Name: Farelerde Kontrollü Servikal yırtığı Sakatlık (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2013-05-09T13:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 28 s
Description: Öğrenin farelerde servikal omurilik yırtığı yaralanması modeli oluşturma yöntemini. Titreşimli bıçak ve omurga sabitleme cihazı kullanılarak yüksek hassasiyetle tekrarlanabilir lezyonlar elde edilir.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Bu cihazın geliştirilmesi LISA Co, Louisville, Kentucky tarafından desteklenmiştir. Ayrıca Norton Sağlık, Louisville, CBS için KY ve NIH NS050243, NS052290 ve XMX için NS059622 devam eden desteği kabul.

1. Omurga Sabitleyici hayvan Hazırlama ve Uygulama Fare servikal ventral olarak lateral görünümü görüldüğü içbükey olduğunu. C3 ila T1 spinöz proses küçük ve hassastır ve genellikle 3,4 tarif edildiği gibi, bu nedenle vertebra stabilizasyonu için uygun değildir. Biz omurga stabilizasyonu yan faset sabitleme tarafından yapılmalıdır öneririz. Tesbit yanal olarak her bir düzlük için kelepçe fare ve ayarlanabilen iki paslanmaz çelik kol desteklemek için bir U-şekilli metal kanal oluşur. Bu hedef vertebra mükemmel immobilizasyon sağlar. Spinal fiksasyon sonra, omurga biraz omurilik daha iyi poz sağlamak için servikal eğrilik düzleştirmek için yükselir. <ol><li> Forseps, microscissors 2 çift, bir 30 G iğne, dikiş ve iğne tutucu, cilt klipleri ve klip aplikatör 2-3 çiftleri: Aşağıdaki cerrahi aletler sterilize edin. Omurga sabitleyici dezenfekte edin. AnesKetamin / Ksilazin (100 mg / 10 mg / kg) intraperitoneal kokteyl kullanarak fare thetize. Fare boynundan saç tıraş. </li><li> Bir povidon-iyot çözeltisi ve% 70 alkol ile cilt temizliği sonra, bir ısıtma yastığı ile ısındı ameliyat masası üzerine fareyi hareket ettirin. Kornea kurumasını önlemek için oftalmik merhem ile hayvan gözleri Kapak. </li><li> Anestezi (fare bir kuyruk tutam cevap vermediğinde ulaştı) oluşturulduktan sonra, alt servikal deri altı yağ-pad için oksiput bir posterior servikal orta hat cilt kesi yapmak. Büyütme altında, C2 de trapez kasları arasında bir orta hat kesi yapmak ve semispinalis kapitis kasları bölünmüş. Submüsküler yağ yastığı belirlenmesi doğru katmanda diseksiyonu kolaylaştırır. </li><li> Güvenilir bir dönüm noktası olarak hizmet veren T2 spinöz proses için kaudal orta hat kas diseksiyonu uzatın. T2 vertebra bağlı kas kesin ve T2 kıkırdak kısmını çıkarınspinöz proses. </li><li> Mikro bir makas kullanarak T2 lamina aracılığıyla C2 paraspinal kaslar parçalara ayır. Kas diseksiyonu spinöz süreçleri bitişik başlar ve faset eklem iki taraflı uzanır. Kanamayı en aza indirmek için, spinöz süreçleri ve lamina (periosteal katmanında) hemen bitişiğinde kasları ayırın. Lateral yönleri maruz sonra LISA aşamasının U-şekilli kanal üzerinde fare. </li><li> Bilateral maruz yönü altında paslanmaz çelik kolları takın. Silah devreye girdikten sonra, omurga hareketsiz çelik silah başparmak vidaları sıkın. Bu hedef vertebra firma tespit korur ve mükemmel pozlama sağlar. Kollar omurga tam yatay yönünü sağlamak için ayarlanabilir. </li><li> Dura altında yatan ortaya çıkarmak için, C5 ve C6 arasındaki ligamentum flavum İnsizyon. Interlaminar alanı arasında, microscissors yerleştirilir, üzerinden küçük bir durotomy oluşturmak için 30 G iğne kullanındurotomy uzatmak. Omurilik şimdi kontrollü laserasyon lezyon geçmesi hazırlanmıştır. </li></ol> 2. LISA Cihaz Kullanımı Servikal Omurilik yırtığı <ol><li> Servikal spinal kord genişleme genişliği farklı seviyelerde değişir. Bir 2.3 mm düz bıçak kullanarak C5-6 bir sırt hemiseksiyona lezyon yapın ve omurilik tüm genişliğini kapsayacak şekilde titreşim genliği ayarlayın. Bıçaklar Güzel Bilim Araçları A.Ş. (Foster City, CA) elde edilen ve omurilik yaralanması için değiştirilir. Düşük genliğe seviyeleri kord yaralanması kolaylığı azalacak şekilde, ≥ 0.5 mm bıçak titreşim genliği koruyun. </li><li> LISA sahnede omurga sabitleme ve fare yerleştirin. Bıçak hareket üç aralıklarının sahip mikro-sürücüleri tarafından kontrol konumu ile Lisa takılır. Lisa ve bunların işlevleri bileşenleri Şekil 1 &#39;de tarif edilmektedir. </li><li> Güç bıçak-titreşimli anahtarı. Magnif altındamaruz omurilik titreşimli bıçak altına doğrudan konumlandırılmış böylece ication, fareyi hareket ettirin. </li><li> Salınan bıçak doğru fareyi destekleyen sahne yükseltmek. Bıçak ancak omurilik dorsal ven dokunduğunda &quot;0&quot; konumuna kaydedilir. &quot;0&quot; pozisyonuna göre, omurilik yaralanması derinliği ölçün. </li><li> Mikro-sürücü kontrolü ile sahne konumunu yükseltmek: mikro-sürücü topuzu bir 360 ° dönüş 0,25 mm sahne yükseltir. Bu nedenle, 0,75 mm sırt hemiseksiyona lezyon mikro sürücü kolu 3 kez çevrilerek oluşturulur. Lezyonun doğruluğu ± 0.01 mm&#39;dir. Bıçak omurilik lacerate başladığında, tuzlu sulama ile cerrahi alan yağlayın. Omurilik kesme derinliği dikey mikro-sürücü tarafından kontrol ve görsel rehberlik bağımsızdır. </li><li> Önceden belirlenmiş derinlik ulaşıldığında, titreşimli anahtarını kapatın. İdeal olarak, salınan bıçak l konumlandırılmışdoku deformasyon delil olmadan esion boşluğu. Kesme bıçağı gelen sahne indirin ve pamuk Q-ipuçlarını kullanarak cerrahi alanında kan ve tuzlu çıkarın. Hemostaz &lt;1 dakika içinde kendiliğinden oluşur. </li><li> Omurga sabitleyici gelen fareyi bırakın. 6-0 ipek sütür ve cilt kapatın kullanarak paraspinal kaslar Yaklaşık paslanmaz çelik Michel klipler kullanarak yara. </li></ol> 3. Hayvan Bakımı <ol><li> Subkutan bilinç kazanmak ise yeterli hidrasyon korumak ve bir ısıtma yastığı kurtarma kafeste fare yerleştirmek için serum fizyolojik 1-2 ml toplam enjekte. </li><li> Su ve yumuşak gıda reklam lib sağlamak ve 48 saat sonrası ameliyat için analjezikler yönetmek. Omurilik dorsal hemiseksiyona sonra mesane bakımı için gerek yoktur. </li></ol>

<ol><li>Blackmore, M., Letourneau, P. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Changes+within+maturing+neurons+limit+axonal+regeneration+in+the+developing+spinal+cord%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurobiol%22%5BJournal%5D)">Changes within maturing neurons limit axonal regeneration in the developing spinal cord.</a> J. Neurobiol. 66 (4), 348(2006).</li>
<li>Blackmore, M. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Kruppel-like+Factor+7+engineered+for+transcriptional+activation+promotes+axon+regeneration+in+the+adult+corticospinal+tract%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci+U.S.A%22%5BJournal%5D)">Kruppel-like Factor 7 engineered for transcriptional activation promotes axon regeneration in the adult corticospinal tract.</a> Proc. Natl. Acad. Sci U.S.A. 109 (19), 7517(2012).</li>
<li>Carbajal, K. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Surgical+transplantation+of+mouse+neural+stem+cells+into+the+spinal+cords+of+mice+infected+with+neurotropic+mouse+hepatitis+virus%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Vis.+Exp%22%5BJournal%5D)">Surgical transplantation of mouse neural stem cells into the spinal cords of mice infected with neurotropic mouse hepatitis virus.</a> J. Vis. Exp. (53), e2834(2011).</li>
<li>Duhamel, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+lumbar+and+cervical+spinal+cord+blood+flow+measurements+by+arterial+spin+labeling%3A+sensitivity+optimization+and+first+application%5BTitle%5D)+AND+%22Magn.+Reson.+Med%22%5BJournal%5D)">Mouse lumbar and cervical spinal cord blood flow measurements by arterial spin labeling: sensitivity optimization and first application.</a> Magn. Reson. Med. 62 (2), 430(2009).</li>
<li>Hermanns, S., Reiprich, P., Muller, H. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+reliable+method+to+reduce+collagen+scar+formation+in+the+lesioned+rat+spinal+cord%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci.+Methods%22%5BJournal%5D)">A reliable method to reduce collagen scar formation in the lesioned rat spinal cord.</a> J. Neurosci. Methods. 110 (1-2), 141(2001).</li>
<li>Hill, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Anatomic+and+functional+outcomes+following+a+precise%2C+graded%2C+dorsal+laceration+spinal+cord+injury+in+C57BL%2F6+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurotrauma%22%5BJournal%5D)">Anatomic and functional outcomes following a precise, graded, dorsal laceration spinal cord injury in C57BL/6 mice.</a> J. Neurotrauma. 26 (1), 1(2009).</li>
<li>Iannotti, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dural+repair+reduces+connective+tissue+scar+invasion+and+cystic+cavity+formation+after+acute+spinal+cord+laceration+injury+in+adult+rats%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurotrauma%22%5BJournal%5D)">Dural repair reduces connective tissue scar invasion and cystic cavity formation after acute spinal cord laceration injury in adult rats.</a> J. Neurotrauma. 23 (6), 853(2006).</li>
<li>Inman, D., Guth, L., Steward, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genetic+influences+on+secondary+degeneration+and+wound+healing+following+spinal+cord+injury+in+various+strains+of+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Comp+Neurol%22%5BJournal%5D)">Genetic influences on secondary degeneration and wound healing following spinal cord injury in various strains of mice.</a> J. Comp Neurol. 451 (3), 225(2002).</li>
<li>Onifer, S. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adult+rat+forelimb+dysfunction+after+dorsal+cervical+spinal+cord+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Exp.+Neurol%22%5BJournal%5D)">Adult rat forelimb dysfunction after dorsal cervical spinal cord injury.</a> Exp. Neurol. 192 (1), 25(2005).</li>
<li>Ramer, M. S., Harper, G. P., Bradbury, E. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Progress+in+spinal+cord+research+-+a+refined+strategy+for+the+International+Spinal+Research+Trust%5BTitle%5D)+AND+%22Spinal+Cord%22%5BJournal%5D)">Progress in spinal cord research - a refined strategy for the International Spinal Research Trust.</a> Spinal Cord. 38 (8), 449(2000).</li>
<li>Seitz, A., Aglow, E., Heber-Katz, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Recovery+from+spinal+cord+injury%3A+a+new+transection+model+in+the+C57Bl%2F6+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci.+Res%22%5BJournal%5D)">Recovery from spinal cord injury: a new transection model in the C57Bl/6 mouse.</a> J. Neurosci. Res. 67 (3), 337(2002).</li>
<li>Sivasankaran, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((PKC+mediates+inhibitory+effects+of+myelin+and+chondroitin+sulfate+proteoglycans+on+axonal+regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">PKC mediates inhibitory effects of myelin and chondroitin sulfate proteoglycans on axonal regeneration.</a> Nat. Neurosci. 7 (3), 261(2004).</li>
<li>Yu, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inhibitor+of+DNA+binding+2+promotes+sensory+axonal+growth+after+SCI%5BTitle%5D)+AND+%22Exp.+Neurol%22%5BJournal%5D)">Inhibitor of DNA binding 2 promotes sensory axonal growth after SCI.</a> Exp. Neurol. 231 (1), 38(2011).</li>
<li>Zhang, Y. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dural+closure%2C+cord+approximation%2C+and+clot+removal%3A+enhancement+of+tissue+sparing+in+a+novel+laceration+spinal+cord+injury+model%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosurg%22%5BJournal%5D)">Dural closure, cord approximation, and clot removal: enhancement of tissue sparing in a novel laceration spinal cord injury model.</a> J. Neurosurg. 100, 343(2004).</li>
</ol>

<ol><li> Bazı yazarlar (YPZ, XMX, CBS) Louisville Darbeli System, Inc bir mali ilgi var </li><li> Yazarlar, Yi Ping Zhang, Lisa BE Shields ve Christopher B. Shields, Norton Sağlık, Louisville, KY çalışanlarıdır. Diğer yazarlar IN Indiana Üniversitesi, Indianapolis, tarafından istihdam edilmektedir. </li><li> Yazarlar bu makalede kullanılan reaktifler veya araçlarında herhangi bir şirket fon almadı. </li></ol>

Omuriliğe laserasyon yaralanmaları önce vertebra stabilizasyonu spinöz süreçleri tespit ile elde edilmiştir. Fare T1 ile C3 oynak kısa servikal spinöz süreçlerine kelepçeler servikal lordoz ve eki hem etkili omurga stabilizasyon önlemek. Ayrıca, manuel kontrol lezyonun 6 derinliği değişkenlik oluşturur önemli doku deformasyon neden altında kullanılan bir jilet veya microscissors kullanın. Bu özel yolların aksonal rejenerasyon incelenmiştir özellikle verilerin yanlış yol açabilir. Dorsal kortikospinal yolu tamamen lezyon sırasında nakledilmiştir değildi Örneğin, bağışladı dorsal kortikospinal akson yeniden akson olarak yanlış olabilir. Bu sorunlar tek bir seviyesi ve omuriliğin kesin lezyon de yönleriyle için tespit ile bir omurga stabilizasyon cihazı kullanılarak aşılabilir. Buna ek olarak, ah kullanılaraküksek frekans salınan bıçak komşu omurilik kırma veya contusing olmadan keskin bir kesi oluşturur. Bu yöntem, farenin 6 toraks omurilik laserasyon üretimi için müteakip değişiklikler ile birlikte, 9,12,14 sıçanlarda omurilik yaralanması yaralanmaları üretmek için kullanılmıştır. Mevcut iletişim olarak, fare güvenilir servikal laserasyon lezyonların oluşturma yöntemi açıklanmaktadır. Omurilik ön-arka çapı fare &lt;2 mm olduğu ölçüde, laserasyon lezyonun kesin derinliklerinde güvenilir bir deneysel model oluşturmada önemlidir. Lezyon derinliği minimal değişkenlik önemli ölçüde akson rejenerasyonu yanı sıra hacim ve davranış çalışmaları değerlendirmek deney sonuçları değiştirecektir. Biz kesme bıçağı yerini kontrol etmek için yüksek hassasiyetli mikro-sürücüler kullanılır, çünkü bu yöntemi kullanarak lezyon derinlik hassasiyeti ± 0.01 mm&#39;dir. Bu yöntem, en tutarsızlık azalttıbir yırtık SCI yaratma diğer modellerinde herent. Bu yöntem, kortikospinal sistem, rubrospinal sistem ve dorsal artan sistemi gibi omurilik dorsal yarısında bulunan uzun omurilik yolakların aksonal rejenerasyon inceleyerek özellikle yararlıdır. Bu yöntemle, bu lif yolları tamamen olması ve güvenilir transeksiyon olabilir. Bu bağlamda, veri yorumlama hataları böylece SCI üzerinde deneysel çalışmalar raporlama güvenilirliğini geliştirerek, en aza indirilir. Özetle, biz fare servikal spinal kord yaralanması yırtık in vivo modelinde bir tekrarlanabilir oluşturmak için yeni bir teknik tarif var. Bu teknik bir salınım bıçak kullanarak omurilik servikal yönleri ve yırtık tespit ile omurga stabilizasyon dayanmaktadır. Fareler 6 bir dorsal torasik omurilik kesisi modelinde Bu yöntemi kullanarak, biz laserasyon derinliği, histoloji ve arasında sıkı bir korelasyon gösterdidavranış kurtarma. Böyle bir teknik, ayrıca çok sayıda diğer laboratuar 2,12 ile güvenilir olduğu bulunmuştur.

Genetik olarak değiştirilmiş farelerin durumu SCI mekanizmalarında rol oynayan spesifik genlerin etkilerini belirlemek için güçlü bir araçtır. Yırtığı SCI bu yaralanma 8 sonra etkili bir tedavi sağlayabilir terapötik ajanlar veya moleküller incelemek için kullanılan önemli bir modeldir. Farelerde laserasyon yaralanma oluşturulması sırasında spinöz süreçleri Tespit nedeniyle spinal fiksasyon 5,11 bakımı ile ilgili ince ve kırılgan spinöz süreçleri kavrama zorluk için kesin olmayan. Sadece 0.2 mm (fare omurilik çapının% 10) laserasyon derinliği değişkenlik verilerin yanıltıcı yorumlanması neden olur. Omurilik kesisi lezyonun doğası ve kapsamı tam 10 tanımlanmalıdır. Bu sorunu gidermek için, biz vertebra stabilizasyonu oluşan yeni bir teknik geliştirdi ve Louisville Sakatlık Sistemi Aparatı bağlı fabrikasyon bıçak kullanmış (LISA) bir kesi SCI 7,14 üretmek. Bu yaralanma laserasyon sürecinde doku deformasyon kaçınılması keskin salınan bıçak kullanılarak oluşturuldu. Laserasyon derinliği laserasyon derinliğini kontrol mikro-sürücüleri kullanarak 0.01 mm doğrulukla hassas oldu. Kesme bıçakları istenen laserasyon kontur 9 oluşturmak için belirli şekil ve genişlikleri için-özel yapılır. Biz, 1), servikal omurga maruz kalma, 2&#39;nin yöntemi) karşılıklı bir yönüyle sabitleme cihazı kullanılarak omurga sabitleme tekniği ve titreşen bir bıçak kullanarak bir yırtılma servikal yaralanma 3) oluşturulmasını göstermektedir.

<table><tbody><tr><td>Fareler vertebral stabilizatör </td><td>Louisville Çarpma Sistemi</td><td></td><td>Servikal vertebrayı stabilize edin ve açığa çıkarın</td></tr><tr><td>LISA vibraknife </td><td>Louisville Çarpma Sistemi</td><td></td><td>Servikal omuriliğin yırtılma yaralanmasını üretin</td></tr><tr><td>Yaylı Makas</td><td>Güzel Bilim Araçları (ABD)</td><td>15013-12</td><td>Deri ve trapez kas insizyonu</td></tr><tr><td>Yaylı Makas</td><td>Güzel Bilim Araçları (ABD)</td><td>15023-10</td><td>Laminalardan ayrı kaslar</td></tr><tr><td>Yaylı Makas</td><td>Güzel Bilim Araçları (ABD)</td><td>15002-08</td><td>Dura</td></tr><tr><td>Graefe forseps </td> insizyonu <td>Güzel Bilim Araçları (ABD)</td><td>11154-10</td><td>Cildi geri çekin</td></tr><tr><td>Dumont #7 forseps </td><td>Güzel Bilim Araçları (ABD)</td><td>11274-20</td><td>Kas retraksiyonu (uç değiştirilmiş)(Şek. A)</td></tr><tr><td>Dumont SS forseps </td><td>Güzel Bilim Araçları (ABD)</td><td>11203-25</td><td>Omurun fiksasyonu (uç modifiye edilmiş)(Şekil B)</td></tr><tr><td>30G iğne </td><td>Becton Dickenson</td><td>305106</td><td>Dural açıklık </td></tr><tr><td>oluşturun 6-0 sütür </td><td>Ethicon</td><td>8806H</td><td>Kas ve fasyal katmanları kapatın </td></tr><tr><td>yara klipsi </td><td>Güzel Bilim Araçları (ABD)</td><td>12031-07</td><td>Cilt kapatma</td></tr><tr><td>Tribrom&#8211; thanol (Avertin)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>90710-10G</td><td>Anestezik ajan</td></tr><tr><td colspan="4">Louisville Impactor System, Inc, 210 E. Gray St., Suite 1102, Louisville, KY 40202, (502) 629-5510, E-posta: <a href="mailto:cbshields1@gmail.com">cbshields1@gmail.com</a> Güzel Bilim Araçları (ABD), Inc, 373-G Vintage Park Drive, Foster City, CA 94404-1139, (800) 521-2109, E-posta: <a href="mailto:info@finescience.com">info@finescience.com</a> Becton Dickenson, 1 Becton Drive, Franklin Lakes, NJ ABD 07417, (201) 847-6800 Ethicon, Route 22 West, Somerville, NJ 08876 1-877-ETHICON Sigma-Aldrich Corp. St. Louis, MO, ABD, 63178 (314) 771-5765, E-posta: cssorders@sial.com</td></tr><tr><td colspan="4">Şekil A modifiye edilmiş Dumont #7 forsepsleridir; B, modifiye edilmiş Dumont SS forsepsleridir.</td></tr></tbody></table>

farelerde kontrollü servikal yırtığı sakatlık

Controlled Cervical Laceration Injury in Mice

Genetiği değiştirilmiş farelerin kullanımı böyle bir omurilik yaralanması (SKY) gibi çeşitli nörolojik bozukluklar altında yatan moleküler mekanizmaları anlayışımız artırır. SCI bir laserasyon modeli üretmek için kullanılan serbest manuel kontrol genellikle ezmeyin veya kontüzyon bileşen ve bu nedenle, yeni bir teknik geliştirildi ile ilgili tutarsız yaralanmaları oluşturur. Servikal laserasyon SCI Bizim modeli) vertebra faset sabitleme, 2 ile) gelişmiş omurilik maruz servikal vertebra stabilizasyonu 1 dahil ederek serbest yöntemi ile doğal sorunların ortadan kalktığını ve 3) omurilik bir tekrarlanabilir laserasyon yaratılması salınan bir bıçak kullanarak ilişkili kontüzyon olmadan derinlemesine ± 0.01 mm doğruluk. Böyle bir neşter ya da makas serbest kullanımı gibi bir SCI laserasyon oluşturma standart yöntemlerle karşılaştırıldığında, bizim yöntem tutarlı bir lezyon üretti. Bu yöntem corticosp bir aksonal rejenerasyon çalışmaları için yararlıdırinal, rubrospinal ve dorsal artan yolları.

Hedef vertebra immobilizasyonu fare omurilik lezyonları hassas üreten büyük önem taşımaktadır. Bizim omurga stabilizasyon cihaz kısa spinöz süreçleri ve fare servikal ventral lordoz anatomik sorunları üstesinden gelir. Servikal vertebra de bizim servikal sabitleyici (Şekil 2) ile maruz kalmaktadır. Cihaz stabilize Bizim fare omurga servikal omurilik işlemleri için omurga hazırlamak için güvenilir bir tekniktir. LISA kullanarak lezyonun derinliği 0.01 mm 6,13 için doğrudur. Kesin laserasyon lezyon / doku arayüzü (Şekil 3) hiçbir kontüzyon neden olur. Dorsal hemiseksiyona lezyonların hassas bir 0.9 mm derinliğinde kesi sadece omurilik 1 patolojik bölümleri ile teyit her numunede merkezi kanal ötesine hangi aksonal rejenerasyon üzerine bir çalışmada C57BL / 6 farelerde gösterilmiştir. Bu hayvanların tüm hareket kurtarmakBu omurilik kesisi yaralanma sonrası ed. <img alt="Şekil 1" src="/files/ftp_upload/50030/50030fig1.jpg" /> Şekil 1,. (A) Lisa sahne üzerine yerleştirilen omurga sabitleyici fare. Titreşimli bıçak yırtılmış için omurilik doğru yönlendirilir. Mikro-sürücü kontrol sahne altında bulunan ve uygun site içinde fare konumlandırmak için tasarlanmıştır. Dikey mikro-sürücü lezyon derinliği kontrol ve devirme topuzu yırtık açılanma önlemek için omurilik yatay düzlem kontrol eder. Açma-kapama düğmesi titreşim motoru kontrol eder ve başka bir düğme ile genlik ayarlar. (B) 0.75 mm sırt hemiseksiyona laserasyon lezyon sağlam laminer kemerler altında kesti. <img alt="Şekil 2," src="/files/ftp_upload/50030/50030fig2.jpg" /> Şekil 2. </stRong&gt; (A), U-şekilli bir kanalı ve iki kol ve konektörler oluşan fare omurga sabitleyici. Fare servikal SCI için kullanılan C çukur ve göğüs SCI için T çukur yerleştirilir. (B) servikal lateral yönü altında silah yerleştirerek ve sonra başparmak kilitleme vidaları ile sabitlenmiş olduğunu. Dura kemik herhangi bir temizleme olmadan C5-6 lamina, C6-7, ve C7-T1 arasında maruz kalmaktadır. <img alt="Şekil 3," src="/files/ftp_upload/50030/50030fig3.jpg" /> Şekil 3. 0.5 derinliklerinde, 0.8, 1.1, ve sagital görünümü (leke kresil-mor ve eozin) gözlenen 1.4 mm Dört dorsal spinal kord laserasyon bu tekniği kullanarak hassas yüksek derecede tasvir.

Bir tekrarlanabilir oluşturmak için bir roman tekniği<em&gt; In vivo</emFare servikal spinal kord laserasyon hasarı&gt; modeli açıklanmıştır. Bu teknik ± 0.01 mm bir hassasiyetle salınan bir bıçak kullanarak omurilik servikal yönleri ve yırtık tespit ile omurga stabilizasyon dayanmaktadır.

Farelerde Kontrollü Servikal yırtığı Sakatlık

Use of genetically modified mice enhances our  understanding of molecular mechanisms underlying several neurological disorders  such as a spinal cord ...

Deneyin genel amacı, fare omuriliğinde tekrarlanabilir bir laserasyon lezyonu oluşturmaktır. Bu, hayvan Louisville yaralanma sistemi aparatına yerleştirildiğinde servikal laminanın posteriordan açığa çıkarılmasıyla gerçekleştirilir. İkinci adım olarak, fare omurgasının hedef vertebrasının fiksasyonu için özel olarak tasarlanmış bir stabilize edici cihaz kullanılır.Ardından, ligamentum flavum son bölümde çıkarıldıktan sonra lamine arklar arasındaki hedef omurilik belirlenir. 0,75 milimetre derinliğinde servikal dorsal hemiseksiyon, osilasyonlu bir bıçak ve mikro sürücü kullanılarak hassas bir şekilde oluşturulur. Laboratuvarda geliştirdiğimiz tekniğin temel avantajı, spinal kord laserasyon yaralanması oluşturmak için oldukça kesin bir yöntem sunmasıdır.Bu durum önemlidir çünkü şimdiye kadar kullanılan teknikler, yani makas veya skalpel, omurilik yaralanmaları için yetersiz ve hatalı yöntemler olduklarından çeşitli sorunlar yaratmıştır. Artık omuriliğin ezilmesini, parçalayıcı cihazdan uzaklaşarak yer değiştirmesini ve omurilik yaralanması sırasında meydana gelen aşırı kanamayı önleyecek yöntemlere sahibiz. Bu tekniği kullanarak, omurilik yaralanmasının derinliğinin görsel olarak tahmin edilmesi yönteminden kaçınan, oldukça hassas bir yöntem oluşturabilmekteyiz.Bu tekniği kullanarak, akson rejenerasyonunda ve omurilik yaralanmasının tedavisine yönelik çözümler bulunmasında doğası gereği önemli olabilecek laserasyon modelinde kullanılan deneysel omurilik yaralanması yöntemlerinde devrim yaratabileceğimizi düşünüyoruz. Bu prosedür, laboratuvarımızda nöroşirürjikal araştırma bilimcisi olan beyin cerrahı Jang tarafından gösterilmektedir. İşleme şu cerrahi aletleri steril ederek başlayın: iki ila üç çift pens, üç çift mikro makas, 30 gauge iğne, mikro URS sütür, iğne tutucu, deri klipsleri ve bir klips aplikatörü. Ardından omurga stabilizatörünü dezenfekte edin ve sonrasında fareyi ketamin, xylazine veya tri etanol karışımıyla intraperitonal olarak anesteziye alın.Ardından, farenin boyun bölgesindeki tüyleri tıraş edin. Cildi povidon iyot çözeltisi ve %70 alkol ile temizleyin. Daha sonra fareyi, önceden ısıtılmış bir ısıtma pedi bulunan ameliyat masasına transfer edin.Kornea kurumasını önlemek için gözlere oftalmik pomad uygulayın. Anestezi indüksiyonundan sonra, enseden alt servikal omurganın subkutan yağ tabakasına kadar posterior servikal orta hat cilt insizyonu yapın. Mikroskop altında, C2 seviyesinde trapezius kasları arasında orta hat cilt insizyonu yapın ve semispinalis capitis kaslarını lateral olarak retraksiyonla ekart edin.Ardından, güvenilir bir referans noktası olan T2 spinöz çıkıntıya kadar orta hat kas diseksiyonunu dikkatlice genişletin. Kasları T2 spinöz çıkıntıdan ayırın. Daha sonra T2 spinöz çıkıntının kartilajinöz kısmını çıkarın.Ardından, bir çift mikro makas kullanarak C4 ile T2 arasındaki her iki taraftaki paraspinal kasları lamina arklarından ayırarak dissekt edin. Disseksiyon spinöz çıkıntıların yanından başlar ve her iki lamina arkı üzerinden faset eklemlere kadar uzanır. Lateral fasetler açığa çıktıktan sonra, fareyi fare omurga stabilizatörünün U şeklindeki kanalına yerleştirin.Ardından, fare sabitleyicinin paslanmaz çelik kollarını her iki tarafta açıkta kalan fasetlerin altına yerleştirin. Kollar yerleştiğinde, omurgayı mikroskop altında sabitlemek için çelik kolların başparmak vidalarını sıkın. İnterlaminar boşluk arasındaki altta yatan durayı açığa çıkarmak için C beş ve C altı laminar arklar arasındaki ligamentum flavum'u kaldırın.Küçük bir dura tomisi oluşturmak için 30 gauge'lik bir iğne ve dura tomisini genişletmek için mikro makas kullanın. Omurilik artık kontrollü laserasyon lezyonuna tabi tutulmaya hazırdır. Bu prosedürde, omurga stabilize edicisini ve fareyi, mikro sürücüler tarafından konumu kontrol edilen bir bıçağın takılı olduğu Louisville yaralanma sistemi cihaz sahnesine yerleştirin.Osilatöre takılı 2,3 mm'lik düz bir bıçakla, C5 ile C6 lamina arasında dorsal HEMI seksiyon lezyonu gerçekleştirmek için üç hareket aralığına sahiptir. Düşük amplitüdler tam kord laserasyonunu zorlaştırabileceği için, osilasyon bıçağının amplitüdünü 0,5 mm olarak ayarlayın. Ardından, mikroskop altındaki bıçak vibratör anahtarını açın ve farenin spinal kordunu doğrudan titreşen bıçağın altına yerleştirin.Ardından, mikro sürücü kontrol kaydı ile sahneyi salınımlı bıçağa doğru yükseltin. Bıçağın omuriliğin dorsal venine hafifçe değdiği an sıfır noktası olarak belirlenir; omurilik lacerasyon derinliği bu sıfır noktasına göre ölçülür. Sonrasında, mikro sürücü kontrolü ile sahne konumunu yükseltin.Mikro sürücü düğmesinin 360 derecelik bir dönüşü, sahneyi 0,25 milimetre yükseltir. Bu nedenle, bıçak omuriliği kesmeye başladığında mikro sürücü düğmesini üç kez çevirerek 0,75 milimetrelik bir dorsal hemiseksiyon lezyonu oluşturulur; bu sırada cerrahi alan salin irrigasyonu ile yağlanır. Önceden belirlenmiş derinliğe ulaşıldığında, vibratör anahtarı kapatılır ve fareyi destekleyen sahne ile klembas kesici bıçaktan uzaklaştırılarak aşağı indirilir.Cerrahi bölgeyi salin ile irigasyon yaparak kanı temizleyin. Hemostaz genellikle bir dakika içinde gerçekleştiği için ardından bölgeyi pamuklu kulak çubuklarıyla kurulayın. Son olarak, fareyi omurga stabilize edicisinden çıkarın ve cildi paslanmaz çelikle kapatın.Michelle klipsleri. Servikal omurga, kollar lateral fasetlerin altına yerleştirilip ardından bu şekildeki gibi başparmak vidaları kilitlenerek sabitlenir; dura, herhangi bir kemik çıkarımı yapılmaksızın C5-C6, C6-C7 ve C7-T1 laminaları arasında açığa çıkarılır. Burada, 0.5, 0.8, 1.1 ve 1.4 milimetre derinlikteki dört dorsal spinal kord laserasyonunun sagital görünümleri gösterilmektedir.Bu tekniğin kullanımındaki yüksek hassasiyet derecesini göstermektedirler. Omurilik yaralanmalarının oluşturulmasında karşılaşılan sorunlardan biri, servikal omurganın stabilizasyonunun eksikliği olmuştur. Grubumuz tarafından geliştirilen omurga stabilize edicisini kullanarak, artık tamamen hareketsiz bir servikal omurga oluşturabilmekteyiz.Bu durum, tüm omurilik araştırması yöntemleri için omurilik kontüzyonu, omurilik enjeksiyonlarının yanı sıra omuriliğe hücre transplantasyonu kullanarak omurilik yaralanmasının geliştirilmesine olanak sağlayacaktır.

controlled-cervical-laceration-injury-in-mice

Research

JoVE Journal

Medicine

Tıp

Farelerde Deneysel miyokardiyal enfarktüs indüklemek için kullanılan cerrahi prosedür kalp ve akciğer sol ön yüzeyine görselleştirmek için üçüncü ve dördüncü kaburgalar arasındaki sol torakotomi ile başlar. Sol koroner arter ligasyonu olduğu, göğüs kapalı ve fare kendiliğinden kurtarmak için izin verilir.

Fare Koroner Arter Ligasyonu için Modifiye Tekniği

Kaynak: Gao, Z., et al. Sinir transferi cerrahisini geçmek için prespinal yol yoluyla doğrudan anastomozlu bir fare modeli. J. Vis. Uzm. (2021).Bu video, doğrudan servikal sinirin yeniden bağlanması yoluyla bir farede ön ayak hareketinin geri yüklenmesini göstermektedir. Sinir kökünde kesilen bir sağ C7 siniri nedeniyle sağ ön ayağı felçli bir fare ile başlar. Sol C7 siniri koparılır, prespinal yoldan sağa yönlendirilir ve sağ C7 siniri ile dikilir. Ameliyat bölgesi daha sonra temizlenir ve...

Bir farede ön ayak hareketliliğini eski haline getirmek için servikal sinirlerin doğrudan yeniden bağlanması

Biz tekrar elde edilebilirliğini arttırmak için, sol ön inen arter (LAD) üzerine ligasyon konumlandırma daha fazla netlik sağlar fare modellerinde miyokard infarktüsü (MI) simüle etmek için deneysel iskemi / reperfüzyon (I / R) hasarı ikna etmek için bir cerrahi yöntemi tanıtmak Farelerde MI deneyler.

Sol ön inen arter ligasyonu ile Miyokard İskemi-reperfüzyon Hasarı bir fare modeli

Fototromboz, omurilikte fokal iskemiyi indüklemek için minimal invaziv ve yüksek oranda tekrarlanabilir bir prosedürdür ve farelerde omurilik yaralanması modeli olarak hizmet eder.

Farelerde Omurilik Yaralanma Modeli Olarak Odak iskemisi Fototromboz kaynaklı

Yetişkin farelerde tutarlı bir kontüzif omurilik yaralanması üretebilen doku yer değiştirme tabanlı kontüzyon omurilik hasarı modelini sunuyoruz.

Farelerde Doku Yerinden Olma Esaslı Taşan Spinal Kord Yaralanması Modeli

Bu protokol, fare modelinde stabil traneksiyon tipi omurilik yaralanmasıinin indüksiyonu için hassas bir laminektominin nasıl oluşturulacak larını, omurilik yaralanması araştırmaları için en az ikincil hasarın nasıl yaratılabildiğini açıklamaktadır.

Farelerde Tam Traneksiyon Tipi Spinal Kord Yaralanması İndüksiyonu

Serebral kontüzyonun eşlik ettiği intraparankimal kanama ve nöroinflamasyon ciddi ikincil beyin hasarını tetikleyebilir. Bu protokol, araştırmacıların kanama, kontüzyon ve travma sonrası bağışıklık tepkilerini incelemelerine ve potansiyel terapötikleri keşfetmelerine olanak tanıyan fare kontrollü bir kortikal etki (CCI) modelini detaylandırır.

Travmatik Kanama, Konkontüzyon ve Nöroinflamasyon için Preklinik Kontrollü Kortikal Etki Modeli

Burada, basit dikişler ve bir kelepçe kullanarak geçici bilateral ortak karotis arter tıkanma ile retina iskemisinin bir fare modelini tarif ediyoruz. Bu model, kardiyovasküler anormalliklerin neden olduğu retina iskemisinin patolojik mekanizmalarını anlamak için yararlı olabilir.

Geçici Bilateral Ortak Karotid Arter Tıkanması sonucu İndüklenen İskemik Retina Yaralanmasının Murine Modeli

Minimal invaziv teknikler ve basit bir laboratuvar cihazı, deney hayvanlarına operatif hasarı azaltarak ve anatomik morfoloji bakımına izin vererek omurilik yaralanması modelinin tekrarlanabilirliğini arttırır. Yöntem değerlidir, çünkü güvenilir sonuçlar ve tekrarlanabilir prosedür, hastalık onarım mekanizmalarının araştırılmasını kolaylaştırır.

Minimal İnvaziv Bir Tekniğe Dayalı Bir Fare Kontüzyonu Omurilik Yaralanması Modelinin Oluşturulması

Farelerde merkezi kord sendromunu (CCS) simüle eden mevcut protokol, tekrarlanabilirliği artırmış ve deney hayvanlarında operasyon hasarını en aza indirerek anatomik yapıyı aşırı derecede bozmaktan kaçınmıştır. Bu çalışmadaki strateji, tutarlı sonuçlar üreterek yaralanma mekanizmalarının araştırılmasına izin verdiği için avantajlıdır.

C57BL/6J Farede Santral Kord Sendromu Modelinin Kurulması

Bu protokol, bir fare modelinde uterus hasarını indüklemek için bir prosedürü ve ardından sonraki bir hamilelik sırasında aşağı akış analizlerini açıklar.

Cerrahi Uterus Yaralanması ve Sonraki Gebelik Sonuçlarının Fare Modeli

Öğrenin farelerde servikal omurilik yırtığı yaralanması modeli oluşturma yöntemini. Titreşimli bıçak ve omurga sabitleme cihazı kullanılarak yüksek hassasiyetle tekrarlanabilir lezyonlar elde edilir.

Farelerde Kontrollü Servikal yırtığı Sakatlık

Daha fazla video keşfet