Name: Akut Graft-Versus-Host Hastalığı Biyomarkörler onaylanması için Yüksek Verimli Sıralı ELISA (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-10-31T11:45:00.000+00:00
Duration: 9 min
Description: Öğrenin, akut graft-versus-host hastalığı için yüksek verimli ardışık ELISA yöntemiyle plazma biyomarkörlerini doğrulamayı. Bu teknik, değerli örnekleri koruyarak erken tanıya olanak tanır.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

NIH hibe RC1-HL-101102, P01-CA039542, T32-HL007622, ​​Hartwell Vakfı ve Doris Duke Vakfı tarafından desteklenir. Dr Paczesny Eric Hartwell fonu ve Amy Strelzer Manasevit Araştırma Programı bir dedektiftir.

1. Deney Gün 0: IL-2Rα, REG3α ve HGF için Yakalama Antikor ile Numune Hazırlama ve ELISA Testi Levha Kaplama <ol><li> Analiz edilecek Plazma kısım örnekler çözülmüş ve plazma üst alt ve lipidler de pıhtıları ayırmak için 10 dakika 12.000 rpm&#39;de bükülmüş, çekilecektir. Seyreltilmemiş plazma 150 ul önceden haritalarına göre manuel pipetleme ile (kaynak plaka) bir 96-gözlü V-alt plaka üzerine her bir numuneden kaplanmış olacaktır. Alikotları parafilm sarılmış ve tüm süreç boyunca 4 ° C&#39;de nemli odasında muhafaza edilecektir; artık daha 72 saat. </li><li> IL-2Rα ve HGF yakalama antikorlar sulandırılır ve üretici teknik özellikleri ve 50 ul başına seyreltilmiş sonra sızdırmaz ve 4 gecede inkübe edilir ilgili 96-de yüksek bağlayıcı yarım kuyucuğu her iyi ° C içine kaplama olacak olacak Alternatif olarak, çok sayıda plaka 37 ° C sıcaklıkta kurutuldu ve ° C daha sonra kullanılmak üzere, bağlı 4 saklanabilirprotein istikrarı ing. </li><li> REG3α yakalama antikor sonra mühürlenir ve 4 de bir gece inkübe edilir bir 384-kuyucuklu Nunc Maxi Sorp-plakanın her ° C &#39;de kaplanmış olacaktır üretici kaplama tamponu ve 25 ul kullanılarak üreticinin protokolüne uygun olarak seyreltilebilir olacaktır </li></ol> 2. Deney 1. Gün: IL-2Rα ELISA (Şekil 1) <ol><li> IL-2Rα test plakasına, yıkanmış TBS içinde Blotto ile bloke ve standart kurulur ve 8 noktalı bir standart eğri üretici protokolüne göre hazırlanır. </li><li> Bloke etme adımı aşağıdaki plaka yıkandıktan sonra, plazma sulandırılmamış 50 ul kaynak plaka plaka ELISA testi için suret halinde kaplama olup, her bir standart 50 ul kopya halinde kaplıdır. Plaka 300 rpm&#39;de ayarlanmış bir plaka döndürücü üzerine kapatılmış ve oda sıcaklığında 2 saat süreyle inkübe edilmektedir. </li><li> Plazma IL-2Rα ELISA testi plaka geri istenmeye ve un geri yerleştirilirplazma kaynağı plakası seyreltilir. ELISA imalatçı protokolü (yarı oyuklu plakalar için düzeltilmiş hacim ile) ve 450-570 nm dalga boyuna sahip bir plaka okuyucu kümesi kullanılarak okunacak her çukurun optik yoğunluk göre tamamlandı ve veriler kaydedilir ve analiz edilir. </li></ol> 3. Deney 1. Gün: REG3α ELISA (Şekil 1) <ol><li> Seyreltilmemiş 10 ul plazma bir ayrı v-alt kaynak plakasına transfer edilir. Imalatçı tarafından sağlanan seyreltme tamponu 90 ul bir 1:10 seyreltme kaynak plaka oluşturmak için her bir oyuğa ilave edilir. </li><li> REG3α ELISA üretici protokolüne göre yapılır (hacimli 384-kuyucuğu için düzeltilmiş) ve her kuyu optik yoğunluğu 450-620 nm ayarlanmış bir plaka okuyucu kullanarak okunacak ve veriler kaydedilir ve analiz edilecektir. </li></ol> 4. Deney 1. Gün: Elafin ve Capture Antikor ile TNFR1 Testi Levha Kaplama <ol><li> Elafin ve TNFR1 yakalama antikorlar sulandırılmış ve dil olacaküretici şartname ve 50 ul başına uted sonra mühürlenir ve Elafin için oda sıcaklığında bir gece inkübe edilir sırasıyla 96-de yüksek bağlayıcı yarı oyuklu plakalar her oyuğuna kaplama, ve 4 ° C sıcaklıkta TNFR1 için olacaktır. </li></ol> 5. Deney Gün 1-2: HGF ELISA (Şekil 1) <ol><li> IL-2Rα ELISA tamamlanması ve deney temin sonra tekrar edilmesi gerekmez, seyreltilmemiş ve 60 ul plazma yeni bir kaynak plaka aktarılır ve daha sonra 1 x PBS içinde% 1 BSA ve 60 ul bir hale getirmek için her bir oyuğa ilave edilir 01:02 seyreltilmiş plazma kaynağı plakası. </li><li> HGF test plakasına, yıkanmış TBS içinde Blotto ile bloke ve standart kurulur ve 8 noktalı bir standart eğri üretici protokolüne göre hazırlanır. </li><li> Bloke etme adımı aşağıdaki plaka yıkandıktan sonra, 1:2 seyreltilmiş plazma 50 ul ELISA testi plaka üzerinde kopya halinde kaplama olup, her bir standart 50 ul kopya halinde kaplıdır. Plakası kapatılmış ve300 rpm&#39;de ayarlanmış bir plaka Döndürücü üzerinde gece boyunca oda sıcaklığında inkübe edildi. </li><li> 1:2 seyreltilmiş plazma HGF ELISA testi plaka geri istenmeye ve 1:2 seyreltilmiş plazma kaynağı plaka geri yerleştirilir. ELISA imalatçı protokolü (yarı oyuklu plakalar için düzeltilmiş hacim ile) ve 450-570 nm dalga boyuna sahip bir plaka okuyucu kümesi kullanılarak okunacak her çukurun optik yoğunluk göre tamamlandı ve veriler kaydedilir ve analiz edilir. </li></ol> 6. Deney 2. Gün: Elafin ELISA <ol><li> Seyreltilmemiş 10 ul plazma yeni bir kaynak plaka transfer edilir ve daha sonra 1 x PBS içinde% 1 BSA, 190 ul plazma dluted 1:20 200 ul olmak için her bir oyuğa ilave edilir. </li><li> Elafin ELISA olarak 450-570 nm ayarlanmış bir plaka okuyucu kullanarak okunacaktır üreticisi protokolü (hacimleri ile yarı-kuyucuğu için düzeltilmiş) ve her kuyu optik yoğunluğuna göre yapılır ve veriler kaydedilir ve analiz. </li></ol> 7. Deneme Day 2: ELISA TNFR1 <ol><li> PBS içinde% 1 BSA ve 25 ul 1:25 seyreltilmiş 125 ul plazma elde etmek için 1:20 kaynak plaka (şimdi 01:20 plazma ihtiva eden 100 ul) eklenir. </li><li> TNFR1 ELISA üretici protokole göre tamamlanmış (yarım-kuyucuğu için ayarlanabilir hacimli) ve her kuyu optik yoğunluğu 450-570 nm ayarlanmış bir plaka okuyucu kullanarak okunacak ve verilerin kaydedilmesini ve analiz. </li></ol> 8. Deney 2. Gün: IL-8 ELISA <ol><li> 1:02 seyreltilmiş ve 60 ul plazma yeni bir kaynak plaka aktarılır ve daha sonra IL-8 seyreltici, 180 ul plazma bir 1:06 seyreltilmiş kaynak plakası olmak için her bir oyuğa ilave edilir. </li><li> IL-8 ELISA üretici protokole göre tamamlanmış (yarım-kuyucuğu için ayarlanabilir hacimli) ve her kuyu optik yoğunluğu 450-570 nm ayarlanmış bir plaka okuyucu kullanarak okunacak ve verilerin kaydedilmesini ve analiz. </li></ol> Tüm ELISA&#39;lar, unuse tamamlandıktan sonrad stok plazma çözülmüş alikotları içine değiştirilir ve ileride kullanmak için dondurulmuş olacaktır.

<ol><li>Paczesny, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+biomarker+panel+for+acute+graft-versus-host+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">A biomarker panel for acute graft-versus-host disease.</a> Blood. 113, 273-278 (2009).</li>
<li>Paczesny, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Elafin+is+a+biomarker+of+graft-versus-host+disease+of+the+skin%5BTitle%5D)+AND+%22Science+Translational+Medicine%22%5BJournal%5D)">Elafin is a biomarker of graft-versus-host disease of the skin.</a> Science Translational Medicine. 2, 13ra12(2010).</li>
<li>Ferrara, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regenerating+islet-derived+3+alpha+is+a+biomarker+of+gastrointestinal+graft-versus-host+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">Regenerating islet-derived 3 alpha is a biomarker of gastrointestinal graft-versus-host disease.</a> Blood. , (2011).</li>
<li>Ferrara, J. L., Levine, J. E., Reddy, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Graft-versus-host+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet%22%5BJournal%5D)">Graft-versus-host disease.</a> Lancet. 373, 1550-1561 (2009).</li>
<li>Miyamoto, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Serum+concentration+of+the+soluble+interleukin-2+receptor+for+monitoring+acute+graft-versus-host+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Bone+Marrow+Transpl%22%5BJournal%5D)">Serum concentration of the soluble interleukin-2 receptor for monitoring acute graft-versus-host disease.</a> Bone Marrow Transpl. 17, 185-190 (1996).</li>
<li>Holler, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Role+of+tumor+necrosis+factor+alpha+in+acute+graft-versus-host+disease+and+complications+following+allogeneic+bone+marrow+transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22Transplant.+Proc%22%5BJournal%5D)">Role of tumor necrosis factor alpha in acute graft-versus-host disease and complications following allogeneic bone marrow transplantation.</a> Transplant. Proc. 25, 1234-1236 (1993).</li>
<li>Okamoto, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Increased+hepatocyte+growth+factor+in+serum+in+acute+graft-versus-host+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Bone+Marrow+Transpl%22%5BJournal%5D)">Increased hepatocyte growth factor in serum in acute graft-versus-host disease.</a> Bone Marrow Transpl. 28, 197-200 (2001).</li>
<li>Uguccioni, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Elevated+interleukin-8+serum+concentrations+in+beta-thalassemia+and+graft-versus-host+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">Elevated interleukin-8 serum concentrations in beta-thalassemia and graft-versus-host disease.</a> Blood. 81, 2252-2256 (1993).</li>
<li>Osuchowski, M. F., Siddiqui, J., Copeland, S., Remick, D. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sequential+ELISA+to+profile+multiple+cytokines+from+small+volumes%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Immunol.+Methods%22%5BJournal%5D)">Sequential ELISA to profile multiple cytokines from small volumes.</a> J. Immunol. Methods. 302, 172-181 (2005).</li>
<li>Osuchowski, M. F., Remick, D. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+repetitive+use+of+samples+to+measure+multiple+cytokines%3A+the+sequential+ELISA%5BTitle%5D)+AND+%22Methods%22%5BJournal%5D)">The repetitive use of samples to measure multiple cytokines: the sequential ELISA.</a> Methods. 38, 304-311 (2006).</li>
<li>Schweitzer, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multiplexed+protein+profiling+on+microarrays+by+rolling-circle+amplification%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">Multiplexed protein profiling on microarrays by rolling-circle amplification.</a> Nat. Biotechnol. 20, 359-365 (2002).</li>
</ol>

Çıkar çatışması ilan etti.

<html> Burada sunulan sıralı ELISA yöntemi örneğin fare 9,10 elde nadir hastalıklar veya plazma örnekleri ile insan denekler örnekleri de yeri doldurulamaz edinme ve / veya zor olabilir plazma küçük hacimlerde birden fazla plazma proteinlerinin ölçümü sağlar. Sıralı ELISA&#39;lar genellikle gerektiren ELISA&#39;lar ile artan plazma seyreltme faktörü amacıyla yapılan plazma seyreltilmiş ≥ genellikle istenirse bu yapılabilir, ancak iadesi olmaya gerek yok 01:10. Vardır Ardışık ELISA gerçekleştirmek için yetenek plazma diğer reaktifler ile karıştırıldığında ya da farklı olan seyreltme tampon plazma için gerekli olan ELISA kitleri / protokoller ile sınırlıdır, bu yeniden kullanımı bir örnek dolayı bir uyumsuz kaygılar ablility engellemektedir tampon / reaktif Belirli bir testin performansını etkileyecektir. Dikkatli planlama ile, 10 ya da daha fazla aynı ELISA&#39;lar plazma örneği üzerinde gerçekleştirilebilir. ent &quot;&gt; Bireysel laboratuarlarda denek gelen örneklerde ilgi protein beklenen plazma konsantrasyonlarına dayalı yorumlanabilir sonuçlar elde etmek için plazma dilüsyonları ayarlamanız gerekebilir. laboratuar ekipmanları farklılıklar inkübasyon ve kolorimetrik geliştirme optimize etmek için ihtiyaç neden olabilir kez, yıkar sayısı ve / veya yıkama herhangi bir ELISA optimize etmek amacıyla kez ıslatın. High-throughput kapasitesi ve doğruluğu artırmak için ve maliyet-etkin bir şekilde analizler yaparak, 384 iyi plakaları üzerinde analiz ve istifleme ünitesi ile otomatik plaka yıkayıcı yeteneğine sahip bir robot sıvı taşıma platform kullanımı tavsiye edilir. Bu cihaz birden fazla kullanıcı tarafından yapılan analizlerin doğruluğunu ve hassasiyetini artırmak, ve inter-ve intra-analiz varyasyonu azaltmak için analiz tutarlılığı sağlamaya yardımcı olabilir. ) 1 çoğu: Biz iki nedenden dolayı mevcut multipleks platformlar üzerinde sıralı ELISAroman proteinler için antikor çiftleri kolayca boncuk veya diğer malzemelerin üzerine konjuge yanı sıra, zaman alıcı ve pahalı olamaz; 2) Bireysel ELISA deneyleri çapraz reaktivite 11 yokluğu sekonder multipleks mikroarray veya boncuklar, daha kesindir. Güvenilir bir yöntem çoğaltılmış, boncuk esaslı mikrodizileri gerçekleştirmek için kurulmuştur, bu ardışık ELISA işlemi yerine mümkün olabilir, fakat boncuklar ve / eşlenik antikorların yeteneğini ya da olması istenen proteinlerin sayısı ile sınırlıdır edilebilir analiz.

Akut graft-versus-host hastalığı (GVHD), allojeneik hematopoietik kök hücre transplantasyonu (HKHT) sonrasında non-relaps mortalite (UYM) önde gelen nedeni, üç organ sistemi disfonksiyonu ile ölçülür: deri, karaciğer ve gastrointestinal (Gİ) yolu 4. Akut GVHH genellikle iki ila sekiz hafta nakli sonra oluşur ancak daha sonra ortaya çıkabilir ve genellikle rejimin toksisite, enfeksiyon veya ilaç yan etkileri gibi diğer post-HKHT komplikasyonlar klinik olarak ayirt olduğunu. Sıralı ELISA kullanılarak proteomik stratejileri ve high-throughput doğrulama kullanımı sayesinde, kimin konsantrasyonları GVHH klinik belirtilerin başlangıcında yükselir 6 proteinler belirledik. 4 biyomarker paneli birleştirilir IL-2Rα, TNFR1, HGF ve IL-8, klinik semptomların başlangıcında GVHD teşhis edebilir ve bağımsız GVHH şiddeti 1 post-HKHT sağkalım tahmin edebilirsiniz. Elafin, sk GVHH için bir biyomarker, bu tür ilaç döküntüleri gibi diğer nedenler GVHH döküntü ve döküntü ayırt edebilir ve nakli sağkalım 2. tahmin edebilirsiniz. Biz son zamanlarda alt gastrointestinal GVHH bir biyomarker olarak REG3α belirledik, hedef organ en UYM ile ilişkilidir. Plazma REG3α konsantrasyonu güvenilir post-HKHT ishal nedeni olarak GVHD tespit ve teşhis barsak biyopsilerde GVHH histolojik şiddeti ilişkili olabilir. GI GVHH başlangıcında REG3α konsantrasyonları da GVHH tedavisi ve UYM 3 yanıt tahmin edebilirsiniz. Klinik bakım içine bu valide GVHH biyobelirteçlerin birleşme anda klinik çalışmalarda araştırılmaktadır. Bu deneyler yeri doldurulamaz ve sınırlı büyüklüktedir GVHH başlama zamanında 2000 ve 2010 yılları arasında HKHT alan hastalardan toplanan küçük plazma alikotları yapıldı. Bu örneklerin değerli doğası gereği, biz bir araya geldi geliştirdikaşırı donma-çözülme döngüleri, çözünme zamanı ve plazma kullanımını ortadan kaldırmak için etkili, tekrarlanabilir bir şekilde birden fazla plazma protein konsantrasyonu ölçüm hod. Bu teknik (ler), diğer bir reaktif ile karıştırılmak üzere gerek yoktur örnekleri verilen aynı numune üzerinde birden fazla protein / ilgi sitokinler için ELISA&#39;da gerçekleştirmek için uygulanabilir. ELISA kitleri önceden kaplanmış plakalar, 96-iyi yarı oyuklu plakalar ya da 384-kuyucuklu levhalar ihtiva etmediği takdirde daha ileri örnekleri / reaktiflerin kullanımını en aza indirmek için kullanılabilir. Bu yazıda GVHH biyolojik ölçüm teknolojik yönleri üzerinde duruluyor.

<table border="1"><tbody><tr><td> Reaktif Adı </td><td> Şirket </td><td> Katalog numarası </td><td> Yorumlar </td></tr><tr><td> İnsan IL-2 Duoset R alfa </td><td> R &amp; D Systems </td><td> DY223 </td><td></td></tr><tr><td> İnsan HGF Duoset </td><td> R &amp; D Systems </td><td> DY294 </td><td></td></tr><tr><td> İnsan IL-8 OptEIA TAKIMI II </td><td> Becton Dickinson </td><td> 550999 </td><td></td></tr><tr><td> Ab-Match MONTAJ İnsan PAP1 (REG3α) Kit </td><td> MBL Uluslararası </td><td> 5323 </td><td></td></tr><tr><td> Ab-Match UNIVERSAL Takımı </td><td> MBL Uluslararası </td><td> 5310 </td><td></td></tr><tr><td> İnsan sTNFRI/TNFRSF1A Duoset </td><td> R &amp; D Systems </td><td> DY225 </td><td></td></tr><tr><td> İnsan Trappin-2/Elafin Duoset </td><td> Ar-Ge Sykaynaklanıyor </td><td> DY1747 </td><td></td></tr><tr><td> 96-polistiren konik alt plakalar </td><td> Thermo Scientific </td><td> 249570 </td><td> Plazma kaynağı plakaları için kullanılır </td></tr><tr><td> Costar yarım sıra yüksek bağlayıcı 96 oyuklu plakalar </td><td> Corning </td><td> 3690 </td><td> IL-2Rα, HGF, TNFR1 ve elafin ELISA&#39;lar için </td></tr><tr><td> Nunc 384-iyi MaxiSorp plakaları </td><td> Nunc </td><td> 464718 </td><td> REG3α Elisa için </td></tr><tr><td> HyClone Fosfat, 1x Tamponlu Salin </td><td> Thermo Scientific </td><td> SH30256.02 </td><td></td></tr><tr><td> Bovine Serum Albumin, Fraksiyon V, Tedavi Isı Şoku </td><td> Fisher Scientific </td><td> BP1600-100 </td><td></td></tr><tr><td> TBS içinde Engelleyicisi Blotto </td><td> Thermo Scientific </td><td> 37530 </td><td> IL-2Rα HGF ve TNFR1 ELISA&#39;lar için engelleme ajan </td></tr><tr><td> DulbeccoTuzlu Fosfat-Buffered </td><td> Gibco </td><td> 21600-069 </td><td> IL-2Rα, HGF, Elafin ve TNFR1 ELISA&#39;lar için tampon yıkayın </td></tr><tr><td> TMB Peroksit Susbtrate </td><td> Kirkegaard ve Perry Laboratuvarları </td><td> 50-76-00 </td><td></td></tr><tr><td> Tween 20 </td><td> Acros Organics </td><td> 233362500 </td><td> IL-2Rα, HGF, Elafin ve TNFR1 ELISA&#39;lar için tampon yıkayın </td></tr><tr><td> Sülfürik Asit </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> 84720 </td><td> (2N Seyreltilmiş) stop çözüm </td></tr></tbody></table>

akut graft-versus-host hastalığı biyomarkörler onaylanması için yüksek verimli sıralı elisa

High Throughput Sequential ELISA for Validation of Biomarkers of Acute Graft-Versus-Host Disease

Tarafsız keşif proteomik stratejiler klinik ortamda tanısal ve prognostik test artırabilir ve kılavuz terapötik girişimlere yardımcı olabilecek yeni biyomarkerler sayıda tanımlamak için bir potansiyele sahiptir. Aday proteinleri çok sayıda tespit edildiğinde, bu tür akut başlangıçlı itibariyle sonlu hacim, olay odaklı ve yeri doldurulamaz olan hasta plazma numuneleri, bir zamanında ve verimli bir şekilde aday biyobelirteçlerin doğrulamak zor olabilir graft-versus- host hastalığı (GVHH), allojeneik hematopoietik kök hücre transplantasyonu (HKHT) bir potansiyel olarak yaşamı tehdit eden bir komplikasyondur. En aza indirmek için ardışık bir şekilde IL-2Rα 5, 6 TNFR1, HGF 7, IL-8 8, elafin 2, 3 ve REG3α (aynı zamanda PAP1 olarak da bilinir): Burada altı doğrulanmış GVHD proteinler için ticari olarak mevcut ELISA&#39;lar gerçekleştirme işlemini tarif donma-çözülme döngüleri, Plazma zaman ve plazma kullanımı çözülmüş. Optimum sıralı ELISA performansı kolaylaştırmak için küçük ayarlamalar ile üretici ELISA kitleri ve protokollerini kullanarak Laboratuvarımızda kurulmuş olarak örnek seyreltme faktörü ile belirlenir, bu işlem için biz sırayla ELISA&#39;lar gerçekleştirin. Çıkan plazma biyolojik konsantrasyonları sonra derlenen ve bir hasta kohort içinde önemli bulgular için analiz edilebilir. Bu biyobelirteçlerin sadece araştırma amaçlı anda olsa da, klinik bakım onların içine eklenmesi halen klinik çalışmalarda araştırılmaktadır. Bu teknik (ler), diğer bir reaktif ile karıştırılmak üzere gerek yoktur örnekleri verilen aynı numune üzerinde birden fazla protein / ilgi sitokinler için ELISA&#39;da gerçekleştirmek için uygulanabilir. ELISA kitleri önceden kaplanmış plakalar, 96-iyi yarı oyuklu plakalar ya da 384-kuyucuklu levhalar ihtiva etmediği takdirde daha ileri örnekleri / reaktiflerin kullanımını en aza indirmek için kullanılabilir.

<html> Biyomarker iş akışı ve zaman çizelgesi, sırasıyla Tablo 1 ve Tablo 2&#39;de ayrıntılı olarak verilmektedir. Bir kere tamamlandı, 6 farklı protein konsantrasyonu hemen plazma 150 ul toplam plazma kullanılarak aynı numune üzerinde ölçülebilir edilmiştir. Test başına nüsha örnekleri Kaplama CV% 10&#39;un altında optimum olmak üzere, iç kalite güvence sağlar. Çok plakalı, yüksek standartları tutarlı optik yoğunlukları üzerinde sıralı ELISA gerçekleştirerek tercih ve ölçümlerin gelişmiş arası plaka güvenilirlik için izin iseniz; standart eğri ODS ELISA performansı tutarsızlık (Şekil 2) için değerlendirmek bakmak plakaları arasındaki mukayese edilebilir. Tetrametilbenzidin kolorimetrik alt tabaka ve yüksek konsantrasyon kullanılarak ODS Development kez laboratuarımızda her bir biyolojik için gözlenen Tablo 3 de listelenmiştir. tp_upload/4247/4247fig1.jpg &quot;alt =&quot; Şekil 1 &quot;/&gt; Şekil 1. IL-2Rα, REG3α ve HGF ELISA&#39;lar için iş akışı. Plazma örnekleri, IL-2Rα ELISA plakaları üzerinde kaplanmış edildikten sonra, diğer ELISA&#39;lar için seyreltme kaynak plakaları yapmak için yapıştırılır. HGF ELISA için, plazma IL-8 1:06 seyreltme plaka hazırlamak için yapıştırılır. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/4247/4247fig1large.jpg" target="_blank">büyük bir rakam için tıklayınız</a> . <img src="/files/ftp_upload/4247/4247fig2.jpg" alt="Şekil 2,"/> Şekil 2. İlk REG3α GI GVHH biyomarker raporu 3 test 1084 hastaya karşılık REG3α konsantrasyonlarını ölçmek 7 farklı ELISA plakaları standart eğri için optik Yoğunlukları. Plakalar arasındaki Tutarlı ODS plakaları arasında tutarlı protein konsantrasyonu ölçümleri sağlamak. Protein konsantrasyonlarıplazma numuneleri standart eğri optik yoğunlukları numunenin optik yoğunlukları karşılaştırılarak hesaplanmıştır. <table border="1"><tbody><tr><td> Deney Gün 0 </td><td> 1. Örnekler hazırlayın </td></tr><tr><td></td><td> 2. IL-2Rα, HGF ve REG3α yakalama Ab </td></tr><tr><td> Deney 1. Gün </td><td> 1. IL-2RαELISA </td></tr><tr><td></td><td> 2. REG3αELISA </td></tr><tr><td></td><td> 3. HGF ELISA (örnek sayesinde kaplama) </td></tr><tr><td></td><td> 4. Elafin ve TNFR yakalama Ab </td></tr><tr><td> Deney 2. Gün </td><td> 1. HGF ELISA tamamlama </td></tr><tr><td></td><td> 2. Elafin ELISA </td></tr><tr><td></td><td> 3. TNFR1 ELISA </td></tr><tr><td></td><td> 4. IL-8 ELISA </td></tr><tr><td></td><td> 5. Kullanılmayan dondurulabilirplazma </td></tr></tbody></table> Tablo 1. GVHH Biyomarker İş Akışına Genel Bakış <table border="1"><tbody><tr><td colspan="2"> Gün 0 </td><td colspan="3"> Numune hazırlama ve geceleme yakalama vücut inkübasyon </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td colspan="2"> ELISA </td><td> IL-2Rα </td><td> REG3α </td><td> HGF </td><td> Elafin </td><td> TNFR1 </td><td> IL-8 </td></tr><tr><td> Süresi (saat) </td><td> 0.0 </td><td> Bloke etme </td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td> 1.0 </td><td> Kaplama, Örnekleri </td><td></td><td></td><td></td><td></td> &lt;td&gt; </td></tr><tr><td></td><td> 3.0 </td><td> Algılama Ab; plazma numuneleri Reclaim </td><td> Engelleme; Prepare Örnekleri (1:10 seyreltme) </td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td> 4.0 </td><td></td><td> Kaplama Örnekleri (1:10) </td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td> 5.0 </td><td> Streptavidin-HRP </td><td> Algılama Ab </td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td> 5.5 </td><td> TMB </td><td> Streptavidin-HRP </td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td> 6 </td><td> Plaka Okuma </td><td> TMB </td><td> Engelleme; Prepare örnekleri (1:2 seyreltme) </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td> 6.5 </td><td></td><td> Plaka Okuma </td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td> 7 </td><td></td><td></td><td> Kaplama Örnekleri (1:2) </td><td> Ab (gecelik inkübasyon) Yakalama </td><td> Ab (gecelik inkübasyon) Yakalama </td><td></td></tr><tr><td> 2. Gün </td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> Süresi (saat) </td><td> 0.0 </td><td></td><td></td><td> Plazma, Algılama Ab Reclaim </td><td> Engelleme; Prepare örnekleri (1:20) </td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td> 1.0 </td><td></td><td></td><td></td><td> Örnek kaplama (1:2) </td><td> Engelleme; 01:20 örneklerin ilave seyreltme 1:25 seyreltme </td><td></td></tr><tr><td></td><td> 2.0 </td><td></td><td></td><td> HRP </td><td></td><td> Örnek kaplama (1:25) </td><td></td></tr><tr><td></td><td> 2.5 </td><td></td><td></td><td> TMB </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td> 3.0 </td><td></td><td></td><td> Plaka Okuma </td><td> Algılama Ab </td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td> 3.5 </td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td> Örnekleri (1:6 seyreltme) hazırlayın </td></tr><tr><td></td><td> 4.0 </td><td></td><td></td><td></td><td></td><td> Algılama Ab </td><td> Örnek kaplama (1:6) </td></tr><tr><td></td><td> 5.0 </td><td></td><td></td><td></td><td> HRP </td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td> 5.5 </td><td></td><td></td><td></td><td> TMB </td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td> 6 </td><td></td><td></td><td></td><td> Plaka Okuma </td&gt; <td> HRP </td><td> Algılama Ab </td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td> TMB </td><td></td></tr><tr><td></td><td> 7 </td><td></td><td></td><td></td><td></td><td> Plaka Okuma </td><td> TMB </td></tr><tr><td></td><td> 7.5 </td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td> Plaka okuma </td></tr><tr><td colspan="2"> Tamamlanmasından sonra, </td><td colspan="6"> Alikotları içine kaynak plazma değiştirin ve daha sonra kullanmak için dondurma </td></tr></tbody></table> Tablo 2. ELISA&#39;lar gerçekleştirmek için zaman çizelgesi. <table border="1"><tbody><tr><td></td><td> Plazma Seyreltme faktörü </td><td> Yüksek Standart Konsantrasyon </td><td> Yüzey Geliştirme Süresi (dk) </td><td> Yüksek OD </td><td> Eğri </td></tr><tr><td> IL-2Rα </td><td> 01:01 </td><td> 2,000 pg / ml </td><td> 5 </td><td> 1 </td><td> Doğrusal </td></tr><tr><td> HGF </td><td> 01:02 </td><td> 4.000 pg / ml </td><td> 22 </td><td> 2.1 </td><td> 4-parametreli </td></tr><tr><td> IL-8 </td><td> 01:06 </td><td> 200 pg / ml </td><td> 12 </td><td> 2.7 </td><td> 4-parametreli </td></tr><tr><td> REG3α </td><td> 01:10 </td><td> 100 ng / ml </td><td> 12 </td><td> 1.7 </td><td> 4-parametreli </td></tr><tr><td> Elafin </td><td> 01:20 </td><td> 2,000 pg / ml </td><td> 20 </td><td> 1.9 </td><td> 4-parametreli </td></tr><tr><td> TNFR1 </td><td> 01:25 </td><td> 800 pg / ml </td><td> 8 </td><td> 2.7 </td><td> Doğrusal </td></tr></tbody></table> 6 GVHH Biyobelirteçler için Tablo 3. ELISA Detayları.

Birden fazla aday biyobelirteçlerin Yüksek throughput doğrulama donma / çözülme çevrimleri en aza indirmek ve değerli plazma numunesi kullanmak için sıralı ELISA ile yapılabilir. Burada, sıralı altı farklı valide plazma biyobelirteçleri için ELISA&#39;lar gerçekleştirmek için nasıl göstermek<sup&gt; 1-3</sup&gt; Graft-versus-host hastalığı (GVHH)<sup&gt; 4</sup&gt; Aynı plazma örneği üzerinde.

Akut Graft-Versus-Host Hastalığı Biyomarkörler onaylanması için Yüksek Verimli Sıralı ELISA

Tarafsız keşif proteomik stratejileri, tanısal ve prognostik süreçleri iyileştirebilecek çok sayıda yeni biyobelirteci tanımlama potansiyeline sahiptir...

Aşağıdaki deneyin genel amacı, proteomik ile keşfedilen çok sayıda yeni biyobelirteci verimli bir şekilde analiz etmek için yüksek kapasiteli ardışık ELISA kullanmaktır. Bu işlem, öncelikle her bir biyobelirteç için seyreltme oluşturmak ve testler arasında geri kazanılan plazmayı saklamak amacıyla örneklerin bir kaynak plakaya eklenmesiyle gerçekleştirilir. Ardından, hasta örneklerindeki konsantrasyonlarını belirlemek için her bir protein için ELISA testleri uygulanır.Nihayetinde, akut graft versus host hastalığının klinik belirtilerinin başlangıcında bu biyobelirteçlerin protein seviyelerindeki artış değerlendirilebilir. Bu tekniğin mevcut yöntemlere karşı temel avantajı, sıralı analizörlerin, çoklu analiz platformlarında her zaman mevcut olmayan birden fazla yeni proteini analiz edebilmesidir. Bu tekniğin uygulamaları, akut graft versus host hastalığının teşhisine kadar uzanmaktadır.Bu yöntemle doğrulanan biyobelirteçler şu anda klinik bakım için araştırılmaktadır. Bu yöntem, travma sonrası poetik kök hücre transplantasyonundaki komplikasyonlara dair içgörü sağlayabilse de akciğer transplantasyonu, komplikasyonlar, akciğer kanseri veya potansiyel olarak tanısal bir kan testinin yararlı olacağı herhangi bir hastalık için biyobelirteç keşfi ve doğrulamasına da uygulanabilir.Çoklu adımların, tekrarlanabilirliği sağlamak ve parti varyasyonunu düşük tutmak için tutarlı bir şekilde uygulanması önemli olduğundan, bu yöntemin görsel olarak gösterilmesi kritiktir. Deneyden bir gün önce, pıhtıları dipte ve lipidleri üstte ayırarak plazmadan uzaklaştırmak için plazma alikot örneklerini 15.300 RCF'de ve dört santigrat derecede 10 dakika boyunca santrifüjleyin. Ardından, önceden tanımlanmış haritalara göre manuel pipetleme ile her örnekten 150 mikrolitre seyreltilmemiş plazmayı 96 kuyucuklu V tabanlı bir plakaya aktarın. Plakayı Parafilm ile sarın ve 72 saate kadar dört santigrat derecedeki bir soğutma haznesinde bekletin.Ardından, IL iki reseptör alfa ve insan büyüme faktörü veya HGF yakalama antikorlarını üretici spesifikasyonlarına göre yeniden oluşturup seyreltedikten sonra, her bir antikordan 50 µL'lik alikotları ilgili 96 kuyucuklu yüksek bağlama kapasiteli yarım kuyucuklu plakalardaki her bir kuyucuğa ekleyin. Daha sonra bu plakaları bir plaka kapatıcı ile mühürleyin ve dört °C'de gece boyunca inkübe edin. Şimdi reg üç alfa'yı üreticinin kaplama tamponu ile üretici protokolüne uygun olarak seyreltin ve çözeltiden 25 µL'yi 3 84 kuyucuklu no maxor plakanın her bir kuyucuğuna ekleyin.Ardından, deneyin ilk gününde bu plakayı mühürleyerek dört derece Celsius'ta saklayın. IL two reseptör alfa test plakasını yıkayarak ve TBS içindeki blotto ile bloklayarak başlayın. Standartı yeniden çözdükten sonra, üreticinin protokolüne uygun olarak sekiz noktalı bir standart eğrisi hazırlayın.Bir sonraki plakada, kaynak plakadan ELISA test plağına, her bir standarttan çift örneği ve 50 µL seyreltilmemiş plazmayı aktarın. Ardından, kapatılmış plağı 300 RPM'ye ayarlanmış bir plak rotator üzerinde oda sıcaklığında inkübe edin. İki saat sonra, plazmayı IL-2 reseptörü alfa ELISA test plağından geri alın ve tekrar seyreltilmemiş plazma kaynak plağına yerleştirin.Ardından, üretici protokolüne göre EIA'yı tamamladıktan sonra, her kuyucuğun optik yoğunluğunu 450 ile 570 nanometreye ayarlanmış bir plaka okuyucu kullanarak okuyun. Reg üç alfa Eliza için öncelikle 10 µL seyreltilmemiş plazmayı ayrı bir V-bottom kaynak plakasına aktarın ve ardından 1:10 seyreltme kaynak plakası oluşturmak için her kuyucuğa üretici tarafından sağlanan 90 µL seyreltme tamponu ekleyin. Üretici protokolüne göre Reg üç alfa Eliza'yı tamamladıktan sonra, 384 kuyucuklu plakaya durdurma çözeltisini ekleyin ve her kuyucuğun optik yoğunluğunu 450 ile 620 nanometreye ayarlanmış bir plaka okuyucu kullanarak okuyun. Elephant ve TNF-R1 yakalama antikorlarını üretici spesifikasyonlarına göre yeniden çözüp seyreltikten sonra, ilgili 96 kuyucuklu yüksek bağlama kapasiteli yarım kuyucuklu plakaların her bir kuyucuğunu 50 µL yakalama antikoru ile kaplayın.Ardından, mühürlenmiş test plakalarını; fil plakası için oda sıcaklığında, TN FFR plakası için ise dört derece Celsius'ta gece boyunca inkübe edin. IL iki reseptör alfa Eliza işlemini tamamladıktan sonra, 60 µL seyreltilmemiş plazmayı yeni bir kaynak plakasına aktarın. Daha sonra, 1:2 seyreltilmiş plazma kaynak plakası oluşturmak için her kuyuya 60 µL %1 BSA içeren PBS ekleyin.Ardından, HGF test plağını TBS içindeki BLOTTO ile yıkayın ve bloklayın, ardından sekiz noktalı standart eğri dilüsyonunu hazırlayın. Plak yıkandıktan ve bloklama adımı tamamlandıktan sonra, EISA test plağına bir ila iki kat dilüe edilmiş plazmadan ve her bir standarttan 50 µL'lik duble alikotlar ekleyin. Daha sonra, kapatılmış plağı oda sıcaklığında, 300 RPM'e ayarlanmış bir plak rotatöründe gece boyunca inkübe edin.Ertesi sabah, 1/2 oranında seyreltilmiş plazmayı HGF Eliza test plağından geri alın ve tekrar 1/2 oranında seyreltilmiş plazma kaynak plağına yerleştirin. Üreticinin protokolüne uygun olarak EIA işlemini tamamladıktan sonra, deneyin ikinci gününde, 450 ila 570 nanometreye ayarlanmış bir plaka okuyucu kullanarak her kuyucuğun optik yoğunluğunu okuyun. Önce 10 µL seyreltilmemiş plazmayı yeni bir kaynak plağına aktarın ve ardından 200 µL 1/20 oranında seyreltilmiş plazma hazırlamak için 190 µL PBS içinde %1 BSA ekleyin.Ardından, üretici protokolüne uygun olarak ELISA işlemini tamamladıktan sonra, 450 ila 570 nanometreye ayarlanmış bir plaka okuyucu kullanarak optik yoğunluğu okudu. TNF-α FFR için ELISA, öncelikle 1'e 20 kaynak plakasına 25 µL %1 BSA ve PBS ekleyerek kuyuk başına 125 µL 1'e 25 seyreltilmiş plazma elde etti. Daha sonra, üretici protokolüne göre TNF-α FFR ELISA'yı tamamladıktan sonra, 450 ila 570 nanometreye ayarlanmış bir plaka okuyucu kullanarak her kuyuğun optik yoğunluğunu okudu; IL-8 EIA için öncelikle 60 µL 1'e 2 seyreltilmiş plazmayı yeni bir kaynak plakaya aktardı ve ardından 1'e 6 seyreltilmiş plazma kaynak plağı oluşturmak için her kuyuğa 180 µL IL-8 dilüenti ekledi.Ardından, üretici protokolüne uygun olarak ILH Eliza'yı tamamladıktan sonra, her bir kuyucuğun optik yoğunluğunu 450 ile 570 nanometreye ayarlanmış bir plaka okuyucu kullanarak ölçün. Son olarak, tüm Eliza işlemleri tamamlandığında, kullanılmayan talk plazmayı thought Eloqua'ya geri koyun ve gelecekteki kullanımlar için dondurun. Bu grafikte, başlangıçtaki reg üç alfa gastrointestinal graft versus host hastalığı biyobelirteç raporu için test edilen 1084 hastaya karşılık gelen reg üç alfa konsantrasyonlarını ölçen yedi farklı ELIZA plakasının standart eğrisi için optik yoğunluklar gösterilmektedir; plakalar arasındaki tutarlı optik yoğunluklar, deneyler arasında tutarlı protein konsantrasyonu ölçümlerini sağlar.Plazma örneklerindeki protein konsantrasyonları, örnek optik yoğunlukları standart eğri optik yoğunlukları ile karşılaştırılarak hesaplanmıştır. ELISA ve kreatif form mikroplakaları kullanılarak, plazma kullanım hacmi azaltılırken tekrarlanabilirliği daha da artırmak için robotik bir temiz işlem platformu kullanılabilir. Bu prosedür planlanırken, önce seyreltilmemiş plazma ile EIS'lerin çalıştırılması önemlidir; böylece plazma, geliştirme sonrası geri kazanılabilir ve sonraki deneylerde kullanılabilir.Bu teknik, proteomik alanındaki araştırmacıların, ardışık ELISA'ların evrensel kullanımı yoluyla ilgi duyulan herhangi bir hastalıkta aday biyobelirteçleri keşfetmesinin önünü açmıştır. Bu videoyu izledikten sonra, az miktarda plazma kullanarak ve serbest döngüleri minimize ederek, ardışık ELISA ile birden fazla biyobelirtecin nasıl valide edileceği konusunda iyi bir anlayışa sahip olmalısınız.

high-throughput-sequential-elisa-for-validation-biomarkers-acute

Research

JoVE Journal

Medicine

Tıp

Mürin kemik iliği nakli insanlarda graft-versus-host hastalığı yöneten immünolojik mekanizmalarla çalışmak için yaygın olarak kullanılan bir tekniktir. T hücre trafiğini modellerini izlemek için...

Graft-versus-host hastalığı indüksiyonu ve<em&gt; In Vivo</emBir MHC-eşlemeli murin Model Kullanma&gt; T Hücre İzleme

Bu video, organ alıcılarında anti-donör HLA alloantikorlarını tespit etmek için yapılan bir testi göstermektedir. Antikor aracılı organ reddi için potansiyel epitopları temsil etmek üzere bir peptit dizisi sentezlenir. Dizi, hedef epitoplarına bağlanan alloantikorlar içeren alıcının serumu ile inkübe edilir. Antikor bağlanması, alloantikor reaktivitesini indükleyen donöre özgü HLA epitoplarını tanımlamak için kemilüminesans kullanılarak tespit edilir.

Organ Alıcılarında Anti-donör HLA Alloantikorlarının Peptit Dizisi Tabanlı Tespiti

Bu video, insan kan trombositlerinden amyotrofik lateral skleroz (ALS) ile ilişkili bir protein biyobelirtecini tespit etmek için bir kılcal elektroforez immünolojik test protokolünü göstermektedir. ALS biyobelirteç proteininin varlığının doğrulanması, trombosit proteinlerinin boyuta dayalı olarak ayrılması ve ardından kemilüminesan tespiti ile elde edilir.

Protein Biyobelirteç Tespiti için Bir Kapiller Elektroforez İmmünoassay

Bu tür tek hücre düzeyinde sitokin üretimi tespit etmek ve T hücre yanıtlarının hem nicel hem de nitel karakterizasyonu sağlanmıştır interferon gamma (IFN-γ) ELISpot, gibi fonksiyonel deneylerde sahip yeni kuşak varicella zoster karşı hücre aracılı bağışıklık tepkilerini ölçmek için kullanılabilir virüsü (VZV).

Göbek Kordon Kanı Transplantasyonu takiben, IFN-γ değerlendirin ELISpot Tahlili Varisella-Zoster Virüs spesifik hücre-aracılı bağışıklık geliştirilmesi

Burada, hoşgörü Ekiminde teşvik ve içinde in vitro ve in vivo değerlendirmek için bir protokol farklı hücre alt kümeleri alıcıdan gelen süpresif kapasitesi ve donör veya eksojen antijenleri doğru alıcının bağışıklık durumu mevcut.

Vitro ve In Vivo değerlendirme T, B ve Myeloid hücrelerin süpresif etkinlik ve nakli alıcılardan gelen Humoral yanıt

İnsan lökosit antijeni (HLA) serileri organ donörü ve alıcı çiftleri arasındaki uyuşmazlıklar antikor aracılıklı ret organ nakli yapılan en önemli nedeni vardır. Burada Anti-donör HLA alloantibodies organ alıcıları içinde soruşturma için bireysel bağış HLA dizileri üzerinde temel alan özel antijen diziler kullanımı mevcut.

Peptid diziler HLA Alloantibodies Organ nakli olarak algılanması için kişiselleştirilmiş

Burada, bir xenogeneic Graft-versus-Host hastalığı (xenoGVHD) modelinde hastalığı teşvik etmek ve puan vermek için bir protokol sunuyoruz. xenoGVHD, insan T hücrelerinin bağışıklık bastırılmasını incelemek için bir in vivo modeli sağlar. Ayrıca, immunobastırma ölçmek için bir araç olarak dijital PCR ile dokularda insan T hücrelerinin nasıl algılanmasını açıklar.

Bir Xenogeneic Murine modelinde Graft-versus-Host hastalığının indüksiyon ve skorlama ve dijital PCR kullanarak fare dokularında ınsan T hücrelerinin ölçümü

7 otoantikor testini bir araya getiren basit bir çoklanmış ECL testi modelliyoruz. Tahlil, çölyak hastalığı, otoimmün tiroid hastalığı ve otoimmün poliglandüler sendrom 1 dahil olmak üzere T1D ve diğer birçok otoimmün hastalığı aynı anda tarayabilir.

Yüksek Verimli Bir Elektrokemilüminesans 7-Plex Testi Aynı Anda Tip 1 Diyabet ve Çoklu Otoimmün Hastalıklar İçin Tarama

Tip 1 diyabet, çölyak hastalığı ve koronavirüs hastalığı 2019 için acil tarama ihtiyacı doğrultusunda, dört adacık otoantikorlarını, doku transglutaminaz otoantikorlarını ve şiddetli akut solunum sendromu koronavirüs 2'nin reseptör bağlanma alanına karşı antikorları aynı anda tespit etmek için yüksek verimli bir 6-Plex elektrokemilüminesans testi geliştirdik.

Tip 1 Diyabet, Çölyak Hastalıkları ve COVID-19 için Yüksek Verimli Çok Katlı Tarama

Tam kan bazlı immünolojik testler, tanı ve araştırma amaçları için antijene özgü bağışıklığı analiz etmek için kolay ve kaynak açısından verimli bir araç sağlar. Bu makale, pediatrik hastalar ve küçük hayvanlar için düşük hacimli bir versiyon da dahil olmak üzere, mantar ve viral patojenlere karşı konak bağışıklığının kapsamlı analizi için ikili ko-stimülasyonlu optimize edilmiş bir tam kan bazlı protokol sağlar.

Fungal ve Viral Patojenlere Karşı Konak Bağışıklığının Antijene Özgü Analizi için İkili Ko-stimülasyonlu Tam Kan Testi

Öğrenin, akut graft-versus-host hastalığı için yüksek verimli ardışık ELISA yöntemiyle plazma biyomarkörlerini doğrulamayı. Bu teknik, değerli örnekleri koruyarak erken tanıya olanak tanır.

Akut Graft-Versus-Host Hastalığı Biyomarkörler onaylanması için Yüksek Verimli Sıralı ELISA

Daha fazla video keşfet