Name: Üzerinde görebilir Işık ve Gentamisin en Sinerjik Etkisi Pseudomona aeruginosa Mikroorganizmalar (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2013-07-02T12:00:00.000+00:00
Duration: 5 min 57 s
Description: Keşfedin Pseudomonas aeruginosa üzerinde görünür ışık ve gentamisin sinerjik etkisini. Bu yöntem, antibiyotik direncine karşı yeni tedavi stratejileri geliştirmeye yardımcı olur.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

1. Bakteriyel Kültür <ol><li> Gram-negatif S. aeruginosa PAO1 suşu, 18 saat boyunca 37 ° C&#39;de Luria Broth (LB) içinde büyütülmüştür. </li><li> Hücrelerin kültür daha sonra 5 dakika boyunca 7500 rpm (dakika başına tur) santrifüjlenmiş ve süpernatan uzaklaştırılmıştır. </li><li> Bakteriler, 10% LB yeniden süspanse edildi ve kültür durağan faz yeniden girmek için izin vermek için başka bir 2 saat boyunca yeniden büyütülmüştür. </li><li> Bakteri süspansiyonu daha sonra iki gruba bölünmüştür: birinci grup (2 tüpler) herhangi bir antibiyotik, ikinci grupta biz antibiyotik gentamisin (50 ug / ml) ilave edilir, ilave edildi. </li></ol> 2. Koloni oluşturucu birim belirlenmesi (CFU) <ol><li> Hücre canlılığı belirlemek için 20 ul örnek 24 saat en süre içinde yaklaşık her 2 saat deney alınmıştır. Numunelerin seri dilüsyon yapılmış ve daha sonra kaplama LB agar plakaları üzerinde ve 37 ° C&#39;de gece boyunca kuluçkalanmıştır </li><li> Her tedavi için, plat başına CFUE belirlendi ve bir karşılaştırma süreler ve çeşitli tedaviler arasında yapıldı. Eşitlik açıklandığı gibi CFU yılında günlük azalma hesaplanmıştır. (1): Log azalma = Logu-LogC [CFU / ml] Nerede U her noktasında birim değeri oluşturan koloni olduğunu, CFU koloni oluşturan birim ise CFU / ml eşit birimleri: CFU / ml = (koloniler x seyreltme faktörü sayısı) / (hacim aşılanmış) Ve C başlama zamanında kontrol örneği bulunan CFU olduğunu. U Ölçüm anda faktörü oluşturan koloni atar unutmayın. </li><li> Bunların her biri içinde bakteri konsantrasyonu, 10 kat azaltılmıştır ise seyreltme faktörü dilüsyonları sayısıdır. Aşılanmış hacmi her zaman 200 mikro litre idi ve test tüpünün büyüklüğü ile ilgilidir. </li></ol> Bu nedenle bakış konsantrasyon noktasına özetlemek, gentamisin antibiyotik 50 mg / ml konsantrasyonda oldu. Sonuna kadar, bakteri ile ilgilisüreci biz genel olarak 8 seyreltme vardı. Her bir seyreltme 10 arasında bir faktör tarafından yapıldı ve 200 ul tüplerde gerçekleştirilmiştir. Başlangıç ​​noktası, 200 ul tüp içine ilave örnekleri, 20 ul (ve dolayısıyla başlangıç ​​konsantrasyonu 20/200C, 0 C = 0 ile 0.1C0 numunelerin 20 ul başlangıç ​​konsantrasyonu olmak üzere) ve nihai konsantrasyon 8 azaltılmıştır 8 dilüsyonları nedeniyle büyüklükte emir. 3. Aydınlatma <ol><li> CW Nd: YAG lazer (532 nm ve 200 mW ortalama optik güç dalga boyu) optik% 50 /% 50 ışın ayırıcı kullanarak iki optik yolları ayrıldı. Işın çapı 10 mm ilgiliydi. Maruz kalma süresi 24 saat oldu. </li><li> Q-anahtarlı darbeli Nd: YAG lazer (532 nm dalga boyu, 300 mW ve 2.5 MW optik tepe gücü ortalama güç) da optik% 50 /% 50 ışın ayırıcı kullanarak iki yol bölündü. Nokta çapı 6 mm oldu. Q-anahtarlı lazer darbe genişliği 6 ns ve tekrarlama oranı 15Hz oldu.ortalama güç yoğunluğu 106 mW / cm 2 ve pik güç yoğunluğu 8.83 kW / mm 2 oldu. Maruz kalma süresi 24 saat oldu. </li></ol> Bakteriyel süspansiyon ışınlama sırasında karıştırıldı ve bakteriyel büyümeyi (bütün tüpler Luria Broth orta bakterilerin büyümesine izin vermek için orada) için uygun kültür koşulları altında tutuldu unutmayın.

<ol><li>Feuerstein, O., Persman, N., Weiss, E. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Phototoxic+Effect+of+Visible+Light+on+Porphyromonas+gingivalis+and+Fusobacterium+nucleatum%3A+An+In+Vitro+Study%5BTitle%5D)+AND+%22Photochemistry+and+Photobiology%22%5BJournal%5D)">Phototoxic Effect of Visible Light on Porphyromonas gingivalis and Fusobacterium nucleatum: An In Vitro Study.</a> Photochemistry and Photobiology. 80, 412-415 (2004).</li>
<li>Enwemeka, C. S., Williams, D., Enwemeka, S. K., Hollosi, S., Yens, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Blue+470-nm+light+kills+methicillin-resistant+Staphylococcus+aureus+%28MRSA%29+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22Photomed.+Laser+Surg%22%5BJournal%5D)">Blue 470-nm light kills methicillin-resistant Staphylococcus aureus (MRSA) in vitro.</a> Photomed. Laser Surg. 27, 221-226 (2009).</li>
<li>Guffey, J. S., Wilborn, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vitro+bactericidal+effects+of+405-nm+and+470-nm%5BTitle%5D)+AND+%22Photomed.+Laser+Surg%22%5BJournal%5D)">In vitro bactericidal effects of 405-nm and 470-nm.</a> Photomed. Laser Surg. 24, 684-688 (2006).</li>
<li>Lipovsky, A., Nitzan, Y., Friedman, H., Lubart, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sensitivity+of+Staphylococcus+aureus+strains+to+broadband+visible+light%5BTitle%5D)+AND+%22Photochem.+Photobiol%22%5BJournal%5D)">Sensitivity of Staphylococcus aureus strains to broadband visible light.</a> Photochem. Photobiol. 85, 255-260 (2008).</li>
<li>Lipovsky, A., Nitzan, Y., Lubart, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+possible+Mechanism+for+visible+light+induced+wound+healing%5BTitle%5D)+AND+%22Lasers+in+Surgery+and+Medicine%22%5BJournal%5D)">A possible Mechanism for visible light induced wound healing.</a> Lasers in Surgery and Medicine. 40, 509-514 (2008).</li>
<li>Lipovsky, A., Nitzan, Y., Gedanken, A., Lubart, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Visible+light-induced+killing+of+bacteria+as+a+function+of+wavelength%3A+Implication+for+wound+healing%5BTitle%5D)+AND+%22Lasers+in+Surgery+and+Medicine%22%5BJournal%5D)">Visible light-induced killing of bacteria as a function of wavelength: Implication for wound healing.</a> Lasers in Surgery and Medicine. 42, 467-472 (2010).</li>
<li>Feuerstein, O., Ginsburg, I., Dayan, E., Veler, D., Weiss, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanism+of+Visible+Light+Phototoxicity+on+Porphyromonas+gingiwalis+and+Fusobacferium+nucleaturn%5BTitle%5D)+AND+%22Photochemistry+and+Photobiology%22%5BJournal%5D)">Mechanism of Visible Light Phototoxicity on Porphyromonas gingiwalis and Fusobacferium nucleaturn.</a> Photochemistry and Photobiology. 81, 1186-1189 (2005).</li>
<li>Nussbaum, E. L., Lilge, L., Mazzulli, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+630-%2C+660-%2C+810-%2C+and+905-nm+laser+irradiation+delivering+radiant+exposure+of+1-50+J%2Fcm2+on+three+species+of+bacteria+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Clin.+Laser+Med.+Surg%22%5BJournal%5D)">Effects of 630-, 660-, 810-, and 905-nm laser irradiation delivering radiant exposure of 1-50 J/cm2 on three species of bacteria in vitro.</a> J. Clin. Laser Med. Surg. 20, 325-333 (2002).</li>
<li>Dadras, S., Mohajerani, E., Eftekhar, F., Hosseini, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Different+Photoresponses+of+Staphylococcus+aureus+and+Pseudomonas+aeruginosa+to+514%2C+532%2C+and+633+nm+Low+Level+Lasers+In+Vitro%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Microbiology%22%5BJournal%5D)">Different Photoresponses of Staphylococcus aureus and Pseudomonas aeruginosa to 514, 532, and 633 nm Low Level Lasers In Vitro.</a> Current Microbiology. 53, 282-286 (2006).</li>
<li>Stover, C. K., Pham, X. Q., Erwin, A. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Complete+genome+sequence+of+Pseudomonas+aeruginosa+PAO1%2C+an+opportunistic+pathogen%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Complete genome sequence of Pseudomonas aeruginosa PAO1, an opportunistic pathogen.</a> Nature. 406, 952-964 (2000).</li>
<li>Hamblin, M. R., Demidova, T. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanisms+of+low+level+light+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+SPIE%22%5BJournal%5D)">Mechanisms of low level light therapy.</a> Proc. SPIE. 6140, 1-12 (2006).</li>
<li>Krespi, Y. P., Stoodley, P., Hall-Stoodley, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Laser+disruption+of+biofilm%5BTitle%5D)+AND+%22Laryngoscope%22%5BJournal%5D)">Laser disruption of biofilm.</a> Laryngoscope. 118, 1168-1173 (2008).</li>
<li>Reznick, Y., Banin, E., Lipovsky, A., Lubart, R., Zalevsky, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Direct+laser+light+enhancement+of+susceptibility+of+bacteria+to+gentamycin+antibiotic%5BTitle%5D)+AND+%22Opt.+Commun%22%5BJournal%5D)">Direct laser light enhancement of susceptibility of bacteria to gentamycin antibiotic.</a> Opt. Commun. 284, 5501-5507 (2011).</li>
</ol>

Çıkar çatışması ilan etti.

Fototerapi tedavisi çok hastalıklar için umut verici bir yaklaşım olarak ortaya son yıllarda gelişmiş çok disiplinli bir araştırma alanı olmuştur. Bu bağlamda görünür aralığında ışık kullanımı yaygın incelenmiştir. Örneğin, enfekte yaralar sterilizasyon amacıyla yoğun görünür ışığa maruz bırakılmasıyla, daha etkili bir şekilde iyileşmiş edilebilir olduğu tespit edilmiştir. Bu yaklaşım için eylem mekanizması bakteri 11 öldürmek ışık kaynaklı oksijen radikallerinin indüksiyon (ROS) aracılığıyla olduğu kanıtlanm...

<table><tbody><tr><td>Lauria Besiyeri</td><td>Difco</td><td>241420</td><td></td></tr><tr><td>Gentamisin</td><td>Sigma</td><td>G1914</td><td></td></tr><tr><td>Bacto Agar</td><td>Difco</td><td>231710</td><td></td></tr></tbody></table>

Üzerinde görebilir işık ve gentamisin en sinerjik etkisi<em&gt; pseudomona aeruginosa</em&gt; mikroorganizmalar

The Synergistic Effect of Visible Light and Gentamycin on Pseudomona aeruginosa Microorganisms

Son zamanlarda görünür ışık, çoğu çeşitli patojenler 1-5 öldürmekten sorumlu olan spektrumun bu mavi kısmı (400 nm-500 nm) iddia bakterisidal etkisi çeşitli yayınlar vardı. Mavi ışık fototoksik etkisi ışık kaynaklı reaktif oksijen türlerinin (ROS) çoğunlukla mavi bölgede 4,6,7 ışık absorbe endojen bakteriyel ışığa tarafından oluşumunun bir sonucu olduğu ileri sürülmüştür. Kırmızı ve yakın kızılötesi 8 yanı sıra yeşil ışık 9 biyosidal etkisi raporları da vardır. Bu çalışmada, bize Pseudomonas aeruginosa üzerinde yüksek güç yeşil (532 nm dalga boyu) sürekli (CW) ve darbeli Q-anahtarlı (QS) ışık etkisini karakterize etmek için izin verilen bir yöntem geliştirdi. Bu yöntemi kullanarak biz de bakteri canlılığı üzerindeki antibiyotik tedavisi (gentamisin) ile birlikte yeşil ışık etkisini inceledi. P. aeruginosa acommon noscomial fırsatçı patojen çeşitli hastalıklara neden olur. Gerginlik çeşitli antibiyotiklere oldukça dirençli ve birçok tahmin AcrB / Mex tipi RND akış sistemleri 10 ilaca içerir. Serbest yaşayan durağan faz, Gram-negatif bakteriler (Pseudomonas aeruginosa PAO1 suşu), Luria Broth (LB) ve antibiyotik gentamisin ilavesi olmadan Q-anahtarlı ve / veya CW lazerler maruz kalan bir ortamda yetiştirilen kullanılan yöntem. Hücre canlılığı, farklı zaman noktalarında belirlenmiştir. Elde edilen sonuçlar, tek başına lazer tedavisi sadece P. için uygun sayısında 0.5 günlük azalma sonuçlandı tedavi edilmemiş kontrolü ve tek başına gentamisin tedavisine göre hücre canlılığı azaltmak olmadığını gösterdi aeruginosa. Birleştirilen lazer ve gentamisin tedavi Ancak, S. bir sinerjistik etkisi olduğunu ve canlılığı sonuçlandı aeruginosa 8 günlük en azalmıştır. Önerilen yöntem, bundan başka uygu olabiliraynı anda ışık alanı aydınlatan ise enfekte organı içine bir antibiyotik çözüm enjekte yeteneğine sahip cihaz gibi kateter geliştirilmesi ile tamamlanır.

Lazer tabanlı kurulum şematik olarak Şekil 1&#39;de sunulmuştur. İlk deneysel durumu bir CW Nd kullanılan: ve 200 mW ortalama optik güç: YAG lazer 532 nm dalga boyu (YAG Nd ikinci harmonik) sahip. Bu ışın her bölünmüş ışın gücü 100 mW olduğu gibi optik% 50 /% 50 ışın ayırıcı kullanarak iki optik yolları ayrıldı. Işın çapı yaklaşık 10 mm idi ve bu nedenle güç yoğunluğu yaklaşık 100 mW / cm 2 idi. Maruz kalma süresi 24 saat oldu. Aydınlatma gücü nispeten yüksek olmasına rağmen örnek ısıtma nede...

Sürekli veya atımlı görebilir lazer esaslı muamele içeren gelişmiş bir biyomedikal cihaz antibiyotik tedavisi (kadaverin), canlılığı bir azalmaya yol açan bir istatistiksel olarak belirgin bir sinerjistik etki sonuçları ile birlikte olduğunu göstermektedir<em&gt; S. aeruginosa</em&gt; PAO1, 8 ile günlük tek başına antibiyotik tedavisi ile karşılaştırıldığında var.

Üzerinde görebilir Işık ve Gentamisin en Sinerjik Etkisi<em&gt; Pseudomona aeruginosa</em&gt; Mikroorganizmalar

Son zamanlarda, çoğunlukla spektrumun mavi kısmının (400 nm-500... görünür ışığın bakterisid etkisi üzerine birkaç yayın yapılmıştır.

Aşağıdaki prosedürün genel amacı, görünür ışığın çözelti halindeki Pseudomona aerogen üzerinde gentamisin etkinliğini artırdığını deneysel olarak doğrulamaktır. Bu işlem, öncelikle deneysel bakteri kültürünün büyütülmesiyle gerçekleştirilir. İkinci adımda, bakteriler antibiyotik tedavisi varlığında veya yokluğunda ışığa maruz bırakılır.Son olarak, örnekler 24 saatlik bir süre boyunca kültürden toplanır ve ardından her zaman noktasındaki hücre kültüründe bulunan koloni oluşum birimleri nicelendirilir. Nihayetinde, aydınlatmanın bakterilerin antibiyotik tedavisiyle eliminasyona karşı duyarlılığı üzerindeki etkisi değerlendirilebilir. Aydınlatma, antibiyotik tedavisinin etkinliğini artırdığı için bu tekniğin etkileri enfeksiyonların in vivo tedavisine kadar uzanmaktadır.Prosedürün gösterimi, laboratuvarımdaki yüksek lisans öğrencisi Anna Resnick tarafından gerçekleştirilecektir. İlgili bakteri kültürünü uygun büyüme ortamında çoğaltarak başlayın. Burada, gram-negatif P aerogen suşu olan PAO one, luria broth içerisinde 37 °C'de on üç saat boyunca kültüre edilmektedir.Ardından, hücreleri oda sıcaklığında yaklaşık 3.145 G ile beş dakika boyunca santrifüjleyin. Daha sonra süpernatanızı al

the-synergistic-effect-visible-light-gentamycin-on-pseudomona

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

İmmünoloji ve Enfeksiyon

Çok ilaca dirençli (MDR) bakteri suşlarının neden olduğu enfeksiyonlar, halk sağlığı için ciddi bir tehdit olarak ortaya çıkmış ve alternatif terapötiklerin geliştirilmesini gerektirmiştir. Biyolüminesans görüntüleme kullanarak fare yanıklarında MDR Acinetobacter baumannii enfeksiyonları için antimikrobiyal mavi ışık (aBL) tedavisinin etkinliğini değerlendirmek için bir protokol sunuyoruz.

Çok ilaca dirençli için Antimikrobiyal Mavi Işık Tedavisinin Vivo İncelenmesinin Acinetobacter baumannii Biyoparlaklık ımaging&#39;i kullanarak Enfeksiyonlar Yanık

Antimikrobiyal sinerji test birlikte kullanılan iki veya daha fazla antibiyotik etkisini değerlendirmek için kullanılır ve genellikle iki yöntemden birini kullanarak gerçekleştirilir: Dama Tahtası dizi ya da zaman-kill tahlil. Burada, otomatik bir, mürekkep püskürtmeli yazıcı destekli Dama Tahtası dizi sinerji teknik ve bir klasik saat-kill sinerji çalışma mevcut.

Antimikrobiyal sinerji mürekkep püskürtmeli yazıcı yoluyla tarafından test otomatik Dama Tahtası dizi ve el ile zaman-kill yöntem

Bu protokol, D 2O metabolizmasının tek hücreli uyarılmış Raman saçılma görüntülemesi ile 2.5 saat içinde hızlı antimikrobiyal duyarlılık testi (AST) testi sunar. Bu yöntem, klinikte hızlı tek hücreli fenotipik AST için dönüştürücü olan idrar veya tam kan ortamındaki bakteriler için geçerlidir.

Tek Bir Bakteride Döteryum Birleşmesinin Uyarılmış Raman Saçılma Görüntülemesi ile Hızlı Antimikrobiyal Duyarlılık Testi

Burada, düşük yoğunluklu mavi ve mor ışık ışınlaması altında flavin mononükleotidin (FMN) fotolizi sırasında üretilen reaktif oksijen türleri ile patojenik bakterileri inaktive etmek için bir protokol sunuyoruz. FMN fotolizinin sıhhi işlemler için basit ve güvenli bir yöntem olduğu gösterilmiştir.

Riboflavin-5′- Fosfatın Görünür Işık Fotolizi ile Patojenlerin İnaktivasyonu

Candida spp. ilaç direncinde minyon kolonilerin önemi tam olarak araştırılmamıştır. Antimikrobiyal fotodinamik tedavi (aPDT), ilaca dirençli mantar enfeksiyonlarına karşı umut verici bir strateji sunmaktadır. Bu çalışma, gül bengal aracılı aPDT'nin Candida glabrata'yı etkili bir şekilde deaktive ettiğini ve küçük kolonileri indükleyerek benzersiz bir prosedür sunduğunu göstermektedir.

Rose Bengal Aracılı Fotodinamik Terapi ile Candida glabrate'de Minyon Kolonilerin İndüksiyonu

Bu metodoloji, araştırma ve klinik laboratuvarlarda antimikrobiyal duyarlılık testi için kistik fibrozda bir polimikrobiyal biyofilm modelinin oluşturulmasına izin verir. Bu model, bir dizi çıktıda doğru ve güvenilir sonuçlar sağlar.

Kistik Fibrozisde Antimikrobiyalleri Test Etmek İçin Polimikrobiyal Koloni Biyofilm Modelinin Geliştirilmesi

Bu protokol, bir LED panel ışık kaynağı ile birleştirilmiş 96 oyuklu bir plaka formatı kullanarak, antibakteriyel fotodinamik inaktivasyonda (aPDI) potansiyel ışığa duyarlılaştırıcıların etkinliğini değerlendirmek için basit ve ekonomik bir yöntemi açıklar. Bu yaklaşım, farklı konsantrasyonlar, bileşikler ve bakteri suşları dahil olmak üzere birden fazla deneysel koşulun aynı anda test edilmesini sağlar.

Bakteriyel Fotodinamik İnaktivasyonda Fotoaktif Moleküllerin Değerlendirilmesi için LED Tabanlı İn Vitro Tarama

405 nm mavi ışık LED cihazı, kolajen bazlı sentetik cilt modelinde değerlendirildiğinde geniş bir yara patojenlerine karşı antimikrobiyal etkinlik göstermektedir. Bu basitleştirilmiş in vitro yaklaşım, ışık temelli antimikrobiyal tedavilerin erken aşama değerlendirmesi için tekrarlanabilir ve etik açıdan uygulanabilir bir alternatif sunar.

Kolajen Bazlı Sentetik Cilt Modeli Kullanarak Yara Patojenlerini Bastırmak İçin Mavi Tışık LED Cihazının Araştırılması

Bu protokol, fitokimyasalların geleneksel biyositlerin bakterisit etkilerini nasıl artırabileceğini değerlendirmek için sistematik bir çerçeve sunar; bakterisit aktivite modellemesi ve kombinatoryal etkileşim testleri kullanarak, mikrobiyal kontrolü iyileştiren ve genel biyosit kullanımını azaltan sinergistik karışımları belirlemeyi amaçlar.

In Vitro Bitki kaynaklı moleküllerin geleneksel biyositler üzerindeki etkisinin değerlendirilmesi

Bu kağıt büyüyen farklı yöntemleri açıklar.

Co-kültür Modelleri Pseudomonas aeruginosa</emCanlı İnsan Havayolu Hücreler Yetiştirilen> Biyofilmler

Keşfedin Pseudomonas aeruginosa üzerinde görünür ışık ve gentamisin sinerjik etkisini. Bu yöntem, antibiyotik direncine karşı yeni tedavi stratejileri geliştirmeye yardımcı olur.

Üzerinde görebilir Işık ve Gentamisin en Sinerjik Etkisi

Daha fazla video keşfet