Name: Zebra balığı Embriyonik Beyin Ventrikül Manuel Drenaj (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-12-16T12:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 17 s
Description: Öğrenin, Danio rerio embriyonik beyin ventriküllerinden manuel drenaj yöntemiyle beyin omurilik sıvısını çıkarma ve içeriğini analiz etme tekniğini. Bu yöntem nörogenez ve hücre bölünmesi üzerindeki etkileri incelemeyi sağlar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Bu çalışma, Ulusal Ruh Sağlığı Enstitüsü ve Ulusal Bilim Vakfı tarafından desteklenmiştir. Dr Jen Gutzman, Dr Amanda Dickinson ve birçok faydalı tartışmalar ve yapıcı eleştirileri için diğer Sive laboratuvar üyeleri ve uzman balık yetiştiriciliği için Olivier Paugois özel teşekkürler.

1. Mikroenjeksiyon İğneleri ve Hücre Tramvay hazırlanması <ol><li> Üreticinin talimatlarına göre mineral yağ ile Eppendorf CellTram petrol mikroenjektör aparatı doldurun. </li><li> Sutter araçlar iğne çektirmenin kullanarak kılcal tüpler çekerek mikroenjeksiyon iğneler hazırlayın. </li><li> Eppendorf CellTram bağlı mikromanipülatör üzerine iğne takın. </li><li> Dikkatlice iğne ucu bölünürler. Üniform uç boyutu için, bir mikrometre ile ölçümü veya referans iğne karşılaştırın. </li><li> Kabarcıkları önlemek için dikkatli olmak, uzunluğu aşağı petrol itmek CellTram kullanarak, yağ ile iğnenin uzunluğu doldurun. </li></ol> 2. Embriyolar hazırlanması <ol><li> Bir 1-200 ul pipet ile% 1 agaroz kaplı çanak delikleri Poke ve agaroz tıpaları çıkarın. Embriyo medya (Westerfield 25&#39;e göre yapılan) ile çanak doldurun. </li><li> Stereomikroskop altında forseps, dechorionate embriyolar kullanma. </li><li> Dechorionated embriyolar transferAgaroz kaplı çanak içine. </li><li> Embriyolar (Westerfield 25&#39;e göre yapılan) hareket durdurana kadar embriyo uyutmak için, agaroz çanak Tricaine (0.1 mg / ml) ekleyin. </li></ol> 3. ECSF boşaltılması <ol><li> Agaroz ve mikromanipülatör yakın kendi arka tarafın delikleri kendi kuyrukları ile Orient embriyolar, beynin dorsal yüzü görselleştirme için izin. </li><li> Rhombomere 0/1 menteşe noktası veya arka beyin ventrikülü (Şekil 1A) en geniş noktada iğne yerleştirin. </li><li> Sarısı içine beynin derinliği boyunca gitmek emin olmak arka beyin ventrikül dikkatlice pierce tavan plakası. </li><li> CellTram kullanarak eCSF boşaltın ve mikroenjeksiyon iğne sıvı toplamak. Herhangi bir hücre önlemek için dikkatli olun. </li></ol> 4. Kompozisyon Analiz eCSF Toplama <ol><li> ECSF iğne içinde toplandıktan sonra, CellTram emme dikkatli bir şekilde durmaktadır. </li><li> Moiğnenin altından çanak ettik ve dikkatlice istenilen tampon içeren bir tüp içine iğne yerleştirin. </li><li> CellTram kullanarak, yağ ile çözüm kontamine olmasını önlemek için çalışıyoruz tampon içine iğne eCSF boşaltın. </li><li> 10,000 x g&#39;de eCSF, spin eCSF birlikte aspire olduğunu hücreleri çıkarmak için. Toplamak daha fazla analiz için -80 eCSF (süpernatant) ve mağaza ° C kadar hazır kirlenmemiş. </li></ol> 5. Seçilen Faktörler reintroduction <ol><li> Sıvı o süre içinde doldurulan olduğundan, istenen zaman aralığı boyunca eCSF her 2 saat boşaltın. Sıcaklık drenaj zaman noktalarında Arasında, iğne kaldırmak ve 28.5 ° C&#39;de embriyolar saklamak veya arzu. </li><li> Test faktörü ikinci mikropipet iğne yerleştirin. </li><li> Mikromanipülatör içine yerleştirin iğne mikroenjektör bağlı. </li><li> Petrol ve ayarlama enjeksiyon zamanı ve p damla boyutu ölçerek 1 nl enjeksiyon seviyesini ayarlamaressure. </li><li> Daha önce 26 açıklandığı beyin ventriküller içine 1-2 nl enjekte. </li></ol>

<ol><li>Chodobski, A., Szmydynger-Chodobska, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Choroid+plexus%3A+target+for+polypeptides+and+site+of+their+synthesis%5BTitle%5D)+AND+%22Microsc.+Res.+Tech%22%5BJournal%5D)">Choroid plexus: target for polypeptides and site of their synthesis.</a> Microsc. Res. Tech. 52, 65-82 (2001).</li>
<li>Redzic, Z. B., Preston, J. E., Duncan, J. A., Chodobski, A., Szmydynger-Chodobska, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+choroid+plexus-cerebrospinal+fluid+system%3A+from+development+to+aging%5BTitle%5D)+AND+%22Curr.+Top.+Dev.+Biol%22%5BJournal%5D)">The choroid plexus-cerebrospinal fluid system: from development to aging.</a> Curr. Top. Dev. Biol. 71, 1-52 (2005).</li>
<li>Brown, P. D., Davies, S. L., Speake, T., Millar, I. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+mechanisms+of+cerebrospinal+fluid+production%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Molecular mechanisms of cerebrospinal fluid production.</a> Neuroscience. 129, 957-970 (2004).</li>
<li>Praetorius, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Water+and+solute+secretion+by+the+choroid+plexus%5BTitle%5D)+AND+%22Pflugers+Arch%22%5BJournal%5D)">Water and solute secretion by the choroid plexus.</a> Pflugers Arch. 454, 1-18 (2007).</li>
<li>Speake, T., Whitwell, C., Kajita, H., Majid, A., Brown, P. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanisms+of+CSF+secretion+by+the+choroid+plexus%5BTitle%5D)+AND+%22Microsc.+Res.+Tech%22%5BJournal%5D)">Mechanisms of CSF secretion by the choroid plexus.</a> Microsc. Res. Tech. 52, 49-59 (2001).</li>
<li>Garcia-Lecea, M., Kondrychyn, I., Fong, S. H., Ye, Z. R., Korzh, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+analysis+of+choroid+plexus+morphogenesis+in+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">In vivo analysis of choroid plexus morphogenesis in zebrafish.</a> PLoS One. 3, e3090(2008).</li>
<li>Welss, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Secretory+activity+of+the+inner+layer+of+the+embryonic+mid-brain+of+the+chick%2C+as+revealed+by+tissue+culture%5BTitle%5D)+AND+%22The+Anatomical+Record%22%5BJournal%5D)">Secretory activity of the inner layer of the embryonic mid-brain of the chick, as revealed by tissue culture.</a> The Anatomical Record. 58, 299-302 (1934).</li>
<li>Saunders, N. R., Habgood, M. D., Dziegielewska, K. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Barrier+mechanisms+in+the+brain%2C+II.+Immature+brain%5BTitle%5D)+AND+%22Clin.+Exp.+Pharmacol.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Barrier mechanisms in the brain, II. Immature brain.</a> Clin. Exp. Pharmacol. Physiol. 26, 85-91 (1999).</li>
<li>Zheng, W., Chodobski, A. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aZheng%2C+W+%22The+blood-cerebrospinal+fluid+barrier%22">The blood-cerebrospinal fluid barrier</a>. , Taylor and Francis. Boca Raton, Fl. (2005).</li>
<li>Salehi, Z., Mashayekhi, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+of+cerebrospinal+fluid+on+neural+cell+survival+in+the+developing+chick+cerebral+cortex%3A+an+in+vivo+study%5BTitle%5D)+AND+%22Eur.+J.+Neurol%22%5BJournal%5D)">The role of cerebrospinal fluid on neural cell survival in the developing chick cerebral cortex: an in vivo study.</a> Eur. J. Neurol. 13, 760-764 (2006).</li>
<li>Parada, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Embryonic+cerebrospinal+fluid+collaborates+with+the+isthmic+organizer+to+regulate+mesencephalic+gene+expression%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci.+Res%22%5BJournal%5D)">Embryonic cerebrospinal fluid collaborates with the isthmic organizer to regulate mesencephalic gene expression.</a> J. Neurosci. Res. 82, 333-345 (2005).</li>
<li>Mashayekhi, F., Salehi, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+importance+of+cerebrospinal+fluid+on+neural+cell+proliferation+in+developing+chick+cerebral+cortex%5BTitle%5D)+AND+%22Eur.+J.+Neurol%22%5BJournal%5D)">The importance of cerebrospinal fluid on neural cell proliferation in developing chick cerebral cortex.</a> Eur. J. Neurol. 13, 266-272 (2006).</li>
<li>Martin, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((FGF2+plays+a+key+role+in+embryonic+cerebrospinal+fluid+trophic+properties+over+chick+embryo+neuroepithelial+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Dev.+Biol%22%5BJournal%5D)">FGF2 plays a key role in embryonic cerebrospinal fluid trophic properties over chick embryo neuroepithelial stem cells.</a> Dev. Biol. 297, 402-416 (2006).</li>
<li>Martin, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Early+embryonic+brain+development+in+rats+requires+the+trophic+influence+of+cerebrospinal+fluid%5BTitle%5D)+AND+%22Int.+J.+Dev.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Early embryonic brain development in rats requires the trophic influence of cerebrospinal fluid.</a> Int. J. Dev. Neurosci. 27, 733-740 (2009).</li>
<li>Gato, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Embryonic+cerebrospinal+fluid+regulates+neuroepithelial+survival%2C+proliferation%2C+and+neurogenesis+in+chick+embryos%5BTitle%5D)+AND+%22Anat.+Rec.+A+Discov.+Mol.+Cell+Evol.+Biol%22%5BJournal%5D)">Embryonic cerebrospinal fluid regulates neuroepithelial survival, proliferation, and neurogenesis in chick embryos.</a> Anat. Rec. A Discov. Mol. Cell Evol. Biol. 284, 475-484 (2005).</li>
<li>Desmond, M. E., Levitan, M. L., Haas, A. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Internal+luminal+pressure+during+early+chick+embryonic+brain+growth%3A+descriptive+and+empirical+observations%5BTitle%5D)+AND+%22Anat.+Rec.+A+Discov.+Mol.+Cell+Evol.+Biol%22%5BJournal%5D)">Internal luminal pressure during early chick embryonic brain growth: descriptive and empirical observations.</a> Anat. Rec. A Discov. Mol. Cell Evol. Biol. 285, 737-747 (2005).</li>
<li>Alonso, M. I., Martin, C., Carnicero, E., Bueno, D., Gato, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cerebrospinal+fluid+control+of+neurogenesis+induced+by+retinoic+acid+during+early+brain+development%5BTitle%5D)+AND+%22Dev.+Dyn%22%5BJournal%5D)">Cerebrospinal fluid control of neurogenesis induced by retinoic acid during early brain development.</a> Dev. Dyn. 240, 1650-1659 (2011).</li>
<li>Miyan, J. A., Zendah, M., Mashayekhi, F., Owen-Lynch, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cerebrospinal+fluid+supports+viability+and+proliferation+of+cortical+cells+in+vitro%2C+mirroring+in+vivo+development%5BTitle%5D)+AND+%22Cerebrospinal+Fluid+Res%22%5BJournal%5D)">Cerebrospinal fluid supports viability and proliferation of cortical cells in vitro, mirroring in vivo development.</a> Cerebrospinal Fluid Res. 3, 2(2006).</li>
<li>Mashayekhi, F., Bannister, C. M., Miyan, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Failure+in+cell+proliferation+in+the+germinal+epithelium+of+the+HTx+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Eur.+J.+Pediatr.+Surg%22%5BJournal%5D)">Failure in cell proliferation in the germinal epithelium of the HTx rats.</a> Eur. J. Pediatr. Surg. 11, Suppl 1. S57-S59 (2001).</li>
<li>Lehtinen, M. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+cerebrospinal+fluid+provides+a+proliferative+niche+for+neural+progenitor+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">The cerebrospinal fluid provides a proliferative niche for neural progenitor cells.</a> Neuron. 69, 893-905 (2011).</li>
<li>Zappaterra, M. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+comparative+proteomic+analysis+of+human+and+rat+embryonic+cerebrospinal+fluid%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Proteome.+Res%22%5BJournal%5D)">A comparative proteomic analysis of human and rat embryonic cerebrospinal fluid.</a> J. Proteome. Res. 6, 3537-3548 (2007).</li>
<li>Parvas, M., Parada, C., Bueno, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+blood-CSF+barrier+function+controls+embryonic+CSF+protein+composition+and+homeostasis+during+early+CNS+development%5BTitle%5D)+AND+%22Dev.+Biol%22%5BJournal%5D)">A blood-CSF barrier function controls embryonic CSF protein composition and homeostasis during early CNS development.</a> Dev. Biol. 321, 51-63 (2008).</li>
<li>Parada, C., Gato, A., Bueno, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mammalian+embryonic+cerebrospinal+fluid+proteome+has+greater+apolipoprotein+and+enzyme+pattern+complexity+than+the+avian+proteome%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Proteome+Res%22%5BJournal%5D)">Mammalian embryonic cerebrospinal fluid proteome has greater apolipoprotein and enzyme pattern complexity than the avian proteome.</a> J. Proteome Res. 4, 2420-2428 (2005).</li>
<li>Gato, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Analysis+of+cerebro-spinal+fluid+protein+composition+in+early+developmental+stages+in+chick+embryos%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Exp.+Zool.+A+Comp.+Exp.+Biol%22%5BJournal%5D)">Analysis of cerebro-spinal fluid protein composition in early developmental stages in chick embryos.</a> J. Exp. Zool. A Comp. Exp. Biol. 301, 280-289 (2004).</li>
<li>Westerfield, M., Sprague, J., Doerry, E., Douglas, S., Grp, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Zebrafish+Information+Network+%28ZFIN%29%3A+a+resource+for+genetic%2C+genomic+and+developmental+research%5BTitle%5D)+AND+%22Nucleic+Acids+Res%22%5BJournal%5D)">The Zebrafish Information Network (ZFIN): a resource for genetic, genomic and developmental research.</a> Nucleic Acids Res. 29, 87-90 (2001).</li>
<li>Gutzman, J. H., Sive, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Zebrafish+Brain+Ventricle+Injection%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Vis.+Exp%22%5BJournal%5D)">Zebrafish Brain Ventricle Injection.</a> J. Vis. Exp. (26), e1218(2009).</li>
<li>Parada, C., Gato, A., Bueno, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((All-trans+retinol+and+retinol-binding+protein+from+embryonic+cerebrospinal+fluid+exhibit+dynamic+behaviour+during+early+central+nervous+system+development%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroreport%22%5BJournal%5D)">All-trans retinol and retinol-binding protein from embryonic cerebrospinal fluid exhibit dynamic behaviour during early central nervous system development.</a> Neuroreport. 19, 945-950 (2008).</li>
<li>Parada, C., Escola-Gil, J. C., Bueno, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Low-density+lipoproteins+from+embryonic+cerebrospinal+fluid+are+required+for+neural+differentiation%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci.+Res%22%5BJournal%5D)">Low-density lipoproteins from embryonic cerebrospinal fluid are required for neural differentiation.</a> J. Neurosci. Res. 86, 2674-2684 (2008).</li>
<li>Kramer-Zucker, A. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cilia-driven+fluid+flow+in+the+zebrafish+pronephros%2C+brain+and+Kupffer%27s+vesicle+is+required+for+normal+organogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Cilia-driven fluid flow in the zebrafish pronephros, brain and Kupffer's vesicle is required for normal organogenesis.</a> Development. 132, 1907-1921 (2005).</li>
<li>Lowery, L. A., Sive, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Initial+formation+of+zebrafish+brain+ventricles+occurs+independently+of+circulation+and+requires+the+nagie+oko+and+snakehead%2Fatp1a1a.1+gene+products%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Initial formation of zebrafish brain ventricles occurs independently of circulation and requires the nagie oko and snakehead/atp1a1a.1 gene products.</a> Development. 132, 2057-2067 (2005).</li>
<li>Lowery, L. A., De Rienzo, G., Gutzman, J. H., Sive, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+and+classification+of+zebrafish+brain+morphology+mutants%5BTitle%5D)+AND+%22Anat.+Rec.+%28Hoboken%29%22%5BJournal%5D)">Characterization and classification of zebrafish brain morphology mutants.</a> Anat. Rec. (Hoboken). 292, 94-106 (2009).</li>
</ol>

Çıkar çatışması ilan etti.

El ile zebrafish beyin ventriküllerden eCSF boşaltmak için bu tekniğin kullanılması, gelişme sırasında eCSF için ihtiyaç belirlenmesi için yararlı olacaktır. Buna ek olarak, bu teknik embriyonik gelişme boyunca eCSF protein profili açıklamasına izin verir. Bu süre boyunca farklı proteinin tanımlanması BOS ve beyin gelişimi sırasında potansiyel rolünün işlevinin içine daha fazla araştırma sağlayacaktır. Amniotları yılında eCSF (IGF2 FGF2, retinoik asit ve apolipoproteinler) belirlenen bazı faktörler nöroepitelyal hücre c...

<table border="1"><tbody><tr><td> Reaktif Adı </td><td> Şirket </td><td> Katalog numarası </td></tr><tr><td> Eppendorf CellTram Oil </td><td> Eppendorf </td><td> 516 000.025 </td></tr><tr><td> Madeni Yağ </td><td> Sigma </td><td> M8410 </td></tr><tr><td> Tricaine tozu </td><td> Sigma </td><td> A5040 </td></tr><tr><td> Kapiler Tüpler </td><td> FHC A.Ş. </td><td> 30-30-1 </td></tr></tbody></table>

zebra balığı embriyonik beyin ventrikül manuel drenaj

Manual Drainage of the Zebrafish Embryonic Brain Ventricles

Beyin omurilik sıvısı (BOS) beyin ventriküller içinde bulunan bir protein açısından zengin bir sıvıdır. Erken omurgalı embriyonik gelişim sırasında mevcuttur ve yaşam boyu devam eder. Yetişkin BOS, beyin yastık atık kaldırmak ve salgılanan moleküller 1,2 taşımak için düşünülmektedir. Yetişkin ve yaşlı embriyoda BOS çoğunluğu koroid pleksus, beyin ventriküller 3-5 bitişiğindedir çok kanlanan sekretuar bölgelerinde bir dizi yapılır. Zebra balığı olarak, koroid pleksus tam 144 saat sonrası fertilizasyon (HPF) 6 oluşur. Bundan önce, fare embriyonik BOS (eCSF) önemli bir kısmını içeren zebrafish ve diğer ikisi de omurgalı embriyolarının mevcuttur. Piliç Bu veriler ve çalışmalar nöroepitelyumda gelişiminde erken sekretuar ve öncesi koroid pleksus gelişimi 7 eCSF en önemli kaynağı olabileceğini düşündürmektedir. eCSF yaklaşık üç kat daha fazla protein içerir tkalkınma 8,9 sırasında önemli bir rol oynayabileceğini han yetişkin BOS, düşündüren. Civciv ve fare yapılan çalışmalar eCSF, sıvı basınç, ya da bunların bir kombinasyonu olarak salgılanan faktörler epitele 10-20 nöron, gen ekspresyonu, hücre çoğalması ve hücre hayatta kalma için önemli olduğunu ortaya koymaktadır. Insan, sıçan, fare ve civciv eCSF proteinle ilgili analizler BOS fonksiyonu için gerekli olabilecek birçok protein belirledik. Bu hücre ölümü ve çoğalma 21-24 dahil hücre dışı matris bileşenleri, apolipoproteinler, ozmotik basıncı düzenleyen proteinleri, ve proteinleri içerir. Ancak, eCSF karmaşık işlevleri büyük ölçüde bilinmemektedir. Dolayısıyla eCSF bileşenlerin tanımlanması ve geliştirilmesi sırasında eCSF ihtiyaç analizi için izin zebrafish beyin ventriküllerden eCSF uzaklaştırılması için bir yöntem geliştirmiştir. Daha eCSF diğer omurgalı sistemleri w tahsil edilebilmesine rağmenITH büyük embriyolar, eCSF zebrafish gelişiminin erken aşamalarında toplanan ve anormal beyin ventrikül hacim veya morfolojisi neden genetik veya çevresel koşullar altında yapılabilir. ECSF çıkarılması ve toplama tahlil etmek ventriküllerin içine belirli faktörler kütle spektrometrik analizi, eCSF fonksiyonu araştırmalar, yeniden yerleştirilmesi ve bunların fonksiyonları için olanak sağlar. Böylece erken zebrafish embriyo erişilebilirlik gelişimi sırasında eCSF fonksiyonunun ayrıntılı analizi için izin verir.

Bir süzülmüş beyin ventrikül bir örneği Şekil 1B-C &#39;de gösterilmiştir. Onlar eCSF (Şekil 1B vs C) yoksun olarak beyin ventriküller yıkılmıştır. Olarak dorsal görüntüleri (Şekil 1B-C ve Şekil 2A-B) arka beyin nöroepitelyumda karakteristik morfolojisi korumak yapar ve sağlam menteşe noktaları olasılığı nedeniyle eCSF olmamasına rağmen açık görünüyor. Görülen Ancak, yan görünümleri (Şekil 2A&#39;-D &#39;) ventral daraltır ince esnek bi...

Biz beyin omurilik sıvısı (BOS) toplamak ve embriyonik zebrafish beynin ventriküler sistemde BOS yoksun bir sistem oluşturmak için bir yöntem mevcut. Bu embriyonik beyin gelişimi sırasında BOS kompozisyonu ve onun ihtiyacının daha fazla inceleme için izin verir.

Zebra balığı Embriyonik Beyin Ventrikül Manuel Drenaj

Serebrospinal sıvı (SSS), beyin ventrikülleri içinde bulunan protein açısından zengin bir sıvıdır. Erken omurgalı embriyonik gelişimi sırasında mevcuttur ve ...

Bu prosedürün genel amacı, embriyonik beyin ventriküler sisteminde serebrospinal sıvı veya CSF bulunmayan bir sistem oluşturmaktır. Bu işlem, öncelikle zebrafish beyin ventriküllerindeki embriyonik CSF veya ECSF'nin manuel olarak drene edilmesiyle gerçekleştirilir. Ardından, içeriğin daha detaylı analizi için ECSF toplanır.Ardından, potansiyel faktörler boşaltılmış beyin ventriküllerine yenidenlendirilir. Son olarak, ECSF'nin etkili bir şekilde uzaklaştırılması ve faktörlerin beyin gelişimine yenidenlendirilmesi analiz edilir. Nihayetinde, hücre bölünmesi, ölümü ve nörogenez gibi beyin gelişim yönleri izlenerek zebrafish ECSF'sinin işlevi gösterilebilir.Ayrıca, ECSF içeriği kütle spektrometrisi ile belirlenebilir. Bu teknik sayesinde, gelişme sürecinde embriyonik beyin omurilik sıvısının işlevini incelemeye başlayabiliriz. Bu yöntem, hidrosefali gibi BOS bileşimini ve hacmini değiştiren hastalıkların daha iyi anlaşılması için diğer sistemlere de uygulanabilir.Başlamak için, bir yağ enjektör aparatını üretici talimatlarına uygun olarak mineral yağ ile doldurun. Mikroenjeksiyon iğnelerini çektikten sonra, yağ enjektörüne bağlı olan mikro manipülatöre bir iğne monte edin. Tekdüze bir

manual-drainage-of-the-zebrafish-embryonic-brain-ventricles

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Sinirbilim

Bu videoda, biz gelişmekte olan omurgalı beyin konfokal mikroskobu ile tek bir hücre çözünürlükte canlı zebrafish embriyolar analiz edildiği bir yöntem gösteriyor. Bu, tek hücreli zebrafish embriyo enjekte ve daha sonra gelişmekte olan beyin montaj ve görüntü hangi yöntemi içerir.

Konfokal Mikroskop Zebra balığı Embriyonik Beyin Görüntüleme Canlı

Nöral tüp oluşumu sonra neuroepithelium daraltır ve tüp embriyonik beyin ventriküller oluşturmak için embriyonik beyin omurilik sıvısı (eCSF) ile doldurur katlanabilir. Biz daha iyi, canlı embriyo nöroepitelyal şekli aksine sıvı dolu boşluk görselleştirmek için bu ventrikül enjeksiyon tekniği geliştirdi.

Zebra balığı Beyin Ventrikül Enjeksiyon

Biz embriyonik zebrafish beyin geçirgenliği için canlı bir bütün hayvan kantitatif ölçümü tarif. Tekniği nöral tüp lümeninde farklı molekül ağırlıklarında beyin omurilik sıvısı ve molekülleri korumak için yeteneği analiz ve ventriküllerin kendi hareketini rakamlarla. Bu yöntem, gelişme esnasında ve hastalık epitel geçirgenlik ve olgunlaşma farklılıkları belirlemek için yararlıdır.

Zebra balığı Embriyonik nöroepitelyumda geçirgenliği için bir Assay

Bu video, yetişkin bir zebra balığından beynin mikrodiseksiyon tekniğini anlatıyor. Bu yöntem, daha fazla çalışılabilecek tüm beyin kaynaklı nötrosferlerin elde edilmesine yardımcı olur.

Zebra Balığı Beyin Diseksiyonu: Balık Nörobiyolojisi Tekniği

Bu video, birincil nörosferlerin oluşumunu ve farklılaşmasını göstermektedir. Zebra balıklarından elde edilen nöral kök hücreler, büyüme faktörlerinin varlığında, kendi kendini yenileme kapasitesine sahip serbest yüzen nörosferlere çoğalır ve bu daha sonra glial hücrelere ve nöronlara farklılaşır.

Zebra Balığı Nöral Kök Hücrelerinden Primer Nörosferlerin Üretilmesi ve Farklılaşması

Kaynak: Schramm, P.  et al. Uyanık Zebra Balığı Larvalarında ve Yavrularında Tam Aktif Beyin Dokusunun Kafatası ve Deri Çıkarma ile İn vivo Görüntülenmesi. J. Vis. Uzm. (2021)Bu video, Purkinje nöronlarında floresan proteinleri eksprese eden transgenik zebra balığı larvalarındaki serebellar nöronların in vivo görüntülemesini göstermektedir. İşlem, larvaların uyuşturulmasını, agarozda hareketsiz hale getirilmesini ve ışık penetrasyonunu ve floresan yoğunluğunu artırmak için pigmentli cildin...

Serebellar Nöronları Görselleştirmek için Zebra Balığı Larva Beyninin İn Vivo Görüntülenmesi

Larva Zebrafish serebrovasküler gelişme görüntüleme açıklanmıştır. 3D görüntüleme kolaylaştırmak ve kimyasal tedaviler kullanarak serebrovasküler gelişimini değiştirme teknikleri de verilmektedir.

Görüntüleme ve Embriyonik Zebra balığı Serebrovasküler Yapıların 3D İmar

Çoğalma, desenleme, farklılaşma ve akson rehberlik gibi gelişimsel süreçleri kolaylıkla Zebrafish omurilikte örnek alınabilir. Bu yazıda, bu olayların görselleştirme optimize eden, zebra balığı embriyolarının için bir montaj prosedürü açıklar.

Diseksiyon ve Zebra balığı Embriyolar Yanal Montaj: Omurilik Kalkınma Analizi

Burada tüm beyin veya telencephalic, tectal veya yetişkin zebrabalıkları beyin beyincik bölgelerinin türetilen bir neurosphere tahlili kullanılarak yetişkin nöron incelemek için tekrarlanabilir bir yöntem sağlar. Ayrıca, zebrabalıkları neurospheres gen ifadesini işlemek için prosedürü açıklar.

Yetişkin balığı beyin türevli Neurospheres İzolasyon ve Kültürü

Bu yazıda zebra balığı embriyolarının ve larva spinal nöronların elektrofizyolojik kayıtları için yöntemleri tarif eder. Hazırlık yerinde nöronları korur ve genellikle asgari diseksiyonu kapsar. Bu yöntemler, erken larva aşamalarında ilk elektrik uyarılma alımından spinal nöronların çeşitli elektrofizyolojik çalışmaları için izin verir.

Zebra balığı<em&gt; Situ</em&gt; Omurilik Omurilik duyusal ve motor nöronlar gelen Elektrofizyolojik Recordings Hazırlık

In vivo görüntüleme sinir sistemi gelişiminin altında yatan hücresel mekanizmaları araştırmak için kullanılabilecek güçlü bir araçtır. Burada, gelişmekte olan zebra balığı sinir sistemi içinde çok renkli Brainbow etiketli çok sayıda hücreyi gerçek zamanlı olarak görselleştirmek için zaman atlamalı konfokal mikroskopiyi kullanma tekniğini açıklıyoruz.

Brainbow ve Time-lapse Konfokal Görüntüleme kullanarak Yaşayan Zebrabalıklarında Gelişen Beyni Görselleştirme

Öğrenin, Danio rerio embriyonik beyin ventriküllerinden manuel drenaj yöntemiyle beyin omurilik sıvısını çıkarma ve içeriğini analiz etme tekniğini. Bu yöntem nörogenez ve hücre bölünmesi üzerindeki etkileri incelemeyi sağlar.

Zebra balığı Embriyonik Beyin Ventrikül Manuel Drenaj

Daha fazla video keşfet