Mikropipet, küçük sıvı hacimlerini hassas bir şekilde ölçmek için kullanılan önemli bir enstrümandır. Dünya çapındaki birçok araştırma laboratuvarında bulunan bu araştırma aracı, çeşitli şekil ve boyutlarda olabilir. Ancak, mikropipetler arasındaki farklılıklara rağmen, tümü mikrolitre miktarlarındaki sıvıları doğru şekilde ölçmek için benzer bir yöntemle çalışır. Mikropipetler, tıpkı mikropipetler gibi çeşitli boyutlarda olan tek kullanımlık uçlarla birlikte kullanılır.
Tüm mikro-pipetler, sıvıları çekmek ve boşaltmak için aynı temel bileşenleri paylaşır. Pipetleyiciyle en üstte bulunan piston, basıldığı veya serbest bırakıldığı konuma bağlı olarak sıvıyı çekmek veya dışarı atmak için kullanılır.
Hacim ayar kadranı, aktarılacak sıvı hacmini değiştirmek için kullanılır.
Hacim göstergesi yukarıdan aşağıya doğru okunur. Kullanılan mikro-pipete bağlı olarak rakamlar, hacim ölçümünüzdeki farklı büyüklük mertebelerini yansıtır. Burada 370 µL için bir ölçüm görebilirsiniz.
Tek kullanımlık uçlar, mikro-pipetin alt kısmına takılır.
Uç atma düğmesi ve uç atma mili, pipet uçlarının atılması gerektiğinde onları dışarı atmak için birlikte çalışır.
Mikropipet ailesi, belirli hacim aralıklarını hassas bir şekilde aktaran farklı boyutlarda birçok üyeden oluşur.
Burada, ailenin her birinin aktarabileceği hacim aralıklarına göre sıralandığını görebilirsiniz. Örneğin, Papa P-1000 200-1000 µl arasında sıvı aktarırken, grubun en küçüğü olan P-2 ise 0.2-2 µl arasında aktarım yapar.
Aile üyelerinin her biri, pistonun üstündeki bir numara ve renge göre ayırt edilebilir; bu da hangi pipetin ne kadar hacmi rahatça aktarabileceğini açıkça gösterir.
Zaman zaman, deneylerde Uncle P5000, Auntie P100 ve Cousin P10 gibi diğer mikropipet akrabaları da karşınıza çıkabilir. Bu geniş aile, toplamda 0.2-5000 µl hacmindeki sıvıların taşınmasında yardımcı olabilir.
Sıvı aktarımının daha doğru ve hassas olmasını sağlamak için, genellikle (ancak her zaman değil) kolay tanınması adına renk kodlu farklı boyutlarda pipet uçları kullanılır ve bunlar farklı boyutlardaki pipetlerle eşleştirilir. Aktarılan hacimle ilgili olarak, beyaz mikropipet uçları genellikle 0.5-2.5 μl, sarı uçlar 1-200 µl ve mavi uçlar 200 ile 1000 μl arasında aktarım yapar.
Bir mikropipet kullanırken, öncelikle aktarmak istediğiniz hacim için uygun aralığa sahip aleti seçin. Pipetin doğru seçilmesi, deneyin başarılı veya başarısız olması arasındaki farkı belirleyebilir.
Başlamak için, ayar düğmesini istenen hacme getirin. Aspirasyon hacmini artırmak için, düğmeyi saat yönünün tersine çevirerek istenen hacmi bir üçte bir tur kadar geçin ve ardından yavaşça nihai işaretle aynı hizaya getirin. Hacmi azaltmak için düğmeyi saat yönünde çevirin.
Hacim okumasındaki rakamların, mikropipete bağlı olarak farklı büyüklük mertebelerine sahip olduğunu unutmayın. Örneğin, solda 370 µl okunan P1000'i görüyoruz. Binler basamağında sıfır, yüzler basamağında 3 ve onlar basamağında 7 vardır. Sağda ise yüzler basamağında 1, onlar basamağında 5 ve birler basamağında 9 ile 159 µl görüntüleyen P200 bulunmaktadır.
Hacim ayarlandığında, bir uç seçin.
Şimdi mikropipeti, gövdenin dar kısmı avuç içinizde ve çıkıntılı kısmı işaret parmağınızın üzerinde olacak şekilde dik konumda tutun.
Pistonu yaklaşık olarak ilk durağın yarısına kadar veya daha fazla direnç hissetmeye başladığınız ana kadar hafifçe bastırın.
Bu işlem, pipet ucundaki havayı dışarı iter.
Pistonu basılı tutarak, ucu numunenin içine 1-3 mm girecek şekilde daldırın. Pistonu yumuşak bir şekilde başlangıç konumuna geri bırakın, sıvının uca geçmesi için bir saniye bekleyin ve ardından pipeti numuneden çıkarın.
Piston başlangıç konumuna geri bırakıldığında, sıvı, yer değiştiren havanın oluşturduğu vakum sayesinde içeri çekilir.
İstenen miktarda sıvının çekildiğini ve uçta hava kabarcığı olmadığını onaylamak için ucu kontrol edin.
Numuneyi istenen kaba aktarırken, mikropipeti alıcı kabın iç duvarına 10-45° açıyla tutun. Bu, ucun hava kabarcığı oluşturmasını önleyecektir. Sıvıyı boşaltmak için, sıvıyı vermeye başlamak üzere pistonu yumuşak bir şekilde 1. durağa kadar hafifçe bastırın ve ardından, daha güçlü bir direnç uygulayarak pistonu tamamen ikinci durağa kadar bastırıp ucundaki son sıvı kısmını "boşaltın".
Ucu kaptan tamamen çıkarın ve ardından pistonu tekrar başlangıç konumuna bırakın.
Şimdi, pipet ucunu uygun atık kabına dikkatlice atmak için ejektör düğmesini kullanın. Yaptığınız işleme dikkat edin, çünkü fırlatılan uçlar mermi gibi hareket ederek laboratuvar arkadaşlarınızı yaralayabilir.
Mikropipetlerin iyi çalışmasını sağlamak ve dahili hacim ayar mekanizmasını korumak için, hacim ayar kadranını asla mikropipetin belirtilen hacim aralığının üzerine veya altına getirmeyin. Aksi takdirde cihazı bozabilirsiniz.
Numuneler arasında çapraz kontaminasyonu önlemek için, her hacim transferinden sonra ucu değiştirin.
Mikropipetlerle çalışırken operatör tutarlılığı önemlidir. Pistonun pürüzsüz bir şekilde bastırılması, optimal deneysel sonuçlar sağlayacaktır. Son olarak, mikropipetlerinizi en yüksek performans durumunda tutmak için, cihazlar kullanılmadığında onları daima dikey konumda saklamayı unutmayın.
Mikropipetlerin temel çalışmasını ve kullanım ilkelerini incelediğimize göre, mikro hacimli transferler için yaygın laboratuvar uygulamalarını ve bu cihazın varyasyonlarını tartışalım.
Mikropipetler, çeşitli deneyler için hücre süspansiyonlarını kültür plakalarına aktarmak amacıyla sıklıkla kullanılır.
Özel uçlarla birlikte mikropipetler, DNA jel elektroforezi gibi analitik teknikler için numunelerin dikkatlice yüklenmesinde kullanılabilir.
Mikropipetler, tek hücreli süspansiyonlar elde etmek amacıyla dokuları mekanik olarak parçalamak için de kullanılabilir.
Hava yer değiştirme prensibiyle çalışan mikropipet varyasyonları da laboratuvarlarda bulunabilir.
Tekrarlayıcı pipetler, başlangıçta daha büyük bir hacimde solüsyon aspirasyonundan sonra, daha küçük hacimlerin seri şekilde pipetlenmesine olanak tanır. Bu pipetler, aynı hacimdeki numunelerin çok sayıda kaba aktarılması için oldukça kullanışlıdır.
Çok kanallı pipetler genellikle 20-200 μl hacim aralığındaki sıvıları transfer etmek için kullanılır ve 96 kuyucuklu plakaların tüm sıralarını doldurmak için faydalıdır.
JoVE mikro pipetlere giriş videosunu izlediniz.
Bu videoda şunları inceledik: mikro pipetin ne olduğu ve nasıl çalıştığı, bir sıvı hacim örneğinin nasıl aspire edileceği ve boşaltılacağı, bazı güvenlik önlemleri ve mikro pipetlerinizin farklı uygulamaları. İzlediğiniz için teşekkürler, deneyleriniz için doğru pipeti seçmeyi unutmayın.
Mikropipet, sıvı çözeltilerin mikro hacimlerini aktarmak için kullanılan yaygın bir laboratuvar cihazıdır. Mikropipetler, 0.5 ile 5000 μl arasındaki h…
Bu videodaki bölümler
0:00
Overview
0:42
Components of a Micropipettor
1:40
Types of Micropipettors and Tips
3:20
Basic Micropipettor Operation
6:27
Helpful Hints
7:17
Applications
8:44
Summary
Telif hakkı © 2026 MyJoVE Corporation. Tüm hakları saklıdır.