Laboratuvar örneklerinin, numunelerin ve reaktiflerin korunması, dünya genelindeki araştırma laboratuvarlarının temel bir gerekliliğidir. Örnek bütünlüğünü ve canlılığını zaman içinde korumanın etkili bir yolu, bunları soğuk sıcaklıklarda tutmaktır.
İster tezgah başında bir örnekle çalışıyor olun, ister bir deneyin sonunda bir örneği saklıyor olun, farklı soğutma yöntemleri kullanılabilir. Bu video, laboratuvarda tipik olarak bulunan soğutucu ajan türlerini ve araçları gösterecek ve hangi tür örneklerin hangi sıcaklıklarda saklandığını anlamanıza yardımcı olacaktır.
Soğutma maddesi seçimi, gerçekleştirilen deneysel prosedürün doğasına bağlıdır.
Konvansiyonel buz, örneklerin kısa süreli korunması için mantıklı seçimdir. Bu faz diyagramında görebileceğiniz üzere, buzun normal atmosfer basıncında 0 °C erime noktasına sahip donmuş su olduğunu muhtemelen biliyorsunuzdur. Oda sıcaklığında ısındığında sıvıya dönüştüğü için bazen buna “ıslak buz” denildiğini bilmiyor olabilirsiniz.
“Islak buz”, örnekler ve reaktiflerle çalışırken veya bunları taşırken soğuk tutmak için idealdir.
“Islak buz” katı H2O iken, “kuru buz” ise erime noktası -78.5 ˚C olan karbondioksitin katı formudur. Kuru buz atmosfer basıncında sıvıya dönüşmez; bunun yerine süblimasyon adı verilen bir işlemle doğrudan karbondioksit gazına dönüşür. Süblimasyon, maddenin fazının katıdan doğrudan gaza geçişini ifade eder ve bir faz diyagramındaki üçlü noktanın altında gerçekleşir.
Genellikle 0˚C'nin çok altındaki sıcaklıklarda saklanan dondurulmuş bakteriyel veya memeli hücreleri veya dokuları gibi biyolojik örneklerle çalışırken kuru buz kullanın.
Kuru buz, hal değiştirirken kalıntı bırakmaması nedeniyle ayrıca avantajlıdır; bu da üzerine sıvı dökülerek bir dondurma banyosu oluşturmak için onu ideal kılar.
Sıvı azot, yoğunlaştırılmış azot gazıdır ve yaygın olarak “LN2” şeklinde yazılır. Atmosfer basıncında sıvı azot, faz diyagramından görebileceğiniz üzere -196 °C'de kaynar veya sıvıdan gaza geçer.
Biyolojik örnekleri çoğu laboratuvar dondurucusunun ulaşabileceği sıcaklıkların altında saklamanız gerektiğinde sıvı azot kullanılır.
Sıvı azot, gevşek kapanan bir kapağa sahip bir dewarda veya vakumlu flaskta ya da sistem içinde basınç birikmesini önlemek için tahliye valfi ile donatılmış büyük bir tank dewarda saklanabilir.
Toksik olmasalar da, kuru buz ve sıvı azot tehlikeli maddelerdir ve laboratuvarın deneyimli bir üyesi tarafından eğitilene kadar bunlarla işlem yapılmamalıdır.
Sıvı azotun ve kuru buzun aşırı düşük sıcaklıkları nedeniyle, ciltle temas halinde ciddi doku hasarı meydana gelebilir. Her zaman kriyojenik eldivenler ve laboratuvar önlüğü dahil olmak üzere uygun koruyucu ekipmanlar kullanın. Ciltle temastan kaçınmak için örnekleri manipüle ederken araçlar kullanın.
Ayrıca, bu soğutma maddeleri gaz haline geçerek hal değiştirdiği için kuru buz veya sıvı azot saklamak amacıyla asla hava geçirmez kaplar kullanılmamalıdır. Hava geçirmez koşullar altında basınç artabilir ve bu da patlamaya yol açabilir.
Şimdi örnekleri soğuk tutan cihazlara bakalım… Laboratuvar buzdolapları ve dondurucuları, ünite genelinde homojen bir sıcaklık sağlamak için sıcaklığı ev tipi olanlardan daha hassas bir şekilde düzenler.
Genellikle sıcaklık izleme sistemleri ve belirgin sıcaklık değişimleri sonrası devreye giren alarmlarla donatılmışlardır.
Toksik kimyasallar veya bakterilerle kontaminasyon riskine karşı, laboratuvar buzdolaplarında veya dondurucularında asla yiyecek veya içecek saklamayın. Öğle yemeğiniz için başka bir yer bulmanız gerekecektir.
Buzdolapları 4°C'de tutulur ve genellikle, özellikle dondurmanın örnek bütünlüğünü etkileyebileceği durumlarda, örneklerin geçici saklanması için kullanılır.
Kullanılmadan önce ısıtılan doku kültürü medyaları ve dökülmüş hücre kültürü plakaları da dahil olmak üzere birçok reaktif ve çözelti, raf ömrünü uzatmak için 4°C'de saklanır.
Soğuk odalar, sıvı kromatografi üniteleri gibi düşük sıcaklıklarda çalışması gereken daha büyük ekipmanların saklanması için idealdir.
Laboratuvar tipi dondurucuların sıcaklıkları -20° C ile kriyojenik dondurucular için -196 °C arasında değişir.
Nükleik asitlerin ve restriksiyon enzimi gibi reaktiflerin saklanması için -20 °C uygun seçimdir. Dondurucudan çıkarılan örnekler ve reaktifler buz üzerinde tutulmalıdır.
-80°C ve kriyojenik dondurucular, sıvı azot içinde kriyoprezervasyon sonrası dondurulmuş doku ve hücrelerin uzun süreli saklanması için uygundur. -80 ˚C donduruculardan çıkarılan örneklerin taşınmasında genellikle kuru buz kullanılır.
Kriyoprezervasyon, dokuların ve hatta canlı hücrelerin uzun süreli saklanmasını ifade eden bir terimdir. Sıfırın altındaki sıcaklıklarda, numuneyi degrade eden reaksiyonlar da dahil olmak üzere tüm biyolojik aktiviteler etkili bir şekilde durdurulur.
Canlı hücreler ve dokular dondurulduğunda buz kristalleri oluşabilir; bu durum hücrelerin dehidrasyonuna ve hasarına yol açtığı gibi, çözünmüş moleküllerin zararlı konsantrasyonlarda birikmesine neden olabilir.
Ani dondurma (snap-freezing) veya flaş dondurma, biyolojik numunelerin sıvı azota veya kuru buz ve etanol karışımına hızla daldırılması işlemidir; böylece büyük buz kristalleri oluşamaz ve hücrelere zarar veremez. Buz oluşumunu azaltmak için katkı maddesi olarak kriyoprotektanlar da kullanılabilir.
Flaş dondurmaya alternatif olarak, burada gördüğünüz koyun embriyolarını kriyoprezerve etmek için gerekli olan, dondurma işlemini yavaşça kontrol eden makineler kullanılabilir.
Son zamanlarda, hücreleri ve dokuları buz kristallerinden kaynaklanan herhangi bir hasar olmaksızın kriyoprezerve etmek için bir yöntem olarak vitrifikasyon tanıtılmıştır. Bu işlem, belirli kriyoprotektanların varlığında hızlı soğutma yoluyla numunedeki sıvıyı kristal olmayan, camsı bir katıya dönüştürür.
JoVE'nin laboratuvar örneklerinin ve reaktiflerin soğutulmasına ilişkin giriş videosunu izlediniz.
Bu videoda farklı soğutucu ajan ve ekipman türlerini ve her bir soğutma yönteminin ne zaman kullanılacağına dair örnekleri inceledik. Ayrıca, biyolojik örnekleri kriyoprezerve etmenin çeşitli yollarını tanıttık. İzlediğiniz için teşekkürler.
Laboratuvar numunelerinin, örneklerinin ve reaktiflerinin aşırı soğuk kullanılarak korunması, biyomedikal araştırma laboratuvarlarında rutin olarak ge…
Bu videodaki bölümler
0:00
Overview
0:47
Use of Cooling Agents
4:02
Use of Cooling Equipment
6:13
Applications
7:38
Summary
Telif Hakkı © 2026 MyJoVE Corporation. Tüm hakları saklıdır.