Name: İnsan 3D Doku Mühendisliği In vitro Tümör Test Sistemi (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2013-08-06T08:56:00.000+00:00
Duration: 11 min 12 s
Description: Keşfedin, primer hücreler ve deküllülerize biyolojik iskelet kullanarak 3D tümör test sistemi oluşturma yöntemini. Statik ve dinamik koşullarda kültür, in vivo tümör ortamını daha doğru simüle eder.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Yazarlar Reaktörler ve biyoreaktör inkübatör geliştirmek için yaptığı teknik destek için Jan HANSMANN (Fraunhofer IGB, Stuttgart) teşekkür etmek istiyorum.

1.. BioVaSc ve Decellularization <ol><li> Kanüle arter erişim ve PBS ile bağırsak lümeni ile domuz jejunal segmentin damar sistemi yıkayın -. Tamamen temiz olana kadar tekrarlayın. </li><li> 4 adaptörleri ile 200 mm çaplı cam tankı hazırlayın ve peristaltik pompa (Ismatec) silikon tüpler aracılığıyla bağlayın. Kontrol ünitesi basınç steril tek kubbe (bkz. Şekil 1) bağlı olan bir basınç sensörü ile izlenebilir. </li><li> Decellularization (DZ) çözümü ile rezervuar şişeleri doldurmak ve olası hava kabarcıklarının için boru sistemini kontrol. </li><li> Lümen akışı için cam konnektörlerine kablo bağları ile bağırsak lümeni bağlayın. Damar sisteminin kırmızı arter erişim (Şekil 1B) içine 500 ml DZ çözelti pompası. Kısa bir süre elle tüm intestinal lümen dışarı basın pompalama işlemini her 15 dk kesiyoruz. </li><li> Decellularizati sırasındadoğal kan basıncı örnek alınarak 100 mm Hg, - süreç, tampon çözeltinin basıncı 80 arasında olmalıdır. </li><li> PBS ile BioVaSc yıkayın - bu (&quot;tamamen beyaz&quot;) hücre kalıntıları çıkana kadar. </li><li> DZ solüsyonu ile tamamen BioVaSc doldurun ve sallanan çalkalayıcı üzerinde 4 ° C de gece boyunca daldırın DZ çözelti içinde inkübe edilir. </li><li> Adımı 1.6 tekrarlayın. </li><li> DNase çözelti içinde BioVaSc yerleştirin ve çalkalayıcıyı sallanan üzerinde 4 ° C&#39;de gece boyunca inkübe edilir. </li><li> DNaz çözüm çıkarın ve yıkama tamponu ile yıkayın. </li><li> 25 kGy ile γ-sterilizasyon </li></ol> 2. Farklı Hücre Tipleri Primer insan dermal mikrovasküler endotelial hücreleri (mvECs) ve fibroblast 2.1 izolasyonu <ol><li> 2 şeritler halinde deri biyopsisi (tercihen preputiumda) Cut - neşter ile 3 mm genişliğinde ve onları PBS ile 3x yıkayın - çözüm. </li><li> Dispase çözeltisi ile doku örtün ve 16 için inkübe - 14 ° C &#39;de 8 saat </li><li> Ayrı 2 cımbız ile dermis epidermis ve PBS + ile dolu petri kutularının içine de ayrı ayrı aktarmak. </li><li> Durulama dermis Versene ile 1x şeritler. </li><li> Dermis şeritlere 10 ml tripsin / EDTA solüsyonu ilave edin ve 40 dakika boyunca inkübatör içinde inkübe edilir. </li><li> Hemen% 1 FCS ile enzim reaksiyonu durdurun. </li><li> VascuLife ile dolu bir petri deri şeritler aktarın ve biraz baskı ekleyerek, her tarafta 8x neşter ile her şerit çizik. </li><li> Bir santrifüj tüpüne bir hücre süzgecinden ile üretilen hücre süspansiyonu aktarın ve VascuLife ile hücre filtresi 3 kez yıkayın. </li><li> 5 dakika boyunca 1,200 x g de santrifüj ve tüp VascuLife ile hücre pelletini. </li><li> Fibroblastlar izole etmek, pirzola dermis neşter kullanarak küçük parçalar halinde şeritler. </li><li> Dermis parçalara kollajenaz çözüm 10 ml ekleyin. </li><li> Kuluçka makinesi içinde 45 dakika için inkübe edilir, sonra su da santrifüj ve dikkatli bir şekilde çıkarınpernatant. </li><li> DMEM +% 10 FCS +% Penstrep ile tedarik edilmiş, santrifüj onunla pelet 1x yıkayın ve dikkatlice süpernatant kaldırmak. </li><li> Kültür ortamı içinde pelet yeniden süspanse edin ve hücreleri, doku dışında büyümeye izin veren bir T75 kültür şişesine aktarın. </li></ol> 2.2 Tümör Hücre Hattı S462 (Lütfen Dr Nikola Holtkamp, ​​Charite Üniversitesi Tıp Berlin tarafından sağlanan) tümör hücre hattı S462 herediter tümör yatkınlık sendromu Nörofibromatozis tip 1 9 olan bir kadın hastanın malign periferik sinir kılıfı tümörü elde edildi. S462,% 10 FCS ile takviye edilmiş DMEM içinde kültürlenir. 3 gün - Medium her 2 değiştirilmelidir. Haftada bir hücreler bölünmüş olması gerekir. 3. Tümör Test Sistemi: Statik Kültür Koşulları Biyoreaktörü&#39;nün Sistemlerinde Dinamik Kültür ile karşılaştırıldığında <ol><li> Boru şekilli SIS-Muc bir tarafta açık ve iki metal halkalar (hücre kron, 10 mm çap, kendi C arasında tamir Kesonstructed). Gece boyunca, hücre kültür ortamı içinde SIS-Muc örtün. </li><li> SIS (mono-ya da ko-kültür set-up) bir ya da her iki tarafta tanımlanmış hücre sayıları Tohum izole edilmiş hücreler (aşağıya bakınız). <ol><li> Tohum 8.000 hücre SIS (eski Seroza) bazolateral yüzeyi üzerine 100 ul toplam hacim içinde birinci mvECs of / cm 2. 3 saat sonra, bir daldırılmış kültür sağlamak için ortam ile kuyu doldurun. </li><li> Endotel hücreleri 3 gün boyunca yapışmaya izin verin. 180 ° statik kültür sistemi çevirin ve 12-iyi levhaya transfer. </li><li> SIS (eski lümenin tarafı) apikal yüzeyi üzerinde 500 ul toplam hacim içinde birinci dermal fibroblastlarda oluşan bir karışım (8.000 hücre / cm 2) ve tümör hücreleri (15,000 hücre / cm 2) tohum. </li><li> Hücreler, 3 saat boyunca bağlı ve orta ile iyi doldurmak için izin verir (daldırılmış kültür ortamı:% 10 FCS ile takviye edilmiş% 50 Vasculife +% 50 DMEM). </li><li> Tümör test sistemi, statik şartlar a altında kültürlenmekteT 37 ° C, ilave 14 gün boyunca inkübatör içinde% 5 CO2. 3 gün - her 2 kültür ortamı değiştirin. </li></ol></li><li> Dinamik kültürü için, iki metal halkalar arasındaki SIS-Muc düzeltmek ve 3.2.1 de açıklandığı gibi birincil mvECs tohum. 3 gün sonra, metal halkalar SIS-Muc çıkarın ve (Şekiller 2C ve 2D bakınız) akış reaktörüne membran yerleştirin. Biyoreaktör içinde bir matris üzerine bir şırınga ve kanül ile dermal fibroblastlar ve tümör hücrelerinin birincil uygulanır ve hücreler, kültür ortamı ile biyoreaktör sistemi doldurulmadan önce 3 saat boyunca yapışmaya izin verir. </li><li> Sabit orta akış ile ertesi gün dinamik kültür koşulları üzerinde (3.8 ml / dakika, 37 ° C ve% 5 CO2) başlatılabilir. Dinamik Kültür 14 gün boyunca muhafaza edilir, kültür ortamı, 7 gün sonra değiştirilir. </li><li> Dinamik test düzeneği, bir pompa ve gerekli sıcaklık ve CO2 ile ortam akışı sağlayan, kendi kendine yapılan inkübatörde kültüre </sub&gt; Içeriği. </li></ol> 4. Analiz için Karakterizasyon Yöntemleri 4.1 Tespit ve seribaşı kollajen matriks parafin-gömme <ol><li> (Imüno-) histolojik karakterizasyonu için, kültür ortamı çıkarın ve 2 saat boyunca% 4 paraformaldehit ile doku tamir. </li><li> % 4 paraformaldehid çıkarın ve bir doku gömme kasetine metal ovülden SIS aktarın. Kalan Fiksatif kaldırmak ve parafin infiltrasyonu için kurutmak için doku sulayın. </li><li> Bir parafin bloğu içine yerleştirilmeden önce, 2 SIS kesilmiş - 3 dilim ve kesme yüzeyleri aşağı doğru gelecek şekilde bir parafin dolu metal taban kalıp yerleştirin. Bir destek olarak, kalıbın üst doku kaseti ekleyin. </li><li> 5 mikron dilim kesin ve düzleştirme için bir 40 ° C su banyosunda onları yüzer, daha sonra uygun bir cam slaytlar üzerine monte slaytlar. Kaplanmamış slaytlar immünohistolojik boyama için polilisin ile kaplanmış dilimlerin yapışması için, H &amp; E lekeler için kullanılır.Dilimleri iyice kurumasını bekleyin. </li><li> Parafin eritin, ksilen ile çıkarın ve lekelenme aşağıdaki için dilimleri depoIayabiIirIer. </li></ol> 4.2 Boyama <ol><li> Rehydrated dilimler standartlaştırılmış bakış boyama olarak Hematoksilen / Eosin ile boyanmış olabilir. </li><li> Immunhistological boyama için, sabit ve parafine infiltre doku dilimleri antikorları tanıyan ve spesifik epitoplara bağlanan izin vermek için bir antijen alma geçmesi gerekmektedir. Bu nedenle, deparafinize ve rehidre slaytları 20 dakika boyunca ısıtıldı sitrat tampon maddesi (pH 6.0) ile bir buhar ocak içine yerleştirilir. </li><li> Boyama çözümler için gerekli hacmi en aza indirmek için bir PAP kalem ile yıkama tamponu (0.5 M TBS tamponu +% 0.5 Tween) ve daire dilimleri aktarın kayar. </li><li> Bir nem odası içinde slayt yerleştirin. Antijen-antikor-bağlanma, belirli bir yaban turbu peroksidaz-aracılı görselleştirme güvence altına almak için, endojen peroksidaz% 3 hidrojen peroksit ile doygun hale getirilir. </li><li> İlköğretim antibody seyreltiler dilimlerine uygulandığı oda sıcaklığında 1 saat inkübe edildi ve dikkatli bir şekilde yıkama tamponu ile yıkanır. </li><li> Spesifik antijen-antikor bağlamaları tespiti için Ultra Vision Quanto Detection System HRP DAB (Thermo Scientific) tavsiye edilen protokole uygun olarak kullanılır. </li><li> Çekirdekler, 1 dakika için hematoksilin ile karşı edilir. </li><li> Slaytlar, bir sulu ortam ile monte edilmiş, kurutulmuş ve bir ters mikroskop kullanılarak. </li></ol>

<ol><li>Schenke-Layland, K., Nerem, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vitro+human+tissue+models--moving+towards+personalized+regenerative+medicine%5BTitle%5D)+AND+%22Adv.+Drug+Deliv.+Rev%22%5BJournal%5D)">In vitro human tissue models--moving towards personalized regenerative medicine.</a> Adv. Drug Deliv. Rev. 63, 195-196 (2011).</li>
<li>Pusch, J., Votteler, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+physiological+performance+of+a+three-dimensional+model+that+mimics+the+microenvironment+of+the+small+intestine%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">The physiological performance of a three-dimensional model that mimics the microenvironment of the small intestine.</a> Biomaterials. 32, 7469-7478 (2011).</li>
<li>Schanz, J., Pusch, J., Hansmann, J., Walles, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Vascularised+human+tissue+models%3A+a+new+approach+for+the+refinement+of+biomedical+research%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">Vascularised human tissue models: a new approach for the refinement of biomedical research.</a> J. Biotechnol. 148, 56-63 (2010).</li>
<li>Lanza, R., Langer, R., Vacanti, J. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aLanza%2C+R+%22Principles+of+tissue+engineering%22">Principles of tissue engineering</a>. , 3rd, Elsevier Academic Press. Burlington, MA. (2007).</li>
<li>Barron, V., Lyons, E., Stenson-Cox, C., McHugh, P. E., Pandit, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bioreactors+for+cardiovascular+cell+and+tissue+growth%3A+a+review%5BTitle%5D)+AND+%22Ann.+Biomed.+Eng%22%5BJournal%5D)">Bioreactors for cardiovascular cell and tissue growth: a review.</a> Ann. Biomed. Eng. 31, 1017-1030 (2003).</li>
<li>Martin, I., Wendt, D., Heberer, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+of+bioreactors+in+tissue+engineering%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">The role of bioreactors in tissue engineering.</a> Trends Biotechnol. 22, 80-86 (2004).</li>
<li>Mertsching, H., Walles, T., Hofmann, M., Schanz, J., Knapp, W. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Engineering+of+a+vascularized+scaffold+for+artificial+tissue+and+organ+generation%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">Engineering of a vascularized scaffold for artificial tissue and organ generation.</a> Biomaterials. 26, 6610-6617 (2005).</li>
<li>Linke, K., Schanz, J., Hansmann, J., Walles, T., Brunner, H., Mertsching, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Engineered+liver-like+tissue+on+a+capillarized+matrix+for+applied+research%5BTitle%5D)+AND+%22Tissue+Eng%22%5BJournal%5D)">Engineered liver-like tissue on a capillarized matrix for applied research.</a> Tissue Eng. 13, 2699-2707 (2007).</li>
<li>Holtkamp, N., Atallah, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((MMP-13+and+p53+in+the+progression+of+malignant+peripheral+nerve+sheath+tumors%5BTitle%5D)+AND+%22Neoplasia%22%5BJournal%5D)">MMP-13 and p53 in the progression of malignant peripheral nerve sheath tumors.</a> Neoplasia. 9, 671-677 (2007).</li>
<li>Weaver, V. M., Petersen, O. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reversion+of+the+malignant+phenotype+of+human+breast+cells+in+three-dimensional+culture+and+in+vivo+by+integrin+blocking+antibodies%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Reversion of the malignant phenotype of human breast cells in three-dimensional culture and in vivo by integrin blocking antibodies.</a> J. Cell Biol. 137, 231-245 (1997).</li>
<li>Hutmacher, D. W., Horch, R. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Translating+tissue+engineering+technology+platforms+into+cancer+research%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Cell.+Mol.+Med%22%5BJournal%5D)">Translating tissue engineering technology platforms into cancer research.</a> J. Cell. Mol. Med. 13, 1417-1427 (2009).</li>
<li>Yamada, K. M., Cukierman, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Modeling+tissue+morphogenesis+and+cancer+in+3D%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Modeling tissue morphogenesis and cancer in 3D.</a> Cell. 130, 601-610 (2007).</li>
<li>Hanahan, D., Weinberg, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hallmarks+of+cancer%3A+the+next+generation%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Hallmarks of cancer: the next generation.</a> Cell. 144, 646-674 (2011).</li>
<li>Yang, S. -T., Zhang, X., Wen, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microbioreactors+for+high-throughput+cytotoxicity+assays%5BTitle%5D)+AND+%22Curr.+Opin.+Drug+Discov.+Devel%22%5BJournal%5D)">Microbioreactors for high-throughput cytotoxicity assays.</a> Curr. Opin. Drug Discov. Devel. 11, 111-127 (2008).</li>
<li>Schultheiss, D., Gabouev, A. I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biological+vascularized+matrix+for+bladder+tissue+engineering%3A+matrix+preparation%2C+reseeding+technique+and+short-term+implantation+in+a+porcine+model%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Urol%22%5BJournal%5D)">Biological vascularized matrix for bladder tissue engineering: matrix preparation, reseeding technique and short-term implantation in a porcine model.</a> J. Urol. 173, 276-280 (2005).</li>
</ol>

Yazarlar ifşa hiçbir şey yok.

<html> Daha pahalı bir yaklaşım olmasına rağmen, tümör araştırma, 3D sistemleri, 2 ve 3 boyutlu kültür sistemleri karşılaştırıldığında, daha iyi biyolojik mikroçevrelerde koşullarını taklit kanıtlanmıştır. Bu, bazı tümör hücreleri gerçek tümöründe duruma uygun olarak ortak bir 2B kültür 12, daha 3B kültürde daha yavaş büyümeye gösterilebilir. Bissell ve arkadaşları kanserojen meme hücrelerinin davranışı bir matris içinde bir 3D kültür hücre-ECM etkileşimleri sunmaktadır daha doğru hücre morfolojisi ve sinyalizasyon dahil in vivo durumu yansıtan bu işlerinde gösterdi. Bundan başka, çevre etkileşimleri değişiklikler, normal bir fenotip için habis hücrelerin geri dönmesine neden olduğunu göstererek 3D olarak hücre dışı ortamın önemi vurgulanmıştır. İlave olarak ve en önemlisi, bu sonuçlar aynı zamanda in vivo hayvan modellerinde 10,11 teyit edilebilir. ontent &quot;&gt; in vivo hayvan deneylerinde ve in vitro doku modellerinde arasında direkt karşılaştırma her iki sistemde de avantajları ve sakıncaları ortaya koyar. in vitro modellerin bir avantajı, çok daha iyi bir gerçek zamanlı veya mikroskobu ile sabit görüntüleme izni olan. bir sınırlama olduğu Bu in vivo sistemler genellikle ilerleme ise, statik ya da kısa süreli koşullarını taklit eder. damar ve küçük moleküller, normal taşıma mevcut olmaması. bağışıklık tepkilerini barındırmak ve diğer hücre-hücre etkileşimleri in vitro model 12 daha başka dezavantajları vardır Bu nedenle, 3D vitro sistemlerde bu çalışmada sunulan hayvan deneyleri için umut verici bir ek sunuyoruz. Onlar insan organizması için daha iyi bir kıyaslama sağlamak ve bu nedenle deneysel yanlış yorumlamaları en aza indirmek. Biyomimetik vivo model sistemlerinde dolayısıyla kanser ve metastatik yayılma bağımlı olduğunu nasıl çalışma için daha uygun olacak tumorig düzenleyen microenvironmental koşullarıEnesis 11. Çalışmamız SIS-Muc sağladığı 3D çevre ortak 2B hücre kültürü içinde gözlemlenmemektedir hücre, daha tümör gibi doku formasyonu, (Şekil 3A) neden olduğunu göstermektedir. Ayrıca, tümör biyopsi türetilen birincil hücrelerin kullanımı kişiselleştirilmiş tıp, bir hastanın bireysel ihtiyaçlarına göre en iyi tedaviyi belirlemeyi amaçlamaktadır bir disiplin yönünde çok önemli bir adımdır. Biyopsi izole birinci hastaya özgü tümör hücrelerini ekleme tedavi stratejilerinin vitro test sağlayacaktır. Bu test sistemleri mümkün bir zaman ve maliyet tasarrufu, yüksek verimli tarama bunların farklı ilaçlar ve bunların kombinasyonlarını araştırmak için yapacaktır. Bir tümörün mikro çevre etkileri, tümör ilerlemesi ve 13 suitab olarak ispat olabilir çünkü Buna ek olarak, bu çalışmada gösterildiği gibi, tümörle bağlantılı stromal hücrelerin entegrasyonu, kişiye özel bir yaklaşım için önemlidirle terapötik hedefi. Alternatif olarak, bir kişiye bir yaklaşıma, bizim tümör modeli kurulmuş kanser oluşturucu hücre çizgilerinin eklenmesi ile genel bir tümör test sistemi olarak hizmet etmek için modifiye edilebilir. Bu temel araştırma amaçlı umut verici bir uyarlamasıdır. Her iki ilaç testi için, bir damar yapısı, bu terapötik maddelerin dağılımını ve alımını test etmek için gereklidir yaklaşır. SIS-Muc matris bariyer emilme deneyleri için birincil mvEC ile bazolateral tohum sağlar BioVaSc korunmuş vasküler yapıların yeniden tohumlama başka ilaç teslimat çalışma artıracaktır. Doku modelleri oluşturmak için, 3 boyutlu bir biyo-bozunabilir matris, farklı hücre tipleri 14 bir ko-kültür için çerçeve olarak kullanılabilir. , 3D matrislerin kullanımı genellikle fonksiyonel damarlanma yokluğu ile sınırlıdır. Bu sorun, korunmuş kan damarı str sunar BioVaSc, kullanımı ile çözülebiliructures, bu endotel hücreleri ile tohumlandı edilebilir. Ayrıca, BioVaSc hücrelerin yapışmasını sağlamak ve doku farklılaşması kolaylaştırmak hücre dışı bileşenleri içerir. Ayrıca biyoyapay 3D dokuların 7,8,15 uzun süre doku özel bir işlev sağlar. Fonksiyonel vasküler vekalet mühendisliği için önkoşul insan fizyolojik ve biyomekanik koşullar taklidi yapmak. Bu nedenle, in vitro bu gereksinimleri uygulamak biyo-reaktör sistemleri, biyolojik tümör modelleri oluşturmak için son derece ilgi çekicidir. BioVaSc kombinasyonu, biyoreaktör teknolojisi ve farklı hücre tiplerinin ortak kültürleme örneğin anjiyojenez, kanser ve metastaz olarak ilerlemesi hakkında mekanizmalarının çalışmasını sağlayacak vaskülarize tümör dokular üretmek için bir çok umut verici bir yöntemdir. Biz bir eşdeğerini sağlayarak hayvan çalışmaları tamamlayan için umut verici bir yaklaşım gibi tümör modellerini görmekinsan tümör fizyolojisi.

Yeni ilaç kalitesi, güvenliği, ve ruhsat öncesi etkinlik açısından valide edilmelidir. Bugüne kadar, hayvan deneyleri uyuşturucu testi ve doğrulama için standart bir yöntemdir. Ancak, türe özgü farklılıklar nedeniyle, genellikle hayvan deneyleri kapsamlı insanlarda 1 bileşiklerin etkisini değerlendirmek yoktur. Bu nedenle, bu yeni ilaçlar ve maddelerin in vitro testler için kullanılabilir insan doku modelleri oluşturmak için önemlidir. Grubumuzun odaklarından biri, bizim biyolojik kanlanan iskele (BioVaSc) 2,3 ile in vitro test modellerinin oluşturulmasıdır. BioVaSc, bir statik veya dinamik 3D matris sistemi olarak kullanılabilir. Statik kültür için hücresizleştirilmiş domuz jejunal segment (küçük bağırsak mukozada SIS-Muc) hücre yeniden tohumlama için bir metal uç yerleştirilir. Kanser ve endotel hücreleri gibi çeşitli hücreler, bir platform üzerinde kültürlenebilir. <pDinamik kültür için class = &quot;jove_content&quot;&gt;, BioVaSc damar boyunca ya da iskele yüzeyi boyunca akış uygulayan bir biyo-reaktör sistemine bağlanmıştır. Şu biyoreaktörleri hücrelerin 4 farklılaştırma veya çoğalması üzerine hareket, biyolojik, mekanik veya elektrik uyaranlara uygulamak. Doku mühendisliği alanında biyoreaktörler için, temel kavram, insan vücudundaki koşullarını taklit etmektir. Bu formülde, hücreler birbirlerine ve kendi çevre hücre dışı matris ile etkileşim için doğal bir ortam sağlanmaktadır. In vitro test sistemleri veya transplantların üretimi için, uygun bir taşıyıcı yapı ve biyoreaktör sistemi ile hücrelerin doğal ortamı taklit edilmesi yeteneği kritiktir 5&#39;tir. Bu nedenle, daha karmaşık ve teknik olarak zorlu cihazlar bu görevleri 6 yerine getirmek amacıyla geliştirilmiş olmalıdır. Bu establ için iskele kullanmak da mümkündürnedeniyle besleme arter, ven ve bağlantı kapiler yatak bulunmaktadır korunmuş boru şeklindeki yapılar, bir vaskülarize modeli ishment. Tüm hücreler, domuz, kimyasal, mekanik ve enzimatik decellularization ile kaldırılması gerekir ve iskele gama-sterilize edilmiştir. Geri boru vasküler yapılar daha sonra, pH, sıcaklık, basınç, besin kaynağı ve atık çıkarma 6 olarak biyomekanik ve / veya biyokimyasal parametreler taklit eden bir devridaim perfüzyon biyoreaktörü kullanarak 7, insan mikrovasküler endotelyal hücreleri ile tohumlandı edilebilir. Boru şeklindeki yapıların yeniden endotelizasyon kollajen iskele 3,7 olan bir insan kan damarı eşdeğer oluşturur. Bir sonraki adımda, eski lümen (mukoza) yüzey ko-kültürler 3,7,8 kurmak için primer insan hücreleri ile tohumlanabilmektedir. Bu çalışmada, 3 boyutlu bir tümör test sistemi primer st olan bir tümör hücre çizgisi ko-kültür tarafından kurulmuşDİE-Muc statik ve dinamik koşullar altında romal hücreleri.

<table><tbody><tr><td>Kollajenaz çözeltisi</td><td>SERVA</td><td>17454</td> <td>(500 U / ml)</td></tr> <tr><td>Dispas çözeltisi</td><td>Gibco</td><td>17105-041</td> <td>(2.0 U / ml)</td></tr> <tr><td>DMEM, yüksek glikozlu</td><td>PAA</td><td>G0001,3010</td><td></td></tr><tr><td>DNaz</td><td>ROCHE</td><td>10104159001</td><td>200 mg 500 ml PBS < içinde çözüldü PBSsup> + +% 1 PenStrep</td></tr><tr><td>DZ çözeltisi</td><td>Roth</td><td>3484.2</td><td>34 g Sodyum Desoksişelat, 1 L Ultra saf suda</td></tr><tr><td>FCS</td><td>LONZA</td><td>DE14-801F</td><td></td></tr><tr><td>IHC-Kit DCS SuperVision 2 HRP</td><td>DCS</td><td>PD000KIT</td><td></td></tr><tr><td>tıbbi basınç dönüştürücü</td><td>MEMSCAP</td><td>SP844</td><td></td></tr><tr><td>monoklonal fare anti-insan Von Willebrand Faktör</td><td>DAKO Cytomation</td><td>M0616</td><td>Klon F8 / 86 0.12 & mu; g/ml</td></tr><tr><td>fare monoklonal anti-insan p53</td><td>DAKO Sitomasyon</td><td>IS616</td><td>Klon DO-7 kullanıma hazır</td></tr><tr><td>peristaltik pompa</td><td>Ismatec</td><td></td><td></td></tr><tr><td>steril tek kullanımlık kubbe</td><td>MEMSCAP</td><td>844-28</td><td></td></tr><tr><td>Tripsin / EDTA çözeltisi</td><td>PAA</td><td>L11-003</td><td>%0,05</td></tr> <tr><td>VascuLife (VEGF-MV)</td><td>Lifeline</td><td>LL-0003</td><td></td></tr><tr><td>Versene</td><td>Gibco</td><td>15040-033</td><td></td></tr></tbody></table>

İnsan 3d doku mühendisliği<em&gt; in vitro</em&gt; tümör test sistemi

Tissue Engineering of a Human 3D in vitro Tumor Test System

Kanser dünya çapında önde gelen ölüm nedenlerinden biridir. Şu an tedavi stratejileri ağırlıklı olarak yetersiz in vivo fizyolojik koşulları yansıtacak 2D kültür sistemlerinde, gelişmiştir. Biyolojik 3D matrisler doku organizasyonu ve hücre farklılaşmasının çalışma izin, hücreler kendini organize bir ortam sağlar. Bu tip iskeleler doğrudan 3D, hücre-hücre etkileşimleri incelemek için, farklı hücre tiplerinin karışımı ile tohumlandı edilebilir. Kanser tümörlerinin 3D karmaşıklığını taklit etmek, bizim grup bir 3D in vitro tümör testi sistemi geliştirdi. Bizim 3D doku test sistemi modelleri bizim decellularized domuz jejunal segmentte elde edilen biyolojik kanlanan iskele (BioVaSc) ile kurulan malign periferik sinir kılıfı tümörü (MPNSTs), in vivo durum. Bizim modelde, birincil fibroblastlar, mikrovasküler endotel hücreleri ile (modifiye BioVaSc matris reseededmvECs) ve S462 tümör hücre hattı. Statik kültür için BioVaSc vasküler yapısı çıkarılır ve geriye kalan iskele bir tarafta (küçük bağırsak mukozada SIS-Muc) açık kesilir. Elde edilen matris, iki metal halkalar (hücre kron) arasında sabitlenir. Başka bir seçenek kesme stresine karşı kültür hücreleri ortaya akış biyoreaktör sistemi içinde hücre tohumlanmış SIS-Muc etmektir. Burada, biyoreaktör kendinden inşa inkübatör içerisinde bir peristaltik pompa bağlanmıştır. Bir bilgisayar gibi kan basınç, sıcaklık ve akış hızı gibi parametreleri ile arteriyel oksijen ve besin kaynağı düzenler. Bu kurulum, basınç-regüle ya da aralıklı ya da sürekli akışı ile dinamik bir kültürü sağlar. Bu çalışmada, başarılı MPNSTs için statik ve dinamik 3D kültür sistemi hem de kurabilir. Daha doğal bir 3D ortamda kanser tümörleri model yeteneği keşif, test ve doğrulama ve sağlayacakBir insan gibi modelinde gelecek ilaç.

Şekil 1B &#39;de gösterildiği gibi, kılcal ağ korunmuş boru yapıları ile domuz jejunal parçası (yaklaşık 2 m uzunluğunda ve 20 mm çapında) decellularized. Kimyasal, enzimatik ve mekanik decellularization sonra, 3D hücre kültürü için kullanılabilecek bir kollajen I / III iskeleti sağlamıştır. A Feulgen test matrisi (veriler gösterilmemiştir) saflığını (no DNA kalıntıları) göstermek için gerçekleştirildi. Şekiller 2A ve 2B hücre kron tarafından güvenli SIS-Muc statik kültürünü göstermektedir. Bu dinamik kültürü için bir in-house olarak tasarlanmış biyoreaktör (Şekil 2C) &#39;de SIS-Muc sabit. Şekil 2B bioreaktörün bölmesi boyunca simüle edilmiş dinamik bir akış göstermektedir. Biyoreaktör, kendi kendine yapılan kuluçka makinesi sistemi içine yerleştirilmiş ve bir peristaltik pompa ile bağlanır. Bu kurulum, basınç-regüle pulsatil akış ya da C ile bir dinamik kültür sağlar:<html> ONSTANT akışı. Şekil 3, 2 boyutlu monokültürde statik S462 kültürlenmiş tümör hücre çizgisinin bir bakış (Şekil 3A) verir ve 3D kokültür (Şekiller 3B-3D). Şekil 3B, tümör hücreleri, S462 ve SIS apikal tarafında birinci fibroblast üçlü kültür gösterir basolateral tarafında (eski Seroza tarafı)-Muc (eski iç lümen tarafı) ve mvEC. Farklı hücre tiplerinin tanımlanması mvEC (Şekil 3C) etiketlemek için von Willebrand faktörü gibi, hücre tipi özel belirteçler, boyama ile mümkün olduğunu. P53-pozitif hücreler, S462, p53-negatif primer fibroblastlar (Şekil 3B) ve hücrelerin 3D dağılımı analiz edilebilir ayırt edilebilir. Dinamik olarak kültürlenmiş üçlü kültür Şekil 3 Şekil 4 boyamaları eşdeğer Şekil. <html> 0460/50460fig1.jpg &quot;/&gt; Şekil 1. Decellularization set-up. (A) Bioreactor ve bir PC tarafından izlenen BioVaSc, decellularizing için pompa set-up. (B) decellularized BioVaSc cam tankta. Lümen ve arteryel giriş adaptörlere bağlanır. . <img alt="Şekil 2," src="/files/ftp_upload/50460/50460fig2.jpg" /> Şekil 2. Farklı kültür set-up bir bakış. Mikrotiter plaka statik kültür sistemi (A) CAD kesit görünüşüdür, (B) statik kültürü için metal insertler, akış bioreaktörün üst kapağının dinamik kültürü için (C) orta akış simülasyonu (hız alanı [m / sn]) , (D) peristaltik pompaya bağlı dinamik kültürü için akış biyoreaktör. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/50460/50460fig2large.jpg" target="_blank">büyük rakam görmek için buraya tıklayın</a> ent &quot;fo: keep-together.within-page =&quot; always &quot;&gt; <img alt="Şekil 3," fo:content-src="/files/ftp_upload/50460fig3highres.jpg" fo:content-width="5.5in" src="/files/ftp_upload/50460/50460fig3.jpg" /> Şekil 3,. Statik 3B tümör modelinin immünohistolojik karakterizasyonu bakış. Bir Permanox slaytta S462 hücrelerin statik kültürlü 2D mono kültür (A) Hematoksilen leke, statik kültürlü 3D üçlü kültür (B) H &amp; E boyama, oklar, von Willebrand faktör (C) immünohistolojik boyama, (D endotel hücreleri işaretlemek p53) immünohistolojik boyama. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/50460/50460fig3large.jpg" target="_blank">büyük rakam görmek için buraya tıklayın</a> <img alt="Şekil 4," fo:content-src="/files/ftp_upload/50460fig4highres.jpg" fo:content-width="6in" src="/files/ftp_upload/50460/50460fig4.jpg" /> <stRong&gt; Şekil 4. Dinamik 3D tümör modelinin immünohistolojik karakterizasyonu bakış. (A) dinamik kültürlü 3D üçlü kültür H &amp; E boyama, oklar endotel hücreleri, (B) işaretlemek von Willebrand faktör immünohistolojik boyama, p53 için (C) immünohistolojik boyama. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/50460/50460fig4large.jpg" target="_blank">büyük rakam görmek için buraya tıklayın</a>

Test sistemleri olarak insan 3D tümör dokuları oluşturmak için yöntemler tarif edilmiştir. Bu teknolojiler, decellularized Biyolojik Vaskülarize İskele (BioVaSc), primer insan hücreleri ve bir akış biyoreaktör içinde dinamik koşullar altında hem de statik altında kültürlenebilir bir tümör hücre hattı, dayanmaktadır.

İnsan 3D Doku Mühendisliği<em&gt; In vitro</em&gt; Tümör Test Sistemi

Cancer is one of the leading causes of death worldwide.  Current therapeutic strategies are predominantly developed in 2D culture  systems, which ...

Bu prosedürün genel amacı, deselülarize edilmiş biyolojik bir iskele üzerinde primer hücreler ile 3B tümör test sistemi oluşturmaktır. Bu işlem, öncelikle porcine al segmentinin deselülarizasyon solüsyonu ile pompalandığı bir deselülarizasyon süreci kullanılarak iskelenin hazırlanmasıyla gerçekleştirilir. İkinci adım, standart bir izolasyon protokolü kullanılarak bir hastanın biyopsisinden primer insan hücrelerinin izole edilmesidir.Ardından, tübüler ince bağırsak submukozasını bir tarafını kesecek şekilde açarak, iki metal halka arasına sabitleyerek ve belirlenmiş hücre yoğunluklarında tümör hücreleri ile ilişkili stromal hücreler ekerek tümör test sistemini kurun. Son adım, hücre yüklü konstrüktün statik veya dinamik koşullar altında uygun bir düzenekte kültüre edilmesidir. Nihayetinde, tümör büyümesinin özelliklerini değerlendirmek için immünohistokimyasal mikroskopi kullanılır.Bu tekniğin TT tümör test sistemleri gibi mevcut yöntemlere göre temel avantajı, bu yöntemle tümörün in vivo koşullarını yaygın 2D modellerden daha doğru bir şekilde simüle eden 3D doku modelleri oluşturmanın mümkün olmasıdır. Dinamik kültürün avantajı, hücreye özgü karakteristiklerin korunmasıdır. Bu yöntem, kanser hücrelerinin 3D bir ortamda hücre-hücre ve hücre-matriks etkileşimlerini nasıl oluşturduğu gibi tümör biyolojisi alanındaki temel soruların yanıtlanmasına yardımcı olabilir ve bu da tümör ilerlemesi ve metastaz gibi kanserle ilgili süreçların açıklığa kavuşturulmasına katkı sağlayacaktır.Bu tümör test sisteminde kullanılan biyolojik vaskülerize iskele veya biova, porsin jejunum segmentinden türetilmiştir. Porcin jejunum segmentinin vasküler sistemini ve intestinal lümeni, kanüle edilmiş arteriyel erişim yoluyla PBS ile yıkayın. Tamamen temizlenene kadar işlemi tekrarlayın.Dört adaptörlü, 200 milimetre çapında cam bir tank hazırlayın ve bunları silikon tüpler aracılığıyla peristaltik pompaya bağlayın. Basınç kontrol ünitesi, steril tek kullanımlık bir kubbeye bağlı olan bir basınç sensörü aracılığıyla izlenebilir. Rezervuar şişelerini deselülarizasyon veya DZ solüsyonu ile doldurun.Borulama sisteminde olası hava kabarcıkları olup olmadığını kontrol edin. Bağırsak lümenini, lümenel akış için kullanılan cam konnektörlere kablo bağlarıyla bağlayın. Vasküler sistemin kırmızı arteriyel girişinden 500 mililitre DZ çözeltisi pompalayın.Bağırsak lümeninin tamamını manuel olarak boşaltmak için pompalama işlemini her 15 dakikada bir kısa süreliğine durdurun. Deselülerizasyon süreci boyunca tampon çözeltinin basıncının izlenmesi önemlidir. Basınç, doğal kan basıncı örnek alınarak 80 ila 100 milimetre cıva arasında olmalıdır.Biovayı, hücre kalıntılarından arınana ve vasküler yapı tamamen beyaz renk alana kadar PBS ile yıkayın. Bu işleme, deri biyopsisini bir bistüri ile iki ila üç milimetre genişliğinde şeritler halinde keserek ve bunları üç kez PBS solüsyonu ile durulayarak başlayın. Dokuyu disbe solüsyonu ile inkübe ettikten sonra, epidermisi dermisten ayırmak için iki adet pens kullanın.Primer dermal mikrovasküler endotel hücrelerini veya MV eec'leri izole etmek için her ikisini de ayrı ayrı PBS ile doldurulmuş Petri kaplarına aktarın; dermis şeritlerini bir kez enzimle durulayın, dermis şeritlerine 10 mililitre EDTA çözeltisi ekleyin ve 37 °C'de 40 dakika boyunca inkübe edin. Enzim reaksiyonunu %1 FCS ile durdurun ve deri şeritlerini VascuLife ile doldurulmuş bir Petri kabına aktarın. Bir hücre süspansiyonu oluşturmak için her şeridi, her iki tarafına biraz basınç uygulayarak skalpel ile sekiz kez kazıyın.Ardından hücre süspansiyonunu santrifüjleyin ve hücre peletini vascu life ile yeniden süspanse edin. Fibroblastları izole etmek için öncelikle dermis şeritlerini bir skalpel kullanarak küçük parçalara bölün.Dermis parçalarını bir Falcon tüpüne aktarın ve 37 °C'de 45 dakika inkübe edilmiş 10 mL kollagenaz çözeltisi ekleyin. Ardından, çözeltiyi santrifüjleyin ve süpernatantı dikkatlice uzaklaştırın. Peleti DMEM artı %10 FCS artı %1 pen strep ile yıkayın.Santrifüjden sonra süpernatan dikkatlice uzaklaştırın, peleti kültür ortamında yeniden süspanse edin ve hücrelerin dokudan dışarı büyümelerini sağlamak için bir T 75 kültür flaskına aktararak statik koşullarda inkübe edin. Tümör test sistemini kurmak için öncelikle, tübüler ince bağırsak submukozasını veya SIS mukozasını kesin, bir taraftan açın ve iki metal halka arasına sabitleyin. Bu şekilde oluşturulan hücre kronlarının çapı 10 milimetredir.SIS mu'yu hücre kültür ortamı ile bir gece boyunca örtün; ertesi gün, primer MVE CS hücrelerini SIS'in bazal katman yüzeyine, önceki CI'ye ekleyin. 37 °C'de, %5 karbondioksit içeren inkübatörde üç saat boyunca inkübe edin. Üç saat sonra, daldırma kültürü sağlamak için kuyucuğu ortam ile doldurun ve inkübatöre geri yerleştirin. Endotel hücrelerinin yapışması için üç gün bekleyin.Statik kültür sistemini 180 derece döndürün ve 12 kuyucuklu bir plakaya aktarın. Ardından, SIS'in apikal yüzeyinde primer dermal fibroblastlar ve tümör hücrelerinden oluşan bir karışım göreceksiniz. Burası eski lümen tarafıdır.Hücrelerin yapışması için üç saat bekleyin. Kültürü tamamen örtmek için kuyucuğu besiyeri ile doldurun; tümör test sistemini statik koşullarda, 37 °C sıcaklıkta ve %5 karbondioksit ortamında 14 gün boyunca inkübe edin ve dinamik kültür için her iki ila üç günde bir kültür besiyerini değiştirin. SIS mu'yu iki metal halka arasına sabitleyin ve daha önce gösterildiği gibi primer MV eec'leri ekleyin.Üç gün sonra, SIS mu'yu metal halkalardan çıkarın ve membranı bir şırınga ve kanül yardımıyla akış reaktörüne yerleştirin. Biyoreaktördeki matris üzerine primer dermal fibroblastları ve tümör hücrelerini uygulayın. Ertesi gün biyoreaktör sistemini kültür medyumu ile doldurmadan önce hücrelerin üç saat boyunca tutunmasını sağlayın; ardından biyoreaktörü kendi yapımınız olan bir inkübatör sistemine yerleştirin ve bir perisaltik pompaya bağlayın.Bu düzenek, basınç regülasyonlu pulsatil akış veya sabit akış ile dinamik kültüre olanak tanır. Bu deneyde, dakikada 3,8 mililitre sabit bir besiyeri akışı kullanılmaktadır. Dinamik kültürü 14 gün boyunca sürdürün ve yedi gün sonra kültür besiyerini değiştirin.Deneylerin tamamlanmasının ardından dokular fikse edilir, parafinle gömülür, boyanır ve ardından bir ters mikroskop kullanılarak görüntülenir. Temsili sonuçlar burada gösterilmiştir. Panel A, hematoksilen ile boyanmış 2D monokültürde statik olarak kültüre edilmiş S 4 62 tümör hücre hattının genel görünümünü sunmaktadır.3B ko-kültür paneller B, C ve D'de gösterilmiştir. Bu H ve e boyalı görüntü, SIS MU ve MVEC'in apikal tarafındaki tümör hücreleri S 4 62 ve primer fibroblastların üçlü kültürünü göstermektedir. Bazolateral tarafta, oklar endotel hücrelerini işaret etmektedir. Farklı hücre tipleri, panel C'de gösterilen MVEC'leri etiketlemek için von Willebrand faktörü ve panel D'de gösterilen P 53 gibi hücre tipine özgü belirteçlerin boyanmasıyla tanımlanabilir. P 53 pozitif S 4 62 hücreleri, P 53 negatif primer fibroblastlardan ayırt edilebilir ve hücrelerin 3B dağılımı aynı şekilde analiz edilebilir.Dinamik olarak kültüre edilen üçlü kültürde farklı hücre tipleri tanımlanabilir; Panel A, okların endotel hücrelerini işaret ettiği bir H ve E boyama görüntüsüdür. Panel B, von Willebrand faktörü için immünohistokimyasal boyamayı ve Panel C ise P 53 boyamasını göstermektedir. Bu prosedürün ardından, yeni kanser tedavilerinin nasıl bulunacağı veya tümör oluşumundaki önemli sinyal yollarının analizi gibi ek soruları yanıtlamak amacıyla ilaç testleri gibi diğer yöntemler uygulanabilir.Ayrıca, primer hücreler bireysel hastalar için en iyi kişiselleştirilmiş tedaviyi belirlemek amacıyla kullanılabilir.

tissue-engineering-of-a-human-3d-in-vitro-tumor-test-system

Research

JoVE Journal

Bioengineering

Biyomühendislik

Bu videoda, 3D insan biyojeli kullanarak hastadan türetilen tümör hücrelerinden mikrotümörler üretiyoruz. Bu mikrotümörler, in vivo tümör mikroçevresine çok benzer ve ilaç testi için potansiyel platformlar olarak hizmet eder.

Mikrotümörlerin Oluşturulması: İlaç Tedavisine Yanıtı Analiz Etmek İçin 3D Mikrotümörleri Kültürlemek İçin İn Vitro Kültür Tekniği

Çevredeki normal dokuların invazyonu, malign tümörlerin tanımlayıcı bir özelliğidir. Burada, bir dizi ileri insan kanseri modeliyle örneklenmiş doğal bir 3D biyomatrise basit, yarı otomatik bir mikro plaka istila testi sunuyoruz.

Üç boyutlu (3D) Tümör Sfero Yayılması deneyindeki

Bu yazının üretimi, karakterizasyonu ve normal birincil insan özofagus fibroblast ve de-cellularized domuz iskele içinde ekilmiş skuamöz epitel hücrelerinden hazırlanan bir dokuya işlenmiş 3D özofagus yapı potansiyel kullanımlarını açıklar. Sonuçlar normal insan yemek borusunda benzer olgun tabakalı epitel oluşumunu göstermektedir.

3D Doku mühendisliği İnsan Özofagus Mukozal Modeli Üretimi, Karakterizasyonu ve Potansiyel Kullanımları

Küçük hücreli dışı akciğer kanseri (NSCLC) hedefli tedavilere karşı duyarlılığı incelemek için biyolojik bir kollajen iskelesine dayalı üç boyutlu (3D) bir akciğer kanseri modeli sunuyoruz. Proliferasyon indeksi, apoptoz ve epitelyal-mezenkimal geçiş (EMT) durumunu belirlemek için farklı okuma teknikleri gösteriyoruz. Toplanan veriler, ilaç duyarlılığının tahmini için in silico bir modele entegre edilmiştir.

Kombine bir 3D doku mühendisliği<em&gt; İn Vitro</em&gt; /<em&gt; Siliko</emSpesifik mutasyonel Arka İlaç Etkinliği tahmin için&gt; Akciğer Tümör Modeli

Glioblastoma multiforme'nin hasta kaynaklı ksenogreftleri, 3D insan biyojel kültür sistemi kullanılarak canlı mikrotümörlere minyatürleştirilebilir. Bu in vivo benzeri 3D tümör testi, kinom analizi de dahil olmak üzere ilaç yanıt testi ve moleküler profilleme için uygundur.

Kinomic Profil Yöntemi ve İlaç Tepki Testi için 3D İnsan BIOGEL Kültür Sisteminin Kullanılması Microtumors ve Hasta kaynaklı Glioblastom Hücreleri Üretimi

Tümör mikroçevresini (TME) taklit etmek için geçirgen bir mikro gözenekli membran ekini uyarladık. Model, karışık bir hücre kültüründen oluşur, floresan etiketleme veya hücre sıralama kullanmadan yüksek oranda zenginleştirilmiş bireysel hücre popülasyonlarının basitleştirilmiş üretimine izin verir ve normal veya stres koşulları altında TME içinde hücreler arası iletişimin incelenmesine izin verir.

Tümör mikroçevresinin A Mimik: Hücreler arası İletişim Zenginleştirilmiş hücre popülasyonları oluşturma ve incelenmesi için Basit Bir Yöntem

Bu makalede, üç boyutlu (3D) timik kültür sistemi tarafından tümör antijene özgü indüklenen pluripotent kök hücre kaynaklı timik göçmenler (iTE) oluşturmak için yeni bir yöntem açıklanmaktadır. iTE, proliferasyon, hafıza oluşumu ve tümör baskılanması kapasitesine sahip naif T hücreleri ile yakından ilişkili T hücrelerinin homojen bir alt kümesidir.

Üç boyutlu Timik Kültür Sistemi Murine indüklenen Pluripotent Kök Hücre kaynaklı Tümör Antijen-spesifik Timik Emigrants oluşturmak için

Tümör mikroçevre kanser büyüme ve işgali önemli bir parçasıdır. Karsinom ilerlemesini taklit etmek için biyolojik olarak alakalı bir insan matrisine ihtiyaç vardır. Bu protokol, insan leiomyoma tabanlı matris uygulayarak in vitro üç boyutlu küroid invazyonu tahlil için bir gelişme tanıtır. Protokol aynı zamanda bilgisayar tabanlı bir hücre istilası analizi sunar.

Üç boyutlu Küroid Istilası tahlil tam ınsan tümör tabanlı matris

Bu protokolün amacı, ilaç tarama çalışmaları için kullanılabilecek 3D meme endotelyal ortak kültür modellerini hızla oluşturmak için önceden oluşturulmuş endotel ağlarına çok hücreli sferoidler olarak meme epitel hücrelerini doğrudan biyobaskılamaktır.

3D Çok Hücreli Meme Sferoidlerinin Endotel Ağlarına Doğrudan Biyobaskı

Bu tahlil, filizlenen anjiyogenezi in vitro olarak kontrol eden biyolojik süreçleri analiz etmek için 3D-kollajen jel içinde kültürlenmiş embriyoid cisimlere farklılaştırılmış fare embriyonik kök hücrelerini kullanır. Bu teknik, ilaçları test etmek, hastalıkları modellemek ve embriyonik olarak ölümcül olan delesyonlar bağlamında spesifik genleri incelemek için uygulanabilir.

In Vitro Vasküler Hastalık Modellemesi ve İlaç Testi için Fare Embriyonik Kök Hücreleri Kullanılarak Anjiyogenezin Üç Boyutlu Filizlenme Testi

Bu protokol, yükleme, bakım ve değerlendirme prosedürlerinin bir açıklamasıyla birlikte yüksek verimli temel ve translasyonel insan kanseri araştırmaları, gelişmiş ilaç taraması, hastalık modellemesi ve kişiselleştirilmiş tıp yaklaşımları gerçekleştirmek için fizyolojik olarak ilgili bir çip üzerinde tümör modeli sunar.

Kanser Araştırmaları için Fizyolojik İnsan Vaskülarize Mikro-Tümör Modelinin Oluşturulması

Keşfedin, primer hücreler ve deküllülerize biyolojik iskelet kullanarak 3D tümör test sistemi oluşturma yöntemini. Statik ve dinamik koşullarda kültür, in vivo tümör ortamını daha doğru simüle eder.

İnsan 3D Doku Mühendisliği

Daha fazla video keşfet