Name: Bir Tavşan Modelinde Kondral Kusurların Tadilat ve Onarım için matris destekli Otolog Kondrosit Nakli (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2013-05-21T12:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 58 s
Description: Öğrenin, tavşan diz eklemindeki kondral kusurları otolog kondrositlerle ve üç boyutlu matris desteğiyle onarmak için bu deneysel tekniği. On iki haftalık sonuçlar homojen ve sağlam kıkırdak dokusu göstermektedir.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Bu proje Alman Araştırma Birliği (DFG, HE 4578/3-1) tarafından finanse edildi.

A. Kıkırdak Biyopsi (Ameliyathane, Steril olmayan Hazırlık Odaya 1-5 Steps) <ol><li> Doğru doz ilaç edebilmek için ve ameliyat sonra ağırlık izlemek için tavşan (6 aylık Yeni Zelanda Beyaz tavşan, kadın, 3.5-4.0 kg vücut ağırlığı,) son bir kilo kontrolü yapın. </li><li> 10 mg / kg propofole intravenöz enjeksiyonu ile anestezi neden tavşana. </li><li> Entübasyon sonra, 1.5 mg / kg / dk propofol ve intravenöz 0.05 mg / kg fentanil ile anestezi korumak. Kapnografi, pulse oksimetre ve nabız ile anestezi izleyin. </li><li> Bir elektrik kesme makinesi ve vakum kürk ile ameliyat olmak için diz tıraş. </li><li> Iyice traş diz dezenfekte ve steril bir sargı ile tavşan geri kalanı kapsar. </li><li> Patella palpe ve patella medial bir cilt kesisi gerçekleştirin. </li><li> Steril koşullar altında bir medial parapatellar artrotomi ile diz eklemi açın. Herhangi bir küçük su kesme kaçınınişlem sırasında yüzeyel kan damarları. </li><li> Yanal patella yerinden. </li><li> Herhangi bir anomali ve makroskobik kıkırdak lezyonları için diz eklemi kontrol edin. </li><li> Dikkatlice steril bir neşter (Şekil 1) ile Trochlea osis femoris dışında küçük kıkırdak parçaları (2-3 mm) kabuğu. </li><li> Hemen tam ortam ile 50 ml&#39;lik bir tüp içine bu kıkırdak biyopsisi yerleştirmek (DMEM +% 10 fetal buzağı serumu (FCS) ve% 1 penisilin / streptomisin (pen / strep)) işleminden sonra in vitro kültür sağ ile devam etmektedir. </li><li> Kusurları temiz ve steril serum fizyolojik ile yıkayın. </li><li> Trochlea oluk içinde Patella yerleştirin. </li><li> Tek bir düğme dikiş (4-0 vicryl) ve sürekli bir cilt sütür (4-0 Monocryl) ile kat yara kapatma. Emilebilir dikiş malzemesi kullanın. </li><li> Son olarak, su buharı geçirgen soyunma bir sprey ile yara mühür. </li></ol> In vitro kültür B. <ol><li> Biyopsi c Sürecien kısa zamanda steril bir laminer akış doku kültürü kaputu ameliyat sonrası artilage adet. </li><li> Oda sıcaklığında 3 dakika boyunca 500 x g&#39;de santrifüj ile daha sonra PBS içinde steril hasat edilmiş kıkırdak 2x yıkayın. </li><li> 30 dakika boyunca 1 mm 3, bir 50 ml Falcon transfer parçalar halinde kesilmiş ve kıkırdak 10 mi tripsin-EDTA (% 0.25) ve 10 ml PBS ile 30 dakika süreyle bir çalkalayıcı içinde sindirirler </li><li> 30 dakika sonra tam ortam eklenerek tripsinizasyon dur. Daha sonra, serum içermeyen ortam içinde bir kollajenaz (0.21 U / mg), (DMEM +% 1 Pen / Strep) ile 12 saat boyunca başka kıkırdak parçaları sallayın. </li><li> Oda sıcaklığında 3 dakika boyunca 170 x g&#39;de santrifüj edilen çözelti. </li><li> 5 ml tam ortam içinde hücre topakları yeniden süspanse edin. </li><li> Tohum 5 ml tam ortam içinde ve 37 ° C&#39;de nemlendirilmiş bir doku kültürü inkübatöründe tutmak ° C,% 5 CO2 içinde 25 cm2 doku kültürü şişeleri için, izole edilmiş kondrositler. </li><li> % 80 arasında bir yoğunluğa kondrosit büyütün. </li><li> Hücrelerin F bırakın3 dakika boyunca% 0.05 tripsin-EDTA ile maruz kalmadan önce PBS 2x yıkanarak ROM şişeler. Kondrositler ayırmak sonra, 10 ul komple ortam ilave trypsinization dur. </li><li> Tam orta 300 xg (3 dk) ve tekrar süspansiyon pelet de süspansiyon santrifüj. </li><li> Doku kültürü şişeleri (75 cm2) ve 1:3 arasında bir oran (~ 5.000 hücre / cm 2) her 5 günde ya da% 80 konfluent üzerine bölünmüş Tohum hücreleri. </li><li> Tripan mavisi boyama ile hücre sayıları ve canlılığı belirleyin. </li></ol> Matrix C. Hücre-tohumlama <ol><li> Yukarıda tarif edildiği gibi yıkama ve serbest implantasyon öncesinde hücreler. Hücre sayısı gerçekleştirin ve 1.5 ml mikrosantrifüj tüpe 5 x 10 4 hücre transferi. Daha sonra, oda sıcaklığında 5 dakika boyunca 500 x g&#39;de santrifüj. </li><li> Matrisin tam doygunluk için 15 ul tam ortam içinde yeniden süspanse pelet. </li><li> Steril bir biyopsi ile troklear kusurun tam boyutları için çift katlı kollajen iskele Cutyumruk. </li><li> Uygun boyutlu bir doku kültürü kabı (örneğin, 24-delikli plakalar) içine yerleştirin matrisi. </li><li> Matris, gözenekli, hücre yapışan yanı üzerine tohum hücreleri. Bu matris uzak hücre göçü engeller. </li><li> Kondrositlerin tam yapışma sağlamak için 1 saat boyunca bir inkübatör içinde daha fazla hücre kültür ortamı olmayan hücre-matris tohumlu bırakın. </li><li> Taze tam ortam ile kültürleme kapları (örneğin, 24-gözlü plakalar) içine Ardından, hücre-matriks-yapıları. Güçlü bağlılık bekleniyor olsa da matris kapalı herhangi bir hücre yıkayın dikkat edin. </li><li> Şimdi, hücre-matriks-yapıları yeniden implantasyon için ameliyat odasına alınabilir. </li></ol> D. Matrix destekli Otolog Kondrosit Nakli <ol><li> (A 1-8) yukarıda tarif edildiği gibi, karşı diz Parapatellar artrotomiye yapın. </li><li> Steril bir hava operatin ile troklear oluk iki izole kıkırdak defektleri oluşturung güç matkap (çapı 3.6 mm). </li><li> Kusur temizleyin ve steril tuzlu su ile durulayın. </li><li> Dikkat herhangi bir zamanda iliği boşluğu açmak için değil dikkat edilmelidir. Gerekirse, kanama karşı elektrik koter ile kusurların alt mühür. </li><li> Gözenekli yüzü aşağı (Şekil 2) ile kültürlü kondrosit numaralı seribaşı matrisler İmplant. Daha sonra delik içine basın-fit ve çevresindeki yüzey yıkayın. </li><li> Güvenli fiksasyon sağlamak için fibrin yapıştırıcı (Tissucol Duo S) biraz ile implante matrisler Seal. </li><li> Pıhtılaşma sonra, troklear oluk içinde patella yerini değiştirmek ve diz eklemi birkaç kez hareket tam kapsamlı geçerlidir. </li><li> Yanal bir kez daha patella yerinden ve istikrarsız tespitin herhangi bir olay ya da işaret olup olmadığını kontrol edin. Matrisler hala yerinde tutulması gerekir. </li><li> Tekrar patella değiştirin ve yukarıda açıklandığı gibi giyinme katmanları ve sprey yara kapanması ile işlemi bitirmek. </li></ol>

<ol><li>Albrecht, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gene+expression+and+cell+differentiation+in+matrix-associated+chondrocyte+transplantation+grafts%3A+a+comparative+study%5BTitle%5D)+AND+%22Osteoarthritis+Cartilage%22%5BJournal%5D)">Gene expression and cell differentiation in matrix-associated chondrocyte transplantation grafts: a comparative study.</a> Osteoarthritis Cartilage. 19, 1219-1227 (2011).</li>
<li>Pridie, K. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+method+of+resurfacing+osteoarthritic+knee+joints%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Bone+Joint+Surg.+Br%22%5BJournal%5D)">A method of resurfacing osteoarthritic knee joints.</a> J. Bone Joint Surg. Br. 41, 618-619 (1959).</li>
<li>Johnson, L. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Arthroscopic+abrasion+arthroplasty+historical+and+pathologic+perspective%3A+present+status%5BTitle%5D)+AND+%22Arthroscopy%22%5BJournal%5D)">Arthroscopic abrasion arthroplasty historical and pathologic perspective: present status.</a> Arthroscopy. 2, 54-69 (1986).</li>
<li>Steadman, J. R., Rodkey, W. G., Singelton, S. B., Briggs, K. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microfracture+technique+for+full-thickness+chondral+defects%3A+technique+and+clinical+result%5BTitle%5D)+AND+%22Operat.+Tech.+Orthop%22%5BJournal%5D)">Microfracture technique for full-thickness chondral defects: technique and clinical result.</a> Operat. Tech. Orthop. 7, 300-304 (1997).</li>
<li>Brittberg, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Treatment+of+deep+cartilage+defects+in+the+knee+with+autologous+chondrocyte+transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22N.+Engl.+J.+Med%22%5BJournal%5D)">Treatment of deep cartilage defects in the knee with autologous chondrocyte transplantation.</a> N. Engl. J. Med. 331, 889-895 (1994).</li>
<li>Peterson, L., Vasiliadis, H. S., Brittberg, M., Lindahl, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Autologous+chondrocyte+implantation%3A+a+long-term+follow-up%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Sports+Med%22%5BJournal%5D)">Autologous chondrocyte implantation: a long-term follow-up.</a> Am. J. Sports Med. 38, 1117-1124 (2010).</li>
<li>Nehrer, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chondrocyte-seeded+collagen+matrices+implanted+in+a+chondral+defect+in+a+canine+model%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">Chondrocyte-seeded collagen matrices implanted in a chondral defect in a canine model.</a> Biomaterials. 19, 2313-2328 (1998).</li>
<li>Frenkel, S. R., Toolan, B., Menche, D., Pitman, M. I., Pachence, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chondrocyte+transplantation+using+a+collagen+bilayer+matrix+for+cartilage+repair%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Bone.+Joint+Surg.+Br%22%5BJournal%5D)">Chondrocyte transplantation using a collagen bilayer matrix for cartilage repair.</a> J. Bone. Joint Surg. Br. 79, 831-836 (1997).</li>
<li>Salzmann, G. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+dependence+of+autologous+chondrocyte+transplantation+on+varying+cellular+passage%2C+yield+and+culture+duration%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">The dependence of autologous chondrocyte transplantation on varying cellular passage, yield and culture duration.</a> Biomaterials. 32, 5810-5818 (2011).</li>
<li>Frohlich, M., Malicev, E., Gorensek, M., Knezevic, M., Kregar Velikonja, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evaluation+of+rabbit+auricular+chondrocyte+isolation+and+growth+parameters+in+cell+culture%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Biol.+Int%22%5BJournal%5D)">Evaluation of rabbit auricular chondrocyte isolation and growth parameters in cell culture.</a> Cell Biol. Int. 31, 620-625 (2007).</li>
<li>Willers, C., Chen, J., Wood, D., Xu, J., Zheng, M. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Autologous+chondrocyte+implantation+with+collagen+bioscaffold+for+the+treatment+of+osteochondral+defects+in+rabbits%5BTitle%5D)+AND+%22Tissue+Eng%22%5BJournal%5D)">Autologous chondrocyte implantation with collagen bioscaffold for the treatment of osteochondral defects in rabbits.</a> Tissue Eng. 11, 1065-1076 (2005).</li>
<li>Vogt, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+influence+of+the+stable+expression+of+BMP2+in+fibrin+clots+on+the+remodelling+and+repair+of+osteochondral+defects%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">The influence of the stable expression of BMP2 in fibrin clots on the remodelling and repair of osteochondral defects.</a> Biomaterials. 30, 2385-2392 (2009).</li>
<li>Ueblacker, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+analysis+of+retroviral+gene+transfer+to+chondrocytes+within+collagen+scaffolds+for+the+treatment+of+osteochondral+defects%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">In vivo analysis of retroviral gene transfer to chondrocytes within collagen scaffolds for the treatment of osteochondral defects.</a> Biomaterials. 28, 4480-4487 (2007).</li>
<li>Marlovits, S., Zeller, P., Singer, P., Resinger, C., Vecsei, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cartilage+repair%3A+generations+of+autologous+chondrocyte+transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22Eur.+J.+Radiol%22%5BJournal%5D)">Cartilage repair: generations of autologous chondrocyte transplantation.</a> Eur. J. Radiol. 57, 24-31 (2006).</li>
<li>Benya, P. D., Shaffer, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dedifferentiated+chondrocytes+reexpress+the+differentiated+collagen+phenotype+when+cultured+in+agarose+gels%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Dedifferentiated chondrocytes reexpress the differentiated collagen phenotype when cultured in agarose gels.</a> Cell. 30, 215-224 (1982).</li>
<li>Rudert, M., Hirschmann, F., Wirth, C. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Growth+behavior+of+chondrocytes+on+various+biomaterials%5BTitle%5D)+AND+%22Orthopade%22%5BJournal%5D)">Growth behavior of chondrocytes on various biomaterials.</a> Orthopade. 28, 68-75 (1999).</li>
<li>Hsu, S. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evaluation+of+biodegradable+polyesters+modified+by+type+II+collagen+and+Arg-Gly-Asp+as+Tissue+Engineering+scaffolding+materials+for+cartilage+regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Artificial+Organs%22%5BJournal%5D)">Evaluation of biodegradable polyesters modified by type II collagen and Arg-Gly-Asp as Tissue Engineering scaffolding materials for cartilage regeneration.</a> Artificial Organs. 30, 42-55 (2006).</li>
<li>Brun, P., Cortivo, R., Zavan, B., Vecchiato, N., Abatangelo, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vitro++reconstructed+tissues+on+hyaluronan-based+temporary+scaffolding%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Mater.+Sci.+Mater.+Med%22%5BJournal%5D)">In vitro reconstructed tissues on hyaluronan-based temporary scaffolding.</a> J. Mater. Sci. Mater. Med. 10, 683-688 (1999).</li>
<li>Domm, C., Fay, J., Schunke, M., Kurz, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Redifferentiation+of+dedifferentiated+joint+cartilage+cells+in+alginate+culture.+Effect+of+intermittent+hydrostatic+pressure+and+low+oxygen+partial+pressure%5BTitle%5D)+AND+%22Orthopade%22%5BJournal%5D)">Redifferentiation of dedifferentiated joint cartilage cells in alginate culture. Effect of intermittent hydrostatic pressure and low oxygen partial pressure.</a> Orthopade. 29, 91-99 (2000).</li>
<li>Kimura, T., Yasui, N., Ohsawa, S., Ono, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chondrocytes+embedded+in+collagen+gels+maintain+cartilage+phenotype+during+long-term+cultures%5BTitle%5D)+AND+%22Clin.+Orthop.+Relat.+Res%22%5BJournal%5D)">Chondrocytes embedded in collagen gels maintain cartilage phenotype during long-term cultures.</a> Clin. Orthop. Relat. Res. , 231-239 (1984).</li>
<li>Kon, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Second-generation+autologous+chondrocyte+implantation%3A+results+in+patients+older+than+40+years%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Sports+Med%22%5BJournal%5D)">Second-generation autologous chondrocyte implantation: results in patients older than 40 years.</a> Am. J. Sports Med. 39, 1668-1675 (2011).</li>
<li>Gavenis, K., Schmidt-Rohlfing, B., Mueller-Rath, R., Andereya, S., Schneider, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vitro+comparison+of+six+different+matrix+systems+for+the+cultivation+of+human+chondrocytes%5BTitle%5D)+AND+%22In+Vitro+Cell+Dev.+Biol.+Anim%22%5BJournal%5D)">In vitro comparison of six different matrix systems for the cultivation of human chondrocytes.</a> In Vitro Cell Dev. Biol. Anim. 42, 159-167 (2006).</li>
<li>Niemeyer, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characteristic+complications+after+autologous+chondrocyte+implantation+for+cartilage+defects+of+the+knee+joint%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Sports+Med%22%5BJournal%5D)">Characteristic complications after autologous chondrocyte implantation for cartilage defects of the knee joint.</a> Am. J. Sports Med. 36, 2091-2099 (2008).</li>
<li>Tay, L. X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Treatment+outcomes+of+alginate-embedded+allogenic+mesenchymal+stem+cells+versus+autologous+chondrocytes+for+the+repair+of+focal+articular+cartilage+defects+in+a+rabbit+model%5BTitle%5D)+AND+%22The+American+Journal+of+Sports+Medicine%22%5BJournal%5D)">Treatment outcomes of alginate-embedded allogenic mesenchymal stem cells versus autologous chondrocytes for the repair of focal articular cartilage defects in a rabbit model.</a> The American Journal of Sports Medicine. 40, 83-90 (2012).</li>
<li>Brittberg, M., Nilsson, A., Lindahl, A., Ohlsson, C., Peterson, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rabbit+articular+cartilage+defects+treated+with+autologous+cultured+chondrocytes%5BTitle%5D)+AND+%22Clin.+Orthop.+Relat.+Res%22%5BJournal%5D)">Rabbit articular cartilage defects treated with autologous cultured chondrocytes.</a> Clin. Orthop. Relat. Res. , 270-283 (1996).</li>
</ol>

Yazarlar ifşa hiçbir şey yok.

Sunulan protokol tavşan diz yapay olarak oluşturulmuş kıkırdak defektleri içine sonraki çoğalması ve yeniden implantasyon için otolog kondrosit izole etmek için bir 9,12,13 kurulmuş ve kolay kullanışlı bir teknik sağlar. Eklem kıkırdağı lezyonlarının yeniden ve onarım için otolog kondrosit kullanımı klinik kullanımı tatmin edici uzun dönem sonuçları 6 sağlayan zaten. Periost hipertrofisi ve kireçlenme örneğin gibi büyük sorunlar, greft delaminasyon veya donör alan morbi...

<table><tbody><tr><td>&lt;strong&gt;Reaktif/ekipman adı&lt;/strong&gt;</td><td>&lt;strong&gt;Şirket&lt;/strong&gt;</td><td>&lt;strong&gt;Katalog Numarası&lt;/strong&gt;</td><td>&lt;strong&gt;Yorumlar&lt;/strong&gt;</td></tr><tr><td>DMEM</td><td>Biochrom AG</td><td>F 0415</td><td></td></tr><tr><td>Kollagenaz A</td><td>Roche</td><td>10 103 586 001</td><td>0.21 U/mg</td></tr><tr><td>Fetal sığır serumu (FCS)</td><td>PAN Biotech GmbH</td><td>3702-P103009</td><td></td></tr><tr><td>Propofol</td><td>Fresenius Kabi</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Penisilin/Streptomisin</td><td>Biochrom AG</td><td>A 2213</td><td>10,000 U/ml/10,000 &amp;mu;g/ml</td></tr><tr><td>PBS Dulbecco (1X)</td><td>Biochrom AG</td><td>L1815</td><td></td></tr><tr><td>Ethanol (%70)</td><td>Merck KgaA</td><td>410230</td><td></td></tr><tr><td>Trypsin-EDTA %0.25/%0.02</td><td>Biochrom AG</td><td>L2163</td><td>Ca&lt;sup&gt;2+&lt;/sup&gt;, Mg&lt;sup&gt;2+&lt;/sup&gt; içermeyen PBS içinde</td></tr><tr><td>Fentanil</td><td>Delta Select GmBH</td><td>1819340</td><td></td></tr><tr><td>NaCl çözeltisi (%0.9)</td><td>Bbraun</td><td>8333A193</td><td></td></tr><tr><td>Doku kültürü kapları 100 mm/150 mm</td><td>TPP AG</td><td>93100/93150</td><td>Büyüme alanı 60.1 mm&lt;sup&gt;2&lt;/sup&gt;/147.8 mm&lt;sup&gt;2&lt;/sup&gt;</td></tr><tr><td>Doku kültürü flaskları 25/75 mm&lt;sup&gt;2&lt;/sup&gt;</td><td>TPP AG</td><td>90025/90075</td><td>25 mm&lt;sup&gt;2&lt;/sup&gt;, 75 mm&lt;sup&gt;2&lt;/sup&gt;</td></tr><tr><td>Santrifüj Tüpleri (50 ml)</td><td>TPP AG</td><td>91050</td><td>Gama sterilize edilmiş</td></tr><tr><td>Hemositometre</td><td>Brand GmbH+Co KG</td><td>717810</td><td>Neubauer</td></tr><tr><td>Trypan Blue Çözeltisi %0.4</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>L8154</td><td></td></tr><tr><td>Sprey pansuman (OpSite)</td><td>Smith&amp;amp;Nephew</td><td>66004978</td><td>Su buharı geçirgen</td></tr><tr><td>Chondro-Gide&amp;Ograve;</td><td>Geistlich Pharma AG</td><td>30915.5</td><td></td></tr><tr><td>Biyopsi Punch</td><td>pfm medical ag</td><td>48351</td><td></td></tr><tr><td>Tissucol Duo S</td><td>Baxter</td><td>3419627</td><td>0.5 ml</td></tr></tbody></table>

bir tavşan modelinde kondral kusurların tadilat ve onarım için matris destekli otolog kondrosit nakli

Matrix-assisted Autologous Chondrocyte Transplantation for Remodeling and Repair of Chondral Defects in a Rabbit Model

Eklem kıkırdağı kendini rejenerasyon 1 için sınırlı bir kapasiteye sahiptir çünkü eklem kıkırdağı kusurları önemli bir sağlık sorunu olarak kabul edilir. Tedavi edilmeyen kıkırdak lezyonları devam eden ağrıya yol, olumsuz yaşam kalitesini etkileyen ve osteoartrit için zemin hazırlayabilir. Son on yıl boyunca, çeşitli cerrahi tekniklerin bu lezyonların tedavisi için geliştirilmiştir. Ancak, şimdiye kadar hyalin kıkırdak ile defekt kapsayan veya tatmin edici uzun vadeli iyileşme 2-4 sağlama açısından tam bir onarım elde etmek mümkün değildi. Bu nedenle, eklem kıkırdağı yaralanmaları gibi Doku Mühendisliği gibi rejeneratif teknikler için önemli bir hedef olmaya devam etmektedir. Genellikle lifli ya da fibröz kıkırdak dokusu oluşumuna yol açan diğer cerrahi tekniklerin aksine, doku mühendisliği tam olarak nakledilen hücrelerin kondrojenik potansiyel kullanarak orijinal eklem kıkırdağının kompleks yapısı ve özellikleri geri amaçlamaktadır. Recent gelişmeler rejeneratif kıkırdak tedaviler için umut verici olanaklar açtı. Tam kat kıkırdak veya osteokondral lezyonlarının tedavisi için ilk hücre bazlı yaklaşım klinik otolog kondrosit implantasyonu (ACI) 5 öncülük Lars Peterson ve Mats Brittberg tarafından 1994 yılında yapıldı. Bugün, tekniği klinik hatta 10 ila 20 yıl implantasyon 6 sonra iyi klinik sonuçlar bakımı, diz büyük kıkırdak defektleri tedavisi için iyi kurulmuştur. Son yıllarda, otolog kondrosit implantasyonu hızlı bir ilerleme yapıldı. Hücreler daha sonra dikilmiştir edildiği bir yapay üç boyutlu kolajen matrisin kullanımı daha popüler 7-9 oldu. MACT iki cerrahi işlemler oluşmaktadır: kondrosit toplamak için, İlk olarak, kıkırdak biyopsi t olmayan bir ağırlık taşıyan kıkırdak alanından yapılması gerekiro diz eklemi. Daha sonra, kondrosit, çıkarılan saflaştırılmış ve in vitro yeterli hücre sayısı için genişletilmiş edilmektedir. Kondrositler, daha sonra, üç boyutlu bir matris üzerine ekilir ve daha sonra yeniden implante edilebilir. Bir doku mühendisliği implant hazırlarken, çoğalma hızı ve farklılaşma kapasitesi başarılı bir doku rejenerasyonu 10 için çok önemlidir. Bir cep taşıyıcı olarak üç boyutlu bir matrisin kullanılması, bu hücresel özellikleri 11 desteklemek için düşünülmektedir. Aşağıdaki protokol özetlemek ve kıkırdak biyopsi gelen kondrosit izolasyonu için bir teknik, bir 3D-matrix (Chondro-Gide, Geistlich Biomaterials, Wollhusen, İsviçre) üzerine in vitro ve tohumlama kendi çoğalması gösterecektir. Son olarak, bir tavşan diz ekleminin yapay olarak oluşturulmuş kıkırdak zararların içine hücre-matriks-yapıları arasında implantasyon tarif edilecektir. Bu teknik, deneysel ortamda olarak kullanılabilirkıkırdak onarım daha fazla deneyler için.

Açıklanan cerrahi teknik yapay kıkırdak kusur içine otolog kondrosit başarılı bir izolasyon ve implantasyon izin verir. Deney düzeneği çevre kıkırdak içine implant başarılı bir şekilde entegrasyonu ile sonuçlanmıştır. In vivo olarak 12 hafta sonra, kıkırdak kusur implant (Şekil 4) kayma gerilmesi ve hasar azaltılmış bir homojen ve sağlam yüzey, ile tamir dokusu ile doluydu. Ayrıca, implantın hiçbir hipertrofi veya kalsifikasyon görüldü. Onarım dokusu sağlıklı çevre ...

Tavşan diz ekleminde kıkırdak defektlerinin tedavisi için bir deney tekniği tarif edilmektedir. Bir matris üzerinde numaralı seribaşı otolog kondrosit implantasyonu tatmin edici uzun vadeli sonuçlar sağlayan eklem kıkırdağı lezyonların yeniden ve onarım için bir iyi kabul edilen bir yöntemdir. Matrix destekli otolog kondrosit transplantasyonu (MACT) bir standart ve klinik olarak kurulan implantasyon yöntem sunmaktadır.

Bir Tavşan Modelinde Kondral Kusurların Tadilat ve Onarım için matris destekli Otolog Kondrosit Nakli

Eklem kıkırdağının kendi kendini yenileme kapasitesinin sınırlı olması nedeniyle, eklem kıkırdağı defektleri ciddi bir sağlık sorunu olarak kabul edilmektedir 1. Tedavi edilmediğinde ...

Bu prosedürün genel amacı, tavşan diz eklemindeki kondral defektlerin tedavisi için deneysel bir tekniği tanımlamaktır. Bu işlem, öncelikle otolog kondrositleri toplamak amacıyla diz ekleminden bir kıkırdak biyopsisi yapılarak gerçekleştirilir. İkinci adım ise biyopsi ile alınan kondrositlerin in vitro ortamda ekstrakte edilmesi, saflaştırılması ve yeterli hücre sayısına ulaşana kadar genişletilmesidir.Ardından, kondrositler üç boyutlu bir matrise yerleştirilir. Son adımda, üç boyutlu matris tavşanın kontralateral dizine açılmış bir kondral defekte implante edilir. Nihayetinde, 12 haftalık in vivo sürenin ardından, implante edilen bölgeler makroskobik olarak incelenebilir ve onarım dokusunun homojen, sağlam ve bütün bir yüzey sergilediği görülür.Bu yöntem, eklem kıkırdağı onarımı alanındaki temel soruların yanıtlanmasına yardımcı olabilir; büyüme faktörü tedavisi, gen indüksiyonu ve metrik özelliklerin değiştirilmesinin deneysel analizini kolaylaştırabilir. Tavşanı anestezi altına aldıktan sonra, operasyon yapılacak dizi bir elektrikli tıraş makinesi ile tıraş edin. Ardından tüyleri vakumla temizleyin, tıraş edilen dizi iyice dezenfekte edin ve hayvanın geri kalanını steril bir pansumanla örtün.Ardından, patellayı palpe edin. Patellanın medialinden bir cilt insizyonu gerçekleştirin ve ardından steril koşullar altında medial parapattellar artrotomi ile diz eklemini açın, patellayı lateral olarak kaydırın ve ardından steril bir skalpel kullanın. Trochlea ossis femoris'ten iki ila üç milimetre uzunluğunda küçük kıkırdak parçalarını dikkatlice soyup çıkarın.Kıkırdak biyopsilerini derhal komple ortam içeren 50 mililitrelik bir tüpe yerleştirin ve ardından defektleri steril salin ile durulayın. Kalan kıkırdak parçalarını çıkarmak için pens kullanın. Şimdi patellayı troklear oluk içerisine yeniden konumlandırın ve yarayı tek düğümlü sütürler ve sürekli emilebilir kutanöz sütür ile katmanlar halinde kapatın.Son olarak, yarayı su buharına geçirgen bir sprey pansuman ile kapatın. Bu adıma, steril olarak hasat edilen kıkırdağı iki kez PBS ile yıkayıp ardından oda sıcaklığında 500 times G'de üç dakika boyunca santrifüj ederek başlayın. Daha sonra, kıkırdağı bir kübik milimetrelik parçalar halinde kesin.Bunları yeni bir 50 milliliter konik tüpe aktarın ve ardından parçaları 10 milliliters tripsin, EDTA ve 10 milliliters PBS ile bir çalkalayıcı üzerinde sindirin. 30 dakika sonra, 10 milliliters komple ortam ekleyerek tripsinizasyonu durdurun. Santrifüjden sonra süpernatanı uzaklaştırın ve kollajenaz A içeren serumsuz ortam ekleyin. Ardından parçaları 12 saat daha çalkalayın.Şimdi elde edilen çözeltiyi santrifüjleyin ve ardından hücre peletini beş mililitre komple besiyerinde yeniden süspanse edin; izole edilen sitleri, beş mililitre komple besiyeri içeren 25 santimetrekarelik doku kültürü flasklarına ekin ve hücreleri 37 °C sıcaklıkta ve %5 CO2 içeren nemlendirilmiş bir doku kültürü inkübatöründe büyütün. Kültürler %80 yoğunluğa ulaştığında, sitleri PBS ile iki kez yıkayın. Ardından hücreleri üç dakika boyunca %0,05 tripsin EDTA'ya maruz bırakın.Hücreler ayrıldıktan sonra, tripsinizasyonu durdurmak için beş mililitre komple ortam ekleyin. Hücreleri santrifüjle çöktürdükten sonra, peleti komple ortamda yeniden süspande edin ve ardından hücreleri 75 santimetrekarelik doku kültürü flasklarına ekimleyin. Az önce gösterildiği gibi in vitro kültürden hücreleri topladıktan sonra, hücreleri sayın ve ardından 5 × 10⁴ hücreyi 1,5 mililitrelik bir mikrosantrifüj tüpüne aktarın.Hücre süspansiyonu santrifüj edildikten sonra, matriksin tamamen doyurulması için peleti 15 µL komple besiyerinde yeniden süspanse edin. Ardından, çift katmanlı kolajen iskelesini troklear defektin tam boyutlarında kesin ve matriksi 24 kuyucuklu bir plakaya yerleştirin. Şimdi, hücrelerin matriksten uzaklaşmasını önlemek için kondrositleri matriksin gözenekli hücre yapışkan yüzeyine ekleyin.Ardından, kondrositlerin tam olarak tutunmasını sağlamak için hücre yerleştirilmiş matrisleri, başka bir hücre kültürü ortamı olmadan bir saat boyunca inkübe edin. Son olarak, hücre matrisi yapılarını taze, tamamlanmış besiyeri içeren yeni bir 24 kuyucuklu plakaya yerleştirin.Az önce gösterildiği gibi karşı dizde para patella artrotomi gerçekleştirdikten sonra, troklear olukta 3,6 mm çapında iki izole kondral defekt oluşturmak için steril havayla çalışan bir güç matkabı kullanarak transplantasyona başlayın. Ardından, defektleri steril salin ile yıkayın. Bunu yaparken iliğin boşluğunu açmamaya dikkat edin.Şimdi, kondrosit ekilmiş matrisleri gözenekli yüzeyleri aşağıya gelecek şekilde implante edin ve ardından güvenli fiksasyonu sağlamak için implante edilen matrisleri mühürlemek amacıyla bir miktar fibrin yapıştırıcısı kullanın. Patellayı troklear oluk içerisine yeniden yerleştirin ve diz ekleminin tam hareket açıklığını birkaç kez uygulayın. Ardından, matrisleri yerinde tutarak fiksasyonun herhangi bir belirtisini kontrol etmek için patellayı bir kez daha lateral olarak kaydırın.Patellayı yerine yerleştirdikten sonra, operasyonu tekrar katmanlar halinde yara kapatma ve az önce gösterildiği gibi sprey pansuman ile tamamlayın. In vivo olarak 12 hafta sonra, kondral defekt homojen ve sağlam bir yüzeye sahip onarım dokusu ile dolmuş olup bu durum implant üzerindeki kayma stresini ve hasarı azaltmıştır. Ayrıca, implantta herhangi bir hipertrofi veya kalsifikasyon görülmemiştir.Onarım dokusu, sağlıklı çevre kıkırdak dokusu ile kıyaslanabilir düzeyde sert ve sağlam bir yapı sergilemiştir. Ayrıca, greft delaminasyonu meydana gelmemiştir. Kırmızı ok, otolog kondrosit ekiminden 12 hafta sonraki önceden açılmış kondral defekti göstermektedir.Bu videoyu izledikten sonra, in vitro proliferasyon için otolog kondrositlerin nasıl izole edileceği ve tavşan dizinde yapay olarak oluşturulan kıkırdak defektlerine yeniden implantasyon için bu hücrelerin 3D matrislere nasıl ekileceği konusunda iyi bir anlayışa sahip olmalısınız. Kıkırdak defekt tekniğinin farklı bir deneysel modeldeki daha kapsamlı gösterimi için lütfen beraberindeki JoVE makalemiz olan "treatment of Osteocondral defects in the rabbit's knee joint by implantation of allogeneic mesenchymal stem cells in fibrin clots" çalışmasını da izleyin.

matrix-assisted-autologous-chondrocyte-transplantation-for-remodeling

Research

JoVE Journal

Medicine

Tıp

Tavşan diz eklemi osteokondral defektlerinin tedavisi için bir deney tekniği tarif edilmektedir. Osteokondral kusurları içine allojenik mezenkimal kök hücrelerin implantasyon doku mühendisliği alanında umut verici bir gelişme sağlar. Fibrin pıhtısı hücre...

Fibrin pıhtısı içinde allojenik Mezenkimal Kök Hücre implantasyonu ile Tavşan Diz Eklemi içinde Osteokondral Kusur tedavisi

Hayvan modelleri, doku mühendisliği yapılmış greftlerin değerlendirilmesi için önemli araçlardır. Bu makale, ön çapraz bağ dokusu mühendisliğinde kullanılmak üzere elektroeğrilmiş biyobozunur polimer greft hazırlama protokolünün yanı sıra bir sıçan modelinde implantasyon için bir cerrahi protokol sunmaktadır.

Engineered Ön Çapraz Bağ Greftlerinin Değerlendirme Atimik Rat Modeli

Bu çalışmada microfractured ve saf yağ kaynaklı kök hücre kullanarak talus osteokondral lezyon artroskopik tedavi için bir protokol rapor etmektir.

Otolog Microfractured ve saf yağ dokusu osteokondral lezyon Talus, artroskopik yönetimi için

Biz hücre ölümü yaralanma/olduğu gibi fare eklemlerin eklem yüzeyinde kayma ölçüde kontrollü mekanik yükler veya etkileri uygulamadan sonra değerlendirmek için bir yöntem mevcut. Bu yöntem, osteoartrit, genetik faktörler ve/veya farklı yükleme rejimleri içinde situ kondrosit güvenlik açığı nasıl etkilediğini araştırmak için kullanılabilir.

Gerçek zamanlı görselleştirme ve analiz nedeniyle tam olarak olduğu gibi fare kıkırdak Explants mekanik yükleme kondrosit yaralanma

Burada, büyükbaş dizleri kıkırdak eksültasyonunun izole edilmesi ve kültürlenmesini açıklayan bir protokol salıyoruz. Bu yöntem, eklemi hedefleyen biyolojik uyaranlara veya yeni terapötiklere yanıt olarak doku değişikliklerini tanımlamak için kolay ve erişilebilir bir araç sağlar.

Sığır Diz Eksbitkilerinde Kıkırdak Remodeling Ex Vivo Doku Kültür Modeli

Burada, sıçan dizinin siklik yüklemeye bağlı eklem içi kıkırdak lezyonu modeli, 20 N üzerinde 60 siklik kompresyon ile oluşturulan ve sıçanlarda femoral kondiler kıkırdakta hasara neden olan modeli sunuyoruz.

Sıçan Dizinin Döngüsel Yüklemeye Bağlı Eklem İçi Kıkırdak Lezyon Modelini Oluşturmak için Non-İnvaziv Bir Yöntem

Tavşanlarda açık medial femoral kondil etki modeli, travma sonrası osteoartrit (PTOA) ve PTOA ilerlemesini azaltmak için yeni terapötik stratejiler üzerinde çalışmak için güvenilirdir. Bu protokol, bir çarpma kafasına sahip taşıyıcı tabanlı bir düşme kulesi kullanılarak tavşanlarda posterior medial femoral kondilin izole bir kıkırdak defektini oluşturur.

Tavşanda travma sonrası osteoartrit oluşturmak için tekrarlanabilir bir kıkırdak etki modeli

Bu protokol, sıçanların femoral troklear oluğunda delikler açarak ve sonraki ağrı davranışını ve histopatolojik değişiklikleri ölçerek tam kat kıkırdak defektleri (FTCD) modeli oluşturur.

Tam Kat Kıkırdak Defektlerinin Sıçan Modelinin Geliştirilmesi ve Değerlendirilmesi

Bu protokolde modifiye Videman yöntemi kullanılarak diz osteoartriti modeli hazırlanmış olup, akupotominin operasyon prosedürleri ve önlemleri detaylandırılmıştır. Akupupotominin etkinliği, kuadriseps, femoris ve tendonun mekanik özellikleri ve kıkırdağın mekanik ve morfolojik özellikleri test edilerek gösterilmiştir.

Tavşanda Diz Osteoartrit Modelinde Akupotomi Uygulaması

Protokol, diz osteoartritinin bir tavşan modelinde Tuina müdahalesi için bir yöntemi açıklar.

Diz Osteoartritinin Tavşan Modelinde Tuina Müdahalesi

Burada, kemik ve kıkırdak dokusu yenileme çalışmaları için uygun deneysel bir model oluşturmak amacıyla, koyun dizlerinde kontrollü osteokondral lezyonlar oluşturmak için entegre bir protokol sunuyoruz. Protokol, femoral kondilde tam kalınlıkta osteokondral defekt oluşturmak için hayvan refahı etkilerini ve sonuçlardaki değişkenliği en aza indiren teknikler kullanarak bir yöntem ortaya koyuyor.

Tam Kalınlıkta Osteokondral Defektli Bir Koyun Modelinin Oluşturulması ve Değerlendirilmesi

Öğrenin, tavşan diz eklemindeki kondral kusurları otolog kondrositlerle ve üç boyutlu matris desteğiyle onarmak için bu deneysel tekniği. On iki haftalık sonuçlar homojen ve sağlam kıkırdak dokusu göstermektedir.

Bir Tavşan Modelinde Kondral Kusurların Tadilat ve Onarım için matris destekli Otolog Kondrosit Nakli

Daha fazla video keşfet