Bir Fetal Fare Modelinde Biyoaktif Ajan intratrakeal Yönetimi İçin Yeni Bir Cerrahi Yaklaşım

Aşağıdaki deneyin genel amacı, tercih edilen bir ajanı doğrudan fetal fare trakeasına enjekte edebilmektir, bu da hava yollarına mevcut tekniklerden daha verimli bir iletim sağlar. Bu, fetal başın bir histerik otomi ile dıştan çıkarılması ve fetal trakeaya erişilmesiyle elde edilir. Daha sonra, trakeayı görselleştirmek için dikey bir boyun kesisi yapılır ve görsel kılavuzluk altında bir iğne yerleştirilir.

Daha sonra, tercih edilen maddeyi fetal hava yollarına verimli bir şekilde iletmek için trakeaya floresan boncuklar veya viral bir vektör enjekte edilir. Tedavi edilen akciğerlerden alınan doku kesitlerinin mikroskobik analizi, intratrakeal enjeksiyonun, en sık kullanılan intra amniyotik dağıtım köküne kıyasla fetal hava yollarına floresan moleküllerin veya viral vektörlerin daha verimli bir şekilde verilmesiyle sonuçlandığını göstermektedir. Bu tekniğin fetal intra amniyotik enjeksiyon gibi mevcut yöntemlere kıyasla en büyük avantajı, enjekte edilen maddenin amniyotik sıvıya seyreltilmesini önlemenizdir.

Bu, fetal fare akciğerinde bulunan parçacıkların miktar etkisini en üst düzeye çıkarır. Genel olarak, bu teknolojiye yeni olan kişiler, mükemmel bir endotrakeal enjeksiyon gerçekleştirmeyi son derece zor bulacaktır. Bunun nedeni, fetal trakeanın son derece kırılgan olması ve bu nedenle çok kolay bir şekilde delinebilmesidir.

Bunu yaptığınızda, trakeal enjeksiyon başına bir işlem yapacaksınız ve bu nedenle fetal akciğeri hedeflemeyeceksiniz. Ancak her zaman olduğu gibi, pratik mükemmel yapar İntrakeal hazırlık veya enjeksiyon zamanı hamile ve MRI fareleri için. Yani ameliyat sırasında ameliyat öncesi ve sonrası 18 günlük hamiledirler.

Normal oda sıcaklığında ve normal gün ışığında, suya ve yemeğe ücretsiz erişimi olan filtre üstü kafeslere yerleştirilirler. Fareyi flor ile uyuşturduktan sonra, vücut ısısını korumak için 37 santigrat derecede bir ısıtma yastığına yerleştirin ve bir ayak parmağı yaparak anestezi seviyesini kontrol edin. Çimdikleyin, karnı povidon iyot ile dezenfekte edin ve hamile uterusu ortaya çıkarmak için medyan laparotomi yapın, iki uterus boynuzunu dışlayın ve gebelik torbalarının sayısını sayın.

Boynuz başına bir fetüs, fetal başın dışsallaştırılması için en uygun pozisyona bağlı olarak ameliyat edilir. Fetusu rahim içine omuzlardan sabitlemek için, rahim duvarı ve fetal zarlardan fetal başın açığa çıkacağı alan boyunca yaklaşık bir santimetre çapında ip başına altı oh prolin geçer. Daha sonra, keskin uçlu küçük bir makas kullanarak yaklaşık 0,8 santimetrelik çanta ipinin içindeki rahim duvarında bir kesi yapın.

Daha sonra, fetüsün başını ve boynunu hyster otomi ile hafifçe sıkın. Sonra çanta ipini nazikçe çekin, boynunuza sıkıca dikin ve iki mikro sivrisinek forseps kullanın. Yerine sabitlemek için beş o poli aktin kullanın.

Fetal başı stereo mikroskop altında hiperekstansiyonda tutmak için üst çene çevresinde ağza yerleştirilen iki forseps üzerine dokuz 10 dikiş. Dikey bir boyun kesisi yapmak için keskin ve künt diseksiyon kullanarak trakeayı görselleştirin, trakeaya ulaşmak için alttaki dokuyu daha fazla inceleyin. 30 gauge keskin bir iğne ile 50 mikrolitrelik bir Hamilton cam şırınga kullanarak, toplam 30 mikrolitre madde enjekte edin.

İğnenin çıkarılmasından sonra enjekte edilen sıvının minimum akışı, enjeksiyonun düzgün bir şekilde yapılmasını sağlar. Rahimdeki başı değiştirmek için buruna hafif bir baskı uygulayın. Boyun önce rahim içine, ardından baş içine geri döner.

Ve son olarak, burun. Çanta ipinin içindeki kesiye salin içeren bir iğne sokun. Çanta ipini sıkarak histeri otomisini kapatın ve oligo hidrusu önlemek için amniyotik boşluğa toplam yaklaşık 500 mikrolitre salin enjekte edin.

Uterusu karın içine yerleştirdikten sonra, iki ayrı tabaka halinde beş oh Vicryl koşu sütürü kullanın. Maternal karın duvarını kapatmak için, insizyona %0.2 Ksilokain ile sızın Postoperatif ağrı kesici için. Fetal intra amniyotik veya IA enjeksiyonu gerçekleştirmek için tamamen iyileşene kadar fareyi bir ısıtma yastığı üzerinde tutun.

Hamile fareyi uyuşturduktan sonra, karnı dezenfekte etmek için povidon iyot kullanın ve medyan laparotomi yapın Hamile uterusu açığa çıkarmak için, iki uterus boynuzunu dıştan çıkarın ve gebelik torbalarının sayısını sayın. 30 gauge keskin bir iğne ile 50 mikrolitrelik bir Hamilton cam şırınga kullanarak, iğneyi içeri girmeden fetüsün ağzına yakın bir yere çuvala sokun. Fetüs ile temas edin ve amniyotik sıvıya 30 mikrolitre çözelti enjekte edin.

Tüm fetüsler enjekte edildikten sonra, uterusu karın içinde yeniden konumlandırın ve karın duvarına ve cildine beş oh Vicryl sütür kullanın. Barajı ötenazi yaptıktan sonra, fetal müdahaleden 36 saat sonra, fetüsleri sezaryen ile doğurun ve kalp atışı, pembe ten rengi ve spontan hareketlerin varlığını kontrol ederek canlılıklarını değerlendirin. Solunumu ve oksijen güncellemesini uyarmak için yavruları bir oksijen kaynağının yakınına yerleştirin.

Ardından yavruları kuyruğun dibinde işaretleyin. Çin mürekkebi kullanılarak, başarılı bir enjeksiyon, ameliyat edilmiş bir fetüsün ötenazi yapılması ve akciğerlerin makroskopik olarak diseke edilmesiyle, enjekte edilmeyen kontrollü akciğerlere kıyasla akciğerlerdeki görünür boyanın varlığını değerlendirerek değerlendirilebilir. Ardından, yaşayabilirlik kriterlerini karşılayan yavruların geri kalanını örtün.

Bir günlük yavruları olan bir koruyucu anneden alınan dışkı ve idrarı içeren yatak takımı materyali ve yavruları koruyucu annenin kumunun yanına yerleştirin. Koruyucu annenin çöpüne toplamda 10'dan fazla yavru bırakmayın. Daha sonra kafesi 12 saat boyunca sessiz, rahatsız edilmemiş bir ortama yerleştirin ve bunun için en uygun hacmi belirlemek için beslemenin hayatta kalma oranını değerlendirin.

Enjeksiyon 10, 20 ve 30 mikrolitre hacimlerde 100 nanometre kırmızı floresan molekülleri ampirik olarak seçildi. Burada, çekirdek boyaması ile sabit akciğer bölümlerinin konfokal görüntüleri gösterilmiştir. Fetal cerrahi sırasında, sadece 30 mikrolitre enjeksiyondan sonra bir geri akış tespit edilmesine rağmen, enjekte edilen fazla sıvıyı gösterir, 30 mikrolitre, burada gösterildiği gibi nispi floresansın ölçülmesiyle ölçüldüğü üzere akciğer parankiminde en yüksek miktarda floresan sinyali vermiştir, enjeksiyon, I A köküne kıyasla fetal akciğere önemli ölçüde daha yüksek floros küreleri verilmesine neden olmuştur.

Gastrointestinal sistem hem IT hem de IA enjekte edilen hayvanlar için de pozitifti. Enjeksiyondan sonra viral transdüksiyonun etkinliğini değerlendirmek için tedavi edilen fetüslerden veya negatif kontrol hayvanlarından alınan diğer dokularda kırmızı floresan gözlenmedi, IT ve IA enjeksiyonları, bir haftalıkken tavuk beta aktin promotörü kontrolü altında RAAV vektörleri ENC kaplama ateşböceği lusiferaz ile gerçekleştirildi. BT grubu için toplam foton akışı, IA yavrularına ve negatif kontrole göre anlamlı derecede yüksekti.

Doğru ve yanlış bir IT enjeksiyonunu ayırt etmek için, yüzeyi birleştiren bir kaplama görüntüsü elde etmek için manyetik rezonans görüntüleme veya MRI ve biyolüminesans görüntüleme veya BLI'nin bir kombinasyonu gerçekleştirildi. Burada gösterildiği gibi MR görüntülemeden daha derin anatomik yapıların görselleştirilmesi ile BLI sinyali. Bir haftalıkken, BL görüntüleme boyun ve torasik bölgeden yayılan bir sinyal ortaya çıkardı.

MRG'nin BLI ile birlikte kaydı, doğru bir enjeksiyonu takiben pulmoner bölgede, ancak yanlış bir enjeksiyondan sonra boyun ve karın bölgesinde lusiferaz gen ekspresyonunu yerleştirdi. Ex gal boyama ile yapılan histolojik analiz, in vivo ko-kaydı doğruladı. Bir kez ustalaştıktan sonra, anne hayvanın insizyonundan kapanmasına kadar tüm intra enjeksiyon prosedürü yarım saat içinde gerçekleştirilebilir.

Kısa bir ameliyat süresi, daha iyi fetal sağkalım ve doğumdan sonra incelenebilecek daha fazla hayvan ile sonuçlanacaktır.