Name: Sıçan Kronik Besin İnfüzyon Bir Model (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2013-08-14T12:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 18 s
Description: Keşfedin sıçanlarda kronik besin fazlalığı modelini; juguler ven ve karotis arter kateterizasyonu ile glukoz ve lipid infüzyonu yaparak metabolik sağlık üzerindeki etkileri inceleyin. Bu yöntem, beta hücre fonksiyonundaki erken değişiklikleri araştırmak için idealdir.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Bu çalışma Ulusal Sağlık Enstitüleri (R01DK58096 Vincent Poitout için) tarafından desteklenmiştir. Vincent Poitout Diyabet ve Pankreas beta-hücre Fonksiyon Kanada Araştırma Başkanı tutar. Bader Zarrouki Merck ve Eli Lilly gelen doktora sonrası burslar aldı. Ghislaine FONTES Kanada Diyabet Derneği bir doktora sonrası burs ile desteklenmiştir.

Bakış:, bir 7 günlük iyileşme süresi sağlayan, bir döner ve kafeste serbestçe hareket hayvan sağlayan karşı sistemini kullanarak pompaları için kateterler bağlayan işlem genel anestezi altında sağ juguler ven ve sol karotis arter kateterizasyonu oluşur; ve 72 saat süre ile (9, heparin infüzyonu doymuş yağ asitleri, yaklaşık% 80 unsaturated/20% karışımı üreten bir soya fasulyesi yağ emülsiyonu), glukoz ve / veya Intralipid beslerken. 1. Sağ Juguler Ven ve Sol Karotis Arter kanülasyon <ol><li> Cerrahi aletler sterilize edin. Kanülasyonu boruları, aynı zamanda işlem öncesinde bir sıvı sterilize edici madde (% 2.6 glutaraldehid) kullanılarak soğuk sterilize olması gerekir. 16-24 saat boyunca, bir otoklav kapta boru daldırın. Durulayın ve kullanmadan önce glutaraldehit tüm izlerini kaldırmak için steril distile su ile iyice yıkayın. </li><li> Hesaplamak için fare tartılırilaç dozları: Karprofen 5 mg / kg: seyreltme 1/10 = Vücut ağırlığı (g) x 0.001 mi SC (analjezik) 0.01 mg / kg &#39;glikopirolat: seyreltme 1/10 = CA (g) X, 0.0012 mi SC (antikolinerjik) </li><li> Izofluran ve oksijen kullanarak sıçan anestezisi. </li><li> Kendi karnına sıçan yerleştirin. Omuz tabanına kulak arkasındaki alan tıraş. Sırtında sıçan yatıyordu. Ön pençeleri için boyun altında bölge tıraş. </li><li> Klorheksidin, alkol ve iyot ile Hazırlık cerrahi Alanı. Ilaçlar yönetmek. </li><li> Cerrahi alanına sıçan aktarın. </li><li> Aseptik teknik kullanılarak, sağ juguler ven ve heparinize tuzlu 5 U ile dolu bir 1 ml şırınga bağlanmış bir PE-50 kanül ile sol karotid arter canulate. Iyileşme döneminde pıhtılaşma önlemek için heparinli serum fizyolojik 50 U ile canulas yıkayın. Körelmiş 23G iğne kullanın. Bir 23G iğne ile her kanül kapatın. </li><li> Ameliyattan sonra, kapalı yaklaşık 2.5 mm Döşemealt kesici dişler ve yer yemiş olmaktan canulas önlemek için bir infüzyon ceket sıçan. </li><li> Izofluran tahliye yardımcı olmak için oksijen (1 L / 10 dk dk) sağlayın. </li><li> Tamamen uyanık kadar ısıtılmış bir kafeste sıçan yerleştirin. </li><li> Infüzyon durum başına bir kullanımı dört sıçan (Tablo 1) çalıştırın. </li></ol> 2. Ameliyat sonrası Bakım (kateterler Post-cerrahi Tedavi ve Bağlantı) <ol><li> 1. gün ve gün 2 sonrası cerrahi fareler tartılır. </li><li> Gün 1 ameliyat sonrası ve günde bir kez 2 ameliyat sonrası iki kez glikopirolat (BW (g) x 0.00048 mi) SC yönetmek. </li><li> Gerekirse ek destekleyici tedaviler uygulanabilir: sıvılar, ısıtma yastığı, ıslak diyet, oksijen tedavisi, analjezikler, antikolinerjikler. </li><li> Gün 7 sonrası cerrahi, infüzyon için akış oranlarını hesaplamak için fareler tartın. </li><li> Bir kafes ızgara üst (Şekil 1) üzerine monte edilmiş bir halata ve döner kullanarak bir infüzyon sistemine her fare bağlayın.</li><li> Pıhtıları kaldırmak için heparinli serum fizyolojik 5 U ile canulas yıkayın. Pıhtılaşma önlemek için heparinli serum fizyolojik 50 U ile bir kez daha canulas yıkayın. </li><li> Sıçanlarda ip gelmesini ve infüzyon başlamadan önce en az 24 saat döner izin verin. </li></ol> 3. Demleme <ol><li> Her bir fare ve ölçü glisemi karotis kan 0.15 mL çizin. Juguler canulas yıkayın. Her bir sıçanın her iki canulas pıhtılaşmayı önlemek için heparinize tuzlu 50 U kullanımı. </li><li> % 2 EDTA içeren 0.5 ml&#39;lik bir toplama tüpü için kan örneği aktarın. 2 dakika 10.000 rpm&#39;de santrifüj ve -20 ° C de plazma dondurmak </li><li> Aşağıda listelenen infüzyon koşulların her biri için iki adet 60 ml şırınga doldurun. Pompanın arka pozisyon pompa ve yer Şırınga 2 ön konumuna yer Şırınga 1. </li><li> Y-bağlantı ve sterilize edilmiştir CO-EX T22 boru ile birlikte çözümleri her çift katılın. Harvard 33. şırınga yerleştirinikili şırınga pompası. </li><li> Kafes alt değiştirin ve kafes ızgara üstten tüm gıda çıkarın. </li><li> Kafes ızgara üzerine 150 standart yem g ve yer tartılır. </li><li> Kafes ızgara döner için şırınga bağlayın. Hatları sıkışmış hava kaldırmak için doğru şırınga yıkayın. </li><li> Infüzyon sistemi için sıçan bağlamadan önce alındı ​​vücut ağırlığı kullanılarak infüzyon akış oranları hesaplayın. Oranlar ml / saat içine glikoz infüzyon hızı (Gir) dönüştüren bir Microsoft Excel dosyası ile hesaplanır. </li><li> Fabrika ayarlarına göre 60 ml şırınga için akış oranları yönetmek için pompa ayarlayın. Şırınga 1 (ön şırınga) için hızı ve Şırınga 2 (geri şırınga) için oranını girin. </li><li> Pompayı çalıştır. </li></ol> 4. İzleme <ol><li> Pompayı çalıştırmadan sonra, herhangi bir döner veya canulas sızan ve infüzyon boru bükülmüş değil olduğunu doğrulayın. Ayrıca hiçbir hava kabarcığı olmadığını doğrulayınboru. </li><li> Infüzyon 3 saat sonra, glisemi izlemek için bir kan örneği almak. , 24, 6 sonra 48 tekrar ve infüzyon 72 saat. Bir önlem olarak, glisemi da infüzyon 30, 34, 54, ve 60 saat sonra izlenir. Kan şekeri taşınabilir bir glikoz monitörü kullanılarak, tam bir damla kan kullanılarak ölçülebilir. Bu infüzyon sırasında alınan kan miktarını sınırlar ve bu nedenle önemli ölçüde değiştiren kan hacmi ve / veya hematokrit önler. </li><li> Şırınga 1 için oran 220-250 mg / dl kan şekeri korumak için glisemi değerlerine göre değiştirilir. Serbest yağ asitleri 1 mmol / L tutulur çünkü Şırınga 2 oranı infüzyon 72 saat boyunca değişmez </li><li> İnfüzyon koşulları kontrol hayvanları için alınan ses test hayvanları (Tablo 1) için alınan hacmine eşit olduğunu, eşleştirilir. </li><li> Infüzyon 24 saat sonra kafesin altına değiştirmek ve kafes ızgara kalan gıda tartın. Yenmemiş kısmı t dönkafes ızgara o. 48 saat sonra tekrarlayın. </li><li> Yedek şırıngalar günlük olarak infüzyon 72 saat boyunca gerekli. </li><li> Infüzyon sırasında, her zaman iltihap veya rahatsızlık herhangi bir işaret için fare gözlemlemek. Gerekirse uygun bakım yönetmek. </li></ol> 5. Post-infüzyon Ötenazi <ol><li class="jove_content"> Infüzyon 72 saat sonra, sıçanlar, bir ketamin / ksilazin kokteyli (182 ketamin ve 11.6 mg / kg &#39;mg / kg ksilazin% 0.9 NaCI ile 1:02 seyreltilmiş), 0.5 ml ile intravenöz anestezi uygulanır. </li><li class="jove_content"> Ayak-tutam refleks anestezi seviyesini doğrulamak için kullanılır. Ek anestezi gerektiği gibi yönetilmektedir. </li><li class="jove_content"> Fare anestezi olduğunda, karın boşluğu ameliyat makasları ile açılır. Sıçan aort veya vena kava bir şırınga içinde kan 10-15 ml çizerek exsanguinated edilir. </li></ol>

<ol><li>Poitout, V., Robertson, R. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Glucolipotoxicity%3A+fuel+excess+and+beta-cell+dysfunction%5BTitle%5D)+AND+%22Endocr.+Rev%22%5BJournal%5D)">Glucolipotoxicity: fuel excess and beta-cell dysfunction.</a> Endocr. Rev. 29, 351-366 (2008).</li>
<li>Poitout, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Glucolipotoxicity+of+the+pancreatic+beta+cell%5BTitle%5D)+AND+%22Biochim.+Biophys.+Acta%22%5BJournal%5D)">Glucolipotoxicity of the pancreatic beta cell.</a> Biochim. Biophys. Acta. 1801, 289-298 (2010).</li>
<li>Unger, R. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Minireview%3A+weapons+of+lean+body+mass+destruction%3A+the+role+of+ectopic+lipids+in+the+metabolic+syndrome%5BTitle%5D)+AND+%22Endocrinology%22%5BJournal%5D)">Minireview: weapons of lean body mass destruction: the role of ectopic lipids in the metabolic syndrome.</a> Endocrinology. 144, 5159-5165 (2003).</li>
<li>Harmon, J. S., Gleason, C. E., Tanaka, Y., Poitout, V., Robertson, R. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antecedent+hyperglycemia%2C+not+hyperlipidemia%2C+is+associated+with+increased+islet+triacylglycerol+content+and+decreased+insulin+gene+mRNA+level+in+Zucker+diabetic+fatty+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Diabetes%22%5BJournal%5D)">Antecedent hyperglycemia, not hyperlipidemia, is associated with increased islet triacylglycerol content and decreased insulin gene mRNA level in Zucker diabetic fatty rats.</a> Diabetes. 50, 2481-2486 (2001).</li>
<li>Bachar, E., Ariav, Y., Cerasi, E., Kaiser, N., Leibowitz, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neuronal+nitric+oxide+synthase+protects+the+pancreatic+beta+cell+from+glucolipotoxicity-induced+endoplasmic+reticulum+stress+and+apoptosis%5BTitle%5D)+AND+%22Diabetologia%22%5BJournal%5D)">Neuronal nitric oxide synthase protects the pancreatic beta cell from glucolipotoxicity-induced endoplasmic reticulum stress and apoptosis.</a> Diabetologia. 53, 2177-2187 (2010).</li>
<li>Peyot, M. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Beta-cell+failure+in+diet-induced+obese+mice+stratified+according+to+body+weight+gain%3A+secretory+dysfunction+and+altered+islet+lipid+metabolism+without+steatosis+or+reduced+beta-cell+mass%5BTitle%5D)+AND+%22Diabetes%22%5BJournal%5D)">Beta-cell failure in diet-induced obese mice stratified according to body weight gain: secretory dysfunction and altered islet lipid metabolism without steatosis or reduced beta-cell mass.</a> Diabetes. 59, 2178-2187 (2010).</li>
<li>Hagman, D. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cyclical+and+alternating+infusions+of+glucose+and+intralipid+in+rats+inhibit+insulin+gene+expression+and+Pdx-1+binding+in+islets%5BTitle%5D)+AND+%22Diabetes%22%5BJournal%5D)">Cyclical and alternating infusions of glucose and intralipid in rats inhibit insulin gene expression and Pdx-1 binding in islets.</a> Diabetes. 57, 424-431 (2008).</li>
<li>Fontes, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Glucolipotoxicity+age-dependently+impairs+beta+cell+function+in+rats+despite+a+marked+increase+in+beta+cell+mass%5BTitle%5D)+AND+%22Diabetologia%22%5BJournal%5D)">Glucolipotoxicity age-dependently impairs beta cell function in rats despite a marked increase in beta cell mass.</a> Diabetologia. 53, 2369-2379 (2010).</li>
<li>Stein, D. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Essentiality+of+circulating+fatty+acids+for+glucose-stimulated+insulin+secretion+in+the+fasted+rat%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Clin.+Invest%22%5BJournal%5D)">Essentiality of circulating fatty acids for glucose-stimulated insulin secretion in the fasted rat.</a> J. Clin. Invest. 97, 2728-2735 (1996).</li>
<li>Leahy, J. L., Cooper, H. E., Weir, G. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Impaired+insulin+secretion+associated+with+near+normoglycemia.+Study+in+normal+rats+with+96-h+in+vivo+glucose+infusions%5BTitle%5D)+AND+%22Diabetes%22%5BJournal%5D)">Impaired insulin secretion associated with near normoglycemia. Study in normal rats with 96-h in vivo glucose infusions.</a> Diabetes. 36, 459-464 (1987).</li>
<li>Hager, S. R., Jochen, A. L., Kalkhoff, R. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Insulin+resistance+in+normal+rats+infused+with+glucose+for+72+h%5BTitle%5D)+AND+%22The+American+Journal+of+Physiology%22%5BJournal%5D)">Insulin resistance in normal rats infused with glucose for 72 h.</a> The American Journal of Physiology. 260, 353-362 (1991).</li>
<li>Laybutt, D. R., Chisholm, D. J., Kraegen, E. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Specific+adaptations+in+muscle+and+adipose+tissue+in+response+to+chronic+systemic+glucose+oversupply+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22The+American+Journal+of+Physiology%22%5BJournal%5D)">Specific adaptations in muscle and adipose tissue in response to chronic systemic glucose oversupply in rats.</a> The American Journal of Physiology. 273, E1-E9 (1997).</li>
<li>Jonas, J. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High+glucose+stimulates+early+response+gene+c-Myc+expression+in+rat+pancreatic+beta+cells%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Biological+Chemistry%22%5BJournal%5D)">High glucose stimulates early response gene c-Myc expression in rat pancreatic beta cells.</a> The Journal of Biological Chemistry. 276, 35375-35381 (2001).</li>
<li>Tang, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Glucose-induced+beta+cell+dysfunction+in+vivo+in+rats%3A+link+between+oxidative+stress+and+endoplasmic+reticulum+stress%5BTitle%5D)+AND+%22Diabetologia%22%5BJournal%5D)">Glucose-induced beta cell dysfunction in vivo in rats: link between oxidative stress and endoplasmic reticulum stress.</a> Diabetologia. 55, 1366-1379 (2012).</li>
<li>Alonso, L. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Glucose+infusion+in+mice%3A+a+new+model+to+induce+beta-cell+replication%5BTitle%5D)+AND+%22Diabetes%22%5BJournal%5D)">Glucose infusion in mice: a new model to induce beta-cell replication.</a> Diabetes. 56, 1792-1801 (2007).</li>
<li>Magnan, C., Gilbert, M., Kahn, B. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chronic+free+fatty+acid+infusion+in+rats+results+in+insulin+resistance+but+no+alteration+in+insulin-responsive+glucose+transporter+levels+in+skeletal+muscle%5BTitle%5D)+AND+%22Lipids%22%5BJournal%5D)">Chronic free fatty acid infusion in rats results in insulin resistance but no alteration in insulin-responsive glucose transporter levels in skeletal muscle.</a> Lipids. 31, 1141-1149 (1996).</li>
<li>Goh, T. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lipid-induced+beta-cell+dysfunction+in+vivo+in+models+of+progressive+beta-cell+failure%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Physiol.+Endocrinol.+Metab%22%5BJournal%5D)">Lipid-induced beta-cell dysfunction in vivo in models of progressive beta-cell failure.</a> Am. J. Physiol. Endocrinol. Metab. 292, 549-560 (2007).</li>
<li>Pascoe, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Free+fatty+acids+block+glucose-induced+beta-cell+proliferation+in+mice+by+inducing+cell+cycle+inhibitors+p16+and+p18%5BTitle%5D)+AND+%22Diabetes%22%5BJournal%5D)">Free fatty acids block glucose-induced beta-cell proliferation in mice by inducing cell cycle inhibitors p16 and p18.</a> Diabetes. 61, 632-641 (2012).</li>
<li>Bell, C. G., Walley, A. J., Froguel, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+genetics+of+human+obesity%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews.+Genetics%22%5BJournal%5D)">The genetics of human obesity.</a> Nature Reviews. Genetics. 6, 221-234 (2005).</li>
<li>Fontes, G., Hagman, D. K., Latour, M. G., Semache, M., Poitout, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lack+of+preservation+of+insulin+gene+expression+by+a+glucagon-like+peptide+1+agonist+or+a+dipeptidyl+peptidase+4+inhibitor+in+an+in+vivo+model+of+glucolipotoxicity%5BTitle%5D)+AND+%22Diabetes+Res.+Clin.+Pract%22%5BJournal%5D)">Lack of preservation of insulin gene expression by a glucagon-like peptide 1 agonist or a dipeptidyl peptidase 4 inhibitor in an in vivo model of glucolipotoxicity.</a> Diabetes Res. Clin. Pract. 87, 322-328 (2010).</li>
<li>Crawford, P. A., Schaffer, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Metabolic+stress+in+the+myocardium%3A+Adaptations+of+gene+expression%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Molecular+and+Cellular+Cardiology%22%5BJournal%5D)">Metabolic stress in the myocardium: Adaptations of gene expression.</a> Journal of Molecular and Cellular Cardiology. , (2012).</li>
<li>Kewalramani, G., Bilan, P. J., Klip, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Muscle+insulin+resistance%3A+assault+by+lipids%2C+cytokines+and+local+macrophages%5BTitle%5D)+AND+%22Curr.+Opin.+Clin.+Nutr.+Metab+Care%22%5BJournal%5D)">Muscle insulin resistance: assault by lipids, cytokines and local macrophages.</a> Curr. Opin. Clin. Nutr. Metab Care. 13, 382-390 (2010).</li>
<li>Cusi, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Role+of+obesity+and+lipotoxicity+in+the+development+of+nonalcoholic+steatohepatitis%3A+pathophysiology+and+clinical+implications%5BTitle%5D)+AND+%22Gastroenterology%22%5BJournal%5D)">Role of obesity and lipotoxicity in the development of nonalcoholic steatohepatitis: pathophysiology and clinical implications.</a> Gastroenterology. 142, 711-725 (2012).</li>
</ol>

Vincent Poitout kurucularından ve Bêtagenex A.Ş., ticari bir hizmet olarak bu makalede sunulan infüzyon modeli sunan bir sözleşmeli araştırma kuruluştan araştırma sözleşmeleri aldı.

Önceki çalışmalarda bir dizi bilgilerimize kronik glikoz infüzyon (örneğin 10-15) veya kemirgenlerde lipid (örneğin 16,17), istihdam olmasına rağmen her iki yakıt kombine infüzyon sadece fareler 18 bildirilmiştir. Burada sunulan kronik infüzyon modeli sıçanlarda biyolojik fonksiyonları çeşitli besin aşırı üzerindeki etkilerini incelemek için çeşitli avantajlar sunuyor. İlk olarak, genetik olarak obez kemirgenler içermez ve insanlarda ortak obezite polijenik 19</sup...

Dolaşımdaki glukoz ve lipit kronik yüksek seviyeleri de dahil olmak üzere glukoz homeostazının muhafaza edilmesinde rol oynadığı çeşitli organların fonksiyonunu değiştirerek, tip 2 diyabet patogenezine katkıda için önerilen, ancak bunlarla sınırlı değildir edilmiş, pankreatik beta-hücresi (yorumlanan 1). Kronik hiperglisemi böylece bir kısır döngü oluşturmak ve tip 2 diyabet hastalarında glikoz kontrolünün bozulmasına katkıda, ilk etapta hiperglisemi yol açan beta-hücre kusur azdırır bu Glukotoksisite hipotez öne süren. Aynı şekilde, glucolipotoxicity hipotez olarak genellikle tip 2 diyabet gözlenen glukoz ve lipid düzeylerinin eşlik eden cepheler,, beta hücre için zararlıdır önermektedir. Pankreatik beta hücre fonksiyonu üzerinde kronik yüksek besinlerin zararlı etkileri hücresel ve moleküler mekanizmaları deşifre understandi anahtarıdırtip 2 diyabet 1 patogenezi ng. Bu amaçla, çalışmaları, çok sayıda, Langerhans adacıklarında bir izole edilmiş ya da klonlar, insülin salgılayan hücre hatlarında in vitro kronik besin aşırı ex vivo mekanizmaları inceledik. Kültürlenmiş adacık hücreleri ya da içinde kullanılan yağ asitlerinin konsantrasyonu nadiren in vivo 2 beta hücrelerinin yakın dolaşımdaki seviyeleri neticesinde Ancak, bütün bir organizma için bu model sistemlerinde de elde edilen bulguların yapıldı, özellikle karmaşıktır. Öte yandan, besin aşırı tepki olarak beta hücresi yetmezliği mekanizmaları olarak Zucker Diyabetik Şişman sıçan 3,4, gerbil Psammomys obesus 5 ve yüksek yağlı diyet ile örneklenen, diyabet kemirgen modellerinde incelenmiştir beslenen fare 6. Bu modeller, ancak, içsel metabolik anormallikler ile karakterizedir ve kan şekeri manipülasyonlar kolayca uygun değildir vardırve / veya bir daha kontrollü ve daha az kronik bir ortamda lipid düzeyleri. Aksi takdirde, normal hayvanlarda gün bir süre besin seviyelerini dolaşan değiştirmek edebilmek için, fizyolojik parametreleri ve fonksiyonu, bize tek başına veya birlikte, lipid ve glukoz etkilerini incelemek sağlar Normal sıçanlarda kronik bir infüzyon modeli geliştirdik 7,8.

<table><tbody><tr><td>Tuzlu %0,9</td> <td>BD</td><td>JB1324</td><td></td></tr><tr><td>Dekstroz %70</td> <td>McKesson</td><td></td><td></td></tr><tr><td>İntralipid %20</td> <td>Fresenius Kabi</td><td>JB6023</td><td></td></tr><tr><td>Metrikit (Glutaraldehit %2,6)</td><td>Metrex</td><td>11-1401</td><td></td></tr><tr><td>Heparin Sodyum 10.000 USP u/ml</td><td>PPC</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Carprofen</td><td>Metacam</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Glikopirrolat</td><td>Sandoz İzofluran</td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td>Abbott</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Chlohexidine %</td><td></td><td></td><td></td>2</tr> <tr><td>Alkol %</td><td></td><td></td><td></td>70</tr> <tr><td>İyot</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>PE-50</td><td>BD</td><td>427411</td><td></td></tr><tr><td>CO-EX T22</td><td>Instech Solomon</td><td>BCOEX-T22</td><td></td></tr><tr><td>Konnektör 22G</td><td>Instech Solomon</td><td>SC22/15</td><td></td></tr><tr><td>Döner 22G</td><td>Instech Solomon</td><td>375/22PS</td><td></td></tr><tr><td>Y-Konnektör 22G</td><td>Instech Solomon</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Karşı Ağırlık ve kol</td><td>Instech Solomon</td><td>CM375BP</td><td></td></tr><tr><td>23 G körelmiş iğneler</td><td>Instech Solomon</td><td>LS23</td><td></td></tr><tr><td>23 G kanülasyon pimleri</td><td>Instech Solomon</td><td>SP23/12</td><td></td></tr><tr><td>Bağlar (12 inç)</td><td>Lomir</td><td>RT12D</td><td></td></tr><tr><td>İnfüzyon ceketleri </td><td>Lomir</td><td>RJ01, RJ02, RJ03, RJ04</td><td></td></tr><tr><td>(SM-XL)</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Bağlama bağlantı parçası</td><td>Lomir</td><td>RS T1</td><td></td></tr><tr><td>60 ml şırınga</td><td>BD</td><td>309653</td><td></td></tr><tr><td>1 ml şırınga</td><td>BD</td><td>309602</td><td></td></tr></tbody></table>

sıçan kronik besin İnfüzyon bir model

A Model of Chronic Nutrient Infusion in the Rat

Besinlerin aşırı düzeyde kronik maruz kalma birçok organ ve dokuların fonksiyonlarını etkileyen ve obezite ile ilişkili birçok komplikasyon gelişimi ve tip 2 diyabet gibi metabolik sendrom, katkıda kabul edilmektedir. Glikoz ve yağ asitlerinin aşırı düzeyde pankreas beta hücre ve insülin salgılanmasını etkileyen hangi mekanizmaları incelemek için, sıçan kronik bir besin infüzyon modeli kurduk. 7 günlük iyileşme süresi sağlayan,, bir döner ve kafes içinde serbestçe hareket hayvan sağlayan karşı sistemini kullanarak pompaları için kateter bağlantı ve beslerken işlem genel anestezi altında sağ juguler ven ve sol karotis arter kateterizasyonu oluşur glikoz ve / ya da Intralipid (heparin infüzyonu çok yaklaşık% 80 oranında unsaturated/20% doymuş yağ asitlerinin bir karışımı üreten bir soya fasulyesi yağı emülsiyonu) 72 saat boyunca gerçekleştirilebilir. Bu model birçok avan sunuyorFarmakolojik bileşikler, co-aşılamak için seçenek; ve diyet modellere karşı nispeten kısa bir zaman dilimi ince glukoz ve yağ asitleri, dolaşımdaki hedef seviyelerini değiştirmek üzere olasılığı dahil olmak üzere Ges. Bu organlarda çeşitli besin indüklenen disfonksiyon mekanizmalarını incelemek ve bu bağlamda ilaçların etkinliğini test etmek için de kullanılabilir.

Ameliyat 42 sıçan bir dizi dışında, 5 sıçan ameliyat sonrası dönemde kaybedildi ve 1 sıçan% 86 genel başarı oranı temsil eden, infüzyon sırasında kayboldu. Sonunda infüze edildi 37 sıçanların ortalama vücut ağırlığı 608 oldu ± 5 ameliyat öncesi g ve 588 ± infüzyon başlangıcında 6 g (ortalama ± SE, n = 37, p &lt;0.0001 tarafından t-testi eşleştirilmiş). 72 saatlik enfüzyon süresince, tuzlu su (sal) ve + Intralipid (GLU + IL) Şekiller 2A ve 2B göstermek kan şekeri ve yağlı asit düzeyi, sı...

Farelerde glukoz ve Intralipid kronik infüzyon için bir protokol açıklanmıştır. Bu model, organ fonksiyonu ve fizyolojik parametreler üzerindeki besin aşırı etkisini incelemek için kullanılabilir.

Sıçan Kronik Besin İnfüzyon Bir Model

Chronic exposure to excessive levels of nutrients is postulated to  affect the function of several organs and tissues and to contribute to the  ...

Bu prosedürün genel amacı, kronik besin fazlalığı modeli oluşturmak amacıyla glikoz ve lipid infüzyonu yapmak için sıçanların juguler venlerini ve karotis arterlerini kateterize etmektir. Bu işlem, öncelikle genel anestezi altında juguler ven ve karotis arterin kateterizasyonu ile gerçekleştirilir. Prosedürden sonra, sıçanın altı gün boyunca iyileşmesine izin verilir.Ardından kateterler, kafes üstüne monte edilmiş bir bağlama düzeneği ve döner eklem (swivel) aracılığıyla infüzyon pompalarına bağlanır. Son olarak, sıçana glikoz ve lipid solüsyonları infüze edilir. Nihayetinde, kronik besin fazlalığının glikoz homeostazı üzerindeki etkilerini gösteren sonuçlar elde edilebilir.Bu tekniğin, örneğin genetik modeller gibi diğer modellere göre temel avantajı, besin fazlalığına yanıt olarak beta hücre fonksiyonundaki erken değişimlerin incelenebilmesidir. Bir diğer avantajı ise, dolaşımdaki glukoz ve intralipid veya lipid seviyelerinin spesifik olarak modüle edilebilmesidir. Şu anda bu tekniği beta hücre fonksiyonundaki değişimleri incelemek için kullanıyoruz, ancak elbette insülin direnci gibi diğer fizyolojik parametrelerin incelenmesi için de kullanılabilir.Örneğin, prosedürü laboratuvarımdaki hayvan sağlığı teknisyeni Grace Ferguson uygulamalı olarak gösterecektir. Başlamadan önce, tüm cerrahi aletleri prosedürden en az 16 ila 24 saat önce otoklavla sterilize edin. Kanülasyon tüplerini sterilizasyon için %2,6 glutaralde yerleştirin. İnfüzyon durumu başına dört sıçan kullanarak her sıçanı tartın ve ardından analjezik ve antikolinerjik ilaçlar için dozajları hesaplayın.Sıçağı iki ila 3% isofluran ve oksijen ile anestezi ettikten sonra, sedasyon seviyesini ayak parmağıyla kontrol edin. Sıçanı karnının üzerine yerleştirin. Kulak arkasından omuz tabanına kadar olan bölgeyi tıraş edin; ardından hayvanı sırtüstü çevirerek boyun altından ön patilere kadar olan bölgeyi tıraş edin.Ardından, cerrahi bölgeyi klorheksidin alkol ve iyot ile üç kez dezenfekte edin ve ardından karprofen ile glikopiron uygulaması yapın. Sıçanı cerrahi alana transfer edin ve ardından aseptik teknikle ilerleyin. Beş ünite heparinli serum fizyolojik ile doldurulmuş bir mililitrelik şırıngaya bağlı bir PE 50 kanül kullanarak, sağ juguler ven ve sol karotid arteri kanüle edin. İyileşme sürecinde pıhtılaşmayı önlemek için kanülleri küt uçlu 23 gauge bir iğne aracılığıyla 50 ünite heparinli serum fizyolojik ile yıkayın; ardından ameliyat sonrası her bir kanülü kapatmak için başka bir 23 gauge iğne kullanın, kesici dişlerin alt kısmından yaklaşık 2,5 milimetre kesin ve kanüllerin yenmesini önlemek için sıçanı bir infüzyon yeleğine yerleştirin.ISO florini tahliye etmeye yardımcı olmak için dakikada bir litre hızında oksijen verin. Sıçanı, tamamen uyanana kadar ısıtmalı bir kafese yerleştirin. Ameliyat sonrası birinci ve ikinci günlerde.Sıçanları tartın, birinci gün iki kez ve ikinci gün bir kez deri altına glikopironyum uygulayın ve cerrahi işlemden sonraki yedinci günde metin protokolüne göre gerektiğinde ek tedaviler sağlayın. İnfüzyon akış hızlarını hesaplamak için her sıçanı tarttıktan sonra, juguler ven kanülünü yay içindeki bir boru uzantısı aracılığıyla mavi döner ekleme bağlayın. Kanülleri beş ünite heparinli salin ile yıkayın ve bunları bağlama aparatına bağlayın.Ardından, sıçanı bağlama düzeneği ve döner eklem (swivel) kullanarak infüzyon sistemine bağlayın. Pıhtılaşmayı önlemek için kanülleri beş ünite heparinli salin ile bir kez daha yıkayın. İnfüzyonu gerçekleştirmek üzere infüzyon işlemine başlamadan önce sıçanların bağlama düzeneğine ve döner ekleme alışması için en az 24 saat süre tanıyın.Her bir sıçanın karotis arteri üzerinden 0.15 mililitre kan alarak başlayın ve glisemiyi ölçün. Juguler kanülleri yıkayın ve her iki kanülün pıhtılaşmasını önlemek için 50 ünite heparinli salin kullanın. Kan örneğini %2 EDTA içeren 0.5 mililitrelik bir toplama tüpüne aktarın, ardından iki dakika boyunca 10,000 RBM hızında santrifüjleyin ve plazmayı -20 °C'de dondurun.Burada listelenen her bir infüzyon koşulu için iki adet 60 mililitrelik şırıngayı doldurun. Her bir çözelti çiftini birbirine bağlamak için y konnektörleri ve sterilize edilmiş coex T 22 tüpler kullanın. Ardından, şırıngaları bir Harbor 33 şırınga pompasına yerleştirerek birinci şırıngayı pompanın ön konumuna, ikinci şırıngayı ise arka konumuna yerleştirin.Ardından, kafes tabanını değiştirin ve standart yemle değiştirmeden önce kafes ızgarasının üzerindeki tüm yemleri temizleyin; ızgara üzerine 150 gram standart yem yerleştirin. Daha sonra şırıngaları kafes ızgarasındaki döner konektöre bağlayın ve şırıngaları uygun şekilde yıkayın. Hatlarda hapsolmuş havayı gidermek için, en son belirlenen vücut ağırlığını kullanarak, deney boyunca sürdürülmesi istenen önceden belirlenmiş glikoz seviyelerine göre glikoz infüzyon hızını veya GIR değerini saatlik mililitreye dönüştüren bir Excel dosyası yardımıyla infüzyon akış hızlarını hesaplayın.Pompayı, üretici ayarlarına göre 60'lık şırıngalar için akış hızlarını uygulayacak şekilde ayarlayın ve birinci şırınga ile ikinci şırınganın hızlarını girin. Ardından pompayı başlatın. Pompayı başlattıktan sonra, döner bağlantıdan veya kanüllerden sızıntı olmadığını ve infüzyon tüplerinin bükülmediğini doğrulayın.Ayrıca, tüplerde hava kabarcığı olmadığından emin olun. Üç saatlik infüzyondan sonra, küçük bir kan örneği alın ve glisemi düzeyini ölçmek için taşınabilir bir glukoz monitörü kullanın. Küçük hacimlerde örnek almak, kan hacminin ve/veya hematokrit değerinin değişmesini önleyecektir.Bu zaman çizelgesini kullanarak ek kan örnekleri alın. Ölçülen glisemi değerlerine dayanarak, kan glukozunu 220 ile 250 miligram per deciliter arasında tutmak için birinci şırınganın hızını ayarlayın. Serbest yağ asitlerini bir milli mole per liter seviyesinde tutmak için ikinci şırınganın hızı sabit kalır.24 saatlik infüzyondan sonra, kafes tabanını değiştirin ve kafes ızgarasında kalan yemi tartın. UNE kısmını kafese, ızgaraya geri koyun ve 72 saat boyunca gerektiğinde şırıngaları yeniden doldurun. Sıçanı herhangi bir inflamasyon veya rahatsızlık belirtisi açısından gözlemleyin ve gerektiğinde uygun bakımı sağlayın.İnfüzyon sonunda sıçanlar, hiperglisemik veya öglisemik hiperinsülinemik klempe çalışmalarına tabi tutulabilir ve ardından ötanazi uygulanarak pankreas histolojisi veya adacık izolasyonu için pankreas dokusu toplanabilir. Bu şekil, 72 saatlik infüzyon süresince kan, glukoz ve yağ asidi seviyelerini göstermektedir. Burada tasarım gereği gösterildiği üzere, glukoz seviyeleri infüzyon boyunca 220 ila 250 milligrams per deciliter civarında tutulmaktadır.Kemirgenler, endojen insülin salgılanmasını artırarak glikoz infüzyonunu kompanse etme konusunda güçlü bir kapasiteye sahiptir. Bu nedenle, kan glikoz seviyelerinin göreceli olarak kararlı bir durumda tutulabilmesi için infüzyon süresince GIR artırılmalıdır. Buna rağmen, kan glikoz seviyeleri infüzyonun sonuna doğru azalma eğilimi gösterir.Ek olarak, yem ağırlık ölçümlerine dayanarak, glukoz ve intralipid infüzyonu yapılan hayvanlar kalorik besinler aldıkları için gıda alımlarını kendiliğinden azaltırlar. Salin infüzyonu yapılan kontrol sıçanlarının aksine, bu teknik bir kez kavrandığında, düzgün bir şekilde uygulandığında sıçan başına 30 ila 40 dakikada tamamlanabilir. Bu nedenle, bu prosedürün ardından, insülin salgılamasını veya insülin duyarlılığını sırasıyla ölçmek için genellikle hiperglisemik veya öglisemik hiperinsülinemik klempler uygularız.

a-model-of-chronic-nutrient-infusion-in-the-rat

Research

JoVE Journal

Medicine

Tıp

Bu videoda bir sıçan modelinde intraduodenal kanülasyon gösterilmektedir. Sıçanı uyuşturduktan sonra, duodenum yerleştirilir ve küçük bir delik oluşturulur. Eğimli uçlu J şeklinde bir kanül dikkatlice yerleştirilir ve sabitlenir ve kesi kapatılır. Kanüllü sıçan modeli, immünopatoloji çalışmaları için intra-intestinal infüzyonu mümkün kılar.

İmmünopatoloji Çalışmaları için Bir Sıçan Modelinde İntraduodenal Kanülasyon

Bu protokol, uzun süreli kritik hastalığın merkezi olarak kateterize edilmiş bir fare modelini tanımlar. Sepsisi indüklemek için çekal ligasyon ve ponksiyon yöntemini, insan klinik ortamını taklit etmek için sıvılar, ilaçlar ve besin uygulaması için merkezi bir venöz hat kullanımı ile birleştiriyoruz.

Kritik Hastalık Fare Modeli Sıvılar, Uyuşturucu ve Besin İdaresi için Santral Venöz Hattı Kullanımı

Bu protokol, kemirgenlerde aşırı yeme ve obeziteyi modellemek için son derece lezzetli, batı tarzı bir kafeterya diyetinin kullanımını açıklamaktadır. Burada, gıda seçimi, hazırlanması ve ölçümü nün ayrıntılı bir anahatını sağlamakta ve sağlam ve tekrarlanabilir bir fenotip oluşturmaya yardımcı olan metodolojik faktörleri açıklıyoruz.

Kemirgenlerde Diyetkaynaklı Obezitemodellemeiçin Güvenilir Bir Yöntem olarak Lezzetli Batı tarzı Kafeterya Diyet

Sıçanların üstün mezenterik arterinde (SMA) uzun süreli infüzyona erişim, SMA'nın proksimal bir dalının kanülasyonundan oluşan cerrahi bir işlemdir. Kanolün karın yarasından çıkar ve deri altı boşluğundan kesitler arası kıvrıma kadar tünellanır.

Sıçanın İnce Bağırsaklarını Hedeflemek: Üstün Mezenterik Artere Uzun Süreli infüzyon

Kronik pankreatit (CP), genellikle inatçı karın ağrısı ile ilişkili olan pankreasın iltihabı ve fibrozisi ile karakterize bir hastalıktır. Bu makalede, 2,4,6 -trinitrobenzen sülfiyonik asit (TNBS) ile safra kanalı infüzyonu yoluyla CP'nin fare modelini oluşturma tekniğinin iyileştirilmesine odaklanmaktadır.

Safra Kanalı TNBS infüzyonu ile Kronik Pankreatit için Bir Fare Modeli

Bu makale, diyete bağlı obezitenin Sprague-Dawley sıçan modelinde yüksek yoğunluklu aralıklı antrenman (HIIT) protokolünün morfometrik yanıtlarını ve antrenman performansı sonuçlarını sunmaktadır. Bu protokolün amacı, zayıf ve obez sıçanlarda egzersiz yoğunluğunu en üst düzeye çıkarmak ve HIIT'e fizyolojik yanıtları belirlemektir.

Egzersiz eforunu en üst düzeye çıkarmak ve sıçanlarda fizyolojik değişiklikleri indüklemek için kronik yüksek yoğunluklu aralıklı antrenman ve diyete bağlı obezite modeli

Farelerde, M&amp;M'lere (yağ ve şekerden yapılan oldukça lezzetli bir gıda) aralıklı erişim kullanılarak bir tıkınırcasına yeme modeli kuruldu. Bu yüksek yağlı, yüksek şekerli yiyeceğe aralıklı erişimi olan fareler, yiyeceğe sürekli erişimi olan veya hiç erişimi olmayan farelere kıyasla stres benzeri davranışlar, artan kalori alımı ve bu yiyeceği standart yemek yerine tercih etme gösterdi.

Farelerde Aralıklı Tıkınırcasına Alım Modeli

Bu protokol, greft reddine ilaç müdahalesinin zaman seyri değerlendirmesi için ileostomi ile sıçan tabanlı bir bağırsak transplantasyon modelini tanımlar.

Longitudinal Prognoz Değerlendirmesi için Eksteriorize İleostomi ile İntestiorize İleostomi ile İntestinal Transplantasyonun Sıçan Greft Rejeksiyon Modeli

Bu çalışma, genellikle yağlı pankreas ile karakterize edilen basit obezite sergileyen obez sıçan modelleri oluşturmak için tekrarlanabilir ve standartlaştırılmış bir yöntem sunmaktadır. Ayrıca pankreas dokusu örneklemesi ve immünohistokimya için ayrıntılı protokoller içerir.

Tipik Yağlı Pankreas ile Obez Sıçan Modelleri Oluşturmak için Bir Metodolojinin Geliştirilmesi ve Doğrulanması

Bu makale, örnek toplamadan bir gün önce yapılan kontralateral nefrektomi ile tek taraflı böbrek IRI kullanan iskemik CKD modelini sunmaktadır; bu protokol, serum tabanlı fonksiyonel değerlendirme, yüksek sağkalma ve tekrarlanabilir KBD patolojisini 28 ve 42 gün içinde mümkün kılarak mekanik ve girişimsel çalışmalar için çok yönlü bir platform sağlar.

Böbrek Iskemisi/Reperfüzyon Yaralanması Nedeniyle Akut Böbrek Hastalığına Geçişin Fare Modeli

Keşfedin sıçanlarda kronik besin fazlalığı modelini; juguler ven ve karotis arter kateterizasyonu ile glukoz ve lipid infüzyonu yaparak metabolik sağlık üzerindeki etkileri inceleyin. Bu yöntem, beta hücre fonksiyonundaki erken değişiklikleri araştırmak için idealdir.

Sıçan Kronik Besin İnfüzyon Bir Model

Daha fazla video keşfet