14 Mayıs 2013
Biz fare greft arteriosclerois (GA) aynı doğuştan gerginlik bir alıcıya bir fare damar segmentinin interpozisyonu içeren modeller için protokolleri tarif. Damar donör içine ek genetik değişiklikler geri melezlenmesine tarafından, model GA belirli genlerin etkisini değerlendirebilir.
Aşağıdaki deneyin genel amacı, bir donör damarı bir alıcının abdominal aortuna nakletmektir. İlk adım, torasik aortu donör fareden diseksiyon yapmaktır. Daha sonra alıcı farenin abdominal aortunda anastomoz bölgeleri oluşturulur.
Donör damar daha sonra alıcı abdominal aort içine implante edilir. Sonuç olarak, başarılı transplantasyona, alıcı farenin sağlam arka bacak motor fonksiyonu ile erişilebilir. Dolayısıyla bu model graft arteriyel sklerozun patogenezini anlamamıza yardımcı olacak.
Ve teknik olarak zorlu bir iştir, bu da çok fazla pratik uygulama ve hastanın mükemmel olmasını gerektirir. Bu yüzden prosedürü göstermek Dr.Chen ve Louanne'nin asistanı olacak. Başlamak için, donör farede uygun anestezi derinliğini onaylayın.
Anestezi uygulandıktan sonra, fareyi ameliyat mikroskobu altında bir tepsiye sırtüstü pozisyonda yerleştirin. Kalbi açığa çıkardıktan ve tuzlu suyla yıkadıktan sonra, göğsü tekrar tekrar iyot ve alkol ovma ile temizleyin, torasik aortun tüm uzunluğunu ortaya çıkarmak için kalbi ve akciğerleri çıkarın. Görüntülendikten sonra, torasik aortu çevreleyen dokudan dikkatlice incelemeye başlayın.
Bel dallarına ulaşıldığında, kesmeden önce ipek dikişle aort damarının yakınına bağlayın. Çevreleyen dokudan serbest bırakıldığında, tüm torasik aortu eksize edin. İzole edildikten sonra, donör aortu heparinize salin ile yıkayın ve transplantasyona kadar bu solüsyonda buz üzerinde saklayın.
Alıcı farede yeterli anestezi sağlandıktan sonra, kürkü ön karın bölgesinden tıraş edin. Gözleri oftalmik merhemle örtün ve bölgeyi daha önce görüldüğü gibi temizleyin. Hazır olduğunda, fareyi ameliyat mikroskobu altında bir tepsiye sırtüstü pozisyonda yerleştirin.
Karın duvarını orta hattan ksifoidden pubise kadar kesin ve ardından duvarı ayırmak ve karın boşluğunu ortaya çıkarmak için bir ekartör kullanın Maruz kaldıktan sonra, bağırsakları tuzlu suyla nemlendirilmiş gazlı bezle sarın ve karın boşluğundan yukarı ve uzağa itin. Kalan karın bölgelerini sarmak için daha fazla tuzlu nemli gazlı bez kullanın ve bunu rektumu karnın sağ tarafına geri çekmek için kullanın. Sonra, üreme organlarını aşağı doğru hareket ettirin.
Tuzlu su çözeltisi uygulayarak maruz kalan dokuları nemli tutmayı unutmayın. Böbrek damarının proksimalinde ve aort bifurkasyon küntüsünün distalinde bulunan infrarenal aortu düzenli olarak tanımlayın. İnferior vena cva'dan ayırmak için dikkatlice inceleyin.
Aortun bu segmentinden kaynaklanan tüm küçük dalları tanımlayın, bağlayın ve kesin. Aort segmenti izole edildikten sonra, her iki ucuna yaklaşık beş milimetre aralıklarla bir vasküler klemp yerleştirin. Daha sonra, abdominal aortu klempler arasında keserek anastomoz bölgelerini oluşturun.
Keskin mikro makas kullanarak, donör aort greftini yerleştirmek için aortun küçük bir segmentini kesik bir kesik ucundan çıkarın. Kalan kanı çıkarmak için heparinize salin kullanarak kelepçeler arasındaki aort segmentlerini yıkayın. İşlem boyunca her iki aort örneğini de heparinize salin solüsyonu ile periyodik olarak sulamayı unutmayın.
Daha sonra, transplantasyon için 2,5 milimetre uzunluğunda bir segment grefti oluşturmak için donör aortun her iki tarafını da kesin. Donör aort greftini, sürekli dikişler için proksimal ve distal uçları hizalayacak şekilde yerleştirin. Kalma dikişlerini önce her iki ucun saat üç ve dokuz pozisyonlarına yerleştirin.
Daha sonra, kesilen kenarları üç ila dört koşu sütürüyle birleştirin ve kesintili dikişler için çalışan dikişleri çift düğüm ile kalan dikişlere bağlayın. Greftin her iki tarafının saat üç ve dokuz pozisyonlarında dört anastomoz bölgesi oluşturun. Birinci. Ardından, bu bölgelerin her biri arasına yerleştirilen üç ila dört dikişle kesilen kenarları birleştirin.
Dikişler yerleştirildikten sonra, grefte retrograd akışa izin vermek için distal klempi serbest bırakın. Herhangi bir kanama bölgesini belirleyin ve üç dakika içinde ek dikişler yapın. Tatmin edici hemostaz elde edildiğinde, proksimal kelepçe amp'i serbest bırakın.
Greft açıklığı, kuvvetli nabız atışının varlığı ile doğrulanabilir. Nabız azalırsa, trombozu önlemek için damar içine heparin enjekte edin. Hazır olduğunda, bağırsakları karın boşluğuna geri koyun ve kas ve cilt katmanlarını kapatın.
Alıcı fareyi ılık, temiz bir kafese yerleştirin ve bilinç geri gelene kadar bir ila iki saat izleyin. İyileşmeden sonra farenin motor fonksiyonunu değerlendirin ve yine ikinci gün, arka bacaklarda herhangi bir işlev bozukluğu gözlenmezse bir transplantasyon ameliyatı başarılı olur. Ameliyattan dört hafta sonra alınan arter greftlerinin histolojik analizi, bir erkek donörün kadın alıcılarında damar duvarında artmış bir kalınlık olduğunu ortaya koydu.
Bununla birlikte, erkekten erkeğe grupta greft arterioskleroz gözlenmedi. Bu örnekte, bir erkek donörden alınan torasik arter, bir interferon gama nakavt faresine nakledildi, daha sonra alıcı farede interferon gama ekspresyonu indüklendi. Numuneler alınmadan önce.
Birkaç hafta sonra, arter greftlerinin histolojik analizi, tedavi edilen grupta greft arterioskleroz gözlenmediğini göstermektedir. Artık bu ameliyatı nasıl yapacağınızı biliyorsunuz. Denemeye devam et.
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin
Bu makale, bir donör damarın alıcı fareye transplantasyonuna odaklanarak, fare greft arteriyoskleroz modeli için protokolleri açıklamaktadır. Model, belirli genetik değişikliklerin greft arteriyosklerozu üzerindeki etkisini değerlendirmeyi amaçlamaktadır.
Graft arteriosklerozu, graft intimasındaki düz kas hücresi proliferasyonunun etkisiyle uzun vadeli transplant başarısızlığının temel nedenlerinden biri olmaya devam etmektedir. Mevcut preklinik modeller, bağışıklık aracılı hızlı graft kaybı nedeniyle genellikle başarısız olmakta ve bu durum mekanistik çalışmaları sınırlandırmaktadır. Açıklanan fare modelleri, donör hücrelerin uzun süreli sağkalımını ve IFN-γ bağımlı patolojiyi mümkün kılarak bu sorunu aşmakta, böylece vasküler graft araştırmalarında hedef doğrulamayı ve mekanistik risk azaltma çalışmalarını desteklemektedir.
Model, hedef doğrulamasından preklinik değerlendirmeye kadar uzanan keşif sürekliliğine uyum sağlayarak, öncü bileşik optimizasyonu öncesinde vasküler greft yetmezliğinin mekanistik çalışmalarının yürütülmesine olanak tanır.