Chromosome Replicating Timing Combined with Fluorescent <em>In situ</em> Hybridization

Leslie Smith; Mathew Thayer

doi:10.3791/4400

Floresan ile birlikte Kromozom çoğaltılıyor Zamanlama Yerinde Hibridizasyon

JoVE Journal
Biology

A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.

JoVE Journal Biology

Chromosome Replicating Timing Combined with Fluorescent In situ Hybridization

Floresan ile birlikte Kromozom çoğaltılıyor Zamanlama Yerinde Hibridizasyon

Full Text

14,577 Views

17:14 min

December 10, 2012

DOI: 10.3791/4400-v

Leslie Smith¹, Mathew Thayer¹

¹Department of Biochemistry and Molecular Biology, Knight Cancer Institute,Oregon Health & Science University

Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

Kromozom replikasyonu zamanlama analizi için nicel bir yöntem tarif edilmektedir. Yöntem floresan ile kombinasyon halinde BrdU eklenmesi kullanır

Bu deneysel yaklaşım, BRDU katılımını C iki hibridizasyonda floresan ile birleştirir. Memeli kromozomlarının replikasyon zamanlamasını kantitatif olarak analiz etmek. İlk olarak, BRDU'yu canlı hücrelere dahil edin ve metafaz kromozomlarını hasat edin.

Ardından, tek tek replike eden kromozomları tanımlamak için sıralı BRDU antikor boyaması ile birleştirilmiş DNA balığı gerçekleştirin. Daha sonra, balık sinyallerinin görüntülerini yakalamak ve bireysel mitotik figürlerde BRDU katılımını yakalamak için fotoğraf mikroskobunu kullanın. Cyto vision yazılımını kullanarak, izole edilmiş her bir kromozom üzerindeki BRDU veya DPI sinyalleri tarafından temsil edilen piksellerin alanını ve yoğunluğunu hesaplayın.

View the full transcript and gain access to thousands of scientific videos