Name: Yerli, Fibröz Uzun Aralığı ve Bölümlere Uzun Aralığı Kollajen in vitro sentezi olarak (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-09-20T12:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 54 s
Description: Öğrenin, Tip I kollajen monomerinden yerli, fibröz uzun aralıklı ve bölümlere uzun aralıklı kollajen yapımı için basit ve tekrarlanabilir yöntemleri. Bu protokoller, atomik kuvvet mikroskobisi ile karakterizasyon sağlar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Biz laboratuarımızda kollajen fibrogenez çalışma için zaman ve çaba katkıda bulunan tüm birçok geçmiş lisans, lisansüstü ve doktora sonrası öğrencilere teşekkür etmek istiyorum. Doğa Bilimleri ve Kanada&#39;nın Mühendislik Araştırma Konseyi sürekli kollajen çalışmaları için finansman sağlamıştır.

NOT: Tüm protokoller kullanılan su direnci&gt; 18 var MΩ.cm. 1. Yerli kollajen fibrillerin <ol><li> Su ve 6 ul, 200 mM 20 ul 2 HCl ve bir mikrofüj tüpü ve karışımı 400 mM KCl 10 ul ile pH 7&#39;ye ayarlanmış HPO 4 Na birleştirin. </li><li> Mikrofüj tüpü ve karışım, kolajen monomer (0.01 N HCI içinde yaklaşık 3 mg / ml), 4 ul ekle. Çözelti, berrak ve renksiz olmalıdır. </li><li> 37 ile önceden ısıtılmış olan bir ısıtma bloğu içinde reaksiyon karışımını ihtiva eden mikrofüj tüpü yerleştirin ° C&#39;de ve 3-4 saat bekletin. Bu noktada, çözelti hafifçe bulanık olabilir ve çoğunlukla doğal kolajen fibriller içermelidir. </li></ol> 2. Fibröz Uzun Aralığı Kolajen <ol><li> Oda sıcaklığında 24 saat arasında bir süre boyunca su dört kez değişen su, 400 ml karşı 12-14 kDa MWCO membranı kullanılarak kolajen monomer (0.01 N HCI içinde yaklaşık 3 mg / ml), 1 ml Dialyze. Diyalizlenmiş collaghemen kullanılmaz en monomer 4 ° C ileride kullanılmak üzere saklanabilir. </li><li> Su 20 ul, su içinde 3 mg / ml &#39;α1-asit glikoprotein 20 ul ve bir mikrofüj tüpü içinde diyalize kolajen monomer 20 ul birleştirin. Çözelti, berrak ve renksiz olmalıdır. </li><li> 30 dakika için oda sıcaklığında reaksiyon karışımını ihtiva eden mikrofüj tüpü bırakın. Bu noktada, çözelti bulanık olabilir ve çoğunlukla FLS kollajen fibrillerin içermelidir. </li></ol> 3. Segmental Uzun Aralığı Kolajen <ol><li> 67 ul su, pH 3.3 &#39;de 100 mM glisin-HCI tamponu 60 ul ve bir mikrofüj tüpü ve karışım su içinde 10 mg / ml, 40 ul ATP birleştirin. </li><li> Mikrofüj tüpü ve karışım, kolajen monomer (0.01 N HCI içinde yaklaşık 3 mg / ml) 33 ul ekle. Çözelti, berrak ve renksiz olmalıdır. </li><li> 2 saat için oda sıcaklığında reaksiyon karışımını ihtiva eden mikrofüj tüpü bırakın. Bu noktada, çözüm hala net görünür, ancak gerektiği olacakçoğunlukla SLS kollajen içerir. </li></ol> 4. AFM Karakterizasyonu <ol><li> Cleave yapışkan bant bir parça ile mika yüzeyini kaplayarak ve sonra uzak soyulması bir AFM substrat bağlı mika parçasının yüzeyi. Mika bütün bir tabaka yüzeyinde düzensizliklere azaltmak ve mika tekrar alınması durumunda eski bir numune çıkarılır sağlamak üzere parçalanabilen olduğunu teyit etmek için daha sonra bant kontrol edin. </li><li> Taze yarılan mika alt tabaka için telcik kolajen çözeltisi 20 ul uygulanır. 5 dakika bekletin. </li><li> Yavaşça su ile kollajen fibril çözüm durulayın. Bu, direkt olarak mika substrat üzerine merkez ancak kenarında su uygulamak için ve örnek üzerinde akmasına izin vermek için tavsiye edilir. </li><li> Azot gazı, yumuşak bir akışı altında yüzeyi kurulayın. Bu, mika alt tabakanın merkezinde kenarında doğrudan akım ile değil tavsiye edilir. </li><li> 200 × büyütmede bir optik mikroskop altında,yerli ve FLS kollajen fibrillerin örnekleri kümeleri göstermek gerekir. SLS kollajen görünür olmayacaktır. </li><li> Üç farklı kollajen yapıların benzersiz özellikleri AFM gözlenebilir. Genellikle, silikon AFM problar kullanılarak temassızlığı modunda bir AFM ile biz görüntü yerli kollajen fibrillerin, FLS ve SLS kollajen kontak modda bir AFM ile biz genellikle görüntü silisyum nitrür AFM problar kullanılarak fibrillerin ise. Biz çünkü zaman ve maliyet konuları bunu. Silikon AFM probları genellikle görüntüleme yerli kollajen fibrillerin dar bantı yapısı için özellikle yararlı hale silisyum nitrür AFM probları, daha keskindir. Ancak, silikon AFM problar silisyum nitrür AFM soruşturmalardan daha kollajen örnekleri ile kontaminasyona daha yatkındır ve sık sık değiştirilmesi gerekir. Bu nedenle, biz çoğunlukla çözünürlüğü büyük bir zorunluluktur görüntüleme yerli kollajen fibrillerin için silikon AFM probların kullanımı tutuyoruz ve biz Prol kesintili iletişim modunda çalışırkullanışlılığı ong yaşamları. </li></ol> Biz en azından birkaç kollajen yapıları göstermesi gerekir bir ilk 100 × 100 mikron 2 tarama öneririz. Orada, yakınlaştırma itibaren 10 Boyutlar × 10 mikron 2 ve sonra 2 × yerli ve FLS kollajen veya SLS kollajen ince özellikleri bantlama periyodiklik gözlemlemek için 2 mikron 2 taramak için. Aynı zamanda ilk taramaları temsilcisi olduğunu doğrulamak için kollajen numune üzerinde en az iki diğer bölgelere kontrol etmek iyi bir fikirdir.

<ol><li>Kadler, K. E., Baldock, C., Bella, J., Boot-Handford, R. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Collagen+at+a+glance%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Cell+Sci%22%5BJournal%5D)">Collagen at a glance.</a> J. Cell Sci. 120, 1955-1958 (2007).</li>
<li>Abraham, L. C., Zuena, E., Perez-Ramirez, B., Kaplan, D. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Guide+to+Collagen+Characterization+for+Bio+Studies%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Biomed.+Mat.+Res%22%5BJournal%5D)">Guide to Collagen Characterization for Bio Studies.</a> J. Biomed. Mat. Res. 87B, 264-285 (2008).</li>
<li>Baselt, D. R., Revel, J. -P., Baldeschwieler, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Subfibrillar+Structure+of+Type+I+Collagen+Observed+by+Atomic+Force+Microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Biophys.+J%22%5BJournal%5D)">Subfibrillar Structure of Type I Collagen Observed by Atomic Force Microscopy.</a> Biophys. J. 65, 2644-2655 (1993).</li>
<li>Petruska, J. A., Hodge, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+Subunit+Model+for+Tropocollagen+Macromolecule%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci.+U.S.A%22%5BJournal%5D)">A Subunit Model for Tropocollagen Macromolecule.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 51, 871-876 (1964).</li>
<li>Smith, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+Pattern+in+Native+Collagen%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Molecular Pattern in Native Collagen.</a> Nature. 219, 157-158 (1968).</li>
<li>Gross, J., Highberger, J. H., Schmitt, F. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Extract+of+collagen+from+connective+tissue+by+neutral+salt+solutions%5BTitle%5D)+AND+%22PNAS%22%5BJournal%5D)">Extract of collagen from connective tissue by neutral salt solutions.</a> PNAS. 41, 1-7 (1955).</li>
<li>Gale, M., Pollanen, M. S., Markiewicz, P., Goh, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sequential+assembly+of+collagen+revealed+by+atomic+force+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Biophys.+J%22%5BJournal%5D)">Sequential assembly of collagen revealed by atomic force microscopy.</a> Biophys. J. 68, 2124-2128 (1995).</li>
<li>Wood, G. C., Keech, M. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+formation+of+fibrils+from+collagen+solutions%5BTitle%5D)+AND+%22Biochem.+J%22%5BJournal%5D)">The formation of fibrils from collagen solutions.</a> Biochem. J. 75, 588-597 (1960).</li>
<li>Williams, B. R., Gelman, R. A., Poppke, D. C., Piez, K. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Collagen+Fibril+formation%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Biol.+Chem%22%5BJournal%5D)">Collagen Fibril formation.</a> J. Biol. Chem. 253, 6578-6585 (1978).</li>
<li>Holmes, D. F., Capaldi, M. J., Chapman, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reconstitution+of+collagen+fibrils+in+vitro%3B+the+assembly+process+depends+on+the+initiating+procedure%5BTitle%5D)+AND+%22Int.+J.+Biol.+Macromol%22%5BJournal%5D)">Reconstitution of collagen fibrils in vitro; the assembly process depends on the initiating procedure.</a> Int. J. Biol. Macromol. 8, 161-166 (1986).</li>
<li>Paige, M. F., Rainey, J. K., Goh, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fibrous+long+spacing+collagen+ultrastructure+elucidated+by+atomic+force+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Biophysical+Journal%22%5BJournal%5D)">Fibrous long spacing collagen ultrastructure elucidated by atomic force microscopy.</a> Biophysical Journal. 74, 3211-3216 (1998).</li>
<li>Highberger, J. H., Gross, J., Schmitt, F. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+interaction+of+mucoprotein+with+soluble+collagen%3B+an+electron+microscope+study%5BTitle%5D)+AND+%22PNAS%22%5BJournal%5D)">The interaction of mucoprotein with soluble collagen; an electron microscope study.</a> PNAS. 37, 286-291 (1951).</li>
<li>Ghadially, F. N. Ultrastructural pathology of the cell and matrix. , 3rd Edition, Butterworths. London. (1988).</li>
<li>Paige, M. F., Goh, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ultrastructure+and+assembly+of+segmental+long+spacing+collagen+studied+by+atomic+force+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Micron%22%5BJournal%5D)">Ultrastructure and assembly of segmental long spacing collagen studied by atomic force microscopy.</a> Micron. 74, 355-361 (2001).</li>
<li>Schmitt, F. O., Gross, J., Highberger, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+new+particle+type+in+certain+connective+tissue+extracts%5BTitle%5D)+AND+%22PNAS%22%5BJournal%5D)">A new particle type in certain connective tissue extracts.</a> PNAS. 39, 459-470 (1953).</li>
<li>Bruns, R. R., Hulmes, D. J. S., Therrien, S. F., Gross, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Procollagen+segment-long-spacing+crystallites%3A+their+role+in+collagen+fibrillogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22PNAS%22%5BJournal%5D)">Procollagen segment-long-spacing crystallites: their role in collagen fibrillogenesis.</a> PNAS. 76, 313-317 (1979).</li>
<li>Highberger, J. H., Gross, J., Schmitt, F. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Electron+microscope+observations+of+certain+fibrous+structures+obtained+from+connective+tissue+extracts%5BTitle%5D)+AND+%22JACS%22%5BJournal%5D)">Electron microscope observations of certain fibrous structures obtained from connective tissue extracts.</a> JACS. 72, 3321-3322 (1950).</li>
<li>Orekhovich, V. N., Tustanovsky, A. A., Orekhovich, K. D., Plotnikova, N. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((O+prokollagene+kohzi%5BTitle%5D)+AND+%22Biokhimiya%22%5BJournal%5D)">O prokollagene kohzi.</a> Biokhimiya. 13, 55-60 (1948).</li>
<li>Lin, A. C., Goh, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Investigating+the+ultrastructure+of+fibrous+long+spacing+collagen+by+parallel+atomic+force+and+transmission+electron+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Proteins%22%5BJournal%5D)">Investigating the ultrastructure of fibrous long spacing collagen by parallel atomic force and transmission electron microscopy.</a> Proteins. 49, 378-384 (2002).</li>
</ol>

Çıkar çatışması ilan etti.

Kollajen monomer Saflaştırılmış düşük pH ve sıcaklıkta kararlı olan ve doğal kolajen fibril oluşumunun esasen kolajen monomer çözeltisinin pH ve sıcaklık yükseltme içerir. Monomerlerin bantlı kollajen fibrillerin sulandırılması için prosedürler fazla 50 yıl boyunca var olmuştur. 15 yıl önce kollajen ile ilk çalışmalarda kullanılan laboratuvar 7 prosedürleri dayandığını prosedürü 1986 10 yılında Chapman ve arkadaşları tarafından özetlenmiştir. Daha önceki çalışmalar içinde kollajen fibril oluşumu için koşullar 34 nolu Na 2 HPO 4 / KH 2 PO 4 (I = 0.2, pH 7.4) tampon içinde 0.18 mg / ml kolajen monomer ° C idi Bu ve biz denedim diğer prosedürlerin dezavantajı istenilen bantlı fibril birlikte oluşan her unbanded fibrillerin olmasıdır. Yeni koşullar ~ pH 7&#39;de 100 mM fosfat ve 100 mM KCl içinde 0.3 mg / ml kolajen monomer 3-4 saat boyunca 37 ° C&#39;de bırakılır. Procedure yerli kollajen fibrillerin yapmak için önceki yordamı her yönüyle farklıdır burada tarif. Ama en belirgin, biz tampon konsantrasyonu yükselterek ve 100 mM KCl ekleyerek iyonik gücü iki katına çıkardık. Münhasıran bantlı kollajen fibrillerin daha tutarlı oluşumunda iyonik kuvvet sonuçlarında artış. Kollajen monomer çözeltisi kullanımı üreticinin önerdiği tarihe geçmiş iken bizim deneyimlerimize göre, bu prosedürü doğal türü kollajen üretilen olmadığını sadece zaman oldu. Bu durumda, ne tüm hala gözlenen birçok fibrillerin için unbanded ama çoğunlukla unbanded edilmektedir az fibrillerin gelen aralıkları görülmektedir. Aşımına uğramış kolajen monomer genellikle hala başarılı bir doğal kolajen yapmak için kullanılabilir, fakat başarısız olduğunda, yeni kolajen monomer kesinlikle satın alınması gerektiğini not edin. FLS birinci Highberger ve arkadaşları tarafından tespit edilmiştir. Kolajen preparatlar içinde 17 Orekhovic yatırılırh ve ark. 18. Ileri çalışmalara Highberger ve Schmitt bunu FLS 12 oluşumunu teşvik α1-asit glikoprotein olduğu sonucuna götürdü. Daha sonra ticari olarak temin kolajen monomer ve düşük pH değerlerinde α1-asit glikoprotein, birleştirme ve yavaşça pH 24 saat 11 için suya karşı diyaliz ile karışım artmasına izin verilmesi ile FLS kollajen yapımı için işlem çoğaltmak için mümkün. Şimdi, ilk olarak suya karşı diyaliz ve kollajen monomer sadece FLS kolajen oluşturmak için suda α1-asit glikoprotein ile birleştirerek Bu prosedürün bir modifikasyonu sunulmaktadır. Burada anlatılan FLS kollajen montaj koşulları çok daha az zaman alıcı vardır. Kollajen monomer hala su karşı önceden diyalizlenmiş olması gerekir, ancak toplu olarak yapılır ve ardından ° C stably kullanılıncaya kadar 4 saklanabilir. Bu yeni prosedür verimleri çoğunlukla bantlı kollajen fibrillerin FLS. Bizim deneyim, α1-asit glikodüşük bir kombine protein ve su içeriği ile protein ve çıkarsama yüksek şeker içeriği ile, başarıyla FLS fibrillerin yapmak için kritik öneme sahiptir. Biz genellikle bizim kullandığımız α1-asit glikoprotein lot 82 veya daha az bir kombine% protein ve su içeriğine sahip olduğu üreticisine başvurun. Ve çok eski yerli kollajen sentezi, kollajen monomer için prosedür olarak da FLS kolajen üretmek için başarısızlıkla sonuçlanabilir. Buna ek olarak, diyaliz için kullanılan suyun saflığını bu işlem çok önemlidir. Örneğin, hatta karşı kolajen monomer ~ 8 MΩ.cm yerine FLS kolajen oluşturmayan bir kolajen çözeltisi içinde&gt; 18 MΩ.cm su sonuç diyaliz. Üç kollajen fibril tipleri ki, kazanmak için en kolay SLS kolajen. SLS erken hazırlanması Schmitt ve co-workers 15 tarafından tarif edilmiştir. Biz piyasada satılan argo kullanarak SLS kollajen yapımı için 12 yıl önce bu prosedürü bir adaptasyon yayınladıagen 14. Prosedür, sadece 2 mg / ml ATP ve% 0.05 &#39;de 0.5 mg / ml kolajen monomer (v / v) pH 3.5 asetik asit birleştirerek, ve gece boyunca oda sıcaklığında karışım bırakarak neden oldu. Bizim deneyim, kontrol edilmesi gereken SLS montaj kritik yönü reaksiyon çözeltisinin pH değeri. SLS kristalden toplulaştırılmış kümeleri daha temel koşulları (~ pH 3,6-3,9) sonuçları toplandı. Daha asidik koşullarda (~ pH 2,9-3,2) pH 3,3-3,5 arasında ideal koşullar altında montajı olanlar daha ince, daha ayrılmış kristalden sonuçları. Bu aralığı (&lt;2.8 ve&gt; 4) dışında Reaksiyon pH herhangi SLS kollajen verim yok. Geçmişte, asetik asit ilave edilerek reaksiyon karışımının pH değeri ayarlanır. Daha da prosedürü basitleştirmek için, bu makalede, pH değerini kontrol etmek bir glisin-HCI tamponu tanıttı. Yukarıda tarif edilen protokollere oluşan üç farklı yapılara kolajen karakterO istik özellikler sadece nanometre çözünürlük yeteneğine sahip araçlar tarafından ayırt edilebilir. Doğal ve FLS kolajen ~ 67 nm ve ~ 270 nm periyotlarda bandı ile karakterize edilir. SLS kollajen uzun boyutu sadece ~ 360 nm. Biz üç farklı kollajen yapıları karakterize bir AFM nasıl kullandıklarını özellikle nitelendirdiler. Ancak, herhangi bir AFM probu &lt;10 nm yarıçaplı olan temas veya aralıklı temasta modunda herhangi AFM işletim Ayrıca görüntü bu kolajen yapılarını gerekir. Buna ek olarak, elektron mikroskobu olabilir ve bunlar kolajen yapılar 19 karakterize etmek için kullanılmaktadır. Bu işlemlerin büyük avantajı istenilen kolajen inşa ağırlıklı üretmek. Bu reaksiyonlar bulunan kollajen sadece diğer formu genellikle AFM görüntüleri arka plan görülebilir başlangıç ​​monomer vardır. Doğal ve FLS kolajen durumunda, bunlar kolaylıkla unrea çoğu ayrılabilirsu ile ortaya çıkan, doğal veya FLS, kolajen pelet tekrar santrifüj ve yıkanması yoluyla cted monomer. Biz gelişmiş, ticari olarak mevcut başlangıç ​​materyalleri kullanarak yerel, FLS ve SLS kollajen yapmak için basit ve güvenilir prosedürler sundu. Bütün bu işlemlerde kullanılan kollajen monomer saflaştırılmış bir formda ticari olarak temin edilebilmektedir. α1-Asit glikoprotein ve ATP ticari de mevcuttur her ikisi de.

Kollajen üç polipeptid zincirinin oluşan bir üçlü sarmal yapıya sahip yapısal bir protein sınıfıdır. Bu üçlü sarmal monomerlerin fazla giderek daha büyük yapıları oluşturmak üzere bir hiyerarşik şekilde monte edin. 1 tespit edilmiştir en az 28 genetik olarak farklı kollajen türleri vardır. Kombine, kollajen tüm kolajen proteinleri 2% 90 kadar ben baskın formu muhasebe yazın ile hayvanlarda bulunan toplam proteinin% 30 oluşturmaktadır. Tip I kollajen deri, bağ, tendon ve kemiklerde fibrillous yapılar olarak bulunmuştur. Atomik kuvvet mikroskobu (AFM) ve elektron mikroskobu (EM) ben yerli kolajen lifleri genelde ~ 67 nm 3-5 (genellikle D-bantlama olarak anılacaktır) karakteristik bir süre ile bantlanma Tip görüntüleri. I kollajen monomerinin iki özdeş α1 (I) zincirler ve bir α2 (I) zinciri, bir daha her fazla oluşan bir üçlü sarmal heterotrimer olduğunu yazınUzun bin amino asitler. Uzun ve uzunluğu ve çapı 1.4 nm 300 nm boyutlarında ince. Kollajen monomerinin kolayca doğal olarak oluşan yüksek mertebeden yapıları 6 parçalayarak elde edilebilir ben yazın. Biz 7 ve diğerleri 8-10, bu çözünür monomer yapı taşları sonra in vitro olarak D-bantlı fibril (Şekil 1) yeniden kurmak için kullanılabileceğini göstermiştir. Doğal kolajen fibriller ilave olarak, iki başka yüksek dereceden kollajen yapılar aynı monomer yapı bloğu kullanılarak in vitro olarak oluşturacak şekilde tespit edilmiştir. Iki yapı fibröz uzun boşluk (FLS) ve segmental uzun boşluk (SLS) kolajen (Şekil 1). Kollajen monomer α1-asit glikoprotein ile kombine edildiğinde FLS kollajen doğal kolajen gibi bir fibrillous yapıdır, ama yerel kollajen 11. In vitro daha büyük bir bantlama periyodiklik ile karakterize, FLS kollajen oluşturur <sup&gt; 12. FLS kolajen rağmen nadiren 13, hem de in vivo olarak gözlenmiştir. Monomerlerin bir kristal kafes 14 de benzer kayıt hizalanır, çünkü kolajen SLS kristalitlerin olarak tarif edilir. Kollajen monomer adenozin trifosfat (ATP) 15 ile birlikte olduğunda SLS kollajen oluşturur. Doğal olarak ortaya çıkan SLS kollajen fibroblast kültür ortamında gözlenen ancak çıkarılan doku örneklerinde, olasılıkla küçük boyutu ve ayırt topografik özellikleri 16 eksikliği nedeniyle. Olmuştur Bu yazının amacı, iyi FLS ve hatta en deneyimsiz araştırmacı üretebileceği SLS kollajen gibi doğal kollajen fibrillerin yapmak için ayrıntılı yordamlar sunmaktır. Piyasada bulunan gelişmiş başlangıç ​​maddeleri kullanarak, mümkün olduğunca basit protokoller yapmak için çalıştık ve hala güvenilir bir iş var. Nasıl farklı kollajen yapısı karakterize bir AFM kullanmak Biz de ayrıntılıyapılmaktadır s. Bu çalışma bu yüksek mertebeden kollajen yapılar bir veya daha fazla çalışma ve / veya diğer uygulamalarda öncüleri olarak kullanmak isteyen araştırmacılar için yararlı olabilir, ancak şu anda uzmanlık eksikliği ya da sadece doku örnekleri ile çalışmak istemiyorum edecektir.

<table border="1"><tbody><tr><td> Malzeme / reaktif </td><td> Şirket </td><td> Katalog numarası </td><td> Yorumlar (isteğe bağlı) </td></tr><tr><td> Ben kollajen monomer yazın (~ 3 mg / ml 0.01 N HCI) </td><td> INAMED Gelişmiş Biyo </td><td> 5409 5005-B </td><td> Çok 1261443 (2.9 mg / ml, pH 2.1) Çok 1629346 (3.2 mg / ml, pH 2.1) Çok 6006 (3.2 mg / ml, pH 2.1) </td></tr><tr><td> ATP </td><td> Araştırma Biyokimyasallar Uluslararası </td><td> A-141 </td><td> Lot FBJ-1194A </td></tr><tr><td> sığır plazmadan α1-asit glikoprotein </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> G3643 </td><td> Çok 051K7440 (% 89.8) Çok 011K7410 (% 82) Çok 065K7405 (% 71.2) Çok 063K7495 (% 71.9) Çok 117K7535 (% 75.9) (Protein + su içeriği) </td></tr><tr><td> A1-asit glycoprİnsan plazmasından otein </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> G9885 </td><td> Çok 128H7606 (% 70.9) Çok 049K7565V (% 68) (Protein + su içeriği) </td></tr><tr><td> mika </td><td> Ted Pella </td><td> 53 </td><td></td></tr><tr><td> Pointprobe - Silikon SPM-Sensörü </td><td> Nanoworld </td><td> NHC </td><td> Biz temassızlığı modu için Silikon AFM prob kullanın </td></tr><tr><td> Veeco Nanoprobe İpuçları </td><td> Veeco (Şimdi Bruker AFM probları) </td><td> NP-S </td><td> Biz iletişim modu için kullandığınız Silisyum nitrür AFM probe </td></tr></tbody></table>

yerli, fibröz uzun aralığı ve bölümlere uzun aralığı kollajen in vitro sentezi olarak

In vitro Synthesis of Native, Fibrous Long Spacing and Segmental Long Spacing Collagen

Kollajen fibrillerin yapı iskele ve mekanik güç sağlamak için hayvan dokusu ekstrasellüler matrikste bulunan. Bunlar doğal kolajen fibriller ~ 67 nm arasında bir karakteristik bantlama periyodiklik sahiptir ve uzunluğu ve çapı 1,4 nm içinde 300 nm, tip I kolajen monomerlerin hiyerarşik montaj yoluyla in vivo olarak oluşur. In vitro olarak, hangi için koşullar değiştirilerek monomer yapı blokları maruz kalanlar, 50 mikron kadar uzunluk ölçüleri arasında değişen özgün yapılarıyla yerel tür fibrillerin sadece dahil olmak üzere, inşa, ama aynı zamanda fibröz uzun boşluklar ve segmental uzun aralıklı kollajen. edilebilir Bu yazıda, ortak bir ticari kollajen monomerlere üç farklı kollajen yapılar oluşturan prosedürleri sunuyoruz. Biz ve diğerleri, bu üç tip için geçmişte yayınlanan olduğu protokolleri kullanarak tipik olarak yapı karışımlarına yol açmaktadır. Özellikle, unbanded fibrillerin yaygın f ididoğal Kollagen yaparken ise kullanınız ve fibröz uzun aralıklı kollajen yaparken yerli fibrillerin çoğu mevcuttu. Bu yeni işlemler hemen hemen sadece arzu edilen fibril tipi kollajen üretme avantajına sahiptir. İstenen yapıların oluşumunu bir atomik kuvvet mikroskopu kullanılarak görüntüleme ile teyit edilmektedir.

Yerli kollajen 100 mM fosfat içinde ~ 0.3 mg / ml kolajen monomer ve 37 sola pH&#39;ı 7 olan 100 mM KCl Reaksiyon karışımı, 3-4 ° C&#39;de saat süre ile açık ~ 67 nm D-bant ile yerli tip kolajen ihtiva eden bir çözelti fibriller elde edilir, unbanded fibrillerin olmadan. 200 × büyütmede bir optik mikroskop altında, birçok fibrillerinin kümeleri normal diferansiyel girişim kontrast (DIC) mikroskobu (Şekil 2) tarafından izlendi özellikle mika yüzey görülebilir. Tipik bir örnek olarak, bir rasgele 100 × AFM tarafından 100 mikron 2 taraması genellikle uzun 5-50 mikron, en azından bir kaç fibrillerin gösterecektir (Şekil 3a-c). Bireysel, ayrılmış kollajen fibrillerin kolayca bu aşamada tespit edilebilir. 512 × 512 piksel 2 resim taraması ile, 10 × 10 mikron 2 tarama boyutu yakınlaştırmayı tüm fibriller bantlı olduğunu göstermektedir (Şekil 3d-f </strong&gt;). Doğru bantlama periyodiklik ölçmek için, o 2 × 2 mikron 2 tarama boyutu (Şekil 3g-i) yakınlaştırmak için en iyisidir. Periyodiklik Bantlama sadece ölçme ve birkaç zirveleri ya vadiler arasındaki uzunlamasına mesafe ortalaması alınarak tespit edilebilir. AFM yazılımı sağlar, alternatif olarak, bir tek boyutlu Fourier de kullanılabilir enine kesit uzunlamasına bir boyunca dönüşümü. Şekil 4, bir telcik ve karşılık gelen bir uzunlamasına kesit bir AFM boy görüntü gösterir. FLS kollajen 1 mg / ml μ1-asit glikoprotein ve 30 dakika için oda sıcaklığında kalan su içinde ~ 1 mg / ml kolajen monomerin reaksiyon karışımı FLS, kollajen fibrillerin bir çözelti elde edilir. Doğal kolajen halinde görülmektedir ne benzer fibrillerin kümeleri, kolaylıkla 200 bir optik mikroskop altında × m mika alt tabaka üzerinde görülebiliragnification. Tipik bir örnek olarak, AFM ile rastgele 100 × 100 mikron 2 taraması genellikle en az birkaç fibrillerin gösterecektir. 512 × 512 piksel 2 resim tarama boyutu ile, bantlama dönemsellik gösteren bir 10 × daha doğru 10 mikron 2 tarama (Şekil 5a) veya 2 × 2 mikron 2 tarama (Şekil 5b). Şekil 5c içine büyüterek ölçülebilir FLS bir telcik uzunlamasına bir enine kesitini göstermektedir. SLS kollajen 2 mg / ml ATP ve reaksiyon karışımı, pH 3.3 &#39;de 100 mM glisin-HCI tamponu içinde ~ 0.5 mg / ml kolajen monomer 2 saat boyunca oda sıcaklığında bırakılır SLS kollajen bir çözelti elde edilir. Genellikle, SLS kristalden bir optik mikroskop altında görülebilir olmayacak. Bir AFM SLS kristalden varlığını doğrulamak için gereklidir. Tipik bir örnek olarak, AFM ile rastgele 100 × 100 mikron 2 taraması genellikle birçok gösterecektirnoktalar. 10 × 10 mikron 2 tarama içine yakınlaştırma genellikle birkaç SLS kristalden (Şekil 6a) gösterecektir. Ve 2 × 2 mikron 2 tarama (Şekil 6b) bir SLS kristalit arasında ince yapısını gösterir. <img alt="Şekil 1" src="/files/ftp_upload/4417/4417fig1.jpg" /> Şekil 1. Kollajen monomer in vitro olarak oluşturulabilir kollajen fibrillerin üç yapısal olarak farklı biçimlerde. AFM görüntüleri hepsi aynı boyutta ölçek (2 × 2 mikron 2) kollajen monomerinin ve üç yüksek mertebeden kolajen yapılarını tasvir. <img alt="Şekil 2," src="/files/ftp_upload/4417/4417fig2.jpg" /> Şekil 2. Mika üzerinde yerli kollajen fibrillerin optik DIC mikroskobu (a) el değmemiş ve (b) t eşiklenir ve bilenmiş tarafından ~ 200 × büyütmede Dijital görüntüfibriller vurgulamak o. <img alt="Şekil 3" src="/files/ftp_upload/4417/4417fig3.jpg" /> Mika üzerinde yerli kollajen fibrillerin Şekil 3. AFM görüntüleri. Aralıklı kontak modda AFM genlik görüntüler gösterilir. <img alt="Şekil 4," src="/files/ftp_upload/4417/4417fig4.jpg" /> Şekil 4,. (A) 0.5 x 1 mikron 2 aralıklı temas şeklinde AFM boy görüntü (dikey ölçek = 100 nm) ile bir doğal kolajen fibril (b) uzunlamasına kesiti. <img alt="Şekil 5," src="/files/ftp_upload/4417/4417fig5.jpg" /> Şekil 5. Mika FLS kollajen fibrillerin AFM görüntüleri. (A) 10 × 10 mikron 2 kontak modda AFM sehim görüntüsü, (b) 2 × 2 mikron 2 kontak modda AFM sehim görüntüsü ve (c) BoyunaBir FLS kollajen fibril kesiti. <img alt="Şekil 6" src="/files/ftp_upload/4417/4417fig6.jpg" /> Şekil 6. Mika SLS kollajen AFM görüntüleri. Aralıklı kontak modda AFM genlik görüntüler gösterilir.

Basit ve tekrarlanabilir prosedürler ortak bir ticari Tip I kollajen monomer üç yapısal olarak ayrı kollajen derlemeler yapmak için tarif edilmiştir. Yerli tip fibröz uzun aralıklı veya segmental uzun boşluklar kolajen 300 nm uzunluğunda ve 1,4 nm çaplı monomer yapı taşı maruz hangi koşullarda değişen tarafından inşa edilebilir.

Yerli, Fibröz Uzun Aralığı ve Bölümlere Uzun Aralığı Kollajen in vitro sentezi olarak

Kollajen fibrilleri, yapısal iskele sağlamak ve mekanik dayanıklılık oluşturmak amacıyla hayvan dokusunun hücre dışı matrisinde bulunur. Bu doğal...

Bu prosedürlerin genel amacı, kollajen monomerin tekrarlanabilir bir şekilde üç farklı türde yüksek dereceli kollajen yapısı oluşturmak için nasıl kullanılabileceğini göstermektir. Doğal kollajen, kollajen monomer çözeltisinin pH değeri yükseltilerek oluşturulur; fibröz uzun aralıklı kollajen ise kollajen monomerin alfa bir asit glikoproteini ile birleştirilmesiyle ve segmental uzun aralıklı kollajenle oluşturulur.Kolajen, kolajen monomerinin bir TP ile karıştırılmasıyla üretilir. Nihayetinde, oluşan üç farklı kolajen yapısını karakterize etmek için atomik kuvvet mikroskopisi kullanılır. Bu protokollerin daha önce yayınlanmış prosedürlere göre temel avantajı, istenen kolajen yapılarını oluşturmada daha basit ve oldukça tekrarlanabilir olmalarıdır. Bu protokoller, başlangıç materyali olarak güvenilir bir ticari kolajen monomer kaynağının avantajlarından yararlanılarak son 10 yıl boyunca laboratuvarımızda geliştirilmiştir; prosedür, belirgin 67 nanometre D-bantlama özelliğine sahip doğal kolajen lifleri oluşturmak amacıyla laboratuvarımdan lisansüstü öğrencisi Calvin Chang tarafından gösterilecektir.Öncelikle bir ısıtma bloğunu 37 °C'ye kadar ön ısıtın. Ardından, bir mikrosantrifüj tüpünde 3 mg/mL'lik kolajen monomer çözeltisinden 4 µL kullanarak tampon çözeltiyi hazırlayın ve iyice karıştırın. Elde edilen çözelti berrak ve renksiz olmalıdır.Doğal kolajen fibrillerinin oluşması için karışımı 37 °C'ye önceden ısıtılmış ısı bloğunda üç ila dört saat bekletin. Lifli uzun aralıklı kolajen hazırlamak için elde edilen nihai çözelti hafif bulanık olmalı ve esas olarak doğal kolajen fibriller içermelidir. İlk olarak, 3 mg/mL konsantrasyonundaki kolajen monomer çözeltisinden 1 mL'sini 12 ila 14 kilodalton moleküler ağırlık kesim sınırına sahip bir membrana yerleştirin.Ardından, 24 saatlik bir süre boyunca suyu dört kez değiştirerek 400 mililitre suya karşı diyaliz yapın. Sonra, 20 mikrolitre diyalize edilmiş kolajen monomeri ile 20 mikrolitre ultra saf suyu ve 3 mg/mL konsantrasyondaki alfa-1 asit glikoproteinin sudaki 20 mikrolitresini bir mikrosantrifüj tüpünde birleştirip karıştırın.Lifli akciğer boşluklu kolajenin oda sıcaklığında 30 dakika boyunca birikmesine izin verin. Bu süre zarfında çözelti, berraktan bulanığa dönerek lifli akciğer boşluklu kolajeni oluşturacaktır. İlk olarak, asidik tamponu bir mikrosantrifüj tüpünde hazırlayın.Tampon çözeltiye 40 µL 10 mg/mL'lik suda çözünmüş TP ekleyin ve karıştırın. Son olarak, 0.01 N hidroklorik asit içinde bulunan 3 mg/mL'lik kolajen monomer çözeltisinden 33 µL ekleyin ve homojen hale gelene kadar karıştırın.Segmental uzun aralıklı kolajenin oda sıcaklığında iki saat boyunca birikmesine izin verin. Tanımlanan diğer iki kolajen formunun aksine, bu hazırlıkta nihai çözelti berrak olacaktır. Atomik kuvvet mikroskobu veya FM için temiz ve düz bir yüzey elde etmek amacıyla, MICA'dan yapılmış bir AFM substratına bir parça yapışkan bant yapıştırın ve en az bir katmanı soyun.Bir katmanın tamamen kaldırıldığını doğrulamak için bandı kontrol edin. Uygun bir yüzey elde edildiğinde, mika substrat üzerine 20 microliters kolajen FI çözeltisi uygulayın ve beş dakika bekleyin. Beş dakika sonra, mika substratın kenarına su ekleyip numune üzerinden 10 ila 15 saniye boyunca akıtarak fazla fibrilleri durulayın.Örnekleme alanına doğrudan su eklemeyin. Ardından, substratın bir kenarından yumuşak bir nitrojen gazı akımı kullanarak yüzeyi kurutun. Gaz akışının örneğin merkezine yöneltilmemesine dikkat edin.Numuneyi 200 x büyütmede bir ışık mikroskobu altında inceleyerek doğal ve fibröz uzun aralıkları kontrol edin. Kollajen numuneleri fibro kümeleri gösterirken, segmental uzun aralıklı kollajen görünür değildir. Farklı kollajenlerin kendine özgü özellikleri en iyi şekilde gözlemlenir.Bir AFM kullanarak, başlangıçta 100 by 100 mikrometrelik kare bir tarama gerçekleştirin ve ardından 10 by 10 mikrometrelik kare tarama boyutlarına ve son olarak iki by iki mikrometrelik kare boyutuna yakınlaşın. Natif ve fibröz akciğer aralıklarının bantlama periyodisitesini gözlemlemek için kullanılır. Kollajenler, segmental akciğer aralığı kollajeninin daha ince özellikleriydi.Yerli kolajen fibrilleri için, lifli uzun aralık ve segmental uzun aralık tayini amacıyla atomik kuvvet mikroskobunu silikon bir AFM probu kullanarak kesikli temas modunda çalıştırın. Kolajen fibrilleri için atomik kuvvet mikroskobunu temas modunda çalıştırın ve en iyi sonuçlar için silikon nitrür AFM probları kullanın. İlk taramaların temsili olduğunu doğrulamak için kolajen örneği üzerinde en az iki başka bölgeyi daha kontrol edin.Bir AFM'nin yüksek uzamsal çözünürlüğü, bu videoda açıklanan farklı kolajen preparasyonlarının karakterize edilmesi için idealdir. Cihaz; doğal kolajen liflerini, fibröz uzun aralıklı kolajeni ve segmental uzun aralıklı kolajeni kolayca ayırt eder. Diferansiyel girişim kontrast mikroskobu gibi optik mikroskopi teknikleri lifleri gösterse de, bu yöntemlerle hazırlanan üç kolajen tipini birbirinden ayıran nanometre ölçekli özellikleri gösteremezler. Tipik bir örnekte, bir AFM ile yapılan rastgele 100 by 100 mikrometre kare tarama, beş ila 50 mikron uzunluğunda, birbirinden ayrılmış en az birkaç fibril gösterir.Kolajen fibrilleri bu aşamada kolayca tanımlanabilir; 10 µm kare tarama boyutuna yakınlaştırıldığında tüm fibrillerin bantlı olduğu görülür. Bantlama periyodunu doğru bir şekilde ölçmek için en iyisi 2 x 2 µm kare tarama boyutuna yakınlaştırmaktır. 10 x 10 µm kare tarama boyutuna yakınlaştırıldığında tüm fibrillerin bantlı olduğu görülür.Bantlama periyodunu doğru bir şekilde ölçmek için, iki çarpı iki mikrometrelik kare bir tarama boyutuna yakınlaştırmak en iyisidir. Kolajen, uzun aralıklı kolajen prosedürüne göre hazırlandığında bantlama periyodu artar ve fiber boyunca 270 nanometrelik tekrarlar oluşturur. Tipik bir örnekte, bir FM ile yapılan rastgele 100 çarpı 100 mikrometrelik kare bir tarama en az birkaç fibril gösterir.Bant periyodisitesi, 10 by 10 mikrometre kare bir taramaya yakınlaştırılarak görülebilir ve 2 by 2 mikrometre kare bir tarama ile kolayca ölçülebilir. Son olarak, segmental uzun aralıklı kolajen hiç fiber oluşturmaz, bunun yerine bireysel segmentler oluşturur. Tipik bir örnekte, FM ile yapılan rastgele bir 100 by 100 mikrometre kare tarama birçok bireysel nokta gösterir.10 by 10 µm karelik daha yakından bir tarama birkaç SLS kristaliti göstermekte ve 2 by 2 µm karelik bir tarama bir SLS kristalitinin daha ince yapısını göstermektedir. Bu videoyu izledikten sonra, ticari olarak temin edilebilen kolajen monomerden nasıl tekdüze, olgun, doğal FLS ve SLS kolajen yapıları oluşturulacağı konusunda iyi bir anlayışa sahip olmalısınız. Kolajen, hücre ve doku büyütmek için bir substrat veya iskele olarak yararlı olan biyouyumlu bir malzemedir.Bu prosedür, bu ve diğer uygulamalar için istenilen kolajen yapılarıyla başlamanızı sağlayacaktır.

in-vitro-synthesis-native-fibrous-long-spacing-segmental-long-spacing

Research

JoVE Journal

Bioengineering

Biyomühendislik

Bir yöntem olup kollajen tip I ve primer insan fibroblast oluşan bir 3-boyutlu matrisi hazırlanması için tarif edilmektedir. Bu doku stroma temel özelliklerini taklit eder ve mikroskopi birçok formları için müsait olduğundan bu organotipik jel invaziv hücre göçü değerlendirmek için yararlı bir substrat olarak hizmet vermektedir.

Organotipik Kollajen Ben Assay: 3-Boyutlu Bağlamında Hücre Davranışı değerlendirin A Dövülebilir Platformu

Bu makalede, floresan daha düzeltme ve 3D-hücre kültürleri canlı görüntüleme için kullanılabilir kollajen etiketlemek için bir yöntem sunar. Ayrıca 3D ortamlarda kültür hücrelerinin endojen iskelet proteinleri görselleştirmek için optimize edilmiş bir protokol sağlar.

3D İnvaziv Kanser Hücrelerinin Sitoskeletal Örgütü ortaya

Bu model sistem bir tahribatsız şekilde endojen kolajen (yeniden) organizasyonu gerçek zamanlı çalışma için kullanılabilecek bir miyofibroblast nüfuslu fibrin jel başlar. Bu model sistemi, farklı hücre kaynakları, orta katkı maddeleri ile birlikte kullanılabilir gibi çok ayarlanabilir, ve özel ihtiyaçlarına göre kolay bir şekilde adapte edilebilir.

Mühendislik Fibrin tabanlı Doku miyofibroblastlar ve Kısıtlar Uygulamasından Yapıları ve Hücre ve Kollajen (Re) Organizasyon tetikleyebilecek süzün

Çözünebilen bir tip 1 kollajen (col1) izolasyonu için geleneksel işlemleri de, uzun inkubasyon tampon ve fibrillerin zahmetli resuspensions of baştan sona yaklaşık 10 gün gerektirmektedir. Burada, biz az 3 saat küçük dermal biyopsilerden Süt1 arındırmak için bir araç açıklar.

Cilt Tip I Kolajen hazırlanması için geliştirilmiş bir yöntem

Bu prosedür, IR floresan in farelerde kollagen yeniden faaliyetleri görüntüleme hem de denatüre edilmiş kolajen sarmalları ile melezleşmek için verilmedi tetiklenen olabilir kafesli kollajen mimetik peptitler kullanılarak, doku kesitlerinde kolajenlerin ex vivo boyanması yakın in vivo gösterilmiştir.

Doğallığı Kollajen Tellerinin Görüntüleme<em&gt; In vivo</em&gt; Ve<em&gt; Ex vivo</em&gt; Kafesli Kollajen Mimetik Peptidlerinin Fotoğraf-tetiklenen Hybridization yoluyla

Kolajen ECM temel bir bileşenidir ve göç farklılaşma ve çoğalması kadar çeşitli hücresel süreçler için gerekli ipuçları sağlar. 3D kolajen hidrojellerin içinde hücreleri gömmek için bir protokol ve PDMS mikrokanallar kullanılarak randomize veya hizalanmış kollajen matrisleri oluşturmak için daha gelişmiş bir teknik burada sağlanmıştır.

3D Etkileşimleri Çalışmaları 3D Kollajen jeller ve Mikrokanallarda Hazırlanması<em&gt; İn Vivo</em

Bu protokol, jelatin ve kollajen I'den oluşan bir 2D karışık matristin nasıl hazırlanacağını ve lineer invadozomaları incelemek için bir 3D kolajen I fünyesinin nasıl hazırlandığını açıklamaktadır. Bu protokoller lineer invadozom oluşumunun, matris bozulma aktivitesinin ve birincil hücrelerin ve kanser hücre çizgilerinin invazyon yeteneklerinin incelenmesine izin verir.

Doğrusal Invadozom Oluşumu ve Aktivitesi Çalışmak İçin 2D ve 3D Matrisler

Bu makale, bir elektrik alanına (EF) maruz kalan lifli iletken malzemelerin sonlu eleman modellerini oluşturmak için bir strateji sunmaktadır. Modeller, bu tür malzemelerde tohumlanan hücrelerin aldığı elektrik girişini tahmin etmek ve iskelenin kurucu malzeme özelliklerini, yapısını veya yönünü değiştirmenin etkisini değerlendirmek için kullanılabilir.

Hücresel Elektrik Mikroçevriminin Sonlu Eleman Modellemesi

Bu protokol, lifleri bir 3D kollajen hidrojel (kalınlığı &lt;250 μm) hizalamak için uzatma gerinim (germe) oluşturmak için sıvı akış yönü boyunca değişen geometriye sahip bir mikroakışkan kanalın kullanımını göstermektedir. Ortaya çıkan hizalama birkaç milimetre boyunca uzanır ve uzatma gerinim hızından etkilenir.

Uzun Menzilli Fiber Hizalamalı Mikromühendislik 3D Kollajen Hidrojelleri

Aşağıdaki protokol, çok çeşitli doku mühendisliği uygulamalarına uygulanabilen nano ölçekli desenli fibrillere sahip kollajen hidrojellerin üretimi için kesme tabanlı bir ekstrüzyon yöntemi sunar.

Doku Mühendisliği İçin Nanofibriler Desenli Kollajen Üretimi

Öğrenin, Tip I kollajen monomerinden yerli, fibröz uzun aralıklı ve bölümlere uzun aralıklı kollajen yapımı için basit ve tekrarlanabilir yöntemleri. Bu protokoller, atomik kuvvet mikroskobisi ile karakterizasyon sağlar.

Yerli, Fibröz Uzun Aralığı ve Bölümlere Uzun Aralığı Kollajen in vitro sentezi olarak

Daha fazla video keşfet