Sıçan Kronik Besin İnfüzyon Bir Model

Bu prosedürün genel amacı, kronik besin fazlalığı için bir model olarak glikoz ve lipitleri infüze etmek için sıçanların juguler venlerini ve karotis arterlerini kateterize etmektir. Bu, genel anestezi altında önce juguler ven ve karotis arterin kateterize edilmesiyle gerçekleştirilir. İşlemden sonra, sıçanın altı gün boyunca iyileşmesine izin verilir.

Daha sonra kateterler, kafes üstüne monte edilmiş bir ip ve fırdöndü vasıtasıyla infüzyon pompalarına bağlanır. Son olarak, sıçan glikoz ve lipit çözeltileri ile infüze edilir. Sonuç olarak, kronik besin fazlalığının glikoz homeostazı üzerindeki etkilerini gösteren sonuçlar elde edilebilir.

Bu tekniğin, örneğin genetik modeller gibi diğer modellere göre en büyük avantajı, besin fazlalığına yanıt olarak beta hücre fonksiyonundaki erken değişikliklerin incelenebilmesidir. Diğer bir avantaj, dolaşımdaki glikoz ve intralipid veya lipit seviyelerinin spesifik olarak modüle edilebilmesidir. Şimdi, bu tekniği beta hücre fonksiyonundaki değişiklikleri incelemek için kullanıyoruz, ancak elbette, insülin direnci gibi diğer fizyolojik parametrelere bakmak için de kullanılabilir.

Örneğin, prosedürü göstermek laboratuvarımda bir hayvan sağlığı teknisyeni olan Grace Ferguson olacak, Başlamadan önce, tüm cerrahi aletleri işlemden en az 16 ila 24 saat önce otoklavla sterilize edin. Kanülasyon tüpünü sterilizasyon için %2.6 glute aldehit içine yerleştirin. İnfüzyon koşulu başına dört sıçan kullanarak, her bir sıçanı tartın ve daha sonra analjezi ve antikolinerjik ilaçlar için dozajları hesaplayın.

Sıçatanı% iki ila% 3 izo, flor ve oksijen ile uyuşturduktan sonra, sedasyon seviyesini ayak parmağı ile kontrol edin. Fareyi çimdikleyin ve midesine yerleştirin. Kulakların arkasındaki alanı omuzların tabanına kadar tıraş edin, ardından hayvanı sırt üstü çevirin ve boynun altındaki bölgeyi ön pençelere doğru tıraş edin.

Daha sonra, cerrahi bölgeyi klorheksidin alkol ve iyot ile üç kez dezenfekte edin ve ardından carprofen ve glikopirrolat uygulayın. Fareyi cerrahi alana ve daha sonra aseptik teknikle aktarın. Beş ünite heparinize salin ile doldurulmuş bir mililitrelik şırıngaya bağlı bir PE 50 kanül kullanarak, sağ juguler ven ve sol karotis arteri kanül edin İyileşme döneminde pıhtılaşmayı önlemek için, kanülleri 50 ünite heparinize salin ile körelmiş 23 gauge iğne ile yıkayın ve ardından ameliyattan sonra her kanülü kapatmak için başka bir 23 gauge pim kullanın, Kesici dişlerin altından yaklaşık 2,5 milimetre kesin ve kanüllerin yenmesini önlemek için fareyi bir infüzyon ceketine yerleştirin.

ISO florun tahliyesine yardımcı olmak için dakikada bir litre oksijen verin. Fareyi tamamen uyanana kadar ısıtılmış bir kafese koyun. Birinci ve ikinci günlerde, ameliyat sonrası.

Sıçanları tartın, birinci gün iki kez ve ikinci gün bir kez deri altına glikopirrolat uygulayın ve ameliyattan sonraki yedinci günde metin protokolüne göre gerektiğinde ek tedaviler sağlayın. İnfüzyon akış hızlarını hesaplamak için her bir fareyi tarttıktan sonra, juguler venin kanülünü yayın içindeki bir boru uzantısı ile mavi fırdöndüye bağlayın. Kanülleri beş ünite heparinize salin ile yıkayın ve ipe bağlayın.

Ardından, fareyi ip ve döndürme kullanarak infüzyon sistemine bağlayın. Şimdi pıhtılaşmayı önlemek için kanülleri bir kez daha beş ünite heparinize salin ile yıkayın. İnfüzyonu gerçekleştirmek için infüzyona başlamadan önce farelerin ipe alışmasına ve en az 24 saat dönmesine izin verin.

Her sıçanın karotidisinden 0.15 mililitre kan çekerek başlayın ve glisemiyi ölçün. Şah damarlarını yıkayın ve her iki kanülün pıhtılaşmasını önlemek için 50 ünite heparinize salin kullanın. Kan örneğini% 2 EDTA içeren 0.5 mililitrelik bir toplama tüpüne aktarın, daha sonra iki dakika boyunca 10.000 RBM'de santrifüjleyin ve plazmayı eksi 20 santigrat derecede dondurun.

Burada listelenen infüzyon koşullarının her biri için iki adet 60 mililitrelik şırınga doldurun. Her bir çözelti çiftini birleştirmek için y konektörleri ve sterilize edilmiş coex T 22 hortumu kullanın. Daha sonra şırıngaları bir şırınga pompasına bir Liman 33'e yerleştirin, şırıngayı bir pompanın ön konumuna ve iki şırıngayı arka konuma yerleştirin.

Ardından, kafesin altını değiştirin ve 150 gram standart yemekle değiştirmeden önce kafes ızgarasının üstündeki tüm yiyecekleri çıkarın. Ardından şırıngaları kafes ızgarasındaki fırdöndüye bağlayın ve şırıngaları uygun şekilde yıkayın. En son belirlenen vücut ağırlığını kullanarak hatlarda sıkışan havayı çıkarmak için, deney boyunca korunması istenen önceden belirlenmiş glikoz seviyelerine dayalı olarak glikoz infüzyon hızını veya GIR'i saatte mililitreye dönüştüren bir Excel dosyası kullanarak infüzyon akış hızlarını hesaplayın.

Pompayı, üreticinin ayarlarına göre 60 şırınga için akış hızlarını yönetecek şekilde ayarlayın ve şırınga bir ve şırınga iki için hızı girin. Ardından pompayı çalıştırın. Pompayı çalıştırdıktan sonra, fırdöndüden veya kanüllerden sızıntı olmadığını ve infüzyon tüpünün bükülmediğini doğrulayın.

Ayrıca, boruda hava kabarcığı olmadığını doğrulayın. Üç saatlik infüzyondan sonra, küçük bir kan örneği alın ve glisemi çizimini ölçmek için taşınabilir bir glikoz monitörü kullanın. Küçük hacimler kan hacminin ve/veya hematokritin değişmesini önleyecektir.

Bu zaman çizelgesini kullanarak ek kan örnekleri alın. Ölçülen glisemi değerlerine dayanarak, kan şekerini desilitre başına 220 ila 250 miligramda tutmak için şırınga oranını değiştirin. Şırınga iki oranı, serbest yağ asitlerini litre başına bir mili molde tutmak için sabit kalır.

24 saatlik infüzyondan sonra kafesin tabanını değiştirin ve kafes ızgarasında kalan yiyecekleri tartın. UNE kısmını kafese geri koyun, ızgara yapın ve 72 saat boyunca gerektiği gibi şırıngaları yeniden doldurun. Fareyi herhangi bir iltihap veya rahatsızlık belirtisi açısından gözlemleyin ve gerektiğinde uygun bakımı uygulayın.

İnfüzyonun sonunda, sıçanlar hiperglisemik veya u glisemik hiperinsülinemik kelepçe çalışmalarına tabi tutulabilir ve daha sonra histoloji veya kuşgözü izolasyonu için pankreası toplamak üzere ötenazi veya ötenazi yapılabilir. Bu şekil, 72 saatlik infüzyon süresi boyunca kan, glikoz ve yağ asidi seviyelerini göstermektedir. Burada tasarım gereği gösterildiği gibi, glikoz seviyeleri infüzyon boyunca desilitre başına 220 ila 250 miligram civarında tutulur.

Kemirgenler, endojen insülin sekresyonunu artırarak glikoz infüzyonunu telafi etmek için güçlü bir kapasiteye sahiptir. Bu nedenle, kan şekeri seviyelerinin göreceli olarak sabit bir durumda tutulması için infüzyon sırasında GIR'in arttırılması gerekir. Bununla birlikte, kan şekeri seviyeleri infüzyonun sonuna doğru düşme eğilimindedir.

Ek olarak, yemin ağırlık ölçümlerine dayanarak, glikoz ve intralipid ile aşılanmış hayvanlar kalorili besinler aldığından, gıda alımlarını kendiliğinden azaltırlar. Bir kez ustalaştıktan sonra salinle aşılanmış kontrol sıçanlarının aksine, bu teknik uygun şekilde yapılırsa sıçan başına 30 ila 40 dakika içinde gerçekleştirilebilir. Bu prosedürü takiben, insülin sekresyonunu veya insülin duyarlılığını ölçmek için genellikle hiperglisemik veya U glisemik hiper insülin anemik klempleri uygularız.