Name: Fare Östrus Döngüsü Evreleme Tanımlaması Vajinal Lavaj, Kristal Violet Boyama ve Vajinal Sitolojik Değerlendirilmesi Sahne (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-09-15T14:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 1 s
Description: Keşfedin fare östrus döngüsü evrelerini vajinal lavaj, kristal violet boyama ve sitolojik değerlendirme ile belirleme yöntemini. Bu protokol üreme biyolojisi ve hormonal düzenleme araştırmalarında güvenilir sonuçlar sağlar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Biz görsel modeli yardım için video üretimi ve kurgusu ve Carleton Dr Martin Bertrand Immersive Media Studio / Sinir Rejenerasyon Laboratuvar uzman teknik yardım için Carleton Immersive Media Studio Marc Leonard teşekkür etmek istiyorum. Yazarlar minnetle Dr Marilyn Keaney ve Ottawa Hayvan Bakım ve Veteriner Hizmetleri Üniversitesi&#39;nde adanmış tüm personelin uzman tavsiyesi kabul. Bu çalışma SALB, Yaşlanma CIHR Enstitüsü ve SALB ve SF, Kanada Vakfı Nörodejeneratif Lipidomics Sağlık Araştırma / CIHR Eğitim Programı (TGF 96121) Stratejik Eğitim Girişimi, Sağlık Araştırma Kanada Enstitüsü (CIHR, MOP 62826) tarafından finanse edilmiştir SF, SF Ontario Yenilik Güven ve SF Autodesk Araştırma Yenilik. ACM CIHR Banting ve iyi doktora ödülü aldı. NV Yaşlanma ve Nörodejeneratif Lipidomics yılında CIHR Eğitim Programı Enstitüsü sonrası profesyonel bursu alır.

1. Hazırlanması Reaktifler <ol><li> Gerekinceye kadar steril vajinal lavaj için, oda sıcaklığında, sıkıca kapatılmış bir kap içinde çifte damıtılmış su (GKD 2 O) ve depo otoklava. </li><li> Sitolojik değerlendirme için GKD 2 O. 100 ml kristal viyole toz 0.1 g ekleyebilir İyice karıştırın. Gerekinceye kadar kristal mor leke (% 0.1), oda sıcaklığında, sıkıca kapatılmış bir kap içinde muhafaza edilebilir. </li></ol> 2. Toplama Vajinal Hücreler (Vajinal Lavaj) <ol><li> Steril 200 ul ucu ucuna bir lateks ampul yerleştirin ve steril GKD 2 O bir ses kılavuz olarak ucu tonlamalarını kullanarak yaklaşık 100 ul hazırlar. </li><li> Onu kafes fare dışarı kaldırın ve kendinize doğru onu arka / arka ucu ile kafes hazne (kapaklı) onu yerleştirmek. </li><li> Sıkıca kuyruk kavrayın ve arka uç yükseltmek. Şimdi fare hazne kavrayarak sadece onu ön pençeleri var olacaktır. Bu noktada, fare idrara. Öyleyse, Idrara çıkma durana kadar bekleyin. Orada vajinal kanal girişinde sol idrar olmalı, ayrı bir ucu (yani, sizin örnek toplama ucu) kullanarak fazla GKD 2 O ile açılış durulama isteyebilirsiniz. </li><li> Vajinal (ve servikal) stimülasyon sıçanlarda 1,2 pseudopregnancy uyarabilir olarak orifis nüfuz edemez özen vajinal kanalın açılışında GKD 2 O dolu ucu sonu yerleştirin. Son raporlar fareler yine bakım tekrarlanan analizler 3 invazivlik derecesini en aza indirmek için alınması gereken bu etkiyi daha az duyarlı olduğunu düşündürmektedir. </li><li> Yavaşça vajinal kanalın açılışında su (~ 25-50 ul) hacminin yarısına dörtte sınırdışı ampulü bastırın. Sıvı kendiliğinden ucu ekleme olmadan kanal içine aspire olacaktır. Yavaşça ampul üzerine uyguladığı basınca bırakın. Sıvı ucu geri çekilecek. Sıvı aspirasyonu önlemek için çok hızlı bir şekilde serbest basınç kaçınınampul takın. Filtre edilmiş uç bu amaç için yararlı olabilir. </li><li> Tek bir örnek bir hücre elde etmek için yeterli sayıda aynı ucu, ampul, ve sıvı ile bir önceki adımda 4-5 kez tekrarlayın. </li><li> Cam slayt üzerine sıvı yerleştirin ve yayma tamamen oda sıcaklığında kurumaya bırakın. Kuruduktan sonra, bu östrus lekeler hemen lekeli veya saklanan ve daha sonraki bir tarihte lekeli olabilir. </li></ol> 3. Kristal Violet kullanarak Sitolojik Boyama * 4 <ol><li> Kristal viyole 1 dakika leke içeren bir Coplin kavanoz (veya diğer benzer boyanma damar) içinde kuru slayt yerleştirin. </li><li> GKD 2 O. içeren ikinci Coplin kavanoz çıkarın 1 dakika GKD 2 O ile slayt yıkayın. Tekrarlayın. </li><li> Lekeli smear ile temas kaçınarak, hafif vergili doku silecek ile slayt kenarlarından aşırı GKD 2 O çıkarın. </li><li> Yayma ve kapak üstüne gliserol Pipet yaklaşık 15 ulslip. Alternatif olarak, diğer histolojik montaj reaktifler, bir daha kalıcı olmayan, leke difüzyon elde etmek için kullanılabilir. </li></ol> Burada anlatılan * boyama yöntemi, herhangi bir laboratuvar yapılabilir basit bir işlemdir. Diğer yöntemler ek ayrıntıları sağlayabilir. Örneğin, Papanicolaou yöntemiyle, çekirdekli epitel hücrelerinin vadesi olgun hücrelere lekeli turkuaz ve daha olgun hücreler pembe ya da turuncu-lekeli ile ayırt edilebilir. Bu farklılıklar, erken ya da geç Proestrus hazırlamak için de kullanılabilir. 4 4. Vajinal Sitoloji <ol><li> Hücre tipleri mevcut belirlemek için ışık mikroskobunda smear inceleyin. Mikroskop incelemesi için coverslipping gliserol kullanıldığı zaman kristal viyole saat boyunca hücrelerin dağılacaktır olarak lekeleme hemen sonra yapılmalıdır. Fotomikrografı sitoloji belgelemek için analiz sırasında alınmalıdır. </li><li> Entir inceleyerek başlayındüşük büyütmede e smear. Temsili bir alan seçin ve daha yüksek bir büyütme taşımak. Eğer (temsili sonuçlar, Şekil 1A-C) yassı epitel hücreleri, lökositler, ve / veya çekirdekli epitel hücreleri boynuzsu görür. Hücrelerin mevcut oran, numune toplama zamanı (temsilcisi sonuçlar, Şekil 1D-G) ve onun derhal hormonal durumu (tartışma, Şekil 2) fare östrus evresini belirlemek için izin verir. </li></ol> 5. Temsilcisi Sonuçlar Sitoloji: Üç birincil hücre tipleri vaginal smear örneklerinde tespit edilebilir: (1) çekirdekli epitel hücreleri (Şekil 1A), (2) skuamöz epitel hücreleri (Şekil 1B), ve (3) lökosit (Şekil 1C) Boynuzsu. Çekirdekli epitel hücreleri hafifçe lekeli sitoplazma, koyu lekeli plazma zarı ve oval nükleus var ( <strong&gt; Şekil 1A). Boynuzsu skuamöz epitel hücreleri çekirdekli epitel öncekilerden daha şekil daha çok köşeli, düzgün lekeli ve bir çekirdek (Şekil 1B) yoksundur. Polimorfonükleer lökositler onların düzensiz şekil, koyu lekeli polimorfik nukleus ve küçük boyutu (Şekil 1C, siyah oklar) ile epitel hücreleri ayırt edilebilir. Idrar kontaminasyon yayma mevcut olmalı, ürik asit kristalleri kolayca herhangi beklenen hücre tipleri (Şekil 3) benzemeyen kendi kristal yapılar tarafından algılanır. Bu meydana, ve baskın hücre tipi belirsiz tespiti halinde, smear atılır ve Aşamalandırma amacıyla kullanılmaz edilmelidir. Hazırlama: lekeleri içinde gözlenen hücre tipleri arasında nispi oranı, numune toplama gününde (şekil 1D-G) fare estrojen döngüsü aşamasına belirlemek için kullanılabilir. Proestrus sırasında hücreler hemen hemen özeldiryuvarlak kümeleri, epitel hücreleri (Şekil 1D, beyaz ok ile gösterilen temsili hücre) çekirdeğini iyi biçimlidir. Kızgınlık sırasında hücreler ağırlıklı yoğun dolu kümeleri bulunan skuamöz epitel hücreleri, (Şekil 1E, ok ucu ile gösterilen temsili hücre) Boynuzsu edilir. Metestrus sırasında, küçük koyu lekeli lökosit (Şekil 1F, siyah ok ile gösterilen temsili hücre) baskındır. Boynuzsu yassı epitel hücreleri genellikle parçacıkları, (Şekil 1F, beyaz ok ucu ile gösterilen temsili hücre) içinde görülebilir. Diestrus sırasında nadir Boynuzsu skuamöz epitel hücreleri hala (Şekil 1G, siyah ok ucu ile gösterilen temsili hücre) mevcut olabilir, ancak lökosit hala (Şekil 1G, siyah ok ile gösterilen temsili hücre) baskındır. Metestrus diestrus içinde çekirdekli epitel hücrelerinin görünümü (diestrus ile ayırt edilebilir <stron<html> g&gt; Şekil 1G, temsili hücre) beyaz okla gösterilir. <img src="/files/ftp_upload/4389/4389fig1.jpg" alt="Şekil 1" /> Şekil 1. Vaginal smear sitolojik değerlendirilmesi östrus aşamada tanımlamak için kullanılan üç ana hücre tipi vajinal smear örneklerinde tespit edilmiştir:. (A) çekirdekli epitel hücreleri, (B) Boynuzsu skuamöz epitel hücreleri, ve (C) lökositler. Yayma mevcut olan bu hücre tipleri oranı (D) Proestrus, (E) kızışma, (F) metestrus, ya da (G) diestrus olarak temsil eden sonuçlar tarif fareler belirlemek için kullanılabilir. Temsilcisi Boynuzsu skuamöz epitel hücreleri E, F ve G noktası Siyah ok başları. Temsilcisi leykocytes C, F ve G noktası siyah oklar. D ve G vurgulamak temsilcisi Beyaz oklar epitel hücreleri çekirdekleşirken. . Jpg &quot;alt =&quot; Şekil 2 &quot;/&gt; Şekil 2. Vajinal smear sitoloji yatan endokrin olayları yansıtır. Ayrıntılar ayrıca Tartışma sağlanmaktadır. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/4389/4389fig2large.jpg" target="_blank">büyük bir rakam görmek için buraya tıklayın</a> . <img src="/files/ftp_upload/4389/4389fig3.jpg" alt="Şekil 3" /> Şekil 3,. Ürik asit kristalleri idrar-kontamine örneklerin bugünkü şu kristal violet boyama olabilir. (A) Kristaller şeffaf ve çeşitli boyutlarda ((B) büyütülmüş oklar ve kutulu bölge) olabilir. Resim hücreleri, bu alanda bulunmaktadır. Sitolojik boyama için kullanılan alanlar içinde ürik asit kristal kirlenme mevcut olmalı, doğru hücre tipleri mevcut ve yayma atılmalıdır tespit etmek zor olabilir. Ölçek bar = 50 mikron.

<ol><li>Adler, N. T., Zoloth, S. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Copulatory+behavior+can+inhibit+pregnancy+in+female+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Copulatory behavior can inhibit pregnancy in female rats.</a> Science. 168, 1480-1482 (1970).</li>
<li>Adler, N. T., Resko, J. A., Goy, R. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+effect+of+copulatory+behavior+on+hormonal+change+in+the+female+rat+prior+to+implantation%5BTitle%5D)+AND+%22Physiology%22%5BJournal%5D)">The effect of copulatory behavior on hormonal change in the female rat prior to implantation.</a> Physiology. 5, 1003-1007 (1970).</li>
<li>Yang, J. J., Larsen, C. M., Grattan, D. R., Erskine, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mating-induced+neuroendocrine+responses+during+pseudopregnancy+in+the+female+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of%22%5BJournal%5D)">Mating-induced neuroendocrine responses during pseudopregnancy in the female mouse.</a> Journal of. 21, 30-39 (2009).</li>
<li>Hong, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Changes+in+the+mouse+estrus+cycle+in+response+to+BRCA1+inactivation+suggest+a+potential+link+between+risk+factors+for+familial+and+sporadic+ovarian+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+research%22%5BJournal%5D)">Changes in the mouse estrus cycle in response to BRCA1 inactivation suggest a potential link between risk factors for familial and sporadic ovarian cancer.</a> Cancer research. 70, 221-228 (2010).</li>
<li>Hawkins, S. M., Matzuk, M. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+menstrual+cycle%3A+basic+biology%5BTitle%5D)+AND+%22Annals+of+the+New+York+Academy+of+Sciences%22%5BJournal%5D)">The menstrual cycle: basic biology.</a> Annals of the New York Academy of Sciences. 1135, 10-18 (2008).</li>
<li>Walmer, D. K., Wrona, M. A., Hughes, C. L., Nelson, K. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lactoferrin+expression+in+the+mouse+reproductive+tract+during+the+natural+estrous+cycle%3A+correlation+with+circulating+estradiol+and+progesterone%5BTitle%5D)+AND+%22Endocrinology%22%5BJournal%5D)">Lactoferrin expression in the mouse reproductive tract during the natural estrous cycle: correlation with circulating estradiol and progesterone.</a> Endocrinology. 131, 1458-1466 (1992).</li>
<li>Parkening, T. A., Collins, T. J., Smith, E. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Plasma+and+pituitary+concentrations+of+LH%2C+FSH%2C+and+prolactin+in+aging+C57BL%2F6+mice+at+various+times+of+the+estrous+cycle%5BTitle%5D)+AND+%22Neurobiology+of+aging%22%5BJournal%5D)">Plasma and pituitary concentrations of LH, FSH, and prolactin in aging C57BL/6 mice at various times of the estrous cycle.</a> Neurobiology of aging. 3, 31-35 (1982).</li>
<li>Sarkar, D. K., Chiappa, S. A., Fink, G., Sherwood, N. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gonadotropin-releasing+hormone+surge+in+pro-oestrous+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Gonadotropin-releasing hormone surge in pro-oestrous rats.</a> Nature. 264, 461-463 (1976).</li>
<li>Rajendren, G., Gibson, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+confocal+microscopic+study+of+synaptic+inputs+to+gonadotropin-releasing+hormone+cells+in+mouse+brain%3A+regional+differences+and+enhancement+by+estrogen%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroendocrinology%22%5BJournal%5D)">A confocal microscopic study of synaptic inputs to gonadotropin-releasing hormone cells in mouse brain: regional differences and enhancement by estrogen.</a> Neuroendocrinology. 73, 84-90 (2001).</li>
<li>Kumar, T. R., Wang, Y., Lu, N., Matzuk, M. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Follicle+stimulating+hormone+is+required+for+ovarian+follicle+maturation+but+not+male+fertility%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Follicle stimulating hormone is required for ovarian follicle maturation but not male fertility.</a> Nature. 15, 201-204 (1997).</li>
<li>Montgomery, V., Loutradis, D., Tulchinsky, D., Kiessling, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((FSH-induced+ovulation+in+intact+and+hypophysectomized+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+reproduction+and+fertility%22%5BJournal%5D)">FSH-induced ovulation in intact and hypophysectomized mice.</a> Journal of reproduction and fertility. 84, 1-6 (1988).</li>
<li>Mihm, M., Gangooly, S., Muttukrishna, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+normal+menstrual+cycle+in+women%5BTitle%5D)+AND+%22Animal+reproduction+science%22%5BJournal%5D)">The normal menstrual cycle in women.</a> Animal reproduction science. , 124-229 (2011).</li>
<li>Appelgren, L. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Histochemical+demonstration+of+drug+interference+with+progesterone+synthesis%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+reproduction+and%22%5BJournal%5D)">Histochemical demonstration of drug interference with progesterone synthesis.</a> Journal of reproduction and. 19, 185-186 (1969).</li>
<li>Sander, V. A., Facorro, G. B., Piehl, L., de Celis Rubin, E., Motta, A. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+DHEA+and+metformin+on+corpus+luteum+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Reproduction%22%5BJournal%5D)">Effect of DHEA and metformin on corpus luteum in mice.</a> Reproduction. 138, 571-579 (2009).</li>
<li>Stocco, C., Telleria, C., Gibori, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+molecular+control+of+corpus+luteum+formation%2C+function%2C+and+regression%5BTitle%5D)+AND+%22Endocrine+reviews%22%5BJournal%5D)">The molecular control of corpus luteum formation, function, and regression.</a> Endocrine reviews. 28, 117-149 (2007).</li>
<li>Rudolph, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Induction+of+overt+menstruation+in+intact+mice%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Induction of overt menstruation in intact mice.</a> PLoS One. 7, e32922(2012).</li>
<li>Yano, J., Lilly, E., Barousse, M., Fidel, P. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Epithelial+cell-derived+S100+calcium-binding+proteins+as+key+mediators+in+the+hallmark+acute+neutrophil+response+during+Candida+vaginitis%5BTitle%5D)+AND+%22Infection+and+immunity%22%5BJournal%5D)">Epithelial cell-derived S100 calcium-binding proteins as key mediators in the hallmark acute neutrophil response during Candida vaginitis.</a> Infection and immunity. 78, 5126-5137 (2010).</li>
<li>Whitten, W. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Occurrence+of+anoestrus+in+mice+caged+in+groups%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+endocrinology%22%5BJournal%5D)">Occurrence of anoestrus in mice caged in groups.</a> The Journal of endocrinology. 18, 102-107 (1959).</li>
<li>Lamond, D. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+stimulation+derived+from+other+animals+of+the+same+species+on+oestrous+cycles+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+endocrinology%22%5BJournal%5D)">Effect of stimulation derived from other animals of the same species on oestrous cycles in mice.</a> The Journal of endocrinology. 18, 343-349 (1959).</li>
<li>Nelson, J. F., Felicio, L. S., Randall, P. K., Sims, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+longitudinal+study+of+estrous+cyclicity+in+aging+C57BL%2F6J+mice%3A+I.+Cycle+frequency%2C+length+and+vaginal+cytology%5BTitle%5D)+AND+%22Biology+of+reproduction%22%5BJournal%5D)">A longitudinal study of estrous cyclicity in aging C57BL/6J mice: I. Cycle frequency, length and vaginal cytology.</a> Biology of reproduction. 27, 327-339 (1982).</li>
<li>Felicio, L. S., Nelson, J. F., Finch, C. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Longitudinal+studies+of+estrous+cyclicity+in+aging+C57BL%2F6J+mice%3A+II.+Cessation+of+cyclicity+and+the+duration+of+persistent+vaginal+cornification%5BTitle%5D)+AND+%22Biology+of+reproduction%22%5BJournal%5D)">Longitudinal studies of estrous cyclicity in aging C57BL/6J mice: II. Cessation of cyclicity and the duration of persistent vaginal cornification.</a> Biology of reproduction. 31, 446-453 (1984).</li>
<li>Van Der Lee, S., Boot, L. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spontaneous+pseudopregnancy+in+mice.+II%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+physiologica+et+pharmacologica+Neerlandica%22%5BJournal%5D)">Spontaneous pseudopregnancy in mice. II.</a> Acta physiologica et pharmacologica Neerlandica. 5, 213-215 (1956).</li>
<li>Van Der Lee, S., Boot, L. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spontaneous+pseudopregnancy+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+physiologica+et+pharmacologica+Neerlandica%22%5BJournal%5D)">Spontaneous pseudopregnancy in mice.</a> Acta physiologica et pharmacologica Neerlandica. 4, 442-444 (1955).</li>
<li>Armaiz-Pena, G. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Estrous+cycle+modulates+ovarian+carcinoma+growth%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+cancer+research+%3A+an+official+journal+of+the+American+Association+for+Cancer+Research%22%5BJournal%5D)">Estrous cycle modulates ovarian carcinoma growth.</a> Clinical cancer research : an official journal of the American Association for Cancer Research. 15, 2971-2978 (2009).</li>
<li>Jemiolo, B., Harvey, S., Novotny, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Promotion+of+the+Whitten+effect+in+female+mice+by+synthetic+analogs+of+male+urinary+constituents%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">Promotion of the Whitten effect in female mice by synthetic analogs of male urinary constituents.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 83, 4576-4579 (1986).</li>
</ol>

Yazarlar herhangi bir çıkar çatışması beyan ederim. Hayvanlar üzerinde tüm deneyler Ottawa Hayvan Bakım Komitesi Üniversitesi ve Hayvan Bakımı Kanada Konseyi tarafından belirlenen kurallara ve yönetmeliklere tam uyum içinde yapıldı.

Hücre tipoloji Bu değişiklikler altta yatan endokrin olaylar göstergesidir. Estrojen döngüsü Proestrus faz adet döngüsünün 5 insan foliküler faz karşılık gelir ve 17-β-estradiol düzeyleri 6 dolaşan bir ön-ovulatuar artışın, aynı zamanda prolaktin 7 küçük dalgalanma (Şekil 2 ile tanımlanır, Proestrus, sol panel). 17-β-estradiol artış dolaylı uyarır gonadotropin salgılatıcı sırayla, sirkülasyon 8,9 içine luteinizan hormon ve follikül uyarıcı hormon serbest bırakmak için ön hipofiz içinde duyarlı hücreleri aktive, hipotalamus ve septumda hormon nöronlar (Şekil 2 , Proestrus, sol panel). Proestrus yılında hayvanlardan alınan vajinal smear, hücreler neredeyse sadece oval nükleuslu epitel hücreleri (Şekil 1D, Şekil 2, Proestrus, sağ panel) vardır. Folikül uyarıcı Horm yılında zirvekızışma 10,11 içine bir düzeyde sinyalleri yumurtlama ve giriş. Kızgınlık sırasında, 17-β-östradiol düzeyleri düşüş ve prolaktin seviyeleri zirve 6,7 (Şekil 2, Östrus, sol panel). Vajinal smear kümeleri genellikle düzensiz şekilli Boynuzsu skuamöz epitel hücreleri (Şekil 1E, Şekil 2, Östrus, sağ panel) neredeyse özel algılama ile karakterizedir. Metestrus girmesi progesteron hormon düzeyleri 6 sürekli bir artış ile çakışmaktadır ve insan luteal faz 12 (Şekil 2, Metestrus, sol panel) başlangıcına karşılık gelir. Progesteron seviyeleri yükselmeye başlar ve korpus luteum aktivasyon 6,13,14 (Şekil 2, Metestrus, sol panel) yanıt olarak 17-β-estradiol düzeyleri küçük bir dalgalanma var gibi. Bu aşamada sırasında vajinal smear mevcut hücre tipleri parçalanmış, boynuzsu epitel hücreleri ve küçük koyu lekeli lökosit (Figür vardırE 1F, Şekil 2, Metestrus, sağ panel). Son olarak, farelerde diestrus içine giriş oluşur ve progesteron seviyeleri insan geç luteal faz 12 karşılık gelen tepe 6, dolaşan. Corpus luteum Regresyon progesteron seviyeleri 15,16 bir sonraki keskin bir düşüş (Şekil 2, Diestrus, sol panel) yol açar. Lökositler diestrus sırasında smear baskındır. Boynuzsu epitel hücrelerinin sıklığı azalır ve çekirdekleşirken epitel hücrelerinin hemen önce Proestrus (Şekil 1G, Şekil 2, Diestrus, sağ panel) geçiş algılanabilir başlarız. Özetle, bu basit, rutin protokolü günlük hormonal dalgalanmalar tahmin ve aşağıdaki önlemler alındığı takdirde üreme durumunu değiştirmeden deneysel farelerde östrus sahne kurmak için kullanılabilir. Örnekleme günde bir kez invazif olmayan bir protokol kullanılarak azalan fazla yapılmalıdırvajinal kanal, aspirasyon ve ajitasyon tekrarlanan penetrasyonu ile karşılaştırıldığında burada belirlemiş. Bu sitolojik değerlendirme yanıltabilecek smear mevcut olduğu lökosit ve diğer hücre tipleri ile sonuçlanan bir inflamatuvar yanıt 17 sonuçlanan vajinal tahrişe neden olabilir. Dahası, koloni yer kadınlarda, iyi anestrous 18 indüksiyonu ve bu tanımlama üreme, cinsiyet hormonal etkisi yorumlanması yararlıdır, ve hastalık çalışmaları gibi farklı farelerde uzun diestrus ve kızışma aşamaları görmek normaldir. Döngüsü uzunluğu değişkenlik de yaş ile birlikte kadın ve 7,19-21 kolonileri içinde konut farklılıkları (bireysel ya da grup-konut) tarafından tanıtıldı. Sadece kadınların koloniler içinde yer Dişiler bisiklet durdurma ve bisiklet bisiklet 24,25 ortaya çıkarmak için erkek idrar ile önceden kafesleri maruz tarafından yeniden aktarabileceği rağmen uzamış diestrus 18,22,23 bir devlet girebilirsiniz. Böylece, individua kurmakBelirli bir fare için l döngü uzunlukları, iki tam devir gözlenir kadar burada açıklanan non-invaziv değerlendirmeler, bakım, günlük yapılması tavsiye edilir.

<table border="1"><tbody><tr><td> Isim </td><td> Şirket </td><td> Katalog # </td></tr><tr><td> Steril 200 ul pipet uçları </td><td> DiaMed </td><td> E340901 </td></tr><tr><td> Lateks ampul (1 mi) </td><td> Balıkçı </td><td> 03-488-21 </td></tr><tr><td> Cam mikroskop slaytlar </td><td> Balıkçı </td><td> 12-550-15 </td></tr><tr><td> Kristal Violet (25 g) leke </td><td> Balıkçı </td><td> C581-25 </td></tr><tr><td> Hafif iş Doku Silecekler </td><td> VWR </td><td> 82003-820 </td></tr><tr><td> Gliserin </td><td> Balıkçı </td><td> BP229-1 </td></tr><tr><td> Mikroskop Kapak Cam (22x30) </td><td> Balıkçı </td><td> 12-544A </td></tr></tbody></table>

fare Östrus döngüsü evreleme tanımlaması vajinal lavaj, kristal violet boyama ve vajinal sitolojik değerlendirilmesi sahne

Performing Vaginal Lavage, Crystal Violet Staining, and Vaginal Cytological Evaluation for Mouse Estrous Cycle Staging Identification

Kemirgenlerde üreme durumunu değerlendirmede hızlı bir araç değil sadece üreme disfonksiyon çalışmada yararlıdır ama aynı zamanda patolojik karşılaştırmadan sonra doku dejenerasyonu hormonal regülasyonu (veya rejenerasyon) içine yeni fare hastalık modelleri ve soruşturmaların üretimi için gereklidir. Proestrus, kızgınlık, metestrus ve diestrus: fare üreme (veya östrus) döngüsü 4 aşamadan ayrılmıştır. Over steroid 17-β-östradiol ve progesteron seviyelerini dolaşan Tanımlı dalgalanmalar, gonadotropinler luteinizan ve uyarıcı hormonlar folikül ve bu üreme aşamaları luteotropic prolaktin hormonu sinyal geçişi. Murin vajinal kanal içinde hücre tipolojisi değişiklikler bu temel endokrin olayları yansıtmaktadır. Çekirdekli epitel hücreleri, boynuzsu yassı epitel hücreleri, ve vajinal smear içinde mevcut lökositlerin göreli oran günlük değerlendirme mürin estrojen belirlemek için kullanılabiliraşamaları. Invazivlik derecesi, ancak bu örneklerin üreme durumunu değiştirmez ve smear sitolojik değerlendirilmesi bulandırabilir inflamatuar bir yanıt ortaya çıkarmak olabilir toplayarak istihdam. Burada, biz onu üreme döngüsü değiştirmeden bir kadın fare östrus siklusunun evresini belirlemek için kullanılabilecek basit, non-invaziv protokol açıklar. Biz nasıl dört vajinal smear baskın hücre tipolojisinin toplanması ve analizi ile östrus siklusunun evreleri ve bu değişikliklerin endokrin durumuna göre yorumlanabilir göstermek ayırt ayrıntı.

Burada, basit, non-invaziv toplama ve vaginal smear örneklerinin sitolojik değerlendirmesi ile fare üreme (Proestrus, kızgınlık, metestrus veya diestrus) aşamasında nasıl belirleneceği açıklanmaktadır. Biz daha vajinal sitoloji fare üreme döngüsü boyunca geçiş yatan hormonal seviyeleri dolaşımdaki nasıl yansıttığını açıklar.

Fare Östrus Döngüsü Evreleme Tanımlaması Vajinal Lavaj, Kristal Violet Boyama ve Vajinal Sitolojik Değerlendirilmesi Sahne

Kemirgenlerde reprodüktif durumun değerlendirilmesi için hızlı bir yöntemin olması, yalnızca reprodüktif disfonksiyon çalışmalarında faydalı olmakla kalmaz, aynı zamanda ... için de gereklidir.

Bu çalışmada gerçekleştirilen tüm prosedürler, Ottawa Üniversitesi Hayvan Bakım Komitesi ve Kanada Hayvan Bakım Konseyi tarafından belirlenen kılavuz ve düzenlemelere uygun olarak yürütülmüştür. Kemirgenlerin reprodüktif durumunu değerlendirmek için hızlı bir yöntemin olması, yalnızca reprodüktif disfonksiyon çalışmalarında faydalı olmakla kalmaz, aynı zamanda yeni hastalık fare modellerinin üretimi ile patolojik zorlanma sonrası doku dejenerasyonu veya rejenerasyonunun hormonal düzenlemesine yönelik araştırmalar için de gereklidir. Burada, vajinal sürüntülerde bulunan baskın hücre tipinin basit, non-invaziv sitolojik değerlendirmesi yoluyla, dişi farelerin herhangi bir gündeki reprodüktif siklus evrelerinin nasıl belirleneceğini açıklıyoruz.Üreme veya östrus döngüsünün yansıması dört evreye ayrılır. Proöstrus, östrus, metöstrus ve diöstrus; dolaşımdaki over steroidleri olan 17 beta estradiol ve progesteron ile gonadotropinler olan luteinize edici hormon ve folikül uyarıcı hormon seviyelerindeki dalgalanmaları tanımlarken, lüteotropik hormon prolaktin bu üreme evreleri arasındaki geçişi işaret eder. Östrus döngüsünün proöstrus evresi, menstrual döngünün insanlardaki foliküler evresine karşılık gelir ve dolaşımdaki 17 beta estradiol seviyelerinde ovülasyon öncesi bir artışın yanı sıra prolaktinde küçük bir yükselme ile tanımlanır.17 beta estradiol artışını, dolaşımdaki luteinize edici hormon ve folikül uyarıcı hormon seviyelerinde bir yükselme takip eder. Folikül uyarıcı hormon seviyelerindeki zirve, ovülasyonu ve östrus evresine girişi işaret eder. Östrus stresi sırasında, 17 beta estradiol seviyeleri ile prolaktin seviyeleri düşer.Met östrusa girişin zirvesi, dolaşımdaki folikül uyarıcı hormon seviyelerindeki küçük bir artışla örtüşür ve insanın luteal fazının başlangıcına tekabül eder. Progesteron seviyeleri yükselmeye başlar ve 17 beta estradiol seviyelerinde ikinci bir küçük artış meydana gelir. Corpus luteum aktivasyonuna yanıt olarak, dolaşımdaki progesteron seviyeleri zirveye ulaştığında farelerde diastrus evresine giriş gerçekleşir ve bu durum insanın [ilgili evresine] tekabül eder.Geç luteal faz. Korpus luteumun regresyonu, progesteron seviyelerinde ardından gelen keskin bir düşüşe ve prote aşamasına girişe yol açar. Hücre tipolojisindeki değişiklikler, epitel hücrelerinin göreceli oranında bu temel endokrin olayları yansıtır.Vajinal sürüntülerde tespit edilen sayısallaştırılmış hücreler ve lökositler, östrus evrelerinin her birini tanımlamak için kullanılabilir. Merhaba, benim adım Ashley McLean. Ottawa Üniversitesi'nde Dr. Stephanie Bennett yönetimindeki nörorejenerasyon laboratuvarında araştırmacıyım.Ben Nicholas Valenzuela. Ottawa'daki Carlton Üniversitesi'nde bulunan Carlton Immersive Media Studio'da Dr. Steven Phi ile çalışıyorum. Bu videoda, EST ekstra döngü aşaması tayini için kullanılabilecek basit bir protokolü açıklıyoruz.Bu protokol, baskın hücre tipolojisinin ve vajinal yaymaların değerlendirilmesi yoluyla proestrus, östrus, metaöstrus ve diestrus olmak üzere farenin dört üreme evresini nasıl ayırt edebileceğinizi detaylandıracaktır. Öyleyse başlayalım. Bu protokol için iki ürün hazırlamanız gerekecek: otoklavlanmış çift distile su ve %0,1'lik kristal viyole çözeltisi.Boyama solüsyonu, ihtiyaç duyulana kadar oda sıcaklığında sıkıca kapatılmış bir kapta saklanabilir. Steril bir 200 µL uca lateks bir ampul yerleştirerek başlayın ve yaklaşık 100 µL steril çift distile su çekin. Hacim kılavuzu olarak ucun üzerindeki derecelendirmeleri kullanın.Farenin arka tarafı size bakacak şekilde fareyi hazneye yerleştirin. Kuyruğunu sıkıca kavrayın ve arka kısmını nazikçe kaldırın. Fare, hazneyi kavramak için ön patilerini kullanacaktır.Bu noktada fare idrar yapabilir. Böyle bir durumda, bölgeyi ayrı bir uç kullanarak çift distile su ile durulayın. Çift distile su ile dolu ucun ucunu vajinal kanalın ağzına yerleştirin.Bulbu nazikçe sıkarak su hacminin dörtte birini veya yarısını vajinal kanala boşaltın. Ardından, bulba uygulanan basıncı yavaşça bırakarak sıvıyı tekrar uca geri çekin. Aynı uç bulbu ve sıvıyı kullanarak bu önceki adımı dört ila beş kez tekrarlayın.Sıvının bulba aspirasyonunu önlemek için basıncı çok hızlı tahliye etmekten kaçının. Bu amaç için filtreli uç kullanılması faydalı olabilir. Fareyi kafesine geri koyun ve sıvıyı lam üzerine boşaltın.Slaytın oda sıcaklığında tamamen kurumasını bekleyin. Kuruduktan sonra, bu Este ekstra yaymalar hemen veya daha sonraki bir tarihte boyanabilir. Hava ile kurutulmuş slaytı bir dakika boyunca kristal viyole boyasına yerleştirin.Lamı bir dakika boyunca çift distile su ile yıkayın. İşlemi tekrarlayın ve lam üzerindeki fazla çift distile suyu hafif bir doku mendiliyle temizleyin. Boyanmış yayma bölgesinden kaçınarak, yaymanın üzerine yaklaşık 20 µL gliserol damlatın ve üzerini lamel ile kapatın.Boya zamanla gliserol montajındaki hücrelerden yayılacağı için, boyanmış yaymaları mümkün olan en kısa sürede ışık mikroskobu altında incelemelisiniz. Önce tüm yaymayı düşük büyütmede inceleyerek başlayın. Temsili bir alan seçin ve daha yüksek büyütmeye geçin.Pro Astra aşamasında hücreler, neredeyse tamamen çekirdekli epitel hücrelerinden oluşur. Ekstra aşamasında göreceğiniz hücreler ise ağırlıklı olarak, genellikle yoğun kümeler oluşturan skuamöz boynuzlaşmış epitel hücreleridir. Bu hücreler düzensiz şekillidir ve görünür bir çekirdeğe sahip değildir.Met östrus evresinde, nadir boynuzlaşmış skuamöz epitel hücreleri hala gözlemlenir, ancak artık daha küçük ve daha koyu boyanan lökositler baskındır. Diöstrus evresinde ise, varsa bile çok az sayıda boynuzlaşmış skuamöz epitel hücresi bulunur. Geriye kalan lökositler ise çok büyük sayılarda mevcuttur.Hem tekil hücreler hem de kümeler halinde bulunan çekirdekli epitel hücreleri gözlemlenir. Karşılaşabileceğiniz sorunlardan biri, yaymanızın idrarla kontamine olmasıdır. Böyle bir durum gerçekleşirse, yaymayı atmalı ve evreleme için kullanmamalısınız.Vajinal lavajların nasıl yapılacağını size göstermiş olduk. Analiz anında dişi farelerin östrus döngüsünün evresini belirlemek için örnekler toplayın, bu örnekleri boyayın ve hücre tipolojisini değerlendirin. Özetlemek gerekirse, PROE'lerdeki preovulatuar evre boyunca, dolaşımdaki 17 beta estradiol seviyelerindeki zirve, vajinal smear örneklerinde iyi oluşmuş çekirdekli epitel hücrelerin baskınlığı ile kendini gösterir.Folikül uyarıcı hormon seviyelerindeki sonraki bir pik, ovülasyonu işaret eder ve östrus döneminde yaymalarda boynuzlaşmış skuamöz epitel hücreleri baskın hale gelir. Metöstrus sırasında progesteron seviyeleri yükselir. Bu zaman noktasında vajinal yaymalarda bulunan hücre tipleri, fragmanlara ayrılmış boynuzlaşmış epitel hücreleri ve daha küçük, daha koyu boyanmış lökositlerdir.Progesteronun zirve yaptığı diestrus sırasında, çekirdekli epitel hücreleri görülmeye başlar. Lökositler hâlâ mevcuttur. Bir dişi farenin düzenli döngüye girdiğinden emin olmak ve östrus döngüsünün uzunluğunu belirlemek için bu değerlendirmeler günlük olarak yapılmalı ve iki tam döngü boyunca takip edilmelidir; farklı farelerde uzamış diestrus ve östrus evrelerinin görülmesi normaldir.Umarız bu çalışma cinsiyet ve hormon odaklı araştırmalarınızda size yardımcı olur, deneylerinizde başarılar dileriz.

performing-vaginal-lavage-crystal-violet-staining-vaginal-cytological

Research

JoVE Journal

Biology

Biyoloji

Değerlendirilmesinde kullanılacak kilit...

Deneysel Fare Modeli Vajinal Aşılama ve Örnek Toplama Protokolleri Candida Vajinit

Kaynak: Morrill, S.R., ve diğerleri. Anaerobik olarak yetiştirilen bakteriler tarafından murin vajinal kolonizasyon modelleri. J. Vis. Uzm. (2022)Bu video, antibiyotiğe dirençli anaerobik bakteriler kullanılarak farelerde vajinal kolonizasyonun modellenmesine yönelik bir protokolü göstermektedir. Epitel duyarlılığını artırmak için hormonal tedavi ile başlar, ardından anaerobik koşullar altında vajinal aşılama ve ko-aşılama ile devam eder. Prosedür, bakteri kolonizasyonunu ve biyofilm oluşumunu...

Murin Vajinal Kolonizasyonunun Anaerobik Bakterilerle Modellenmesi

Bu protokolün amacı bir murin modelinde insan Grup B Streptococcus (GBS), vajinal kolonizasyonu taklit etmektir. Bu yöntem konak bağışıklık yanıtlarını ve GBS vajinal sebat katkıda bakteriyel faktörleri araştırmak için, yanı sıra tedavi stratejileri test etmek için kullanılabilir.

B Grubu bir murin modelinde<em&gt; Streptococcus</em&gt; Vajinal Kolonizasyon

Birçok tedaviler ve genetik mutasyonlar cinsel olgunluk ve doğurganlık zamanlaması etkisi. Bu iletişim kuralı fare ve sıçanlar cinsel olgun hayvanlar doğurganlık çalışmada kurma önce pubertal başlangıçlı değerlendirmek için non-invaziv bir yöntem açıklanır.

Pubertal başlangıçlı teyit ve doğurganlık tahlil fare ve sıçanlar üreme yetkinlik belirlenmesi

Rahim kasılmaları dişilerin refahı için önemlidir. Ancak, patolojik olarak artan kontraktilite dismenore neden olabilir, özellikle genç kadınlarda. Burada, dismenore tedavisinde kullanılabilecek düz kas gevşeticilerin etkinliğinin hızlı bir şekilde değerlendirilmesini sağlayan basit bir ex vivo hazırlık tarif ediyoruz.

Fare Üreme Yolu Spontan Hareketliliği Değerlendirmek için Ex Vivo Yöntemi ve Veri Analizi için MATLAB tabanlı Rahim Hareket Takip Algoritması

Bu çalışma, dişi sıçanları içeren deneysel tasarımlarda göz önünde bulundurulması gereken önemli faktörleri detaylandırmaktadır. Daha geniş anlamda, bu veriler damgalamayı azaltmaya ve daha kapsayıcı teşhis ve müdahale araçlarının geliştirilmesine yardımcı olmaya hizmet eder.

Vajinal Lavaj Kullanarak Kemirgen Östrus Döngüsünün İzlenmesi: Normal Bir Döngü Olarak Böyle Bir Şey Yok

Protokol, anaerobik olarak kültürlenmiş insan vajinal bakterileri ile vajinal kolonizasyonun bir fare modelini sunar. Prevotella bivia ve Fusobacterium nucleatum için öneriler eklerken Gardnerella vaginalis'e odaklanıyoruz. Bu protokol aynı zamanda vajinal aşılamalar ve diğer anaerobik olarak yetiştirilen bakterilerin canlı iyileşmesi için bir rehber olarak da kullanılabilir.

Yapay Olarak Yetiştirilen Bakteriler Tarafından Murin Vajinal Kolonizasyon Modelleri

Sunulan servikal manipülasyon yöntemi, vazektomize erkeklerle üreme dişilerine gerek kalmadan farelerde yalancı gebeliği indükleyebilir. Yalancı gebelik indüksiyonu, her ikisi de sunulan ameliyatsız embriyo transferi ve ameliyatsız suni tohumlamanın başarısı için gereklidir.

Cerrahi olmayan embriyo transferi veya suni tohumlamadan önce vazektomize erkeklere ihtiyaç duymadan dişi farelerde yalancı gebeliğin indüklenmesi

Bu makale, fare rahmine 1-3 dakika içinde %95 etanol enjekte ederek çok düşük mortalite oranı ve minimal intrauterin adezyonlara sahip güvenilir ve tekrarlanabilir bir ince endometriyum üretmek için ayrıntılı bir protokolü açıklamaktadır.

İnce Endometriyumun Fare Modelinin Oluşturulması

Yumurtalık kanseri Ortotopik hayvan modellerinde daha iyi insan hastalığı çoğaltmak ve bu nedenle kanser progresyonu ve tedaviye tümör yanıt anlayışımızı geliştirmek. Bir fare modelinde lusiferaz ifade over tümör hücrelerinin bir İntrabursal enjeksiyon alır. Tedavi ağızdan sonda ile yönetilmektedir. Tümör büyüme...

In vivo Görüntüleme ve Yumurtalık Kanseri Ortotopik Fare Modeli Tedavi Tedaviler

Keşfedin fare östrus döngüsü evrelerini vajinal lavaj, kristal violet boyama ve sitolojik değerlendirme ile belirleme yöntemini. Bu protokol üreme biyolojisi ve hormonal düzenleme araştırmalarında güvenilir sonuçlar sağlar.

Fare Östrus Döngüsü Evreleme Tanımlaması Vajinal Lavaj, Kristal Violet Boyama ve Vajinal Sitolojik Değerlendirilmesi Sahne

Daha fazla video keşfet