Name: Ekstansör digitorum longus kas ve kas Fonksiyonunun Değerlendirilmesi Ex vivo Ve tibialis anterior kas Yerinde Farelerde (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2013-02-09T14:00:00.000+00:00
Duration: 14 min 36 s
Description: Öğrenin farelerde ekstansör digitorum longus ve tibialis anterior kaslarının mekanik özelliklerini ex vivo ve in situ tekniklerle değerlendirme yöntemini. Bu yaklaşım kas hastalıklarında fizyolojik değişiklikleri anlamak ve deneysel müdahalelerin etkinliğini belirlemek için kullanılır.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Bu çalışma Sağlık (AR-49419, DD), Müsküler Distrofi Derneği (DD) ve NIH eğitim bursu T90DK70105 (CH) Ulusal Enstitüleri ile hibe tarafından desteklenmiştir.

1. EDL kas Ex vivo kasılma ve Pasif Özelliklerinin Değerlendirilmesi EDL kasının kasılma ve pasif özellikleri in vitro kas testi sisteminde Aurora Bilimsel kullanarak ex vivo olarak ölçülür. Malzeme ve ekipman için Tablo 1&#39;e bakınız. 1.1 Ekipmanın hazırlanması <ol><li> Su ceketi doku banyosuna oxytube sabitleyerek doku-organ banyosuna birleştirin. Kas montaj aparatı monte banyo takın. Oxytube için gaz hattı bağlayın. Su ceketi doku banyosuna su sirkülasyon hatları sabitleyin ve banyo drenaj içine iğne vana yerleştirin. </li><li> Dolaşan su-banyosu ile kapatın ve 30 ° C&#39;de 7 sıcaklığını ayarlamak. 95% 5 PSI (inç kare başına pound) O 2 -5% CO 2 oxytube akmasına izin verin. Ringer tamponu ile banyo doldurun. En azından için tampon dengelemekOxytube valfi ile sürekli bir gaz akışı ile 10 dk. </li><li> (Uyarıcı, dual-mode kolu sistemi ve sinyal arayüzü) aletleri açın. Üreticinin talimatlarına göre dinamik kas kontrolü (DMC) yazılımı yükleyin. </li></ol> 1.2 EDL kasının diseksiyonu Bütün hayvan çalışmaları Kurumsal Hayvan Bakım ve Kullanım Kurulu tarafından onaylanmalıdır. <ol><li> 2.5 ul / anestezik kokteyl (malzeme bölümüne bakınız) g vücut ağırlığı intraperitoneal enjeksiyonu ile fare uyuştur. Cerrahi prosedür boyunca, sedasyon derinliği ayak tutam yaparak kontrol edildi. Anestezi altında hayvan tutmak için gerektiğinde ilk anestetik dozunun% 10 oranında bir ek yönetilmektedir. Arka bacak Tıraş. Bir ısıtma yastığı üzerinde fare koyarak diseksiyon prosedür ° C önce 37 vücut sıcaklığı koruyun. Vücut sıcaklığı sürekli olarak, rektal temperat ölçülmesi ile izlenirtermal prob kullanılarak ure. </li><li> Diseksiyon kurulu (Şekil 1) üzerinde fare sırtüstü konumlandırın. Bacak cilt soyun arka bacak kasları ortaya çıkarmak. Iki terzi pimleri, grasilis kas ayak diğeri kullanarak Sylgard blok bacak sabitleyin. 37 iç vücut ısısını korumak için fare vücut üstünde bir ısı lambası yerleştirin ° C. Sürekli Ringer tamponu ile açıkta kalan tüm kasları superfuse. Bir vakum hattı sayesinde aşırı tampon boşaltın. </li><li> Distal TA tendon ve ayak doğru cilt diseksiyon bir stereomikroskop altında ekstansör ligaman Açığa. Yavaşça TA kası örten fasya çıkarın. Distal TA tendonun serbest ekstansör bağ kesin. </li><li> Distal TA tendonu kesin ve TA kas kalkmasına kullanabilirsiniz. Dikkatlice proksimal eki de TA kas kaldırın. TA kas damar rüptürü nedeniyle kanama absorbe EDL kasının yanında Ringer tampon batırılmış pamuk ince bir parça yerleştirin. Aşırı tampon ve kan temizlemek için vakum hattı kullanın. </li><li> Distal EDL kasının kas tendon bileşkesine (MTJ) (Şekil 2) bir ekmek ipek sütür kullanarak bir döngü düğüm tarafından izlenen bir çift kare knot kravat. Proksimal EDL kasının açığa biseps femoris kasının distal kısmına bir kesi olun. Proksimal EDL tendon MTJ de knot aynı seti (Şekil 2) tekrarlayın. Aynı sütür hattı kullanarak bir çift kare düğüm ile proksimal veya distal knot birine kol kanca takın. Kalan sütür hattı kesti. </li><li> Proksimal sütür düğümü üstün proksimal EDS tendonu kesin. Kanca ile EDL kasının yukarı kaldırın ve kas altında damar kesti. Arka bacak arasından EDL kasının çıkarmak için distal sütür düğümü aşağı distal EDS tendonu kesin. Ringer tampon batırılmış bir parça pamuk ile maruz arka bacak örtün. </li><li> Kol için kanca takın. Dikey olarak kas hizalamaiki elektrot arasında. Sabit yazılan distal sütür hattı sabitleyin. Daldırın Ringer tampon kas dokusu banyo yukarı kaldırın. Iki ince / kaba çeviri aşama kullanılarak 1.0 g istirahat gerilim ayarlayın ve kas en azından 10 dakika için denge sağlaması için izin verir. </li></ol> 1.3 EDL kasının kasılma ve pasif özellikleri Ölçüm Aşağıdaki ölçümler her biri için yazılım DMC içinde parametrelerini ayarlamak için Tablo 2 kullanın. Dinamik kas analizi (DMA) yazılımını kullanarak verileri analiz edin. 1.3.1 EDL kasının kasılma özelliklerinin ölçülmesi <ol><li> Kas 8 stabilize etmek dışında 60 sn ile 150 Hz&#39;de EDL kasının üç kez teşvik. </li><li> Optimal uzunluğu (Lo) belirlemek için farklı dinlenme gerilimleri EDL kasının teşvik. Optimum uzunluğu kas maksimum kasılan gerginliği geliştirir hangi uzunluğudur. Ile kas izin2 dakika dinlenin. </li><li> Lo dinlenme gerginliğini ayarlayın. Tek seğirme stimülasyon az kas kuvveti ölçün. Mutlak seğirme kuvveti (Pt), pik gerilimi (TPT) ve Pt yarısından gevşeme zamanı (½ RT) için zaman belirleyin. Kas 2 dk dinlendirilir. </li><li> Lo dinlenme gerginliğini ayarlayın. Farklı stimülasyon frekansları (50, 80, 100, 120, 150 ve 200 Hz) üretilen tetanik kas kuvveti ölçün. Kas kuvveti maksimal ulaştığında mutlak maksimal tetanik kas kuvveti (Po) belirleyin. TPT ve ½ Po 9 RT ölçün. </li><li> Kas 5 dk dinlendirilir. Lo dinlenme gerginliğini ayarlayın. Çevrimleri arasında 2 dk dinlenme ile eksantrik kasılmalar 10 döngüleri uygulayın. Eksentrik her döngüden sonra Po göreli gücü kaybını hesaplayınız. </li><li> Cihazdan EDL kasının ayırın ve dikiş yerinde tendonlar kesilir. Kas ıslak ağırlık belirleyin ve kas kesit alanı (CSA) hesaplamak6,10. </li></ol> 1.3.2 EDL kasının pasif özelliklerinin ölçülmesi <ol><li> Kontralateral EDL kasının inceleyin ve Bölüm 1.2 &#39;de açıklandığı gibi cihazla birleştiriniz, 2 ila 7 adım. </li><li> Kas 10% Lo bir artış ile% 160 Lo gergin bir altı adım germe protokolü Konu EDL kasının. Gerilme-deformasyon profili 6. Çözümle. </li><li> 10% Lo germe ve kas tutarak sonra aşağıdaki süreler de stres gevşeme oranı (SRR) ölçerek EDL kasının viskoz özelliği Değerlendirin: zirveden 0.1s sonrası pik (puan), 0.1 0.2s için 0,2 ila 0,5 s pp dan 0.5 &#39;dan 1S ppm&#39;e ve 1 ila 1.5s pp için pp, </li><li> Fare anestezi altında iken Çalışmanın sonunda, servikal dislokasyon ve / veya dekapitasyon ile fare ötenazi. Cihazdan EDL kasının ayırın ve dikiş yerinde tendonlar kesilir. Kas ıslak ağırlık belirleyin ve kas çapraz se hesaplamakctional alanı (CSA) 6, 10. </li></ol> 2. Yerinde TA Kası Kontraktil Özelliklerinin Değerlendirilmesi TA kasının kasılma özelliklerinin yerinde kas testi sisteminde Aurora Bilimsel kullanılarak ölçülür. Malzeme ve ekipman için Tablo 1&#39;e bakınız. 2.1 Ekipmanın hazırlanması <ol><li> 37 termo-kontrollü hayvan sahne kadar ısıtın ° C dolaşan su banyosu kullanılarak. </li><li> (Uyarıcı, dual-mode kolu sistemi ve sinyal arayüzü) aletleri açın. Üreticinin talimatlarına göre DMC yazılımı yükleyin. </li></ol> Yerinde kuvvet ölçümü için TA kas 2.2 hazırlanması <ol><li> Fare anestetize, arka bacak ve tıraş Bölüm 1.2 &#39;de 3 ila adım 1 de tarif edildiği gibi TA kas maruz. </li><li> Patella ligament USI etrafında bir çift kare düğüm Kravatng bir ekmek ipek sütür. Distal TA kas MTJ (Şekil 2) bir döngü düğüm tarafından izlenen bir çift kare düğüm Kravat, aynı sütür hattı kullanılarak distal TA tendon düğüm bir ~ 10 mm döngü bırakarak başka bir çift kare düğüm. Döngü tarafındaki ikinci çift kare düğüm yerleştirin. </li><li> Arka bacak arasından işaretçilerine çıkarın ve hayvan eğilimli konumlandırmak. Biseps femoris kas Açığa. Siyatik sinir ortaya orta hatta bir kesi olun. Siyatik sinirin proksimal ucunun etrafında bir çift kare düğüm Kravat. Sütür hatlarının bir tarafı Trim ve düğüm üstün sinirlerini kesti. Yavaşça, dikiş hattı kullanarak diz doğru siyatik sinir çekin ve özgür çevreleyen bağ dokusu ~ uzunluğu 5 mm temizleyin. Bu işlem sırasında sinir germek ve sürekli zil tamponu ile sinir superfuse etmeyin. </li><li> Olarak 3&#39;e kadar olan adımları 1 &#39;de tarif kontralateral TA kas hazırlayın. Ri bir parça ile maruz arka bacak biri Kapaknger tampon pamuk ıslatılır. Sürekli önceden ısıtılmış (37 ° C) Ringer tampon ile arka bacaklarda hem superfuse. Bir vakum hattı sayesinde aşırı tampon çıkarın. </li><li> Hayvan platformda eğilimli hayvan yerleştirin. Hayvan platforma diz kelepçe tutucu takın ve patella ligament dikiş hatları kullanarak çift kare knot ile metal pin her iki diz sabitleyin. Terzi işaretçilerine kullanarak Sylgard blokta iki ayak Pin. Termo-kontrollü sahneye hayvan platformu sabitleyin. 37 ° C &#39;de hayvansal iç vücut ısısını korumak için ısı lambası konumu </li><li> Hayvan platforma elektrot tutucu sabitleyin ve sütür hattı kullanarak elektrot üzerinde siyatik sinir yatıyordu. Uzaklıkta arka bacak kaslarından elektrodu tutun. MTJ dikiş yerinde örtünmeyen arka ekstremite distal TA tendonu kesin. Kol kanca distal TA tendon dikiş döngü takın. Sıcak bir Ringer tampon batırılmış pamuk ile maruz arka bacak kası örtün. </li></ol><ol><li> DMC yazılım parametrelerini ayarlamak için Tablo 2 kullanın. TA kas kasılma özelliklerini belirlemek için Bölüm 1.3.1 &#39;de tarif edilen aynı protokol takip edin. DMA yazılımını kullanarak verileri analiz edin. </li><li> Kasılma özelliği ölçüm yapıldıktan sonra, tesviye kol kanca distal TA tendon dikiş döngü ayırın. TA kas çıkarın. Kas ıslak ağırlık belirleyin ve CSA 10 hesaplayabilirsiniz. </li><li> 1-3 Yukarıda açıklanan aşamalara göre kontralateral TA kas kasılma özelliklerini ölçün. Çalışmanın sonunda, kurumsal kurallarına göre fare Euthanize. </li></ol>

<ol><li>Huijing, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Muscle+as+a+collagen+fiber+reinforced+composite%3A+a+review+of+force+transmission+in+muscle+and+whole+limb%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Biomech%22%5BJournal%5D)">Muscle as a collagen fiber reinforced composite: a review of force transmission in muscle and whole limb.</a> J. Biomech. 32, 329-345 (1999).</li>
<li>Moss, R. L., Halpern, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Elastic+and+viscous+properties+of+resting+frog+skeletal+muscle%5BTitle%5D)+AND+%22Biophys.+J%22%5BJournal%5D)">Elastic and viscous properties of resting frog skeletal muscle.</a> Biophys. J. 17, 213-228 (1977).</li>
<li>Hoffman, E. P., Brown, R. H., Kunkel, L. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dystrophin%3A+the+protein+product+of+the+Duchenne+muscular+dystrophy+locus%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Dystrophin: the protein product of the Duchenne muscular dystrophy locus.</a> Cell. 51, 919-928 (1987).</li>
<li>Petrof, B. J., Shrager, J. B., Stedman, H. H., Kelly, A. M., Sweeney, H. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dystrophin+protects+the+sarcolemma+from+stresses+developed+during+muscle+contraction%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci.+U.S.A%22%5BJournal%5D)">Dystrophin protects the sarcolemma from stresses developed during muscle contraction.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 90, 3710-3714 (1993).</li>
<li>Pastoret, C., Sebille, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((mdx+mice+show+progressive+weakness+and+muscle+deterioration+with+age%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurol.+Sci%22%5BJournal%5D)">mdx mice show progressive weakness and muscle deterioration with age.</a> J. Neurol. Sci. 129, 97-105 (1995).</li>
<li>Hakim, C. H., Grange, R. W., Duan, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+passive+mechanical+properties+of+the+extensor+digitorum+longus+muscle+are+compromised+in+2-+to+20-mo-old+mdx+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Appl.+Physiol%22%5BJournal%5D)">The passive mechanical properties of the extensor digitorum longus muscle are compromised in 2- to 20-mo-old mdx mice.</a> J. Appl. Physiol. 110, 1656-1663 (2011).</li>
<li>Segal, S. S., Faulkner, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Temperature-dependent+physiological+stability+of+rat+skeletal+muscle+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Temperature-dependent physiological stability of rat skeletal muscle in vitro.</a> Am. J. Physiol. 248, 265-270 (1985).</li>
<li>Grange, R. W., Gainer, T. G., Marschner, K. M., Talmadge, R. J., Stull, J. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fast-twitch+skeletal+muscles+of+dystrophic+mouse+pups+are+resistant+to+injury+from+acute+mechanical+stress%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Physiol.+Cell+Physiol%22%5BJournal%5D)">Fast-twitch skeletal muscles of dystrophic mouse pups are resistant to injury from acute mechanical stress.</a> Am. J. Physiol. Cell Physiol. 283, 1090-1101 (2002).</li>
<li>Hakim, C. H., Duan, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gender+differences+in+contractile+and+passive+properties+of+mdx+extensor+digitorum+longus+muscle%5BTitle%5D)+AND+%22Muscle+Nerve%22%5BJournal%5D)">Gender differences in contractile and passive properties of mdx extensor digitorum longus muscle.</a> Muscle Nerve. 45, 250-256 (2012).</li>
<li>Hakim, C. H., Li, D., Duan, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Monitoring+murine+skeletal+muscle+function+for+muscle+gene+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol.+Biol%22%5BJournal%5D)">Monitoring murine skeletal muscle function for muscle gene therapy.</a> Methods Mol. Biol. 709, 75-89 (2011).</li>
</ol>

Çıkar çatışması ilan etti.

Bu protokol, kontraktil ve pasif özellikleri EDL kasının ve TA kas kasılma özelliklerini ölçmek için fizyolojik testler gösterdik. Kas fizyolojisi çalışmalarında önemli bir endişe hedef kas oksijenasyonu olduğunu. Ringer tampon oksijen difüzyon in vitro assay bir de kas merkezine ulaşmak olmayabilir, çünkü büyük kaslar (örneğin TA kas gibi), in situ yaklaşım tercih edilmektedir. Yerinde bir yaklaşım olarak normal kan temini ve hipoksi ile ilişkili rahatsız etmez yapay etkilerinden kaçınılır. EDS, kas fizyolojisi içine alan en yaygın olarak kullanılan kas biridir. Tüm kas yeterli oksijen dolayı kas boyutunun küçük in vitro sistemde de elde edilebilir. Bundan başka, in vitro sistem içinde kapalı bir iyon konsantrasyonu (Ca2 +, Na + ve K +) işlemek için çevre ve kimyasal içerirOptimal kas gücü üretimi için gerekli olan kalori (ATP ve glikoz). Bu kuvvet üretimi bu değişkenlerin etkisini incelemek için büyük bir fırsat sunuyor. Ekstremite kas kasılma ve pasif özellikleri doğru ölçülmesi iskelet kası fonksiyonu çalışma için çok önemlidir. Bu özelliklerin Karakteristik değişiklikler genellikle çeşitli kas hastalıklarından diğerlerinden ayıran olarak kabul edilmektedir. Bu parametrelerde değişiklikler de deneysel bir tedavinin etkili olup olmadığını belirlemek için önemli göstergelerdir.

<table border="1"><tbody><tr><td> Malzeme </td><td> Üretici </td><td></td><td> Özellikler ve yorumlar </td></tr><tr><td> Doku-organ banyosu </td><td> Radnoti LLC, CA, USA </td><td></td><td> Su-ceket doku banyosu (Cat # 158351-LL), Oksijen dağıtıcı boru (Cat # 160192), Luer kapak (Cat # 120722) </td></tr><tr><td> Su banyosu Sirkülasyon </td><td> Fisher Scientific, Waltham, MA, USA </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Gaz karışımı </td><td> Airgas Ulusal, Charlotte, NC, ABD </td><td></td><td> % 95 O 2 ve% 5 CO 2 </td></tr><tr><td> In vitro kas fonksiyonu testi tertibatta </td><td> Aurora Bilimsel, Aurora, ON, Kanada </td><td></td><td> Sistemi uyarıcısı (Model # 701A), çift modlu bir kaldıraç sistemi (Model # 300C veya 305C), bir sinyal arayüz (Model # 604B) ve bir test ap oluşurparatus (Model # 800A) dikey doku organ banyosuna monte etmek </td></tr><tr><td> In vitro kas fonksiyonu testi yazılımında </td><td></td><td></td><td> Dinamik kas kontrolü (DMC) yazılım ve dinamik kas kontrolü veri analizi (DMA) yazılımı </td></tr><tr><td> % 0.9 NaCl içinde karıştırılır Fare anestezi kokteyl </td><td> Kurumsal düzenlemeler bakın </td><td></td><td> Ketamin (25 mg / ml) ve ksilazin (2.5 mg / ml) ve Acepromazine (0.5 mg / ml). Cerrahi prosedür boyunca, başlangıç ​​dozunun% 10 ek anestezi altında hayvan tutmak için gerekli olabilir. </td></tr><tr><td> Sylgard </td><td> Dünya Precision Instrument </td><td> Cat # SYLG184 </td><td></td></tr><tr><td> Bir ısmarlama pleksiglas diseksiyon kurulu </td><td> Tasarlanmış evde </td><td></td><td> Şekil 1 &#39;e bakınız </td></tr><tr><td> Isıtma lambası </td><td> Tensör Aydınlatma Firma,Boston, MA, ABD </td><td></td><td> Diseksiyon sırasında fare sıcak tutmak için 15 Watt lamba </td></tr><tr><td> Ringer Tampon </td><td> Kimyasallar Fisher Scientific, Waltham, MA, ABD satın alınan </td><td></td><td> MM Kompozisyon: 1.2 NaH 2 PO 4 (Cat # S369), 1 MgSO4 (Cat # M63), 4.83 KCl (Cat # P217), 137 NaCl (Cat # 217), 24 NaHCO 3 (Cat # S233), 2 CaCl2 (Cat # C79) ve 10 glikoz (Cat # D16). Bireysel kimyasallar çözülür ve yukarıda listelenen sipariş karıştırabilirsiniz. 4 ° C&#39;de depolayın </td></tr><tr><td> Stereo diseksiyon mikroskobu </td><td> Nikon, Melville, NY, ABD </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Diseksiyon araçları </td><td> Güzel Bilim Araçları, Foster City, CA, USA </td><td></td><td> Kaba forseps, kaba makas, ince forseps (Düz ve 45 ° açı) </td></tr><tr><td> # 4-0 Örgülü ipek sütür </td><td> SofSilk USSC Sularda, Norwalk, CT, ABD </td><td> Cat # SP116 </td><td></td></tr><tr><td> Bir ısmarlama paslanmaz çelik kanca </td><td> Küçük Parçalar, Inc </td><td></td><td> 2&#39;&#39; kuvvet dönüştürücü 305C veya 2.5 için uzun S / S 304V (0.18&#39;&#39; çap)&#39;&#39; dönüştürücü 300C için uzun S / S 304V (0.012&#39;&#39; çap) (Cat # ASTM A313) </td></tr><tr><td> Yerinde kas fonksiyonunu test sisteminde </td><td> Aurora Bilimsel, Aurora, ON, Kanada </td><td></td><td> Sistemi (809B, in situ fare aygıtı içinde) bir uyarıcı (Model # 701B), çift modlu bir kaldıraç sistemi (Model # 305C), bir sinyal arayüz (Model # 604A) ve bir termo kontrollü ayaklıklar aparatı (Model # 809A oluşur ) </td></tr><tr><td> In vitro kas fonksiyonu testi yazılımında </td><td> Aurora Bilimsel, Aurora, ON, Kanada </td><td></td><td> Dinamik kas kontrolü (DMC) yazılım ve dinamik kas kontrolü veri analizi (DMA) yazılımı </td></tr><tr><td> Bir ısmarlama TA tahlil hayvan platformu </td><td> Tasarlanmış evde </td><td></td><td> Şekil 2 &#39;ye bakınız </td></tr><tr><td> Bir ısmarlama paslanmaz çelik kanca </td><td> Küçük Parçalar, Inc </td><td> Cat # ASTM A313 </td><td> 0.5&#39;&#39; Uzun S / S 304V (0.18&#39;&#39; çap) </td></tr><tr><td> Ismarlama 25G platin elektrot </td><td> Chalgren Enterprises, Gilroy, CA </td><td></td><td> İki 24G elektrik tellerine Lehim iki 0.016&#39;&#39; kalınlığında platin telleri </td></tr></tbody></table> Tablo 1. Malzemeler ve ekipmanlar.

ekstansör digitorum longus kas ve kas fonksiyonunun değerlendirilmesi<em&gt; ex vivo</em&gt; ve tibialis anterior kas<em&gt; yerinde</em&gt; farelerde

Evaluation of Muscle Function of the Extensor Digitorum Longus Muscle Ex vivo and Tibialis Anterior Muscle In situ in Mice

Vücut hareketleri özellikle iskelet kası mekanik fonksiyon tarafından sağlanmaktadır. İskelet kası intramüsküler bağ dokular tarafından kılıfa myofibers sayısız demetleri oluşur. Her bir myofiber myofiber uzunluğu boyunca uzunlamasına çalışır çok miyofibril içerir. Miyofibril kas kasılma cihaz olup, sarkomerlerin olarak bilinen tekrar eden birimler kontraktil oluşmaktadır. Bir sarkomer ünitesi Z diskleri ve titin protein tarafından aralıklı aktin ve miyozin filamentleri içerir. İskelet kası mekanik fonksiyon kas kasılma ve pasif özellikleri ile tanımlanır. Kasılma özelliği kas kasılması, kas gevşeme bölgesinin kuvvet kuşak ve bir zaman süresi esnasında oluşan kuvvet miktarını karakterize etmek için kullanılır. Kas kasılması (örneğin aktin ve miyozin filamentler, kalsiyum homeostazı, ATP / ADP oranı, vb arasındaki etkileşim gibi) etkileyen her türlü faktörü kontraktil prope etkilerrties. Pasif özelliklere daralma yokluğunda kas elastik ve yapışkan özellikleri (sertlik ve viskozite) bakın. Bu özellikler, 1-2 (özellikle kolajen) hücre dışı ve hücre içi yapısal bileşenleri (örneğin, titin gibi) ve bağ dokusu ile tespit edilir. Kasılma ve pasif özellikleri kas fonksiyonu birbirinden ayrılamayan iki yönü vardır. Örneğin, dirsek fleksiyon üst kolun arka bölme içinde üst kol ve kas pasif kolunun ön bölme içinde kaslarının kasılmasına ile gerçekleştirilir. Gerçekten kas fonksiyonu anlamak için, hem de kasılma ve pasif özellikleri incelenmelidir. Kas kasılma ve / veya pasif mekanik özellikler genellikle kas hastalıklarında da başkaları vardır. Buna iyi bir örnek Duchenne müsküler distrofi (DMD), distrofin eksikliği 3 ile oluşan hastalık israf ciddi bir kastır. Distrofin bir sitoskeletal prote olduğunuBu kas kasılması 4 sırasında kas hücresi zarı (sarcolemma) dengeler. Distrofinin yokluğunda, sarcolemma kuvvet aktarımı sırasında oluşturulan makaslama kuvveti ile zarar görmüş. Yırtılma Bu membran kas hücre ölümü ve kontraktil makine kaybına yol açan bir zincir reaksiyon başlatır. Bunun bir sonucu olarak, kas kuvveti azalır ve ölü myofibers fibrotik doku 5 ile değiştirilir. Bu daha sonra değişiklik kas sertliği 6 artırır. Bu değişikliklerin ortaya konması hastalığın ilerlemesini değerlendirmek ve yeni gen / hücre / farmakolojik müdahalelerin tedavi etkinliğini belirlemek için önemli bir kılavuz sağlar. Burada, ekstansör digitorum longus (EDL) kas ve tibialis anterior (TA) kas kasılma özelliklerinin hem kasılma ve pasif mekanik özelliklerini değerlendirmek için iki yöntem sunar.

Aşağıdaki sonuçlar önceki raporlarımızda 6,9 bir temsilidir. Veriler ortalama ortalama ± standart hata olarak sunulmuştur. Tablo 3. Normal BL10 ve yaşı 4 ila 6 ayda distrofin eksikliği (mdx) farelerde EDL kasının morfometrik özelliklerini gösterir. Şekil 4 temsili kasılma ve pasif özelliklerini gösterir BL10 ve mdx fareler EDL kasının. EDS kasının kasılma özelliklerini spesifik (mutlak CSA bölünmüş kuvvet) seyirme kuvvet (Şekil 4A), belirli bir maksimum kuvvet tetanik (Şekil 4B), TPT ve yarım maksimum mutlak tetanik kuvvet RT dahil olmak üzere, aşağıdaki terimler ile tanımlanır (Şekil 4C, D). TPT ve ½ RT de mutlak kasılan kuvveti hesaplamak mümkündür. Stres-gerilme profili (Şekil 4E) ve SRR (Şekil 4F) birEDL kasının pasif özelliklerini tanımlamak için kullanılır yeniden. Distrofin yokluğu EDL kasının 6,9 kasılma ve pasif özellikleri üzerinde önemli bir etkisi vardır. Belirli seğirme ve tetanik güçleri önemli ölçüde mdx EDL kasının azalır. ½ RT mdx EDL kasının daha yavaş iken TPT çok daha hızlıdır. Stres-gerilme profili bu sertliği belirgin mdx EDL kasının artış olduğunu göstermektedir. Sonrası yüksek gerilimleri daha hızlı düşüş ise mdx EDL kasının da tepe stres ulaşmadan önce bir ölçüde çok daha yüksek direnç kuvveti (pasif stres) vermektedir. Ayrıca, SRR BL10 EDL kasının kıyasla mdx EDL kasının anlamlı derecede yüksek bulunmuştur. İstatistiksel analiz İki grup arasında istatistiksel anlamlılık Student t-testi ile analiz edilmiştir. Ler içinBirden gruplar arasında tatistical önemi, Tek yönlü veya Bonferroni post hoc analizi takiben iki-yönlü ANOVA analizi SAS yazılımı (SAS Institute Inc, Cary, NC) kullanmanız önerilir. Fark durumunda p &lt;0.05 anlamlı olarak kabul edilmektedir. Tablo 1. Malzemeler ve ekipmanlar. <table border="1"><tbody><tr><td class="jove_content_small"> Deney </td><td class="jove_content_small"> Dinlenme gerginlik (gram) </td><td class="jove_content_small"> Darbe frekansı (Hz) </td><td class="jove_content_small"> Puls genişliği (ms) </td><td class="jove_content_small"> Stimülasyon süresi (ms) </td><td class="jove_content_small"> Streç uzunluğu </td><td class="jove_content_small"> Streç süresi (ms) </td><td class="jove_content_small"> Streç oranı </td><td class="jove_content_small"> Yorumlar </td></tr><tr><td colspan="9"> 1. EDL kasının ex vivo kasılma ve pasif özelliklerin değerlendirilmesi </td></tr><tr><td colspan="9"> 1.3.1 EDL kasının kasılma özelliklerinin ölçülmesi </td></tr><tr><td> 1. Isınmak </td><td> 1.0 </td><td> 150 </td><td> 0.2 </td><td> 300 </td><td></td><td></td><td></td><td> Her uyaran arasındaki 60 saniye boyunca kas dinlendirin. Bunlar ön tetanik kasılmalar sonraki ölçümler için kas stabilize. </td></tr><tr><td> 2. Optimal kas uzunluğu (Lo) </td><td> 0.5, 1.0, 1.5 ve 2.0 </td><td> 1 </td><td> 0.2 </td><td> 300 </td><td></td><td></td><td></td><td> Kas Her uyaran arasındaki 30 saniye dinlenmek için izin verin. Bir dijital kumpas kullanılarak kas optimum uzunluğunu ölçün. </td></tr><tr><td> 3. Tek twitch kuvveti (Pt) </td><td> Lo dinlenme gerginliğini ayarlayın </td><td> 1 </td><td> 0.2 </td><td> 300 </td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> 4. Tetanik kas kuvveti </td><td> Lo dinlenme gerginliğini ayarlayın </td><td> 50, 80, 100, 120, 150 ve 200 </td><td> 0.2 </td><td> 300 </td><td></td><td></td><td></td><td> Kas her uyaran arasında 1 dakika dinlenmek için izin verin. Maksimal mutlak tetanik kuvvet (Po) oluşturmak frekansı belirleyin. </td></tr><tr><td> 5. Eksantrik kasılma </td><td> Lo dinlenme gerginliğini ayarlayın </td><td> Maksimum tetanik kuvvet (Po) üretir frekansı kullanın </td><td> 0.2 </td><td> 700 </td><td> % 10 Lo </td><td> stimülasyon süresinin son 200 ms </td><td> 0.5 Lo / sn </td><td> Çevrimleri arasında 2 dk dinlenme ile 10 döngü için eksentrik tekrarlayın. </td></tr><tr><td> 6. EDL kasının CSA </td&gt; <td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td> CSA = (kas kütlesi (g) / [1.06 g / cm 3 x (Lo x 0.44)]. 1.06 g / cm 3 kas yoğunluğu ve 0.44 oranı Lo EDL kas lif uzunluğu. </td></tr><tr><td colspan="9"> 1.3.2 EDL kasının pasif özelliklerinin ölçülmesi </td></tr><tr><td> 1. Altı adım protokolü germe </td><td> Lo dinlenme gerginliğini ayarlayın </td><td></td><td></td><td></td><td> % 10 Lo </td><td></td><td> 2 cm / sn &#39; </td><td> % 160 Lo ulaşıldığında kadar Lo% 10 bir artış ile germe protokolü tekrarlayın. Streç döngüleri arasındaki alow 1,5 sn. </td></tr><tr><td> 2. SRR </td><td> Lo dinlenme gerginliğini ayarlayın </td><td></td><td></td><td></td><td> % 10 Lo </td><td></td><td> 2 cm / sn &#39; </td><td> SSR t gerilme farkı bölünmesiyle hesaplanırime bir zaman dilimi içinde iki zaman nokta arasında geçen. </td></tr><tr><td colspan="9"> 2.3 TA kas kasılma özelliklerinin ölçülmesi </td></tr><tr><td> 1. Isınmak </td><td> 4.0 </td><td> 150 </td><td> 0.2 </td><td> 300 </td><td></td><td></td><td></td><td> Her uyaran arasındaki 60 saniye boyunca kas dinlendirin. </td></tr><tr><td> 2. Optimal kas uzunluğu (Lo) </td><td> 3.0, 4.0, 5.0, 6.0 ve 7.0 </td><td> 1 </td><td> 0.2 </td><td> 300 </td><td></td><td></td><td></td><td> Kas Her uyaran arasındaki 30 saniye dinlenmek için izin verin. Bir dijital kumpas kullanılarak kas optimum uzunluğunu ölçün. </td></tr><tr><td> 3. TA kas CSA </td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td> CSA = (kas kütlesi (g) / [1.06 g / cm 3 x (Lo x 0.6)]. 0.6 Lo ra TA kas lif uzunluğutio. </td></tr></tbody></table> Tablo 2. EDL ve TA kasların mekanik özelliklerinin değerlendirilmesi için Parametreler. <table border="1"><tbody><tr><td> Zorlanma </td><td> Yaş (ay) </td><td> Vücut ağırlığı (g) </td><td> EDS ağırlığı (mg) </td><td> EDL Lo (mm) </td><td> EDS, CSA (mm2) </td></tr><tr><td> BL10 </td><td> 6 </td><td> 32.03 ± 0.57 </td><td> 13.90 ± 0.77 </td><td> 14.09 ± 0.04 </td><td> 2.12 ± 0.12 </td></tr><tr><td> mdx </td><td> 6 </td><td> 35.44 ± 0.42 * </td><td> 16.73 ± 0.42 * </td><td> 13.93 ± 0.05 * </td><td> 2.57 ± 0.07 * </td></tr></tbody></table> Tablo 3. MD EDL kas morfometrik özellikleri. * Değerinex fareler arasında BL10 fareler yaştaki önemli ölçüde farklı olduğunu. <img src="/files/ftp_upload/50183/50183fig1.jpg" alt="Şekil 1" fo:src="/files/ftp_upload/50183/50183fig1highres.jpg" fo:content-width="5.5in"/> Şekil 1. Ismarlama fare diseksiyon kurulu şematik diyagramı. Diseksiyon kurulu bir ½ inç kalınlığında pleksiglas malzemeden yapılmış ve kurumsal dükkanında imal edilmiştir. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/50183/50183fig1large.jpg" target="_blank">büyük bir rakam görmek için buraya tıklayın</a> . <img src="/files/ftp_upload/50183/50183fig2.jpg" alt="Şekil 2," fo:src="/files/ftp_upload/50183/50183fig2highres.jpg" fo:content-width="4in"/> /&gt; Şekil 2. MTJ bir döngü düğüm tarafından izlenen bir çift kare düğüm bağlama aşamalarını gösteren dijital görüntüler bir dizi. Asterisk,EDL kasının; Ok, EDL kasının distal tendon. <img src="/files/ftp_upload/50183/50183fig3.jpg" alt="Şekil 3" fo:src="/files/ftp_upload/50183/50183fig3highres.jpg" fo:content-width="6in"/> /&gt; Şekil 3,. Yerinde TA kas fonksiyonu tayininde için ısmarlama platformu şematik diyagramı. Pleksiglas hayvan platformu ve paslanmaz çelik diz tutucu in situ fare aygıtı içinde 809B üzerine monte edilmek üzere tasarlanmıştır. * Paslanmaz çelik çubuk (Cat # MPR-2.0 , Siskiyou, Grants Pass, OR); #, Evrensel elektrot tutucu (Cat # MXB, Siskiyou, Grants Pass, OR); §, elektrot eki çubuk (Cat # MPR-3.0, Siskiyou, Grants Pass, OR); **, Sylgard blok. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/50183/50183fig3large.jpg" target="_blank">büyük bir rakam görmek için buraya tıklayın</a> . <p class="jove_content" fo:keep-together.within-page = &quot;always&quot;&gt; <img src="/files/ftp_upload/50183/50183fig4.jpg" alt="Şekil 4," fo:src="/files/ftp_upload/50183/50183fig4highres.jpg" fo:content-width="4in"/> /&gt; Şekil 4. EDL kasının kasılma ve pasif özellikleri Temsilcisi sonuçları. EDL kasının kasılma özellikleri Belirli bir seğirme kuvveti (A), spesifik tetanik kuvvet (B), tepe noktası gerilimi (C) ve yarı gevşeme süresi (D) için süre ile karakterize edilir. EDS kas pasif özellikleri gerilme şekil profil (E) ve SSC ile değerlendirilir. *, MDX farelerden alınan BL10 fareler yaş grubundaki önemli ölçüde farklıdır.

Ekstremite kas kasılma ve pasif mekanik özelliklerinde değişimler kas hastalıkları için önemli belirteçler vardır. Bu yazıda murin ekstansör digitorum longus ve tibialis anterior kaslar bu özellikleri ölçmek için fizyolojik testler anlatılmaktadır.

Ekstansör digitorum longus kas ve kas Fonksiyonunun Değerlendirilmesi<em&gt; Ex vivo</em&gt; Ve tibialis anterior kas<em&gt; Yerinde</em&gt; Farelerde

Body  movements are mainly provided by mechanical function of skeletal muscle. Skeletal  muscle is composed of numerous bundles of myofibers that are ...

Bu prosedürün genel amacı, fare uzuv kaslarının mekanik özelliklerini doğru bir şekilde belirlemektir. Bu, ekstansör digitorum longus kasının kasılma ve pasif özelliklerinin ex evo ölçülmesiyle veya tibialis anterior kasının kasılma özelliklerinin in situ olarak ölçülmesiyle gerçekleştirilir, sonuçta çeşitli kas hastalıklarındaki fizyolojik değişikliklerin ve deneysel müdahalelerin kas fonksiyonunu iyileştirip iyileştirmediğinin daha iyi anlaşılmasını sağlayan sonuçlar elde edilebilir. Bu yöntem, vücut hareketi için gerekli olan iskelet kasının mekanik işlevinin ayrılmaz iki yönü olan iskelet kasının kasılma ve pasif özelliğinin tam bir değerlendirmesini sağlar.Bu nedenle, kas diseksiyon prosedürünün görsel olarak gösterilmesi kritiktir çünkü çok fazla beceri ve manipülasyon gerektirir. Ayrıca, NC iki'nin büyük kasların kasılma özelliğinin in vitro SA gibi mevcut yöntemlere göre değerlendirilmesinin ana avantajı, enstitü yaklaşımının normal kan akışını ve oksijenasyonu bozmamasıdır. Kas fizyolojisi çalışmasında önemli bir endişe, hedef kasın oksijenlenmesidir.In vitro SA, TA kası gibi büyük kaslar için oksijen difüzyonu kasın merkezine ulaşamayabilir. Bu tekniğin etkileri kas hastalıklarının tedavisine kadar uzanır, çünkü iskelet kasının mekanik fonksiyonunun doğru ölçümü, kas hastalıklarının ilerlemesini değerlendirmek ve yeni gen hücresi ve farmakolojik müdahalelerin terapötik etkinliğini belirlemek için de kullanılabilir. Burada sunulan tüm hayvan prosedürleri, kurumsal hayvan bakımı teşvik komitesi tarafından onaylanmıştır.Bu, ex vivo deneyler için kas test sistemini kurmak için hayatta kalmayan bir ameliyattır. Oksi tüpünü su ceketi doku banyosuna sabitleyerek doku banyosunu monte ederek başlayın. Monte edilmiş banyoyu kas montaj aparatına takın ve iğneli valfi banyo drenajına yerleştirin.Gaz hattını ve su sirkülasyon hatlarını banyoya bağlayın. Ceket haznesinde 30 santigrat derece suyun dolaşmasına ve beş PSI gazın oksi tüpünden akmasına izin verin. Banyoyu zil tamponu ile doldurun ve sabit bir gaz akışı ile dengeleyin.Aletleri açın ve EDL kas arter arterini incelemek, anestezi uygulamak ve fareyi bir ısıtma yastığına yerleştirmek için DMC yazılımını yükleyin. Arka bacakları tıraş edin ve ayak parmağınızı kıstırarak sedasyon olup olmadığını kontrol edin. Fareyi diseksiyon tahtasının üzerine yerleştirin ve bacak derisini soyun.Arka ayağı ayağa ve gracilis kasına sabitlemek için iki terzi pimi kullanın. Çekirdek vücut sıcaklığını 37 santigrat derecede tutmak için farenin üzerine bir ısıtma lambası yerleştirin ve açıkta kalan tüm kasları stereo mikroskop altında sıcak zil tamponu ile sürekli olarak süper kaynaştırın, distal TA tendonunu ve ekstansör ligamenti ortaya çıkarmak için cildi inceleyin ve TA kasını kaplayan fasyayı nazikçe çıkarın. Distal TA tendonunu serbest bırakmak için ekstansör ligamenti kesin.Distal TA tendonunu kesin ve ince bir zil tamponu ıslatılmış pamuk parçasıyla TA kasını çıkarmak için kullanın. TA kas damar sisteminin yırtılmasından kaynaklanan kanamayı durdurun. Daha sonra, bir ekmek ipek sütür kullanarak, EDL kasının distal kas tendon kavşağında bir ilmek düğümü takiben çift kare bir düğüm bağlayın.Daha sonra proksimal tendonu ortaya çıkarmak için biseps fems kasında bir kesi yapın ve aynı düğüm setini proksimal kas tendon kavşağında bağlayın. Çift kare bir düğüm yapmak için aynı dikiş hattını kullanın. Kol kancasını proksimal veya distal düğümlere sabitlemek için.EDL kasını arka bacaktan nazikçe incelemek için. İlk olarak, dikiş düğümlerinin üstündeki proksimal tendonu kesin ve kasın altındaki damar sistemini kesin. Daha sonra dikiş düğümünden daha düşük olan distal tendonu kesin.Açıkta kalan arka bacakyı bir parça zil sesiyle ıslatılmış pamukla örtün. Son olarak, kancayı kol koluna takın ve kasları elektrotlar arasında dikey olarak hizalayın. Distal sütür hattını sabit direğe sabitleyin.Kası zil tamponuna batırın ve dinlenme gerginliğini 1.0 grama ayarlayın. Kasın en az 10 dakika dengelenmesine izin verin. EDL kasının kasılma özelliklerini ölçmek için, DMC yazılımında aşağıdaki protokollerin her biri için parametreleri burada sunulduğu gibi ayarlayın.İlk protokol için, EDL kasını, stimülasyonlar arasında 62. bir dinlenme ile 150 hertz'de üç kez uyararak stabilize edin. İkinci protokol için, kasların iki dakika gevşemesine izin verin ve ardından EDL kasını farklı dinlenme gerginliklerinde uyararak en uygun uzunluğu veya LN'yi belirleyin. Distal ve proksimal düğümler arasındaki en uygun kas uzunluğunu ölçmek için dijital kumpas kullanın.Kasın iki dakika gevşemesine izin verin. Üçüncü protokol için, dinlenme gerginliğini sıfıra ayarlayın ve tek seğirme stimülasyonunda kas kuvvetini ölçün. Seğirme gerginliğini veya pt'yi, tepe gerginliğine veya TPT'ye kadar geçen süreyi ve pt'nin yarım gevşeme süresini belirleyin.Kasın iki dakika gevşemesine izin verin. Dördüncü protokolü gerçekleştirmek için, dinlenme gerginliğini LN'ye ayarlayın ve farklı stimülasyon frekanslarında üretilen testis kas kuvvetini ölçün. Kas Kuvvetinin maksimum titanik kuvvete ulaştığı yerde P NAUGH'u ölçün.P naugh için en yüksek gerginliğe kadar geçen süreyi ve yarım gevşeme süresini ölçün. Kasın beş dakika gevşemesine izin vererek beşinci protokole başlayın, dinlenme gerginliğini L Naugh'a ayarlayın ve döngüler arasında iki dakika dinlenme ile 10 döngü eksantrik kasılma uygulayın. Her eksantrik kasılma döngüsünden sonra PN'nin bağıl kuvvet kaybını hesaplayın.Son olarak, EDL kasını aparattan ayırın ve dikiş yerindeki tendonları kesin. Kas yaş ağırlığını belirleyin ve kas kesit alanını hesaplayın. EDL kasının pasif özelliklerini ölçmek için, kontralateral EDL kasını inceleyin ve daha önce gösterildiği gibi aparata takın.Bu videoda kası, kasın %10'luk artışlarla %160'a kadar gerildiği altı aşamalı bir germe protokolüne tabi tutun. EDL kas gerilmesinin viskoz özelliğini değerlendirmek için stres gerilme profilini analiz edin ve kası %10L sıfırda tutun ve aşağıdaki zaman dilimlerinde stres gevşeme oranını ölçün. Termo kontrollü hayvan aşamasını dolaşım suyu ile 37 santigrat dereceye ısıtarak başlayın.DMC yazılımını açın ve yükleyin. Anestezi uygulanmış farenin arka bacağındaki TA kasını açığa çıkardıktan sonra, patella ligamentinin etrafına çift kare bir düğüm bağlamak için bir ekmek ipek sütürü kullanın. Daha sonra çift kare bir düğüm atın, ardından distal ta tendonun kas tendon kavşağında veya MTJ'sinde bir halka düğümü atın.Yaklaşık 10 milimetrelik bir halka yapmak için aynı dikişi kullanın. Hayvanı yüzüstü konumlandırın ve pazı fems kasını ortaya çıkarın. Siyatik siniri açığa çıkarın ve proksimal ucunun etrafına çift kare bir düğüm atın.Düğümün üstündeki siniri kesin ve uzunluğunun yaklaşık beş milimetresini dizinize doğru dikkatlice inceleyin. Siniri germeyin veya zarar vermeyin. Kontralateral ta kasını bu videoda daha önce gösterildiği gibi hazırlayın ve arka bacaklardan birini bir parça zil tamponu ıslatılmış pamukla örtün.Daha sonra, hayvanı hayvan platformuna yüzüstü yerleştirin ve dizini sabitlemek için çift kare bir düğüm bağlamak için diz piminin etrafındaki patella ligament dikiş çizgilerini kullanın. Daha sonra ayakları SIL koruma bloğuna sabitledikten sonra, hayvan platformunu termo kontrollü sahneye sabitleyin ve hayvan çekirdeği vücut sıcaklığını 37 santigrat derecede tutmak için ısı lambasını konumlandırın. Elektrodu platforma taktıktan sonra, siyatik siniri elektroda takın, ardından distal düğümün distalinde açıkta kalan arka uzuvun TA tendonunu kesin ve dikiş halkasını kol kolu kancasına takın.Açıkta kalan arka bacak kasını ılık halkalarla örtün, TA kasının kasılma ölçümlerini kaydetmek için ıslatılmış pamuğu tamponlayın. EDL kası için bu videoda daha önce gösterilen DMC yazılımındaki parametreleri ve protokolü kullanın ve verileri analiz etmek için yazılımı kullanın. TA kasının ölçümlerini aldıktan sonra, distal TA tendon sütür halkasını kol kancasından ayırın ve kontralateral TA kasının kasılma özelliklerini gösterildiği gibi ölçün Hayvana ötenazi yaptıktan sonra, TA kaslarını çıkarın ve ıslak ağırlıklarını belirleyin.Kesit alanını hesaplamak için, bu tablo normal siyah 10 ve distrofin eksikliği olan veya dört ila altı aylık MDX farelerinde EDL kasının morfometrik özelliklerini göstermektedir. Burada, seğirme kuvvetine özgü maksimum titanik kuvvet, tepe gerilimine kadar geçen süre ve mutlak maksimal titanik kuvvetin yarı gevşeme süresi dahil olmak üzere, siyah 10 ve MDX farelerinden EDL kasının temsili bir kasılma ve pasif özellikleri gösterilmiştir. En yüksek gerginliğe kadar geçen süre ve yarım gevşeme süresi de mutlak seğirme kuvvetinden hesaplanabilir.Stres gerinim profili ve stres gevşeme oranı, EDL kasının pasif özelliklerini tanımlamak için kullanılır. Distrofin yokluğu, EDL kasının kasılma ve pasif özellikleri üzerinde önemli bir etkiye sahiptir. Belirli Seğirme ve Titanik kuvvetleri, M-D-X-E-D-L kasında önemli ölçüde azalır.Örneğin, M-D-X-E-D-L kasında yarım gevşeme süresi önemli ölçüde daha yavaşken, gerginliği zirveye çıkarma süresi önemli ölçüde daha yavaştır. Ek olarak, stres gerinim profili, M-D-X-E-D-L kasında sertliğin önemli ölçüde arttığını göstermektedir. M-D-X-E-D-L kası ayrıca tepe stresine ulaşmadan önce önemli ölçüde daha yüksek direnç kuvveti verirken, zirve sonrası stresler çok daha hızlı azalır.Ayrıca, stres gevşeme oranı, MDXXE-d-l kasında, siyah 10 EDL kasına kıyasla önemli ölçüde daha yüksekti. Diseksiyon prosedürüne hakim olduktan sonra, kasılmanın ex vivo analizi ve EDL kasının pasif özelliği 40 dakika içinde yapılabilir. Ve her iki TA kasının kasılma özelliğinin yerinde değerlendirilmesi, geliştirildikten sonra 60 dakika içinde yapılabilir.Bu teknik, araştırmacıların kas hastalığı alanında iskelet kasının kasılma ve pasif özelliklerini değerlendirmede ve bu prosedürü takiben tedavinin etkinliğini belirlemeye yardımcı olmalarının yolunu açmıştır. İskelet kasının histopatoloji analizi gibi başka bir yöntem de ek bir soruya cevap vermek için yapılabilir. Örneğin, deneysel tedavinin iskelet kası histopatolojisi üzerindeki etkisi.

evaluation-muscle-function-extensor-digitorum-longus-muscle-ex-vivo

Research

JoVE Journal

Biology

Biyoloji

İzole İskelet Kası Myo-mekanik Analizi

Biz doğrudan kas kuvveti, kas gücü, kasılma kinetiği ve izole iskelet kaslarında yorulma ölçmek için bir yöntem...

İzole İskelet Kaslar Kasılma, çabuk yorulma ve Alternans Ex Vivo Değerlendirilmesi

Kas fonksiyonunun measurements kas patoloji için potansiyel terapötik değerlendirilmesi yanı sıra, bu dokuda fizyolojik altında yatan mekanizmaların belirlenmesi için katkıda bulunur. Biz fonksiyonel testleri için ekstansör digitorum longus ve diyafram kaslarının hazırlanması gösterecektir. Izometrik ve eksantrik kasılmalar için Protokoller patolojik bir devleti temsil eden distrofik kaslar arasındaki sonuçlar farklılıklar, ve yabani-tip kaslar yanı sıra görünecek.

İskelet Kası İzometrik ve Eksantrik Kuvvet Oluşturma Değerlendirme İzole Müsküler Distrofisi arasında murin Models

Kas duyusal nöronlar propriyoseptör sinyalizasyon dahil ve aynı zamanda metabolik devlet ve yaralanma ile ilgili olaylar üzerine rapor edilmektedir. Biz streç aktive kas afferentlerde çalışmaları için in vitro kas-sinir hazırlanmasında bir yetişkin fare açıklar.

Bir İn Vitro Yetişkin Fare kas-sinir Hazırlık

Peroneal sinirin uyarılmasını ve sıçan arka ayağının anterior krural kompartmanının kasılmasını takiben ayağın dorsifleksiyonunu ölçmek için bir in vivo protokol tarif ediyoruz. Bu tür ölçümler, iskelet kası patolojisini ve kas onarımı ve rejenerasyonuna yönelik doku mühendisliği yaklaşımlarını değerlendirmek için vazgeçilmez bir translasyonel araçtır.

Uygulamaları<em&gt; İn Vivo</em&gt; Doku değerlendirilmesi için Rat Tibialis Anterior Fonksiyonel Test İskelet Kası Onarım Engineered

Ölçüm kemirgen iskelet kası contractile işlevinin hastalık ilerleme ve terapötik müdahale etkinliğini izlemek için kullanılan yararlı bir araçtır. Burada zaman içinde aynı fare tekrarlanan dorsiflexor kasları non-invaziv, vivo içinde değerlendirilmesi açıklayın.

Non-invaziv Dorsiflexor kas fonksiyonu farelerde değerlendirilmesi

Kas glukoz alımının bozulmamış bir şekilde düzenlenmesi, tüm vücut glikoz homeostazını korumak için önemlidir. Bu protokol, çeşitli fizyolojik müdahalelerin tüm vücut glikoz metabolizması üzerindeki etkisini tanımlarken, izole ve inkübe edilmiş olgun iskelet kasında insülin ve kontraksiyonla uyarılmış glikoz alımının değerlendirilmesini sunar.

Farelerden İzole ve İnkübe Olgun İskelet Kasında İnsülin ve Kasılma ile Uyarılmış Glikoz Alımının Ölçülmesi

Diz ekstensor maksimal gücünün ölçülmesi yaşlanma, hastalık, yaralanma ve rehabilitasyona fonksiyonel adaptasyonları anlamak için zorunludur. In vivo diz uzatma izometrik tepe tetanik tork tekrar tekrar ölçmek için yeni bir yöntem sunuyoruz.

Farelerde Diz Ekstensör Kas fonksiyonunun in vivo ölçümü

Bu protokol, SMA ve ColQ ile ilişkili CMS'nin fare modellerindeki patolojik değişiklikleri ölçmek için kullanılan kombine konfokal ve STED mikroskopisi ile nöromüsküler kavşakların morfometrik analizi için bir yöntemi açıklamaktadır.

Farelerde Nöromüsküler Kavşakların Kombine Konfokal ve Süper Redüksiyonlu Mikroskopi ile Karakterizasyonu

Bu makale, gerinim geçişlerinin ve aktivasyonun kas kuvveti tepkisine katkılarını değerlendirmek için bir laboratuvar kemirgeninden bir "avatar" kası kullanılarak ex vivo iş döngüsü deneyleri sırasında in vivo kas kuvveti üretimini taklit etme metodolojisini detaylandırır.

"Avatar", In vivo Gerinim ve Aktivasyon Kullanılarak Modifiye Edilmiş Bir Ex vivo Çalışma Döngüsü Deneyi

Yetişkin farelerin altı kasından farklı uzunluk ve tiplerde enzimatik olarak ayrışmış lifler elde etmek için bir protokol tarif ediyoruz: bunlardan üçü daha önce tarif edildi (fleksör digitorum brevis, ekstansör digitorum longus, soleus) ve üçü ilk kez başarılı bir şekilde ayrıştı (ekstansör hallusis longus, peroneus longus, peroneus digiti quarti).

Farelerin Altı Arka Bacak Kasının Enzimatik Ayrışmasıyla Elde Edilen Sağlam Kısa, Orta ve Uzun İskelet Kası Lifleri: Fleksör Digitorum Brevis'in Ötesinde

Öğrenin farelerde ekstansör digitorum longus ve tibialis anterior kaslarının mekanik özelliklerini ex vivo ve in situ tekniklerle değerlendirme yöntemini. Bu yaklaşım kas hastalıklarında fizyolojik değişiklikleri anlamak ve deneysel müdahalelerin etkinliğini belirlemek için kullanılır.

Ekstansör digitorum longus kas ve kas Fonksiyonunun Değerlendirilmesi

Daha fazla video keşfet