Name: Tripsin ile Pasajlanması tonlar İnsan Embriyonik Kök Hücre hatları (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2006-10-12T00:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 38 s
Description: Öğrenin, tripsin kullanarak HuES insan embriyonik kök hücre hatlarını pasajlama tekniğini. Sağlıklı, farklılaşmamış ve karyotipik olarak normal hücre kültürlerini sürdürmek için standart protokolü keşfedin.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Genel Biz kolay kullanım sağlamak için belirli bir zamanda birden fazla örnek çözülme öneririz. İşleyici, uzun bir süre için oda sıcaklığında ve düşük CO2 kültürler bırakmamaya özen göstermelisiniz. Bütün canlı hücreler santrifüj xg&#39;de 500-600 oda sıcaklığında 5 dakika süreyle yapılır. MEFS (Fare Embriyonik Besleyici Hücreler) <ol><li> 37 Pre-sıcak MEF medya ° C -80 Den MEF flakon çıkarın ° C ve hemen batığın 37 ° C su banyosunda tüp alt yarısı. Hücrelerin% 80 (küçük donmuş kısmını sol) çözülmüş önce 30-45 saniye sürer. </li><li> Hızla tüp, laminer akış kaputu getirmek,% 70 alkol ile sprey ve önceden ısıtılmış medya hücreleri aktarmak. </li><li> Önceden hazırlanmış plakalar jelatin solüsyonu aspire edin. </li><li> MEF her altı kuyu içine bir damla akıllıca bir şekilde çözüm kısım 2 ml. MEFS eşit dağıtmak için iyi hakkında emin olun. MEFS plaka takmak için izin gecede MEF plaka ve 37 ° C inkübatör yer tarih. </li><li> 6 saat sonra MEFS plaka eklenecektir. MEF plakalar 24-48 saat sonra kaplama kullanmak en iyisidir. 4 gün ve üzeri bir MEF plaka KULLANMAYIN. </li><li> Pre-sıcak tonlar medya ve% 0.05 tripsin / EDTA - 37 ° C Kaputun altında, prelabel bir steril 50 ml konik tüp. </li><li> Dikkatle aspirat kültürü tonlar medya bölünebilir. 1X fosfat tampon çözeltisi (PBS) başına 2mL kuyu nazikçe yıkayın. PBS aspire. 0.75 ml% 0.05 tripsin / EDTA iyi ettiniz. </li><li> Kapağını değiştirin ve 4x büyütme altında hücreler gözlemlemek. Tonlar kolonileri çevreleyen MEFS geri çekmek için başlamalıdır. MEFS yeterince yuvarlak ve tonlar kolonilerin sınırları kaba, kaput, plaka dönün. Bu süreç kesinlikle HAYIR, 10 dakika veya hücreleri yeniden büyümek olmaz daha uzun yaklaşık 5 dakika sürer. </li><li> MEF tek tabaka tamamen müstakil (tek tabaka yapışkan ve tek parça halinde kalması) kadar yavaşça kuyunun altındaki yıkama, aşağı yukarı pipet ve. </li><li> 50 ml konik boru, ek tonlar medya içeren bir hücre süspansiyonu aktarın. Spin tüp 5 dakika için 500xg hücrelerin, hücre pelletini rahatsız etmemek için dikkatli olmak, medya aspire. </li><li> MEFS yeni bir tabağa plaka için ek tonlar medya hücrelerinin uygun şekilde belirlenir hacmi ekleyin ve 5-7 kez otomatik bir pipet yardımıyla çözüm pipetle. </li><li> MEFS taze bir plaka MEF medya çıkarın. </li><li> Kısım iyi hakkında, eşit bir şekilde düşer dağıtmak için emin olun, her bir kuyunun akıllıca tonlar damla. Plaka sallayarak, tonlar koloniler tohum sağlamak için dikkatli bir şekilde bir gecede 37 ° C inkübatör hücrelerin geri. </li><li> Tonlar hücreleri bir bölünme çıkan bir çözülme çıkan bu benzer şekilde davranır. </li></ol>

<ol><li>Edmond, M. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nosocomial+bloodstream+infections+in+United+States+hospitals%3A+a+three-year+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Clin.+Infect.+Dis%22%5BJournal%5D)">Nosocomial bloodstream infections in United States hospitals: a three-year analysis.</a> Clin. Infect. Dis. 29, 239-244 (1999).</li>
<li>Ramage, G., Bachmann, S., Patterson, T. F., Wickes, B. L., Lopez-Ribot, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Investigation+of+multidrug+efflux+pumps+in+relation+to+fluconazole+resistance+in+Candida+albicans+biofilms%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Antimicrob.+Chemother%22%5BJournal%5D)">Investigation of multidrug efflux pumps in relation to fluconazole resistance in Candida albicans biofilms.</a> J. Antimicrob. Chemother. 49, 973-980 (2002).</li>
<li>Srinivasan, A., Uppuluri, P., Lopez-Ribot, J., Ramasubramanian, A. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+a+High-Throughput+Candida+albicans+Biofilm+Chip%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+ONE%22%5BJournal%5D)">Development of a High-Throughput Candida albicans Biofilm Chip.</a> PLoS ONE. 6, 19036-19036 (2011).</li>
<li>Ramage, G., Vandewalle, K., Wickes, B. L., Lopez-Ribot, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characteristics+of+biofilm+formation+by+Candida+albicans%5BTitle%5D)+AND+%22Rev.+Iberoam.+Micol%22%5BJournal%5D)">Characteristics of biofilm formation by Candida albicans.</a> Rev. Iberoam. Micol. 18, 163-170 (2001).</li>
<li>Pierce, C. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+simple+and+reproducible+96-well+plate-based+method+for+the+formation+of+fungal+biofilms+and+its+application+to+antifungal+susceptibility+testing%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Protoc%22%5BJournal%5D)">A simple and reproducible 96-well plate-based method for the formation of fungal biofilms and its application to antifungal susceptibility testing.</a> Nat. Protoc. 3, 1494-1500 (2008).</li>
<li>Lee, M. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Three-dimensional+cellular+microarray+for+high-throughput+toxicology+assays%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci.+U.S.A%22%5BJournal%5D)">Three-dimensional cellular microarray for high-throughput toxicology assays.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 105, 59-63 (2008).</li>
<li>Meyerhofer, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characteristics+of+resist+films+produced+by+spinning%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Applied+Physics%22%5BJournal%5D)">Characteristics of resist films produced by spinning.</a> Journal of Applied Physics. 49, (1978).</li>
<li>Ramage, G., Vande Walle, K., Wickes, B. L., Lopez-Ribot, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Standardized+method+for+in+vitro+antifungal+susceptibility+testing+of+Candida+albicans+biofilms%5BTitle%5D)+AND+%22Antimicrob.+Agents+Chemother%22%5BJournal%5D)">Standardized method for in vitro antifungal susceptibility testing of Candida albicans biofilms.</a> Antimicrob. Agents Chemother. 45, 2475-2479 (2001).</li>
<li>Chandra, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biofilm+formation+by+the+fungal+pathogen+Candida+albicans%3A+Development%2C+architecture%2C+and+drug+resistance%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Bacteriology%22%5BJournal%5D)">Biofilm formation by the fungal pathogen Candida albicans: Development, architecture, and drug resistance.</a> Journal of Bacteriology. 183, 5385-5394 (2001).</li>
<li>Jabra-Rizk, M. A., Falkler, W. A., Meiller, T. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fungal+biofilms+and+drug+resistance%5BTitle%5D)+AND+%22Emerg.+Infect.+Dis%22%5BJournal%5D)">Fungal biofilms and drug resistance.</a> Emerg. Infect. Dis. 10, 14-19 (2004).</li>
<li>Tobudic, S., Lassnigg, A., Kratzer, C., Graninger, W., Presterl, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antifungal+activity+of+amphotericin+B%2C+caspofungin+and+posaconazole+on+Candida+albicans+biofilms+in+intermediate+and+mature+development+phases%5BTitle%5D)+AND+%22Mycoses%22%5BJournal%5D)">Antifungal activity of amphotericin B, caspofungin and posaconazole on Candida albicans biofilms in intermediate and mature development phases.</a> Mycoses. 53, 208-214 (2010).</li>
</ol>

Bu video laboratuvarda rutin geçit tonlar insan embriyonik kök hücre hatları gösterdi. Verimli ve düzenli bir bölme ve Pasajlanması sağlıklı bir insan embriyonik kök hücre hattı korumak için şarttır. Tripsin aracılı geçit tonlar hücre hatlarının önemli bir avantaj, ancak kültürler üstü trypsinize veya yeniden platting sırasında tek hücre büyük bir kısmı için değil önemlidir.

Tonlar medya 651,5 ml KO-DMEM 500 ml PenStrep 6.5 ml GlutaMAXTM 6,5 ml NEAA 6,5 ml 2-merkaptoetanol 0.5ul KO Serum Değiştirme 65 ml Plasmanate 65 ml bFGF2 (10 ng / ml son) 0.65 ml

tripsin ile pasajlanması tonlar İnsan embriyonik kök hücre hatları

Passaging HuES Human Embryonic Stem Cell-lines with Trypsin.

Bu video laboratuarımızda rutin tripsin tonlar insan embriyonik kök hücre hatları geçişleri nasıl göstermektedir. İnsan embriyonik kök hücreleri, hücre kültürü eserler, ve yüksek nüfus çiftlenmeler karyotipik anormallikler edinmeye eğilimindedir. Uygun Pasajlanması sağlıklı, farklılaşmamış, karyotipik olarak normal tonlar, insan embriyonik kök hücre kültürü korumak için şarttır. Birincisi, genişleyen bir kültürün artık medya ve hücre enkaz kaldırmak için PBS içinde yıkanır, sonra da hücre sıcak 0.05% tripsin-EDTA minimum hacmi ile üst üste. Tripsin, beş dakika kadar hücreleri sol, sonra da hücre 2mL serolojik bir pipet yardımıyla hafifçe yerinden vardır. Tonlar medyanın büyük hacimli hücre süspansiyonu ile toplanır ve karıştırılır, sonra da hücre nazik santrifüj tarafından toplanır. Inaktive tripsin medya karışımı kaldırılır ve hücrelerin önceden ısıtılmış tonlar medya yeniden bekletildi. Uygun bir bölünme oranı (genellikle 1:10-01:20) hesaplanır ve ışınlanmış fare embriyonik fibroblast besleyici hücreler tek tabaka içeren 1-2 gün eski bir plaka üzerine yeniden kaplı hücreler. Yeni seribaşı tonlar kültür plaka 48 saat boyunca rahatsız edilmeden bırakılırsa, o medya bundan sonra her gün değiştirilir. Bu karyotipik anormallikleri tanıtan riskini artırır gibi, tek bir hücre süspansiyonu aşağı trpsinize için önemlidir.

Bu video laboratuarımızda rutin tripsin tonlar insan embriyonik kök hücre hatları geçişleri nasıl göstermektedir.

Tripsin ile Pasajlanması tonlar İnsan Embriyonik Kök Hücre hatları

Bu videoda, laboratuvarımızda HuES insan embriyonik kök hücre hatlarının tripsin ile rutin olarak nasıl pasajlandığını gösteriyoruz. İnsan embriyonik kök hücreleri, ...

Bu, teknikleri nerede çalıştırdınız? Ah, sana nerede öğrettim? Belcher.Evet.Sana Bel'i ilk öğrettiğimde, yazı T.Yeah'ımda geçirdim.Ve bu sanki orada kıkırdak malzemelerini seviyorduk. Ve bu yüzden oradaki sosyal kültürü sevdim. Ve sonra Hopkins'te son yılımda farklı kişilerle çalıştım, bu yüzden mühendislik meselesi gibi, bu daha çok denemekle ilgiliydi, bunu üç boyutlu olarak tasarlıyoruz.

passaging-hues-human-embryonic-stem-cell-lines-with-trypsin

Research

JoVE Journal

Biology

Biyoloji

Bu video fare embriyonik fibroblast (MEF) besleyici hücreler insan embriyonik kök hücreleri (hESC) nasıl büyümeye göstermektedir. Part 1 3.

MEFS I Matrigel: MEFS Durum Pasajlanması hESC

ESC farklılaşması, hücre türüne özgü yapısı değişiklikleri ve kromatin bileşimi ile çakışmaktadır. Bu değişikliklerin tespiti stemcellness ve hücre farklılaşması tanımlamak mekanizmaları içine değerli bilgiler sağlar. Kromatin immunoprecipitation (ChIP) kök hücre farklılaşması altında yatan moleküler mekanizmaları incelemek için değerli bir yöntem temsil eder.

İnsan Embriyonik Kök Hücre Kromatin Immunoprecipitation

Bu video, besleyici, hücre koşullarda ve ne kadar besleyici sürekli geçit hESC hücre koşulları, insan embriyonik kök hücreleri (hESC) büyümesini nasıl koruyacağınızı gösteriyor. HESC, Onay pluripotency immünofloresan mikroskobu ile besleyici, hücre koşullarda yetiştirilen da gösterilmiştir. 3 Bölüm...

Matrigel MEFS Matrigel 3: Matrigel üzerine gelen Pasajlanması hESC

Karyotipleme genetik değişiklikler tespit etmek için yaygın olarak kullanılan basit ve kullanışlı bir bir tekniktir. Burada bakımı, kültür bu hücrelerin kromozom durum izleme için insan embriyonik kök hücrelerin kromozom yayılmış hazırlık için adım protokol tarafından bir adım açıklanmaktadır.

Karyotipik İnsan Embriyonik Kök Hücreleri kromozom Yayılı Hazırlık

Biz küçük bir molekül tabanlı oligodendrosit öncü hücreler (OPC) içine fare embriyonik kök hücreleri farklılaşma için protokol açıklar. Bu protokol, 30 gün farklılaşma, yüksek verimlilik ile Olig2 + NG2 + OPC üretir. Ayrıca, aksiyon potansiyelleri ateş "spike" OPC oluşturmak için bir yöntem açıklanmaktadır.

Embriyonik Kök Hücreler farklılaşma oligodendrosit Öncüleri

Belirli hücrelerin içine hESC Yönetmen farklılaşma, rejeneratif tıp alanında büyük ilgi yarattı. Biz belirlemek için bir özlü, adım-adım...

Teratom Oluşumu İnsan Embriyonik Kök Hücre Kader Haritalama

Mikro-disseke eksplantlar tekniği, iskelet kas kök hücre kaynağı olarak çocuk, yetişkin ya da embriyonik kasları proliferatif iskelet kas hücreleri izole için sağlam ve güvenilir bir yöntemdir. Benzersiz, bu hücrelerin klonal in vivo nakli için kullanılan iskelet kas kök hücre hatları üretmek için türetilmiştir.

Yetişkin ve Embriyonik İskelet, Kas Microexplant Kültür ve İskelet Kası Kök Hücre İzolasyonu

Bu protokol, ek eksojen takviye veya hPSC'ye özgü sentetik substrat olmaksızın jelatin kaplı bir tabakta yalnızca insan plasentasından türetilen şartlandırılmış ortamı kullanarak insan pluripotent kök hücrelerini (hPSC'ler) çoğaltmak için basit ve etkili bir yol sağlar.

A Novel Kültür Modeli İnsan Pluripotent için Plasenta klimalı Medyada Jelatin üzerinde hücre çoğalma Kök

Bu yöntem, floresan etiketli sarkomere proteinleri ile pluripotent kök hücre türevi kardiyomiyositler kullanarak sarkomere kısaltmasını incelemek için kullanılabilir.

Floresan Etiketli Sarkom Proteinleri kullanılarak Pluripotent Kök Hücre Türevli Kardiyomiyositlerin Sarkomer Kısaltılması.

Besleyici hücrelerde kültürlenen insan embriyonik kök hücrelerinin (hESC'ler) ve insan kaynaklı pluripotent kök hücrelerin (hiPSC'ler) enzimatik veya mekanik geçişiyle ilişkili sınırlamalardan kaçınmak için, EDTA aracılı yapışma bozukluğu kullanılarak insan sünnet derisi fibroblastlarının besleyici hücre tabakasında tutulan hESC veya hiPSC kolonilerinin toplanması için hızlı, etkili, uygun maliyetli, yüksek verimli bir yöntem oluşturduk.

İnsan pluripotent kök hücrelerinin besleyici hücreler üzerinde etilendiamintetraasetik asit aracılı yapışma ile hızlı, uygun maliyetli, enzimsiz geçişi

Bu protokol, insan osteoklastlarının indüklenmiş pluripotent kök hücrelerden (iPSC'ler) ayırt edilmesini sunar ve osteoklastların ve osteoklast öncüllerinin karakterizasyonu için yöntemleri açıklar.

İnsan Kaynaklı Pluripotent Kök Hücrelerden Osteoklastların Farklılaşması ve Karakterizasyonu

Öğrenin, tripsin kullanarak HuES insan embriyonik kök hücre hatlarını pasajlama tekniğini. Sağlıklı, farklılaşmamış ve karyotipik olarak normal hücre kültürlerini sürdürmek için standart protokolü keşfedin.

Tripsin ile Pasajlanması tonlar İnsan Embriyonik Kök Hücre hatları

Daha fazla video keşfet