Name: An In Vitro Hazırlık Aplysianın californica (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-12-05T13:00:00.000+00:00
Duration: 11 min 49 s
Description: Öğrenin, Aplysia californica'da beslenme davranışlarını in vitro ekstraselüler kayıt yöntemiyle nasıl inceleneceğini. Bu teknik sinir ve kas aktivitesini davranışsal hareketlerle ilişkilendirir.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Bu araştırma NIH hibe NS047073 ve NSF hibe DMS1010434 tarafından desteklenmiştir.

<ol><li>Neustadter, D. M., Herman, R. L., Drushel, R. F., Chestek, D. W., Chiel, H. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+kinematics+of+multifunctionality%3A+comparisons+of+biting+and+swallowing+in+Aplysia+californica%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Exp.+Biol%22%5BJournal%5D)">The kinematics of multifunctionality: comparisons of biting and swallowing in Aplysia californica.</a> J. Exp. Biol. 210, 238-260 (2007).</li>
<li>Morton, D. W., Chiel, H. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+buccal+nerve+activity+that+distinguishes+ingestion+from+rejection+can+be+used+to+predict+behavioral+transitions+in+Aplysia%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Comp.+Physiol.+A%22%5BJournal%5D)">In vivo buccal nerve activity that distinguishes ingestion from rejection can be used to predict behavioral transitions in Aplysia.</a> J. Comp. Physiol. A. 172, 17-32 (1993).</li>
<li>Hurwitz, I., Neustadter, D., Morton, D. W., Chiel, H. J., Susswein, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Activity+patterns+of+the+B31%2FB32+pattern+initiators+innervating+the+I2+muscle+of+the+buccal+mass+during+normal+feeding+movements+in+Aplysia+californica%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurophys%22%5BJournal%5D)">Activity patterns of the B31/B32 pattern initiators innervating the I2 muscle of the buccal mass during normal feeding movements in Aplysia californica.</a> J. Neurophys. 75, 1309-1326 (1996).</li>
<li>Cullins, M. J., Chiel, H. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Electrode+fabrication+and+implantation+in+Aplysia+californica+for+multi-channel+neural+and+muscular+recordings+in+intact%2C+freely+behaving+animals%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Vis.+Exp%22%5BJournal%5D)">Electrode fabrication and implantation in Aplysia californica for multi-channel neural and muscular recordings in intact, freely behaving animals.</a> J. Vis. Exp. (40), e1791(2010).</li>
<li>Warman, E. N., Chiel, H. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+new+technique+for+chronic+single+extracellular+recording+in+freely+behaving+animals+using+pipette+electrodes%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci.+Methods%22%5BJournal%5D)">A new technique for chronic single extracellular recording in freely behaving animals using pipette electrodes.</a> J. Neurosci. Methods. 57, 161-169 (1995).</li>
<li>Lu, H., Chestek, C. A., Shaw, K. M., Chiel, H. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Selective+extracellular+stimulation+of+individual+neurons+in+ganglia%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neural+Eng%22%5BJournal%5D)">Selective extracellular stimulation of individual neurons in ganglia.</a> J. Neural Eng. 5, 287-309 (2008).</li>
<li>Church, P. J., Lloyd, P. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Expression+of+diverse+neuropeptide+cotransmitters+by+identified+motor+neurons+in+Aplysia%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Expression of diverse neuropeptide cotransmitters by identified motor neurons in Aplysia.</a> J. Neurosci. 11, 618-625 (1991).</li>
<li>Church, P. J., Lloyd, P. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Activity+of+multiple+identified+motor+neurons+recorded+intracellularly+during+evoked+feedinglike+motor+programs+in+Aplysia%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurophys%22%5BJournal%5D)">Activity of multiple identified motor neurons recorded intracellularly during evoked feedinglike motor programs in Aplysia.</a> J. Neurophys. 72, 1794-1809 (1994).</li>
<li>Nargeot, R. N., Baxter, D. A., Byrne, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Contingent-dependent+enhancement+of+rhythmic+motor+patterns%3A+an+in+vitro+analog+of+operant+conditioning%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Contingent-dependent enhancement of rhythmic motor patterns: an in vitro analog of operant conditioning.</a> J. Neurosci. 17, 8093-8105 (1997).</li>
<li>Kandel, E. R. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aKandel%2C+ER+%22Behavioral+biology+of+Aplysia%22">Behavioral biology of Aplysia</a>. , Freeman. San Francisco. (1979).</li>
<li>Scott, M. L., Govind, C. K., Kirk, M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neuromuscular+organization+of+the+buccal+system+in+Aplysia+californica%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Comp.+Neurol%22%5BJournal%5D)">Neuromuscular organization of the buccal system in Aplysia californica.</a> J. Comp. Neurol. 312, 207-222 (1991).</li>
<li>Susswein, A. J., Rosen, S. C., Gapon, S., Kupfermann, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+buccal+motor+programs+elicited+by+a+cholinergic+agonist+applied+to+the+cerebral+ganglion+of+Aplysia+californica%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Comp.+Physiol.+A%22%5BJournal%5D)">Characterization of buccal motor programs elicited by a cholinergic agonist applied to the cerebral ganglion of Aplysia californica.</a> J. Comp. Physiol. A. 179, 509-524 (1996).</li>
<li>Kupfermann, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Feeding+behavior+in+Aplysia%3A+A+simple+system+for+the+study+of+motivation%5BTitle%5D)+AND+%22Behav.+Biol%22%5BJournal%5D)">Feeding behavior in Aplysia: A simple system for the study of motivation.</a> Behav. Biol. 10, 1-26 (1974).</li>
<li>Morton, D. W., Chiel, H. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+timing+of+activity+in+motor+neurons+that+produce+radula+movements+distinguishes+ingestion+from+rejection+in+Aplysia%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Comp.+Physiol.+A%22%5BJournal%5D)">The timing of activity in motor neurons that produce radula movements distinguishes ingestion from rejection in Aplysia.</a> J. Comp. Physiol. A. 173, 519-536 (1993).</li>
<li>Weiss, K. R., Chiel, H. J., Koch, U., Kupfermann, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Activity+of+an+identified+histaminergic+neuron%2C+and+its+possible+role+in+arousal+of+feeding+behavior+in+semi-intact+Aplysia%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Activity of an identified histaminergic neuron, and its possible role in arousal of feeding behavior in semi-intact Aplysia.</a> J. Neurosci. 6, 2403-2415 (1986).</li>
<li>Jing, J., Weiss, K. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Generation+of+variants+of+a+motor+act+in+a+modular+and+hierarchical+motor+network%5BTitle%5D)+AND+%22Curr.+Biol%22%5BJournal%5D)">Generation of variants of a motor act in a modular and hierarchical motor network.</a> Curr. Biol. 15, 1712-1721 (2005).</li>
<li>Jing, J., Weiss, K. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neural+mechanisms+of+motor+program+switching+in+Aplysia%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Neural mechanisms of motor program switching in Aplysia.</a> J. Neurosci. 21, 7349-7362 (2001).</li>
<li>Morgan, P. T., Jing, J., Vilim, F. S., Weiss, K. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Interneuronal+and+peptidergic+control+of+motor+pattern+switching+in+Aplysia%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurophysiol%22%5BJournal%5D)">Interneuronal and peptidergic control of motor pattern switching in Aplysia.</a> J. Neurophysiol. 87, 49-61 (2002).</li>
<li>Jing, J., Cropper, E. C., Hurwitz, I., Weiss, K. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+construction+of+movement+with+behavior-specific+and+behavior-independent+modules%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">The construction of movement with behavior-specific and behavior-independent modules.</a> J. Neurosci. 24, 6315-6325 (2004).</li>
</ol>

Çıkar çatışması ilan etti.

Önceki iş sağlam hayvan ve tür izole ganglionlar azaltılmış hazırlıklarda, Aplysia&#39;nın motorlu programları karakterize etmiştir. Bireysel nöronların kayıtları 5 elde edilmiş olmasına rağmen sağlam hayvan olarak, bu tür deneyler çok zordur, ve elektrotlar beslenme sırasında nörona nörondan taşınamaz. Izole ganglionlar, sinir aktivitesi tarafından indüklenen beslenme hareketleri izlenememektedir. Askıya bukkal kitle hazırlanması bu iki uç arasındaki boşluğu kapatıyor. D...

<table><tbody><tr><td>Sodyum klorür</td><td>Fisher Scientific</td><td>S671</td><td>Biyolojik, Sertifikalı</td></tr><tr><td>Potasyum klorür</td><td>Fisher Scientific</td><td>P217</td><td>Sertifikalı ACS</td></tr><tr><td>Magnezyum klorür hekzahidrat</td><td>Acros Organics</td><td>19753</td><td>99% </td></tr><tr><td>Magnezyum sülfat heptahidrat</td><td>Fisher Scientific</td><td>M63</td><td>Sertifikalı ACS </td></tr><tr><td>Kalsiyum klorür dihidrat</td><td>Fisher Scientifc</td><td>C79</td><td>Sertifikalı ACS </td></tr><tr><td>Glikoz (dekstroz)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>G7528</td><td>BioXtra</td></tr><tr><td>MOPS tamponu</td><td>Acros Organics</td><td>17263</td><td>99%</td></tr><tr><td>Karbakol</td><td>Acros Organics</td><td>10824</td><td>99%</td></tr><tr><td>Sodyum hidroksit</td><td>Fisher Scientific</td><td>SS255</td><td>Sertifikalı</td></tr><tr><td>Hidroklorik asit</td><td>Fisher Scientific</td><td>SA49</td><td>Sertifikalı</td></tr><tr><td>Tek kanallı kapiler cam</td><td>A-M Systems</td><td>6150</td><td></td></tr><tr><td>Flaming-Brown mikropipet çekici model P-80/PC</td><td>Sutter Instruments</td><td></td><td>Kullanılan filament: FT345B</td></tr><tr><td>Emaye kaplı paslanmaz çelik tel</td><td>California Fine Wire</td><td></td><td>0.001D, kaplama h </td></tr><tr><td>Ev tipi Silicone II Yapıştırıcı </td><td>GE</td><td></td><td> </td></tr><tr><td>Duro Quick-Gel hızlı yapıştırıcı </td><td>Henkel corp.</td><td></td><td> </td></tr><tr><td>A-M Systems model 1700 amplifikatör </td><td>A-M Systems</td><td></td><td>Filtre ayarları: sinirler için 300-500 Hz, I2 kası için 10-500 Hz</td></tr><tr><td>Pulsemaster Çok Kanallı Stimülatör</td><td>World Precision Instruments</td><td>A300</td><td></td></tr><tr><td>Stimülasyon İzolatörü</td><td>World Precision Instruments</td><td>A360</td><td></td></tr><tr><td>AxoGraph X</td><td>AxoGraph Scientific</td><td></td><td> </td></tr><tr><td>Veeder-Root Toplam Sayıcı</td><td>Danaher</td><td>C342-0562</td><td></td></tr><tr><td>Altın Konnektör Pinleri</td><td>Bulgin</td><td>SA3148/1</td><td></td></tr><tr><td>Altın Konnektör Yuvaları</td><td>Bulgin</td><td>SA3149/1</td><td></td></tr><tr><td>Sylgard 184 Silikon Elastomer</td><td>Dow Corning</td><td></td><td></td></tr><tr><td>100 x 50 mm Kristalizasyon Kabı</td><td>Pyrex</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Yüksek Vakum Gresi</td><td>Dow Corning</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Pipet Uçları</td><td>Fisher Scientific</td><td>21-375D</td><td></td></tr><tr><td>Minutien Pinleri</td><td>Fine Science Tools</td><td>26002-10</td><td></td></tr><tr><td>Modelleme Kili</td><td>Sargent Art</td><td>22-4400</td><td></td></tr><tr><td>İpek Sütürler</td><td>Ethicon</td><td>K89OH</td><td></td></tr><tr><td>Whisper Hava Pompası</td><td>Tetra</td><td>77849</td><td></td></tr><tr><td>Akvaryum Hortumu</td><td>Eheim</td><td>7783</td><td>12/16 mm</td></tr><tr><td>Elite Hava Taşı</td><td>Hagen</td><td>A962</td><td></td></tr><tr><td>Vannas Yaylı Makas</td><td>Fine Science Tools</td><td>15000-08</td><td></td></tr><tr><td>Dumont #5 İnce Pens</td><td>Fine Science Tools</td><td>11254-20</td><td></td></tr><tr><td>Yaki Sushi Nori Deniz Yosunu</td><td>Rhee Bros</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Kimwipes</td><td>Kimberly-Clark</td><td>34155</td><td></td></tr></tbody></table>

an<em&gt; in vitro</emfizyolojik hareketleri besleme motor programlar ortaya çıkartılması ve kayıt için&gt; hazırlık<em&gt; aplysia&#39;nın californica</em

An In Vitro Preparation for Eliciting and Recording Feeding Motor Programs with Physiological Movements in Aplysia californica

Işlevliliği, birden çok, farklı davranışlar 1 oluşturmak için bir periferik yapının özelliği, hayvanlar hızla değişen çevresel davranışlarını uyum sağlar. Deniz yumuşakça Aplysia&#39;nın californica multifunctionality çalışma için uysal sistemi sağlar. Besleme sırasında, Aplysia aynı besleme aygıtı, bukkal kütle kullanılarak davranış birkaç farklı türde oluşturur. Bu davranışları kontrol eden ganglionlar elektrofizyolojik çalışma için erişilebilir büyük, tespit nöronların bir dizi içerir. Bu nöronların aktivitesi sinirsel faaliyet için gıda grasper göreli kapatan sinirsel faaliyet ve zamanlama bağlı olarak iki tip ingestive ve egestive programları, ayrılabilir motorlu programları tarif edilmiştir ki uzattığını ya da geri çekilir grasper 2. Ancak izole ganglionlar, bu davranışlar üretecektir kas hareketleri yapma, bulunmadığınasert vivo, sinir ve kas kayıtlarında programları 2,3,4 beslenme karşılık elde edilmiştir. gözlenen motor programları gerçek davranışları bağıntılarını olup olmadığını emin olmak, ancak bunu doğrudan 5 bireysel nöronların kaydetmek çok zor olduğu. Buna ek olarak, in vivo olarak, ingestive programların daha fazla ısırma ve yutar 1,2, en önceden anlatılan in vitro müstahzarlar olarak yapmak zor olan bir ayrım ayrılabilir. Askıya bukkal kütle hazırlama (Şekil 1) izole ganglia ve sağlam hayvanlar arasındaki boşluğu kapatıyor. Bu hazırlık, ingestive davranışlar - ısırma ve yutma de dahil olmak üzere - bireysel nöronların kaydedilen ve ekstrasellüler elektrotlar 6 ile stimüle edilebilir olarak ve egestive davranışlar (red), aynı zamanda da gözlemlenebilir. Bu farklı davranışlarla ilişkili beslenme hareketleri recor olabilirded, ölçülebilir, ve motor programları ile doğrudan ilişkilidir. Askıya bukkal kitle hazırlanmasında motoru programları Motor programları izole ganglionlar elicited olandan in vivo gözlenen daha benzer olduğu görülmektedir. Bu nedenle, bu hazırlama, motor programların daha direkt olarak in vivo davranış ile ilgili olabilir, aynı zamanda, bireysel nöronların bozulmamış hayvanlarda daha kayıt ve uyarma için daha erişilebilir. Bunun yanında izole ganglia ve sağlam hayvanlar arasında bir ara adım, askıya bukkal kitle bulguları daha az ve daha sağlam hem ortamlarda elde edilen verileri yorumlamada yardımcı olabilir. Askıya bukkal kütle hazırlama Aplysia&#39;nın içinde multifunctionality nöral kontrolü tanımlamak için yararlı bir araçtır.

Hücre dışı bir elektrot, bir nöronun soması üzerine yerleştirilip nöronu uyarmak için kullanıldığında, soma kanalı ile nöronun projeksiyon yaptığı sinir(ler)deki spike'lar arasında bire bir bir karşılık gözlemlenebilir (Şekil 6, sol panel, tanımlanmış B9 nöronunun uyarımı). Akım uygulandığında soma kanalı (üst kanal) uyarma moduna ayarlanır (şekildeki zaman 1) ve ardından hızla kayıt moduna (zaman 2) geçirilir. Elektrodun konumu sabit tutularak, I2 kası, radular sinir ve bilateral bukkal 2 ve 3 sinirleri...

Biz ekstraselüler kayıt ve sinirler, kaslar ve bireysel tespit nöronlardan uyarmak için bir teknik tarif<em&gt; In vitro</em&gt; Eliciting ve besleme aygıtı içinde davranışlar besleme farklı gözleyerek<em&gt; Aplysia&#39;nın</em&gt;.

An<em&gt; In Vitro</emFizyolojik Hareketleri Besleme Motor Programlar ortaya çıkartılması ve kayıt için&gt; Hazırlık<em&gt; Aplysia&#39;nın californica</em

Tek bir periferik yapının birden fazla ve farklı davranışlar üretme yeteneği olan çok fonksiyonluluk1, hayvanların davranışlarını hızla adapte etmelerine olanak tanır...

Bu prosedürün genel amacı, beslenme motor programları sırasında sinirlerden, kaslardan ve nöronlardan gelen elektriksel aktiviteyi ve beslenme aparatının buna karşılık gelen hareketlerini kaydetmektir. Bu işlem, öncelikle anestezi uygulanmış bir plegia'dan bukkal kütlenin çıkarılması ve ana sinir ile kaslara kanca elektrotların takılmasıyla gerçekleştirilir. İkinci adım ise bukkal kütlenin bir kayıt kabına yerleştirilmesi ve gangliyonların hücre dışı kayıt için hazırlanmasıdır.Ardından, hücre dışı elektrotlar kullanılarak hedef nöronlar tespit edilir. Son adım ise ısırma, yutma ve reddetme gibi beslenme motor programlarını indüklemek ve kaydetmektir. Nihayetinde, askıya alınmış bukkal kütle preparatı, bukkal kütlenin farklı beslenme benzeri hareketleri sırasında sinirlerin, kasların ve bireysel nöronların aktivitesini göstermek için kullanılır.Bu tekniğin izole ganglion çalışmaları gibi mevcut yöntemlere göre temel avantajı, sinirlerden, kaslardan ve tekil nöronlardan alınan kayıtların doğrudan beslenme aparatının hareketleriyle ilişkilendirilebilmesidir. Prosedürün gösterilmesine laboratuvarımızdan lisansüstü öğrencisi huu yardımcı olacak. Prosedüre başlamak için, bir diseksiyon tepsisindeki 200 ila 300 gram ağırlığındaki sağlıklı bir plegia'ya, vücut ağırlığının yaklaşık %50'si kadar izotonik magnezyum klorür enjekte ederek anestezi uygulayın. Hayvanın kuyruğu yakınına yapılan ilk enjeksiyondan sonra, magnezyum klorürün yayılmasını sağlamak için hayvanın yüzeyine nazikçe masaj yapın.Gerektiğinde hayvanın baş kısmına ek enjeksiyonlar yapın. Hayvan hafif dokunsal uyarılara yanıt vermeyi kestikten sonra, dorsal tarafı yukarı gelecek şekilde tepsiye iğneleyin. Kuyruğa bir iğne ve her bir ön tentaküle birer iğne yerleştirin.Ardından, pens kullanarak hayvanın başının ortasındaki deriyi sıkıştırıp kaldırın. Rhino fours'un arkasında, tutulan noktanın hemen gerisinden hayvanın başı boyunca koronal bir insizyon yapın. Bundan sonra, bukkal kütleyi açığa çıkarmak için rhino fours arasında ağıza doğru orta sagital bir insizyon yapın.Ardından, deri flebini bukkal kütleden uzaklaştırın ve vücut duvarına tutunan sinirleri ve bağ dokusunu kesin. Bu deri flebini bukkal kütleden tamamen ayırmak için, bukkal kütlenin kendisine ait herhangi bir siniri veya dokuyu kesmediğinizden emin olun. Sonrasında, özofagusu yakalayıp tutun.Tutulan noktanın arkasından özofagusu kesin. Özofagusu yukarı çekin ve bukkal kitlenin arkasındaki bukkal kitleyi kaldırın. Serebral, plöral ve pedal ganglionlar bir halka oluşturur ve serebral ganglion, serebro-bukkal konnektifler aracılığıyla bukkal ganglionlara bağlanır.Bu halka gangliyonlarını bukkal kütleye bağlı bırakın ve bu gangliyonlardan vücudun diğer kısımlarına uzanan tüm sinirleri kesin. Ardından bukkal kütlenin etrafındaki bağ dokusunu kesin ve bukkal kütle vücuda daha az bağlandıkça onu yukarı kaldırmaya devam edin. Bukkal kütle sadece ağza bağlı kaldığında, özofagusu ve bukkal kütleyi tutun.Dümdüz kesin. Bukkal kütleyi gövdeden ayırmak için çenelerin hemen önünden son bir kesi yapın. Elektrotlar takılırken kısmi anesteziyi sürdürmek için bukkal kütleyi %50 izotonik magnezyum klorür çözeltisi ve %50 SIA salin içeren bir çözeltiye yerleştirin.Ardından, bukkal kütleyi çözelti ile birlikte, bukkal kütlenin ventral yüzeyindeki bukkal arter boyunca kesilmiş, puro tabanlı bir Petri kabına yerleştirin. Daha sonra, pleural ve pedal ganglionların serebral gangliona olan bağlantılarını keserek bunları çıkarın. Serebral ganglionun, CBC'ler aracılığıyla bukkal ganglionlara ve bukkal kütleye bağlı kalmasını sağlayın ve serebral ganglion ile bukkal kütle arasındaki diğer bağlantıları kesin.Yemek borusunu ve tükürük bezlerini kısa uzunluklarda kesin. Bu adımda, kanca elektrotları ular sinir gözüne, iki adet kas bukal sinirine (iki ve üç) ve bukal sinir ikisinin A dalına bağlayın. Collins ve Shield tarafından JoVE yayınında gösterilen ve burada kısaca özetlenen prosedüre benzer bir yöntem kullanın.Her bir elektrot ayırma işlemi için, elektrodu sinire veya kasa yakın bir konuma yerleştirin, hedef siniri kancaya yerleştirin ve bir manipülatör kullanarak nazikçe kaldırın. Ardından, sinir kesitini bir Kim wipe ile kurulayın. Kancadaki sinire bir miktar hızlı jel süper yapıştırıcı uygulayın; kancanın tamamen yapıştırıcıyla kaplandığından ve referans telinin ucunun yapıştırıcıyla kaplanmadığından emin olun.Ardından, çözeltiyi kaptan yapıştırıcıya uygulamak için polietilen boru eki olan bir şırınga kullanılır; bu işlem yapıştırıcının yüzeyinin donmasını sağlayacaktır. Bir sonraki adım, kayıt odası olarak kullanılacak 100 x 50 milimetrelik yuvarlak bir Pyrex kayıt kabını hazırlamaktır; sızıntıyı en aza indirmek için bir pipet ucu yardımıyla serebral ve buckling odaları arasındaki çentiğe ince bir vakum gresi tabakası uygulayın. Daha sonra ön odayı plescia salin çözeltisi ile doldurun.Bukkal kütleyi Petri kabından yuvarlak Pyrex kabın ön haznesine dikkatlice aktarın ve sinirlerin kopmasına neden olabilecek hiçbir elektrodun gergin bir şekilde çekilmediğinden emin olun. Kabın başka bir binoküler diseksiyon mikroskobuna aktarılması gerekiyorsa kanca elektrotlar konusunda çok dikkatli olun. Kılıfın inceltilmesi için.Bukkal kütlenin her iki yanındaki elektrotları beraberce gruplandırın. Konnektör pinlerini kapatan laboratuvar bandını tutarak elektrotları dikkatlice kavrayın ve elektrotların hiçbirinin sıkıca çekilmediğinden tekrar emin olun. Kap mikroskobun altına yerleştirildiğinde, elektrotlar kabın kenarlarına nazikçe yayılmalı ve ara verildiğinde veya deney aşamaları arasında platform üzerinde durmalıdır; bukkal kütle haznesindeki salini bir akvaryum hava taşı kullanarak havalandırın.Ardından, CBC'ler çentiğin içinden geçecek şekilde serebral gangliyonu arka hazneye iğneleyin. CBC'lerin üzerine daha fazla vakum gresi uygulayın. Sonra, gangliyonların tamamen suya gömülmesi için kabın her iki kısmına daha fazla SIA salini ekleyin.Odacıklar arasında sızıntı oluşmaması için salin seviyesinin, serebral ve bukkal odacıklar arasındaki vakum gresinin yüksekliğinden daha düşük olduğundan emin olun. Bu aşamada, bukkal kütle ön odacığın tabanında dinlenmelidir. Ardından, bukkal kütleye hâlâ bağlı olan sinirlere zarar vermemek için orta platformdaki bukkal gangliyonları iğneleyin.Pinleri yalnızca iki sinir arasındaki kılıf üzerine yerleştirin. Ardından, CBC'leri germek ve sabitlemek için yan taraflarına iki pin daha ekleyin. Bukkal gangliyonları, ilgilenilen nöronların konumuna bağlı olarak düz veya döndürülmüş şekilde tutun.Bukkal ganglionu döndürmek için, ince uçlu bir pens yardımıyla CBC'nin fazla kılıf kısmını tutun ve bunu ikinci bukkal sinir ile üçüncü bukkal sinir arasına iğneleyin. Böylece, arka hazneye yakın olan ve bukkal ganglionun üst kısmından kolayca erişilemeyen hücre gövdelerinin çoğu artık görülebilir hale gelir. Son olarak, bukkal ganglion kılıfının bukkal kütle tarafına yakın kısmına iki adet iğne ekleyin.Bukkal ganglionun hareketini en aza indirmek için, bukkal ganglionun arka hazneye yakın olan kılıfını tutun ve hücre gövdelerini açığa çıkarmadan fazla kılıfı ince makasla kesin. Hasarı en aza indirmek için, kılıfın inceltilmesi işlemi tamamlandıktan sonra yalnızca hücre gövdelerini görmek için gerekli olan miktarda kılıfı kaldırın. Tüm elektrot pinlerini, amplifikatörlere bağlanan kablolar üzerindeki yuvalarına takın.Elektrotların çok sıkı çekilmediğinden, uygun kablolara doğru şekilde bağlandığından ve geri kalan magnezyum klorürün yıkanması için polaritelerin doğru olduğundan emin olun. Bukkal kütle odasındaki SIA salin solüsyonunu taze SIA salin solüsyonu ile değiştirin. Ardından, bukkal kütlenin ön kısmındaki yumuşak dokudan ve çene kıkırdağının dorsalinden bir ipek sütür geçirin.Sütürü kabın kenarına sabitlemek ve böylece bukkal kütleyi ön uç konumundan askıda tutmak için iki parça modelleme kili kullanın. Cam bir hücre dışı elektrodunu, elektrot ucu bukkal ganglionun yakınında olacak şekilde bir manipülatörle tutun. Bir nöronu konumlandırmak ve tanımlamak için hücre dışı elektrodun ucunu kılıfın üzerine nazikçe indirin.Nöron somasının üzerine. Bir stimülasyon akımı uygulayın ve ardından, somayı uyarmak için kullanılan kanalı, hücre dışı elektrottaki aktiviteyi ve reddetmeyi tetiklemek için sinirlerdeki ilgili aktiviteyi kaydetmek amacıyla kayıt moduna geçirin. Motor programlar gibi, ees paternleri oluşturmak için bukkal sinir 2A'yı iki hertz'lik, bir milisaniyelik uzun bir darbe dizisiyle stimüle edin.Kalıplar stimülasyon süresince devam eder ve stimülasyon sona erdikten kısa bir süre sonrasına kadar sürebilir. Isırma benzeri motor programları indüklemek için, birkaç adet katı karakol kristalini doğrudan serebral ganglionun üzerine yerleştirin.Tekrarlayan paternler genellikle beş dakika içinde başlar ve yutmayı tetikleyecek şekilde azalmaya başlamadan önce yaklaşık 10 ila 15 dakika sürer. Motor programlarda olduğu gibi, caracol uygulayın ve bukkal kütle güçlü ısırıklar oluşturana kadar bekleyin. Ardından, bir ısırık sırasında, hayvanın deniz yosununu kavraması için ağzına bir şerit deniz yosunu yerleştirin.Burada, tanımlanan motor nöron B dokuzun stimülasyonu ve kaydı ile aynı nöronun, I iki kasının ve beslenme motor programları sırasında birkaç sinirin kaydı yer almaktadır. Burada, aynı motor programlar serisinden alınan video görüntüleri bulunmaktadır. Yutma paternleri, serebral gangliyona karbahol uygulanması ve ardından karbaholle tetiklenen ısırma sırasında tutucuya bir deniz yosunu şeridinin yerleştirilmesiyle indüklenmiştir.Bu görüntüde, yosunu kavramak için ragula dışarı uzatılmıştır ve bu görüntüde ise ragula, yosunu ağza doğru çekerek geri çekilmiştir. Bu videoyu izledikten sonra, askıda ağız kütlesi preparasyonunun nasıl kurulacağı ve in vitro beslenme motor program kayıtlarının nasıl elde edileceği konusunda iyi bir anlayışa sahip olmalısınız.

an-vitro-preparation-for-eliciting-recording-feeding-motor-programs

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Sinirbilim

Elektrot İmalat ve İmplantasyon Aplysia californica Bozulmamış, Serbestçe Behaving Hayvanlar Çok kanallı Sinir ve Kas Kayıtlar

Biz intrasellüler serbest kalsiyum konsantrasyonu ve sinaptik etkinliği değişiklikleri eşzamanlı bir ganglion hazırlanmasında nasıl takip edilebileceğini...

Mollusk içinde hücre içi kalsiyum konsantrasyonu ve Synaptic Etkinliği İzlenmesi Değişiklikler<em&gt; Aplysia&#39;nın</em

Ekstraselüler bir kas Motor Pool için motor nöronlar belirlenmesi<em&gt; Aplysia&#39;nın californica</em

Onun küçük şeffaf gövde, iyi belgelenmiş nöroanatomi ve müsait genetik teknikler ve reaktiflerin bir dizi...

C. vivo Nöronal Kalsiyum Imaging&#39;de elegans

Biz deniz deniz tavşan sinir sisteminin diseksiyonu...

Duyusal nöronlar izolasyonu<em&gt; Aplysia californica</em&gt; Glutamaterjik Akımlar Patch Kelepçe Kayıtlar için

Deniz salyangozu Aplysia californica, davranışın hücresel ve moleküler temelleri üzerine yapılan çalışmalar için nörobiyoloji modeli olarak yaygın olarak kullanılmaktadır. Burada, tanımlanan sinir devrelerinin tek nöronlarının elektrofizyolojik ve moleküler analizleri için Aplysia'nın sinir sistemini keşfetmek için bir metodoloji açıklanmaktadır.

Aplysia Tek Nöronların Elektrofizyolojik ve Moleküler Analizleri için Gangliyon Hazırlama

Davranışsal tahliller, nöronal işlevi anlamak için güçlü araçlar sağlar. Burada, model nematod Pristionchus pacificus ve akrabalarında bulunan yırtıcı beslenme davranışını ölçmek için çeşitli protokoller sunuyoruz. Ek olarak, ağız yapıları ve dişler dahil olmak üzere yırtıcı beslenme adaptasyonlarını analiz etmek için yöntemler sunuyoruz.

içinde Yırtıcı Beslenme Davranışları tahlil<em&gt; Pristionchus</em&gt; Ve Diğer Nematodlar

Bu iletişim kuralı Caenorhabditis elegans solucanlar davranışlar içinde sinirsel aktivite içinde genetik olarak kodlanmış Ca2 + gazetecilere kayıt değişiklikleri açıklar.

Ratiometric kalsiyum görüntüleme Caenorhabditis Elegans davranışlar içinde bireysel nöronların

Burada, bu kasların beslenme davranışı sırasındaki rollerini anlamak için deniz yumuşakçaaplikası kalinonik kalinonik besleyici cihaza kasların minimal invaziv cerrahi lezyoniçin bir protokol sıyoruz.

Aplysia californica Odontofor Kaslar Için Minimal İnvaziv Lezyon Tekniği

Bu protokol, transgenik olmayan omurgasız türlerde, absorbans voltajı duyarlı boyalar ve bir fotodiyot dizisi kullanılarak nöronal popülasyon aktivitesini tek hücreli çözünürlükle görüntüleme için bir yöntem sunar. Bu yaklaşım, görüntüleme ve analizin tek bir gün boyunca takip edilebildiği hızlı bir iş akışı sağlar.

Transgenik Olmayan Omurgasızlarda Tek Nöron Çözünürlüğü ile Ağ Dinamiklerini Kaydetmek için Fotodiyot Tabanlı Optik Görüntüleme

Bu protokol, genç RAC1/CED-10 mutant Caenorhabditis elegans'ta niceliksel bir dışkılama testini detaylandırır ve prodromal Parkinson hastalığı evrelerini incelemek için basit bir model sunar. Diğer hayvan modellerinin sınırlamalarını aşar ve erken Parkinson patolojisini hedefleyen terapötik stratejilerin test edilmesini kolaylaştırır.

Caenorhabditis elegans RAC1/CED-10 mutantlarında Gastrointestinal Motilite'nin Erken Parkinson Hastalığını Araştırmak İçin Bir Araç Olarak Değerlendirilmesi

Öğrenin, Aplysia californica'da beslenme davranışlarını in vitro ekstraselüler kayıt yöntemiyle nasıl inceleneceğini. Bu teknik sinir ve kas aktivitesini davranışsal hareketlerle ilişkilendirir.

An

Daha fazla video keşfet