4 Kasım 2012
Bu makale idaresi anlatılmaktadır Lux-etiketlendi Fareler bakteri ve sonraki In vivo analizi.
Bu video, canlı farelerde bakteriyel trafiğin incelenmesinde tüm vücut biyolüminesans görüntülemenin kullanımını, özellikle tümör ksenogreftleri içindeki bakteriyel büyümenin tespitine odaklanarak açıklamaktadır. Bakteriler, intravenöz uygulama sonrası tümör hücrelerinin dışında veya içinde büyüyerek, öncelikli olarak tümörler içerisinde büyüme konusundaki doğal yetenekleri sayesinde kanser tedavisi için çekici bir vektör sınıfı oluştururlar. Lux gen kasetini eksprese edecek şekilde mühendisliği yapılmış bakteri suşları, hem bakterilerin hem de eş zamanlı olarak tümörlerin tespitini kolaylaştırır. Bakteri suşlarının in vivo non-invaziv boylamsal izleminin değeri, hayvan kullanımını azaltması ve uç nokta analizlerine kıyasla istatistiksel olarak daha anlamlı veriler üretmesi nedeniyle genel kabul görmektedir.
Bu prosedür, farelerde deri altı tümörlerin indüklenmesini içerir. Tümörlerin gelişmesine izin verilir ve zaman içinde izlenir. Burada açıklanan deneyler için bakteriler uygulanır ve farelere belirlenen zaman noktalarında biyolüminesans görüntüleme yapılır.
İmmün yetkin veya timik arka plana sahip farelerde deri altına tümörler indüklenir. Ksenogreft seçimine bağlı olarak, e coli gibi istenen türdeki Lux tipi bakteriler gece boyu kültürlerinde büyütülür. Bakteriyel hücreler yıkanır ve intravenöz uygulama için istenen konsantrasyonda yeniden süspanse edilir.
10⁶. 100 µL'lik bir enjeksiyon hacmindeki bakteriyel hücreler rutin olarak kullanılır. Rutin olarak 100 mm³ hacminde subkutan tümörü olan fareler tedaviye hazırlanır.
29 gauge bir şırınga iğnesi kullanılarak, bakteri süspansiyonu lateral kuyruk venine enjekte edilir. Bakteriler zamanla tümör kitlesi içerisinde öncelikli olarak çoğalır. Tümör içi bakteriler birkaç hafta boyunca çoğalmaya devam eder ve üç ile altı gün arasında IVUS görüntüleme ile tespit edilebilirler.
Uygulama sonrası biyolüminesans görüntüleme için canlı ve anestezi altındaki fareler, IVIS'in 37 derece olan haznesine yerleştirilir. İstenirse, aynı anda birkaç fare görüntülenebilir. İstenen yazılım ayarları kullanılarak, soğutmalı bir CCD kamera ile fotoğraf ve lüminesans ışık görüntüleri toplanır.
Görüntüleme cihazına bağlı olarak, iki veya üç boyutlu analiz gerçekleştirilebilir. İntratümöral bakteri sayıları ile üretilen ışık seviyeleri arasında güçlü ve lineer bir ilişki kurulması, güvenilir bir kestirime olanak tanır. İn vivo bakteriyel sayıların tahmini mümkündür; ayrıca LX eksprese eden bakteriler vücudun derinliklerinden de tespit edilebilir.
Lux eksprese eden bağırsak kolonize komensal bakteriler birkaç hafta boyunca görüntülenir. Kavaj uygulaması sonrası süreç, araştırma hayvanlarındaki lux eksprese eden bakterilerin analizi için biyolüminesans görüntülemenin faydasını daha da kanıtlamaktadır.
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin
Bu makale, canlı farelerde bakteri trafiğini incelemek için tüm vücut biyoluminesan görüntülemenin kullanımını açıklar. Odak noktası, tümör ksenograftlarında bakteri büyümesini tespit etmek, bakterilerin kanser tedavisi için vektörler olarak potansiyelini vurgulamaktır.
Bioluminescent bacterial imaging enables real-time, non-invasive tracking of bacterial trafficking in vivo, supporting preclinical evaluation of bacterial vectors for cancer therapy. This approach reduces animal usage while providing longitudinal, quantitative data on tumor targeting and bacterial persistence. The method enhances predictive confidence in early-stage therapeutic vector development by visualizing spatial and temporal dynamics of bacterial localization within tumors.
The method integrates into the discovery continuum from early vector screening through preclinical validation, enabling iterative design-build-test cycles for bacterial therapeutics.