Name: 3-Boyutlu Reçine Döküm ve Fare Portal Ven veya intrahepatik safra Sisteminin Görüntüleme (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-10-25T13:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 47 s
Description: Öğrenin, fare karaciğer portal ven veya intrahepatik safra sisteminin 3 boyutlu reçine döküm yöntemiyle görüntülenmesini. Bu teknik, damar ve kanal yapılarının bütünsel mimarisinin in situ görselleştirilmesini sağlar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Bu çalışma tjw Moleküler Tıp HHMI / Vanderbilt Üniversitesi Sertifika Programı aracılığıyla Howard Hughes Tıp Enstitüsü (HHMI) (GRDOT56006779), gelen SSH Sağlık (NIH) National Institutes hibe (R01-DK078640) tarafından desteklenmiştir Vanderbilt Diyabet Araştırma ve Eğitim Merkezi (P30-DK020593) ve Vanderbilt Sindirim Hastalıkları Araştırma Merkezi (P30-DK058404) Çekirdek Hizmetleri sağlamak.

1. Kanül hazırlayın <ol><li> Parmak uçlarınızla PE10 boru, 1 inç uzunluğunda bölüm Isınma ve tüp ince olur böylece germek. Not: kanül için gemi veya kanalının boyutu gerekli germe derecesini belirlemektedir. Kanül koledok atmalarını için iyi gerilmiş olması gerekir ama sadece orta büyük portal ven sığacak şekilde uzatılır gerekebilir. </li><li> Eğimli bir uç oluşturmak için bir çapraz de uzatılmış tüp kesin. </li><li> 5-6 inç segment yaratmak için Tüpün diğer kenarını kesin. </li><li> Boru olmayan eğimli kenar içine ½ inç derialtı iğne 32 göstergesi takın. </li></ol> 2. PBS ile Şırınga hazırlayın <ol><li> PBS ile 3 ml şırınga doldurun. </li><li> Ekli ile derialtı iğne üzerine şırınga vidalayın PE10 boru önceden hazırlanmış çekti. </li><li> Bu PBS sağlamak için Flick şırınga ve şırınga itme pistonu iğne ve tüp ve doldurduşırınga içinde hava kabarcıkları vardır. </li><li> Kil modelleme üzerinden şekillenen bir şırınga tutucu içine PBS ile hazırlanmış şırınga yerleştirin. Boru, kanal içine yerleştirilir iken bu tutucu şırınga sabit tutacak. </li></ol> 3. Diğer Set-up <ol><li> Küçük bir kap, örneğin, bir 24 oyuklu plaka arasında iyi bir katalizör 0.1 g tartılır. </li><li> 3 ml şırınga içine 1 ml reçine çekin. Not: katalizör ve reçine nispi miktarları sertleşme süresi değiştirmek için ayarlanabilir. Katalizör mayıs miktarını azaltmak, ancak, çekme döküm ve daha az arzu döküm yol artar. Not: reçine tutarken, reçine duman reçine veya inhalasyon ile temas önlemek için gerekli tedbirleri almak. Her zaman eldiven giymek ve böyle bir kimyasal davlumbaz gibi iyi havalandırılan bir alanda reçine içeren adımları gerçekleştirin </li><li> Bir bağ olarak kullanılmak üzere yaklaşık olarak 5 inç 5.0 ipek dikiş bir parça keser. </li></ol> 4. Fare hazırlayın <ol&gt; <li> Yetişkin fare Kurban. Sırtında fare yatırın ve karın boşluğunun açılması. </li><li> Kapsamı platformu diseksiyon fare yatırın. Karaciğer görünürlük ve erişilebilirliği arttırmak için fare altında dik bir 15 ml konik tüp yerleştirin. </li><li> PBS ile bir pamuklu çubukla ıslatın ve yukarı doğru ve sizden uzağa ekstrahepatik portal ven veya koledok ile birlikte karaciğerin dorsal görünümü ortaya çıkarmak için karaciğer çevirmek için kullanabilirsiniz. </li><li> Portal ven atmalarını için, oda sıcaklığında PBS ile ven kızarma kanın pıhtılaşmasını önleyebilir. PBS ile dolu bir 3 ml şırınga bir iğne takınız ve kadarıyla yapabilirsiniz gibi karaciğer ekstrahepatik portal ven içine iğne takın. Yavaşça portal ven içine aracılığıyla PBS itin. Kan akıtmak için ortak kardinal ven bir nick olun. Kan drenaj artırılması, masaj karaciğer için ıslak bir pamuklu çubuk kullanın. Bu adım, safra kanalı için tavsiye edilmez ve tüm vasküler sistemler için gerekli olmayabilir. Not: Bu adım aynı zamanda perfo olabiliryerine PBS% 4 paraformaldehid rmed. % 4 paraformaldehid kullanımı, özellikle daha küçük vasküler yapı, daha kesin bir döküm damar bütünlüğünün ve sonuç artırabilir. </li></ol> 5. Ekstrahepatik Portal ven veya Koledok kanüle <ol><li> Karaciğer yaklaşık ¼ inç, portal ven veya safra kanalı altında cerrahi sütür geçmesine kavisli bir forseps kullanın. </li><li> Gevşek bir ortak düğüm haline dikiş bağla. Düğüm SIKMAYIN. </li><li> Eğer açık uçlu bir sistem ile çalışıyorsanız, bu sistemin diğer ucunda bir bağ bağlayıp sıkın yardımcı olabilir. Eğer portal ven kanı boşaltmak için ortak kardinal ven açtıysanız, portal ven içindeki basıncı artırır ve santral hepatik vene reçine sızmasını önlemek için etrafında bir bağ kravat. </li><li> Yaklaşık ¼ inç dikiş düğüm aşağıdaki portal ven ya da safra kanalı küçük bir kesi yapmak için makas makas kullanın. Bu cut yarıya portal ven ya da koledok çapı sayesinde daha fazla nüfuz etmelidir. </li><li> # 5 forseps kullanarak, kesme site portal ven ya da safra yolları tutun ve safra kanalı içine Hortumun ucunu eğimli. </li><li> Öncesi gibi duran ligatür geçmiş ve karaciğer doğru hortumun ucu itin. </li><li> Kanül aracılığı ile PBS enjekte ederek ve portal ven ya da safra kanalı girerse görmek için izliyor tarafından kanülasyon doğruluğunu test edin. </li><li> Yerinde tutmak için kanül bağ sıkıştırın. </li></ol> 6. Reçine Portal Ven veya intrahepatik safra Cast <ol><li> Önceden ölçülmüş 0,1 g katalizör öncesi ölçülen 1 ml reçine ekleyin ve iyice karıştırın. Hava kabarcıkları oluşmasını önleyin. </li><li> 3 ml şırınga içine geri reçine katalizör karışımı çizin. Yavaşça şırınga Flicking ve kabarcıklar kovma tarafından herhangi bir hava kabarcıklarını çıkarın. Not: küçük yapılar döküm için, bu inci çok küçük hava kabarcıklarını çıkarmak için bir vakum odasında kullanmak faydalı olabilirE reçine ve döküm kalitesini artırmak. Bu adımı gerçekleştirmek için zaman izin vermek için, bu reçine kür yavaşlatmak için yukarıda önerilen bundan katalizör / reçine oranı azaltmak için gerekli olacaktır. </li><li> Dikkatle kanül bağlı 32 gauge iğne bırakarak, reçine içeren şırınga ile PBS içeren şırınga değiştirin. </li><li> Direnci artar ve karaciğer dolana kadar yavaşça ve nazikçe portal ven ya da safra yolları içine reçine itin. </li><li> Hafifçe karaciğer masaj ve hatta dolgu teşvik ıslak pamuklu bir bez kullanın. </li><li> Yapısından kanülü çıkarın ve hızlı reçine sızmasını önlemek için bağ yeniden sıkın. </li><li> Reçine tedavileri, daha sonra karaciğer kaldırmak iken farenin 20 dakika için oda sıcaklığında düz bırakmaya izin verir. </li><li> Ya karaciğer temizledikten ya macerating ile devam edin. </li></ol> 7. In situ Görselleştirme için Clear Karaciğer <ol><li> 4 ° C, sallanan bir gece boyunca% 4 paraformaldehit içinde karaciğer düzeltildi. </li><li> Karaciğer yıkayınen az dört saat, sallanan için PBS içinde. İsterseniz bu noktada, karaciğer lobları ayrışabilir. </li><li> Oda sıcaklığında sallanan, en azından dört saat her biri için en az% 50 metanol ve daha sonra da% 100 metanol içinde kurutmak. </li><li> En az 24 saat, sallanan için benzil alkol ve benzil benzoat (Babb) ve 1:2 çözelti içinde karaciğer temizleyin. Daha uzun yıkama kez gerekli olabilir. Karaciğer tamamen 2-3 gün sonra belli değilse, geri 24 saat süreyle% 100 metanol taşımak ve Babb takas tekrarlayın. </li><li> In situ görüntüleme için bir cam Petri kabındaki Babb batığın karaciğer. </li></ol> 8. Karaciğer Doku ıslatarak yumuşatmak <ol><li> Fare karaciğer çıkarın ve 50 ml konik tüp su ile konur. Tam reçine kür için 1 saat bekleyin. Eğer ayrı karaciğer lobları istenen. </li><li> Kapalı su dökün ve bir cam şişe karaciğer taşıyın. % 15 KOH kaba daldırın. Gece boyunca oda sıcaklığında bırakın. Sallamayın. </li><li> Dikkatlice KOH kapalı dökün ve distile su dökme yıkayın. Not: döküm ver olduğuy kırılgan ve son derece dikkatli ele alınmalıdır. Tüpünden sıvı ekleyerek veya çıkartırken döküm kesintiye kaçının. </li><li> Reçine döküm temiz olduğunda, yavaşça kurulayın bir Kimwipe üzerinde yatıyordu, sonra depolanmak üzere bir kaba aktarınız. </li></ol> 9. Temsilcisi Sonuçlar Portal ven ve safra kanalının başarılı bir döküm hilusu gelen karaciğer perifere uzanan giderek küçük şube sürekli ağ gösterecektir. Şekil 1 bir portal ven Babb takas. Şekil 1A tüm karaciğer sol lob döküm ve döküm şeklini ve boyutunu gösterir sonra da in situ görüntülenmiştir olarak döküm. Şekil 1B aynı döküm bir yakın görünümünü gösterir gösteren göstermektedir Karaciğer periferinde küçük portal ven dalları içine reçine penetrasyonu. Şekil 2 KOH ma geçirmiş olan bir portal ven dökme gösterirceration. Şekil 2A tüm sol karaciğer lob ve Şekil 2B küçük periferik dallarının kadar yakın olduğunu gösterir. Bu teknik aynı zamanda başarılı bir intrahepatik safra uygulanan ve Babb takas ve KOH maserasyon teknikleri 1,2,7 kullanarak hem yayımlanmıştır. Genel sorunlar dolgular eksik içerir, çevreleyen sistemleri ya da doku içine reçine, ve taşma halinde kabarcıklar. Şekil 3 için portal damar arasından, tamamlanmamış bir dolgu (Şekil 3A), kabarcıklar (Şekil 3A), ve reçine bir taşma tanımak için gösterilmiştir santral ven (Şekil 3B). Tüm resimler Leica MZ 16 FA stereoskop kullanarak ve RETIGA 4000R kamera QImaging alınır. <img alt="Şekil 1" src="/files/ftp_upload/4272/4272fig1.jpg" /> Şekil 1Hepatik. Babb-temizlenmiş reçine döküm lob portal ven bıraktı. A. Reçine döküm hilusu dan karaciğer çevresine kadar uzanan bir dallanma hiyerarşik yapısını göstermektedir. Reçine döküm mavi renkli karaciğer lob içinde sarı renkte görünür. B. kadar yakın reçine dolgu karaciğer periferinde küçük dallar uzanır göstermektedir. Reçine temizlenir karaciğer yoluyla beyazımsı. Ölçek bar = 1 mm. <img alt="Şekil 2," src="/files/ftp_upload/4272/4272fig2.jpg" /> Şekil 2. Hepatik doku-macerated reçine döküm lob portal ven bıraktı. Bütün karaciğerin ise dökme A. Reçine büyüklü küçüklü birçok dalları gösterir. B. Close-up karaciğer periferinde küçük dalları gösterir. Küçük şube görünümünü Feathering sinüzoidal boşluk doldurma reçine temsil ve veya reçine görünür olmayabilir atmalarını ve eğer varsa görünür şube yoğunluğu artacaktır. Reçine beyaz renklidir. Ölçek bar = 1 mm. Şekil 3. Reçine atmalarını ile ortak sorunlar. A. sol lob portal ven Tamamlanmamış bir dolgu karaciğer çevre genişletmek için başarısız bazı veya tüm döküm dalları ile belirgindir. Bu döküm, aynı zamanda sürekli döküm (ok) molaları gibi görünür, kabarcıklar görüntüler. Bazı yerlerde portal ven ve santral ven dallarının yakınlığı nedeniyle B., portal ven reçine genellikle girin ve santral ven dolduracaktır. Iki ayrı hiler dalları (oklar) ve farklı desen ve örtüşme sahip iki dallanma yapıları olduğunda bu kabul edilebilir. Teknik hatalar ve gerçek morfolojik değişiklikler arasında ayrım iki şekilde yapılabilir. İlk olarak, döküm yapı 2-boyutlu analiz ya da diğer metotlara göre beklenen yapı ile karşılaştırılması gerekmektedir. İkincisi, birkaç çoğaltır gerçekleştirmek için önemlidir ve mümkün olduğunda, struct ölçmekure ve uyarlık belirlemek için istatistiksel analizler gerçekleştirmek ve arasında ve farklı deney ve kontrol kolları içinde istatistiksel olarak anlamlı bir morfolojik değişiklik varsa.

<ol><li>Sparks, E. E., Perrien, D. S., Huppert, K. A., Peterson, T. E., Huppert, S. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Defects+in+hepatic+Notch+signaling+result+in+disruption+of+the+communicating+intrahepatic+bile+duct+network+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Dis.+Model+Mech%22%5BJournal%5D)">Defects in hepatic Notch signaling result in disruption of the communicating intrahepatic bile duct network in mice.</a> Dis. Model Mech. 4, 359-367 (2011).</li>
<li>Vanderpool, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genetic+interactions+between+hepatocyte+nuclear+factor-6+and+notch+signaling+regulate+mouse+intrahepatic+bile+duct+development+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Hepatology%22%5BJournal%5D)">Genetic interactions between hepatocyte nuclear factor-6 and notch signaling regulate mouse intrahepatic bile duct development in vivo.</a> Hepatology. 55, 233-243 (2012).</li>
<li>Meyer, E. P., Ulmann-Schuler, A., Staufenbiel, M., Krucker, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Altered+morphology+and+3D+architecture+of+brain+vasculature+in+a+mouse+model+for+Alzheimer%27s+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences%22%5BJournal%5D)">Altered morphology and 3D architecture of brain vasculature in a mouse model for Alzheimer's disease.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences. 105, 3587-3592 (2008).</li>
<li>Van Steenkiste, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Vascular+corrosion+casting%3A+analyzing+wall+shear+stress+in+the+portal+vein+and+vascular+abnormalities+in+portal+hypertensive+and+cirrhotic+rodents%5BTitle%5D)+AND+%22Lab+Invest%22%5BJournal%5D)">Vascular corrosion casting: analyzing wall shear stress in the portal vein and vascular abnormalities in portal hypertensive and cirrhotic rodents.</a> Lab Invest. 90, 1558-1572 (2010).</li>
<li>Dickie, R., Cormack, M., Semmler-Behnke, M., Kreyling, W. G., Tsuda, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Deep+pulmonary+lymphatics+in+immature+lungs%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Applied+Physiology%22%5BJournal%5D)">Deep pulmonary lymphatics in immature lungs.</a> Journal of Applied Physiology. 107, 859-863 (2009).</li>
<li>Kelly, D. M., McEntee, G. P., McGeenery, K. F., Fitzpatrick, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microvasculature+of+the+pancreas%2C+liver%2C+and+kidney+in+cerulein-induced+pancreatitis%5BTitle%5D)+AND+%22Archives+of+Surgery%22%5BJournal%5D)">Microvasculature of the pancreas, liver, and kidney in cerulein-induced pancreatitis.</a> Archives of Surgery. 128, 293-295 (1993).</li>
<li>Sparks, E. E., Huppert, K. A., Brown, M. A., Washington, M. K., Huppert, S. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Notch+signaling+regulates+formation+of+the+three-dimensional+architecture+of+intrahepatic+bile+ducts+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Hepatology%22%5BJournal%5D)">Notch signaling regulates formation of the three-dimensional architecture of intrahepatic bile ducts in mice.</a> Hepatology. 51, 1391-1400 (2010).</li>
<li>Carlson, T. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Endothelial+expression+of+constitutively+active+Notch4+elicits+reversible+arteriovenous+malformations+in+adult+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci.+U.S.A%22%5BJournal%5D)">Endothelial expression of constitutively active Notch4 elicits reversible arteriovenous malformations in adult mice.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 102, 9884-9889 (2005).</li>
<li>Hemmeryckx, B., Emmerechts, J., Bovill, E. G., Hoylaerts, M. F., Lijnen, H. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+ageing+on+the+murine+venous+circulation%5BTitle%5D)+AND+%22Histochem.+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Effect of ageing on the murine venous circulation.</a> Histochem. Cell Biol. , (2012).</li>
<li>Hossler, F. E., Olson, K. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microvasculature+of+the+nasal+salt+gland+of+the+duckling%2C+Anas+platyrhynchos%3A+quantitative+responses+to+osmotic+adaptation+and+deadaptation+studied+with+vascular+corrosion+casting%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Exp.+Zool%22%5BJournal%5D)">Microvasculature of the nasal salt gland of the duckling, Anas platyrhynchos: quantitative responses to osmotic adaptation and deadaptation studied with vascular corrosion casting.</a> J. Exp. Zool. 254, 237-247 (1990).</li>
<li>Hossler, F. E., West, R. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Venous+valve+anatomy+and+morphometry%3A+studies+on+the+duckling+using+vascular+corrosion+casting%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Anat%22%5BJournal%5D)">Venous valve anatomy and morphometry: studies on the duckling using vascular corrosion casting.</a> Am. J. Anat. 181, 425-432 (1988).</li>
<li>Hossler, F. E., Monson, F. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Structure+and+blood+supply+of+intrinsic+lymph+nodes+in+the+wall+of+the+rabbit+urinary+bladder--studies+with+light+microscopy%2C+electron+microscopy%2C+and+vascular+corrosion+casting%5BTitle%5D)+AND+%22Anat.+Rec%22%5BJournal%5D)">Structure and blood supply of intrinsic lymph nodes in the wall of the rabbit urinary bladder--studies with light microscopy, electron microscopy, and vascular corrosion casting.</a> Anat. Rec. 252, 477-484 (1998).</li>
<li>Hossler, F. E., Monson, F. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evidence+for+a+unique+elastic+sheath+surrounding+the+vesicular+arteries+of+the+rabbit+urinary+bladder--studies+of+the+microvasculature+with+microscopy+and+vascular+corrosion+casting%5BTitle%5D)+AND+%22Anat.+Rec%22%5BJournal%5D)">Evidence for a unique elastic sheath surrounding the vesicular arteries of the rabbit urinary bladder--studies of the microvasculature with microscopy and vascular corrosion casting.</a> Anat. Rec. 252, 472-476 (1998).</li>
<li>Hossler, F. E., Kao, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microvasculature+of+the+urinary+bladder+of+the+dog%3A+a+study+using+vascular+corrosion+casting%5BTitle%5D)+AND+%22Microsc.+Microanal%22%5BJournal%5D)">Microvasculature of the urinary bladder of the dog: a study using vascular corrosion casting.</a> Microsc. Microanal. 13, 220-227 (2007).</li>
<li>Wischgoll, T., Choy, J. S., Kassab, G. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Extraction+of+morphometry+and+branching+angles+of+porcine+coronary+arterial+tree+from+CT+images%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol.+Heart.+Circ.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Extraction of morphometry and branching angles of porcine coronary arterial tree from CT images.</a> Am J Physiol. Heart. Circ. Physiol. 297, H1949-H1955 (2009).</li>
<li>Hossler, F. E., Douglas, J. E., Douglas, L. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Anatomy+and+morphometry+of+myocardial+capillaries+studied+with+vascular+corrosion+casting+and+scanning+electron+microscopy%3A+a+method+for+rat+heart%5BTitle%5D)+AND+%22Scan+Electron+Microsc%22%5BJournal%5D)">Anatomy and morphometry of myocardial capillaries studied with vascular corrosion casting and scanning electron microscopy: a method for rat heart.</a> Scan Electron Microsc. , 1469-1475 (1986).</li>
<li>Hossler, F. E., Douglas, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Vascular+Corrosion+Casting%3A+Review+of+Advantages+and+Limitations+in+the+Application+of+Some+Simple+Quantitative+Methods%5BTitle%5D)+AND+%22Microsc.+Microanal%22%5BJournal%5D)">Vascular Corrosion Casting: Review of Advantages and Limitations in the Application of Some Simple Quantitative Methods.</a> Microsc. Microanal. 7, 253-264 (2001).</li>
<li>Mondy, W. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Micro-CT+of+corrosion+casts+for+use+in+the+computer-aided+design+of+microvasculature%5BTitle%5D)+AND+%22Tissue+Eng.+Part+C+Methods%22%5BJournal%5D)">Micro-CT of corrosion casts for use in the computer-aided design of microvasculature.</a> Tissue Eng. Part C Methods. 15, 729-738 (2009).</li>
<li>Masyuk, T. V., Ritman, E. L., LaRusso, N. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantitative+Assessment+of+the+Rat+Intrahepatic+Biliary+System+by+Three-Dimensional+Reconstruction%5BTitle%5D)+AND+%22The+American+Journal+of+Pathology%22%5BJournal%5D)">Quantitative Assessment of the Rat Intrahepatic Biliary System by Three-Dimensional Reconstruction.</a> The American Journal of Pathology. 158, 2079-2088 (2001).</li>
<li>Masyuk, T. V., Ritman, E. L., LaRusso, N. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hepatic+Artery+and+Portal+Vein+Remodeling+in+Rat+Liver%3A+Vascular+Response+to+Selective+Cholangiocyte+Proliferation%5BTitle%5D)+AND+%22The+American+Journal+of+Pathology%22%5BJournal%5D)">Hepatic Artery and Portal Vein Remodeling in Rat Liver: Vascular Response to Selective Cholangiocyte Proliferation.</a> The American Journal of Pathology. 162, 1175-1182 (2003).</li>
</ol>

Çıkar çatışması ilan etti.

Biz, portal damar ve karaciğer intrahepatik safra kanalı sistemlerinde döküm nasıl için belirli örnekler tarif, ancak bu teknik hafif adaptasyonlar ile hemen hemen herhangi bir başka duktal ya da damar sistemine uygulanabilir. Önceki iş 10,11 yavrusu fare 1,2,7-9 dahil çoklu türler, tavşan 12,13, köpek 14, ve domuz 15, ve burun bezi 14 dahil olmak üzere birçok organ, bu tekniğin fizibilite göstermiştir Kalp 16, mesane 12,13 ve karaci...

<table border="1"><tbody><tr><td> Reaktif Adı </td><td> Şirket </td><td> Katalog numarası </td><td> Yorumlar </td></tr><tr><td> PE10 polietilen boru </td><td> Fisher Scientific </td><td> 1417012P </td><td></td></tr><tr><td> 5-0 cerrahi siyah örgülü ipek </td><td> Roboz Cerrahi </td><td> SUT-15-1 </td><td></td></tr><tr><td> Steriject 32 G x 13 mm iğne </td><td> Hava-tite </td><td> TSK3213 </td><td></td></tr><tr><td> Bahar makas </td><td> Güzel Bilim Araçları </td><td> 15000-08 </td><td></td></tr><tr><td> Sayı 5 forseps </td><td> Güzel Bilim Araçları </td><td> 91150-20 </td><td></td></tr><tr><td> Mercox II kiti </td><td> Ladd Araştırma </td><td> 21247 </td><td></td></tr><tr><td> Benzil alkol </td><td> Fisher Scientific </td><td> 1816-1804 </td><td> Only Babb temizleme için gerekli </td></tr><tr><td> Benzil benzoat </td><td> MP Biomedicals, LLC </td><td> 154839 </td><td> Sadece Babb temizleme için gerekli </td></tr><tr><td> Fosfat tamponlu tuz (PBS) </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> Modelleme kil </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> Ölçek </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> Laboratuvar makası </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> 15 ml kap polipropilen tüpler </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> % 4 paraformaldahyde </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> % 15 potasyum hidroksit (KOH) </td><td></td><td></td><td> Sadece maserasyon için gereken </td></tr><tr><td> Jilet </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> % 100 metanol </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> 3 ml luer lock şırınga </td><td></td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

3-boyutlu reçine döküm ve fare portal ven veya intrahepatik safra sisteminin görüntüleme

3-Dimensional Resin Casting and Imaging of Mouse Portal Vein or Intrahepatic Bile Duct System

Organlarda, vasküler ve duktal yapıların doğru mimarisi düzgün fizyolojik fonksiyonu için vazgeçilmez olduğunu ve bu yapıların oluşumu ve bakımı son derece düzenlenir süreçtir. Bu kompleks, 3-boyutlu yapıların analiz çok bölüm halinde ya da enjeksiyon boya çalışmalar, hem 2-boyutlu inceleme bağlı gelmiştir. Bu teknikler, ancak onlar aydınlatmak amaçlanmıştır duktal veya vasküler yapıların tam ve ölçülebilir temsilini sağlamak mümkün değildir. Alternatif olarak, 3-boyutlu plastik reçine kalıplara doğası sisteminin bir sürekli anlık oluşturur ve 3-boyutlu yapı ve ağ görselleştirilmesi ve hesaplamak için bir yeni ve çok kullanışlı bir yöntemdir. Reçine döküm sisteminin çok önemli bir avantajı bir kan damarı ya da kanal intakt ve bağlı veya iletişim, yapısını belirlemek için yeteneğidir. Damar ve duc yapısıtal ağlar organ fonksiyonları için çok önemlidir ve bu tekniğin çeşitli şekillerde vasküler ve duktal ağların çalışma yardımcı olma potansiyeline sahiptir. Reçine döküm, bir lümen yapı normal morfoloji ve fonksiyonel mimari analiz gelişimsel morfogenetik değişiklikleri tespit etmek ve normal ve hastalık durumları arasında doku mimari içinde morfolojik farklılıklar ortaya çıkarmak için de kullanılabilir. Önceki çalışmalar, örneğin çalışma döküm reçine kullanmıştır, yapının 1,2 2 boyutlu analiz yansıtılmamıştır fare intrahepatik safra sistemi içerisinde mimari ve işlevsel kusurları, bir Alzheimer hastalığı fare modelinde 3 beyin damarlarında değişiklikler , portal hipertansif ve sirotik fare 4, olgunlaşmamış ve yetişkin akciğerler arasındaki sıçan lenf olgunlaşma gelişim basamaklarına 5, kimyasal yaralanma için yanıt sıçan karaciğer, pankreas, böbrek ve hemen mikrovasküler değişiklikler portal ven anormallikleri6. Burada portal ven ve intrahepatik safra odaklanıyor, bir fare vasküler veya duktal ağının bir 3 boyutlu reçine döküm üreten bir yöntem sunmaktır. Bu yayınları doku temizleyerek veya macerating ile görülmesi ve daha sonra analiz edilebilir. Bu teknik hemen her vasküler veya duktal sistemin uygulanabilir ve 3 boyutlu duktal veya vasküler yapısının gelişimi, fonksiyonu, bakım, ya da yaralanma sorguladıktan herhangi bir çalışmaya doğrudan uygulanabilir olacaktır.

Görselleştirilmesi ve fare hepatik ven veya intrahepatik safra kanalı 3-boyutlu yapısının nicel bir yöntem tarif edilmektedir. Bu reçine döküm yöntemiyle aynı zamanda diğer duktal ya da damar sistemlerine uygulanabilir ve olanak edilebilir<em&gt; In situ</em&gt; Bir sistemin sağlam iletişim mimarisinin görselleştirme veya miktar.

3-Boyutlu Reçine Döküm ve Fare Portal Ven veya intrahepatik safra Sisteminin Görüntüleme

Organlarda, vasküler ve duktal yapıların doğru mimarisi, uygun fizyolojik fonksiyon için vazgeçilmezdir ve bunların oluşumu ile...

Bu prosedürün genel amacı, vasküler veya duktal bir dokunun üç boyutlu dökümünü oluşturmaktır. Bu işlem; öncelikle portal ven gibi hedef yapının hazırlanıp kanüle edilmesi ve kanülün yerine sabitlenmesiyle gerçekleştirilir. Ardından, reçine hazırlanır, portal vene enjekte edilir ve kürlenmeye bırakılır.Ardından karaciğer çıkarılır ve doku fikse edilir veya masere edilir. Son olarak, karaciğer şeffaflaştırılır ve döküm yapısı görselleştirilir. Nihayetinde, sonuçlar elde edilebilir.Bu durum, görsel analiz veya mikro CT ile nicelleştirme yoluyla vasküler veya duktal yapının mimarisindeki değişiklikleri göstermektedir. Bu yöntem karaciğer mimarisi hakkında bilgi sağlayabilse de beyin, akciğer, pankreas ve böbrekler dahil olmak üzere herhangi bir organın vasküler veya duktal sistemlerine de uygulanabilir.Kanülü hazırlamak için, PE 10 tüpün bir inçlik bir bölümünü parmak uçlarınızla ısıtın ve incelene kadar nazikçe çekin. Esnetilmiş tüpü çapraz şekilde kesin. Eğimli bir uç oluşturmak için, tüpün diğer kenarını beş ila altı inçlik bir segment oluşturacak şekilde kesin.32 gauge yarım inçlik bir hipodermik iğneyi tüpün eğimsiz ucuna yerleştirin. Önce PBS ile doldurarak üç mililitrelik bir şırınga hazırlayın ve tüpün takılı olduğu iğneyi şırıngaya vidalayın. Şırıngaya hafifçe vurup pistonu iterek şırıngada hava kabarcığı kalmadığından ve iğnenin PBS ile dolduğundan emin olun.Küçük bir kaba 0.1 gram katalizör tartın. Ardından, üç mililitrelik bir şırıngaya bir mililitre reçine çekin. Son olarak, ligatür olarak kullanılmak üzere beş inçlik bir ipek sütür parçası kesin.Yetişkin bir fareyi sakrifiye ettikten sonra, fareyi sırt üstü yatırın ve abdominal kaviteyi açın. Fareyi bir diseksiyon mikroskobunun platformuna yerleştirin ve karaciğere görünürlüğü ve erişilebilirliği artırmak için farenin altına dik olarak 15 mililitrelik konik bir tüp konumlandırın. Bir pamuklu çubuğu PBS ile ıslatın ve karaciğerin dorsal görünümünü, ekstra hepatik portal ven veya ortak safra kanalı ile birlikte ortaya çıkarmak için karaciğeri yukarıya ve yana doğru kaldırmak amacıyla kullanın.Portal ven dökümleri için, veni oda sıcaklığındaki PBS ile yıkayarak kan pıhtılaşmasını önleyin. PBS ile doldurulmuş üç mililitrelik bir şırıngaya iğneyi takın ve karaciğerden mümkün olduğunca uzağa, ekstrahepatik portal vene yerleştirin.Ardından, portal vene nazikçe PBS itin. Daha sonra, kan drenajını artırmak için gerekirse common cardinal vene küçük bir kesik atarak kanı boşaltın ve karaciğere masaj yapmak için ıslak bir pamuklu çubuk kullanın. Açık uçlu bir sistemle çalışılıyorsa, sistemin diğer ucuna bir ligatür bağlayıp sıkıştırmak faydalı olabilir.Portal veinden kan drenajını sağlamak amacıyla ortak kardinal ven açılırsa, portal ven içindeki basıncı artırmak ve reçinenin merkezi hepatik vene sızmasını önlemek için etrafına bir ligatür bağlanır. Karaciğerden yaklaşık bir çeyrek inç uzaklıktaki yapılardan birinin altına cerrahi sütür ligatürünü geçirmek için kavisli pensler kullanın. Sütürü, sıkmadan gevşek bir ortak düğüm şeklinde bağlayın.Ardından, portal ven veya safra kanalında, dikiş düğümünün yaklaşık bir çeyrek inç altına yaylı makasla küçük bir kesi yapın. Bu kesi, her iki yapının da çapının yarısından fazlasına nüfuz etmemelidir. Daha sonra beş numara pens kullanarak, portal veni veya safra kanalını kesi bölgesinden tutun ve tüpün eğimli ucunu içeri yerleştirin.Tüpün ucunu, bağlanan ligatürün ötesine, karaciğere doğru itin. Kanülasyonun doğruluğunu, kanül aracılığıyla PBS enjekte ederek ve sıvının portal vene mi yoksa safra kanalına mı girdiğini gözlemleyerek test edin. Kanülü sabitlemek için ligatürü sıkın.Önceden ölçülmüş 1 mL reçineyi, önceden ölçülmüş 0,1 g katalizöre ekleyin ve hava kabarcığı oluşmamasına dikkat ederek iyice karıştırın. Reçine-katalizör karışımını 3 mL'lik şırıngaya geri çekin. Şırıngaya hafifçe vurarak ve kabarcıkları dışarı iterek tüm hava kabarcıklarını giderin.PBS içeren şırıngayı, 32 gauge iğneyi kanüle takılı bırakarak dikkatlice reçine içeren şırıngayla değiştirin. Direnç artana ve karaciğer dolana kadar portal vene veya safra kanalına yavaşça ve nazikçe reçine itin. Eşit bir dolum sağlamak için.Karaciere nazikçe masaj yapmak için ıslak bir pamuklu çubuk kullanın, kanülü çıkarın ve reçine sızıntısını önlemek için ligatürü hızla yeniden sıkın. Karaciğeri çıkarmadan önce, reçine kürlenirken farenin oda sıcaklığında 20 dakika boyunca düz bir şekilde yatmasını sağlayın; ardından karaciğer içi görüntülemeyi temizlemek için karaciğeri çıkarın ve 4 °C'de gece boyunca %4 Paraformaldehit içinde sabitleyin. Ertesi gün çözeltiyi dökün ve PBS ekleyin.Karaciğeri en az dört saat boyunca PBS ile yıkayın. Arzu edilirse bu aşamada karaciğer lobları ayrılabilir. Dokuyu önce %50 metanolde, ardından %100 metanolde her biri en az dört saat olacak şekildedehidre edin.Oda sıcaklığında sallanır. Karaciğeri, bir ila iki oranında benzoil alkol ve benzoil benzoat çözeltisi içinde en az 24 saat daha şeffaflaştırın. In situ görüntüleme için yıkama süreleri gerekebilir.Dokuyu masere etmek için alternatif bir yöntem olarak karaciğeri cam bir petri kabı içindeki BABB'ye daldırın. Karaciğeri hayvandan çıkardıktan sonra, suyla birlikte 50 mililitrelik konik bir tüpe yerleştirin. Reçinenin tamamen kürlenmesi için bir saat bekleyin.Suyu dökün ve karaciğeri cam bir şişeye aktarın. %15 potasyum hidroksit içerisine daldırın ve oda sıcaklığında, dikkatlice sarsmadan gece boyunca bekletin. Potasyum hidroksiti dökün ve kalıbı distile su ile yıkayın.Tübe sıvı eklerken veya tüpten sıvı çıkarırken dökümün bozulmamasına dikkat edin. Reçine döküm temiz olduğunda, kuruması için nazikçe bir kim wipe üzerine yerleştirin, ardından saklanacağı bir kaba aktarın. Bu şekil, BABB şeffaflaştırma sonrası in situ olarak görselleştirilmiş bir portal ven dökümünü göstermektedir.Burada tüm sol karaciğer lobunun dökümü ile dökümün şekli ve boyutu gösterilmektedir. Bu, aynı dökümün, reçinenin karaciğer periferindeki en küçük portal ven dallarına kadar nüfuz ettiğini gösteren yakın çekim görüntüsüdür. Burada, potasyum hidroksit maserasyonuna tabi tutulmuş bir portal ven dökümü yer almakta olup, tüm sol lob burada, küçük periferik dallar ise burada yakın çekim olarak gösterilmiştir.Yaygın sorunlar arasında eksik dolumlar, reçine içindeki hava kabarcıkları ve çevre sistemlere veya dokulara taşmalar yer alır. Bu şekil, eksik dolumun, hava kabarcıklarının ve reçinenin portal veinden santral veine taşmasının nasıl tanınacağını göstermektedir. Reçine ile çalışmanın son derece tehlikeli olabileceğini unutmayın; bu prosedürü gerçekleştirirken her zaman eldiven takmak ve iyi havalandırılan bir alanda çalışmak gibi önlemler alınmalıdır.

3-dimensional-resin-casting-imaging-mouse-portal-vein-or-intrahepatic

Research

JoVE Journal

Medicine

Tıp

Bu makalede, biz gerçekleştirmek için kolay ve görüntü yetişkin fare beyin damar ağacı kullanılabilir serebrovasküler döküm için basit ve pratik bir tekniği mevcut.

3D Görüntüleme ve Morfolojik Analizi Yetişkin Mouse Serebrovasküler Döküm

Bu videoda, 3D biliyer mimariyi anlamak için safra sistemi reçine dökümü prosedürü açıklanmaktadır. Bu teknik, karaciğer rejenerasyon analizi için kullanılabilecek safra sisteminin iç çapı ve ağ bağlantısı hakkında bilgi sağlar.

Biliyer Sistem Reçine Dökümü: Radyoopak Reçine Enjeksiyonu Kullanarak Murin Modelinde Biliyer Sistemin 3D Mimarisini Analiz Etmek İçin Bir Teknik

Vasküler rejenerasyonu görselleştirmek için kullanılan aletler, vasküler ağaçları kontrastlamak için yöntemler gerektirir. Bu film, vasküler ağaçların optimal kontrastını elde etmek için kullanılan hassas bir enjeksiyon tekniğini gösterdi ve elde edilen örneğin μCT ve histolojik seri kesitler kullanılarak ayrıntılı bir analizinden kaynaklanan potansiyel faydaları gösterdi.

Normal Farelerde% 70 hepatektomi sonrası Vasküler ve Parankimal Rejenerasyon görselleştirme

Meme tümör hücrelerinin portal ven enjeksiyonu yoluyla murin karaciğerine iletilmesi için cerrahi bir prosedür geliştirilmiştir. Bu model, tümör hücresi ekstravazasyonu, tohumlama, sağkalım ve karaciğerde metastatik büyüme dahil olmak üzere tamamen immün yetkin bir konakta karaciğer metastazının geç aşamalarının araştırılmasına izin verir.

Bir Portal Ven Enjeksiyon Modeli Karaciğer Metastazı Meme Kanseri Eğitim için

Bu tekniğin amacı, erken postnatal ve erişkin farelerin pulmoner arter ağlarının akciğer şişmesi yoluyla ex vivo görselleştirilmesi ve pulmoner arter yoluyla radyoopak polimer bazlı bileşiğin enjeksiyonudur. Döküm dokular için potansiyel uygulamalar da tartışılmıştır.

Mikro-BT Görüntüleme için Erişkin ve Erken Postnatal Fare Akciğerlerinin Vasküler Döküm

Kolorektal kanser (KRK) organoidlerinin portal ven enjeksiyonu stroma bakımından zengin karaciğer metastazı oluşturur. CRC hepatik metastazının bu fare modeli, tümör-stroma etkileşimlerini incelemek ve adeno ilişkili virüs aracılı gen terapileri gibi yeni stroma yönelimli terapötikler geliştirmek için yararlı bir araçtır.

Karaciğer Metastazı Stromasını İncelemek için Kolorektal Kanser Organoidlerinin Portal Ven Enjeksiyonu

Çift reçine döküm mikro hesaplamalı tomografi veya DUCT, organ mimarisinin 3D analizini kolaylaştırmak için aynı anda iki borulu sistemin görselleştirilmesini, dijitalleşmesini ve segmentasyonunu sağlar. DUCT, iki radyopak reçinenin ex vivo enjeksiyonunu ve ardından tomografik verilerin mikro bilgisayarlı tomografi taramasını ve segmentasyonunu birleştirir.

DUCT: Çift Reçine Dökümü ve ardından 3D Karaciğer Analizi için Mikro Bilgisayarlı Tomografi

Mevcut protokol, alkolsüz steatohepatit (NASH) sırasında hücre dışı matriks (ECM) yeniden şekillenmesinin dinamiklerini görselleştirmek için güvenilir bir platform oluşturmak üzere karaciğer in situ perfüzyon / desellülarizasyon ve iki foton mikroskopi yöntemlerini optimize etmektedir.

Alkolsüz Steatohepatitin Bir Fare Modelinde Karaciğer Hücre Dışı Matriksin 3D Görüntülenmesi

Biliyer atrezinin (BA) virüs kaynaklı karaciğer fibrozis mekanik çalışması için uygun bir hayvan modeli ve gelecekteki BA tedavileri için bir platform sağlayan kronik karaciğer fibrozisinin fare modelini oluşturduk.

Biliyer atrezi çalışması için kronik karaciğer fibrozisinin bir fare modeli

Bu protokolde, farelerde başarılı bir ortotopik karaciğer transplantasyonu (OLT) modelinin uygulanmasını tartışıyoruz. Ek olarak, bir farede başarılı OLT'den sonra allogreft açıklığını daha fazla analiz etmek için adjuvanlar, özellikle mikrobilgisayarlı tomografi (mikroBT) taramaları kullanılarak tartışılmaktadır.

Mikrobilgisayarlı Tomografi Anjiyografi Kullanan Farelerde Başarılı Ortotopik Karaciğer Nakli

Bu protokol, canlı farelerin intravital mikroskopisi (IVM) için hızlı ve akut deneyler için doku stabilitesini artıran son teknoloji ve Yeniden Kullanılabilir Hepatik Görüntüleme Aracı (RHIT) sunmaktadır. RHIT'in 3D baskılı tasarımı, maliyet etkin üretim, ölçeklenebilirlik ve çok yönlülük sunar; böylece farklı boyuttaki farelerde metabolik süreçlerin uzun süreli gözlemlenmesini mümkün kılar.

Yeniden Kullanılabilir Hepatik Görüntüleme Aracı: Hepatik İntravital Mikroskopi İçin Yeniden Kullanılabilir 3D Baskılı Bir Araç

Öğrenin, fare karaciğer portal ven veya intrahepatik safra sisteminin 3 boyutlu reçine döküm yöntemiyle görüntülenmesini. Bu teknik, damar ve kanal yapılarının bütünsel mimarisinin in situ görselleştirilmesini sağlar.

3-Boyutlu Reçine Döküm ve Fare Portal Ven veya intrahepatik safra Sisteminin Görüntüleme

Daha fazla video keşfet