Name: Hedefli Viral Protein analizi HER2 + tümörler için teslim Nanopartiküller (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2013-06-18T12:00:00.000+00:00
Duration: 11 min 52 s
Description: Öğrenin, HerDox nanopartiküllerinin multimodal optik görüntüleme ile tümör hedeflemesini ve hücre içi penetrasyonunu nasıl analiz edeceğinizi. Bu yöntem, kanser tedavisinde ilaç taşıma verimliliğini değerlendirmeye yardımcı olur.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Bu çalışma Sağlık / Ulusal Kanser Enstitüsü (R01CA129822 ve R01CA140995) Ulusal Enstitüleri LKM-K hibe tarafından finanse edildi. Dr Medine-Kauwe sürekli destek C. Rey, M. M-Kauwe ve D. Revetto teşekkür eder.

1. In vivo sistemik olarak verilmesine <ol><li> 6-8 haftalık nu / nu fare deri altı açısı taraflı yan ksenograft tümörler için enjeksiyon başına Herdox bir 0.004 mg / kg dozda, 0.2 ml eşit steril tuzlu su ile yeterli Herdox karıştırın. </li><li> Yavaşça kabarcıklar kaçınarak, 29G iğnesi ile donatılmış bir 3/10 cc şırınga içine insülin Herdox karışımı çizin. </li><li> 0.5-1 L / dk, izofluran konsantrasyonu:% 3-4 (veya daha düşük) Anestezi bir gazı tahliye sistemi (Oksijen akış oranları ile donatılmış bir indüksiyon odasında kısa izofluran maruz indüklenir. </li><li> Bir anestezi fare (enjeksiyon başına 0.2 mi) bir kuyruk damarı içine tüm karışımı enjekte edilir. IV enjeksiyonu da ölçülü, anestezisiz fare gerçekleştirilebilir. </li><li> Günde bir, altı ardışık gün boyunca aynı fare enjeksiyon tekrarlayın. </li></ol> 2. In vivo Floresans Görüntüleme Tümörlerde Herdox floresan birikimi canBir çok modlu kamera kullanarak enjeksiyon son günü (Günlük 7) ile saptanabilir edilebilir. Aşağıdaki işlemleri özel bir makro-aydınlatma ve algılama sistemi (Şekil 1) 8 kullanımını gerektirecektir. <ol><li> In vivo Optik Görüntüleyici olarak Çoklu açın. </li><li> Doksorubisin floresan tespiti için uygun bir emisyon bant geçiren filtre (590 nm ± 30 nm) seçin. </li><li> Argon-Kripton Lazer açın ve lazer optik yolda bir uyarım bant geçiren filtre (488 nm ± 10 nm) yerleştirin. </li><li> Anestezi sistemi açın ve daha sonra anestezi odası (Oksijen akış hızı bir fare yerleştirin: 0.5-1 L / dk, izofluran konsantrasyonu:% 3-4 (veya daha düşük) bir gazı tahliye sistemi ile donatılmıştır. </li><li> Anestezi odasından fare anestezi in vivo Optik Görüntüleyici olarak Çoklu mod ve görüntüleme odasına fare aktarın. </li><li> Fare burun üzerinde bir roket ucu konisi yerleştirin ve sürekli anestezi yönetmek için akış açıkgörüntü alımı sırasında sia (Oksijen akış hızı: 0.5-1 L / dk, izofluran konsantrasyonu:% 2-3 (veya daha düşük). </li><li> 5-15 sn bir pozlama süresi ile floresan görüntüler elde. </li><li> Arka plan düzeltme veya kontrast ayarı da dahil olmak üzere görüntü analizi ve işleme gerçekleştirin. </li></ol> 3. Floresan Görüntüleme ex vivo Herdox floresan tümörler ve belirli organlarda görüntülü olabilir (karaciğer de dahil olmak üzere, böbrek, dalak, kalp ve iskelet kası) Herdox son (Günlük 7) enjeksiyondan sonra 24 saat de ötenazi farelerden alınan hasat. <ol><li> In vivo Optik Görüntüleyici olarak Çoklu açın. </li><li> Doksorubisin floresan tespiti için bir emisyon bant geçiren filtre (580 nm ± 20 nm) seçin. </li><li> Argon-Kripton Lazer açın ve lazer optik yolda bir uyarım bant geçiren filtre (488 nm ± 10 nm) yerleştirin. </li><li> Yeri tümörler ve belirli organları görüntüleme odasına o bir Petri-tabağına düzenlenmişf in vivo Optik Görüntüleyici olarak Multimode. </li><li> 5-15 sn bir pozlama süresi ile dokuların floresan görüntüler elde. Başlangıç ​​floresans görüntü elde etme için bir örnek, Şekil 2a&#39;da gösterilmiştir. Arka Plan (Şekil 2b) olarak görev yapacak olan, Petri-çanak boş kullanarak aynı tekrarlayın. </li><li> Arka plan düzeltme veya kontrast ayarı da dahil olmak üzere görüntü analizi ve işleme gerçekleştirin. Düzeltilmiş bir görüntü örneği Şekil 2a, Şekil 2b çıkarılması sonucu, Şekil 2c&#39;de gösterilmektedir. </li></ol> 4. Tümörler yerinde Konfokal Görüntüleme olarak Yerinde konfokal görüntüleme hücresel düzeyde algılama ve Herdox tümör birikimi analiz sağlar. <ol><li> Leica SPE konfokal mikroskop açın. </li><li> Doksorubisin için doksorubisin ve emisyon dalga boyları (560-620 nm) uyarma için 488 nm lazer ışığı seçinfloresan algılama. </li><li> Objektif lens üzerinde 40X veya 63X objektif ve damla immersiyon seçin. </li><li> Prosedür 2&#39;de tarif edildiği gibi önceden Herdox ve sahte alınan tedaviler ötenazi farenin taze tümörleri Ayıklama. </li><li> Buz üzerinde bir Petri-tabak yerleştirin tümörler doku bozulmasını önlemek ve daha sonra konfokal görüntüleme için Delta T odasına tümörler aktarmak için. </li><li> Sıralı odak derinliği (: 1 mikron, kalınlığı: 20 mikron adım boyutu) de tümörlerin konfokal görüntüler elde. Z ekseni boyunca ardışık olarak-elde edilen görüntü bir örnek Şekil 3, sol panel gösterilmiştir. </li><li> Maksimum yoğunluk görüntüleri z projeksiyon gerçekleştirin. Z-yığılmış görüntülerin maksimum yoğunluk projeksiyonu Şekil 3, sağ panelde gösterilir. </li><li> . Maksimum yoğunluğun floresan yoğunlukları Z ortalama hesaplama - görünüm genel alan üzerinde görüntü floresan yoğunlukları ortalama projeksiyon görüntüleri hesaplamak edildid ImageJ kullanarak. </li></ol> 5. Oranlı metrik Spektral Görüntüleme ve Analiz Oranlı metrik spektral görüntüleme ve analiz Dox floresan ve otofloresans arasında ayrımcılık sağlar. <ol><li> Floresan konfokal mikroskop tarama bir lazer güç. </li><li> Bir adım 10 nm boyutu ve bir Leica SPE konfokal mikroskop kullanılarak 488 nm ışık uyarma ile, 510-650 nm spektral aralığında belirli bir derinlikte Herdox-tedavi edilen ve edilmeyen tümörler 15 görüntüler elde. </li><li> Doksorubisin bir 100 mcM çözüm hazırlayın. </li><li> Dox floresan (: 510-650 nm, bir adım boyutu: 10 nm spektral aralığı) saf spektral imza elde etmek için 100 mcM doksorubisin çözümün spektral görüntüleme gerçekleştirin. Bir grafik Şekil 4&#39;te gösterildiği gibi spektral görüntüleme ve floresan spektrumu çıkan görüntü elde etme tipik sonuçlar çizilmiştir. </li><li> Bir görüntü c otofloresans spektral imza Edinmeube (spektral aralığı: 510-650 nm, bir adım boyutu: 10 nm) tedavi edilmemiş tümörlerin spektral görüntüleme ile elde edilen. Gösteren bir grafiktir, Şekil 5&#39;te gösterildiği gibi spektral görüntüleme ve floresan spektrumu çıkan görüntü elde etme tipik sonuçlar çizilmiştir. </li><li> Biz 9 geliştirilen programı kullanarak dört referans spektral imzaları (saf otofloresansı, 0.1.doxorubin +0.9. Otofloresansı, 0.2. Doksorubisin +0.8. Otofloresansı, 0.3.doxorubin +0.7. Otofloresans) oluşturun. Dört referans spektral imzaları gösteren tipik bir eğrisi Şekil 6&#39;da gösterilmektedir. </li><li> Daha önce 9 geliştirilen program kullanılarak Öklid uzaklık ölçüsü üzerinden referans spektral imzaları tarafından tanımlanan görüntülerin spektral sınıflandırılması gerçekleştirin. </li><li> Rasyometrik spektral görüntüleme ve analiz için karşılaştırma için biz 7 geliştirilmiş bir spektral Karışmama programı (ImageJ plug-in), 10, kullanarak bu görüntülerin doğrusal spektral Karışmama gerçekleştirin. Bir elineer spektral Karışmama göre otofloresans ikinci Herdox floresan ayırma xample Şekil 7 &#39;de gösterilmiştir. </li></ol>

<ol><li>Agadjanian, H., Chu, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chemotherapy+Targeting+by+DNA+Capture+in+Viral+Protein+Particles%5BTitle%5D)+AND+%22Nanomedicine%22%5BJournal%5D)">Chemotherapy Targeting by DNA Capture in Viral Protein Particles.</a> Nanomedicine. 7 (3), 335-352 (2012).</li>
<li>Agadjanian, H., Ma, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tumor+detection+and+elimination+by+a+targeted+gallium+corrole%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci.+U.S.A%22%5BJournal%5D)">Tumor detection and elimination by a targeted gallium corrole.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 106 (15), 6105-6110 (2009).</li>
<li>Agadjanian, H., Weaver, J. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Specific+delivery+of+corroles+to+cells+via+noncovalent+conjugates+with+viral+proteins%5BTitle%5D)+AND+%22Pharm.+Res%22%5BJournal%5D)">Specific delivery of corroles to cells via noncovalent conjugates with viral proteins.</a> Pharm. Res. 23 (2), 367-377 (2006).</li>
<li>Medina-Kauwe, L. K., Maguire, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Non-viral+gene+delivery+to+human+breast+cancer+cells+by+targeted+Ad5+penton+proteins%5BTitle%5D)+AND+%22Gene+Therapy%22%5BJournal%5D)">Non-viral gene delivery to human breast cancer cells by targeted Ad5 penton proteins.</a> Gene Therapy. , 81753-81761 (2001).</li>
<li>Medina-Kauwe, L. K., Kasahara, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((3PO%2C+a+novel+non-viral+gene+delivery+system+using+engineered+Ad5+penton+proteins%5BTitle%5D)+AND+%22Gene+Therapy%22%5BJournal%5D)">3PO, a novel non-viral gene delivery system using engineered Ad5 penton proteins.</a> Gene Therapy. , 8795-8803 (2001).</li>
<li>Rentsendorj, A., Xie, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Typical+and+atypical+trafficking+pathways+of+Ad5+penton+base+recombinant+protein%3A+implications+for+gene+transfer%5BTitle%5D)+AND+%22Gene+Ther%22%5BJournal%5D)">Typical and atypical trafficking pathways of Ad5 penton base recombinant protein: implications for gene transfer.</a> Gene Ther. 13 (10), 821-836 (2006).</li>
<li>Hwang, J. Y., Park, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multimodality+Imaging+In+vivo+for+Preclinical+Assessment+of+Tumor-Targeted+Doxorubicin+Nanoparticles%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+ONE%22%5BJournal%5D)">Multimodality Imaging In vivo for Preclinical Assessment of Tumor-Targeted Doxorubicin Nanoparticles.</a> PLoS ONE. 7 (4), e34463(2012).</li>
<li>Hwang, J. Y., Wachsmann-Hogiu, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+Multimode+Optical+Imaging+System+for+Preclinical+Applications+In+Vivo%3A+Technology+Development%2C+Multiscale+Imaging%2C+and+Chemotherapy+Assessment%5BTitle%5D)+AND+%22Mol.+Imaging+Biol%22%5BJournal%5D)">A Multimode Optical Imaging System for Preclinical Applications In Vivo: Technology Development, Multiscale Imaging, and Chemotherapy Assessment.</a> Mol. Imaging Biol. , (2011).</li>
<li>Hwang, J. Y., Gross, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ratiometric+spectral+imaging+for+fast+tumor+detection+and+chemotherapy+monitoring+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Biomed.+Opt%22%5BJournal%5D)">Ratiometric spectral imaging for fast tumor detection and chemotherapy monitoring in vivo.</a> J. Biomed. Opt. 16 (6), 066007(2011).</li>
<li>Fujimoto, J. G., Farkas, D. L. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aFujimoto%2C+JG+%22Biomedical+Optical+Imaging%22">Biomedical Optical Imaging</a>. , Oxford University Press. New York. (2009).</li>
<li>Hwang, J. Y., Moffatt-Blue, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multimode+optical+imaging+of+small+animals%3A+development+and+applications%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+of+SPIE%22%5BJournal%5D)">Multimode optical imaging of small animals: development and applications.</a> Proc. of SPIE. 6411, (2007).</li>
<li>Ducros, M., Moreaux, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spectral+unmixing%3A+analysis+of+performance+in+the+olfactory+bulb+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Spectral unmixing: analysis of performance in the olfactory bulb in vivo.</a> PLoS One. 4 (2), e4418(2009).</li>
<li>Zimmermann, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spectral+imaging+and+linear+unmixing+in+light+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Adv.+Biochem.+Eng.+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">Spectral imaging and linear unmixing in light microscopy.</a> Adv. Biochem. Eng. Biotechnol. , 95245-95265 (2005).</li>
</ol>

Yazar, Daniel Farkas, Spektral Moleküler Görüntüleme Başkanıdır. Kalan Yazarlar herhangi bir çıkar çatışması var.

Dox floresan tümörler subkutan olduğunda çoklu görüntüleyicisi kullanılarak in vivo olarak tespit edilebilir. Bununla birlikte, Herdox terapötik olarak etkili doz (0.004 mg / kg) tek bir dozdan sonra aşağıdaki algılama eşiğidir. Buna karşılık, 7 günlük enjeksiyonu (7 gün boyunca 1x/day) sonrasında, parçacığın tümör birikimi ve tutma Dox flöresanının görsellenmesin sağlamak için yeterlidir. Dox veya temiz tekniği kullanılan in vivo görüntüleme için başka bir fluorofor ile ça...

Tümör hedefleme kemoterapi teslim tedavinin daha çok tümör olmayan doku dağıtmak daha da istenilen hedefe birikir, çünkü hedefsiz ilaçlara göre daha düşük dozda kanser hücrelerinin ortadan kaldırmak için bir potansiyele sahiptir. Ikinci durum, ilacın etkinliğinin sulandırmak ve böylece daha yüksek dozlarda etkili olmasını gerektirecektir olarak, tümör hedefleme standart olmayan hedefli tedavi üzerinde her iki tedavi ve güvenlik avantajı vardır. Kendi kendini monte nanopartiküller içine kapsülleme ile, kemoterapi hedefleme ilaç, kimyasal olarak kovalent hedefleme moleküllerine bağlı ilaçların aksine değiştirilmemiş kalmasını sağlar. Bu tür bir bağlantı, uyuşturucu ve hedefleme molekülünün her ikisi de aktivitesini değiştirmek için potansiyele sahiptir; kovalent olmayan bir montaj ilaç kudretini muhafaza edilmesini sağlar. Daha önce yeni üç bileşenli, kendini monte kompleksi, Herdox, HER2 + tümörlerin hedef göstermiştir <em&gt; In vivo ve kalp 1 de dahil olmak üzere, normal doku koruyucu iken tümör büyüme ablasyon ortaya çıkarır. Herdox reseptör bağlanma hücre penetrasyon proteini HerPBK10 ve kemoterapötik ajan arasındaki kovalent olmayan etkileşim yoluyla oluşan küçük bir nükleik asit bağlayıcı yoluyla doksorubisin (Dox). Endozomal membran penetrasyonu, adenovirüs-türetilmiş Penton baz kapsid proteini 4-6 arasında birleşme yoluyla gerçekleştirilir ise HerPBK10, insan epidermal büyüme faktörü reseptörü (HER) bağlar ve 2-4 reseptör aracılı endositoz tetikler. Protein üzerindeki pozitif yüklü bir etki nükleik asit DNA-interkalate Dox hedeflenmiş dağılım için nakledilebileceği üzerinden bağlama 4, 5, sağlar. Elektrofilik, ardalanması, ve muhtemelen protein oligomerizasyonu etkileşimleri farklı sıcaklıklarda 1 kan ve uzun saklama koşulları altında kararlı yuvarlak 10-20 nm parçacıklar halinde kendinden montaj kolaylaştırır. Tercihli HER hedefliyorHER2 yükseldiğinde 2 + tümör hücrelerinin gelişmiş afinite ligandı tarafından kolaylaştırılır. Daha önceki çalışmalar, tümör olmayan doku üzerinde tümörlerde ve karşılaştırma Herdox verim birikmesidir sistemik olarak verilmesine in vivo 7 tümör hücrelerine DOX, 1, ve penetrasyon hedefsiz için göstermiştir. Biz gözlemledim ki tümör hücre girmesinden sonra Herdox bültenleri Dox, çekirdeği 1 içine Dox birikimi sağlar. Tümör-birikimi nispeten düşük HER2-ifade tümörleri nispeten daha yüksek HER2 seviyeleri 1 olanlara göre daha az Herdox biriktikçe, reseptör seviyesi ile uyumlu görünüyor. Dahası, etkin bir şekilde hücre ölümü konsantrasyonu farklı hücre yüzeyi HER2 seviyeleri 1 ifade eden tümör hücre çizgileri üzerinde HER2 ekran ile ters bir ilişki sergiler. Tümör öldürme 10-kat daha düşük dozda üzerinde gerçekleşir olarak Herdox Tar göre, hedefsiz Dox üzerinde tedavi ve güvenlik avantajı sergilergeted uyuşturucu ve hedefsiz Dox 1 aksine, kalp (ekokardiyografi ve histolojik leke ile tespit edilir) ya da karaciğer (leke TÜNEL ile tespit edilir) dokusu üzerinde tespit edilebilir bir yan etki üretmektedir. Bir viral kapsid protein kendi türetme rağmen, HerPBK10 terapötik seviyelerde 2 saptanabilir immünojenitesi sergiler. Bütün adenovirüs için önceden var olan antikorlar HerPBK10 tanıyabilir Oysa, onlar 2 bağlayıcı hücre önlemek mümkün değildir. Zaman içinde ölçülen tümör hacminin hedeflenen tedavi terapötik etkinliğinin değerlendirilmesinde standart bir yöntemdir ve Herdox terapötik etkinliğini değerlendirmek için istihdam edilmiştir. In vivo ve ex vivo floresan görüntüleme ile bu yaklaşım ilave daha iyi verim 7 hedef değerlendirmek için izin verdi. Biz özellikle bu Herdox hiçbir doğrulamak için Dox floresan spektral analizi ile eksize tümörlerin yerinde konfokal görüntüleme entegre vart sadece in vivo tümörlerin biriken ama sitoplazma ve çekirdek 7 içine tümör hücreleri ve teslim Dox nüfuz. Spektral analiz ayrıca bize otofloresansı 7 Dox floresan ayırt sağladı. Burada sistemik doğumdan sonra in vivo Herdox değerlendirilmesi için daha ayrıntılı olarak yaklaşımımızı göstermek, ve en önemlisi, değerlendirmek için çok modlu görüntüleme yöntemleri ve analizleri ile hedef.

<table><tbody><tr><td>Floresan lazer taramalı konfokal mikroskop</td><td>Leica</td><td>SPE</td><td></td></tr><tr><td>In Vivo Optik Görüntüleyici</td><td>Spektral Moleküler Görüntüleme</td><td>Çok Modlu In Vivo Optik Görüntüleyici</td><td></td></tr><tr><td>Doksorubisin-HCl</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>D4035</td><td></td></tr><tr><td>Çıplak (NU/NU) fare, dişi, 6-8 hafta</td><td>Charles Nehri</td><td>Gerinim kodu 088</td><td></td></tr><tr><td>MDA-MB-435 insan HER2 + tümör hücreleri</td><td>NCI-Frederick Kanseri DCTD Tümör/Hücre Hattı Deposu</td><td>0507292</td><td></td></tr><tr><td>3/10 cc insülin şırıngası U-100, 29G x 1/2" Ultra-FineIV kalıcı olarak takılan iğne</td><td>BD</td><td>309301</td><td></td></tr><tr><td>Delta T odası </td><td>Bioptechs</td><td>04200417B</td><td></td></tr></tbody></table>

hedefli viral protein analizi her2 + tümörler için teslim nanopartiküller

Analysis of Targeted Viral Protein Nanoparticles Delivered to HER2+ Tumors

HER2 + tümör hedefli bir nanoparçacık, Herdox, HER2 + kanseri olan bir hayvan modelinde tümör tercihli birikimi ve tümör büyümesini ablasyon sergiler. Herdox küçük bir nükleik asit bağlayıcı yoluyla, kemoterapi ajanı, ve doksorubisin, bir tümör hücresi hedefli penetrasyon proteininin kovalent olmayan bir montajı ile oluşur. Elektrofilik, ardalanması ve oligomerizasyonu etkileşimleri bir arada turu 10-20 nm parçacıklar halinde kendinden montaj kolaylaştırır. Herdox farklı sıcaklıklarda kan hem de uzun süreli depolama stabilitesi gösterir. Kalp ve karaciğer (hedefsiz doksorubisin ile işaretlenmiş zarar görür olan) da dahil olmak üzere tümör olmayan doku tespit edilebilir bir yan etkileri, tümör-hücre ölümü, tümör taşıyan farelere sonuçları Herdox sistemik olarak verilmesine. HER2 yükseklik ekspres hücreleri ile karşılaştırıldığında bu nedenle yüksek seviyelerde HER2 gösteren tümörlerin Herdox daha fazla birikimi gösteren, insan epidermal büyüme faktörü reseptörü ifade eden hücrelere hedefleme kolaylaştırırin vitro ve in vivo olarak daha düşük seviyelerde, şarkı. Yerinde konfokal ve spektral analiz ile birlikte floresan görüntüleme bizi hedef in vivo tümör ve sistemik doğumdan sonra Herdox tümör hücre nüfuz doğrulamak için izin verdi. Sistemik doğumdan sonra çok modlu görüntüleme ile hedef tümör değerlendirmek için burada detaylı bizim yöntemleri.

Şekil 1 floresan, spektral, ömür boyu, 2-foton, içi hayati konfokal ve biyoparlaklık görüntüleme dahil olmak üzere birden fazla yöntemleri altında görüntü elde etme amacıyla, için inşa edilmiştir in vivo optik görüntüleyici prototip, gösterir. Buna ek olarak, bu sistem dahil soğutmalı yüksek duyarlı kamera ve yüksek güçlü lazer çizgileri özellikle doksorubisin floresan in vivo tespiti için ticari optik görüntüleme sistemleri 11 ile karşılaştırıldığında daha yüksek k...

Bu makalede, tümör hedefli nanoparçacık, Herdox optik görüntüleme analizi için prosedürler. Özellikle, hedef ve tümör penetrasyon değerlendirilmesi tümör tespit için çoklu görüntüleme cihazı ayrıntılı kullanımı burada açıklanmıştır.

Hedefli Viral Protein analizi HER2 + tümörler için teslim Nanopartiküller

The HER2+ tumor-targeted nanoparticle, HerDox, exhibits tumor-preferential accumulation and tumor-growth ablation in an animal model of HER2+ cancer. ...

Bu prosedürün genel amacı, tümör hedefli HeroX nanopartikülünün in vivo sistemik iletimini çok modlu optik görüntüleme kullanarak saptamak ve analiz etmektir. İlk olarak, nanopartikül tümör taşıyan bir farenin kuyruk venine enjekte edilir ve çok modlu bir optik görüntüleme sistemi kullanılarak floresan görüntüler alınır. Ötanaziyi takiben, tümör ve organlar hasat edilir ve tümör hücreleri içindeki floresan partikülleri saptamak için tekrar görüntülenir.Ardından in situ konfokal görüntüleme gerçekleştirilir. Elde edilen görüntülerin analizi, sistemik uygulama sonrası her docs'ların tümörlere hedeflenmesinin ve penetrasyonunun ölçülebilir olduğunu göstermektedir. Multimodalite görüntüleme tekniklerinin, tekli görüntüleme modu gibi mevcut tekniklere göre sağladığı avantajların bir alanı, tümör iletiminin analizini ve kantifikasyonunu geliştirebilecek çoklu ve tamamlayıcı bilgiler sunmasıdır.Bu yöntem, ilaç taşıma alanındaki hedefli bir ilacın sadece tümörlere ulaştırılıp ulaştırılmadığı değil, aynı zamanda tümör hücrelerine gerçekten nüfuz edip etmediği gibi temel soruların yanıtlanmasına yardımcı olabilir. Bu protokolde prosedürü, laboratuvarımın eski doktora sonrası araştırmacısı Dr. J Yun Wang ve mevcut lisansüstü öğrencisi Janet Markman uygulamalı olarak gösterecektir. Altı ila sekiz haftalık.Subkütan bilateral flank ksenogreft tümörleri taşıyan yeni fareler kullanılır. Enjeksiyon başına 0,004 mg/kg HeroX dozuna karşılık gelecek şekilde yeterli miktarda HeroX'i steril salin ile karıştırarak sistemik uygulama için hazırlayın. 29 gauge iğne takılmış üç onluk cc insülin şırıngasına 0,2 mL HeroX karışımını nazikçe çekin.Anestezi sonrası hava kabarcığı kalmadığından emin olun. Enjeksiyondan sonra karışımın tamamını kuyruk venine enjekte edin. Enjeksiyon bölgesinden kan kaybını önlemek için kuyruğu sıkıştırın.Kanama durduktan sonra, enjeksiyon bölgesini steril bir pamuklu çubukla temizleyin ve fareyi kafesine geri koyun. Aynı fareye altı gün daha ardışık olarak enjeksiyonu tekrarlayın. Günde bir kez, tümörlerdeki HeroX floresans birikimi enjeksiyonun son gününe kadar tespit edilebilir.Çok modlu bir görüntüleyici kullanılarak gerçekleştirilen yedinci gün. Buradaki prosedürler; floresan yoğunluğu, spektral floresan, yaşam süresi ve intravital konfokal görüntüleme yeteneklerine sahip bir optik görüntüleme sisteminin kullanımını içermektedir. Burada in vivo optik görüntüleyici prototipi gösterilmektedir.Bu sisteme entegre edilen soğutmalı yüksek hassasiyetli kamera ve yüksek güçlü lazer hatları, özellikle doksorubisin floresanının in vivo tespiti için ticari optik görüntüleme sistemlerine kıyasla daha yüksek kontrastlı floresan görüntüleri sağlar. Yazılımda çok modlu in vivo optik görüntüleyiciyi açın. Doksorubisin floresan tespiti için uygun bir emisyon bant geçiren filtre seçin.Lazeri açın ve lazer optik yoluna bir uyarım bant geçiren filtre yerleştirin. İsofluran ile anestezi odasında anestezi uygulanan bir fareyi, çok modlu in vivo optik görüntüleme sisteminin görüntüleme odasına transfer edin. Fareyle burnuna bir burun konisi yerleştirin ve sürekli anestezi sağlamak için akışı açın.Görüntü alımı sırasında, 5 ila 15 saniyelik bir pozlama süresi kullanarak floresan görüntüler elde edin. Her doc'un floresansı, son enjeksiyon gününden 24 saat sonra ötanize edilen farelerden alınan tümörlerde ve karaciğer, böbrek, dalak, kalp ve iskelet kası dahil olmak üzere spesifik organlarda görüntülenebilir. Çok modlu in vivo optik görüntüleyiciyi açın.Daha önce yapıldığı gibi, ardından tümörleri ve belirli organları bir Petri kabına yerleştirin. Çok modlu in vivo optik görüntüleyicinin görüntüleme odası içerisinde, beş ila 15 saniyelik bir pozlama süresi kullanarak dokuların floresan görüntülerini elde edin. Ardından, görüntüleme sonrası arka plan olarak kullanılacak olan boş bir Petri kabı ile aynı görüntüleme işlemlerini tekrarlayın.Arka plan düzeltme veya kontrast ayarı dahil olmak üzere görüntü analizi ve işlemesini gerçekleştirin. In situ konfokal görüntüleme, herd herd'ün tümör birikiminin hücresel düzeyde tespit edilmesine ve analiz edilmesine olanak tanır. Konfokal mikroskop kullanarak.Doksorubisin eksitasyonu için 488 nanometre lazer ışığını ve 560 nanometre ile 620 nanometre arasındaki emisyon dalga boylarını seçin. Doksorubisin floresan tespiti için 40x veya 63x objektif seçin ve üzerine bir damla immersiyon yağı damlatın. Doku degradasyonunu önlemek için ötanize edilen fareden alınan tümörleri bir Petri kabına yerleştirin.Ardından, konfokal görüntüleme için tümörleri bir delta T haznesine aktarın. Tümörlerin konfokal görüntülerini, bir mikron adım boyutu ve 20 mikron kalınlık ile ardışık odak derinliklerinde edinin. Z ekseni boyunca ardışık olarak elde edilen görüntülere bir örnek burada gösterilmiştir.Görüntülerin maksimum yoğunluklu Z projeksiyonlarını oluşturun. Ardından ImageJ veya benzeri bir program kullanarak, toplam görüş alanı oranı için maksimum yoğunluklu Z projeksiyon görüntülerinin ortalama floresan yoğunluklarını hesaplayın. Metrik spektral görüntüleme ve analiz; doksorubisin, floresan ve otofloresan arasında ayrım yapılmasını sağlar.Leica SPE konfokal mikroskop kullanarak, HeroX ile tedavi edilmiş ve edilmemiş tümörlerin belirlenen bir derinlikteki 15 görüntüsünü, 488 nanometre ışık eksitasyonu ile 510 ila 650 nanometre spektral aralıkta ve 10 nanometre adım boyutuyla, lazer taramalı floresan konfokal mikroskop aracılığıyla elde edin. Ardından, salin içerisinde 100 mikromolar doxorubicin çözeltisi hazırlayın. 100 mikromolar doxorubicin çözeltisinin spektral görüntülemesini gerçekleştirin.Doxorubicin floresansının saf spektral imzasını elde etmek için; tedavi edilmemiş tümörleri görüntüleyerek görüntü küpünden otofloresans spektral imzasını edinin. Tüm veriler toplandıktan sonra referans spektral imzalar oluşturun, görüntülerin spektral sınıflandırmasını gerçekleştirin ve tümörlerdeki doxorubicin birikiminin kantitatif değerlendirmesini elde etmek için bu görüntülerin lineer spektral ayrıştırmasını yapın.Konfokal floresan görüntüler in situ olarak farklı odak derinliklerinde elde edilmiş, ardından görüntülerin maksimum yoğunluklu Z projeksiyonu yapılmış ve projeksiyon görüntüsünün ortalama floresan yoğunluğu belirlenmiştir. Bu görüntüde görülen yüksek tümör floresansı, her docs'un sistemik uygulanmasından sonra tipiktir ve tümöre yönelik seçici hedeflemesini göstermektedir. İskelet kasında tespit edilen floresan ise tipik olmayıp, enjeksiyon prosedüründeki anomalilerden kaynaklanmış olabilir.Nitel olarak, bu görüntü düşük arka plana sahiptir. Kantitatif analiz için, burada gösterildiği gibi boş bir kap kullanılarak arka plan düzeltmesi yapılır. Ortaya çıkan arka planı düzeltilmiş görüntü, orijinaline kıyasla görüntünün kenarlarında daha yüksek bir arka plan sinyaline sahiptir; çünkü arka plan görüntüsünün kenarlarındaki yoğunluklar daha düşüktür.Solda gösterilen üst üste bindirilmiş görüntüler, ardışık bir mikron derinliklerde elde edilen tümör dokusunun konfokal taramalarını temsil etmektedir. Sağdaki görüntü, soldaki üst üste bindirilmiş görüntülerin birleşimini göstermektedir. Birleşim görüntüsü, her pikselde belirtilen Z derinlikleri boyunca HeroX birikim bilgilerini içerir ve böylece floresan yoğunluklarının ortalaması, farklı derinliklerdeki tümörlerdeki toplam herd doc birikimlerini nicel olarak yansıtır.Sürü dokümanının floresansını tümörlerdeki otofloresanstan ayırt etmek ve ikisini yüksek özgünlük oranı metrikleriyle nicel olarak ayırt etmek amacıyla spektral görüntüleme ve analiz gerçekleştirilir. Bu görüntü, doksorubisinin saf spektral imzalarını göstermektedir.Belirlenen emisyon dalga boylarında, sınırlandırılmış noktalı alanın floresan yoğunluğu, doxorubicin'in 510 ile 650 nanometre dalga boyu spektrumu üzerindeki profilini gösteren bir histogram oluşturur. Burada, otofloresans için saf spektral imzalar gösterilmiştir. İşlem görmemiş bir tümörden belirtilen emisyon dalga boylarında yayılan floresan, otofloresans emisyon profilini temsil eden bir eğim oluşturur.Referans.Saf spektral imzaların farklı oranlarda karıştırılmasıyla da spektral imzalar oluşturulmuştur. Her bir referans, program kullanılarak geliştirilmiştir. Buradaki spektral imza, tümörlerde biriken her bir dock'un otoflüoresansa göre göreceli floresansını temsil etmektedir.İskelelerin ve otofloresansın spektral imzaları elde edildikten sonra, iskele sinyalleri doğrusal spektral ayrıştırma kullanılarak ayrılır. Şekil, spektral ayrıştırma öncesindeki otofloresans ve iskelelerin karışık görüntüsünü ve spektral ayrıştırma sonrası ayrıştırılmış iskele görüntüsünü göstermektedir. Bu videoyu izledikten sonra, tümör iletiminin analizini ve miktarını artırmak için floresans yoğunluğu, konfokal mikroskopi ve spektral görüntüleme yöntemlerini nasıl birleştireceğiniz konusunda iyi bir anlayışa sahip olmalısınız.Doxorubicin ile çalışmanın tehlikeli olabileceğini unutmayın; bu prosedürü gerçekleştirirken çift eldiven kullanımı ve eldivenlerin sık sık değiştirilmesi gibi önlemler her zaman alınmalıdır.

analysis-targeted-viral-protein-nanoparticles-delivered-to-her2

Research

JoVE Journal

Bioengineering

Biyomühendislik

Biz bir kuş embriyo modeli dinamik, gerçek zamanlı intravital görüntüleme kullanarak insan xenografted tümörlerin vasküler nanoparçacık yerelleştirme ölçmek için yeni bir yaklaşım sunuyoruz.

Intravital Görüntüleme Gerçek Zamanlı tümörler Nanopartikül Alımı Değerlendirme

Bitki viral nanopartiküller (VNPs) biyomedikal uygulamalar için platformlar umut vericidir. Burada, biz bitki VNP yayılımı, saflaştırma, karakterizasyon ve bioconjugation ilişkin prosedürler anlatılmaktadır. Son olarak, biz bir fare ksenogreft model ve floresan görüntüleme kullanılarak tümör homing ve görüntüleme için VNPs uygulama göstermektedir.

Viral Nanopartiküller<em&gt; In vivo</em&gt; Tümör Görüntüleme

Nanoparçacık izleme analizi (NTA) ve polimerik gen teslimat nanopartiküller değerlendirmek için high-throughput Akım sitometri için bir protokol tanımlanmıştır. NTA nanoparçacık parçacık büyüklüğü dağılımı ve plazmid başına parçacık dağılımını karakterize etmek için kullanılmaktadır. Yüksek throughput flow sitometri gen teslimat biyomalzemelerin bir kütüphane için nicel transfeksiyon etkinliği değerlendirilmesini sağlar.

Polimerik Gen Taşıyıcı Değerlendirilmesi Nanoparçacık İzleme Analizi ve Yüksek throughput Flow Sitometri tarafından Nanopartiküller

Polymalic asit bazlı bir nano ilacın bir örnek kanser için de geçerlidir kişiye tıp rasyonel tasarım karşı sunulmuştur. Bu, bir çıplak fare Her2-pozitif insan meme kanseri tedavisi için bir nano ilacın sentezini tarif eder.

Çoklu Tümör Belirteçleri Hedefleme için Polymalic Asit bazlı Nano Biopolymers: Kişiselleştirilmiş Tıp için Bir Fırsat?

Burada, biz güçlü bir manyetik an ve güçlü yakın kızılötesi (NIR) absorbanslı manyeto-plasmonik nanopartiküllerin sentezi için bir protokol açıklar. Protokol moleküler özgü hedeflenmesini gerektiren çeşitli biyomedikal uygulamalar için Fc kısmının yoluyla nanopartiküllere antikor konjugasyonu içerir.

Immunotargeted sentezi Magneto-plasmonik nanoklastırlar

Antikor-conjugates için (ACs) birleştiğinde Viral kaynaklı peptidler, moleküler yükleri artan tümör hücre birikmesi ile teslim etme potansiyeli nedeniyle ivme kazanıyor bir yaklaşım var. Peptid konjügasyon, AC ve hücre içi yük birikimi ve tümör hedefleme değerlendirmek için ortak yöntemleri kullanarak, bu protokolü anahtar ilk geliştirme aşamalarında araştırmacılar yardımcı olur.

Antikor conjugates ilk değerlendirilmesi ile Viral kaynaklı peptidler hücresel birikimi artan ve tümör hedefleme artırmak için değiştirilmiş

Burada bir tümörün genomik yapısına dayalı olarak seçilen hedefe yönelik tedavilerin etkinliğini test etmek için bir protokol sayılacağız. Protokol, yapısal DNA düzenlemelerinin tanımlanması ve doğrulanması, hastaların tümörlerinin farelere engraftasyonu ve ilgili ilaçlara verilen yanıtların test edilmesi olarak tanımlanmaktadır.

Yapısal DNA Alterasyon Analizi ve Hasta Kaynaklı Ksenogreftler Kullanılarak Kanserde Hedefli Tedavilerin Test Edilmesi

Burada fare tümörü ksenogreft modellerinde antikorların in vivo lokalizasyonunu incelemek için bir protokol sayılmaktadır.

Hedef Antijen Spesifik Terapötik Antikor tümör ve doku dağılımının analizi

Bu makale, üçlü negatif meme kanserinin singeneik bir murine modelinden primer kanser ilişkili fibroblastların izolasyonu ve kültürü ve tümör mikroçevrimini hedeflemek için tasarlanmış yeni nanopartiküllerin preklinik çalışması için uygulanması için bir protokol sağlamayı amaçlamaktadır.

Hedeflenen Nanopartiküllerin Çalışması için Meme Kanserinin Singeneik Murine Modelinden Primer Kanserle İlişkili Fibroblastların İzolasyonu

Burada, onkojenik nükleik asitlerin terapötik susturulması için klinik olarak uygulanabilir bir yaklaşım sağlayarak, RNA oligomerlerini taşıyan manyetik demir oksit nanopartiküllerinin hayvan modellerinde metastatik meme kanserine in vivo olarak verilmesi için protokolü açıklıyoruz.

Murin Meme Kanseri Metastazlarında Nanoilaç Birikiminin İzlenmesi

Kan-beyin bariyeri, tedavisi olmayan bir hastalık olan glioblastoma için tedavilerin uygulanmasında önemli bir engeldir. Burada, boyut nedeniyle bu fizyolojik bariyeri atlayabilen ve tümör içinde birikebilen in vivo görüntü kılavuzluğunda demir oksit terapötik nano bir platform sunuyoruz.

Bir Glioblastoma Multiforme Hayvan Modelinde Bir Oligonükleotid Yükünün Nanopartikül Teslimi

Öğrenin, HerDox nanopartiküllerinin multimodal optik görüntüleme ile tümör hedeflemesini ve hücre içi penetrasyonunu nasıl analiz edeceğinizi. Bu yöntem, kanser tedavisinde ilaç taşıma verimliliğini değerlendirmeye yardımcı olur.

Hedefli Viral Protein analizi HER2 + tümörler için teslim Nanopartiküller

Daha fazla video keşfet