Name: Bir Fetal Fare Modelinde Biyoaktif Ajan intratrakeal Yönetimi İçin Yeni Bir Cerrahi Yaklaşım (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-10-31T13:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 12 s
Description: Keşfedin fetal farelerde intratrakeal biyoaktif ajan enjeksiyonu için yeni bir cerrahi teknik. Bu yöntem, amniyon içi enjeksiyona kıyasla akciğer hedeflemesini artırarak fetal tedavi araştırmalarını ilerletir.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

MC ve AVDP Flanders Bilim ve Teknoloji (IWT-Vlaanderen) aracılığıyla Yenilik Geliştirme Enstitüsü hibe tarafından desteklenen doktora öğrencisinin vardır. JT UZ Leuven bir part-time Klinik Araştırma Bursu (Koor) tutar. DV KU Leuven, DBOF/10/062 bir hibe ile desteklenen doktora üyesidir. MMdC Conselho Nacional de Pesquisa e Desenvolvimento (CNPq) ve Erasmus Mundus bir hibe ile desteklenen doktora üyesidir. Araştırma Avrupa Komisyonu hibe DIMI (LSHB-CT-2005-512146) tarafından ve KU Leuven in vivo Moleküler Görüntüleme Araştırma grubu (İmir) In tarafından IWT-Vlaanderen tarafından finanse edildi. Biz rAAV vektör üretimi için plazmid AAV6.2 ambalaj onların tür hediye James M. Wilson tarafından kurulan UPenn Vektör Çekirdek kabul etmek istiyorum.

<ol><li>Willson, D. F., Notter, R. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+future+of+exogenous+surfactant+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Respir.+Care%22%5BJournal%5D)">The future of exogenous surfactant therapy.</a> Respir. Care. 56, 1369-1388 (2011).</li>
<li>Abdel-Latif, M. E., Osborn, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intratracheal+Clara+cell+secretory+protein+%28CCSP%29+administration+in+preterm+infants+with+or+at+risk+of+respiratory+distress+syndrome%5BTitle%5D)+AND+%22Cochrane+Database+Syst.+Rev%22%5BJournal%5D)">Intratracheal Clara cell secretory protein (CCSP) administration in preterm infants with or at risk of respiratory distress syndrome.</a> Cochrane Database Syst. Rev. CD008308, (2011).</li>
<li>Thebaud, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Vascular+endothelial+growth+factor+gene+therapy+increases+survival%2C+promotes+lung+angiogenesis%2C+and+prevents+alveolar+damage+in+hyperoxia-induced+lung+injury%3A+evidence+that+angiogenesis+participates+in+alveolarization%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">Vascular endothelial growth factor gene therapy increases survival, promotes lung angiogenesis, and prevents alveolar damage in hyperoxia-induced lung injury: evidence that angiogenesis participates in alveolarization.</a> Circulation. 112, 2477-2486 (2005).</li>
<li>Griesenbach, U., Alton, E. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gene+transfer+to+the+lung%3A+lessons+learned+from+more+than+2+decades+of+CF+gene+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Adv.+Drug+Deliv.+Rev%22%5BJournal%5D)">Gene transfer to the lung: lessons learned from more than 2 decades of CF gene therapy.</a> Adv. Drug Deliv. Rev. 61, 128-139 (2009).</li>
<li>Aneja, M. K., Rudolph, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gene+therapy+of+surfactant+protein+B+deficiency%5BTitle%5D)+AND+%22Curr.+Opin.+Mol.+Ther%22%5BJournal%5D)">Gene therapy of surfactant protein B deficiency.</a> Curr. Opin. Mol. Ther. 8, 432-438 (2006).</li>
<li>Flotte, T. R., Mueller, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gene+therapy+for+alpha-1+antitrypsin+deficiency%5BTitle%5D)+AND+%22Hum.+Mol.+Genet%22%5BJournal%5D)">Gene therapy for alpha-1 antitrypsin deficiency.</a> Hum. Mol. Genet. 20, R87-R92 (2011).</li>
<li>Roybal, J. L., Santore, M. T., Flake, A. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stem+cell+and+genetic+therapies+for+the+fetus%5BTitle%5D)+AND+%22Semin+Fetal+Neonatal+Med%22%5BJournal%5D)">Stem cell and genetic therapies for the fetus.</a> Semin Fetal Neonatal Med. 15, 46-51 (2010).</li>
<li>Peebles, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Widespread+and+efficient+marker+gene+expression+in+the+airway+epithelia+of+fetal+sheep+after+minimally+invasive+tracheal+application+of+recombinant+adenovirus+in+utero%5BTitle%5D)+AND+%22Gene+Ther%22%5BJournal%5D)">Widespread and efficient marker gene expression in the airway epithelia of fetal sheep after minimally invasive tracheal application of recombinant adenovirus in utero.</a> Gene Ther. 11, 70-708 (2004).</li>
<li>Deprest, J., Gratacos, E., Nicolaides, K. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fetoscopic+tracheal+occlusion+%28FETO%29+for+severe+congenital+diaphragmatic+hernia%3A+evolution+of+a+technique+and+preliminary+results%5BTitle%5D)+AND+%22Ultrasound+Obstet.+Gynecol%22%5BJournal%5D)">Fetoscopic tracheal occlusion (FETO) for severe congenital diaphragmatic hernia: evolution of a technique and preliminary results.</a> Ultrasound Obstet. Gynecol. 24, 121-126 (2004).</li>
<li>Buckley, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intra-amniotic+delivery+of+CFTR-expressing+adenovirus+does+not+reverse+cystic+fibrosis+phenotype+in+inbred+CFTR-knockout+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Mol.+Ther%22%5BJournal%5D)">Intra-amniotic delivery of CFTR-expressing adenovirus does not reverse cystic fibrosis phenotype in inbred CFTR-knockout mice.</a> Mol. Ther. 16, 819-824 (2008).</li>
<li>Davies, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adenovirus-mediated+in+utero+expression+of+CFTR+does+not+improve+survival+of+CFTR+knockout+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Mol.+Ther%22%5BJournal%5D)">Adenovirus-mediated in utero expression of CFTR does not improve survival of CFTR knockout mice.</a> Mol. Ther. 16, 812-818 (2008).</li>
<li>Mitchell, M., Jerebtsova, M., Batshaw, M. L., Newman, K., Ye, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Long-term+gene+transfer+to+mouse+fetuses+with+recombinant+adenovirus+and+adeno-associated+virus+%28AAV%29+vectors%5BTitle%5D)+AND+%22Gene+Ther%22%5BJournal%5D)">Long-term gene transfer to mouse fetuses with recombinant adenovirus and adeno-associated virus (AAV) vectors.</a> Gene Ther. 7, 1986-1992 (2000).</li>
<li>Henriques-Coelho, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Targeted+gene+transfer+to+fetal+rat+lung+interstitium+by+ultrasound-guided+intrapulmonary+injection%5BTitle%5D)+AND+%22Mol.+Ther%22%5BJournal%5D)">Targeted gene transfer to fetal rat lung interstitium by ultrasound-guided intrapulmonary injection.</a> Mol. Ther. 15, 340-347 (2007).</li>
<li>Toelen, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fetal+gene+transfer+with+lentiviral+vectors%3A+long-term+in+vivo+follow-up+evaluation+in+a+rat+model%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Obstet+Gynecol%22%5BJournal%5D)">Fetal gene transfer with lentiviral vectors: long-term in vivo follow-up evaluation in a rat model.</a> Am J Obstet Gynecol. 196, e1-e6 (2007).</li>
<li>Waddington, S. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Long-term+transgene+expression+by+administration+of+a+lentivirus-based+vector+to+the+fetal+circulation+of+immuno-competent+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Gene+Ther%22%5BJournal%5D)">Long-term transgene expression by administration of a lentivirus-based vector to the fetal circulation of immuno-competent mice.</a> Gene Ther. 10, 1234-1240 (2003).</li>
<li>Waddington, S. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Permanent+phenotypic+correction+of+hemophilia+B+in+immunocompetent+mice+by+prenatal+gene+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">Permanent phenotypic correction of hemophilia B in immunocompetent mice by prenatal gene therapy.</a> Blood. 104, 2714-2721 (2004).</li>
<li>Senoo, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adenovirus-mediated+in+utero+gene+transfer+in+mice+and+guinea+pigs%3A+tissue+distribution+of+recombinant+adenovirus+determined+by+quantitative+TaqMan-polymerase+chain+reaction+assay%5BTitle%5D)+AND+%22Mol.+Genet.+Metab%22%5BJournal%5D)">Adenovirus-mediated in utero gene transfer in mice and guinea pigs: tissue distribution of recombinant adenovirus determined by quantitative TaqMan-polymerase chain reaction assay.</a> Mol. Genet. Metab. 69, 269-276 (2000).</li>
<li>Carlon, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Efficient+gene+transfer+into+the+mouse+lung+by+fetal+intratracheal+injection+of+rAAV2%2F6.2%5BTitle%5D)+AND+%22Mol.+Ther%22%5BJournal%5D)">Efficient gene transfer into the mouse lung by fetal intratracheal injection of rAAV2/6.2.</a> Mol. Ther. 18, 2130-2138 (2010).</li>
<li>Schmiedl, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lipopolysaccharide-induced+injury+is+more+pronounced+in+fetal+transgenic+ErbB4-deleted+lungs%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Physiol.+Lung+Cell+Mol+Physiol%22%5BJournal%5D)">Lipopolysaccharide-induced injury is more pronounced in fetal transgenic ErbB4-deleted lungs.</a> Am. J. Physiol. Lung Cell Mol Physiol. 301, L490-L499 (2011).</li>
<li>Buckley, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Factors+influencing+adenovirus-mediated+airway+transduction+in+fetal+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Mol.+Ther%22%5BJournal%5D)">Factors influencing adenovirus-mediated airway transduction in fetal mice.</a> Mol. Ther. 12, 484-492 (2005).</li>
</ol>

Çıkar çatışması ilan etti.

Kritik adımlar <ul><li> Onlar yavru bol sayıda (ortalama DKBKS 14.4 ± 1.8, kendi veri) çünkü biz çalışmayı seçti fare zorlanma NMRI fareler, iyi müdahaleler tahammül ve iyi maternal özelliklere sahip. </li><li> Sadece travma olmaksızın neredeyse imkansızdır aksi konumlandırılması, fetal başın değil omuz maruz istediğiniz gibi rahim duvarı ve fetal membranlar yoluyla çantanızda dize yerleştirilmesi kritik bir adımdır. </li><li> Fetal başın optimal pozisyonu büyük kan damarlarının (şahdamarından) trakea ile paralel çalış...

<table border="1"><tbody><tr><td> Reaktif Adı </td><td> Şirket </td><td> Katalog numarası </td><td> Yorumlar (isteğe bağlı) </td></tr><tr><td> NMRI fareler </td><td> Janvier, Le Genest St Isle, Fransa </td><td></td><td></td></tr><tr><td> İzofluran </td><td> Isoba, Intervet / Schering-Plough Hayvan Sağlığı, Milton Keynes, UK </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Prolen 6-0 </td><td> Ethicon, Groot Bijgaarden, Belçika </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Vicryl 5-0 </td><td> Ethicon, Groot Bijgaarden, Belçika </td><td></td><td></td></tr><tr><td> 50 ul Hamilton Cam Şırınga, Model 1710,5 TLLX SYR </td><td> Hamilton, Reno, NV, ABD </td><td> 5495-20 </td><td></td></tr><tr><td> 30G keskin iğne </td><td> Hamilton, Reno, NV, ABD </td><td> 7762-03 </td><td></td></tr><tr><td> % 2 xylocaine </td><td> AstraZeneca, Zoetermeer, Hollanda </td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

bir fetal fare modelinde biyoaktif ajan intratrakeal yönetimi İçin yeni bir cerrahi yaklaşım

A Novel Surgical Approach for Intratracheal Administration of Bioactive Agents in a Fetal Mouse Model

Hücrelerin, genlerin veya farmakolojik ajanların Prenatal pulmoner teslimat genetik ve kazanılmış hastalıklar çeşitli yeni tedavi stratejileri için temel sağlayabilir. Apart kısa vadeli gen ekspresyonu veya farmakolojik girişimlerle tedavi edici etkileri elde etmek için yeterlidir teslim gen, çeşitli kalıtsal olmayan perinatal durumlar, uzun vadeli ifade şartı ile doğuştan veya kalıtsal bozukluklar, bu gelecekteki potansiyel endikasyon olarak kabul edilmektedir yaklaşım tarzı. Kısa süreli terapi doğum öncesi uygulama için aday neonatal hastalıklar solunum distres sendromu, 1,2 ya da neonatal akciğer 3 hiperoksik yaralanmasına neden olan yüzey aktif protein B geçici neonatal eksikliği olabilir. Kalıcı tedavi düzeltme Aday hastalıkları Kistik Fibrozis (CF) 4, sürfaktan eksiklikleri 5 ve α1-antitripsin eksikliği 6 genetik varyantları vardır. &lt;p class = &quot;jove_content&quot;&gt; Genellikle, doğum öncesi gen tedavisinin önemli bir avantaj böylece bireysel onarılamaz hasar görmemesi hastada klinik öncesi ya da erken gelişimi terapötik müdahale başlatmak için yeteneğidir. Cenin içine daha verimli bir gen ya da kök hücre transferine izin verebilir yetişkin organlarının ile karşılaştırıldığında, ek olarak, fetal organlar artan bir hücre proliferasyon oranına sahiptir. Ayrıca, doğum halinde uterus gen bireyin bağışıklık sisteminin tamamen olgun olmadığında gerçekleşir. Bu nedenle, doğru bir sürümü ile fonksiyonel olmayan ya da eksik protein heterolog hücreleri veya takviyesi transplantasyonu son zamanlarda hücresel ve genetik hem de tedavilerin 7 ile durum kanıtlanmıştır hücre, vektör veya transgen ürün, bağışıklık hassasiyete neden olmamalıdır . Bu çalışmada, biz doğrudan bir fare m fetal trakeaya hedef potansiyeli incelenmiştirodel. Bu yöntem, tavşan, koyun 8, ve hatta klinik ortamda 9&#39;daki gibi daha büyük hayvan modellerinde kullanımda, ancak bir fare modelinde, daha önce yapılmamıştır tarihe sahiptir. CF gibi genetik hastalıklar için fetal gen tedavisinin potansiyel öğrenim görürken, fare modeli, çünkü farklı transgenik fare suşları, iyi belgelenmiş embriyogenez ve fetal gelişim, daha az sıkı geniş kullanılabilirliği proof-of-concept bir ilk olarak çok yararlıdır etik düzenlemeler, kısa gebelik ve büyük çöp boyutu. Farklı erişim yolları intra-amniyotik enjeksiyon 10-12, yolk kesesi damarlarının 15,16 veya umbilikal ven 17 içine (ultrason kılavuzluğunda) intrapulmoner enjeksiyon 13,14 ve intravenöz dahil fetal kemirgen akciğer hedef tarif edilmiştir. Bizim yeni bir cerrahi prosedür doğrudan sağlayan fetal fare trakea içine seçim ajan enjekte araştırmacılar sağlarmevcut tekniklerin 18 göre solunum yollarında daha verimli bir şekilde teslim için.

Biz fare fetüs olarak biyoaktif ajanların intratrakeal yönetimi için yeni bir cerrahi yaklaşım geliştirdi. Teslimat güzergahı sık kullanılan intra-amniyotik enjeksiyon dışında fetal fare akciğerlere hedefleme daha verimlidir. Bu işlem, bir fare modeli tarif edilmemiştir tarihe sahiptir.

Bir Fetal Fare Modelinde Biyoaktif Ajan intratrakeal Yönetimi İçin Yeni Bir Cerrahi Yaklaşım

Hücrelerin, genlerin veya farmakolojik ajanların prenatal pulmoner iletimi, çeşitli genetik ve... için yeni terapötik stratejilerin temelini oluşturabilir.

Aşağıdaki deneyin genel amacı, mevcut tekniklerden daha etkili bir şekilde havayollarına ulaştırılmasını sağlayan, seçilen bir ajanı doğrudan fetal fare trakesine enjekte edebilmektir. Bu işlem, bir histerotomi aracılığıyla fetal başın dışarı çıkarılması ve fetal trakeseye erişilmesiyle gerçekleştirilir. Ardından, trakeseyi görüntülemek için dikey bir boyun insizyonu yapılır ve görsel rehberlik altında bir iğne yerleştirilir.Ardından, seçilen maddeyi fetal havayollarına verimli bir şekilde iletmek için trakeye floresan boncuklar veya bir viral vektör enjekte edilir. İşlem görmüş akciğerlerden alınan doku kesitlerinin mikroskobik analizi, intratrakeal enjeksiyonun, en yaygın kullanılan intraamniyotik iletim yoluna kıyasla floresan moleküllerin veya viral vektörlerin fetal havayollarına daha verimli bir şekilde iletilmesini sağladığını göstermektedir. Bu tekniğin, fetal intraamniyotik enjeksiyon gibi mevcut yöntemlere kıyasla temel avantajı, enjekte edilen maddenin amniyotik sıvı içinde seyrelmesini önlemesidir.Bu işlem, fetal fare akciğerinde bulunan partiküllerin miktar etkisini maksimize eder. Genel olarak, bu teknolojiye yeni başlayan kişiler için mükemmel bir endotrakeal enjeksiyon gerçekleştirmek son derece zorlayıcı olacaktır. Bunun nedeni, fetal trakeanın aşırı derecede hassas olması ve bu nedenle çok kolay bir şekilde delinebilmesidir.Bunu yaptığınızda, pertrakeal bir enjeksiyon gerçekleştirmiş olacaksınız ve bu nedenle fetal akciğeri hedeflemeyi başaramayacaksınız. Ancak her zaman olduğu gibi, pratik yapmak mükemmelleştirir. İntratrakeal veya it enjeksiyonuna hazırlık için hamile ve MRI fareleri hazırlayın. Böylece cerrahi işlem anında, cerrahi öncesinde ve sonrasında 18 günlük hamile olacaklardır.Fareler, normal oda sıcaklığında ve normal gün ışığında, suya ve yeme serbest erişimi olan filtre üstü kafeslerde barındırılır. Fare isoflurane ile anestezi edildikten sonra, vücut sıcaklığını korumak için 37 °C sıcaklıktaki bir ısıtma pedine yerleştirilir ve ayak parmağı sıkıştırma testi yapılarak anestezi düzeyi kontrol edilir. Karın bölgesi povidon iyot ile dezenfekte edilir ve gebe uterusu açığa çıkarmak için median laparotomi uygulanır; iki uterus kornusu dışarı çıkarılır ve gestasyonel kese sayısı sayılır.Fetal başın dışarı çıkarılması için en uygun pozisyona göre her boynuzda bir fetüs üzerinde işlem yapılır. Fetüsü uterus içerisinde sabitlemek için, fetal başın açığa çıkarılacağı bölgenin üzerindeki uterus duvarından ve fetal membranlardan, yaklaşık bir santimetre çapında, altı-0 prolin ile kese dikişi atılır. Ardından, kese dikişinin içindeki uterus duvarına, ucu sivri küçük makaslar kullanılarak yaklaşık 0,8 santimetrelik bir insizyon yapılır.Ardından, fetüsün başını ve boynunu histerotomi üzerinden nazikçe sıkın. Daha sonra, boyun etrafındaki purse string süturu nazikçe çekerek sıkın ve iki adet mikro mosquito forseps kullanın. Pozisyonu sabitlemek için beş 0 poly actin kullanın.Stereo mikroskop altında fetal başı hiperextansiyonda tutmak için, ağza üst çene çevresine iki forseps üzerine yerleştirilmiş dokuz adet 10 numara sütür uygulayın. Keskin ve küt diseksiyon kullanarak trakeayı görüntülemek için boyuna dikey bir insizyon yapın ve trakeaya ulaşmak için alttaki dokuyu daha fazla disseke edin. 30 gauge keskin iğneli 50 microliter Hamilton cam şırınga kullanarak, toplam 30 microliter hacminde madde enjekte edin.İğne çıkarıldığında enjekte edilen sıvının minimum düzeyde geri gelmesi, enjeksiyonun doğru şekilde gerçekleştirildiğini doğrular. Baş kısmını uterusa geri yerleştirmek için burun kısmına hafifçe basınç uygulayın. Önce boyun, ardından baş kısmı uterusun içine girer.Ve son olarak, burun. Purse-string (kesme dikişi) içindeki insizyona salin içeren bir iğne yerleştirin. Purse-string'i sıkarak histerotomi yerini kapatın ve oligohidramniyi önlemek için amniyotik kaviteye toplamda yaklaşık 500 µL salin enjekte edin.Uterusu karın boşluğuna geri yerleştirdikten sonra, iki ayrı katmanda 5-0 Vicryl sürekli dikiş kullanın. Maternal karın duvarını kapatmak için, ameliyat sonrası ağrı yönetimini sağlamak amacıyla insizyon bölgesini %0.2'lik Xylocaine ile infiltre edin. Fetal intraamniyotik veya IA enjeksiyon gerçekleştirmek için, fare tamamen iyileşene kadar onu bir ısıtıcı ped üzerinde tutun.Gebe fareyi anesteziye aldıktan sonra, karnı dezenfekte etmek için povidon iyot kullanın ve medyan laparotomi gerçekleştirin. Gebe uterusu açığa çıkarmak için iki uterus boynuzunu dışarı çıkarın ve gestasyonel kese sayısını sayın. 30 gauge keskin iğneye sahip 50 mikrolitrelik bir Hamilton cam şırıngası kullanarak, iğneyi fetüsle temas etmeden, ağzına yakın bir noktadan keseye yerleştirin ve amniyotik sıvıya 30 mikrolitre çözelti enjekte edin.Tüm fetüslere enjeksiyon yapıldıktan sonra, uterusu karın boşluğunda yeniden konumlandırın ve karın duvarı ile cildi beş sıfır Vicryl sütür ile dikin. Fetal müdahaleden 36 saat sonra anne ötanize edildikten sonra, fetüsleri sezaryenle alın ve kalp atışının varlığı, pembe deri rengi ve spontan hareketleri kontrol ederek canlılıklarını değerlendirin. Solunumu ve oksijen alımını uyarmak için yavruları bir oksijen kaynağının yakınına yerleştirin.Ardından yavruları kuyruk diplerinden işaretleyin. Çin mürekkebi kullanıldığında, başarılı bir enjeksiyon, operasyon geçirmiş bir fetüsün ötanazi edilmesi ve akciğerlerin diseksiyonu ile, enjekte edilmemiş kontrol akciğerleriyle karşılaştırmalı olarak akciğerlerdeki görünür boyanın makroskobik olarak değerlendirilmesiyle tespit edilebilir. Sonrasında, canlılık kriterlerini karşılayan geri kalan yavruların üzerini kapatın.Bir günlük yavruları olan bir koruyucu anneden gelen dışkı ve idrar içeren altlık malzemesini alın ve yavruları koruyucu annenin yuvasına yerleştirin. Koruyucu annenin yuvasında toplamda 10'dan fazla yavru bırakmayın. Ardından kafesi 12 saat boyunca sessiz ve rahatsız edilmeyecek bir ortama yerleştirin ve optimal hacmi belirlemek için koruyucu anneliğin hayatta kalma oranını değerlendirin.100 nanometre kırmızı floresan moleküllerden 10, 20 ve 30 mikrolitre hacimlerde enjeksiyonlar ampirik olarak seçilmiştir. Burada, çekirdek boyaması yapılmış sabitlenmiş akciğer kesitlerinin konfokal görüntüleri gösterilmektedir. Fetal cerrahi sırasında, sadece 30 mikrolitre enjeksiyonundan sonra enjekte edilen sıvıların fazla olduğunu gösteren bir geri akış tespit edilmiş olsa da, burada gösterilen göreceli floresans ölçümleriyle belirlendiği üzere, 30 mikrolitre akciğer parankiminde en yüksek floresan sinyal miktarını vermiştir; bu enjeksiyon, I A rotasına kıyasla fetal akciğere anlamlı derecede daha yüksek florosfer iletimi sağlamıştır.Gastrointestinal traktus, hem IT hem de IA enjekte edilen hayvanlarda pozitif saptandı. Tedavi edilen fetüslerden alınan diğer dokularda veya negatif kontrol hayvanlarında kırmızı floresans gözlenmedi; enjeksiyon sonrası viral transdüksiyonun etkinliğini değerlendirmek için, bir haftalık yaştaki hayvanlara tavuk beta aktin promotörü kontrolündeki ateş böceği lusiferazını taşıyan RAAV vektörleri ile IT ve IA enjeksiyonları uygulandı. IT grubundaki toplam foton akısı, IA yavrularına ve negatif kontrole göre anlamlı derecede daha yüksekti.Doğru ve yanlış bir IT enjeksiyonu arasındaki farkı ayırt etmek için, yüzey BLI sinyalini MR görüntülemeden elde edilen daha derin anatomik yapıların görselleştirmesiyle birleştiren bindirme bir görüntü elde etmek amacıyla, manyetik rezonans görüntüleme (MRI) ve biyolüminesans görüntüleme (BLI) kombinasyonu uygulanmıştır. Bir haftalık yaştaki BL görüntüleme, boyun ve toraks bölgesinden yayılan bir sinyal ortaya çıkarmıştır.MRI ile BLI'nın birlikte kaydedilmesi (co-registration), doğru bir enjeksiyon sonrası lusiferaz gen ekspresyonunun akciğer bölgesinde, hatalı bir enjeksiyon sonrası ise boyun ve abdominal bölgede konumlandığını göstermiştir. Ex gal boyaması ile yapılan histolojik analiz, in vivo co-registration işlemini doğrulamıştır. Tüm prosedüre hakim olunduğunda, intra enjeksiyon işlemi, kesiden anne hayvanın kapatılmasına kadar yarım saat içinde tamamlanabilmektedir.Kısa operasyon süresi, daha iyi fötal sağkalım ve doğum sonrası incelenebilecek daha fazla hayvan ile sonuçlanacaktır.

a-novel-surgical-approach-for-intratracheal-administration-bioactive

Research

JoVE Journal

Medicine

Tıp

Bu videoda, deneysel bir ajanın distal sağ ve sol akciğere seçici olarak uygulanması için intrabronşiyal bir yaklaşım açıklanmaktadır. Öne çıkan protokolde, pulmoner fibroz için daha iyi bir model elde etmek için bleomisini intrabronşikal olarak bir fareye uygulayacağız.

İntrabronşiyal Doğum: Deneysel bir ajanı seçici olarak bir fare akciğerine uygulamak için bir teknik

Kaynak: Venuprasad, K., ve diğerleri. Hava Yolu Enflamasyonunu İncelemek İçin Fare Modellerinde Haemophilus influenzae'nin Trakeal İçi Uygulaması. J. Vis. Uzm. (2016)Bu video, alt solunum yolu enfeksiyonunu modellemek için akciğer patojenik bir bakteri inokulumunun anestezi uygulanmış bir fareye intratrakeal olarak verilmesini göstermektedir.

Bir Fare Modelinde İntratrakeal Bakteri Dağıtımının Gerçekleştirilmesi

Bu video, hamile bir farede bir fare fetüsünün transuterin trakeal oklüzyon prosedürünü göstermektedir. Bu model, tıkalı trakeanın akciğer gelişimi üzerindeki etkisini incelemek için kullanılabilir.

Murin Modelinde Transuterin Fetal Trakeal Oklüzyonun Modellenmesi: Gebe Bir Farede Fetal Trakeanın Ligasyonu İçin Cerrahi Bir Prosedür

Biz 2.0 mm spekulum ile bir otoskop kullanarak direkt laringoskopi yoluyla farelerde entübasyon için, basit, güvenilir ve nispeten ucuz bir yöntem geliştirdik. Bu teknik, atravmatik ve kronik deneylerde tekrarlanan ölçümler için de kullanılabilir. Biz üstün trakeostomi veya daha önce cerrahi dışı teknikler bildirdi bulabilirsiniz.

Farelerde Endotrakeal Entübasyon<em&gt; Via</emBir Otoskop Kullanma&gt; Doğrudan Larengoskopi

Insanlarda akciğer hastalıklarının durumunu taklit eden bir modelinin kullanılması, belirli bir hastalığın patofizyolojisi ve / veya etyolojisinin araştırılması için ve terapötik müdahale geliştirmek için çok önemlidir. Burada doğrudan fare akciğerlere eksojen malzemeleri teslim noninvazif bir entübasyon yöntemi sunulmuştur.

Noninvaziv Entübasyon Fare Akciğer Patolojisi ve Fizyolojisi Eğitim için

Bu makalede, entübasyon yoluyla fare trakea içine doğrudan bleomisin yönetmek için hızlı ve basit bir yöntem sunar. Bu yöntemin en önemli avantajları usta son derece tekrarlanabilir kolay ve özel ekipman ya da uzun iyileşme süreleri gerektirmez vardır.

Farelerde Trakea hızlı intübasyon için geliştirilmiş bir yöntem

Farelerde deneysel ajanlar intratracheal (It) yönetimi genellikle distal akciğerlere asimetrik teslim sonuçlanır.  Bu raporda, her akciğeri operatif olmayan canlı fareler içinde cannulate için doğrudan intrabronchial (ıB) yaklaşımı açıklanmaktadır.  Bu yaklaşım, bir akciğer için seçici olarak ajanlar yönetmek için kullanılabilir ya da her iki akciğerde simetrik Ajan teslim geliştirmek için adapte olabilir.

Fare akciğer Içinde seçici Ajan biriktirme geliştirmek için doğrudan Intrabronchial yönetim

İlaçların doğrudan yenidoğan kemirgenlerinin trakeasına damlatılması tekniği, lokal olarak uygulanan ilaçların veya biyolojiklerin yenidoğan akciğer hastalıkları üzerindeki etkisini incelemede önemlidir. Ek olarak, bu yöntem hayvan modellerinde akciğer hasarını indüklemek için de kullanılabilir.

Yenidoğan Kemirgenlerinde Akciğer Hastalığını Tedavi Etmek İçin İlaçların İntratrakeal İnstilasyonu İçin Minimal İnvaziv Bir Yöntem

Konjenital diyafram fıtığı ve fetal trakeal tıkanıklık gibi çeşitli hayvan modelleri etik konular, maliyet, cerrahi zorluk, boyut, sağkalım oranları ve genetik araçların mevcudiyeti ile ilgili avantaj ve dezavantajlar sürmektedir. Bu model, hem trakeal tıkanıklık hem de artan ışık basıncının akciğer gelişimi üzerindeki etkisini incelemek için yeni bir araç sağlar.

Farelerde Transuterin Fetal Trakeal Oklüzyon Modeli

Burada, noninvaziv orofaringeal endotrakeal entübasyon yoluyla intratrakeal lipopolisakkarit (LPS) doğumu için bir protokol öneriyoruz. Bu yöntem, hayvan için cerrahi prosedürün travmasını en aza indirir ve LPS'yi trakeaya ve daha sonra akciğerlere doğru bir şekilde iletir.

Farelerde Noninvaziv İntratrakeal Lipopolisakkarit Damlatma

Bu protokol, bir farenin en uygun şekilde konumlandırılmasının ve kamera tabanlı bir otoskopun transoral olarak yerleştirilmesinin glotisin görselleştirilmesini, minimal doku travması ile hızlı entübasyonu ve akciğerlere tutarlı sıvı verilmesini nasıl sağladığını gösterir.

Fare Akciğerine Sıvı İletimi için Geliştirilmiş Metodoloji: Tüketici Otoskopu Kullanılarak Entübasyon

Keşfedin fetal farelerde intratrakeal biyoaktif ajan enjeksiyonu için yeni bir cerrahi teknik. Bu yöntem, amniyon içi enjeksiyona kıyasla akciğer hedeflemesini artırarak fetal tedavi araştırmalarını ilerletir.

Bir Fetal Fare Modelinde Biyoaktif Ajan intratrakeal Yönetimi İçin Yeni Bir Cerrahi Yaklaşım

Daha fazla video keşfet