Name: Bioluminescent Bakteriyel Görüntüleme In Vivo (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-11-04T23:00:00.000+00:00
Duration: 5 min 6 s
Description: Öğrenin, farelerde bakteri trafiğini biyolüminesans görüntüleme ile in vivo izleme yöntemini. Bu teknik, tümör ksenogreftlerinde bakteri büyümesini tespit ederek kanser tedavisi için bakterilerin vektör olarak kullanım potansiyelini gösterir.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Yazarlar Avrupa Komisyonu Yedinci Çerçeve Programı (PIOF-GA-2009-255466) ve İrlanda Sağlık Araştırma Kurulu&#39;nun (HRA_POR/2010/138) Bu yazının ilgili destek kabul etmek istiyoruz. Lux etiketli E. coli Dr Cormac Gahan, University College Cork bir tür hediye oldu.

1. Tümör İndüksiyon <ol><li> Rutin tümör indüksiyon için, serum içermeyen kültür ortamı 200 ul içinde süspansiye edilmiş hücreler asgari tümörojenik doz serbest enfeksiyonun yan 6-8 haftalık dişi Balb / C veya atimik fareler içine MF1-nu/nu (sc) deri altından enjekte edilmiştir n 21-gauge enjektör iğnesi kullanarak = 6 (Harlan, Oxfordshire, UK) (1 x 10 6 4T1 hücreleri). Bir haemocytometer ve tripan mavi boyasıyla çıkarma (Gibco) kullanılarak görsel sayımı ile belirlenir olarak aşılama için kullanılan hücre canlılığı% 95&#39;ten daha fazla idi. </li><li> Tümör kurulmasının ardından, tümörleri büyümeye ve gelişmeye izin verildi ve iki haftalık takip edildi. Tümör hacmi tümörün en uzun çapı ve b çapı için en uzun çapı dik olan ve formül V = (ab 2) Π / 6, göre hesaplanmıştır. </li></ol> 2. Bakteriyel Hazırlık <ol><li> Bu protoco kullanılan bakteri suşul E. oldu coli K-12 MG1655, non-protein-toksin salgılayan bakterileri tarafından tespit edilmesini sağlar bir luxABCDE kodlama plazmid barındıran, zorlanma BLI. E. Entegre luxABCDE içeren coli MG1655, 37 aerobik olarak yetiştirilen ° C LB ortamı (Sigma-Aldrich, İrlanda) 300 ug / ml eritromisin (Em) ile desteklenmiştir. MG1655 ve bioluminescent türevi plazmid p16S lux bünye P YARDIM luxABCDE operon 1 içeren kullanılarak oluşturuldu. </li><li> Fareler için uygulama için hazırlanması için, kültürler orta log fazı (600 nm&#39;de optik yoğunluk) 200 rpm&#39;de bir çalkalama kabında 37 ° C&#39;de LB ortamı içinde inkübe edildi. Bakteriler, (6000 x g 5 dakika) santrifüj ile toplanır, PBS (Sigma) ile yıkanmış ve PBS içinde seyreltilmiş ve 1 x 10 7 koloni oluşturan birim (CFU) / intravenöz için mL, ya da gavaj için 1 x 10 10. </li></ol> 3. Bakteriyel Dairesition <ol><li> Tümör hacmi yaklaşık 100 mm 3 ulaştığı zaman fareler rasgele deney grubuna ayrıldı. Intravenöz için, ölçülü fareler her bir 28G şırınga iğnesi kullanarak lateral kuyruk ven içine doğrudan enjekte 100 ul 10 6 hücre aldı. Her bir inokulum canlı sayımı geriye dönük kaplama ile tespit edilmiştir. </li><li> GYTE kolonizasyon çalışmaları için 10 9 bakteri hücrelerinin oral üç gün üst üste, gavaj yoluyla fare başına 100 ul uygulanmıştır. Önceden mevcut komensal bakteri seviyeleri önce ağızdan sonda 1 başlamasından 7 gün için fare içme suyu içinde 5 mg / ml streptomisin ilavesiyle besleme önce düşürülmüştür. </li></ol> 4. Biyoparlaklık Görüntüleme <ol><li> In vivo BLI görüntüleme 2B IVIS100 (Kaliper) kullanılarak yapıldı. Tanımlanmış zaman noktalarında sonrası bakteriyel yönetimi olarak, farelerin Kaliper en XGI-8 Gaz Anestezi kullanarak uyutulduktan% 3 Isofluorane, ve tüm-vücut görüntü analiz sistemi ile yüksek duyarlılık 2-5 dakika boyunca sistem 100 IVIS uygulandı. </li><li> 3D görüntüleme için, anestezi fareler dorsal görüntüleme için optik görüntüleme sistemi (IVIS Spektrum, kaliper) içinde bir fare görüntüleme servis yerleştirildi. 3D optik rekonstrüksiyon için bakteriyel lusiferaz sinyalinin görüntü elde etmek için, 500-580 nm arasında değişen emisyon filtresi dalga gürültü oranı sinyali maksimize etmek için filtre başına 3-4 dk bin 16 edinimi kez kullanılmıştır. Bu görüntü elde etme sırası bir parçası olarak, yapılandırılmış bir ışık görüntü yükseklik haritası tanımlamak için elde edilmiştir. Bu harita giriş diffüz ışık görüntüleme tomografi (DLIT) negatif olmayan en küçük kareler optimizasyon 2 kullanarak bir 3D optik görüntü oluşturmak için kullanılan rekonstrüksiyon algoritmaları oldu. </li><li> Görüntü Analizi: ilgi bölgeler belirlenmeli ve Yaşam Image yazılımı (Kaliper) kullanılarak ölçüldü. </li></ol> 5. TemsilciSonuçlar Bu çalışmada, patojenik olmayan ortakçı bakteri E.coli K-12 MG1655 luxABCDE operon ifade IV sc 4T1 ksenogreft tümörleri taşıyan farelere uygulandığında oldu. Bakteriyel lux sinyalinin farelerde tümörlerin özellikle saptandı sonrası IV-yönetim (Şekil 2). Örnek fareler elde edilen bakteri kültürü iyileşme uygun bakteri sayısı ve tespit ışık miktarı (Şekil 3) arasında doğrusal bir ilişki varlığını doğrular. GIT içinde oral olarak uygulandığında, bakterilere ve in vivo olarak da 3D BLI kullanılarak elde edilir. <img src="/files/ftp_upload/4318/4318fig1.jpg" alt="Şekil 1" fo:content-width="4in" fo:src="/files/ftp_upload/4318/4318fig1highres.jpg"/> Şekil 1. Protokol Timeline. Subkutan tümörler farelerde indüklenen ve bakteriler tümör gelişimi (100 mm 3) üzerine uygulanır. Canlı fareler BLI im vardırçeşitli zaman noktalarında sonrası bakteriyel idaresi (oklar tipik kez gösterilecek) de yaş. <img src="/files/ftp_upload/4318/4318fig2.jpg" alt="Şekil 2," /> Şekil 2. E. İdaresi Tümör taşıyan fareler için coli MG1655 luxABCDE. Subkutan 4T1 tümörlerin MF1 nu / nu farelerine ve E&#39;de indüklenen edildi coli MG1655 luxABCDE tümör gelişimi üzerine uygulanmıştır. Her hayvan lateral kuyruk ven içine doğrudan enjekte 10 6 hücre aldı. Fare örnek kurban farelerde tümör canlı bakteri sonraki kurtarma (cfu) ile çalışma sırasında dört zaman noktalarında (siyah noktalar z ekseni ve görüntüler) (çubuk grafik) de görüntülendi. Bakteriyel numaraları ve özellikle tümörlerde zaman (temsilcisi fare zaman noktası başına resimli) üzerinde saptandı plazmid gen ekspresyonu artış. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/4318/4318fig2large.jpg" target="_blank">büyük bir rakam görmek için buraya tıklayın</a> .<img src="/files/ftp_upload/4318/4318fig3.jpg" alt="Şekil 3" /> Şekil 3,. İntratümöral Bakteriyel Numaraları Ve Biyoparlaklık Arasındaki İlişki. Canlı bakteri tümörleri çeşitli zaman noktalarında sonrası intravenöz az BLI izleyen tümörlerden ex vivo bakteriyel kültür tarafından numaralandırılan. In vivo bioluminesce birimleri göre bakteri sayı değerleri (cfu), oturum grafikle edilir. Bakteri sayımı ve bakteriyel biyolüminesans sinyalleri arasında sağlam bir ilişki gözlenmektedir R 2 = 0,9717 1. <img src="/files/ftp_upload/4318/4318fig4.jpg" alt="Şekil 4," /> Şekil 4. Mürin gastrointestinal 3D IVIS Görüntü E. tarafından kolonileştirildiğini coli MG1655. farelerin GYTE E. 10 9 cfu oral tarafından kolonize edildi üç gün üst üste coli. Kolonize fare 3D tomografi alınan bir numuneden izole görüntü gösterilir.3 boyutlu görüntüler anatomik kayıt sağlanmasında iskeletin bir dijital fare atlası göstermektedir. E. coli MG1655 biyolüminesans düşük yeşil görünür, ve yüksek düzeyde mor.

<ol><li>Cronin, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High+resolution+in+vivo+bioluminescent+imaging+for+the+study+of+bacterial+tumour+targeting%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">High resolution in vivo bioluminescent imaging for the study of bacterial tumour targeting.</a> PLoS One. 7, e30940(2012).</li>
<li>Kuo, C., Coquoz, O., Troy, T. L., Xu, H., Rice, B. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Three-dimensional+reconstruction+of+in+vivo+bioluminescent+sources+based+on+multispectral+imaging%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Biomed.+Opt%22%5BJournal%5D)">Three-dimensional reconstruction of in vivo bioluminescent sources based on multispectral imaging.</a> J. Biomed. Opt. 12, 024007(2007).</li>
<li>Tangney, M., Ahmad, S., Collins, S. A., O'Sullivan, G. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gene+therapy+for+prostate+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Postgrad+Med%22%5BJournal%5D)">Gene therapy for prostate cancer.</a> Postgrad Med. 122, 166-180 (2010).</li>
<li>Morrissey, D., O'Sullivan, G. C., Tangney, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tumour+targeting+with+systemically+administered+bacteria%5BTitle%5D)+AND+%22Curr.+Gene+Ther%22%5BJournal%5D)">Tumour targeting with systemically administered bacteria.</a> Curr. Gene Ther. 10, 3-14 (2010).</li>
<li>Collins, S. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Viral+vectors+in+cancer+immunotherapy%3A+which+vector+for+which+strategy%5BTitle%5D)+AND+%22Curr.+Gene+Ther%22%5BJournal%5D)">Viral vectors in cancer immunotherapy: which vector for which strategy.</a> Curr. Gene Ther. 8, 66-78 (2008).</li>
<li>Yu, Y. A., Zhang, Q., Szalay, A. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Establishment+and+characterization+of+conditions+required+for+tumor+colonization+by+intravenously+delivered+bacteria%5BTitle%5D)+AND+%22Biotechnol.+Bioeng%22%5BJournal%5D)">Establishment and characterization of conditions required for tumor colonization by intravenously delivered bacteria.</a> Biotechnol. Bioeng. 100, 567-578 (2008).</li>
<li>Baban, C. K., Cronin, M., O'Hanlon, D., O'Sullivan, G. C., Tangney, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bacteria+as+vectors+for+gene+therapy+of+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Bioeng.+Bugs%22%5BJournal%5D)">Bacteria as vectors for gene therapy of cancer.</a> Bioeng. Bugs. 1, 385-394 (2010).</li>
<li>Cronin, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Orally+administered+bifidobacteria+as+vehicles+for+delivery+of+agents+to+systemic+tumors%5BTitle%5D)+AND+%22Mol.+Ther%22%5BJournal%5D)">Orally administered bifidobacteria as vehicles for delivery of agents to systemic tumors.</a> Mol. Ther. 18, 1397-1407 (2010).</li>
<li>van Pijkeren, J. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+Listeria+monocytogenes-based+DNA+delivery+system+for+cancer+gene+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Hum.+Gene+Ther%22%5BJournal%5D)">A novel Listeria monocytogenes-based DNA delivery system for cancer gene therapy.</a> Hum. Gene Ther. 21, 405-416 (2010).</li>
<li>Ahmad, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Induction+of+effective+antitumor+response+after+mucosal+bacterial+vector+mediated+DNA+vaccination+with+endogenous+prostate+cancer+specific+antigen%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Urol%22%5BJournal%5D)">Induction of effective antitumor response after mucosal bacterial vector mediated DNA vaccination with endogenous prostate cancer specific antigen.</a> J. Urol. 186, 687-693 (2011).</li>
<li>Riedel, C. U., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Improved+luciferase+tagging+system+for+Listeria+monocytogenes+allows+real-time+monitoring+in+vivo+and+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22Appl+Environ+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Improved luciferase tagging system for Listeria monocytogenes allows real-time monitoring in vivo and in vitro.</a> Appl Environ Microbiol. 73, 3091-3094 (2007).</li>
<li>Cheng, C. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tumor-targeting+prodrug-activating+bacteria+for+cancer+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Gene+Ther%22%5BJournal%5D)">Tumor-targeting prodrug-activating bacteria for cancer therapy.</a> Cancer Gene Ther. 15, 393-401 (2008).</li>
<li>Foucault, M. L., Thomas, L., Goussard, S., Branchini, B. R., Grillot-Courvalin, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+bioluminescence+imaging+for+the+study+of+intestinal+colonization+by+Escherichia+coli+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Appl.+Environ.+Microbiol%22%5BJournal%5D)">In vivo bioluminescence imaging for the study of intestinal colonization by Escherichia coli in mice.</a> Appl. Environ. Microbiol. 76, 264-274 (2010).</li>
<li>Collins, S. A., Hiraoka, K., Inagaki, A., Kasahara, N., Tangney, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((PET+Imaging+For+Gene+%26+Cell+Therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Curr.+Gene+Ther%22%5BJournal%5D)">PET Imaging For Gene & Cell Therapy.</a> Curr. Gene Ther. , (2012).</li>
<li>Tangney, M., Francis, K. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+Optical+Imaging+in+Gene+%26+Cell+Therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Curr.+Gene+Ther%22%5BJournal%5D)">In vivo Optical Imaging in Gene & Cell Therapy.</a> Curr. Gene Ther. , (2012).</li>
</ol>

Çıkar çatışması ilan etti.

Gen terapi bağlamında, hasta için terapötik gen ulaştırılması için biyolojik ajanların kullanımı büyük söz 3-5 göstermiştir. Gibi virüsler, bakteriler ve doğal biyolojik özelliklerini, özellikle kanser bağlamında, hücreler ya da dokulara etkili DNA aktarma izin verir. Bakterilerin doğal olarak yeteneğine sahip olduğu gösterilmiştir için sistemik olarak ya da lokal olarak replikasyon dış, yüksek düzeyde (invazif olmayan türler) ya da tümör hücreleri (patojen) içinde idare edilen tümörler için yuvalandırma. Kan...

<table border="1"><tbody><tr><td> Reaktif Adı </td><td> Şirket </td><td> Katalog numarası </td><td> Yorumlar </td></tr><tr><td> 4T1 hücre çizgisi </td><td> ATCC </td><td> CRL-2539 </td><td> Kendiliğinden ortaya çıkan alınan BALB / c meme tümörü türetilen sinjenik meme kanseri modelinde </td></tr><tr><td> DMEM </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> D6429 </td><td> Dulbecco Modifiye Kartal Orta </td></tr><tr><td> PBS </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> D8537 </td><td> Fosfat Tamponlu Salin </td></tr><tr><td> Xenogen IVIS </td><td> Kaliper Yaşam Bilimleri </td><td></td><td> 2D görüntüleme için IVIS 100; 3D için IVIS Spektrum. </td></tr><tr><td> Luria Broth Miller (LB) </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> L2542 </td><td> E. Büyüme orta coli </td></tr&gt; <tr><td> Eritromisin </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> E5389 </td><td> Antibiyotik </td></tr><tr><td> Streptomisin </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> S9137 </td><td> Antibiyotik </td></tr><tr><td> MF1nu/nu fareler </td><td> Harlan (UK) </td><td> 069 (nu) / 070 (nu / +) </td><td> HSD: atimik Nude-Foxn1nu </td></tr><tr><td> Balb / c fareleri </td><td> Harlan (UK) </td><td> 066 </td><td> Haplotipi: H-2 d </td></tr><tr><td> Gavaj iğne </td><td> Vet-tech Solutions (UK) </td><td> DE009 </td><td> 22G x 38mm düz gavaj iğnesi </td></tr><tr><td> IV enjeksiyon için Şırınga </td><td> BD BioSciences&#39;ı </td><td> 309309-1 mL </td><td> 28 G x ½ inç mikro-ince IV iğne ile insülin şırınga. </td></tr><tr><td> Tümör inokülasyon için Şırınga </td><td> Braun </td><td> 9161376V </td><td> Omnifix 26 G x &amp;frac12; inç iğne </td></tr></tbody></table>

bioluminescent bakteriyel görüntüleme<em&gt; in vivo</em

Bioluminescent Bacterial Imaging In Vivo

Bu video kanseri için gen ve hücre tedavisi bakterilerin kullanımı ile ilgili bir vurgu ile, canlı farelerde bakteriyel ticareti çalışma için tüm vücut bioluminesce görüntüleme (BLI) kullanımı anlatılmaktadır. Bakteriler sistemik uygulamayı takiben tümörler içinde tercihen büyümek için doğal bir yeteneği sahip, kanser tedavisi için vektör çekici bir sınıf mevcut. Bakteriler bakteri ve aynı zamanda tümörün sitelerin lux gen kasetinin izni BLI algılama ifade için tasarlanmıştır. Zaman içinde tümörler içinde yer ve bakteri düzeylerini kolayca kontrol edilebilir, iki ya da üç boyutlu olarak gözlemlenmiştir. Yöntem bakteri türleri ve tümör ksenogreft türleri geniş bir aralığı için geçerlidir. Bu makale, subkutan tümör taşıyan fareler içinde biyolüminesans bakteri analizi için protokol açıklanmaktadır. BLI ile gastrointestinal sistem (GIT) içinde bakterilere görselleştirilmesi de tarif edilmektedir. Bu güçlü ve ucuz, gerçek zamanlı görüntüleme stratejisi temsilcisits belirli kanser, özellikle gen tedavisi araştırma, ve enfeksiyöz hastalık bağlamında in vivo bakteri çalışma için ideal bir yöntem. Bu video lux-etiketli E. incelemek için prosedür ana hatlarıyla IVIS sistemi ile mekansal ve zamansal okuma başarılabilir kullanan BLI gösteren canlı farelerde coli.

Bu makale idaresi anlatılmaktadır<em&gt; Lux-etiketlendi</em&gt; Fareler bakteri ve sonraki<em&gt; In vivo</emIVIS biyolüminesans görüntüleme kullanılarak&gt; analizi.

Bioluminescent Bakteriyel Görüntüleme<em&gt; In Vivo</em

Bu video, ... kullanımına vurgu yaparak, canlı farelerde bakteriyel trafiğin incelenmesi için tüm vücut biyolüminesans görüntüleme (BLI) yönteminin kullanımını açıklamaktadır.

Bu video, canlı farelerde bakteriyel trafiğin incelenmesinde tüm vücut biyolüminesans görüntülemenin kullanımını, özellikle tümör ksenogreftleri içindeki bakteriyel büyümenin tespitine odaklanarak açıklamaktadır. Bakteriler, intravenöz uygulama sonrası tümör hücrelerinin dışında veya içinde büyüyerek, öncelikli olarak tümörler içerisinde büyüme konusundaki doğal yetenekleri sayesinde kanser tedavisi için çekici bir vektör sınıfı oluştururlar. Lux gen kasetini eksprese edecek şekilde mühendisliği yapılmış bakteri suşları, hem bakterilerin hem de eş zamanlı olarak tümörlerin tespitini kolaylaştırır. Bakteri suşlarının in vivo non-invaziv boylamsal izleminin değeri, hayvan kullanımını azaltması ve uç nokta analizlerine kıyasla istatistiksel olarak daha anlamlı veriler üretmesi nedeniyle genel kabul görmektedir.Bu prosedür, farelerde deri altı tümörlerin indüklenmesini içerir. Tümörlerin gelişmesine izin verilir ve zaman içinde izlenir. Burada açıklanan deneyler için bakteriler uygulanır ve farelere belirlenen zaman noktalarında biyolüminesans görüntüleme yapılır.İmmün yetkin veya timik arka plana sahip farelerde deri altına tümörler indüklenir. Ksenogreft seçimine bağlı olarak, e coli gibi istenen türdeki Lux tipi bakteriler gece boyu kültürlerinde büyütülür. Bakteriyel hücreler yıkanır ve intravenöz uygulama için istenen konsantrasyonda yeniden süspanse edilir.10⁶. 100 µL'lik bir enjeksiyon hacmindeki bakteriyel hücreler rutin olarak kullanılır. Rutin olarak 100 mm³ hacminde subkutan tümörü olan fareler tedaviye hazırlanır.29 gauge bir şırınga iğnesi kullanılarak, bakteri süspansiyonu lateral kuyruk venine enjekte edilir. Bakteriler zamanla tümör kitlesi içerisinde öncelikli olarak çoğalır. Tümör içi bakteriler birkaç hafta boyunca çoğalmaya devam eder ve üç ile altı gün arasında IVUS görüntüleme ile tespit edilebilirler.Uygulama sonrası biyolüminesans görüntüleme için canlı ve anestezi altındaki fareler, IVIS'in 37 derece olan haznesine yerleştirilir. İstenirse, aynı anda birkaç fare görüntülenebilir. İstenen yazılım ayarları kullanılarak, soğutmalı bir CCD kamera ile fotoğraf ve lüminesans ışık görüntüleri toplanır.Görüntüleme cihazına bağlı olarak, iki veya üç boyutlu analiz gerçekleştirilebilir. İntratümöral bakteri sayıları ile üretilen ışık seviyeleri arasında güçlü ve lineer bir ilişki kurulması, güvenilir bir kestirime olanak tanır. İn vivo bakteriyel sayıların tahmini mümkündür; ayrıca LX eksprese eden bakteriler vücudun derinliklerinden de tespit edilebilir.Lux eksprese eden bağırsak kolonize komensal bakteriler birkaç hafta boyunca görüntülenir. Kavaj uygulaması sonrası süreç, araştırma hayvanlarındaki lux eksprese eden bakterilerin analizi için biyolüminesans görüntülemenin faydasını daha da kanıtlamaktadır.

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

İmmünoloji ve Enfeksiyon

Yaşayan hayvanların bakteriyel enfeksiyonlar biyoparlaklık görüntüleme yöntemleri açıklanmıştır. Patojenler, canlı hayvanlarda enfeksiyon optik tüm vücut görüntüleme sağlayan lusiferaz ifade etmek için modifiye edilmiştir. Hayvan modelleri lusiferaz ifade patojenler ile enfekte olan ve hastalık ortaya çıkan ders biyoparlaklık görüntüleme ile gerçek zamanlı olarak görüntülenebilmekte.

Farelerde Görüntü Bakteriyel Enfeksiyonlar Lusiferaz Kullanımı

Bu yazıda onların büyüme ve metastaz sırasında metastatik meme kanseri hücrelerinde ifade böceği ve Renilla lusiferaz enzimler hem bioluminescent reaksiyonları, inşa görselleştirmek ve ölçmek için yöntemler...

Vivo Çift Yüzey Bioluminescent Imaging&#39;de

Kaynak: de Vries, C. R. ve ark., Kronik Pseudomonas aeruginosa Yara Enfeksiyonunun Gecikmiş Aşılama Modeli. J. Vis. Exp. (2020).Bu video, canlı bir fare modelinde bakteriyel enfeksiyon ilerlemesini izlemek için biyolüminesans görüntüleme tekniğini gösteriyor. LuxABCDE raporlayıcı sistemiyle tasarlanmış patojenik bakteriler, enfeksiyon bölgesinde ışık yayarak metabolik olarak aktif bakterilerin görselleştirilmesini sağlar. Araştırmacılar, fareyi zamanla görüntülemekle, enfeksiyon dinamiklerini...

Farelerde Bakteriyel Enfeksiyonların Biyolüminesans Görüntülemesi

Kaynak: Valentine, M. E. ve diğerleri, Pseudomonas aeruginosa'da Çerçeve İçi Gen Silinme Mutantlarının Üretimi ve Basit Fare Enfeksiyon Modelinde Virulans Zayıflamasının Testi. J. Vis. Exp. (2020)Bu video, canlı bir fare modelinde bakteriyel enfeksiyonu izlemek için biyolüminesans tabanlı görüntüleme yaklaşımının kullanıldığını göstermektedir. Ardışık biyolüminesans ve X-ışını görüntüleme, konak genelinde yayılan enfeksiyonun gerçek zamanlı görselleştirmesi ve anatomik lokalizasyonu mümkün...

Biyolüminesans kullanarak fare modelinde bakteriyel enfeksiyonun gerçek zamanlı görüntülemesi

Kaynak: Wang, Y. ve diğerleri. In Vivo'da Çoklu ilaç dirençli Acinetobacter baumannii yanık enfeksiyonlarında biyolüminesans görüntüleme kullanılarak antimikrobiyal mavi ışık tedavisinin araştırılması. J. Vis. Exp. (2017)Bu video, biyolüminesans operon taşıyan Acinetobacter baumannii aşılanmış farelerde yanık yarası enfeksiyonlarının görüntülenme prosedürünü göstermektedir. Lusiferaz katalizli alt oksidasyonun, bakteriyel yüke orantılı ışık üretmesini ve enfeksiyonun ilerlemesinin...

Farelerde Acinetobacter baumannii enfekteli yanık yaralarının biyolüminesans görüntülemesi

Staphylococcus aureus bir biyolojik olarak ışık veren mühendislik suşu kullanılarak, ortopedik protez enfeksiyonun bir fare modelinde, optik ve uCT görüntüleme birlikte, invaziv olmayan uzunlamasına ve bakteriyel enfeksiyonun dinamikleri, hem de karşılık gelen enflamatuar yanıtı ve anatomik değişiklikleri izlemek için bir kapasite sağlamadığı Kemik.

Kombine<em&gt; In vivo</em&gt; Optik ve uCT Görüntüleme Farelerde bir Ortopedik İmplant Enfeksiyon Enfeksiyon, Enflamasyon ve Kemik Anatomisi Monitör

Çok ilaca dirençli (MDR) bakteri suşlarının neden olduğu enfeksiyonlar, halk sağlığı için ciddi bir tehdit olarak ortaya çıkmış ve alternatif terapötiklerin geliştirilmesini gerektirmiştir. Biyolüminesans görüntüleme kullanarak fare yanıklarında MDR Acinetobacter baumannii enfeksiyonları için antimikrobiyal mavi ışık (aBL) tedavisinin etkinliğini değerlendirmek için bir protokol sunuyoruz.

Çok ilaca dirençli için Antimikrobiyal Mavi Işık Tedavisinin Vivo İncelenmesinin Acinetobacter baumannii Biyoparlaklık ımaging&#39;i kullanarak Enfeksiyonlar Yanık

Bir fare modeli enterohemorrhagic bioluminescence etiketli bakteri kullanarak E. coli (EHEC) kolonizasyon için detaylı bir protokol sunulmuştur. Kollarındaki bu bakteriler tarafından bir non-invaziv görüntüleme sistemi içinde canlı hayvan vivo içinde tespiti geçerli anlayışımız EHEC kolonizasyon ilerletebilirsiniz.

Non-invaziv Vivo içinde Bioluminescence sistemi tarafından fare konak Enterohemorrhagic Escherichia Coli kolonizasyon algılama

Kollarındaki bakteri gibi çekirdek algılama mekanizmaları, çeşitli aracılığıyla ışık üretim düzenler. Bu roman yöntemi bioluminescence in situ incelenmesi ve hücre yoğunluğu için ışık emisyon korelasyon sağlar. Bir yapay kollarındaki Escherichia coli sistemi sağlar lux operons, Lux proteinler ve onların Interplay karakterizasyonu.

Situ Ölçüm ve korelasyon hücre yoğunluğu ve kollarındaki bakterilerin ışık emisyon

Bu protokol, Çift Bioluminesans görüntüleme ile tümör ilerlemesini ve anjiyogenezi gerçek zamanlı olarak izlemek için tümör taşıyan bir fare modelinin kurulması açıklanmaktadır.

Tümör Ilerlemesi ve anjiyogenezinin çift Bioluminescence görüntülenmesi

Burada sağlanan protokol, veri toplama, analiz ve yorumlamaya odaklanarak, Trypanosoma cruzi enfeksiyonunun biyolüminesans modelinde ilaç etkinliği çalışmaları gerçekleştirmek için ayrıntılı adımları açıklamaktadır. Teknik sorunları en aza indirmek için sorun giderme ve kalite kontrol prosedürleri de sağlanmaktadır.

İlaç Etkinliği Çalışmaları için Bir Chagas Hastalığı Fare Modelinin In Vivo Biyolüminesans Görüntülemesinin Gizeminin Çözülmesi

Öğrenin, farelerde bakteri trafiğini biyolüminesans görüntüleme ile in vivo izleme yöntemini. Bu teknik, tümör ksenogreftlerinde bakteri büyümesini tespit ederek kanser tedavisi için bakterilerin vektör olarak kullanım potansiyelini gösterir.

Bioluminescent Bakteriyel Görüntüleme

Daha fazla video keşfet