Name: Için inceltilmiş-kafatası Kortikal Pencere Tekniği In Vivo Optik Koherens Tomografi Görüntüleme (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-11-19T13:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 28 s
Description: Keşfedin fare modelinde inceltilmiş kafatası kortikal pencere tekniği ile optik koherens tomografi görüntüleme. Bu yöntem, beyin biyolojik bütünlüğünü koruyarak yapısal ve fonksiyonel bilgi sağlar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Bu çalışma Konsept hibe UC Discovery Proof tarafından ve NIH (R00 EB007241) tarafından desteklenmiştir. Yazarlar ayrıca bu deneyde ona yardım için Jacqueline Hubbard teşekkür etmek istiyorum.

1. Cerrahi Hazırlık <ol><li> 6-8 hafta yaşları arasında Bayan CD 1 farelerde bizim deneylerde kullanıldı. </li><li> Bir ketamin ve ksilazin kombinasyonu (80 mg / kg ketamine/10 mg / kg ksilazin) bir intraperitoneal enjeksiyon ile fare anestetize. ~ 37 ° C&#39;de optimum vücut ısısını sağlamak için sıcakkanlı pad üzerinde fare yerleştirin Sürekli hayvanın refleksler (örneğin, künt forseps ile ayak pinching) takarak anestezi seviyesini izlemek ve gerekli olduğunda daha fazla anestezi enjekte. </li><li> Yapay gözyaşı merhemi ile iki gözü yağlayın. Bir jilet kullanarak kafa derisi üzerinde tüyleri çıkarın ve% 70 alkol hazırlık yastıkları kullanarak kalan tüyleri. Kafa derisi üzerinde Nair epilasyon kremi ince bir tabaka uygulayın ve etkili olması için 2 dakika bekleyin. Yavaşça salin kullanarak Nair ve kalan saç pamuklu ve alkol hazırlık yastıkları nemlendirilmiş siliyorum. Derisi artık tamamen tüysüz olmalıdır. </li><li> Bir betadin çubukla sopa kullanarak derisi Dezenfekte ve 7 ile temizleyin0% etanol hazırlık pedleri. </li><li> ~ 37 arasında optimum vücut ısısı sağlamak için cerrahi örtüler içinde dikkatli bir şekilde sarmak hayvan ° C ve kafatası immobilize etmek için bir stereotaksik çerçeve üzerine monte hayvan. Hafif istikrarı sağlamak için kafatası dokunun. Ikinci malzeme listesi Tablo 1 &#39;de verilmiştir. </li></ol> 2. İnceltilmiş-kafatası Kortikal Pencere Hazırlama <ol><li> Gözler arasındaki orta hat noktada kesi başlayın. Kulakları arasındaki orta hat noktasına kaudal devam edin. Forseps ile Parça deri. </li><li> Diseksiyon mikroskop altında inceltilmesi alanı bulun ve hafifçe cımbız kullanarak fasya çıkarın. Inceltilmiş kortikal pencere oluşturmadan önce steril pamuklu çubukla kafatası kurulayın. Deneylerde, biz 4 yarattı × 4 mm kraniyal pencere ~ bregma posterior ve lateral 1 mm inceltilmiş. </li><li> Hafif süpürme hareketi onl kullanarak cerrahi el matkap matkap boyutu 0,75 mm yuvarlak karbit frez kullanarak kafatası incelme Başlayany. Kafatası üzerine doğrudan baskı uygulamayın. Steril serum fizyolojik ve pamuklu çubuk kullanılarak kemik tozları ve kafatası aşırı ısınmasını önlemek için her 20-30 sn sondaj durdurun. Salin de kafatası boyunca ısı gondererek yardımcı olacaktır. </li><li> Kompakt kemik dış tabakası tamamen çıkarıldıktan sonra orta süngerimsi kemik tabakası şimdi görünür olmalıdır. Kan damarları süngerimsi kemik tabakası daha belirgin olarak bazı hafif kanama olabilir. Yeşil bir taş bur geçin ve süngerimsi tabaka daha hassas olduğu için ekstra dikkatli kullanarak sondaj devam ediyor. Kraniyal pencere boyunca düzgünlüğü oluştururken yeşil taş bur az kemik materyali kaldıracaktır. Kemik tozu ve kafatası soğutmak için arada sondaj durdurun. </li><li> Sonunda, kafatası daha şeffaf ve beyin üzerinde damar haline gelmiştir artık görünür bir parlatma frezle kafatası parlatma başlar. Bu sağlayacak kafatası aşağı iken pürüzsüzleştirici incelme daha hassas. Sku inceliği Girişyavaşça forseps ile dokunarak ll. Kafatası biraz esnek olduğunda parlatma durdurun. </li><li> Inceltilmiş kranial penceresi şimdi tamamen düz ve yansıtıcı ve görüntüleme (Şekil 1) için hazır olmalıdır. Beynin çok saçılma dokuların doğası nedeniyle, kafatası optimum nüfuz derinliği için en az 55 um ile inceltilerek olmalıdır. Ikinci malzeme listesi Tablo 1 &#39;de verilmiştir. </li></ol> 3. Optik Koherens Tomografi Görüntüleme <ol><li> Ameliyat tamamlandıktan sonra anestezi uygun düzeyde sağlamak ve gerekirse ek anestezi yönetmek için hayvanın solunum hızı ve refleksler kontrol edin. Stereotaksik çerçeveden hayvan çıkarın, hayvan görüntüleme istasyonuna cerrahi örtüler sarılmış ve ulaşım hayvan tutun. </li><li> Görüntüleme reflekslerin işaretleri kontrol edin ve gerekirse ek yapay gözyaşı uygulamadan önce. Kafatası sabitlemek için stereotaksik çerçeve için hayvan monte edin. </li><li> Altında yer hayvanEkim kamera ve optik ışın (Şekil 2) &#39;de pozisyon TSCW. Kafatası ve beyin bir kesit görünümü artık (Şekil 3) görüntülenebilir. </li><li> Ilgi alanı yer almaktadır kez Veri toplama başlayabilirsiniz. Görüntüleme amaçları için, 4.0 mm kadar bir genişliğe sahip bir görüntüleme penceresi sağlamak için galvo aynalar kullanılır. 2 mm&#39;lik bir görüntü derinliği 6 olay mW güç ve bir odak noktası inceltilmiş kafatası altında 1 mm ile elde edilmiştir. Her kesit alanı görüntü başına 0.14 sn bir kazanım oranı ile 2.048 eksenel taramaları oluşuyordu. </li><li> Beynin hacimsel taramaları de xy sagital yönde ışın tarama birinci galvo ayna ve koronal tarama ikinci galvo ayna ile tarama için galvo ayna iki kümesi kullanılarak 2D kesitsel görüntü dizisi toplanması ile elde edilebilir yönü. </li></ol>

<ol><li>Bizheva, K., Unterhuber, A., Hermann, B., Povazay, B., Sattmann, H., Drexler, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Imaging+ex+vivo+and+in+vitro+brain+morphology+in+animal+models+with+ultrahigh+resolution+optical+coherence+tomography%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Biomedical+Optics%22%5BJournal%5D)">Imaging ex vivo and in vitro brain morphology in animal models with ultrahigh resolution optical coherence tomography.</a> Journal of Biomedical Optics. 9, 719-724 (2004).</li>
<li>Fujimoto, J. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optical+coherence+tomography+for+ultrahigh+resolution+in+vivo+imaging%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Biotechnology%22%5BJournal%5D)">Optical coherence tomography for ultrahigh resolution in vivo imaging.</a> Nature Biotechnology. 21, 1361-1367 (2003).</li>
<li>Wantanabe, H., Rajagopalan, U. M., Nakamichi, Y., Igarashi, K. M., Kadono, H., Tanifuji, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Swept+source+optical+coherence+tomography+as+a+tool+for+real+time+visualization+and+localization+of+electrodes+used+in+electrophysiological+studies+of+brain+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Biomedical+Optics+Express%22%5BJournal%5D)">Swept source optical coherence tomography as a tool for real time visualization and localization of electrodes used in electrophysiological studies of brain in vivo.</a> Biomedical Optics Express. 2, 3129-3134 (2011).</li>
<li>Huang, D., Swanson, E. A., Lin, C. P., Schuman, J. S., Stinson, W. G., Chang, W., Hee, M. R., Flottee, T., Gregory, K., Puliafito, C. A., Fujimoto, J. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optical+coherence+tomography%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Optical coherence tomography.</a> Science. 254, 1178-1181 (1991).</li>
<li>Mitsui, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dynamic+range+of+optical+reflectometry+with+spectral+interferometry%5BTitle%5D)+AND+%22Japanese+Journal+of+Applied+Physics%22%5BJournal%5D)">Dynamic range of optical reflectometry with spectral interferometry.</a> Japanese Journal of Applied Physics. 38, 6133-6137 (1999).</li>
<li>de Boer, J. F., Cense, B., Park, B. H., Pierce, M. C., Tearney, G. J., Bouma, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Improved+signal-to-noise+ratio+in+spectral-domain+compared+with+time-domain+optical+coherence+tomograhy%5BTitle%5D)+AND+%22Optics+Letters%22%5BJournal%5D)">Improved signal-to-noise ratio in spectral-domain compared with time-domain optical coherence tomograhy.</a> Optics Letters. 28, 2067-2069 (2003).</li>
<li>de Boer, J. F. Ch. 5. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3ade+Boer%2C+JF+%22Optical+Coherence+Tomography%3A+Technology+and+Applications%22">Optical Coherence Tomography: Technology and Applications</a>. , Springer. (2008).</li>
<li>Choma, M. A., Sarunic, M. V., Yang, C., Izatt, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sensitivity+advantage+of+swept+source+and+fourier+domain+optical+coherence+tomography%5BTitle%5D)+AND+%22Optics+Express%22%5BJournal%5D)">Sensitivity advantage of swept source and fourier domain optical coherence tomography.</a> Optics Express. 11, 2183-2189 (2003).</li>
<li>Leitgeb, R. A., Drexler, W., Unterhuber, A., Hermann, B., Bajraszewski, T., Le, T., Stingl, A., Fercher, A. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ultrahigh+resolution+fourier+domain+optical+coherence+tomography%5BTitle%5D)+AND+%22Optics+Express%22%5BJournal%5D)">Ultrahigh resolution fourier domain optical coherence tomography.</a> Optics Express. 12, 2156-2165 (2004).</li>
<li>Drew, P. J., Shih, A. Y., Driscoll, J. D., Knutsen, P. M., Blinder, P., Davalos, D., Akassoglou, K., Tsai, P. S., Kleinfeld, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chronic+optical+access+through+a+polished+and+reinforced+thinned+skull%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Methods%22%5BJournal%5D)">Chronic optical access through a polished and reinforced thinned skull.</a> Nature Methods. 7, 981-984 (2010).</li>
<li>Shih, A. Y., Mateo, C., Drew, P. J., Tsai, P. S., Kleinfeld, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+Polished+and+Reinforced+Thinned-skull+Window+for+Long-term+Imaging+of+the+Mouse%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Vis.+Exp%22%5BJournal%5D)">A Polished and Reinforced Thinned-skull Window for Long-term Imaging of the Mouse.</a> J. Vis. Exp. 61, e3742(2012).</li>
<li>Yang, G., Pan, F., Parkhurst, C. N., Grutzendler, J., Gan, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Thinned-skull+cranial+window+technique+for+long-term+imaging+of+the+cortex+in+live+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Protocols%22%5BJournal%5D)">Thinned-skull cranial window technique for long-term imaging of the cortex in live mice.</a> Nature Protocols. 5, (2010).</li>
<li>Lu, M., Majewska, S., K, A., Gelbard, H. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+Thin-skull+Window+Technique+for+Chronic+Two-photon+In+vivo+Imaging+of+Murine+Microglia+in+Models+of+Neuroinflammation%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Vis.+Exp%22%5BJournal%5D)">A Thin-skull Window Technique for Chronic Two-photon In vivo Imaging of Murine Microglia in Models of Neuroinflammation.</a> J. Vis. Exp. (43), e2059(2010).</li>
<li>Wang, Y., Oh, C. M., Oliveira, M. C., Islam, M. S., Ortega, A., Park, B. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((GPU+accelerated+real-time+multi-functional+spectral-domain+optical+coherence+tomography+system+at+1300nm%5BTitle%5D)+AND+%22Optics+Express%22%5BJournal%5D)">GPU accelerated real-time multi-functional spectral-domain optical coherence tomography system at 1300nm.</a> Optics Express. 20, 14797-14813 (2012).</li>
<li>Aguirre, A. D., Chen, Y., Fujimoto, J. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Depth-resolved+imaging+of+functional+activation+in+the+rat+cerebral+cortex+using+optical+coherence+tomography%5BTitle%5D)+AND+%22Opt.+Lett%22%5BJournal%5D)">Depth-resolved imaging of functional activation in the rat cerebral cortex using optical coherence tomography.</a> Opt. Lett. 31, 3459-3461 (2006).</li>
<li>Chen, Y., Aguirre, A. D., Ruvinskaya, L., Devor, A., Boas, D. A., Fujimoto, J. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optical+coherence+tomography+%28OCT%29+reveals+depth-resolved+dynamics+during+functional+brain+activation%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neuroscience+Methods%22%5BJournal%5D)">Optical coherence tomography (OCT) reveals depth-resolved dynamics during functional brain activation.</a> Journal of Neuroscience Methods. 178, 162-173 (2009).</li>
<li>Liang, C., Wierwille, J., Moreira, T., Schwartzbauer, G., Jafri, M. S., Tang, C., Chen, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+forward-imaging+needle-type+OCT+probe+for+image+guided+stereotactic+procedures%5BTitle%5D)+AND+%22Opt+Express%22%5BJournal%5D)">A forward-imaging needle-type OCT probe for image guided stereotactic procedures.</a> Opt Express. 19, 26283-26294 (2011).</li>
<li>Srinivasan, V. J., Sakadzic, S., Gorczynska, I., Ruvinskaya, S., Wu, W., Fugimoto, J. G., Boas, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantitative+cerebral+blood+flow+with+optical+coherence+tomography%5BTitle%5D)+AND+%22Optics+Express%22%5BJournal%5D)">Quantitative cerebral blood flow with optical coherence tomography.</a> Optics Express. 18, 2477-2494 (2010).</li>
<li>Galetta, K. M., Calabresi, P. A., Frohman, E. M., Balcer, L. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optical+Coherence+Tomography+%28OCT%29%3A+imaging+the+visual+pathway+as+a+model+for+neurodegeneration%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+the+American+Society+for+Experimental+NeuroTherapeutics%22%5BJournal%5D)">Optical Coherence Tomography (OCT): imaging the visual pathway as a model for neurodegeneration.</a> The Journal of the American Society for Experimental NeuroTherapeutics. 8, 117-132 (2011).</li>
<li>Seigo, M. A., Sotirchos, E. S., Newsome, S., Babiarz, A., Eckstein, C., Ford, E., Oakley, J. D., Syc, S. B., Frohman, T. C., Ratchford, J. N., Balcer, L. J., Frohman, E. M., Calabresi, P. A., Saidha, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+assessment+of+retinal+neuronal+layers+in+multiple+sclerosis+with+maual+and+automated+optical+coherence+tomography+segementation+techniques%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurol%22%5BJournal%5D)">In vivo assessment of retinal neuronal layers in multiple sclerosis with maual and automated optical coherence tomography segementation techniques.</a> J. Neurol. , (2012).</li>
<li>Frohman, E. M., Fujimoto, J. G., Frohman, T. C., Calabresi, P. A., Cutter, G., Balcer, L. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optical+coherence+tomography%3A+a+window+into+the+mechanisms+of+multiple+sclerosis%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Clinical+Practice%22%5BJournal%5D)">Optical coherence tomography: a window into the mechanisms of multiple sclerosis.</a> Nature Clinical Practice. 4, 664-675 (2008).</li>
<li>Gill, A. S., Rajneesh, K. F., Owen, C. M., Yeh, J., Hsu, M., Binder, D. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Early+optical+detection+of+cerebral+edema+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosurg%22%5BJournal%5D)">Early optical detection of cerebral edema in vivo.</a> J. Neurosurg. 114, 470-477 (2011).</li>
</ol>

Çıkar çatışması ilan etti.

OCT ve bir inceltilmiş-kafatası ile Görüntüleme ancak son 15, 16 araştırılmıştır yeni nöro-görüntüleme tekniğidir. Deneylerde, in vivo olarak fare modelinde bir TSCW aracılığıyla SD-OCT görüntüleme fizibilitesi. Sonuçlardan, kafatası yaklaşık 55 um ile inceltilir ve nüfuz derinliği, sırasıyla eksenel ve yanal yönde 8 mikron ve 20 mikron arasında resim çözünürlüğü ile yaklaşık olarak 1 mm elde edilir. Normal bir kafatası (Şekil 4) ile karşılaştırıldığında sinyal yoğunluk profili, bir ...

Erken 1990 yılında tanıtılmasından bu yana, OKT doku yapısı ve fonksiyonu 2 biyolojik görüntüleme için yaygın olarak kullanılır olmuştur. OCT, fiber-optik Michelson interferometresi 2,4 ile düşük koherens ışık kaynağı uygulayarak geri saçılmış ışık 4 eko gecikme zamanı ölçülerek kesitsel görüntüler oluşturur. Ayrıca Fourier etki OCT (FD-OCT) olarak bilinen SD-OCT, ilk kez 1995 5&#39;ten ve geleneksel zaman alanı OCT (TD-OCT) ile karşılaştırıldığında üstün bir görüntüleme yöntemidir sunmaktadır. SD-OCT, referans kol yüksek hızlı ve ultra yüksek çözünürlüklü görüntü elde etme 6-9 sonuçlanan sabit tutulur. Halen, TSCW modelleri, geleneksel bir kranyotomi yerine iki-fotonlu mikroskopi beyin in vivo görüntüleme uygulamaları için büyük ölçüde kullanılmaktadır. Bu TSCW ek ima sağlamak için özel bir kafatası plaka veya cam bir kapak kayma 10-13 ile eş zamanlı olarak kullanılmıştıristikrar ging. Bizim çalışmalarımızda, biz TSCW kullanıldığında bu gibi aksesuarlar OCT görüntüleme için gerekli olmadığını gözlemledik. Bunların optik huzme ile karışabilen ve OCT görüntüleri değiştirebilir Bu nedenle, bir kafatası levha ya da cam kapak slipi eksikliği görüntüleme penceresinin boyutu, daha geniş bir hareket alanı sağlar. A inceltilmiş-kafatası hazırlık iki foton mikroskopi 10-13 kullanarak beyin görüntüleme çalışmalarında avantajlı olduğu kanıtlanmıştır. Deneylerde, biz TSCW yoluyla in vivo görüntü kortekse bir SD-OCT sistemi kullanmaktadır. Bizim özel SD-OCT görüntüleme kurulumu sırasıyla 8 mikron ve 20 mikron bir aksiyel ve lateral çözünürlük sonuçlanan 97 nm bant genişliği ile 1295 nm de iki superluminescent diyotlar (SLD), 14 oluşan bir geniş bant, düşük koherens ışık kaynağı içerir . Bizim optik görüntüleme cihazı ile, bir TSCW aracılığıyla görüntüleme o yapılar ve fonksiyonları tanımlama ve görselleştirme büyük bir potansiyele sahip olduğunu tasavvurptically yoğun beyin dokusu.

<table border="1"><tbody><tr><td> Malzemeler </td><td> Şirket </td><td> Katalog numarası </td><td> Yorumlar </td></tr><tr><td> Ketamin </td><td> Phoenix Pharmaceuticals </td><td> 57319-542-02 </td><td></td></tr><tr><td> Ksilazin </td><td> Akorn, Inc </td><td> 139-236 </td><td></td></tr><tr><td> Yapay Tears merhem </td><td> Rugby </td><td> 0536-6550-91 </td><td></td></tr><tr><td> Nair </td><td> Church &amp; Dwight A.Ş. </td><td> 4010130 </td><td></td></tr><tr><td> Steril Alkol Hazırlık Pad </td><td> Kendall Sağlık </td><td> 6818 </td><td></td></tr><tr><td> Pamuk Aplikatörler Yatırılan </td><td> Fisherbrand </td><td> 23-400-115 </td><td></td></tr><tr><td> Betadine Çözüm Swabstick </td><td> Purdue Ürünler &lt;/ Td&gt; <td> 67618-153-01 </td><td></td></tr><tr><td> Tuzlu Çözüm, .9% </td><td> Phoenix Pharmaceuticals </td><td> 57319-555-08 </td><td></td></tr><tr><td> Stereotaktik Çerçeve </td><td> Stoelting </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Yüksek Hızlı Cerrahi El Matkap </td><td> Foredom </td><td></td><td> 38,000 rpm </td></tr><tr><td> Carbide Yuvarlak Bur </td><td> Stoelting </td><td></td><td> 0,75 mm </td></tr><tr><td> Dura-Yeşil Taşlar </td><td> Shofu </td><td></td><td> Sap: HP Şekil: BA1 </td></tr><tr><td> CompoMaster Kaba &amp; CompoMaster Cilalayıcı </td><td> Shofu </td><td></td><td> Şekil: Mini-Pt. </td></tr><tr><td> SpaceDrapes </td><td> Braintree Scientific, Inc </td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

için inceltilmiş-kafatası kortikal pencere tekniği<em&gt; in vivo</em&gt; optik koherens tomografi görüntüleme

Thinned-skull Cortical Window Technique for In Vivo Optical Coherence Tomography Imaging

Optik koherens tomografi (OCT) yüksek uzaysal-zamansal çözünürlüğe sahip biyomedikal görüntüleme tekniğidir. Onun minimal invaziv yaklaşım ile Ekim dermatoloji oftalmoloji, ve gastroenteroloji 1-3 yaygın olarak kullanılır olmuştur. Bir inceltilmiş-kafatası kortikal pencere (TSCW) kullanarak, in vivo görüntü korteks için bir araç olarak spectral-domain OCT (SD-OCT) yöntemi kullanır. Daha çok yönlülük sağlar gibi yaygın, açık bir kafatası nöro-görüntüleme için kullanılır olmuştur, ancak, bir TSCW yaklaşım daha az invaziv ve nöropatoloji çalışmalarda uzun süreli görüntüleme için etkili bir araçtır. Burada, serebral korteksin vivo OCT görüntüleme içinde bir fare modelinde bir TSCW yaratma yöntemi sunuyoruz.

Serebral korteks üzerinde inceltilmiş pencere oluşturduktan sonra damar artık görsel olarak daha belirgin olmalıdır (Şekil 1) ve (1 mm&#39;ye) daha derin bir görüntüleme derinliği için izin verecektir. 140 mikron (Şekil 1) ölçülen ve daha büyük optik netlik sağlar Normal bir kafatası ile karşılaştırıldığında sağ korteks yaklaşık 55 mikron kadar inceltilir. Daha 10-15 um ile inceltme 11 ancak cam kapak slipi ve kafatası levhaların kullanılması gerekli (Şekil 1 ve 2),</...

Biz bir fare modelinde bir inceltilmiş-kafatası kortikal pencere (TSCW) oluşturma bir yöntem mevcut<em&gt; In vivo</emSerebral korteksin&gt; OCT görüntüleme.

Için inceltilmiş-kafatası Kortikal Pencere Tekniği<em&gt; In Vivo</em&gt; Optik Koherens Tomografi Görüntüleme

Optical coherence tomography (OCT) is a biomedical imaging technique  with high spatial-temporal resolution. With its minimally invasive approach OCT  has ...

Bu prosedürün genel amacı, beynin in vivo optik koherens tomografi görüntülemesi için bir fare modelinde ince bir kafatası kraniyal penceresi oluşturmaktır. Bu, önce hayvanın uyuşturulması ve ameliyata hazırlanmasıyla gerçekleştirilir. Ardından, çeşitli diş çapakları kullanarak kafatasını inceltin.Son adım, ince kafatası kraniyal penceresinden in vivo olarak beynin OCT görüntülerini elde etmektir. Sonuçta, elde edilen OCT görüntülerinden beynin yapısal ve fonksiyonel bilgileri elde edilebilir. Bu tekniğin kraniektomi veya kapak kayma pencereleri gibi mevcut yöntemlere göre ana avantajı, finical pencerenin daha az invaziv olması ve beynin biyolojik bütünlüğünü ve canlılığını sürdürme olasılığının daha yüksek olmasıdır.Bu tekniğin etkileri nörolojik bozuklukların teşhisine kadar uzanır, çünkü OCT yüksek uzamsal ve zamansal çözünürlük sağlar ve konfokal ve iki foton mikroskobu ile karşılaştırıldığında üstün derinlik penetrasyonu sağlar. Genel olarak, bu yönteme yeni başlayan kişiler, kafatası kırıkları veya subdural kanama olmadan düzgün bir şekilde ince bir kafatası yüzeyi oluşturmak için mücadele edeceklerdir. Bu işleme başlamak için, intraperitoneal ketamin ve ksilazin kombinasyonu enjeksiyonu ile altı ila sekiz haftalık bir CD fareyi uyuşturun.Ardından, cerrahi hazırlık sırasında yaklaşık 37 santigrat derecede optimum vücut sıcaklığını sağlamak için fareyi homeo temalı bir ped veya battaniye üzerine yerleştirin, hayvanın reflekslerini test ederek anestezi seviyesini sürekli izleyin ve gerektiğinde daha fazla anestezi enjekte edin. Ardından, her iki gözü de yapay gözyaşı merhemi ile yağlayın. Saç kesme makinesi ile kafa derisindeki tüyleri alın.Ardından, kalan kesilmiş saçları evli bir ped veya çubukla çıkarın. Bundan sonra, saç derisine ince bir tabaka tüy dökücü krem sürün. İki dakika sonra, tuzlu su, nemli pamuklu çubuklar ve alkol hazırlama pedleri kullanarak kremi ve kalan saçı nazikçe silin.Şimdi bir Betadine çubukla saç derisini dezenfekte edin ve %70 etanol hazırlama pedleri ile temizleyin. Daha sonra kafatasını hareketsiz hale getirmek için hayvanı stereotaksik bir çerçeveye monte edin. Stabilitesini sağlamak için kafatasına hafifçe vurun.Bu prosedürde, kafa derisi kesisine gözler arasındaki orta hat noktasından başlayın. Kulak kısmı arasındaki orta hat noktasına doğru kıvrık bir şekilde devam edin, cilt forseps ile kanatlanır. Ardından, diseksiyon mikroskobu altında inceltilecek alanı bulun.Kalan fasyayı çıkarmak için kafatasını kazımak için forseps kullanın. Daha sonra, yaklaşık bir milimetre posterior ve lateral torema olmak üzere dört x dört milimetre inceltilmiş kortikal pencere oluşturmadan önce kafatasını steril pamuklu çubuklarla kurulayın. Kafatasını inceltmek için hafif bir süpürme hareketiyle yuvarlak karbür çapaklı bir cerrahi el matkabı kullanın.Kafatasına doğrudan baskı uygulamayın. Steril tuzlu su ve pamuklu çubuklar kullanarak kemik tozunu çıkarmak ve kafatasının aşırı ısınmasını önlemek için her 20 ila 30 saniyede bir delmeyi bırakın. Tuzlu su ayrıca ısının kafatası boyunca dağıtılmasına da yardımcı olacaktır.Kompakt kemiğin dış tabakası tamamen çıkarıldıktan sonra, orta süngerimsi kemik tabakası görünür olmalıdır. Süngerimsi kemik tabakasında kan damarları daha belirgin olduğu için hafif kanama olabilir. Yeşil taş çapağına geçin ve ekstra dikkatli kullanarak delmeye devam edin.Süngerimsi tabaka daha hassas olduğundan, yeşil taş çapak, kafatası penceresi boyunca düzgünlüğü sağlarken daha az kemik materyalini çıkaracaktır. Kemik tozunu temizlemek ve kafatasını soğutmak için ara sıra delmeyi bırakın. Son olarak, kafatası daha şeffaf hale geldiğinde ve beyindeki damar sistemi görünür hale geldiğinde, bir parlatma frezi kullanarak kafatasını parlatmaya başlayın, forseps ile hafifçe vurarak kafatasının kalınlığını kontrol edin, cilalamayı durdurun.Kafatası biraz esnek hale geldiğinde, inceltilmiş kafatası penceresi artık tamamen pürüzsüz ve yansıtıcı olmalı ve görüntülemeye hazır olmalıdır. Beynin yüksek derecede dağılan dokularının doğası gereği, optimum derinlik penetrasyonu için kafatası en az 55 mikrona kadar inceltilmelidir. Ameliyat tamamlandıktan sonra, uygun anestezi seviyesini sağlamak için görsel muayene ve refleksler yoluyla hayvanın solunum hızını kontrol edin ve ek anestezi uygulayın Gerekirse, hayvanı OCT kameranın altına yerleştirin, ardından ince kafatası kraniyal penceresini optik ışının altına yerleştirin.Kafatası ve beynin kesitsel bir görünümü artık görselleştirilebilir. Veri toplama işlemi başlayabilir. İlgilenilen alan görüntüleme amacıyla bulunduktan sonra, OCT ışınını 4.0 milimetre genişliğinde bir görüntüleme kortikal penceresi üzerinden taradık ve altı miliwatt olay gücü ve ince kafatasının 0.1 milimetre altında bir odak ile iki milimetrelik bir görüntüleme derinliği elde ettik.Her kesit alanı, görüntü başına 0,14 saniyelik bir edinme oranına sahip 2048 eksenel taramadan oluşuyordu. Bu özel yöntem, OCT kesit görüntülerimizdeki belirli yapıları tanımlamamıza izin verdi. Bu şekil, normal bir kafatası altındaki korteksin bir para sagital OCT görüntüsünü göstermektedir ve burada ince bir kafatası altındaki bir para sagital OCT görüntüsünü göstermektedir.Beynin yapıları, normal bir kafatasının aksine, ince bir kafatası kafatası penceresi altında görsel olarak daha belirgindir. Ek olarak, orta hat yapılarının tanımlanmasını kolaylaştırmak için bir koronal kesitsel OCT görüntüsü de elde edilir. Beynin hacimsel taramaları, XY taraması için iki set gal O aynası kullanılarak bir dizi 2D kesitsel görüntü toplanarak da elde edilebilir, ilk gal O aynası ışını sagital yönde tarar ve ikinci gal aynası koronal yönü tarar.Bir kez ustalaştıktan sonra, bu teknik düzgün bir şekilde yapılırsa 10 dakika içinde tamamlanabilir. Bu prosedürü denemek, OCT görüntüleme sırasında yeterli sinyal penetrasyonunu sağlamak için kafatasını düzgün bir şekilde inceltmek önemli olsa da, bu videoyu izledikten sonra, OCT görüntüleme amaçları için ince bir kafatası kortikal penceresinin nasıl hazırlanacağını iyi anlamalısınız.

thinned-skull-cortical-window-technique-for-vivo-optical-coherence

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Sinirbilim

Biz sürekli fare mikroglia görselleştirme ve dolaşımdaki monositler için bir yöntem...

Kronik İki foton için İnce kafatası Pencere Tekniği In vivo</emNöro-inflamasyon Modelleri murin mikroglia> Görüntüleme

Bu video ve tamamlayıcı malzeme, kronik bir...

Fare Visual Cortex İnceltilen kafatası Hazırlık Kronik Görüntüleme

Biz milimetre yayılan ve beyin iltihabı olmadan ay dayanır farenin kafatasında bir görüntüleme penceresi oluşturmak için bir yöntem sunuyoruz. Bu yöntem de iki foton mikroskopi kullanılarak kan akımı, hücresel dinamiği ve hücre / vasküler yapının uzunlamasına çalışmalar için uygundur.

Fare Beyin Uzun vadeli Görüntüleme için Parlak ve Takviyeli inceltilmiş-kafatası Pencere

Cilalı ve takviyeli ince kafatası (portlar) kraniyal pencere ve glioblastoma (GBM) hücre enjeksiyonu birleştirerek, glioma inisiyasyon ve uzunlamasına bir canlı fare beynindeki enjekte GBM hücreleri büyüme gözlemleyebilirsiniz.

Görüntüleme Glioma Başlatma<em&gt; In Vivo</em&gt; Bir Parlak ve Takviyeli İnce kafatası Kranial Pencere arkası

Canlı hayvanda hızlandırılmış görüntüleme, sağlam beyindeki yapısal yeniden yapılanma hakkında değerli bilgiler sağlar. Burada, canlı fare korteksindeki floresan etiketli sinaptik yapıların iki foton mikroskobu ile transkraniyal görüntülenmesine izin veren inceltilmiş bir kafatası preparatını tanıtıyoruz.

İki-Foton<em&gt; In vivo</em&gt; Bir inceltilmiş-kafatası Hazırlık kullanarak Fare Cortex dendritik dikenler Görüntüleme

Burada, in vivo olarak bir farenin somatosensoriyel korteksinde bir Rose Bengal fototrombotik pıhtısının indüksiyonu için yarı invaziv bir optik mikroskopi yaklaşımını açıklıyoruz.  Görüntüleme prosedürünün teknik yönleri, fototrombotik bir olayın indüksiyonundan uygulama ve veri toplamaya kadar açıklanmaktadır.

Konfokal Optik Görüntüleme ile Rose Bengal Fototromboz<em&gt; In Vivo</em&gt;: Tek Gemi İnme Bir Model

Bu yazının uzunlamasına iki foton mikroskopi kullanılarak in vivo amiloid plak birikimi sırasında cerebrovasculature bir biçimlenme izlemek için bir yordam açıklanır. Incelmiş kafatası preparat, Alzheimer hastalığının bir fare modelinde serebrovasküler hasara ilerlemesini değerlendirmek için floresan boyalar görselleştirme sağlar.

uzunlamasına<em&gt; İn Vivo</em&gt; Cerebrovasculature Görüntüleme: MSS Hastalıkları uygunluk

Biz yukarıda ikili birincil somatosensor corticies (S1) Thy1içinde çift optik pencerelerden nöronal aktivite ölçmek için deneysel bir işlem tarif-GCaMP6s transgenik fareler 2-foton (2 P) mikroskopi vivo içindekullanma.

Sinirsel aktivite Thy1kullanarak birincil somatosensor kortekste Imaging-GCaMP6s transgenik fareler

Burada, uyanık, baş kısıtlı farelerde beyin hücrelerinin uzunlamasına görüntülenmesi için kronik bir kraniyal pencerenin implantasyonu için bir protokol sunulmaktadır.

Uyanık Farelerde Tekrarlanan In Vivo Görüntüleme için Kraniyal Pencerenin İmplantasyonu

Beyin örneklerindeki tüm hücrelerin mezoscale olarak tarafsız görüntülenmesini sağlayan ve aynı örnekte bant tabanlı seri taramalı elektron mikroskopisinin görüntüleme iş akışına sorunsuz entegre edilebilen Optik Çok Katmanlı Girişim Tomografisi (OMLIT) adlı yeni bir görüntüleme tekniği tanıttık.

Mezoskopik Tüm Hücreli Beyin Haritalama İçin Taramalı Elektron Mikroskopi Uyumlu Optik Görüntüleme Yöntemi

Keşfedin fare modelinde inceltilmiş kafatası kortikal pencere tekniği ile optik koherens tomografi görüntüleme. Bu yöntem, beyin biyolojik bütünlüğünü koruyarak yapısal ve fonksiyonel bilgi sağlar.

Için inceltilmiş-kafatası Kortikal Pencere Tekniği

Daha fazla video keşfet