserojen (BBN) ile indüklenen vardır. Mesane tümörü üretimi türdeş olmayan; Bu nedenle, tümör yükünü doğru bir değerlendirme randomizasyon deneysel tedavi için önce gereklidir. Burada tümör boyutu ve sahne değerlendirmek için bir hızlı, güvenilir MRI protokol mevcut.

Manyetik rezonans görüntüleme değerlendirme kanserojen kaynaklı fare mesane Tümörlerinin

Bu protokol, yüksek dereceli ürosityal Hücre Karsinomu hücrelerinin intra-vesically instilling veya intra-rektal enjekte kolorektal kanser hücreleri olmayan obez diyabetik/şiddetli kombine tarafından hasta türeyen ortootopik xenograft modellerinin oluşturulması açıklanmaktadır immüneksikliği (NOD/SCıD) primer tümör büyümesi için fareler ve lenf nodu stromal hücrelerin etkisi altında spontan metastaz, hangi insan metastatik hastalıkların ilerlemesini taklit.

Insan Üromotorial Hücre Karsinomu ve kolorektal kanser tümörü büyüme ve spontan Metasrik için hasta türevi Ortootopik xenograft modelleri

Etiketli hücreleri çok foton mikroskobu ile dil içinde ağız kanseri ve tümör invazyonu niceliksel olarak izlenmesi bir fare modeli üreten yer alan tekniklerin kapsamlı bir bakış sunulmaktadır. Bu sistem, anti-invaziv bileşiklerin moleküler değerlendirme ve ilaç etkinliği için faydalı bir platform olarak hizmet verebilir.

Oral Skuamöz Hücre Karsinomu Ortotopik Fare Modeli Tümör Hücre Invasion Multi-foton Görüntüleme

Öğrenin, immün yetmez farelerde ortotopik mesane tümörü modeli oluşturmayı ve küçük çift zincirli RNA ile intravezikal tedavi uygulamayı. Ultrason ve biyolüminesans görüntüleme ile tümör büyümesini izleyin.

Bir Ortotopik Mesane Tümörü Model ve intravezikal Sarna Tedavisinin Değerlendirilmesi

Daha fazla video keşfet