Name: İskelet Kası İzometrik ve Eksantrik Kuvvet Oluşturma Değerlendirme İzole Müsküler Distrofisi arasında murin Models (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2013-01-31T12:00:00.000+00:00
Duration: 14 min 10 s
Description: Öğrenin, farelerden izole edilmiş iskelet kaslarının mekanik özelliklerini izometrik ve eksantrik kasılmalarla nasıl değerlendireceğinizi. Bu yöntem, distrofik ve sağlıklı kas modelleri arasındaki farkları karşılaştırarak kas fonksiyonunu analiz etmenizi sağlar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Bu çalışma Paul D. Wellstone Kooperatif Araştırma Merkezi (AR052646) tarafından desteklenmiştir.

Tüm prosedürler Pennsylvania IACUC Üniversitesi tarafından gözden geçirilmiş ve onaylanmıştır. 1. EDL Diseksiyon ve Hazırlama (yaklaşık 30 dk) <ol><li> Onlar işlem sırasında herhangi bir ağrı veya sıkıntı yaşamaya emin olmak için fareler uyuştur, ama iyi dolaşımını kaslar tarafından kalmasını oksijenli. Biz rutin IP üzerinden enjekte Ketamin / xylazine kokteyl (100/10 mg / kg) kullanın. Anestezi Cerrahi düzlemi pedalı veya palpedral çekilmesi refleksler, veya kulak seğirme yanıtı eksikliği tam yokluğu ile belirlenir. </li><li> Tıbbi bant kullanarak arka ayaklarında hareketsiz, ve bu bölgenin kasları ortaya çıkarmak için ön alt bacak ve deri kaldırmak. Düzenli aralıklarla PBS uygulama ile kas nemli tutun. </li><li> Diseksiyon kapsamında, EDL kasının proksimal tendon ortaya koymak için diz lateral küçük bir kesi yapmak. İşte bu bölgede iki tendon, ve her ikisi de yeniden sağlamak için kesilmelidirEDL moval. </li><li> Medial ayak bileği, meta tarsals boyunca uzanan EDL distal tendon, açığa TA kas tendon kesti. EDL altında kesmek veya dokunmamaya dikkat ederek, yol TA kas dışarı doğru kaldırın. , EDL distal tendon dön kırt her biri ve daha sonra tendon kavrama, ayak bileği ile bunları çizmek, yavaşça bacak geri kalanı uzak EDL çekin. Serbestçe proksimal ucundan serbest, ama değilse, tendonu kesilmiş olduğundan emin olmak için lateral insizyon dönmesi gerekir. Soğutulmuş oksijenli Ringers dolu bir diseksiyon çanak kas ve yer çıkarın. In vivo olarak bulunan uzunluğu yaklaşık olarak dinlenme süresi, de tendon ile kas Pim. Kas diseksiyon işaretçilerine çekerek ise uzunluğu kas çanak sarkık olduğunda çok kısa ve çok uzun. </li><li> Servikal dislokasyon ile kas çıkarılması hemen ardından fareyi Euthanize. </li><li> On sütür Tiemümkün olduğu kadar yakın kas, ancak kas dokunmadan değil Dons. Sütürler kullanılarak yaklaşık istirahat boyunda kas Pin. </li></ol> 2. Diyafram Diseksiyon ve Hazırlama (yaklaşık 30 dk) <ol><li> Aynı fare hem diseksiyonları maruz kalıyorsa, anestezi altında servikal dislokasyon ile önce bu prosedüre fareler Euthanize veya CO 2 ile servikal dislokasyon ile teyit izledi. </li><li> Karın ve göğüs boşluğuna maruz deride bir kesi olun. Karın boşluğu açın ve sadece kaburga altında vücut duvarı kesti. Kemik makası kullanarak, ve omurga ile diyafram kaburga çizgi izleyen tüm göğüs kafesine çepeçevre kesilir ekleme, ve eşik üstü başlangıç. Diyafram kolayca çıkarılabilir, böylece diyaframın merkezine doğru akan kan damarları kesin. </li><li> Fare diyafram ve oksijenli Ringers dolu bir diseksiyon çanak yer çıkarın. Yavaşça diap ajitasyonkanı yıkamak için çanak hragm. Gerektiğinde Yenile çözümü Ringers. </li><li> Hemidiaphragms yanal bir merkez kısmı içinde liflerin yönelim boyunca merkezi tendondan kaburga diyafram ince bir şerit kes. Şerit geniş 2-4 mm arasında olmalıdır. Kemik makas kullanılarak, diyafram şerit her iki tarafında kaburga, yaklaşık 1-2 mm çıkıntı bırakarak, şerit her iki tarafında kaburga kesti. </li><li> Merkezi tendon sütürleri bağla. Yanal olarak çıkıntılı kaburga uçlarının her bir dikiş için bağla ve daha sonra bir büyük döngü yapmak için birlikte bu bağlar. </li><li> İki şerit herhangi bir diyafram (her iki tarafta birer) dan elde edilebilir. </li></ol> 3. Mekanik Bath Montaj Kaslar <ol><li> Sütürler kavrayın ve bir ucunda bir rijit yazılan kas eklemek için kullanabilirsiniz ve diğer ucunda bir kuvvet dönüştürücü için. </li><li> Kas gevşek değil, gergin olmadığından emin olmak için uzunluğunu ayarlayın. İyi bir yaklaşıklık dinlenme musc olduğunu1.4 gibi le uzunluğu - 1.5. </li><li> Banyo ° C testi için kas kararlılık uzatmak için 22 tutulur oksijenli Ringers çözeltisi ile doldurulur. O kas sıcaklığı 22 ° C&#39;ye dengelenmiş yani Kaslar önceki fonksiyonel test için bu banyosunda 5 dakika dinlenmek gerekir </li></ol> 4. İzometrik Kasılmaları <ol><li> Supramaksimal Uyarım Koşullar oluşturulması. Bir kas banyosuna yerleştirilir sonra, bir seğirme oluşturmak için tek 0,5 msn stimülasyon darbeleri kullanın ve kuvvet çıktı izlemek. Kuvveti maksimum ama istikrarlı attains kadar yavaş yavaş akımı artar. Kalan deneyler için bu seviyenin% 10 daha fazla akım artırın. </li><li> Optimum Uzunluk Kurmak. Maksimal kuvvet elde edilinceye kadar izometrik kasılan uyaranları kullanarak, yavaş yavaş kas uzunluğunu ayarlayın. Her kasılma arasındaki kas ~ 10 sn dinlendirin. Seyirme kuvvet maksimum olduğunda en iyi kas uzunluğu (L o) elde edilir. Rekor kas boyu (uzunluğuaranın myotendinous EDL için kavşaklar ve merkezi tendon myotendinous kavşak ve Vernier kaliper yardımıyla kaburga kas ekleme) arasında. </li><li> Maksimum İzometrik Tetanik Kuvvetleri. Supramaksimal stimulasyon 0.5 msn darbe bir dizi ve füzyon frekansı (frekans-kuvvet ilişkisi (örneğin Ref platosundan azından 500 milisaniye süreyle L o ayarlanmış kas Canlandıracak:. 8) EDL kasları için yayla genellikle 120 Hz ve 100 Hz ile diyafram kasları için elde. her kas için stimülasyon nöbetleri arasında 5 dk dinlenme süreleri ile ilgili frekansta, 3 kez teşvik. </li></ol> 5. Eksantrik Kasılmaları <ol><li> Kas izometrik ve eksantrik kasılmalar performans aras 5 dakika dinlenmeye bırakın. </li><li> Nihai 200 msn uyarım içinde bir% 10 L O stretch (0.5 L o bir esneme oran ardından ilk 500 milisaniye için, izometrik olarak 80 Hz kaslarını/ Sn). </li><li> Eksantrik kasılmalar istenilen sayıda arasında 5 dakikalık molalar ile stimülasyon desen tekrarlayın. </li><li> Streç öncesinde süre her kasılma için kuvveti ölçün. Ilk ve son kontraksiyon arasında yürürlükte damla hesaplayın. </li></ol> 6. Aparat gelen kas Kaldırma <ol><li> Transdüser kas sökmek için izin ve nakletmek ve Ringers bir diseksiyon çanak geri döndürmek için kas uzunluğu kısaltın. </li><li> Kaslardan sütürler çıkarın. </li><li> EDL kasının için, daha sonra (örneğin donma, sabitleme, vb) daha sonraki işleme önce, tartmak, iki kas bekletin. Bu enine kesit alanı, ve spesifik kuvvet hesaplanması için önemli olacaktır. </li><li> Diyafram kası için,% 0,1 procion turuncu, 15-20 dk bir membran geçirgenliği olmayan boya bekletilebilir. Bu diseksiyon hasarın bir göstergesi sağlayacaktır. </li><li> Uzakta kemik yerleştirilmesine bağlı kas teşrih yanı sıra, yüzderal tendon. Bu, kas doğru bir ağırlık sağlamak için gereklidir. Tartım ve sonraki hazırlanmasından önce yukarıda kurutun. </li><li> Kesitsel Alan (CSA) Çapraz hesaplayın: CSA (mm 2) = kütle (mg) / [(ğ mm) * (L / L o) * (1.06 mg / mm 3)], L / L o elyaf burada kas uzunluk oranı (EDS için 0.45, diyafram için 1.0), 5 ve 1.06 kas yoğunluğudur. </li></ol>

<ol><li>Barton, E. R., Khurana, T. S., Lynch, G. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Measuring+isometric+force+of+isolated+mouse+muscles+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22TREAT-NMD%22%5BJournal%5D)">Measuring isometric force of isolated mouse muscles in vitro.</a> TREAT-NMD. , (2008).</li>
<li>Barton, E. R., Morris, L., Musaro, A., Rosenthal, N., Sweeney, H. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Muscle-specific+expression+of+insulin-like+growth+factor+I+counters+muscle+decline+in+mdx+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Muscle-specific expression of insulin-like growth factor I counters muscle decline in mdx mice.</a> J. Cell Biol. 157, 137-148 (2002).</li>
<li>Barton, E. R., Morris, L., Kawana, M., Bish, L. T., Toursel, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Systemic+administration+of+L-arginine+benefits+mdx+skeletal+muscle+function%5BTitle%5D)+AND+%22Muscle+Nerve%22%5BJournal%5D)">Systemic administration of L-arginine benefits mdx skeletal muscle function.</a> Muscle Nerve. 32, 751-760 (2005).</li>
<li>Barton, E. R., Wang, B. J., Brisson, B. K., Sweeney, H. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Diaphragm+displays+early+and+progressive+functional+deficits+in+dysferlin-deficient+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Muscle+Nerve%22%5BJournal%5D)">Diaphragm displays early and progressive functional deficits in dysferlin-deficient mice.</a> Muscle Nerve. 42 (1), 22-229 (2010).</li>
<li>Brooks, S. V., Faulkner, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Contractile+properties+of+skeletal+muscles+from+young%2C+adult+and+aged+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Contractile properties of skeletal muscles from young, adult and aged mice.</a> J. Physiol. 404, 71-82 (1988).</li>
<li>Harcourt, L. J., Schertzer, J. D., Ryall, J. G., Lynch, G. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Low+dose+formoterol+administration+improves+muscle+function+in+dystrophic+mdx+mice+without+increasing+fatigue%5BTitle%5D)+AND+%22Neuromuscul.+Disord%22%5BJournal%5D)">Low dose formoterol administration improves muscle function in dystrophic mdx mice without increasing fatigue.</a> Neuromuscul. Disord. 17 (1), 47-55 (2007).</li>
<li>Lynch, G. S., Hinkle, R. T., Chamberlain, J. S., Brooks, S. V., Faulkner, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Force+and+power+output+of+fast+and+slow+skeletal+muscles+from+mdx+mice+6-28+months+old%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Force and power output of fast and slow skeletal muscles from mdx mice 6-28 months old.</a> J. Physiol. 535 (Pt. 2), 591-600 (2001).</li>
<li>Oishi, P. E., Cholsiripunlert, S., Gong, W., Baker, A. J., Bernstein, H. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Myo-mechanical+Analysis+of+Isolated+Skeletal+Muscle%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Vis.+Exp%22%5BJournal%5D)">Myo-mechanical Analysis of Isolated Skeletal Muscle.</a> J. Vis. Exp. (48), e2582(2011).</li>
<li>Petrof, B. J., Shrager, J. B., Stedman, H. H., Kelly, A. M., Sweeney, H. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dystrophin+protects+the+sarcolemma+from+stresses+developed+during+muscle+contraction%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci.+U.S.A%22%5BJournal%5D)">Dystrophin protects the sarcolemma from stresses developed during muscle contraction.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 90, 3710-3714 (1993).</li>
<li>Salomonsson, S., Grundtman, C., Zhang, S. J., Lanner, J. T., Li, C., Katz, A., Wedderburn, L. R., Nagaraju, K., Lundberg, I. E., Westerblad, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Upregulation+of+MHC+class+I+in+transgenic+mice+results+in+reduced+force-generating+capacity+in+slow-twitch+muscle%5BTitle%5D)+AND+%22Muscle+Nerve%22%5BJournal%5D)">Upregulation of MHC class I in transgenic mice results in reduced force-generating capacity in slow-twitch muscle.</a> Muscle Nerve. 39 (5), 674-6782 (2009).</li>
<li>Stedman, H. H., Sweeney, H. L., Shrager, J. B., Maguire, H. C., Panettieri, R. A., Petrof, B., Narusawa, M., Leferovich, J. M., Sladky, J. T., Kelly, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+mdx+mouse+diaphragm+reproduces+the+degenerative+changes+of+Duchenne+muscular+dystrophy%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">The mdx mouse diaphragm reproduces the degenerative changes of Duchenne muscular dystrophy.</a> Nature. 352, 536-539 (1991).</li>
<li>Welch, E. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((PTC124+targets+genetic+disorders+caused+by+nonsense+mutations%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">PTC124 targets genetic disorders caused by nonsense mutations.</a> Nature. 447 (7140), 87-91 (2007).</li>
</ol>

Bu makalenin Üretim ve Serbest Giriş Aurora Scientific tarafından desteklenmektedir.

EDL ve diyafram - Bu makalenin amacı farelerin iki kasları izole kas fonksiyonu gerçekleştirmek için rehberlik sağlamaktır. Bu kasların değerlendirilmesi kas hastalığı için tedavi adaylar yararlı olup olmadığı konusunda bir fikir verebilir. Her iki kas için sağlam veri elde en önemli faktör temiz bir diseksiyon olduğunu. Bu nedenle, uygulama ve ilk izolasyon adım mükemmelleştirmek fonksiyonel test geçmeden önce esastır. Buna ek olarak, normal kas için işlevsel ölçütler oluşturma öncesinde distrofik kas ile karşılaştırma yapma, ya da tedaviler arasındaki kritik önem taşımaktadır. Bu çalışmanın sonuçları deney yapan kişinin yeteneği kazandırdığı yüksek değişkenlik tabi olmadıklarını temin edecektir. Bir Membran geçirgenliği olmayan boya kullanımı böyle bir boya en hasarlı lifleri işaretler içeren bir solüsyona herhangi bir kas kuluçka, diseksiyon hazırlık optimize yardımcı olabilir, ve d bir göstergesi olarak hizmet verebilirissection başarı. Kas hasar liflerinin sayısını en aza indirmek ölçüm optimize etmeye yardımcı olacaktır. Disseksiyon zarar lifler eksentrik sonucu tahrip olan çok daha parlak flüorışı, ve aynı zamanda boya mekanik işlemi sırasında kullanılır ise, yani bir hasar iki tür arasında ayırt etmek için boya yoğunluğunu kullanılabilir. Diyafram şeritlerin Diseksiyon hemen hemen her zaman liflerin uzunluğu boyunca kesme, kaçınılmaz olarak bir imha, çünkü fiber zarar sahip olacaktır. Boya alımı bu hasarlı lifleri güçlü olduğunu ve bu normal hazırlık dış kenarları ile sınırlıdır. Ortalama olarak, kas şeridinin her iki yanında da genişlik ~ 3 fiberler (~ 120 um) olan bozuk bir lif bandı görüyoruz. Hasarlı bandı kas% 15&#39;den fazla oluşuyorsa, o zaman veri atılır. Diyafram hazırlığı da işlevsel önlemler için optimum boyut kısıtlamaları vardır. Bulduk ki d parçalarınımerkezi tendon kravat tek bir noktadan olduğu için 5 mm daha geniştir iaphragm, kendilerini katlayın başlar. Bu sonuç olarak hazırlanmasında bir spesifik kuvvet azalmıştır. Ayrıca, disseksiyon sırasında zarar liflerin sayısının toplam lif sayısının daha büyük bir kısmını oluşturan çünkü dar şeritlere ayrıca olduğuna inanıyoruz düşük bir spesifik kuvvet, sahip olduğunu bulduk. Örneğin, her iki tarafta 0.1 mm bozuksa, o, zorla katkıda bulunmaz kas hazırlık% 5 (2x0.1 mm / 4 mm şerit) iken şerit sonra sadece 1 mm, 20 ise kas hazırlık% hasarlı. Böylece, hasarlı bölgenin genişliğini hem de tüm hazırlık enine hem de kontrol etmek için önemli bir faktördür. Maksimum izometrik gerilim ölçümleri kas tüm kas lifleri uyarılır gerektirir. Bir işlev aygıtın bileşenlerinin büyük farklılıklar olmadığı için, bu tek tek her bir grubu için tespit edilmelidirkadar. Örneğin, boyut veya banyo stimülatörü kullanılarak tip uyarma yoğunluğunu etkileyebilir. Twitch stimülasyon supramaksimal uyarım koşulları belirlemek için makul bir yoludur. Bu, belirli bir kurulum ve kas için kurulmuş sonra, daha sonraki çalışmalar için kullanılabilir. Buna karşın, verilen herhangi bir kas optimum uzunluğu yukarıda tarif edilen iteratif işlem kullanılarak her bir hazırlık için ölçülen gerekmektedir. Bu, kalın ve ince filament örtüşme optimum ve maksimum potansiyel kuvvet oluşturma kapasitesi ölçülür sağlar. Alternatif prosedürler kas çizikleri ile ilişkili kırınım desenleri güvenebilirsiniz, ama bu burada açıklanmayan ek donanım gerektirir. Biz rutin bu alanda diğer araştırmacılar tarafından kullanılan bu parametre orta menzilli düşüyor 500 msn stimülasyon süreler kullanın. Bu kasılma sırasında kas bazı yorgunluğa sebep olabilir, ancak bu açıktırmaksimal kuvvet üretimi bir &quot;sarkma&quot; tarafından, kendi içinde bu bilgilendirici olabilir. Örneğin, yorgunluk bir fark dolayısıyla aktif kasılma sırasında yürürlükte sarkma iyileştirme için bir dizin olarak hizmet edebilir, bu hedef kalsiyum taşıma dahil tedavileri farklı tipleri ile elde edilebilir. Alternatif olarak, güç kaybı tendonları üzerinde dikişler yeterince sıkı olmadığını göstermektedir, ve onlar kasılması sırasında kayma olduğunu olabilir. Kas banyo kaldırılmış olması ve bu oluşursa dikişlerle yeniden bağlanmalıdır. Ayrıca preparat kararlılık değerlendirmesine olanak sağlar 3 tetanik kasılmalar, bir dizi kullanım. Yine, dikiş fişleri yeniden bağlama sütür gerektiren, kasılmalar arasında güç kaybına yol açacak. Büyük kaslar da protokol esnasında güç kayıplarına yol açan, anoksik çekirdek oluşturabilir. Kas boyutu izole kas fonksiyon testleri gerçekleştirmek için sınırlayıcı faktör, nerede 20 mg&#39;ın kitleler ile EDL kasları her kontraktürü ile yürürlüğe kaybetmekğinde ve banyo superfusion tarafından desteklenen edilemez. Onlar banyoda uzun süre sürdürebilmesi için yeterince ince olduğu için Diyafram şeritler aynı komplikasyonlar olmaz. Diğer kasları yaygın olarak kullanılan soleus dahil izole kas fonksiyonu için kullanılan, ancak burada açıklanan değildir olabilir. Aynı prosedürlerin çoğu hazırlanması ve fonksiyonel test açısından soleus için kabul edilebilir. Ancak, ana farklar stimülasyon frekansı vardır ve eksantrik kasılmalar için parametreleri. Fonksiyonu için soleus kullanımı diğer iki kas tamamlar, ve bu yüzden, distrofik fareler 7 4 değerlendirmek için bir &quot;standart paket&quot; bir parçası olarak kabul edilmelidir. Eksantrik kasılma kasılma kırılganlığının bir göstergesi sağlar ve bir protokol kullanmak için önemli olduğunu yabani-tip hayvanların kaslarında kuvvet mütevazı kaybı ve kuvvet önemli bir kaybına nedenTedavi edilmeyen distrofik kas karşılaştırmalar için geniş bir dinamik aralık kalmayacak şekilde. Normal kaslarda herhangi bir kuvvet kaybı eksikliği eksentrik çok hafif olduğunu göstermektedir, ve etkin olmayan tedaviler ve gerçekten yararlı olduğunu ayırt etmek yeterli olmayacaktır. Ancak, eksentrik tabi normal bir kas kuvvet dramatik kaybı hastalığı ile ilişkili farklılıkların didiklemek için çok büyük olabilir. EDL ve diyafram Bizim protokol 10% uzunluğu değişimi üretmek için 0.5 Lo / sn streç hızını kullanır. Biz genellikle 5 eksantrik kasılmalar, normal kas kuvvet küçük bir kaybı ve distrofik kas kuvveti önemli bir kaybına neden gerçekleştirmek. Elbette, bu parametrelerin her hastalıklı ve sağlıklı kas arasındaki farklar, aynı zamanda mutasyon belirli bir tip üzerine etkisi ile ayırt etmek için toplam uzunluk değişimi, germe oranı, ya da eksantrik kasılmaları sayısını artırmak için değiştirilebilir ya da treatment birini okuyor. Sürece normal ve hastalıklı kasları arasında belirgin bir fark olduğu, daha sonra tedavileri açısından ulaşmak için bir altın standart yoktur. Özetle, bu protokol izometrik ve eksantrik kasılmalar gerçekleştirmek için yönergeler kurar, ve umarım sizin laboratuarında bu tekniği kurarken önlemek için potansiyel tuzaklar tanımlar.

Kas fonksiyonunun measurements kas patoloji yanı sıra, bu dokuda fizyolojik altında yatan mekanizmaların tayin etmek için potansiyel tedavi değerlendirme katkıda bulunur. Kas hastalığı için, fare modellerinin kullanımı ve potansiyel tedavi tasarım ve test içine bu bilgiyi genişletmek için genotip ve fenotip arasındaki bağlantıları anlamak için merkezi bir bileşeni haline gelmiştir. Müsküler distrofi, özellikle de, bu maddeler değerlendirmek ve hastalardaki denemeler için ileriye doğru hareket ettirmek için gerekli ön-klinik veri bağlantısı kurmak için fareler yararlanmıştır. Bir sık ​​sonuç ölçüsü çalışmalar çeşitli uygulanabilir güç belirlemek için izole kas fonksiyonunu kullanır. Başka bir önlem eksantrik veya uzatma kullanımı, kasılmalar Duchenne müsküler distrofi eksiktir kas zarı bütünlüğü değişiklikler, ve bu hastalık (mdx) için fare modelini belirlemek için. Bu nedenle, bu tür measurem için gereklidirveliler hassas ve tekrarlanabilir. Fare ekstansör digitorum longus (EDL) kas üniform elyaf oryantasyonu ve kati tendonlar 2, 5, 6, 10, 12 gibi ideal geometrisi ve boyutu nedeniyle izole kas fonksiyonu için yaygın olarak kullanılır olmuştur. EDS, kaslar izometrik fonksiyonel ölçümleri için yöntemler Treat-NMD SOP 1 içinde bir önceki Jüpiter yayın 8, yanı sıra içinde tarif edilmiştir. Biz izometrik ve eksantrik kasılmalar hem dahil etmek için bu yöntemlerin tanımı genişletmiştir. Hastalığın karakteristik dejenerasyonu / rejenerasyon ve azalmış güç çıkışı heighted döngüleri de dahil olmak üzere, EDL belirgindir. Fare diyafram fare 11 diğer kaslara oranla müsküler distrofi en hızlı patolojik ilerlemesi sergiler. 6 aylıktan göre, kümülatif fibrozis kas yaklaşık% 50 oluşturmaktadır. Önemli ölçüde bozuyor Bu sonuçd kuvvet çıkışı 11. Bu nedenle, fibrotik gitmesini engellemek için terapötik maddeler olarak etkili bir diyafram değerlendirilebilir. Kas distrofin kaybı tüm kasları 9 arttı kırılganlık ve artan kasılma hasara yol açar. Duchenne müsküler distrofi Bu nedenle birçok tedaviler distrofin değiştirme içindir. Gibi, bu stratejileri değerlendirmek için gerekli hale geldi bir deneyde de kasılma hasarı 2, 3, 4 bir distrofik kas korumak için belirli bir strateji olmuştur yarar ne olduğunu belirlemek gibi, normal ve distrofik kas ayırabileceğini eksentrik, bir 12. Bu işlem / kayıt uzunluğu ve kuvvet veya kuvvet dönüştürücü itibaren hızla ayrı boy ayarlama yöntemi modüle olabilir ya bir çift modlu servo motor gerektirir.

<table border="1"><tbody><tr><td> Reaktif / Malzeme Adı </td><td> Şirket </td><td> Katalog Numarası </td><td> Yorumlar </td></tr><tr><td> in vitro kas Test Sistemi içinde </td><td> Aurora Bilimsel </td><td> 1200A </td><td></td></tr><tr><td> Mikroskop Diseksiyon </td><td> Leica </td><td> MZ6 </td><td></td></tr><tr><td> ACE ışık kaynağı </td><td> Schott-Fostec </td><td> A20500 </td><td></td></tr><tr><td> Diseksiyon makas </td><td> Güzel Bilim Araçları </td><td> 14060-11 </td><td></td></tr><tr><td> Açılı kesme makası </td><td> Güzel Bilim Araçları </td><td> 15006-09 </td><td></td></tr><tr><td> Bisturi sapı </td><td> Güzel Bilim Araçları </td><td> 10003-12 </td><td> alternatif kesme aleti </td></tr><tr><td> Kavisli neşter bıçakları # 12 </td><td> Güzel BilimAraçlar </td><td> 10012-00 </td><td> alternatif kesme aleti </td></tr><tr><td> Kemik makas </td><td> Güzel Bilim Araçları </td><td> 16044-10 </td><td></td></tr><tr><td> S &amp; T, sütür bağlama forseps </td><td> Güzel Bilim Araçları </td><td> 00272-13 </td><td></td></tr><tr><td> Dumont SS forseps - açılı </td><td> Güzel Bilim Araçları </td><td> 11203-25 </td><td></td></tr><tr><td> Örgülü ipek sütür büyüklüğü 6-0 </td><td> Teleflex Medical </td><td> 07-30-10 </td><td></td></tr><tr><td> Tıbbi bandı </td><td> Transpore </td><td> 3M </td><td></td></tr><tr><td> Ketamin hidroklorid 100 mg / ml </td><td> Hospira </td><td> NDC 0409-2051-05 </td><td> Final Doz 80 mg / kg &#39;dır </td></tr><tr><td> TranquiVed Enjeksiyon (ksilizin 100 mg / ml) </td><td> Vedco </td><td> NDC 50989-234-11 </td><td> Final Doz 10 mg / kg &#39;dır </td></tr><tr><td> Reaktif turuncu 14 </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> R-8254 </td><td></td></tr><tr><td> Çözüm Bileşenleri Ringers </td><td></td><td></td><td> Çözelti% 95 O2 ve% 5 CO2, nihai pH 7.4 ile dengelenmiş bir gazdır </td></tr><tr><td> Sodyum klorür </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> S7653 </td><td> Final Konsantrasyon: 118 mM </td></tr><tr><td> Potasyum klorür </td><td> Fisher Scientific </td><td> P217-3 </td><td> Final Konsantrasyon: 4.7 mM </td></tr><tr><td> Kalsiyum klorür dihidrat </td><td> Fisher Scientific </td><td> C79-500 </td><td> Nihai konsantrasyon: 2.5 mM </td></tr><tr><td> Potasyum fosfat tekbazlı </td><td> Fisher Scientific </td><td> P-285 </td><td> Nihai konsantrasyon: 1.2 mM </td></tr><tr><td> Magnezyum sülfat </td><td> JT Baker </td><td> 2500-01 </td><td> Final Konsantrasyon: 0.57 mM </td></tr><tr><td> 4 - (2-Hidroksietil) borurazine-1-etansülfonik asit (HEPES) </td><td> Fisher Scientific </td><td> BP310-500 </td><td> Nihai konsantrasyon: 5.95 g / l </td></tr><tr><td> Glikoz </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> G8270 </td><td> Nihai konsantrasyon: 5.5 mM </td></tr></tbody></table>

İskelet kası İzometrik ve eksantrik kuvvet oluşturma değerlendirme İzole müsküler distrofisi arasında murin models

Isometric and Eccentric Force Generation Assessment of Skeletal Muscles Isolated from Murine Models of Muscular Dystrophies

Kas hastalığı için potansiyel tedavilerin değerlendirilmesi Kritik kas fonksiyonlarının hassas ve tekrarlanabilir fizyolojik değerlendirmeler vardır. Birçok klinik öncesi çalışmalarda bu hastalıklar için fare modelleri dayandıklarından izole kas fonksiyonu hastaların içine doğru ilaç adayları hareketli Go / NoGo kararları için standartlardan biri haline gelmiştir. Biz bu çalışmalar için kullanılan baskın kasların fonksiyonel test için ekstansör digitorum longus (EDL) ve diyafram kaslarının hazırlanması gösterecektir. EDL kasının geometrisi iki kolayca erişilebilir tendonlar ve bir banyo superfusion tarafından desteklenen küçük bir boyutu olan, izole kas hazırlıkları için idealdir. Diyafram distrofik hayvanlarda derin ilerleyen patolojiyi sergiler ve fibrozis karşı birçok potansiyel tedaviler değerlendirmek ve myofiber istikrarı teşvik etmek için bir platform olarak hizmet verebilir. Izometrik ve eccen gibi rutin testler için Protokoller,mide kasılmaları, görünecek. İzometrik kuvvet gücü değerlendirmesini sunar ve eksantrik kasılmalar kas distrofiler birçok çeşit bozulur sarcolemma istikrar değerlendirmek için yardımcı olur. Yabani-tip ve distrofik kasların kaslar arasındaki beklenen sonuçların karşılaştırılması da sağlanacaktır. Bu önlemler, doku homeostazında ve morfolojik ve biyokimyasal ölçümler, hem de kas fonksiyonunun tüm hayvan değerlendirmeler tamamlayıcı olabilir.

12 haftalık hayvandan kaslarının EDS izometrik kuvvetleri için beklenen değerleri Şekil 1 &#39;de gösterilmiştir. Mdx kasları kompansatuar hipertrofi sergilemek olduğundan, toplam tetanik kuvvet yaş uyumlu yabani-tip kontrollere göre mdx kas daha yüksek olabilir. Bununla birlikte, fonksiyonel üretiminin daha uygun bir ölçü kuvvet bu değer hesaplamak için enine kesit alanı için normalleştirilmiş bir spesifik kuvvet (Şekil 2) &#39;dir. Spesifik kuvvet mutlak güç ve kesit alanı hem muhasebeleştirilmesi sırasında distrofik kas zayıflığı daha belirgindir kas doğasında fonksiyonel kapasite, bağlıdır. Bizim ellerde, mdx fareler EDL kasları yaklaşık 20 üretir - yaşı 26 hafta - 10 yabani-tip farelerden yaştaki oranla% 25 daha düşük özel kuvvetler. Hazırlık disse bağlı kas bir parça olduğundan, diyafram için, sadece bir spesifik kuvvet karşılaştırmaları için uygundurction. Yabani-tip ve mdx diyafram kasları arasındaki spesifik kuvvet Karşılaştırılması bu dokuda ilerleyen patolojiyi yansıtır. İzometrik kuvvet çıkış yaşı 6 ay, mdx fareler diyafram kasları daha fazla yaş uyumlu yabani-tip denetimler diyafram şeritler fonksiyonel çıkış yarısından üretmek, böylece yaş (Şekil 3) azalır. Diyafram testlerinden eksantrik kasılmalar bir örneği Şekil 4&#39;te gösterilmektedir. Sonraki her eksentrik ile kuvvet çıkışı yabani-tip (C57) ve mdx farelerde hem diyafram şeritler azalır. Bununla birlikte, güç kaybı distrofinin ve ilişkili proteinlerin yokluğunda dan muhtemelen, MDX fare kas örneklerde daha dramatik. <img alt="Şekil 1" src="/files/ftp_upload/50036/50036fig1.jpg" /> Şekil 1. Yabani-tip ve mdx EDL kasları f izometrik tetanik kuvvet<html> rom 12 haftalık fareler. Mutlak güç kompansatuar hipertrofisine bağlı yaştaki mdx EDL kaslarında yüksek olabilir. <img alt="Şekil 2," src="/files/ftp_upload/50036/50036fig2.jpg" /> Kas kesit alanı ile normalize Şekil 2. İzometrik tetanik kuvvet Özgül Kuvvet ve yabani-tip farelerden kıyasla mdx fareler EDL kaslarının depresyona fonksiyonel kapasitesini ortaya koymaktadır. İzler Şekil 1 &#39;de olduğu gibi aynı fareler elde edilmiştir. <img alt="Şekil 3" src="/files/ftp_upload/50036/50036fig3.jpg" /> Şekil 3,. Spesifik kuvvet ile değerlendirilmiştir güç üretim kapasitesinin sürekli bir şekilde azalması (mavi çizgi olarak C57) yabani-tip ile karşılaştırıldığında, MDX fareler (kırmızı bar) diyafram en belirgindir. 36/50036fig4.jpg &quot;/&gt; Şekil 4. 12. Eski hafta C57 ve mdx fareler diyafram kasları için eksentrik sayısının bir fonksiyonu olarak güç kaybı. Veriler, ortalama ± olan genotip başına N SEM = 4 kasları.

Kas fonksiyonunun measurements kas patoloji için potansiyel terapötik değerlendirilmesi yanı sıra, bu dokuda fizyolojik altında yatan mekanizmaların belirlenmesi için katkıda bulunur. Biz fonksiyonel testleri için ekstansör digitorum longus ve diyafram kaslarının hazırlanması gösterecektir. Izometrik ve eksantrik kasılmalar için Protokoller patolojik bir devleti temsil eden distrofik kaslar arasındaki sonuçlar farklılıklar, ve yabani-tip kaslar yanı sıra görünecek.

İskelet Kası İzometrik ve Eksantrik Kuvvet Oluşturma Değerlendirme İzole Müsküler Distrofisi arasında murin Models

Critical to the evaluation of potential  therapeutics for muscular disease are sensitive and reproducible physiological  assessments of muscle function. ...

Bu prosedürün genel amacı, farelerden izole edilen iskelet kaslarının mekanik özelliklerini ölçmektir. Bu, önce ekstansör digitorum longus veya EDL kasının yanı sıra hayvandan diyafram kasının diseke edilmesiyle gerçekleştirilir. Bir diyafram şeridi hazırladıktan sonra, EDL'yi ve diyafram şeridini oksijenli zil çözeltisi dolu bir tabağa sabitleyin ve ardından kasların her iki ucuna dikiş halkaları bağlayın.Daha sonra, EDL veya diyafram şeridi, bir ucunda bir kuvvet dönüştürücüsüne veya koluna bağlı iki elektrot arasındaki bir organ banyosuna sabitlenir ve seğirme kuvvetine bağlı olarak optimum uzunluğuna ayarlanır. Son adım, bir dizi mekanik protokol kullanarak kası uyarmak ve kuvvet üretimini ölçmektir. Sonuç olarak, kuvvet üretiminin, hasara karşı direncin, kuvvet frekans ilişkisinin ve diğer özelliklerin hesaplanması, kasın gücünü ve bütünlüğünü ve diğer özelliklerini ve varsa bir tedavinin veya genetik modifikasyonun etkilerini göstermek için kullanılır.Bu teknik, kas distrofileri için potansiyel tedavileri test etmek için kullanılabilir, çünkü bu tedavilerin çoğu kas gücünü yeniden kazanmayı ve kas kırılganlığını azaltmayı amaçlar. Bu tekniği ilk kullanan biz olmasak da, bunu bir dizi farklı fare modelini incelemek ve kas fonksiyonlarını değerlendirmek ve ayrıca kas distrofileri için çoklu tedavileri karakterize etmek ve değerlendirmek için rutin olarak kullanıyoruz. Dr.Catherine Morewood'a ek olarak, bu prosedürü fizyolojik değerlendirme çekirdeğimizin iki üyesini, bir araştırma görevlisi olan Dr.Min Liu ve bir araştırma uzmanı olan Mr.Ian'ı kullanarak göstereceğiz.Bu prosedürde kullanılan fareler, ağrı veya sıkıntı yaşamadıklarından emin olmak için ketamin ve ksilazin kullanılarak uyuşturulur, ancak kaslar dolaşım tarafından iyi oksijenlenir. Hayvanın yeterince uyuşturulduğunu bir ayak parmağı tutamıyla onayladıktan sonra, yüksek uzuvlarını tıbbi bant kullanarak hareketsiz hale getirin ve bu bölgenin kaslarını açığa çıkarmak için alt ön arka uzuvun derisini çıkarın, düzenli aralıklarla PBS uygulamasıyla kasları nemli tutun. Diseksiyon kapsamı altında, ekstansör digitorum longus veya EDL kasının proksimal tendonunu ortaya çıkarmak için diz lateralinde küçük bir kesi yapın.Bu bölgede iki tendon vardır ve medial ayak bileğindeki EDL'nin çıkarılmasını sağlamak için her ikisi de kesilmelidir. Metatarsallar boyunca uzanan EDL'nin distal tendonlarını ortaya çıkarmak için tibiallerin ön veya TA kasının tendonunu kesin. TA kasını yoldan kaldırın.Altındaki EDL'yi kesmemeye veya dokunmamaya dikkat edin. EDL'nin distal tendonlarına dönün ve her birini kesin. Ardından, tendonları kavrayın ve EDL'yi uzvun geri kalanından yavaşça çekin.Proksimal uçtan serbestçe serbest bırakılmalıdır. EDL kasını çıkarın ve soğutulmuş oksijenli sıkıcılarla dolu bir diseksiyon kabına yerleştirin. Kası, in vivo olarak bulunan uzunluk olan yaklaşık dinlenme uzunluğunda tendonların arasından geçirin.Kas tabakta pul pul döküldüğünde uzunluk çok kısadır ve kas diseksiyon pimlerini çekiyorsa çok uzundur. Dikişleri tendonlara mümkün olduğunca kaslara yakın tutun, ancak kasa dokunmayın. Dikişleri kullanarak kası yaklaşık dinlenme uzunluğunda sabitleyin.Bu prosedüre başlamak için. Ötenazi yapılan hayvanın derisinde bir kesi yapın. Karın ve göğüs boşluğunu ortaya çıkarmak için.Karın boşluğunu açın ve kemik makası kullanarak ve diyafram girişinin üstünden başlayarak kaburgaların hemen altından vücut duvarını kesin. Kaburga çizgisini takip ederek tüm göğüs kafesini kesin ve omurgayı kesin. Diyaframın ortasından geçen kan damarlarını kesin, böylece diyafram kolayca çıkarılabilir.Diyaframı fareden çıkarın ve oksijenli zillerle dolu bir diseksiyon kabına yerleştirin. Kanı yıkamak için diyaframı tabakta hafifçe çalkalayın. Zil sesi çözümünü gerektiği gibi yenileyin.Daha sonra, lateral hemi diyaframların orta kısmındaki liflerin oryantasyonu boyunca merkezi tendondan kaburgalara kadar küçük bir diyafram şeridi kesin. Şerit iki ila dört milimetre genişliğinde olmalıdır. Dikişleri merkezi tendona bağlayın, yanal olarak çıkıntı yapan kaburga uçlarının her birine dikişler bağlayın ve ardından kemik makası kullanarak büyük bir halka oluşturmak için bunları birbirine bağlayın.Şeridin her iki tarafındaki kaburgayı kesin, diyaframın her iki tarafında yaklaşık bir ila iki milimetre kaburga çıkıntısı bırakın. İzole edilmiş iskelet kaslarının şerit kuvveti oluşturma değerlendirmesi, kasları mekanik banyoya monte etmek, dikişleri kavramak ve bunları kasları bir uçta sert bir direğe ve diğer uçta bir kuvvet dönüştürücüsüne bağlamak için kullanmak için bir in vitro kas test sistemi tarafından gerçekleştirilir. İyi bir yaklaşım, dinlenme kasının uzunluğudur.Daha önce gösterildiği gibi, banyo 22 santigrat derecede tutulan oksijenli zil çözeltisi ile doldurulur. Kasları test etmek için kas stabilitesini uzatmak için, fonksiyonel testten önce bu banyoda beş dakika dinlenmelisiniz, böylece supra maksimal stimülasyon koşulları oluşturmak için kas sıcaklığı 22 santigrat dereceye eşit olur. Banyoya bir kas yerleştirildikten sonra, bir seğirme oluşturmak ve kuvvet çıkışını izlemek için tek 0,5 milisaniyelik stimülasyon darbeleri kullanın.Kuvvet maksimum ama sabit bir seviyeye ulaşana kadar akımı kademeli olarak artırın, kalan deneylerin optimum uzunluk oluşturması için akımı bu seviyeden %10 daha fazla artırın, önce kasın gevşek olmadığından emin olun, ancak öğretilmediğinden de emin olun. İyi bir yaklaşım, daha önce gösterildiği gibi dinlenme kası uzunluğudur. İzometrik seğirme stimülasyonlarını kullanarak, maksimum bir kuvvet elde edilene kadar kasın uzunluğunu kademeli olarak ayarlayın.Her kasılma arasında kası yaklaşık 10 saniye dinlendirin. Optimal kas uzunluğu, seğirme kuvveti sürmeli kaliperler kullanılarak maksimum rekor kas uzunluğu olduğunda elde edilir. EDL için, miyo tendonöz bağlantılar arasındaki uzunluktur.Diyafram için, merkezi tendon myo tendonöz bileşke ile kasın kaburgaya eklenmesi arasındaki uzunluktur. Maksimum izometrik Titanik kuvveti belirlemek için, süper maksimal stimülasyonda ve füzyon frekansında bir dizi 0.5 milisaniyelik darbelerle 500 milisaniyelik bir süre boyunca optimal kas uzunluğuna ayarlanan kası uyarın. EDL kasları için plato tipik olarak 120 hertz ile elde edilir ve 100 hertz'lik diyafram kasları için, beş dakikalık bir dinlenmeyi takiben her kas için stimülasyon nöbetleri arasında beş dakikalık dinlenme süreleri ile ilgili frekansta üç kez uyarılır.İzometrik kasılmaları gerçekleştirdikten sonra, eksantrik kasılmalar için prosedüre başlayın. İlk 500 milisaniye boyunca izometrik olarak 80 hertz'de kası uyarın, ardından son 200 milisaniye stimülasyonunda% 10'luk optimal kas uzunluğu esnemesi yapın. Aralarında beş dakikalık dinlenmelerle stimülasyon modelini tekrarlayın.İstenen eksantrik kasılma sayısı için, gerilmeden önceki zaman dilimindeki her kasılma için kuvveti ölçün. Fonksiyonel testin tamamlanmasında ilk ve son kasılma arasındaki kuvvet düşüşünü hesaplayın. Kas uzunluğunu kısaltın ve kası dönüştürücüden ve direkten nazikçe çıkarın.Kası, zil sesleri olan bir diseksiyon kabına geri koyun. EDL kası için kaslardan dikişleri çıkarın. Kası iki kez bloke edin ve sonraki işlemlerden önce tartın.Bu, diyafram kası için kesit alanını ve özgül kuvveti hesaplamak için önemli olacaktır.% 0.1 pros ve portakal, bir zar ve 15 ila 20 dakika boyunca kalıcı boya. Bu, bir diseksiyon hasarı indeksi sağlayacak, diyafram kasını kemik girişinden ve merkezi tendondan uzaklaştıracaktır. Bu, tartılmadan ve sonraki hazırlıktan önce kas lekesinin doğru bir ağırlığını sağlamak için gereklidir.Kesit alanı veya CSA, aşağıdaki formül kullanılarak hesaplanır, burada L üzeri LO lif / kas uzunluk oranıdır ve 1.06, vahşi tip C 57'deki izometrik kuvvetler için beklenen kas yoğunluğu değerleri ve kas distrofisi veya M-D-X-E-D-L 12 haftalık hayvanlardan alınan kaslar bu şekilde gösterilmektedir. MDX kasları kompansatuar hipertrofi sergilediğinden, titanik kuvvetin toplamı, yaşa uygun vahşi tip kontrollere kıyasla MDX kasında daha yüksek olabilir. İşlevsel çıktının daha uygun bir ölçüsü, kuvvetin kesit alanı için normalleştirildiği özgül kuvvettir.Bu değeri hesaplamak için özgül kuvvet, kasın doğal fonksiyonel kapasitesine bağlıdır, burada distrofik kaslardaki zayıflık, hem mutlak kuvvet hem de kesit alanı hesaba katıldığında daha belirgindir. Bu çalışmada, MDX farelerinden elde edilen EDL kaslarının, 10 ila 26 haftalık yaş arasındaki yaşa uygun vahşi tip farelere göre yaklaşık% 20 ila 25 daha düşük spesifik kuvvet ürettiği gözlenmiştir. Diyafram için, karşılaştırmalar için sadece spesifik kuvvet önemlidir, çünkü hazırlık, diseksiyona bağlı olan kasın bir parçasıdır.Mavi çizgi ile gösterilen C 57 vahşi tip kas ile kırmızı çubuklarla gösterilen MDX diyafram kası arasındaki özgül kuvvetin karşılaştırılması, bu dokudaki ilerleyici patolojiyi yansıtır. İzometrik kuvvet çıkışı yaşla birlikte azalır, böylece altı aylık olana kadar MDX farelerinden gelen diyafram kasları, yaşa uygun vahşi tip kontrollerden elde edilen diyafram şeritlerinin işlevsel çıktısının yarısından fazlasını üretmez. Diyafram testinden elde edilen eksantrik kasılmaların bir örneği bu şekilde gösterilmiştir.Sonraki her eksantrik kasılma kuvveti ile, hem mavi ile gösterilen vahşi tip C 57 hem de kırmızı ile gösterilen MDX farelerden diyafram şeritlerinde çıkış azalır. Bununla birlikte, MDX faresinden alınan kas örneklerinde, muhtemelen distrofin ve bununla ilişkili proteinlerin yokluğundan kaynaklanan kuvvet kaybı daha dramatiktir. Bu teknik, bu tekniği takiben uygun şekilde yapılırsa, tek bir kas için yaklaşık bir saat içinde gerçekleştirilebilir.Western blotlama veya diğer biyokimyasal ölçümler gibi diğer yöntemler, tedavinin protein seviyelerini değiştirip değiştirmediği veya kas bütünlüğünü normalleştirip değiştirmediği gibi ek soruları yanıtlamak için kullanılabilir. Bu videoyu izledikten sonra, EDL ve diyaframı fareden nasıl ayıracağınızı ve eksantrik kasılmalardan önce ve sonra kuvvet üretimini nasıl ölçeceğinizi ve analiz edeceğinizi iyi anlamalısınız.

isometric-eccentric-force-generation-assessment-skeletal-muscles

Research

JoVE Journal

Biology

Biyoloji

İzole İskelet Kası Myo-mekanik Analizi

Biz köpek hindlimb kas gücü ve tekrarlanan eksantrik kasılmalar kas yanıtı ölçmek için bir minimal invaziv ve ağrısız bir yöntem açıklanmaktadır.

Vivo Köpek Kas Fonksiyon Testi

Ön kompartman kasları nöromüsküler elektriksel stimülasyon bir fare modeli (NMES), güvenli ve ucuz bir klinik yöntem, anlatılmıştır. Bu modelde, farelerde ve spesifik hedef kas kontraksiyonlarının ortaya çıkarmak amacıyla, kolayca bulunabilen bir klinik cihazı değiştirerek bir avantaja sahiptir.

Nöromüsküler Elektriksel Stimülasyon tarafından Kas Eğitimi A Mürin Modeli

Biz doğrudan kas kuvveti, kas gücü, kasılma kinetiği ve izole iskelet kaslarında yorulma ölçmek için bir yöntem...

İzole İskelet Kaslar Kasılma, çabuk yorulma ve Alternans Ex Vivo Değerlendirilmesi

Myofibers izolasyonu ve kültürü altın...

Yetişkin İskelet Kası gelen bireysel Myofibers ve Uydu Hücre İzolasyonu ve Kültür

Ekstremite kas kasılma ve pasif mekanik özelliklerinde değişimler kas hastalıkları için önemli belirteçler vardır. Bu yazıda murin ekstansör digitorum longus ve tibialis anterior kaslar bu özellikleri ölçmek için fizyolojik testler anlatılmaktadır.

Ekstansör digitorum longus kas ve kas Fonksiyonunun Değerlendirilmesi<em&gt; Ex vivo</em&gt; Ve tibialis anterior kas<em&gt; Yerinde</em&gt; Farelerde

Nöromüsküler hastalıklar için klinik çalışmalarda birincil sonuç ölçütü genellikle kas fonksiyonunu artırıldı. Bu nedenle, fare modellerinde klinik öncesi kas performansı üzerindeki potansiyel terapötik bileşiklerin etkisini değerlendirmek büyük önem taşımaktadır. Biz burada bu adrese birkaç fonksiyonel testler açıklar.

Fonksiyonel Performans değerlendirilmesi<em&gt; Mdx</em&gt; Fare Modeli

Ölçüm kemirgen iskelet kası contractile işlevinin hastalık ilerleme ve terapötik müdahale etkinliğini izlemek için kullanılan yararlı bir araçtır. Burada zaman içinde aynı fare tekrarlanan dorsiflexor kasları non-invaziv, vivo içinde değerlendirilmesi açıklayın.

Non-invaziv Dorsiflexor kas fonksiyonu farelerde değerlendirilmesi

Burada nano-Newton çözünürlüğü ile striated kas miyofibrils kontraktil özelliklerini değerlendirmek için bir protokol sunulmaktadır. Protokolde interferometri tabanlı optik kuvvet sondası içeren bir kurulum uyguluyor. Bu kurulum yüksek sinyal-gürültü oranı ile veri üretir ve miyofibrils kontraktil kinetiği değerlendirilmesini sağlar.

İskelet Kas Biyopsilerinden Miyofibrillerin İzlenmesi ve Nano-Newton Çözünürlük Transdüseri ile Kontraktil Fonksiyonun Belirlenmesi

Burada, homozigot mutant Lamin Δ8-11 fare modeli, Emery-Dreifuss kas distrofisi (EDMD) için çok ciddi bir model erken doğum sonrası gelişim aşamalarında verimli bir şekilde tek kas lifleri elde etmek için bir yöntem öneriyoruz.

Erken Doğum Sonrası Gelişimde Emery-Dreifuss Musküler Distrofi'nin Murine Modelinden Tek Miyofiber İzolasyon ve Kültür

İskelet kası fonksiyonu, geleneksel olarak zahmetli, düşük verimli yaklaşımlar kullanılarak, izole kas liflerinin kontraktilitesini ölçerek değerlendirilebilir. Burada, hidrojel gömülü kas liflerinin kontraktilitesini ölçmek için optik tabanlı, yüksek verimli bir yöntem tarif ediyoruz. Bu yaklaşımın ilaç taraması ve terapötik gelişim için uygulamaları vardır.

Optik tabanlı bir sistem kullanarak hidrojel gömülü bozulmamış fare kas liflerinin yüksek verimli kasılma ölçümleri

Öğrenin, farelerden izole edilmiş iskelet kaslarının mekanik özelliklerini izometrik ve eksantrik kasılmalarla nasıl değerlendireceğinizi. Bu yöntem, distrofik ve sağlıklı kas modelleri arasındaki farkları karşılaştırarak kas fonksiyonunu analiz etmenizi sağlar.

İskelet Kası İzometrik ve Eksantrik Kuvvet Oluşturma Değerlendirme İzole Müsküler Distrofisi arasında murin Models

Daha fazla video keşfet