May 9th, 2013
Bir tekrarlanabilir oluşturmak için bir roman tekniği In vivo modeli açıklanmıştır. Bu teknik ± 0.01 mm bir hassasiyetle salınan bir bıçak kullanarak omurilik servikal yönleri ve yırtık tespit ile omurga stabilizasyon dayanmaktadır.
Deneyin genel amacı, fare omuriliğinin tekrarlanabilir bir laserasyon lezyonu oluşturmaktır. Bu, hayvan Louisville yaralanma sistemi aparatına yerleştirildiğinde servikal laminanın posteriordan açığa çıkarılmasıyla elde edilir. İkinci adım olarak, fare omurgasının hedef omurunun sabitlenmesi için özel olarak tasarlanmış bir dengeleyici cihaz kullanılır.
Daha sonra, laminer arklar arasındaki hedef omurilik, sonunda ligamentum flavum çıkarıldıktan sonra tanımlanır. 0.75 milimetre derinlikteki servikal dorsal hemi bölümü, salınımlı bir bıçak ve bir mikro sürücü kullanılarak hassas bir şekilde oluşturulur. Laboratuvarda geliştirdiğimiz tekniğin en büyük avantajı, yırtılmış bir omurilik yaralanması üretmek için çok hassas bir yöntem oluşturmasıdır.
Bu önemlidir, çünkü şimdiye kadar kullanılan makas veya neşter teknikleri, omurilik yaralanmasının eksik ve yanlış yöntemleri olan sorunlar yaratmıştır. Artık omuriliğin kontüzyonunu, omuriliğin yırtılma cihazından uzaklaşmasını ve omurilik yaralanmasında meydana gelen aşırı kanamayı önlemek için yöntemlerimiz var. Bu tekniği kullanarak, omurilik yaralanmasının derinliğinin görsel olarak tahmin edilmesinden kaçınan çok kesin bir yöntem oluşturabiliyoruz.
Bu tekniği kullanarak, akson rejenerasyonunda ve omurilik yaralanması için bir tedavi bulmanın yaratılmasında doğal olarak önemli olabilecek laserasyon modelinde kullanılan deneysel omurilik yaralanması yöntemlerinde devrim yaratabileceğimizi düşünüyoruz. Bu prosedürü göstermek, laboratuvarımızda nöroşirürji araştırma bilimcisi olan bir beyin cerrahı olan eing Jang'dır, Bu prosedüre aşağıdaki cerrahi aletleri, iki ila üç çift forseps, üç çift mikro makas, 30 gauge iğne, mikro URS sütür ve bir iğne tutucu cilt klipsleri ve bir klips aplikatörünü sterilize ederek başlayın. Daha sonra omurga stabilizatörünü dezenfekte edin, bundan sonra fareyi bir ketamin, ksilazin veya tri etanol intraperitoneal kokteyli ile uyuşturun.
Ardından, farenin boynundaki saçları tıraş edin. Cildi povidon iyot çözeltisi ve% 70 alkol ile temizleyin. Ardından fareyi bir ön ısıtma yastığı ile ameliyat masasına aktarın.
Kornea kurumasını önlemek için gözlere oftalmik merhem sürün. Anestezik indüksiyondan sonra, oputtan alt servikal omurganın deri altı yağ evcil hayvanına posterior servikal orta hat cilt insizyonu yapın. Mikroskop altında, C iki'deki trapez kasları arasında orta hat bir cilt kesisi yapın ve yarı finalist kişi kaslarını yanal olarak geri çekin.
Daha sonra, orta hat kas diseksiyonunu, güvenilir bir dönüm noktası olarak hizmet eden T iki spinöz prosese doğru uzatın. Kasları T iki spinöz süreçten ayırın. Daha sonra T iki spinöz işlemin kıkırdaklı kısmını çıkarın.
Daha sonra, bir çift mikro makas kullanarak laminer kemerlerdeki paraspinal kasları C dörtten T ikiye kadar bilateral olarak inceleyin. Dikenli süreçlere bitişik başlar ve her iki laminer kemer üzerinden faset eklemlerine kadar uzanır. Yan yüzeyler ortaya çıktıktan sonra, fareyi fare omurga sabitleyicisinin U şeklindeki kanalına yerleştirin.
Ardından, fare sabitleyicinin paslanmaz çelik kollarını açıkta kalan yüzeylerin altına iki taraflı olarak yerleştirin. Kollar yerine oturduktan sonra, omurgayı mikroskop altında hareketsiz hale getirmek için çelik kolların kelebek vidalarını sıkın. Interlaminar boşluk arasındaki alttaki durayı ortaya çıkarmak için C beş ve C altı laminer kemer arasındaki ligamentum flamını çıkarın.
Küçük bir dur otomi oluşturmak için 30 gauge bir iğne ve dur otomiyi genişletmek için mikro makas kullanın. Omurilik artık kontrollü laserasyon lezyonuna girmeye hazırdır. Bu prosedürde, omurga stabilizatörünü ve fareyi, mikro sürücüler tarafından kontrol edilen konumu ile bir bıçağın takıldığı Louisville yaralanma sistemi aparatı aşamasına yerleştirin.
Osilatöre bağlı 2.3 milimetrelik düz bir bıçak ile C beş ila altı lamina arasında bir dorsal HEMI kesit lezyonu gerçekleştirmek için üç hareket aralığı yeteneğine sahiptir. Salınımlı bıçağın genliğini 0,5 milimetreye ayarlayın, çünkü daha düşük genlikler tam kordon yırtılmasının kolaylığını azaltabilir. Ardından mikroskop altında bıçak vibratör anahtarını açın, farenin omuriliğini doğrudan titreşimli bıçağın altına yerleştirin.
Ardından, mikro sürücü kontrol kaydı ile sahneyi salınımlı bıçağa doğru yükseltin. Bıçak omuriliğin dorsal venine zar zor temas ettiğinde sıfır pozisyonu, omurilik yırtılmasının derinliği sıfır pozisyonuna göre ölçülür. Ardından mikro sürücü kontrolü ile sahne konumunu yükseltin.
Mikro sürücü düğmesinin 360 derece döndürülmesi, sahneyi 0,25 milimetre yükseltir. Böylece, bıçak omuriliği yırtmaya başladığında mikro sürücü topuzunun üç kez döndürülmesiyle 0.75 milimetrelik bir dorsal hemi kesit lezyonu oluşturulur ve cerrahi alanı tuzlu su irrigasyonu ile yağlar. Önceden belirlenen derinliğe ulaşıldığında, vibratör anahtarını kapatın, fareyi destekleyen kademeyi ve cl'yi indirin.amp kesme bıçağından.
Ameliyat bölgesi üzerinde tuzlu su ile sulama yaparak kanı alın. Daha sonra bölgeyi pamuklu Q uçları ile kurulayın, çünkü hemostaz genellikle bir dakika içinde gerçekleşir. Sonunda, fareyi omurga sabitleyiciden çıkarın ve cildi paslanmaz çelikle kapatın.
Michelle klipleri. Servikal omurga, kolların yan fasetlerin altına yerleştirilmesi ve ardından bu şekilde gösterildiği gibi kelebek vidaların kilitlenmesiyle sabitlenir, dura, herhangi bir kemik çıkarılmadan C beş ila altı C, altı ila yedi ve C yedi ila T bir laminat arasına maruz kalır. Burada 0.5, 0.8, 1.1 ve 1.4 milimetre derinliklerde dört dorsal omurilik yırtılmasının sagital görünümleri gösterilmektedir.
Bu tekniği kullanarak yüksek derecede hassasiyet gösterirler. Omurilik yaralanmalarının yaratılmasında var olan sorunlardan biri, servikal omurganın stabilizasyon eksikliği olmuştur. Grubumuz tarafından geliştirilen omurga stabilizatörünü kullanarak artık mutlak hareketsiz bir servikal omurga oluşturabiliyoruz.
Bu, omurilik kontüzyonu, omurilik enjeksiyonları ve ayrıca tüm omurilik araştırma yöntemleri için omuriliğe hücre nakli kullanılarak omurilik yaralanmasının arttırılmasına izin verecektir.
Bu makale, farelerde servikal omurilik yırtılması yaralanması için tekrarlanabilir bir in vivo modeli oluşturmak için yeni bir tekniği açıklamaktadır. Yöntem, omurga stabilizasyonu ve titreşimli bir bıçak kullanarak hassas yırtılmayı içerir ve yüksek doğruluk elde eder.
This technique addresses a critical bottleneck in preclinical spinal cord injury research by enabling reproducible, precise laceration lesions in mice. By eliminating variability from manual methods, it enhances target validation and mechanistic de-risking in axon regeneration studies. The improved lesion consistency supports predictive confidence in therapeutic candidate evaluation.
The method integrates into the discovery continuum from target validation through lead identification to preclinical efficacy testing in spinal cord injury models.