Name: In iştahlı İlişkilendirilebilir Olfaktör Öğrenme Drosophila Larva (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2013-02-18T12:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 22 s
Description: Öğrenin, Drosophila larvalarında iştahlı ilişkilendirilebilir koku öğrenmesini analiz etmek için davranışsal paradigma kullanmayı. Bu yöntem, ödül sinyali veren nöronları belirlemeye ve öğrenme mekanizmalarını genetik olarak manipüle edilebilir sistemde çalışmaya yardımcı olur.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Biz özellikle deney düzeneği ve el yazması üzerinde yorumlar hakkında teknik talimatlar için Gerber laboratuar üyelerine teşekkür etmek istiyorum. Biz de vahşi tip kantonlar stoklar sinek bakım ve onarım için Lyubov Pankevych ederim. Bu çalışma DFG hibe TH1584/1-1, SNF hibe 31003A_132812 / 1 ve Konstanz Üniversitesi Zukunftskolleg (bütün AST) tarafından desteklenmektedir.

1. Hazırlık <ol><li> Drosophila vahşi tip larva 25 yetiştirilir ° C ve 14/10 ışık / karanlık döngüsü 60% -80% nem. Her zaman 20 kadın standart sinek gıda yaklaşık 6 ml içeren bir flakon (6 cm yüksekliğinde ve 2.5 cm çapında) içine 10 erkek ile konur larvaların tam yaşı kontrol etmek için. Sinekler 12 saat boyunca yumurtalarını bırakmak için izin verilir ve ikinci gününde yeni bir şişeye aktarılır. 25 ° C yetiştirilen ve hemen davranışsal deney için kullanılıp kullanılamayacağını yumurtlama larva 5-6 gün sonra besleme 3. deri değiştirme safhasında aşama ulaşır. Bununla birlikte, bir şişenin yan larva olmayan gıda hala ve larva sadece almak için temin etmelidir. Bu larvalar zaten &quot;dolaşıp 3. evre evre&quot; ulaştı - kısa bir süre önce pupa devresi - ve kullanımı sonuçların yorumlanmasını zorlaştırmaktadır. </li><li> % 2.5 agaroz petri hazırlanması (diğer laboratuvarlar deney boyunca da% 1 agar konsantrasyonlarının kullanımı, nasılHiç düşük konsantrasyonlarda besleme 3. evre larvalar) substrat kazmak için izin verebilir: 100 ml GKD 2 O. 2,5 gr agaroz çözülür Kaynamaya başlayana kadar bir mikrodalga çözümü ısıtın. Dikkatle çözüm ajite ve tüm agaroz eriyene kadar mikrodalga içine geri koymak. Petri kaplarının alt tamamen kapalı ve agaroz çözüm pürüzsüz bir yüzey oluşturur böyle Petri kutularına sıcak agaroz çözüm dökün. Çözelti, oda sıcaklığına kadar soğutulur ve kapakları kapatmak sağlar. Bu kapaklar su yoğuşması için izin verecek, çünkü hemen kapaklarını kapatın etmeyin. </li><li> 2M fruktoz Petri yemeklerin hazırlanması: 100 ml GKD 2 O (yine% 1 agar konsantrasyonu kullanımı mümkündür; ancak 3. evre larvalar substrat kazmak besleme izin verebilir) 2.5 gr agaroz çözülür. Kaynamaya başlayana kadar bir mikrodalga çözümü ısıtın. Dikkatle çözüm ajitasyon ve mikro içine geri koymakTüm agaroz kadar dalga çözülür. Dikkatlice sıcak solüsyon içine fruktoz 35 g ekleyin; şeker kaynatma geriliği önlemek için eriyene kadar karışıma yavaş yavaş karıştırılır. Alt tamamen kapalı ve fruktoz-agaroz çözüm pürüzsüz bir yüzey oluşturur böyle Petri kutularına sıcak fruktoz-agaroz çözeltisi dökün. Çözelti, oda sıcaklığına kadar soğutulur ve kapakları kapatmak sağlar. Bu kapaklar su yoğuşması için izin verecek, çünkü hemen kapaklarını kapatın etmeyin. </li><li> 1-oktanol (OCT) koku kapları hazırlanması: Teflon koku kabı yapılan özel bir şekilde saf OCT 10 ul doldurun ve koku buharlaşması için izin vermek için birkaç küçük delik olan bir kapakla kapatın. Konteyner ayrıntılı bir açıklama Gerber ve Stocker 2007 yılında verilmiştir. Ekim için üç koku kapları hazırlayın. Koku kaplar eklenen kimyasalların buharlaşması için izin verir, ama larvaları bunları doğrudan irtibata geçebilirsiniz önlemek. Bu nedenle, burada açıklanan deneyler özelliklegustatuar yan etkiler rahatsızlık vermesini olmadan larvaları koku öğrenme ele. </li><li> Amylacetate (AM) koku kapları Hazırlanması: seyreltin parafin yağı 01:50. Özel yapım teflon koku kabına dilüsyon 10 ul doldurun ve koku buharlaşması için izin vermek için birkaç küçük delik olan bir kapakla kapatın. AM için üç koku kapları hazırlayın. Seyreltme iki kokuları arasındaki göreli tercihi bir öğrenme bağlı değişim maskeleyebilir diğer üzerinden bir koku için güçlü bir tercih önlemek için yani, pratik nedenlerden dolayı önemlidir. Hem kokuları için eşit cazibe naif hayvanların daha sonra açıklanacağı testi (2.5) uygulayarak deneyden önce laboratuarda teyit edilmesi gerekebilir. Burada sunulan son zamanlarda bizim laboratuar 9,15,16 çoğaltılamaz edildi Gerber laboratuvar çeşitli yayınlara dayanmaktadır değerleri. </li><li> Petri kaplarının Etiketleme: davranışsal deneyler önce tüm petri kodlanmış olması gerekir. Demek ki,Petri kapları içeren fruktoz bir &quot;X&quot; veya bir &quot;A&quot; ve &quot;Y&quot; veya &quot;B&quot; ile agaroz sadece Petri kapları ile örneğin işaretlenmiş olması gerekir. Bu kod tüm veriler kaydedildi sonra sadece deneyci ortaya edilmelidir. Deneyler yaparak bu deneyci beklentilerini larvaların performansını etkileyebilir böylece olası &quot;kör&quot; değildir. Biz yalnızca bir agaroz sunulan zaman fruktoz Petri (+) veya non-ödüllendirerek sunulduğunda ya ödüllendirilir klimalı uyaranlara (CS1 veya CS2) gibi kokuları bahsedeceğiz aşağıda geniş bir okuyucu için bir anlayış kolaylaştırmak için Petri kabı (-). </li></ol> 2. Şeker Ödül Eğitim ve Test <ol><li> Bir gıda şişeden 30 besleme 3. evre larvalar toplayın. Musluk suyu birkaç damla içeren bir ilk Petri onlara aktarın ve dikkatli bir fırça ile ileriye ve geriye doğru hareket ettirin. Ayrıca musluk wa birkaç damla içeren ikinci bir Petri kabı aktarabilirsinizter hiçbir gıda hamur larvaların bodywall kalır kontrol etmek, aksi larva deneme sırasında gıda koku deneyimi mümkün olacaktır. Bu büyük olasılıkla test ortamında öğrenme süreci ve performans karanlıkta bırakırdı. </li><li> Eğitim: Bir iştahlı şeker ipucu şu rejimi ile ilişkilendirmek kokulara larva eğitmek için uygulanır. Işaretli bir &quot;X&quot; sol ve sağ tarafında bir OCT koku kabı koyun - bu nedenle, fruktoz ödül (ayrıntılar 1.6 için bkz &quot;kör&quot; deney) (+) Petri kabı içeren. Petri kabı ortasında üzerine 30 besleme 3. evre larvalar grup koyun, kapağını kapatın ve hayvanlar OCT ile maruz kalırken 5 dakika bekleyin. Larvalar su damlası içinde sıkışıp değildir ve bunun yüzey gerilimini aşmak emin olun. Bu larvalar tarafından serbestçe Petri kabı hareket ve koku ve / veya tat uyaranlara yaşayabilirsiniz. </li><li> Eğitim: nemli bir fırça ile Petri kabı gelen larva çıkarın ve transferBöylece, agaroz sadece (-) - Petri içeren - bir &quot;Y&quot; ile etiketlenmiş bir ikinci Petri kabı üzerine m ve sol ve sağ tarafında bulunan bir AM koku kabı vardır. Kapağını kapatın ve hayvanlar AM maruz iken 5 dakika bekleyin. </li><li> Eğitim: iki kere tekrar 2.2) ve 2.3), öyle ki her 30 larva tecrübe üç çalışma çevrimi: CS1 / (+) - CS2 / (-); CS1 / (+) - CS2 / (-); CS1 / (+) - CS2 / (-). Bu deneyde CS1 AM için OCT ve CS2 kodunu temsil eder. </li><li> Test: Yeri 01:00 ve agaroz yalnızca Petri kabı karşıt sitelerinde tek Ekim koku kabı. Test Petri kabı orta eğitimli hayvanlar aktarın. Kapağı kapatın ve 5 dakika bekleyin. Daha sonra sol tarafta, test Petri kabı orta ve sağ tarafındaki larva sayısını saymak. </li><li> 30 besleme 3. evre larvalar ikinci bir grup ile 2.5) için adım 2.1) tekrarlayın fakat AM ve OCT hayvanlar aşağıdaki eğitim aldığınız gibi deneysel rollerini takas: CS2/ (+) - CS1 / (-); CS2 / (+) - CS1 / (-); CS2 / (+) - CS1 / (-). Bu deneyde CS1 AM için OCT ve CS2 kodunu temsil eder. </li><li> Eğitim için olası düzenlemeler. Biz OCT / (+) ya da üç eğitim çalışmaların var olduğu bir eğitim sunmak Üstü - AM / (-) veya AM / (+) da üç eğitim çalışmalarının karşılıklı grubunda - OCT / (-). Eğitim sırasında sıralamaya bağlı etkileri önlemek için Bununla birlikte, tam bir deney aşağıdaki tekrarlarında uyarıcının dizi değişiklik için önemlidir. CS1 ve CS2 sipariş ve ayrıca birinci ve ikinci plaka içinde sunulan ödül sunum değiştirilerek, eğitim denemeler için dört farklı sekanslar mümkündür: </li></ol><table border="1"><tbody><tr><td> Birinci grup </td><td> CS1 / (+) - CS2 / (-) </td><td> Karşılıklı grubu </td><td> CS2 / (+) - CS1 / (-) </td></tr><tr><td></td><td> CS1 / (-) - CS2 / (+) </td><td></td><td> CS2 / (-) - CS1 / (+) </td></tr><tr><td></td><td> CS2 / (+) - CS2 / (-) </td><td></td><td> CS1 / (+) - CS2 / (-) </td></tr><tr><td></td><td> CS2 / (-) - CS1 / (+) </td><td></td><td> CS1 / (-) - CS2 / (+) </td></tr></tbody></table> Çevre deney ortamında uyaranlara sistematik etkilerini önlemek için, bir OCT soldaki sunulan ve sağa AM olduğu gibi vakaların bir yarısında testi yapmak zorundadır. Olguların diğer yarısında sağda solda ve OCT üzerine sunulmalıdır AM. 3. Görev ilgili Duyusal-motor Fakülteler Testleri Yukarıda açıklanan deney tasarımı, kendi başına 3. deri değiştirme safhasında larva besleme vahşi tip koku-şeker öğrenme analiz etmek için olanak sağlar. Olfaktör öğrenme parametresine bağlıdır Ancak, günlük laboratuar yaşam araştırmacılar genellikle, karşılaştırmak larva iki veya daha fazla farklı deney grupları kullanabilirsinizticular gen, nöron, belirli bir mutant bir stok, özel bir gıda diyet, farklı yetiştirme koşulları, toksik kimyasallar larvaları, iki ya da daha fazla Deney grupları test edilmiş tüm durumlarda tek bir ilgisi vardır Böylece, vb, gelişme sırasında eklenen larvalarının farklı gruplar uygun duyusal-motor keskinlikleri gösteriyorsa, test etmek zorunlu kontrol deneyleri kümesi. Potansiyel fenotipleri mutlaka şeker ile ilişkilendirmek kokulara azaltılması veya tamamen kaldırılması yetenekleri nedeniyle değil gibi bu zorunlu hale gelir. Aksine, potansiyel öğrenme kusurları koku ve / veya şeker işleme duyusal-motor devresi herhangi bir aşamada kusurları dayalı olabilir. Bir larva mutant his şeker mümkün değilse, ya da başka bir deyişle, bir şeker bellek tesis edilemez. Ama bu larva öğrenemez sonucuna izin vermez. Ayrıntılı olarak aşağıdaki kontrol deneyleri uygun OCT, AM ve transgenik larvaların fruktoz işlenmesi için test yapılması gerekir. 1. Naif Ekim prefe için testdendir Bir gıda şişeden 30 besleme 3. evre larvalar toplayın. 2.1 açıklandığı gibi musluk suyu dikkatlice yıkayın. Bir agaroz Petri bir tarafında tek bir Ekim koku kabı koyun, Petri kabı ortasında üzerine larvaları ekleyin kapağını kapatın ve larvaları OCT doğru Petri kabı ve şark sürün ki gibi, 5 dakika bekleyin koku kaynağı. Daha sonra orta ve deney Petri kabı sağ tarafında, sol tarafta larvaların sayısını. 2. Naif AM tercihi için test Bir gıda şişeden 30 besleme 3. evre larvalar toplayın. 2.1 açıklandığı gibi musluk suyu dikkatlice yıkayın. Bir agaroz Petri bir tarafında tek AM koku kabı koyun, Petri kabı ortasında üzerine larvaları ekleyin kapağını kapatın ve larvaları AM doğru Petri kabı ve şark sürün ki gibi, 5 dakika bekleyin koku kaynağı. Sonradan l sayısınıortasında ve deney Petri kabı sağ tarafında, sol tarafta arvae. 3. Naif şeker tercihi için test Bir gıda şişeden 30 besleme 3. evre larvalar toplayın. 2.1 açıklandığı gibi musluk suyu dikkatlice yıkayın. Yarısı ve diğer yarısı bir 2M fruktoz-agaroz karışımı içinde% 2.5 agaroz içeren Petri kapları hazırlayın. Petri kabı üzerine larvaları ekleyin, larva fruktoz içeren tarafına doğru Petri kabı ve şark sürün olabilir böyle 5 dk için kapağını kapatın ve bekleyin. Daha sonra orta ve deney Petri kabı sağ tarafında, sol tarafta larvaların sayısını. Yarım yarım petri Hazırlanması: Yukarıda Bölüm 1.2 &#39;de belirtildiği gibi normal agaroz tabak hazırlayın. Agaroz dolu petri soğutulduktan sonra, dikkatli bir neşter ile dikey eksen boyunca agaroz kesilir. Petri kabı dan agaroz yarısı çıkarın. APetri kabı boş yarısına gg sıcak fruktoz-agaroz çözüm (Hazırlık 1.3). Her iki yarım maç ve tanımlanmış bir kenar oluşturmak olmadığını dikkatli olun - Bu larva seçim davranışını etkiler ve oldukça zor bir davranış analizi render 4.. Sham eğitimi Transgenik besleme 3. evre larvalar OCT ve hava (3.1), AM ve hava (3.2) ve şeker ve saf agaroz (3.3), test deney ek bir kümesi arasındaki vahşi bir düzeyde ayırt etmek mümkün olup olmadığını test rağmen son zamanlarda olmuştur (tartışma için Gerber ve Stocker, 2007 bakınız) tanıttı. Bu deneyler için gerekçesi aşağıdaki gibidir. Eğitim larva döneminde kitlesel taşıma ve izleyen koku ve şeker stimülasyon tabi. Böylece gözlenen öğrenme fenotip (naif koku ve şeker algı testleri vahşi bir düzeyde olsa da!) Yanıltıcı olduğunu da mümkündür. Gerçekten de, mümkün olduğu transjenik hayvanların dstres direnci, motivasyon, yorgunluk, duyusal adaptasyon, bağlamsal öğrenme ve tokluk değişiklikleri ile ilgili vahşi tip larva iffer. Böylece, Michels ve ark. (2005) size ödül atlarsanız ve sadece her iki maruz dışında tam olarak eğitim sırasında larva tedavisi durumunda, belli bir mutant (1) tespit etmek mümkün olup olmadığını sınama boş bir koku kabı karşı AM denetimleri tanıttı kokuları, size kokuları ihmal ve sadece ödül maruz dışında bir eğitim-benzeri şekilde larva davranırsan (3), boş bir koku kabı karşısında AM tespit;, (2) aynı rejim sonrasında Ekim algılamak ve (4 ) aynı rejim sonrasında Ekim algılayabilir. Kapsamlı bir tartışma ve yöntemleri hakkında daha fazla bilgi için Michels ve ark (2005) ve Gerber ve Stocker (2007) bakınız. 4. Şeker Ödül Öğrenme Veri Analizi <ol><li> Şeker ödül öğrenme protokolü veri değerlendirmek için iki Recipro her biri için OKT tercih indeksi (PREF OCT) hesaplamakCally eğitimli gruplar: AM / - (-) OCT / (+) almış olan ilk grup için eğitim: PREF Ekim (OCT + / AM) = (# Ekim tarafta larvaların - # AM tarafta larva) / # bütün larvaların sağ, sol ve orta bölgeler içinde : - OCT / (-) eğitim AM / (+) alınan ikinci grup için PREF AM (AM + / OCT-) = (AM # tarafta larvaların - # larva OCT tarafında) / # sağ, sol ve orta bölgeler içindeki tüm larvaların </li></ol><ol start="2"><li> 4,1 iki PREF değerleri için performans indeksi (Pİ)) hesaplayın. PI koku ve ceza pozlama, zaman ve taşıma geçiş rahatsızlık vermesini etkilerini iptal ederek ilişkisel öğrenmeyi temsil eder: PI = (PREF Ekim (OCT + / AM) + PREF AM (AM + / OCT)) / 2 Böylece PI&#39;ler -1 ile 1 arasında değişir. Anlamlı pozitif değerler iştahlı öğrenme açıklamak ise anlamlı negatif değerler caydırıcı, öğrenme temsil eder. Tam bir deneme genellikle 10 veya daha fazla PI&#39;ler oluşmaktadır. Veri kutusunda araziler includin görselleştirildiği gibidirBelirli bir deney grubu g tüm değerleri. Değerlerin% 50 kutu içinde bulunan varlık; ortanca performans indeksi kutusu arsa içinde bir kalın çizgi olarak gösterilir. </li></ol> 5. Görev ilgili Duyusal-motor Fakülteler için Veri Analizi <ol><li> Uygun Ekim koku işleme şöyle bir OCT koku tercihi indeksi hesaplamak için test ederken verileri değerlendirmek için: Koku PREF Ekim = (# Ekim tarafta larvaların - # diğer tarafta larva) / # sağ, sol ve orta bölgeler içindeki tüm larvaların </li><li> Uygun AM koku algısı aşağıdaki gibi bir AM koku tercihi indeksi hesaplamak için test ederken verileri değerlendirmek için: / # Sağ, sol ve orta bölgeler içindeki tüm larvaların - PREF AM = (# diğer tarafta larvaların AM # tarafında larva) Koku </li><li> Uygun fruktoz algı için test aşağıdaki gibi bir fruktoz tercih indeksi hesaplamak zaman verileri değerlendirmek için: PREF fruktoz = (# fruktoz tarafta larvalarının - # diğer tarafta larva) / # Sağ, sol ve orta bölgeler içindeki tüm larvaların </li><li> Sahte eğitim için ayrıntılar Michels ve ark &#39;de verilmiştir. 2005. </li></ol>

<ol><li>Pawlow, I. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((New+Researches+on+Conditioned+Reflexes%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">New Researches on Conditioned Reflexes.</a> Science. 58, 359-361 (1923).</li>
<li>Heisenberg, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mushroom+body+memoir%3A+from+maps+to+models%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Rev.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Mushroom body memoir: from maps to models.</a> Nat. Rev. Neurosci. 4, 266-275 (2003).</li>
<li>Kandel, E. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cellular+insights+into+behavior+and+learning%5BTitle%5D)+AND+%22Harvey+Lect%22%5BJournal%5D)">Cellular insights into behavior and learning.</a> Harvey Lect. 73, 19-92 (1979).</li>
<li>Gerber, B., Tanimoto, H., Heisenberg, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+engram+found%3F+Evaluating+the+evidence+from+fruit+flies%5BTitle%5D)+AND+%22Curr.+Opin.+Neurobiol%22%5BJournal%5D)">An engram found? Evaluating the evidence from fruit flies.</a> Curr. Opin. Neurobiol. 14, 737-744 (2004).</li>
<li>Milner, B., Squire, L. R., Kandel, E. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cognitive+neuroscience+and+the+study+of+memory%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">Cognitive neuroscience and the study of memory.</a> Neuron. 20, 445-468 (1998).</li>
<li>Keene, A. C., Waddell, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Drosophila+olfactory+memory%3A+single+genes+to+complex+neural+circuits%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Rev.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Drosophila olfactory memory: single genes to complex neural circuits.</a> Nat. Rev. Neurosci. 8, (2007).</li>
<li>Duffy, J. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((GAL4+system+in+Drosophila%3A+a+fly+geneticist%27s+Swiss+army+knife%5BTitle%5D)+AND+%22Genesis%22%5BJournal%5D)">GAL4 system in Drosophila: a fly geneticist's Swiss army knife.</a> Genesis. 34, 1-15 (2002).</li>
<li>Gerber, B., Stocker, R. F., Tanimura, T., Thum, A. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Smelling%2C+tasting%2C+learning%3A+Drosophila+as+a+study+case%5BTitle%5D)+AND+%22Results+Probl.+Cell.+Differ%22%5BJournal%5D)">Smelling, tasting, learning: Drosophila as a study case.</a> Results Probl. Cell. Differ. 47, 139-185 (2009).</li>
<li>Gerber, B., Stocker, R. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Drosophila+larva+as+a+model+for+studying+chemosensation+and+chemosensory+learning%3A+a+review%5BTitle%5D)+AND+%22Chem.+Senses%22%5BJournal%5D)">The Drosophila larva as a model for studying chemosensation and chemosensory learning: a review.</a> Chem. Senses. 32, 65-89 (2007).</li>
<li>Venken, K. J., Simpson, J. H., Bellen, H. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genetic+manipulation+of+genes+and+cells+in+the+nervous+system+of+the+fruit+fly%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">Genetic manipulation of genes and cells in the nervous system of the fruit fly.</a> Neuron. 72, 202-230 (2011).</li>
<li>Gerber, B., Hendel, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Outcome+expectations+drive+learned+behaviour+in+larval+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Biol.+Sci%22%5BJournal%5D)">Outcome expectations drive learned behaviour in larval Drosophila.</a> Proc. Biol. Sci. 273, 2965-2968 (2006).</li>
<li>Schleyer, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+behavior-based+circuit+model+of+how+outcome+expectations+organize+learned+behavior+in+larval+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Learn+Mem%22%5BJournal%5D)">A behavior-based circuit model of how outcome expectations organize learned behavior in larval Drosophila.</a> Learn Mem. 18, 639-653 (2011).</li>
<li>Pauls, D., Selcho, M., Gendre, N., Stocker, R. F., Thum, A. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Drosophila+larvae+establish+appetitive+olfactory+memories+via+mushroom+body+neurons+of+embryonic+origin%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Drosophila larvae establish appetitive olfactory memories via mushroom body neurons of embryonic origin.</a> J. Neurosci. 30, 10655-10666 (2010).</li>
<li>Selcho, M., Pauls, D., Han, K. A., Stocker, R. F., Thum, A. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+of+dopamine+in+Drosophila+larval+classical+olfactory+conditioning%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">The role of dopamine in Drosophila larval classical olfactory conditioning.</a> PLoS One. 4, e5897(2009).</li>
<li>Neuser, K., Husse, J., Stock, P., Gerber, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Appetitive+olfactory+learning+in+Drosophila+larvae%3Aeffects+of+repetition%2C+reward+strength%2C+age%2C+gender%2C+assay+type+and+memory+span%5BTitle%5D)+AND+%22Animal+Behaviour%22%5BJournal%5D)">Appetitive olfactory learning in Drosophila larvae:effects of repetition, reward strength, age, gender, assay type and memory span.</a> Animal Behaviour. 69, 891-898 (2005).</li>
<li>Scherer, S., Stocker, R. F., Gerber, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Olfactory+learning+in+individually+assayed+Drosophila+larvae%5BTitle%5D)+AND+%22Learn+Mem%22%5BJournal%5D)">Olfactory learning in individually assayed Drosophila larvae.</a> Learn Mem. 10, 217-225 (2003).</li>
<li>Aceves-Pina, E. O., Quinn, W. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Learning+in+normal+and+mutant+Drosophila+larvae%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Learning in normal and mutant Drosophila larvae.</a> Science. 206, 93-96 (1979).</li>
<li>Heisenberg, M., Borst, A., Wagner, S., Byers, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Drosophila+mushroom+body+mutants+are+deficient+in+olfactory+learning%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurogenet%22%5BJournal%5D)">Drosophila mushroom body mutants are deficient in olfactory learning.</a> J. Neurogenet. 2, 1-30 (1985).</li>
<li>Khurana, S., Abu Baker, M. B., Siddiqi, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Odour+avoidance+learning+in+the+larva+of+Drosophila+melanogaster%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Biosci%22%5BJournal%5D)">Odour avoidance learning in the larva of Drosophila melanogaster.</a> J. Biosci. 34, 621-631 (2009).</li>
<li>Pauls, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Electric+shock-induced+associative+olfactory+learning+in+Drosophila+larvae%5BTitle%5D)+AND+%22Chem.+Senses%22%5BJournal%5D)">Electric shock-induced associative olfactory learning in Drosophila larvae.</a> Chem. Senses. 35, 335-346 (2010).</li>
<li>Eschbach, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Associative+learning+between+odorants+and+mechanosensory+punishment+in+larval+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Exp.+Biol%22%5BJournal%5D)">Associative learning between odorants and mechanosensory punishment in larval Drosophila.</a> J. Exp. Biol. 214, 3897-3905 (2011).</li>
<li>von Essen, A. M., Pauls, D., Thum, A. S., Sprecher, S. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Capacity+of+visual+classical+conditioning+in+Drosophila+larvae%5BTitle%5D)+AND+%22Behav.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Capacity of visual classical conditioning in Drosophila larvae.</a> Behav. Neurosci. 125, 921-929 (2011).</li>
<li>Gerber, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Visual+learning+in+individually+assayed+Drosophila+larvae%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Exp.+Biol%22%5BJournal%5D)">Visual learning in individually assayed Drosophila larvae.</a> J. Exp. Biol. 207, 179-188 (2004).</li>
<li>Rohwedder, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nutritional+Value-Dependent+and+Nutritional+Value-Independent+Effects+on+Drosophila+melanogaster+Larval+Behavior%5BTitle%5D)+AND+%22Chem.+Senses%22%5BJournal%5D)">Nutritional Value-Dependent and Nutritional Value-Independent Effects on Drosophila melanogaster Larval Behavior.</a> Chem. Senses. , (2012).</li>
<li>Lee, T., Lee, A., Luo, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+the+Drosophila+mushroom+bodies%3A+sequential+generation+of+three+distinct+types+of+neurons+from+a+neuroblast%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Development of the Drosophila mushroom bodies: sequential generation of three distinct types of neurons from a neuroblast.</a> Development. 126, 4065-4076 (1999).</li>
<li>Ito, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+organization+of+extrinsic+neurons+and+their+implications+in+the+functional+roles+of+the+mushroom+bodies+in+Drosophila+melanogaster+Meigen%5BTitle%5D)+AND+%22Learn+Mem%22%5BJournal%5D)">The organization of extrinsic neurons and their implications in the functional roles of the mushroom bodies in Drosophila melanogaster Meigen.</a> Learn Mem. 5, 52-77 (1998).</li>
<li>Wang, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transmembrane%2Fjuxtamembrane+domain-dependent+Dscam+distribution+and+function+during+mushroom+body+neuronal+morphogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">Transmembrane/juxtamembrane domain-dependent Dscam distribution and function during mushroom body neuronal morphogenesis.</a> Neuron. 43, 663-672 (2004).</li>
<li>Robertson, K., Mergliano, J., Minden, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dissecting+Drosophila+embryonic+brain+development+using+photoactivated+gene+expression%5BTitle%5D)+AND+%22Dev.+Biol%22%5BJournal%5D)">Dissecting Drosophila embryonic brain development using photoactivated gene expression.</a> Dev. Biol. 260, 124-137 (2003).</li>
<li>Zhou, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cooperative+functions+of+the+reaper+and+head+involution+defective+genes+in+the+programmed+cell+death+of+Drosophila+central+nervous+system+midline+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci.+U.S.A%22%5BJournal%5D)">Cooperative functions of the reaper and head involution defective genes in the programmed cell death of Drosophila central nervous system midline cells.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 94, 5131-5136 (1997).</li>
<li>Kitamoto, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Conditional+modification+of+behavior+in+Drosophila+by+targeted+expression+of+a+temperature-sensitive+shibire+allele+in+defined+neurons%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurobiol%22%5BJournal%5D)">Conditional modification of behavior in Drosophila by targeted expression of a temperature-sensitive shibire allele in defined neurons.</a> J. Neurobiol. 47, 81-92 (2001).</li>
<li>Schroll, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Light-induced+activation+of+distinct+modulatory+neurons+triggers+appetitive+or+aversive+learning+in+Drosophila+larvae%5BTitle%5D)+AND+%22Curr.+Biol%22%5BJournal%5D)">Light-induced activation of distinct modulatory neurons triggers appetitive or aversive learning in Drosophila larvae.</a> Curr. Biol. 16, 1741-1747 (2006).</li>
<li>Rosenzweig, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Drosophila+ortholog+of+vertebrate+TRPA1+regulates+thermotaxis%5BTitle%5D)+AND+%22Genes+Dev%22%5BJournal%5D)">The Drosophila ortholog of vertebrate TRPA1 regulates thermotaxis.</a> Genes Dev. 19, 419-424 (2005).</li>
<li>Baines, R. A., Uhler, J. P., Thompson, A., Sweeney, S. T., Bate, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Altered+electrical+properties+in+Drosophila+neurons+developing+without+synaptic+transmission%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Altered electrical properties in Drosophila neurons developing without synaptic transmission.</a> J. Neurosci. 21, 1523-1531 (2001).</li>
<li>Chen, Y. C., Mishra, D., Schmitt, L., Schmuker, M., Gerber, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+behavioral+odor+similarity+%22space%22+in+larval+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Chem.+Senses%22%5BJournal%5D)">A behavioral odor similarity "space" in larval Drosophila.</a> Chem. Senses. 36, 237-249 (2011).</li>
<li>Saumweber, T., Husse, J., Gerber, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Innate+attractiveness+and+associative+learnability+of+odors+can+be+dissociated+in+larval+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Chem.+Senses%22%5BJournal%5D)">Innate attractiveness and associative learnability of odors can be dissociated in larval Drosophila.</a> Chem. Senses. 36, 223-235 (2011).</li>
<li>von Essen, A. M., Pauls, D., Thum, A. S., Sprecher, S. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Capacity+of+visual+classical+conditioning+in+Drosophila+larvae%5BTitle%5D)+AND+%22Behav.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Capacity of visual classical conditioning in Drosophila larvae.</a> Behav. Neurosci. , (2011).</li>
<li>Honjo, K., Furukubo-Tokunaga, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Induction+of+cAMP+response+element-binding+protein-dependent+medium-term+memory+by+appetitive+gustatory+reinforcement+in+Drosophila+larvae%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Induction of cAMP response element-binding protein-dependent medium-term memory by appetitive gustatory reinforcement in Drosophila larvae.</a> J. Neurosci. 25, 7905-7913 (2005).</li>
<li>Honjo, K., Furukubo-Tokunaga, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Distinctive+neuronal+networks+and+biochemical+pathways+for+appetitive+and+aversive+memory+in+Drosophila+larvae%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Distinctive neuronal networks and biochemical pathways for appetitive and aversive memory in Drosophila larvae.</a> J. Neurosci. 29, 852-862 (2009).</li>
<li>Khurana, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Olfactory+Conditioning+in+the+Third+Instar+Larvae+of+Drosophila+melanogaster+Using+Heat+Shock+Reinforcement%5BTitle%5D)+AND+%22Behav.+Genet%22%5BJournal%5D)">Olfactory Conditioning in the Third Instar Larvae of Drosophila melanogaster Using Heat Shock Reinforcement.</a> Behav. Genet. 42, 151-161 (2012).</li>
<li>Tully, T., Cambiazo, V., Kruse, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Memory+through+metamorphosis+in+normal+and+mutant%5BTitle%5D)+AND+%22%22%5BJournal%5D)">Memory through metamorphosis in normal and mutant.</a> 14, 68-74 (1994).</li>
<li>Michels, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cellular+site+and+molecular+mode+of+synapsin+action+in+associative+learning%5BTitle%5D)+AND+%22Learn+Mem%22%5BJournal%5D)">Cellular site and molecular mode of synapsin action in associative learning.</a> Learn Mem. 18, 332-344 (2011).</li>
<li>Saumweber, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Behavioral+and+synaptic+plasticity+are+impaired+upon+lack+of+the+synaptic+protein+SAP47%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Behavioral and synaptic plasticity are impaired upon lack of the synaptic protein SAP47.</a> J. Neurosci. 31, 3508-3518 (2011).</li>
<li>Pfeiffer, B. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Refinement+of+tools+for+targeted+gene+expression+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Genetics%22%5BJournal%5D)">Refinement of tools for targeted gene expression in Drosophila.</a> Genetics. 186, 735-755 (2010).</li>
<li>Rosenzweig, M., Kang, K., Garrity, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Distinct+TRP+channels+are+required+for+warm+and+cool+avoidance+in+Drosophila+melanogaster%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci.+U.S.A%22%5BJournal%5D)">Distinct TRP channels are required for warm and cool avoidance in Drosophila melanogaster.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 105, 14668-14673 (2008).</li>
</ol>

Çıkar çatışması ilan etti.

<html> Drosophila larvaları anlatılan kurulum kıyaslanabilir bir ilköğretim beynin içindeki birleştirici koku öğrenme soruşturma için izin verir. Yaklaşımı bir laboratuvar kurmak için, basit, ucuz, kolay ve yüksek teknoloji ekipman 9 gerektirmez. Biz fruktoz ödül 11 ile takviye iştahlı çağrışımsal öğrenme çalışma deneyi, bir sürümü mevcut. Anlatılan kurulumdan kapsamlı eğitim denemelerinin sayısı varyasyonları, tek tahlil karşı kitle tayini, saklama süresi, kullanılan koku ve koku konsantra...

<table border="1"><tbody><tr><td> Reaktif Adı </td><td> Şirket </td><td> Katalog numarası </td><td> CAS numarası </td></tr><tr><td> Fruktoz </td><td> Sigma </td><td> 47740 </td><td> 57-48-7 </td></tr><tr><td> NaCl </td><td> Fluka </td><td> 71350 </td><td> 7647-14-5 </td></tr><tr><td> Agaroz </td><td> Sigma </td><td> A5093 </td><td> 9012-36-6 </td></tr><tr><td> 1-oktanol </td><td> Sigma </td><td> 12012 </td><td> 111-87-5 </td></tr><tr><td> Amylacetate </td><td> Sigma </td><td> 46022 </td><td> 628-63-7 </td></tr><tr><td> Parafin </td><td> Sigma </td><td> 18512 </td><td> 8012-95-1 </td></tr></tbody></table>

in iştahlı İlişkilendirilebilir olfaktör Öğrenme<em&gt; drosophila</em&gt; larva

Appetitive Associative Olfactory Learning in Drosophila Larvae

Aşağıda biz Drosophila larvaları iştahlı çağrışımlı koku öğrenmenin metodolojik ayrıntılarını anlatacağız. Kurulumu, genetik parazit ile kombinasyon halinde basit bir larva özellikle beyinde birleştirici öğrenme nöronal ve moleküler temelleri analiz etmek için bir tutamak içerir. Organizmalar mevcut davranışlarını ayarlamak için geçmiş deneyim kullanabilirsiniz. Davranışsal potansiyeliyle ilgili bu tür satın öğrenme olarak tanımlanır ve bellek izleri 1-4 olarak bu potansiyellerin fiziksel temelleri. Edilebilir Sinir bilimciler bu süreçlerin böceklerden omurgalı 5,6 arasında değişen model organizmalarda çeşitli yöntemler kullanarak beyinde moleküler ve nöronal değişiklikleri açısından organize nasıl anlamaya çalışın. Böyle bir çaba için bu basit ve deneysel erişilebilir model sistemlerde kullanılması yardımcı olur. Drosophila larva dayalı bu talepleri karşılamak için ortaya çıktı7-10: Sağlam davranışsal deneyleri, transgenik çeşitli teknikler ve sadece yaklaşık 10.000 nöron (bilişsel sınırlamalar, birkaç davranış seçenekleri ve sorgulanabilir deneyim zenginliği bazı tavizler ile de olsa) oluşan sinir sisteminin temel örgütün varlığının durumu . Drosophila larvaları kokuları ve şeker 11-14 gibi iştahlı gustatuar donatı arasındaki ilişkileri kurabilir. Standart tahlil, B. Gerber laboratuarda kurulmuş, hayvanlar bir iki karşılıklı koku eğitim almaktadır: larva bir birinci grubu, bir tat güçlendiricidir (şeker ödül) ile bir arada bir koku maruz kalır ve daha sonra bir koku maruz kalır takviye 9 olmadan B. Takviye olmadan koku A yaşıyor ve sonradan takviye (şeker ödül) ile koku B maruz Öte yandan larva ikinci bir grup karşılıklı eğitimi alır. Aşağıda iki grup vardır tesİki kokuları arasında kendi tercihi için ted. Ödüllendirilir koku Nispeten yüksek tercihlerini çağrışımsal öğrenme yansıtır - bir performans indeksi (PI) olarak sunulmuştur. Performans indeksi ilişkisel mahiyeti ile ilgili sonuç ayrı kokular ve tastants gibi koku ve ödül pozlama, zaman ve taşıma geçişi iki grup 9 arasında farklılık yok gibi diğer parametreler arasındaki kontenjan gelen nedeni, zorlayıcı.

Şekil 1A larva olfaktör çağrışımsal öğrenme için deneysel prosedürlerin genel bir görünümünü gösterir. Bir şeker ödül larvaları ile iki sunulan kokuların bir eşleştirme ile ödüllendirilmemiş koku ile karşılaştırıldığında, ödül koku doğru çekici bir tepki ifade etmek için potansiyel davranış kazanır. Larva iki grup her zaman ya da koku Ekim veya AM ile pekiştireç eşleştirme tarafından eğitilir. Performans indeksi (Pİ) karşılıklı eğitimli gruplar arasında tercih farkı olarak ilişkisel işlevi ölçer. <p...

Drosophila larvaları tat ödül ile koku uyaranlara ilişkilendirmek edebiliyoruz. Burada iştahlı çağrışımlı koku öğrenme analizine olanak sağlayan bir basit davranışsal paradigma tarif.

In iştahlı İlişkilendirilebilir Olfaktör Öğrenme<em&gt; Drosophila</em&gt; Larva

Aşağıda, Drosophila larvalarında iştah artırıcı ilişkisel koku öğrenmesinin metodolojik detaylarını açıklıyoruz. Bu düzenek, ... ile kombinasyon halinde kullanıldığında

Bu prosedürün amacı, yüksek beyin fonksiyonlarını analiz etmektir. Basit bir model olan DFA larvalarında, iştah aracılığıyla ilişkisel koku öğrenimi incelenmektedir. Bu işlem, öncelikle bir besin şişesinden beslenen 30 adet üçüncü instar larvanın toplanmasıyla gerçekleştirilir.Ardından, larvalar bir Petri kabında, ödül olarak fruktoz ve her iki yanda olfaktör stimülüs olarak bir adet oktanol içeren koku kapları ile beş dakika boyunca eğitilir. Daha sonra, fruktoz ödülünün olmadığı ve her iki yandaki koku kaplarının amil asetat içerdiği beş dakikalık ikinci bir eğitim aşaması gerçekleştirilir. İki eğitim aşamasının üç kez tekrarlanmasının ardından, larvalar ödül olmaksızın beş dakikalık bir test için karşıt yönlerdeki koku kaplarına maruz bırakılır.Nihayetinde, bir oktalın Amal asetat karşısındaki göreceli koku tercihi, drosophila larvalarının koku uyaranları ile şeker ödülü arasında bir ilişki kurabildiğini göstermektedir ve bu durum, genetik olarak esnek bir sistemde çağrışımsal öğrenmenin incelenmesi için kullanılabilir. Bu yöntemin, nöral fonksiyonun genetik etkileşimi ile kombinasyonu; ödülü sinyalleyen nöronların neler olduğu veya tekrarlayan bir anının edinilmesi veya geri çağrılması için hangi nöronların gerekli veya yeterli olduğu gibi öğrenme ve bellek alanındaki temel soruların yanıtlanmasına yardımcı olabilir. Prosedürün gösterilmesi anti a postop olacaktır.Laboratuvarımdaki bir doktora öğrencisi önce fruktoz içermeyen %2,5'lik aros Petri kapları hazırlar. Fruktozlu kapları hazırlamak için, çözünmüş aros'a fruktozu ekleyin ve ardından plakaya dökün. Daha sonra, deneyi gerçekleştiren kişinin körlemesini sağlamak için bu kapların her birini farklı bir sembolle etiketleyin.Fruktoz içeren kap koşullandırma ödülüdür ve sade kap ise ödül olmayan kaptır. Koşullandırma uyaranları için, 10 µL saf 1-oktan içeren toplam üç adet özelleştirilmiş Teflon koku kabı hazırlayın. Kapaklarda, kokunun buharlaşmasına izin veren küçük delikler bulunmaktadır.İkinci olarak, parafin yağı ile 1'e 50 oranında seyreltilmiş 10 microliters amil asetat içeren üç koku kabı daha hazırlayın. Bu seyreltme, 10 microliters saf oktan kadar çekicidir; beslenen ancak gezmeyen 30 adet örneğin bir besleme tüpünden toplanmasıyla başlayın. Üçüncü olarak,Bu protokol günün herhangi bir saatinde uygulanabilir. Sirkadiyen ritimlerden bağımsızdır. Larvaları birkaç damla musluk suyu içeren bir Petri kabına aktarın ve bir fırça yardımıyla dikkatlice ileri geri hareket ettirin.Ardından larvaları, içinde birkaç damla musluk suyu bulunan ikinci bir Petri kabına aktarın. Larvaların vücut duvarlarında besin macunu olup olmadığını kontrol edin. Şimdi, larvaların kokuları belirli bir şeker ipucuyla ilişkilendirmelerini sağlamak amacıyla Petri kabını deneysel düzeneğe yerleştirin.Kullanılan uyaranların iki tip kabından birinin sol ve sağ tarafına birer koku kabı yerleştirin. Burada bir oktal kullanılmıştır, ancak deneyci ödül konusunda kör olduğu için bu seçim rastgeledir. Ardından, larva grubunu kabın ortasına yerleştirin.Kapağı kapatın ve hayvanlar uyaranlara maruz kalırken beş dakika bekleyin. Larvaların su damlacığının yüzey gerilimini yenileyebildiğinden, böylece hapsolmadıklarından ve serbestçe keşif yapabildiklerinden emin olun. Yeni bir Petri kabına yeni bir Amel asetat kabı yerleştirin.Beş dakika sonra, larvaları sol ve sağ taraflarında zıt uyaranların bulunduğu karşı tip kaptaki yere aktarmak için nemli bir fırça kullanın. Buradaki koku amil asetattır. Larvalar aktarıldıktan sonra kapağı kapatın ve hayvanların beş dakika boyunca keşfetmelerine izin verin.Bu süre dolduğunda, eğitimin ilk turu tamamlanmış olur. Eğitimin sonraki iki turunu da ilkiyle aynı şekilde gerçekleştirin. Hayvanları nemli bir fırça yardımıyla taşıyarak her bir stimülasyon ve ödül kombinasyonuna toplamda üç kez maruz bırakın.Deney test alanı için, her bir stimülustan birer tane olacak şekilde taze koku kaplarını, kaplamasız agroz içeren bir Petri kabının karşılıklı bölgelerine yerleştirin. Eğitilmiş hayvanları kabın ortasına aktarın. Kapağı kapatın ve beş dakika bekleyin.Beş dakika sonra, kabın altında sol, sağ ve orta olmak üzere üç bölgeyi net bir şekilde belirleyen bir şablon kullanarak her bölgedeki larva sayısını sayın. Orta bölge, tercihsizlik puanı olarak kabul edilir ve analizi daha kısıtlayıcı hale getirerek yanlılığa karşı daha az duyarlı kılar. Son olarak, deneyi tamamlamak için, besleme aşamasındaki 30 yeni üçüncü instarla seçin ve eğitim ile test işlemlerini, ödül ve uyaranların ters kombinasyonu ile tekrarlayın.Aynı koku kaplarını kullanmaya devam edin. Transgenik hayvanların ödül stimülasyonları için normal koku işleme yeteneğine sahip olup olmadığını belirlemek amacıyla birkaç kontrol testi gereklidir. Saf koku tercihi testi, eğitim ve test aşamalarında yapıldığı gibi 30 larvanın toplanması ve yıkanmasıyla başlar.Ardından, larvaları tek bir tarafında sadece bir uyaran tüpü bulunan agaroz besiyerli bir Petri kabına yerleştirin. Kapağı kapatın ve beş dakika bekleyin. Sonrasında, şablonu kullanarak, uyaranla karşılaştırıldığında kabın yakın tarafındaki, ortasındaki ve uzak tarafındaki larva sayılarını sayın.Saf şeker tercihini test etmek için deneyde kullanılan her bir uyaran için bu testi gerçekleştirin. Bir petri kabındaki agarın yarısını kesip boş kalan alanı diğer türdeki erimiş agarla doldurarak yarı yarıya petri kapları hazırlayın. Her iki yarının hacminin eşleştiğinden ve belirgin bir kenar oluşmadığından emin olun.Bu işlem, oda sıcaklığında hazırlanmış yarı yarıya kapla pratik yapmayı gerektirebilir; 30 adet saf, beslenmesi kesilmiş larva yerleştirin. Üçüncü olarak, yıldız larvaları kabın merkezine koyun. Kapağı kapatın ve beş dakika bekleyin.Ardından, şablonu kullanarak her iki yandaki larva sayısını ve ortadakilerin sayısını belirleyin. Açıklanan prosedür, trenchgenic larvaların eğitilmesi ve test edilmesi için kullanılmıştır. Örnek uyaranlar kullanılarak veriler, Petri kaplarının farklı bölgelerindeki larva sayısı olarak kaydedilmiştir.Bu veri tercihinden beş dakika sonra indeksler hesaplandı ve karşılıklı olarak eğitilen gruplardan performans indeksleri türetildi. Test edilen larvalar transgenik olduğundan, dolu bir koku konteyneri ile hava arasında bir seçimin yanı sıra, saf kokular ile şeker eklenmiş kokular arasında da bir seçim sunuldu. Hesaplanan indekslerin kutu grafiği (box plot) ile incelenmesi, hayvanların fruktoz kokularını bir iştah pekiştiricisi olarak kullanarak bir oktanolü ML asetattan ayırt etmeyi öğrenebildiklerini ortaya koydu.Hayvanlar her iki uyaranı da çekici olarak tanımlamış ve aero'ya kıyasla fruktoz aromasına karşı doğal bir tercih göstermiştir. Bu deneysel paradigma, çok çeşitli koku ve görme uyaranlarının yanı sıra çok çeşitli ödüllendirici ve cezalandırıcı uyaranlarla başarıyla kullanılmıştır. Bu paradigmanın, drosophila'da mevcut olan birçok güçlü genetik manipülasyonla birleştirilmesi, nöral ağların analiz edilmesinde özellikle yararlıdır; örneğin, gal four ekspresyon modelleriyle tanımlanan belirli nöron setleri genetik olarak manipüle edilerek, bu nöronların iştah öğrenimindeki fonksiyonel rolleri değerlendirilebilir.Bu prosedür, nöronal fonksiyonların genetik interferansı ile birlikte, larva beyninde öğrenme ve hafıza ile ilişkili nöral ağların analiz edilmesi için kullanılabilir. Larva beyninin basitliği sayesinde, bu işlem tek hücre düzeyine kadar gerçekleştirilebilir.

appetitive-associative-olfactory-learning-in-drosophila-larvae

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Sinirbilim

Bu video makalede, istikrarlı ve denetlenebilir geometrileri odorant degradelerin inşaat sağlayan yeni bir yöntem açıklanmaktadır. Biz kısaca bu gradyanlar koku alma kusurları (tam ve kısmi anosmi) ekrana nasıl kullanılabileceğini göstermek ve daha ince kemotaksis davranış özelliklerini incelemek için.

Yüksek çözünürlüklü Ölçüm Drosophila Larva Koku-Driven Davranış

Anahtar Drosophila birleştirici bellek ölçülmesi için bir yöntem tarif edilmektedir. Tahlil negatif güçlendiricidir (elektrik çarpması) ile sunulan bir koku ilişkilendirmek ve daha sonra bellek ölçülmesine izin verecek, daha sonra bu bilgileri hatırlamak için sinek yeteneği dayanmaktadır.

Drosophila Yetişkin Koku Şok Öğrenme

Bu video makalede, Drosophila melanogaster uçmak yetişkin meyve koku bağımlı gıda arama davranışı üzerine açlık veya tokluk etkisini ölçmek için otomatik bir deneyi açıklar.

Toplayıcılık Davranış için Tek-sinek Deneyi Drosophila

Biz Y-labirent testi kullanılarak Drosophila davranışı üzerindeki koku etkisini ortaya çıkarmak için bir seçim testi sunuyoruz.

Test<em&gt; Drosophila</emBir Y-labirenti testi ile&gt; koku alma

Burada, 100'e kadar sirke sineğinin (Drosophila melanogaster) koku alma tepkilerini test etmek için bir davranış kurulumu ve veri analizi yöntemini açıklıyoruz. Bu sistem, tek veya çoklu koku uyaranlarıyla kullanılabilir ve nöronal alt kümelerin optogenetik aktivasyonu veya susturulması için uyarlanabilir.

Of Bilgisayar İzleme tarafından Analiz Edilmiş Olfaktor Davranışlar<em&gt; Drosophila</em&gt; Dört kadranda olfactometer içinde

Tat, faydalı maddelere çekilmeyi ve toksik maddelerden kaçınmayı kolaylaştıran önemli bir duyusal süreçtir.  Bu protokol, belirli bir kimyasal bileşik için Drosophila tat tercihini belirlemek için basit bir yutma testini tanımlar.

Yetişkin için tat Tercihi Testi<em&gt; Drosophila</em

Bu protokol, kur şartlama denilen bir Drosophila öğrenme ve bellek deneyi tanımlar. Bu klasik tahlil, resepsiyona açık olmayan prematüre bir kadının cinsel reddetmesinden sonra erkek kovuşturma davranışının azaltılmasına dayanmaktadır. Davranışsal esnekliğin bu doğal biçimi, öğrenmeyi, kısa vadeli belleği ve uzun süreli belleği test etmek için kullanılabilir.

Öğrenme ve Bellek Tedrisi Olan Drosophila Kurbanlığı İklimlendirme

Bu iletişim kuralı Drosophila larva yanıt onun koku nöronlar eşzamanlı optogenetic uyarılması için gezinme davranışını analiz eder. 630 nm dalga boyunda ışık kırmızı kaymıştır kanal rhodopsin ifade bireysel koku nöronlar etkinleştirmek için kullanılır. Larva hareketi aynı anda izlenir, dijital olarak kaydedilmiş ve özel olarak yazılmış yazılım kullanılarak analiz.

Yanıt koku nöronlar Optogenetic uyarılması olarak Drosophila larva davranışını izlemek

Burada drosophila öğrenme ve bellek bağlamında pre-ve/ veya postsinaptik kalsiyum görselleştirilebilen bir protokol sayılmaktadır. Sinapti lokalize kalsiyum sensörleri kullanılarak yapılan in vivo kalsiyum görüntüleme, bu tür bir assosiyatif öğrenmenin altında yatan sinaptik plastisitenin belirlenebileceği klasik koku alma koşullandırma paradigması ile birleştirilir.

Drosophila melanogaster Öğrenme Kaynaklı Sinaptik Plastisite Vivo Optik Kalsiyum Görüntüleme

Bu çalışma, yetişkin meyve sineklerinde aversif ilişkilendirilebilir öğrenmenin analizine izin veren basit bir davranış paradigmasını açıklar. Yöntem, belirli bir çevresel bağlam ile elektrik çarpması arasında oluşan ilişki nedeniyle doğuştan gelen negatif jeotaksi davranışını bastırmaya dayanır.

Drosophila İlişkisel Aversive Öğrenmeyi İncelemek İçin Yeni Bir Paradigma Olarak Pasif Kaçınma Davranışı

Öğrenme ve hafıza gibi bilişsel süreçler sırasında hücresel aktiviteyi incelemenin önündeki önemli bir engel, in vivo görüntüleme hazırlığı için anesteziklerin kullanılmasıdır. Anestezi, Drosophila  da dahil olmak üzere birçok modelde kısa süreli hafızayı ve bilişi bozar.Bu çalışma, yetişkin Drosophila'yı anestezi olmadan in vivo görüntüleme için hazırlamak için benzersiz bir yöntem sunmaktadır.

In vivo (İn canlı) Anestezi Uygulanmamış Drosophila Yetişkin Sineklerde Nöral Aktivitenin Görüntülenmesi

Öğrenin, Drosophila larvalarında iştahlı ilişkilendirilebilir koku öğrenmesini analiz etmek için davranışsal paradigma kullanmayı. Bu yöntem, ödül sinyali veren nöronları belirlemeye ve öğrenme mekanizmalarını genetik olarak manipüle edilebilir sistemde çalışmaya yardımcı olur.

In iştahlı İlişkilendirilebilir Olfaktör Öğrenme

Daha fazla video keşfet