Name: Bir Kullanarak Non-obez Diyabetik Farelerde Mide boşaltılması Değerlendirilmesi 13 C -oktanoik asit Nefes Testi (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2013-03-23T14:00:00.000+00:00
Duration: 12 min 24 s
Description: Keşfedin mide boşaltılmasını farelerde invaziv olmayan nefes testiyle ölçme yöntemini. Bu teknik tekrarlanabilir ölçümlerle gastroparezi araştırmalarına katkı sağlar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Bu video yayın DK 68.055 Programı Projesi Hibe &quot;Enterik Sistemi Patobiyoloji&quot; Diyabet ve Sindirim ve Böbrek hastalıkları Ulusal Enstitüsü (NIDDK) fon ile mümkün olmuştur. Christopher T. Creedon Rochester Public Schools Mentorluk Programı tarafından desteklenmiştir. Biz teknik asistanlığı, sekreterlik hizmetleri ve Los Gatos Research, Inc (Mountain View, CA) &#39;dan Dr Douglas Baer Bayan Kristy Zodrow Sayın Gary Stoltz ederim.

1. Fare Eğitim ve Alışma <ol><li> Analizden önce, test koşullarına onları alıştırmak için sabit hava akışı ile 2-4 saat için test odaları içinde tüm fareler koydu. Bu belirgin aksi gecikmiş mide boşalması aberan algılama neden olabilecek stres seviyelerini azaltır. Farelerin mide boşalma deneyi koşuyormuş gibi aynı şekilde davranın. Oktanoik asit eklemeden yumurta sarısı (daha bakınız) hazırlayın ve her fare için 0.2 g yem. </li><li> Fareler yeterince (genellikle 2-3 kez) eğitilmiştir kadar bu işlemi tekrarlayın. Çevre koşulları aynı tutulur gibi fareler genellikle kolayca sürece alışmışsındır. </li></ol> Not: alışkın fareler hızlı sessizce yeni bir çevre ve geri kalanı razı olurken Sigara alışkın fareler, odasına transferinden sonra yaklaşık 1 saat boyunca hareket ve arınmak ve sık sık idrara çıkma devam ediyor. Hayırte: Deneme sırasında: Böyle aşırı idrara çıkma, defekasyon, yumurta yeme ilgi eksikliği gibi alışkanlık kaybı belirtileri Monitör hayvanlar. Eğer bu durumda yeniden 1-2 kez önceden gastrik boşalma veri elde etmek boş bir odasında habituating düşünün. Bu deney yaparken Tutarlılık son derece önemlidir. Şeyleri aynı şekilde yaparak her zaman güvenilir ve tekrarlanabilir sonuçlar elde etmek için tek yoldur. Bu, kendi kafes arkadaşları itibaren fareler ayıran değil, aynı zamanda, her gün (örneğin insülin) kesinlikle gerekli olmadıkça, fareler açlık ve aynı zamanda mide boşalması Teste başlamadan ve fareler işleme benzer bir şekilde tedavi veren içerir. 2. Testi Öğün İçeren İzotop hazırlanması <ol><li> 50 ml şahin tüp içinde yumurta sarısı 5 g tarttığını ile başlayın. Taze bir sınama yemek hazırlamak için her deneysel gün bu adımları yineleyin. </li><li> Bir concentr ile oktanoik asit için 10 ul ekleyumurta ihtiva eden 50 ml Falcon tüp 2 ul / g tirme ve şahin tüp içinde bir spatula ile 1 dakika boyunca kuvvetli bir şekilde karıştırılır. </li><li> O pıhtılaşır ve tutarlılık küçük toplar yapmak için uygundur kadar yumurta sonra bir cam behere aktarılır ve bir Bunsen brülör üzerinde ısıtılır. Bu genellikle yaklaşık 30 saniye sürer. </li></ol> Not: yumurta sarısı topları fare başına 0.2 g tartmak gerekir. Bu, tüm farelerde kümülatif doz sabit tutmak için önemlidir. 3. Deneme Başlatma <ol><li> Coprophagia önlemek için metal bir &quot;kafes-bottom&quot; açlık raf (12 saat) hızlı fare gecede, mide boşalmasını için bir kez eğitimli ve hazır. Onlar içme suyu ücretsiz olarak sahip olduğunuzdan emin olun. Diyabetik farelerde mevcut deneyde kullanılan olduğundan, onlar fazla 16 saat boyunca oruç edilmemelidir. </li><li> Mide boşalma odaları kurmaya başlayın. Havada kurutulmuş olmuştur temiz odaları ve kapaklar kullanın. Ayrıca, herhangi biranalizörü veya CO 2 hava beslemesi odalarına bağlayan tüpleri nemsiz olmalıdır; su analizörü tarafından okunan sinyal ile etkileşime girebilir </li><li> Sabit bir hava akışını sağlamak giriş tüpleri için odaları bağlayın. Daha sonra makine ile odalarından çıkış boruları bağlayın. Tüpleri kapatın ve hava akımını açın. </li></ol> Not: kolayca ve güvenli bir şekilde kapatmak kapatılır böylece kapağın kapak sonunda vazelin çok küçük bir miktarda uygulanır. Bu sızdırmaz conta fareler tarafından üretilen tüm karbon dioksit toplamak için gereklidir. 4. Deneysel Prosedürler <ol><li> Her fare ağırlığındaki ile başlayın. Vücut ağırlığı onların sürekli sağlıklı bir ölçüdür. Ardından uygun odasında her fare yerleştirin. Bu hava şu anda odalarına akan adres elbette önemlidir. </li><li> Ölçümü başlatmak için, farelerin ayarlamak önce odalarına gelmesini bekleyinhava seviyelerinin ing. </li><li> Fareler sakin görünen sonra, hangi, birkaç dakika sürebilir her fare odası için hava akış hızını ayarlayabilirsiniz. Bu, her bir fare için farklı olabilir. Tipik olarak, hava akış CO 2 kullanılmakta olan herhangi bir ekipman ile tespit edilebilir düzeyde nefes verme ulaşır olduğundan emin olmak için, ve seviye sağlıklı hava devir hızı sağlamak için yeteri kadar düşük kalmasını sağlamak için, deney başında ayarlanır. Biz milyonda 1,000 ve 1,500 parçalar arasındaki ilk CO 2 düzeyleri kullanın. </li><li> Ayarlamaları ile zorluk varsa, hava sızdırmazlığını kontrol edin. Sonra odalarının her biri için işlemi yineleyin ve hava akışı için yapılan düzeltmeler CO 2 seviyesi düzeltilmiş olup olmadığını görmek için ölçümler başka bir tur için izleyebilirsiniz. Bu farelerin beslenme öncesinde okuma istikrarlı bir temel elde etmek için önemlidir. Biz kendi kendine kalibrasyon özelliği olan bir makine kullanabilirsiniz. Bu değilse durum kalibrasyon kontrol edilmelidir. </li><li> Bu elde edildikten sonra, yumurta yemek yönetmekilk olarak fare ve kayıt süre için her bir fare gıda alır. </li><li> Biz her fare için 13 CO 2 zenginleştirme eğri uydurma için yeterli değerlerini elde etmek için 4 saat süreyle yordamı çalıştırın. Fareler üzerinde CO 2 düzeyleri fareler için hala güvenli olduğundan emin olmak için her 30-60 dakika kontrol edin. </li><li> Farelerde test bitti hemen sonra yeme başlayabilirsiniz böylece test bitmeden gıda içeren yeni kutular hazırlayın. </li></ol>

<ol><li>Yeung, C. K., McCurrie, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+simple+method+to+investigate+the+inhibitory+effects+of+drugs+on+gastric+emptying+in+the+mouse+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Pharmacol.+Toxicol.+Methods%22%5BJournal%5D)">A simple method to investigate the inhibitory effects of drugs on gastric emptying in the mouse in vivo.</a> J. Pharmacol. Toxicol. Methods. 45, 235-240 (2001).</li>
<li>Osinski, M. A., Seifert, T. R., Cox, B. F., Gintant, G. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+improved+method+of+evaluation+of+drug-evoked+changes+in+gastric+emptying+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Pharmacol.+Toxicol.+Methods%22%5BJournal%5D)">An improved method of evaluation of drug-evoked changes in gastric emptying in mice.</a> J. Pharmacol. Toxicol. Methods. 47, 115-120 (2002).</li>
<li>Ghoos, Y. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Measurement+of+gastric+emptying+rate+of+solids+by+means+of+a+carbon-labeled+octanoic+acid+breath+test%5BTitle%5D)+AND+%22Gastroenterology%22%5BJournal%5D)">Measurement of gastric emptying rate of solids by means of a carbon-labeled octanoic acid breath test.</a> Gastroenterology. 104, 1640-1647 (1993).</li>
<li>Symonds, E., Butler, R., Omari, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Noninvasive+breath+tests+can+detect+alterations+in+gastric+emptying+in+the+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22Eur.+J.+Clin.+Invest%22%5BJournal%5D)">Noninvasive breath tests can detect alterations in gastric emptying in the mouse.</a> Eur. J. Clin. Invest. 32, 341-344 (2002).</li>
<li>Symonds, E. L., Butler, R. N., Omari, T. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Assessment+of+gastric+emptying+in+the+mouse+using+the+%5B13C%5D-octanoic+acid+breath+test%5BTitle%5D)+AND+%22Clin.+Exp.+Pharmacol.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Assessment of gastric emptying in the mouse using the [13C]-octanoic acid breath test.</a> Clin. Exp. Pharmacol. Physiol. 27, 671-675 (2000).</li>
<li>Verhulst, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Role+of+ghrelin+in+the+relationship+between+hyperphagia+and+accelerated+gastric+emptying+in+diabetic+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Gastroenterology%22%5BJournal%5D)">Role of ghrelin in the relationship between hyperphagia and accelerated gastric emptying in diabetic mice.</a> Gastroenterology. 135, 1267-1276 (2008).</li>
<li>Schoonjans, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+13C-octanoic+acid+breath+test%3A+validation+of+a+new+noninvasive+method+of+measuring+gastric+emptying+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Neurogastroenterol.+Motil%22%5BJournal%5D)">The 13C-octanoic acid breath test: validation of a new noninvasive method of measuring gastric emptying in rats.</a> Neurogastroenterol. Motil. 14, 287-293 (2002).</li>
<li>Choi, K. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Determination+of+gastric+emptying+in+nonobese+diabetic+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Physiol.+Gastrointest.+Liver+Physiol%22%5BJournal%5D)">Determination of gastric emptying in nonobese diabetic mice.</a> Am. J. Physiol. Gastrointest. Liver Physiol. 293, 1039-1045 (2007).</li>
<li>Atkinson, M. A., Leiter, E. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+NOD+mouse+model+of+type+1+diabetes%3A+as+good+as+it+gets%3F%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Med%22%5BJournal%5D)">The NOD mouse model of type 1 diabetes: as good as it gets?</a> Nat. Med. 5, 601-604 (1999).</li>
<li>Camilleri, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Clinical+practice.+Diabetic+gastroparesis%5BTitle%5D)+AND+%22N.+Engl.+J.+Med%22%5BJournal%5D)">Clinical practice. Diabetic gastroparesis.</a> N. Engl. J. Med. 356, 820-829 (2007).</li>
<li>Choi, K. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Heme+oxygenase-1+protects+interstitial+cells+of+Cajal+from+oxidative+stress+and+reverses+diabetic+gastroparesis%5BTitle%5D)+AND+%22Gastroenterology%22%5BJournal%5D)">Heme oxygenase-1 protects interstitial cells of Cajal from oxidative stress and reverses diabetic gastroparesis.</a> Gastroenterology. 135, 2055-2064 (2008).</li>
<li>Kashyap, P. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Carbon+monoxide+reverses+diabetic+gastroparesis+in+NOD+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Physiol.+GI%22%5BJournal%5D)">Carbon monoxide reverses diabetic gastroparesis in NOD mice.</a> Am. J. Physiol. GI. G298, G1013-G1019 (2010).</li>
</ol>

Yazarlar hiçbir rakip mali çıkarlarının olmadığını beyan ederim.

Açıklanan tekniği Burada farelerde katı mide boşalma vivo ölçümü tekrarlanan ve non-invaziv sağlar. Bu sistem, bu serbestçe hareket ve dönüş sağlayan hayvanlar ölçüm haznesi ölçülü olmayan bir avantajı vardır. Bu yabancı bir ortam olduğu için, farelerin hala eğitilmiş ve gastrik boşaltımı üzerindeki stres etkilerini önlemek için test odaları HABITUATED gerekir. Genel olarak, biz ardışık gastrik boşalma testleri arasındaki intra-fare değişkenliği% 10&#39;dan az ise mide boşalmasını veriler güvenilir var...

Bu yazıda farelerde mide boşalma non-invaziv ölçümü dahil teknik ve metodolojik hususlar anlatılmaktadır. Takip ederek protokolü burada açıklanan, araştırmacılar güvenilir ve tekrarlanabilir hastalığından dolayı gelişimi boşalma gastrik değişiklikleri takip edebilirsiniz, mide boşalımını farmakolojik ajanların etkilerini incelemek ve altta yatan hastalıkları veya kusurları 6,8 tedavisinde mide boşalma yanıtı izleyin 11,12. Önceki yayınlarda, 13 C uygulama oktanoik asit nefes testler, insanlarda ve hayvanlarda 3,8 gastrik boşalma ölçmek için yararlı bir yol olduğu gösterilmiştir. Bu çalışma ayrıntılı olarak açıklanmaktadır, 6-8 fazla güvenilir veri elde etmek için gerekli prosedürler diyabetli farelerde mide boşalma boylamsal bir çalışma için gerekli ay. Önceden yayınlanmış yöntemlere göre bu protokol izlenerek avantajları araştırmacı veri obtaine emin olmalarıdırd güvenilir ve tekrarlanabilir olacaktır. Buna ek olarak, toplama ve gaz numuneleri analiz için otomatik bir sistem burada açıklanan bir çalışmada eş zamanlı olarak takip edilebilir hayvanların sayısını artırır. Genel olarak, bu yazının amacı test etmek için farelerin alışma ve bu elde edilen sonuçlar değişkenlik azaltmak korumak anahtar faktörleri tespit etmektir. Mide boşalmasını in vivo ölçümü için, farelerin gecede oruç ve sabit hava akışı şeffaf plastik test odalarına koymak. Fareler tüpleri HABITUATED olsun sonra, bazal 2 seviyeleri belirlenmiş 13 CO ekshale ve hava akımı buna göre ayarlanır. Ardından, 13C-etiketli oktanoik asit ile karıştırılır yumurta sarısı oluşan bir test yemek yönetmek. Fareler oruç ve eğitimli olduğundan, genellikle 2 dakika içinde test yemeği yiyin. Yönetilen oktanoik asit bir mide absorbe değil ama duodenum ele alınacaktırd çevreleyen hava içinde 13 CO 2 &#39;lik bir zenginleşme elde yayımlanır ve nefes verirken 13 CO 2, içine karaciğerde metabolize alacak. Hava örnekleri belirlenen zaman aralıklarında toplanır ve karbon izotop analizci tarafından analiz edilir. Bütün bu süreçte hız sınırlayıcı adım mide boşalmasını ve CO 2 doğrudan etiketli yemek mide boşalımını karşılık 13 pulmoner atılımı olduğunu. <img src="/files/ftp_upload/50301/50301fig1.jpg" alt="Şekil 1" fo:content-width="6in" fo:src="/files/ftp_upload/50301/50301fig1highres.jpg"/> Şekil 1. Gastrik boşalma aparatın şematik. Gecelik açlık sonrası, fareler onları serbestçe hareket ve açmak için izin şeffaf odalarına yerleştirilir. Bir giriş tüpü taze ve sabit hava akını sağlayan ve bir çıkışı 13 C-to-12 ölçmek için izotop analizörü yol açarC oranı soluk verdi. Kamara da [13 C]-oktanoik asit içeren yiyecek teslimat için merkezi bir bağlantı noktası var.

<table border="1"><tbody><tr><td> ADI </td><td> ŞİRKET </td><td> CAT NUMARASI </td><td> YORUMLAR </td></tr><tr><td> Sabit bir hava besleme, akış kaynak yanı sıra kompozisyon </td><td> araştırma tesisi merkezi hava beslemesi </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Hava girişi, hava çıkışı, ve gıda yönetim açılış var 130 ml numune alma odası Hava beslemesi için plastik borular </td><td> In-house inşa </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Oktanoik asit </td><td> Cambridge izotop laboratuvarları (Andover, MA) </td><td> CLM-293-1 </td><td></td></tr><tr><td> Yumurta yemek hazırlamak için: <ul><li> küçük beher </li><li> 50 ml plastik tüp </li><li> Bunsen beki </li><li> yumurta </li><li> spatula </li></ul></td><td> Herhangi bir tedarikçi </td><td></td><td> Çalışınyumurta, besin içeriği ve lezzeti yemek yenmesi ve mide boşalmasını etkileyen beri yumurta tedarikçisi ile tutarlı olması </td></tr><tr><td> Karbon dioksit izotop analizörü </td><td> Los Gatos Research Inc (Mountain View, CA) </td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

bir kullanarak non-obez diyabetik farelerde mide boşaltılması değerlendirilmesi [<sup&gt; 13</sup&gt; c]-oktanoik asit nefes testi

Assessment of Gastric Emptying in Non-obese Diabetic Mice Using a [13C]-octanoic Acid Breath Test

Farelerde Mide boşalma çalışmaları en sık kullanılan teknikler hayvanlar ve yemek 1,2 postmortem kurtarma öldürülmesi gerektiğinden aynı hayvanda gastrik boşalma değişiklikleri takip etmek yetersizlik ile sınırlı kalmıştır. Bu yaklaşım, yaş ve hastalığın ilerlemesi ile mide boşalmasını değişiklikleri belirlemek için boylamsal çalışmalar önler. Yaygın olarak kullanılan [13C]-oktanoik asit için insanlarda 3 üre nefes testi ve fareler 4-6 Sıçanların 7 kullanılmak üzere modifiye edilmiş ve daha önce bu deney ilaçlara tepki olarak ve sırasında güvenilir ve gastrik boşaltımı değişikliklerine duyarlı olduğunu göstermiştir olmuştur diyabetik hastalık progresyonu 8. Bu video sunumu bu modifiye test prensibi ve pratik uygulama açıklanmıştır. Önceki çalışmada olduğu gibi LTJ NOD fare, tip 1 diyabet 9 olduğu bir örnek kullanılmaktadır. Bu farelerin bir oranda diyabet komplikasyonu, gastroparezi belirtileri gelişires mide 10 mekanik tıkanma olmadan gecikmiş mide boşalması ile karakterize. Bu kağıt testi yemek hazırlamak ve 4 saat gastrik boşalma veri ve nasıl elde edilen veriler analiz edinme, test için fareler eğitmek için nasıl kullanılacağını gösterir. Bu çalışmada kullanılan karbon izotop analiz cihazı aynı zamanda 12 fareler için ikinci hava örneklerinin otomatik numune için uygundur. Bu teknik, diyabet veya diğer uzun süreli hastalığı olan farelerin büyük gruplar mide boşalma boyuna takip sağlar.

Farklı farelerden elde edilen üç set bir temsilci veriler Şekil 2 &#39;de gösterilmiştir. Siyah grafisi normal mide boşalmasını bir fareden veri noktalarını temsil eder. Bu, zamanın bir fonksiyonu olarak ifade saat başına uygulanan dozun bir yüzdesi olarak ifade edilen hava dışarı verilen geri kazanılır 13 C fraksiyonu göstermektedir. Mavi eğri 168 dak &#39;lık bir T yarı değerine sahip bir Gecikmiş mide boşaltımı ile bir fare dan 40 dk ve kırmızı eğri bir T yarı değer ile boşaltma hızlandırı...

Bir non-invaziv ile mide boşalma belirlenmesi [<sup&gt; 13</sup&gt; C]-oktanoik dişi NOD LTJ farelerde izleme gastroparezi için asit nefes testi.

Bir Kullanarak Non-obez Diyabetik Farelerde Mide boşaltılması Değerlendirilmesi [<sup&gt; 13</sup&gt; C]-oktanoik asit Nefes Testi

Gastric emptying studies in mice have been limited by the inability to follow gastric emptying changes in the same animal since the most commonly used ...

Bu prosedürün genel amacı, 13 karbon Octa NOIC asit nefes testi kullanarak farelerde mide boşalımının in vivo ölçümü için bir yöntem geliştirmektir. Fareler ve diğer küçük hayvanlar, hastalıkların patofizyolojisini anlamamıza yardımcı olmak için elbette oldukça yararlı olmuştur; laboratuvarımız gastroparezis üzerine çalışmaktadır ve gastroparezis ile ilgili sorunlardan biri, hastalığı incelemek için mide boşalımını zaman içinde takip etme gereksinimidir. Mevcut teknikler, farenin midesine sıvı veya katı formda bir madde yerleştirilmesini ve daha sonra farenin öldürülerek mideden ne kadarının ayrıldığının tahmin edilmesini gerektirdiği için bu durum mevcut yöntemlerde bir sorun teşkil etmiştir.Amacımız, mide boşalmasını ölçmek için non-invaziv bir teknik geliştirmekti; bu doğrultuda, farelerde kullanabilmemiz için bilinen 13 karbon amino asit nefes testini uyarladık. Bu yöntem, zaman içinde tekrarlanan ölçümler yapmamıza ve ardından elde ettiğimiz bulguları hem histoloji hem de fizyoloji ile ilişkilendirmemize olanak tanır. Burada kullandığımız ekipman, işlemin manuel olarak da yapılabilmesine rağmen, prosedürü otomatik hale getirmemizi sağlar.Otomasyonun avantajı, yalnızca zamanla çok daha fazla mide boşalımı testi yapabilmemiz değil, aynı zamanda bunu birden fazla farede aynı anda gerçekleştirebilmemizdir. Burada, tek seferde 12 fareye kadar işlem yapabildiğimiz bir yöntemi göstereceğiz. Aşağıdaki animasyon, mide boşalımının in vivo ölçümü için hazırlanan mide boşalımı deney düzeneğini göstermektedir.Fareler, sabit hava akışına sahip şeffaf plastik tüplere yerleştirilir. Fareler tüplere alıştıktan ve hava akışı ayarlandıktan sonra, 13 karbon işaretli Octo NOIC asidi ile karıştırılmış yumurta sarısından oluşan bir test öğünü verilir. Fareler aç bırakıldıkları ve eğitildikleri için genellikle test öğününü yerler.İki dakika içinde, uygulanan OCT NOIC asidi duodenum tarafından emilecek, karaciğerde metabolize edilecek, salınacak ve dışarı atılacaktır; bu durum çevre havada 13 karbondioksit zenginleşmesiyle sonuçlanacak ve ardından bu durum izotop analizörümüz tarafından ölçülecektir. Fare vücudunda neler olduğuna daha ayrıntılı bir bakalım. 13 karbon işaretli OCT NOIC asidi içeren test öğününün yenilmesinin ardından, öğün mideye girer.OCT NOIC asidi midede bozulmadan kalır. Pilorus geçişinden sonra duodenumda hızla emilir. İşaretli bileşik portal ven aracılığıyla karaciğere ulaşır ve 13 karbon işaretli karbondioksite metabolize edilir.İşaretli karbondioksit venöz kanda serbest kalır ve nefes yoluyla dışarı atılır. Tüm bu süreçteki hız belirleyici basamak mide boşalmasıdır. Bu durum, 13 karbondioksitin pulmoner ekskresyonunun, işaretli öğünün mide boşalmasıyla doğrudan ilişkili olduğu anlamına gelir.Hava örnekleri belirli zaman aralıklarıyla toplanır ve karbon izotop analizörü ile analiz edilir. Çeşitli izotop analizörleri kullanılabilir. Bu çalışmada, düşük GATOS araştırma LGR 13 karbon izotop analizörü kullanmayı tercih ettik.Dört saat boyunca örnek toplamak, mide boşalma hızını yansıtan tekrarlanabilir 13 karbon dioksit kinetikleri sağlar. Eğri uydurma. Doğrusal olmayan regresyon kullanımı, yarı boşalma sürelerinin hesaplanmasına olanak tanır.Bu prosedür, kronik hastalığı olan farelerin takibi için uygundur. Bu çalışmada, insan tip 1 diyabeti için bir model olan dişi non-obese diabetic, N-O-D-L-T-J fareler kullanılmıştır. Analizden önce, stres seviyelerini en aza indirmek amacıyla tüm farelerin test odalarına alışmalarına izin verilir.Mide boşalmasında gecikme stresin karakteristik bir göstergesi olduğundan ve fareler, alışkanlık kazanmamış fareler hazneye aktarıldıktan sonra yaklaşık bir saat boyunca hareket etmeye, dışkılamaya ve idrar yapmaya devam ederler. Genellikle farelerin yeni ortamlarına hızla uyum sağladıkları zaman başarılı bir şekilde alışkanlık kazandıkları kabul edilir. Hazneye aktarıldıklarında, kısa bir keşif süresinin ardından, alışkanlık kazanmış fareler hazne içinde sessizce dinleneceklerdir.Alıştırılmış farelerde mide boşalma testi sonuçları, fare içi değişkenliğin %10'dan az olduğunu göstermelidir. Fareler eğitimlerini tamamlayıp mide boşalma testi için hazır hale geldiklerinde, deneyden bir gün önce aç bırakılmalıdır. Fareler, metal tel tabanlı bir aç bırakma rafında gece boyunca aç bırakılır.Fazya oluşumunu önlemek için, hayvanların içme suyuna serbest erişimi olduğundan emin olun. Diyabetik fareler 16 saatten fazla aç bırakılmamalıdır. Gastrik MCN deneyi sırasında tutarlılık son derece önemlidir.Farelerin aynı şekilde tutulması, her gün aynı saatte aç bırakılması, glikoz seviyelerinin kontrol edilmesi ve insülinin her gün aynı saatte uygulanması gibi faktörler; kullanıcı olarak her gün aynı kolonyanın sürülmesi ve aynı laboratuvar önlüğünün giyilmesi, tüm bu faktörlerin gastrik MTN verilerini değiştirecek olması nedeniyle son derece önemlidir. Yumurta öğünü hazırlama aşamasında kullandığımız malzemeler bir yumurta OC asidi, bir cam beher, bir falcon tüpü ve bir eğik uçlu spatüldür.İşe, 50 mililitrelik bir falcon tüpüne beş gram yumurta sarısı tartarak başlayın. Ardından, yumurta içeren Falcon tüpüne gram başına iki mikrolitre konsantrasyonda 10 mikrolitre okin NOIC asidi ekleyin ve falcon tüpü içindeki spatulayla kuvvetlice karıştırın. Daha sonra yumurta bir cam behere aktarılır ve pıhtılaşana ve kıvamı uygun hale gelene kadar bir bunsen beki üzerinde bir dakika boyunca ısıtılır.Küçük toplar yapmak için bu işlem tipik olarak yaklaşık 30 saniye sürer. Yumurta sarısı topları fare başına 0,2 gram ağırlığında olmalıdır. Tüm farelerde kümülatif dozun sabit tutulması önemlidir.Kabul edilebilir kümülatif doz geri kazanım aralığımız %55 ile %100 arasıdır. Gastrik boşalım odalarını kurarak başlayın. Hava ile kurutulmuş temiz odalar ve kapaklar kullanın. Ayrıca, odayı analizöre veya karbondioksit hava kaynağına bağlayan tüm tüpler nemden arındırılmış olmalıdır.Nem, analizör tarafından okunan sinyali etkileyebilir. Kamaraları, hidrokarbonlardan arındırılmış hava akışı sağlayan giriş tüplerine bağlayın. Karbondioksit miktarındaki herhangi bir varyasyon baz hattı değerini değiştirebileceği için, bu havanın her zaman tutarlı olması önemlidir.Ardından, odacıklardan gelen çıkış tüplerini makineye bağlayın, tüpleri kapatın ve hava akışını başlatın. Kapakların kolayca ve güvenli bir şekilde kapanıp sızdırmaz hale gelmesi için uç kısımlarına çok az miktarda vazelin sürün. Fareler tarafından üretilen tüm karbondioksitin toplanabilmesi için bu sıkı sızdırmazlık gereklidir.Stres seviyelerini azaltmak için küçük bir fare tutucu kullanarak fareleri tartın. Vücut ağırlığı, farelerin sağlıklı durumlarının devam ettiğinin bir ölçütü olarak belirlenir. Ardından her bir fareyi uygun bölmeye yerleştirin.Bu aşamada odacıklara hava akışının sağlanması önemlidir. Her fareye bir takip cihazı implante edilir. Farelerin ağırlığı, kan glukozu ve tedavilerine ilişkin veriler, bu numarayı kullanan bir yazılım veri tabanı aracılığıyla takip edilir.Fare kimlik numarasını doğrudan depolama verilerine otomatik olarak bağlamamıza olanak tanıyan bir yazılım kullanıyoruz. Bu işlem elbette manuel olarak da gerçekleştirilebilir. Ölçüme başlamak için, hava seviyelerini ayarlamadan önce farelerin haznelere alışmasını sağlayın.Fareler sakinleştiğinde (bu işlem birkaç dakika sürebilir), her bir fare hücresi için hava akış hızını ayarlayın. Bu değer her fare için farklılık gösterebilir. Genellikle hava akışı, deneyin başlangıcında, nefes verme sonucu çıkan karbondioksitin kullanılan ekipman tarafından tespit edilebilecek seviyelere ulaştığından ve sağlıklı bir hava döngüsü sağlamak için seviyenin yeterince düşük kaldığından emin olmak amacıyla ayarlanır.Ayarlamalarla ilgili zorluk yaşanması durumunda 1000 ile 1500 ppm arasında başlangıç karbondioksit seviyeleri kullanıyoruz; hava sızıntısı olup olmadığını kontrol edin. Ardından, işlemi her bir hazne için tekrarlayın ve hava akışında yapılan ayarlamaların karbondioksit seviyesini düzeltip düzeltmediğini görmek için bir dizi ölçüm daha yapın. Farelerin beslenmesinden önce kararlı bir bazal okuma değeri elde etmek önemlidir.Bu durum gerçekleştiğinde, yumurta yemini birinci fareye verin ve her farenin yemeğini aldığı saati kaydedin. Her fare için 13 karbondioksit zenginleştirme eğrisini uydurmaya yetecek kadar değer elde etmek için prosedürü dört saat boyunca yürütüyoruz. Karbondioksit seviyelerinin hala güvenli olduğundan emin olmak için fareleri her 30 ila 60 dakikada bir kontrol edin.Fareler için cihazımız her 25 saniyede bir 12 karbon dioksit, 13 karbon dioksit ve su konsantrasyonlarını ölçmektedir. Bu sayede, okumalar arasında beş dakikalık bir aralık olacak şekilde 12 fare aynı anda analiz edilebilir. Manuel örnekleme yapılıyorsa veya başka bir cihaz kullanılıyorsa, okumaların en az beş ila 10 dakikalık aralıklarla alındığından emin olun.Farelerin test bittikten hemen sonra yemeye başlayabilmeleri için test sona ermeden önce içinde yem bulunan yeni kutular hazırlayın. Bu grafik, normal gastrik boşalmaya sahip bir farenin veri noktalarını temsil etmektedir. Grafikte, verilen dozun saat başına yüzdesi olarak ifade edilen ve solunan havada geri kazanılan 13 karbon fraksiyonu zamanın bir fonksiyonu olarak gösterilmektedir.Veri noktaları aşağıdaki denkleme sahip bir eğri ile uydurulmuştur. Neden saat başına nefesten geri kazanılan 13 karbon yüzdesi ile B ve CA regresyon sabiti kullanılmıştır? T yarım ömrü, laboratuvarımızda daha önce yapılan bir çalışmada belirlendiği üzere, bu eğrinin parametrelerinin ters gama fonksiyonuna yerleştirilmesiyle hesaplanır; diyabetik olmayan, 9 ila 15 haftalık bir NOD faresinin normal gastrik boşalma yarım süresi, gri kutu ile gösterildiği üzere 62 ila 131 dakika arasında değişmektedir.Mavi eğri, T yarım değerlemesi 40 dakika olan hızlanmış mide boşalmasına sahip bir fareden, kırmızı eğri ise T yarım değerlemesi 168 dakika olan gecikmiş mide boşalmasına sahip bir fareden elde edilmiştir. Sonuç olarak bu video, invaziv olmayan bir nefes testi aracılığıyla katı mide boşalmasının nasıl ölçüleceğini göstermektedir. Farelerde, hayvanların teste nasıl hazırlanacağını, yemlerin nasıl hazırlanacağını ve verilerin nasıl toplanacağını göstermiş olduk.13 karbon OCT meşe asidi uygulaması ile katı mide boşalmasının ölçüldüğü bu yöntem daha önce insanlar için rapor edilmiştir ve biz de protokolü farelerde kullanım için uyarladık. Bu protokol, aynı farede mide boşalmasının tekrarlanan ölçümlerini yapabilmemizi sağlayan değerli bir yöntem sunmakta ve bu da uzun süreli hastalıkların incelenmesi için mide boşalmasının araştırılmasına olanak tanımaktadır. Bu yöntemin gelecekte çeşitli uygulama alanları bulunmaktadır.Örneğin, diyabetik gastroparezis tedavisi için farklı ilaçların test edilmesi.

assessment-gastric-emptying-non-obese-diabetic-mice-using-13c

Research

JoVE Journal

Medicine

Tıp

Bu videoda, bir laboratuvar faresinde oral glukoz tolerans testinin nasıl yapılacağı anlatılmaktadır.

Oral Glukoz Tolerans Testi (OGTT): Farelerde Glukoz Metabolizmasının Ölçülmesi

Laboratuvar hayvanlarının gastrointestinal sistemi boyunca düz kas kasılmalarının in vivo ölçümü, yeterince kullanılmasa da güçlü bir teknik olmaya devam etmektedir. Esnek, çift elemanlı gerinim ölçerler ticari olarak mevcut değildir ve üretim gerektirir. Bu protokol, kemirgenlerde akut veya kronik implantasyon için güvenilir, ucuz gerinim ölçerlerin yapımını açıklar.

Ölçüm Minyatür Çift elemanlı deformasyon ölçüm aletlerinin imalat ve implantasyon<em&gt; In Vivo</em&gt; Kemirgenler Gastrointestinal Kasılmalar.

Bariatrik cerrahi, vücut ağırlığını ve sıklıkla morbid obezite ile ilişkili ölümcül metabolik komplikasyonları (diyabet, obezite ve dislipidemi) azaltmanın en etkili yoludur. Bariatrik cerrahinin fare modelleri, bu ameliyatların diyabet, hipertansiyon ve dislipidemi üzerindeki yararlı etkilerinin arkasındaki moleküler mekanizmaları deşifre etmek için benzersiz bir varlığı temsil eder.

Sleeve gastrektomi Teknikleri ve Farelerde Roux-en-Y Gastrik Bypass Modifiye

Geçerli makalenin üretimi ve yüksek yağlı diyet beslenen farelerin metabolik karakterizasyonu diyet kaynaklı insülin direnci ve obezite bir model olarak açıklar. Daha fazla oral glukoz tolerans testi ve glukoz metabolizma vivo içindetüm vücut değişikliklere izleme insülin tolerans testi gerçekleştirmek için detaylı iletişim kuralları bulunmaktadır.

Vivo glikoz metabolizması farelerde Oral glukoz tolerans testi (OGTT) ve insülin tolerans testi (ITT) kullanarak yüksek yağlı diyet beslenen incelenmesi

Obezite sıklığı artıyor ve kronik akciğer hastalıkları riskini artırır. Temel mekanizmaları ve Önleme stratejileri, iyi tanımlanmış hayvan kurmak için modelleri ihtiyaç vardır. Burada, üç yöntem (glikoz tolerans testi, vücut pletismografisi ve akciğer fiksasyon) obezite etkisi farelerde akciğer sonuçlar üzerine eğitim sağlamak.

Mayi glikoz tolerans testi, akciğer işlev ölçümü ve akciğer fiksasyonu obezite ve pulmoner sonuçlar üzerine Engelli metabolizma etkisini incelemek için

Bu makalede, yabani tip ve ob/ob farelerde obezite ve bozulmuş glikoz metabolizmasına karşı korumak ve tedavi etmek için izokalorik 2:1 aralıklı oruç için ayrıntılı bir protokol açıklanmaktadır.

Farelerde Izokalorik 2:1 Aralıklı Orucun Metabolik Etkilerinin Değerlendirilmesi

Bu çalışma, polikistik over sendromu fare modelinde hepatik glikoz üretiminin hem oruç hem de glikoz bakımından zengin durumlarda kuyruk damarı yoluyla stabil bir izotopik glikoz izleyici kullanılarak doğrudan ölçülen ölçümünü açıklar.

Polikistik Over Sendromu Fare Modelinde Hepatik Glikoz Üretiminin Değerlendirilmesi

Bu protokol mide ultrasonografisinde görüntü elde etmek için iki yöntem sunar. Ek olarak, tıbbi karar vermeye yardımcı olmak için bu bilgileri yorumlamak için ipuçları verilmiştir.

Yetişkinlerde Gastrik Bakım Noktası Ultrasonu: Görüntü Elde Etme ve Yorumlama

, Işitsel ve dinleme becerilerini katkıda bilişsel yetenekleri derinlemesine bir değerlendirme yapmak için bir test bataryası (IMAP) açıklanmıştır. Bu çocuk dostu ve dilsel boşa yönetmek için hızlı. Stimulus üretimi ve protokol yönetimi tekrarlanabilir prosedürleri sağlamak için bir yazılım platformu (IHR-STAR) ile kontrol edilir.

Dinlemede Making Sense IMAP Test Batarya:

Amonyak, çeşitli hastalık ve sağlık durumlarıyla ilgili önemli bir fizyolojik metabolittir. Aynı zamanda nefeste ölçülmesi zor bir moleküldür ve doğru sonuçlar elde etmek için özel önlemler alınmasını gerektirir. Amonyağı etkileyen tüm faktörler bilinmemektedir, ancak bu faktörler hesaba katılmadan ilerleme zor olabilir.

Hızlı ve Doğru Üfürükle Amonyak Ölçüm

Keşfedin mide boşaltılmasını farelerde invaziv olmayan nefes testiyle ölçme yöntemini. Bu teknik tekrarlanabilir ölçümlerle gastroparezi araştırmalarına katkı sağlar.

Bir Kullanarak Non-obez Diyabetik Farelerde Mide boşaltılması Değerlendirilmesi [

Daha fazla video keşfet