Name: Zebra balığı Larva kas fonksiyonu değerlendirmek için daralma sırasında Kuvvet Ölçümü (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2013-07-23T13:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 25 s
Description: Keşfedin zebra balığı larva gövde kasında maksimum kasılma sırasında kuvvet ölçümü yöntemini. Bu teknik, kas fonksiyonu ve sağlığını değerlendirmek için geliştirme, yaralanma ve kimyasal maruziyet çalışmalarında kullanılabilir.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Yazarlar Zebra balığı yetiştiriciliği ile yardım için Angela Busta teşekkür ederim. Bu çalışma Ulusal Sağlık Enstitüleri (AG-020.591 için SVB ve JJD için 1K08AR054835) tarafından desteklenmiştir.

Not: Zebra balığı ile ilgili tüm işlemleri ilgili kurallar, düzenlemeler ve düzenleyici kurumlar uygun olarak yapılmalıdır. Bu makalede gösterilen tüm hayvan kullanım prosedürleri Hayvanlar Kullanımı ve Bakım Michigan Komitesi Üniversitesi (UCUCA) tarafından onaylanmıştır. 1. Dikiş Döngüler olun <ol><li> Üç teller içine steril olmayan dikiş (USP 10/0 monofilament naylon, 3 kat) ayırmak için forseps kullanın. </li><li> Teller birinde bir çift yukarıdan aşağı düğüm başlar. Yerine bir düğüm küçük bir (~ 1 mm çapında) döngü yapmak için tamamen düğüm sıkmadan önce durdurun. </li><li> Döngü kuyrukları aşırı dikiş kesmek için makas kullanın. Bitmiş bir döngünün bir örneği Şekil 1&#39;de gösterilmiştir. </li><li> Bu post-daha sonra kullanmak için not a yapışkan tarafı üzerinde döngü yerleştirin. Dikiş döngüler güç testi sırasında yerinde larva tutmak için kullanılacaktır. </li><li> Tekrar gerektiğinde 1.1-1.4 adımları. Maktest edilecek her bir larva için e iki dikiş döngüler. </li></ol> 2. Test Çözüm olun <ol><li> 1.000 ml 7.977 g sodyum klorür, potasyum klorür, 0.373 g, 0.265 g kalsiyum klorür dihidrat, 0.102 gr magnezyum klorür hekzahidrat, 0.048 gr sodyum fosfat monobazik, 1.000 g sodyum bikarbonat ve 0.037 gr etilendiamintetraasetik asit disodyum tuzu dihidrat eklenerek Tyrodes solüsyonu yapmak arıtılmış su. </li><li> Tuzlar tamamen eriyene kadar çözelti karıştırılır. Bu çözelti, 4 ° C de bir ay boyunca saklanabilir </li><li> 47.9 ml Tyrodes solüsyonu ve karışım ila 4 mg / ml &#39;Tricaine 2.1 mi, balığı ayırt 24&#39;e göre hazırlanmıştır, ekleyin. Karanlık bir cam şişe veya alüminyum folyo kaplı bir cam şişe içinde saklayarak ışıktan bu çözüm koruyun. Bu çözelti, oda sıcaklığında depolanır ve her gün taze olarak yapılmalıdır. </li></ol> 3. Deneysel Odası içine Aanesthetized Larva kravat <ol> &lt;li&gt; Yeri stereo mikroskop sahnede test cihazları (Şekil 2). </li><li> Test cihazları için güç dönüştürücü ve süresini kontrol kablolarını bağlayın. Kuvvet dönüştürücü açın. Bu sert kalır, böylece uzunluğu kontrol açın. (Not:.. Uzunluğu kontrolör kasılması sırasında bir kas hazırlanması uzatmak ya da kısaltmak olanağı sağlar Ancak, uzunluğu, bu kontrolör özelliği, burada tarif edilen yöntem içinde kullanılan değildir Bu nedenle, uzunluğu kontrol katı bir eki olarak da düşünülebilir noktası) bir XYZ konumlandırma sistemi monte. </li><li> Tek kullanımlık bir transfer pipeti ile, test çözeltisi ile deney bölmesine doldurun. </li><li> Kuyrukları biri tarafından bir dikiş döngü almak ve kuvvet dönüştürücü tüp asmak için forseps kullanın. Uzunluğu denetleyiciye bağlı tüp ikinci bir dikiş döngü asın. (Not: kavisli parçası üzerinde dikiş döngü sürükleyici dikiş ve cau kıvırmayın olabilirbu) sonraki adımları sırasında kırmak için se. </li><li> Bir tek transferi pipet ile, test çözümü ile dolu küçük bir Petri kabı bir Zebra balığı larva transferi. Etkisi (~ 1 dk) almak için test solüsyonu (tricaine) olarak anestezi bekleyin. Bir forseps ile yavaşça kuyruk dürtmek ve larva dokunmatik uyarılmış yüzme eksikliği ile anestezi olduğundan emin olun. </li><li> Deney bölmesine larva transferi için bir cam pipet kullanın. </li><li> Hafifçe kapalı forseps ile larva dürtmek tarafından, kuvvet dönüştürücü tüp dikiş döngü içinde larva ön kısmı yol. Tüp dikiş döngü içinde larva ön kısmı yol. Forseps ile dikiş döngü kuyrukları hem tutun ve yolk kesesi veya swimbladder (Şekil 3A) için arka dikiş döngü sıkmak için aynı anda onları çekin. </li><li> Bir forseps ile bir dikiş döngü kuyruk tutun ve çekin, larva yüzün yan tarafında kadar tüp etrafında 90 ° döndürmek için larva nedens kadar (Şekil 3B). Döngü yeterince sıkılır ise, çekme bazı direnç olacak, larva kolayca döner olmamalıdır. Döngü çok fazla sıkılır ise, larva tüp etrafında döner olmayacaktır. </li><li> Uzunluğu denetleyiciye bağlı XYZ konumlandırma cihazı kullanarak, X ekseni (Şekil 2A ekseni tanımlar) boyunca ve larva gövde ve kuyruk altında süresini kontrol tüpü hareket. Uzunluğu kontrol tüpün uçları ve kuvvet dönüştürücü tüp arasında boşluk bırakın. </li><li> Larva kuyruğu üzerinde dikiş döngü kılavuzu ve daha önce (Şekil 3C) tarif edildiği gibi dikiş döngü sıkın. Sen yan tarafı yukarı bakacak şekilde larva arka kısmı döner gerekebilir. Dikiş döngü kuyrukları (Şekil 3D) kesin. </li></ol> 4. Deneysel Odası pozisyonu Larva <ol><li> Larva w sağlamak için oda alttan uygun bir mesafe için larva harekethasta sonraki adımları sırasında ters bir mikroskop amacı &quot;çalışma mesafesi&quot; içinde olması. Bunun için, tüpler sadece odasının alt dokunmak kadar yavaşça Z ekseni boyunca tüpleri (ekli larva ile) düşürmek için XYZ konumlandırma cihazları kullanın. Larva odasının alt (~ 100 mikron) uygun bir mesafe kadar sonra, tüpler yükseltmek. </li><li> Uzunluğu kontrolöre bağlı XYZ yerleştirme cihazı kullanarak, kuvvet dönüştürücü borusunun uzun ekseni ile larva uzun eksenine hizalamak için Y ekseni boyunca uzunluğunu kontrol tüpü ayarlayın. </li></ol> 5. Bir Maksimum Twitch daralma sırasında kayıt Gücü <ol><li> Ters bir mikroskop aşamasına test cihazları taşıyın. </li><li> Bir istenen değere oda sıcaklığını ayarlamak. Öncelikle, su banyosu sirkülatör, termometre, ve test cihazı için sıcaklık kontrol bağlanabilir. Gerekli bileşenleri açın ve sıcaklık Contr üzerinde Ayarıtermometre kadar oller istediğiniz değeri bildirir. Bu makalede bulunan veriler 25 ° C&#39;de elde edilmiştir, fakat aynı zamanda ölçümler oda sıcaklığında ya da 28.5 yapılabilir ° C </li><li> Test cihazları için stimülatörü kabloları bağlayın. Stimülatörü için güç açın ama adım 5.6 kadar larva teşvik etmemektedir. </li><li> Larva odasına alt paralel olduğundan emin olun. 40X objektif ile, borular, bunların uçları arasında larva görürler. Dibine paralel olarak ise, larva her iki ucu odak noktası olacaktır. Gerekirse her iki odak kadar, Z ekseni boyunca kuvvet dönüştürücü tüp ayarlayın. </li><li> Larva boyu en uygun daha kısa olduğundan emin olun. Video sarkomer uzunluğunu sistemi açın ve izlerse video karesinin kenarlarına paralel olduğu video kamera gibi döndürün. Bu sistem ilgi kullanıcı tanımlı bir bölge içinde her piksel yatay satır boyunca piksel yoğunluğu değişimleri analiz ederek çizgi çizgi boşluğu izler(ROI). ROI içindeki tüm satırlar için sonuçlar ortalama ve video kare hızı (≥ 80 sn -1) eşdeğer bir frekans ile rapor edilmiştir. Çizgi çizgi aralık sarkomer uzunlukta bir göstergesi olarak kullanılır. </li><li> Mikroskop periferik lifler odaklanmak ve belirtilen sarkomer uzunluğunu not ayarlayın. Gerekirse, sarkomerinde uzunluğu (örneğin, 1.90 mm) daha az uygun olduğu kadar larva uzunluğunu ayarlamak için kontrol uzunluğu (X-ekseni) eklenmiş XYZ konumlandırma cihazı kullanın. </li><li> Seğirme gücü optimize etmek için mevcut uyarı ayarlayın. Başlamak için, düşük büyüklüğü (örneğin 100 mA) stimülatörü üzerinde çıkış akımını ayarlayın. Uyarıcı el ile veya özel bir LabVIEW programı çalıştıran bir bilgisayar tarafından tetiklenebilir. Süresi 0.2 msn güncel bir darbe ile larva kasların bir seğirme ortaya çıkarmak. </li><li> Kuvvet çıkış kayıt ve osiloskobun imleçler kullanarak zirve seğirme kuvvetini ölçmek için bir osiloskop kullanın. Mevcut artırın50 mA adımlarla ve her geçerli düzeyde tepe seğirme gücü ölçmek. Yorgunluğu önlemek için seyirmesi arasında 30 saniye bekleyin. Uyarım akımı arttıkça, en yüksek kasılma gücü tipik olarak en fazla artar ve daha sonra yavaş yavaş azalır. Larva en büyük gücü üretir hangi mevcut en uygun stimülasyon akımdır. Stimülasyonu akıma akım genliği ayarlayın. </li><li> XYZ konumlandırma cihazı kullanarak, maksimum seğirme gücü ortaya çıkarmak için larva (ve dolayısıyla, sarkomer uzunluk) uzunluğunu ayarlayın. Yabani tip Zebra balığı larvaları (3-7 dpf) 2.10 mm veya 2.15 mikron sarkomer uzunlukları maksimum seğirme gücü oluşturmak. Ancak, sarkomer uzunluğu larva aşırı gerilimleri önlemek için 2.08 mikron olarak ayarlanabilir. </li><li> Larva kas seğirme ortaya çıkarmak. Kuvvet yanıt kaydetmek ve sonraki analiz için kayıt kaydetmek için osiloskop kullanın. </li></ol> 6. Optimal Length Larva ile Kas sistemi Boyutlar ölçün <ol&gt; <li> Stereo mikroskop geri test cihazları taşıyın. </li><li> Mercek ölçek kullanarak, yan bakıldığında kas yüksekliğini ölçmek. Daha sonra, larva uzunluğunu değiştirmek için özen, 90 larva döner ° alttan larva görmek için dikiş döngü kuyrukları kullanarak. Alttan bakıldığında kas genişliğini ölçmek. Anatomik bir dönüm noktası (örneğin ürogenital açılış) (Şekil 4) de ölçümler. </li><li> Test ekipmanları gelen larva serbest bırakmak için bir MicroBlade ile dikiş döngüler kesin. </li></ol>

<ol><li>Bassett, D. I., Bryson-Richardson, R. J., Daggett, D. F., Gautier, P., Keenan, D. G., Currie, P. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dystrophin+is+required+for+the+formation+of+stable+muscle+attachments+in+the+zebrafish+embryo%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Dystrophin is required for the formation of stable muscle attachments in the zebrafish embryo.</a> Development. 130 (23), 5851-5860 (2003).</li>
<li>Nixon, S. J., Wegner, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Zebrafish+as+a+model+for+caveolin-associated+muscle+disease%3B+caveolin-3+is+required+for+myofibril+organization+and+muscle+cell+patterning%5BTitle%5D)+AND+%22Hum.+Mol.+Genet%22%5BJournal%5D)">Zebrafish as a model for caveolin-associated muscle disease; caveolin-3 is required for myofibril organization and muscle cell patterning.</a> Hum. Mol. Genet. 14 (13), 1727-1743 (2005).</li>
<li>Hall, T. E., Bryson-Richardson, R. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+zebrafish+candyfloss+mutant+implicates+extracellular+matrix+adhesion+failure+in+laminin+%CE%B12-deficient+congenital+muscular+dystrophy%5BTitle%5D)+AND+%22PNAS%22%5BJournal%5D)">The zebrafish candyfloss mutant implicates extracellular matrix adhesion failure in laminin α2-deficient congenital muscular dystrophy.</a> PNAS. 104 (17), 7092-7097 (2007).</li>
<li>Hirata, H., Watanabe, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Zebrafish+relatively+relaxed+mutants+have+a+ryanodine+receptor+defect%2C+show+slow+swimming+and+provide+a+model+of+multi-minicore+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Zebrafish relatively relaxed mutants have a ryanodine receptor defect, show slow swimming and provide a model of multi-minicore disease.</a> Development. 134, 2771-2781 (2007).</li>
<li>Dowling, J. J., Vreede, A. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Loss+of+myotubularin+function+results+in+t-tubule+disorganization+in+zebrafish+and+human+myotubular+myopathy%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Genet%22%5BJournal%5D)">Loss of myotubularin function results in t-tubule disorganization in zebrafish and human myotubular myopathy.</a> PLoS Genet. 5 (2), e1000372(2009).</li>
<li>Berger, J., Berger, S., Hall, T. E., Lieschke, G. J., Currie, P. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dystrophin-deficient+zebrafish+feature+aspects+of+the+Duchenne+muscular+dystrophy+pathology%5BTitle%5D)+AND+%22Neuromuscul.+Disord%22%5BJournal%5D)">Dystrophin-deficient zebrafish feature aspects of the Duchenne muscular dystrophy pathology.</a> Neuromuscul. Disord. 20 (12), 826-832 (2010).</li>
<li>Kawahara, G., Guyon, J. R., Nakamura, Y., Kunkel, L. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Zebrafish+models+for+human+FKRP+muscular+dystrophies%5BTitle%5D)+AND+%22Hum.+Mol.+Genet%22%5BJournal%5D)">Zebrafish models for human FKRP muscular dystrophies.</a> Hum. Mol. Genet. 19 (4), 623-633 (2010).</li>
<li>Wallace, L. M., Garwick, S. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((DUX4%2C+a+candidate+gene+for+facioscapulohumeral+muscular+dystrophy%2C+causes+p53-dependent+myopathy+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Ann.+Neurol%22%5BJournal%5D)">DUX4, a candidate gene for facioscapulohumeral muscular dystrophy, causes p53-dependent myopathy in vivo.</a> Ann. Neurol. 69, 540-552 (2011).</li>
<li>Sztal, T. E., Sonntag, C., Hall, T. E., Currie, P. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Epistatic+dissection+of+laminin-receptor+interactions+in+dystrophic+zebrafish+muscle%5BTitle%5D)+AND+%22Hum.+Mol.+Genet%22%5BJournal%5D)">Epistatic dissection of laminin-receptor interactions in dystrophic zebrafish muscle.</a> Hum. Mol. Genet. , (1093).</li>
<li>Kawahara, G., Karpf, J. A., Myers, J. A., Alexander, M. S., Guyon, J. R., Kunkel, L. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Drug+screening+in+a+zebrafish+model+of+Duchenne+muscular+dystrophy%5BTitle%5D)+AND+%22PNAS%22%5BJournal%5D)">Drug screening in a zebrafish model of Duchenne muscular dystrophy.</a> PNAS. 108 (13), 5331-5336 (2011).</li>
<li>Berger, J., Berger, S., Jacoby, A. S., Wilton, S. D., Currie, P. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evaluation+of+exon-skipping+strategies+for+Duchenne+muscular+dystrophy+utilizing+dystrophin-deficient+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Cell+Mol.+Med%22%5BJournal%5D)">Evaluation of exon-skipping strategies for Duchenne muscular dystrophy utilizing dystrophin-deficient zebrafish.</a> J. Cell Mol. Med. 15 (12), 2643-2651 (2011).</li>
<li>Seger, C., Hargrave, M., Wang, X., Chai, R. J., Elworthy, S., Ingham, P. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Analysis+of+Pax7+expressing+myogenic+cells+in+zebrafish+muscle+development%2C+injury%2C+and+models+of+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Dev.+Dyn%22%5BJournal%5D)">Analysis of Pax7 expressing myogenic cells in zebrafish muscle development, injury, and models of disease.</a> Dev. Dyn. 240, 2440-2451 (2011).</li>
<li>Postel, R., Vakeel, P., Topczewski, J., Knöll, R., Bakkers, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Zebrafish+integrin-linked+kinase+is+required+in+skeletal+muscles+for+strengthening+the+integrin-ECM+adhesion+complex%5BTitle%5D)+AND+%22Dev.+Biol%22%5BJournal%5D)">Zebrafish integrin-linked kinase is required in skeletal muscles for strengthening the integrin-ECM adhesion complex.</a> Dev. Biol. 318 (1), 92-101 (2008).</li>
<li>Zoeller, J. J., McQuillan, A., Whitelock, J., Ho, S. Y., Iozzo, R. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+central+function+for+perlecan+in+skeletal+muscle+and+cardiovascular+development%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">A central function for perlecan in skeletal muscle and cardiovascular development.</a> J. Cell Biol. 181 (2), 381-394 (2008).</li>
<li>Kim, H. R., Ingham, P. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+extracellular+matrix+protein+TGFBI+promotes+myofibril+bundling+and+muscle+fibre+growth+in+the+zebrafish+embryo%5BTitle%5D)+AND+%22Dev.+Dyn%22%5BJournal%5D)">The extracellular matrix protein TGFBI promotes myofibril bundling and muscle fibre growth in the zebrafish embryo.</a> Dev. Dyn. 238, 56-65 (2009).</li>
<li>Beqqali, A., Monshouwer-Kloots, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CHAP+is+a+newly+identified+Z-disc+protein+essential+for+heart+and+skeletal+muscle+function%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Cell+Sci%22%5BJournal%5D)">CHAP is a newly identified Z-disc protein essential for heart and skeletal muscle function.</a> J. Cell Sci. 123 (7), 1141-1150 (2010).</li>
<li>Huang, H., Huang, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Toxicity%2C+uptake+kinetics+and+behavior+assessment+in+zebrafish+embryos+following+exposure+to+perfluorooctanesulphonicacid+%28PFOS%29%5BTitle%5D)+AND+%22Aquat.+Toxicol%22%5BJournal%5D)">Toxicity, uptake kinetics and behavior assessment in zebrafish embryos following exposure to perfluorooctanesulphonicacid (PFOS).</a> Aquat. Toxicol. 98 (2), 139-147 (2010).</li>
<li>Sylvain, N. J., Brewster, D. L., Ali, D. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Zebrafish+embryos+exposed+to+alcohol+undergo+abnormal+development+of+motor+neurons+and+muscle+fibers%5BTitle%5D)+AND+%22Neurotoxicol.+Teratol%22%5BJournal%5D)">Zebrafish embryos exposed to alcohol undergo abnormal development of motor neurons and muscle fibers.</a> Neurotoxicol. Teratol. 32 (4), 472-480 (2010).</li>
<li>Chandrasekar, G., Arner, A., Kitambi, S. S., Dahlman-Wright, K., Andersson-Lendahl, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Developmental+toxicity+of+the+environmental+pollutant+4-nonylphenol+in+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22Neurotoxicol.+Teratol%22%5BJournal%5D)">Developmental toxicity of the environmental pollutant 4-nonylphenol in zebrafish.</a> Neurotoxicol. Teratol. 33 (6), 752-764 (2011).</li>
<li>Buss, R. R., Drapeau, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Activation+of+embryonic+red+and+white+muscle+fibers+during+fictive+swimming+in+the+developing+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurophysiol%22%5BJournal%5D)">Activation of embryonic red and white muscle fibers during fictive swimming in the developing zebrafish.</a> J. Neurophysiol. 87 (3), 1244-1251 (2002).</li>
<li>Telfer, W. R., Nelson, D. D., Waugh, T., Brooks, S. V., Dowling, J. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((neb%3A+a+zebrafish+model+of+nemaline+myopathy+due+to+nebulin+mutation%5BTitle%5D)+AND+%22Dis+Model+Mech%22%5BJournal%5D)">neb: a zebrafish model of nemaline myopathy due to nebulin mutation.</a> Dis Model Mech. 5, 389-396 (2012).</li>
<li>Dowling, J. J., Arbogast, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Oxidative+stress+and+successful+antioxidant+treatment+in+models+of+RYR1-related+myopathy%5BTitle%5D)+AND+%22Brain%22%5BJournal%5D)">Oxidative stress and successful antioxidant treatment in models of RYR1-related myopathy.</a> Brain. 135 (4), 1115-1127 (2012).</li>
<li>Dou, Y., Andersson-Lendahl, M., Arner, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Structure+and+function+of+skeletal+muscle+in+zebrafish+early+larvae%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Gen.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Structure and function of skeletal muscle in zebrafish early larvae.</a> J. Gen. Physiol. 131, 445-453 (2008).</li>
<li>Westerfield, M. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aWesterfield%2C+M+%22The+zebrafish+book%3A+a+guide+for+the+laboratory+use+of+zebrafish+%28Danio+rerio%29%22">The zebrafish book: a guide for the laboratory use of zebrafish (Danio rerio)</a>. , Univ. of Oregon Press. Eugene, Oregon. (2000).</li>
<li>Herr, V. D., Sonnenburg, D. C., Courogen, P. M., Fiamengo, S. A., Downes, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Muscle+weakness+during+tricaine+anesthesia%5BTitle%5D)+AND+%22Comp+Biochem+Physiol+Part+C%22%5BJournal%5D)">Muscle weakness during tricaine anesthesia.</a> Comp Biochem Physiol Part C. 110 (3), 289-296 (1995).</li>
<li>Frazier, D. T., Narahashi, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tricaine+%28MS-222%29%3A+effects+of+ionic+conductances+of+squid+axon+membranes%5BTitle%5D)+AND+%22Eur.+J.+Pharmacol%22%5BJournal%5D)">Tricaine (MS-222): effects of ionic conductances of squid axon membranes.</a> Eur. J. Pharmacol. 33 (2), 313-317 (1975).</li>
<li>Saint-Amant, L., Drapeau, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Time+course+of+the+development+of+motor+behaviors+in+the+zebrafish+embryo%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurobiol%22%5BJournal%5D)">Time course of the development of motor behaviors in the zebrafish embryo.</a> J. Neurobiol. 37 (4), 622-632 (1998).</li>
</ol>

Yazarlar hiçbir rakip mali çıkarlarının olmadığını beyan ederim.

Bu yöntem, Zebra balığı larvalarının gövde kaslarının kas fonksiyonunu değerlendirmek için bir seğirme sırasında kuvvet oluşturma ölçer. Tetanik kasılmaları (0.2 sn bir süre için 200 stimülasyon darbe / sn gibi) Zebra balığı larvaları ortaya çıkardı olmasına rağmen, en fazla tetanik gücü maksimum seğirme gücü göre sadece% 10-15 daha fazladır. Bu nedenle, bir seğirme sırasında üretilen kuvvet kuvvet üreten özelliği makul bir ölçüsüdür. Tiki programı ya da dikiş bağları da kayma neden daha az olasıdır çünkü seyirmesi tetanik kasılmaları tercih edilir. Bu teknik ile anlamlı veriler elde etmek için, en seğirme kuvvet her bir larva için elde edilmelidir ve deney grupları arasında değişkenliği en aza indirilmelidir. Akılda bu hedefleri ile, aşağıdaki önerileri sunuyoruz. Kuvvet dönüştürücü ve uzunluğu kontrol tüplerine larva bağlama zaman önce, dikkat edin. Dikiş döngüler çok sıkılırsaçok, dikiş kas dokusu ile kesecek. Dikiş döngüler yeterince sıkılır değilseniz, larva tarafından üretilen kuvvet tam kuvvet dönüştürücü iletilir olmayacaktır. Her iki durum da, ama özellikle ikinci, maksimum seğirme gücü hafife. Larva test döneminde geliştirmeye devam edecektir çünkü İkincisi, birden fazla deney grupları test yana gruplar arasında alternatif birkaç saat (20-30 dk / larva), alabilir. Bahsedilen ürün, bazı maksimum seğirme kuvveti ölçümü (örneğin güç dönüştürücü, akımlı uyarıcı) için gerekli olsa da, diğer öğeleri mutlaka gerekli değildir. Video sarkomer boyu sistemi arzu ancak gerekli değildir. Bir alternatif olarak, tikler bir dizi maksimum seğirme kuvveti elde edilene kadar larva uzunluğu ayarlanır sırasında optimal uzunlukta, bulmak için de kullanılabilir. Bir sıcaklık kontrol sistemi de zorunlu olarak gerekli değildir. Sıcaklık kontrolü zaman mea önemlidirmaksimum kuvvet seğirme az miktarda sıcaklık değişimlerine özellikle hassas değildir ve oda sıcaklığında ölçülen olabilir, oysa sıcaklığına kadar son derece duyarlı olan bilyenin seğirme kinetiği. Bağımsız olarak kuvvet test sırasında odasının sıcaklığı arasında, larvaların ° C&#39;de 24 önceden zorlamaya 28.5 arasında optimum büyüme sıcaklıkta muhafaza edilmesi gerektiğine dikkat ediniz doğru evreleme için test. Larvalar tricaine içeren Tyrodes çözeltisi içinde test edilmiştir. Bu sinir sistemi tarafından uyarılan kasılmaları kendiliğinden ortadan kaldırmak ve böylece kuvvet test sırasında yorgunluğu önlemek için (w / v) tricaine, anestezi 24 için tavsiye edilen konsantrasyonu,% 0.02 kullanın. Tricaine de tie-adım kolaylaştırır ve genel test süresini azaltır. Bununla birlikte, test çözeltisi tricaine dahil olmak üzere sürekli olarak yaklaşık% 30 ile en fazla seğirme gücünü azalttığı görüyoruz. Benzer bir etki, aynı zamanda tricai burada, tetra kuyruk kas gözlenmiştirnöromüsküler iletim bloke sonra ne tricaine kas 25 üzerinde doğrudan etkisi olduğunu düşündüren, kuvvet oluşturma azalır. Bu sinir hücreleri 26&#39;da olduğu gibi Tricaine, hücre zarından sodyum iletkenlik azaltarak kas hücre uyarılabilirliğinin azaltabilir. Motor nöronlar tarafından aktivasyonu bloke edilmesi için diğer seçenekler D-tübokurarin ve α-bungarotoxin ancak, tricaine farklı olarak, bu bileşikler, deri geçirgen değildir ve kafa, omurilik, kalp ya da 27 içine doğrudan enjekte edilmesi gerekir. Bireysel araştırmacılar tricaine kendi özel uygulama için arzu edilir olup olmadığını değerlendirmek gerekir. Tricaine test çözümü dahil edilirse tricaine etkisini deney grupları arasında farklılık olmadığını doğrulamanız gerekir, konsantrasyon deneyler ve araştırmacılar arasında tutarlı olmalıdır. Biz 3 dpf&#39;e gibi genç ve 7 dpf kadar eski olarak larva için bu yöntem açıklanmaktadır. Kas lifleri fu gibi görünse de3 dpf&#39;e test ekipmanları için larva bağlama engelleyen önce kendiliğinden kuyruk hareketleri 27, kuyruk kısa boy başlar 17 saat sonrası döllenme, gibi erken nctional. Birçok hastalık modelleri bu kez çok daha uzun hayatta olmadığı için biz genellikle 7 dpf&#39;e sonra larva testi yok. 5 dpf ötesinde larva test durumunda, larvaların beslenmelidir. Biz beslenmemiş larva olasılıkla beslenen larvalar, azalan yolk kesesi nedeniyle daha küçük kasları ve daha az maksimum seğirme güç üreten gözlemledim. Bu nedenle, dış besleme ek değişken önlemek için, 3-5 dpf arasındaki larvaları test etmek için arzu edilebilir. Özet olarak, Zebra balığı larva gövde kas maksimal seğirme kasılma sırasında kuvvet oluşturma ölçmek için bir nicel ve güvenilir bir yöntem açıklanmaktadır. Bu yöntem, Zebra balığı larva kas genel sağlık değerlendirmek için kullanılan ve özellikle kas fonksiyonu hakkında bilgi sağlar edilebilir. Hakkında bilgi vermenin yanı sırakuvvet kuşak büyüklüğü, bu teknik, kuvvet kuşak kinetiğini incelemek için 22 ya da kas yorgunluğu çalışmaya adapte edilebilir kullanılabilir. , Vahşi-tip larva ile kullanılmak için bu tekniğin tarif olmasına rağmen, bu yöntem, kas hastalık modelleri karakterize eden ve tedavilerini ya da kas gelişimi, kas yaralanma veya çalışma için, genetik olarak modifiye edilmiş ya da larvalar için ilaçlar veya toksik maddeler ile tedavi edilen larvalar için kullanılabilir kas ile ilgili kimyasal toksisite.

Genç Zebra balığı (Br.rerio) larvaları, 3-7 gün sonrası fertilizasyon (DPF), giderek iskelet kas araştırmalar için yararlı bir organizma olarak kabul edilmektedir. Genç larva modeli insan kas hastalığı 1-9 için kullanılır, ilaç ve tedavi stratejileri 10-11, çalışma kas yaralanması 12 değerlendirmek gelişimi 13-16 kas anlamak ve kas ile ilgili kimyasal toksisite 17-19 araştırmak. Bu alanlarda tipik çalışmalar sağlıklı kas genetik manipülasyon veya toksik maruz anormal hale olduğu derecesini incelemek ve bazı çalışmalar anormal kas tedaviye yanıt verir derecesi inceleyin. Bu çalışmaların başarısı için kritik doğru kas sağlığını değerlendirmek için yeteneğidir. Zebra balığı larvaları kas sağlığını değerlendirmek için mevcut çeşitli yöntemler olmakla birlikte, birkaç kas fonksiyonu hakkında doğrudan bilgi sağlar. Kas sağlık genellikle appearanc tarafından değerlendirilirolarak 9,15,16,18 immün histolojik boyama 6,8,11,, ışık mikroskobu 3,13, elektron mikroskobu 3,4,14,16 veya çift kırılma 7,9,11 ile değerlendirilen e,, ancak bu teknikleri sağlamak morfolojik bilgiler sadece. Gövde ve kuyruk değiştirmeler ve hız 4,17 motor fonksiyon değerlendirmek, ama onlar da nöral giriş, enerji metabolizması, ve diğer işlemler yansıtan bu yana bu kas fonksiyonlarının doğrudan tedbirler değildir yüzme. Buna karşılık, kasılma sırasında kuvvet oluşturma ölçüm kas fonksiyonu doğrudan bir değerlendirme sağlar ve genel kas sağlık iyi bir göstergesidir. Bu yaklaşımın da yarar basit veri analizi ve kantitatif sonuçlarını içerir. Bu video makalede, daha araştırmacı araştırmalarında kas sağlık mevcut önlemleri tamamlamak için bu yöntemi kullanacağı umuduyla, larva kaslar tarafından kuvvet oluşturma ölçmek için ayrıntılı bir prosedür sağlar. <pclass = &quot;jove_content&quot;&gt; Bu yöntemin genel amacı Zebra balığı larva gövde kas kasılması sırasında kuvvet oluşturma ölçmektir. Bu amacı gerçekleştirmek için, bir Zebra balığı larva anestezi ve bir tuz çözeltisi ile dolu bir odasına yerleştirilir. Larva ön sonunda bir güç dönüştürücü bağlıdır ve larva arka sonunda uzunluğu kontrol bağlıdır. Kas aktivasyonu elektrik alanı stimülasyonu ile gerçekleştirilir, ve uyarım akımı ve larva uzunluğu maksimum seğirme kuvveti üretmek için ayarlanır. Izometrik bir seğirme kasılma ortaya çıkardı ve kuvvet tepki analizi için kaydedilir. Açık olmak gerekirse, bu teknik yüzme sırasında larva kasları tarafından oluşturulan kuvvetlerin ölçmez. Larva her iki ucunda ekipman bağlı ve larva anestezi kaldığından, bu test sırasında hareket başlatmak çünkü. Dahası, alan uyarımı bir bil sebep olmak için aynı anda tüm kas lifleri aktivedoğal olarak 20 ne olacağı değil ateral daralma,. Bu nedenle, daha çok yüzme sırasında oluşturulan gerçek kuvvetlerinin ölçülmesi yerine, bu teknik larva kaslarının kuvvetini üreten yeteneği belirler. Biz kas nemaline miyopati 21 bir Zebra balığı modelinde zayıflık, hem de çok MiniCore hastalığı 22 bir Zebra balığı modelinde kas fonksiyonu üzerine antioksidan tedavinin etkisini değerlendirmek için göstermek için bu tekniği kullandık. Diğer kas fonksiyonu 19 bir çevre kirletici etkilerini incelemek için benzer bir teknik 23 kullandık.

<table><tbody><tr><td colspan="4">&lt;strong&gt;REAKTİFLER&lt;/strong&gt;</td></tr><tr><td>Tricaine tozu</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A5040</td><td></td></tr><tr><td>Sodyum klorür</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S7653</td><td></td></tr><tr><td>Potasyum klorür</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P9541</td><td></td></tr><tr><td>Kalsiyum klorür dihidrat</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>223506</td><td></td></tr><tr><td>Magnezyum klorür heksahidrat</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>M2670</td><td></td></tr><tr><td>Sodyum fosfat monobazik</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S0751</td><td></td></tr><tr><td>Sodyum bikarbonat</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S6297</td><td></td></tr><tr><td>Etilendiamintetraasetik asit disodyum tuzu dihidrat</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>E5134</td><td></td></tr><tr><td colspan="4">&lt;strong&gt;EKİPMANLAR&lt;/strong&gt;</td></tr><tr><td>Steril olmayan sütür</td><td>Ashaway Line Twine</td><td>S30002</td><td>USP 10/0 monofilaman naylon (3 katlı)</td></tr><tr><td>Pens</td><td>Fine Science Tools</td><td>11251-20</td><td>Dumont #5</td></tr><tr><td>Yaylı makas</td><td>Fine Science Tools</td><td>15000-08</td><td>Vannas</td></tr><tr><td>Stereo mikroskop</td><td>Leica Microsystems</td><td>MZ8</td><td>Fostec EKE ACE I ışık kaynağı ile aydınlatılmış</td></tr><tr><td>Kuvvet transdüseri</td><td><a href="http://www.aurorascientific.com/product/series-400/" target="_blank"><img src="/img/new_window.png"> Aurora Scientific</a></td><td>400A</td><td></td></tr><tr><td>Uzunluk kontrolörü</td><td><a href="http://www.aurorascientific.com/product/mp-length-controllers/" target="_blank"><img src="/img/new_window.png"> Aurora Scientific</a></td><td>318B</td><td></td></tr><tr><td>XYZ konumlandırma cihazları</td><td>Parker Hannifin</td><td>3936M</td><td></td></tr><tr><td>Termometre</td><td>Physitemp</td><td>BAT-12</td><td></td></tr><tr><td>Tek kullanımlık transfer pipeti</td><td>Fisher Scientific</td><td>13-711-9AM</td><td>Açıklığı genişletmek ve larva transferini kolaylaştırmak için ucu kesin</td></tr><tr><td>Petri kabı</td><td>Fisher Scientific</td><td>08-757-11YZ</td><td></td></tr><tr><td>Cam pipet</td><td>Fisher Scientific</td><td>13-678-8B</td><td>Açıklığı genişletmek ve larva transferini kolaylaştırmak için ucu kesin (ve ateşle cilalayın)</td></tr><tr><td>Evirtilmiş mikroskop</td><td>Carl Zeiss Microscopy</td><td>Axiovert 100</td><td></td></tr><tr><td>Su banyosu sirkülatörü</td><td>Neslab Instruments</td><td>RTE-111</td><td></td></tr><tr><td>Sıcaklık kontrolörü</td><td>Alpha Omega Instruments</td><td>Series 800</td><td></td></tr><tr><td>Stimülatör</td><td><a href="http://www.aurorascientific.com/product/mp-model-701/" target="_blank"><img src="/img/new_window.png"> Aurora Scientific</a></td><td>701C</td><td>Yüksek güçlü, takip stimülatörü</td></tr><tr><td>Video sarkomer uzunluk sistemi</td><td><a href="http://www.aurorascientific.com/product/mp-model-901/" target="_blank"><img src="/img/new_window.png"> Aurora Scientific</a></td><td>900B-5A</td><td></td></tr><tr><td>LabVIEW yazılımı</td><td>National Instruments</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Osiloskop</td><td>Nicolet Technologies</td><td>ACCURA 100</td><td></td></tr><tr><td>Mikro bıçak</td><td>Fine Science Tools</td><td>10050-00</td><td></td></tr><tr><td>Mikro bıçak tutucu</td><td>Fine Science Tools</td><td>10053-13</td><td></td></tr><tr><td>Veri analiz yazılımı (Signo)</td><td>Alameda Applied Sciences</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

zebra balığı larva kas fonksiyonu değerlendirmek için daralma sırasında kuvvet Ölçümü

Force Measurement During Contraction to Assess Muscle Function in Zebrafish Larvae

Zebra balığı larvaları kas gelişimi, kas hastalığı ve kas ile ilgili kimyasal toksisite modeller sunmak, ancak ilgili çalışmalar genellikle kas sağlık işlevsel önlemler eksikliği. Bu video makalede, biz Zebra balığı larva gövde kas kasılması sırasında kuvvet oluşturma ölçmek için bir yöntem ortaya koymaktadır. Kuvvet ölçümleri, bir tuz çözeltisi ile doldurulmuş bir bölme içine bir anestezi larva yerleştirerek gerçekleştirilir. Larva ön sonunda bir güç dönüştürücü bağlıdır ve larva arka sonunda uzunluğu kontrol bağlıdır. Izometrik bir seğirme kasılma elektrik alanı stimülasyonu tarafından ortaya çıkarılan ve kuvvet tepki analizi için kaydedilir. Kasılma sırasında kuvvet oluşturma genel kas sağlık bir ölçü sağlar ve özellikle kas fonksiyonu bir ölçü sağlar. , Vahşi-tip larva ile kullanılmak için bu tekniğin tarif rağmen, bu yöntem, genetik olarak değiştirilmiş larvaları ile uyuşturucu ya da toksik maddeler ile tedavi larvaları ile kullanılabilirkas hastalık modelleri karakterize ve tedavileri değerlendirmek, ya da kas gelişimi, yaralanma veya kimyasal toksisite çalışma için.

Sağlıklı Yabani tip Zebra balığı larvaları, kas lifleri bir aralarında büyük boşluklar olmadan başka paralel olmalı ve belirgin çizgiler (Şekil 5A) olmalıdır. Bu özellikler sergileyen, veya müstakil lifler (Şekil 5B), belirgin olarak hasar yok, vahşi tip zebrabalıkları larvaları atılmalıdır. Pik seğirme kuvvet karşısında tek zebrabalıkları larva için mevcut stimülasyon arasında temsili bir grafiği Şekil 6&#39;da gösterilmektedir. 3-7 dpf&#39;e arasında yabani tip Zebra balığı larvaları için en uygun stimülasyon mevcut 3 dpf&#39;e larvalar genellikle 6-7 dpf&#39;e larva daha güncel daha fazla uyarılması gerektiren, 400-600 mA arasında tipik olarak. Ham güç verileri (adım 5.8 sırasında toplanan) işlenmiş ve veri analiz yazılımı ile analiz edilmelidir. İlk olarak, güç kaydın temel sıfır olarak ayarlanır. İkinci olarak, kuvvet dönüştürücünün voltaj çıkışı (m zorlamak için dönüştürülürN) (kuvvet dönüştürücü için bir kalibrasyon eğrisi oluşturmak için üreticinin yönergelerine bakın). Tek bir larva bir maksimal seğirme kasılma sırasında toplanan bir temsilci gücü yanıt Şekil 7&#39;de gösterilmiştir. Veri analizi yazılımı tepe kuvveti ve kuvvet yanıtın diğer özellikleri ölçmek için kullanılabilir. Maksimal seğirme kasılmaları tepe kuvveti verilerin temsil edici bir grubu Şekil 8A&#39;da gösterilmiştir. Tipik tepe seğirme gücü yaşlı larva genç larvalar daha fazla güç üreten ile 0.9 &#39;dan 1.7 mN için vahşi tip 3-7 dpf&#39;e larva aralığı, değerleri. Pik seğirme yürürlükte farklar büyüme ve gelişme gibi normal süreçler (Şekil 8) ya da gen mutasyonu ile ilgili patoloji 21,22 olarak anormal süreçler nedeniyle olabilir. Kas kesit alanı (CSA) tarafından Normalleştirme tepe seğirme kuvvet farklılıklar Ayırıcı bağlı basitçe derecesini belirlemek için kullanılabilir<html> kas 21,22 büyüklüğünde nces. Kas CSA formül kullanılarak tahmin edilebilir: CSA (B / 2) (A / 2) = π, bir taraftan bakıldığında kas yüksekliği olduğu, B, alttan bakıldığında kas genişliği ve kesiti eliptik varsayılır. 0.027 3-4 dpf&#39;e larva genellikle 5-7 dpf&#39;e larva daha küçük CSA değerleri gösteren 0.034 mm 2, vahşi tip 3-7 dpf&#39;e larva aralığı için tipik CSA değerleri. Maksimal seğirme kasılmaları normalize maksimum kuvvet verinin temsili bir dizi Şekil 8B&#39;de gösterilmiştir. 4-7 dpf&#39;e larva genellikle 3 dpf&#39;e larvaları daha büyük değerleri gösteren 34 51 mN / mm 2 vahşi tip 3-7 dpf&#39;e larva aralığı, tipik normalize pik seğirme güç değerleri. <img alt="Şekil 1" src="/files/ftp_upload/50539/50539fig1.jpg" /> Şekil 1. Dikiş döngü kuyrukları için dikiş döngü. Oklar noktası. ve_content &quot;fo: keep-together.within-page =&quot; her zaman &quot;&gt; <img alt="Şekil 2," fo:content-width="5in" fo:src="/files/ftp_upload/50539/50539fig2highres.jpg" src="/files/ftp_upload/50539/50539fig2.jpg" /> Şekil 2. Etiketli bileşenleri ile (A) Test cihazı. Deneysel odasının (B) Yakın çekim manzarası. Şeffaf alt ile (a) Deneysel odası. (B) Kuvvet dönüştürücü. (C) Uzunluk kontrol. (D) XYZ konumlandırma cihazları. X, Y ve Z eksenleri sağ üst köşesinde tanımlanır. Termoelektrik modülleri kullanan (e) Sıcaklık kontrol sistemi. Boru termoelektrik modüllerin soğutma için su akışı barındırır. (F) Paslanmaz çelik boru dönüştürücü zorlamak bağlı. (G) Paslanmaz çelik boru uzunluğunu denetleyiciye bağlı. (H) Termometre mikroprob. (I) Platinum paralel plaka elektrotlar, uzunluğu kapsayanodası. Platin levhalar yüksek 2.5 mm ve kalın 0,255 mm. <img alt="Şekil 3," fo:content-width="6in" fo:src="/files/ftp_upload/50539/50539fig3highres.jpg" src="/files/ftp_upload/50539/50539fig3.jpg" /> Şekil 3,. Deneysel odasına larva bağlama. (A) Larva ön sonunda bağlanmış ancak henüz 90 ° döndürülebilir değil. (B) Larva hareket ettirilebilr 90 ancak henüz döndürülebilir değil arka sonunda bağlanmış °. (C) Larva sonra. (D) Larva sonra hareket ettirilebilr ve dikiş döngü kuyrukları kesilmiş. <img alt="Şekil 4," fo:content-width="6in" fo:src="/files/ftp_upload/50539/50539fig4highres.jpg" src="/files/ftp_upload/50539/50539fig4.jpg" /> Şekil 4. Kesit alanı tahmini için ölçümler. Kas sistemi olarak (A), yandan bakıldığında, (B) </strong&gt; alt. Kırmızı bar yerleştirme ürogenital açılış yerini gösterir. Kırmızı çubukların uzunluğu sırasıyla yan ve alt bakıldığında kas yüksekliğini ve genişliğini belirtir. <img alt="Şekil 5," fo:content-width="6in" fo:src="/files/ftp_upload/50539/50539fig5highres.jpg" src="/files/ftp_upload/50539/50539fig5.jpg" /> Şekil 5,. Zebra balığı larvaları gövde kas Yanal görünümü. Belirgin hasar ile (A) Sağlıklı doku. (B) Doku. Lif müfrezeleri kaynaklanan kontraktür yıldız ile işaretlenmiştir. <img alt="Şekil 6," src="/files/ftp_upload/50539/50539fig6.jpg" /> 6 Şekil. Pik seğirme kuvvet karşı uyarılması Temsilcisi arsa mevcut. Stimülasyon akımı 500 mA. Şekil 7. Tek bir seğirme daralma Temsilcisi güç kaydı. Bu daralma 0 msn de bir uyarıcı darbe ile elde edilemedi. Maksimum kuvvet 1.56 mN olduğunu. <img alt="Şekil 8," fo:content-width="6in" fo:src="/files/ftp_upload/50539/50539fig8highres.jpg" src="/files/ftp_upload/50539/50539fig8.jpg" /> Şekil 8. 3-7 dpf&#39;e larva. Temsilcisi kuvveti veri (A) maksimum seğirme kasılmaları gelen Maksimum kuvvet veri. (B) maksimum seğirme kasılmaları gelen Maksimum kuvvet veri CSA normalize. Eski larva (6-7 dpf) 5 dpf&#39;e başlayan Spirulina ile beslenen Hatchfry Encapsulon Sınıf 0 (Argent Laboratories) idi. Araçlar + standart sapma her grupta N = 5 ile rapor edilir. 3 dpf larvaları (*) ve 4 dpf larvaları (#) önemli ölçüde farklı grupları (ANOVA, p &lt;0.05 belirtilir.) 4 ve 6-7 dpf (A) arasında yürürlükte artış hiçbir dayalı büyüme atfedilir ise 3 ve 4 dpf (B) arasında normalize yürürlükte artış, bu dönemde içsel güç üreten yeteneği bir artış gösterir normalize yürürlükte 4 ila 7 dpf&#39;e değiştirmek.

Kuvvet ölçümleri geliştirme, yaralanma, hastalık, tedavi ya da kimyasal toksisite nedeniyle kas fonksiyonu değişiklikleri göstermek için kullanılabilir. Bu video, Zebra balığı larva gövde kas bir maksimal kasılma sırasında güç ölçmek için bir yöntem ortaya koymaktadır.

Zebra balığı Larva kas fonksiyonu değerlendirmek için daralma sırasında Kuvvet Ölçümü

Zebrafish larvae provide models of muscle development, muscle disease and muscle-related chemical toxicity, but related studies often lack functional ...

Bu prosedürün genel amacı, zebra balığı larvası gövde kasının maksimal kasılması sırasında üretilen kuvveti ölçmektir. Bu işlem, öncelikle kuvvet ölçümleri sırasında larvaları yerinde tutmak için kullanılacak sütür döngülerinin oluşturulmasıyla gerçekleştirilir. Ardından, anestezi uygulanmış larva deneysel hazneye yerleştirilir.Yerleştirme tamamlandıktan sonra, maksimal seğirme kasılması sırasında kuvvet kaydedilir. Son adım, pik kuvvetin kas enine kesit alanına normalize edilebilmesi için gövde kaslarının boyutlarının ölçülmesidir. Nihayetinde, kasılma sırasında kuvvet üretiminin ölçülmesi, kas fonksiyonundaki ve genel kas sağlığındaki değişiklikleri göstermek için kullanılır.Bu yöntemi yabanıl tip zebra balığı larvaları kullanarak göstermiş olsak da, yöntem genetiği değiştirilmiş larvalarda veya ilaç ya da toksikanlarla işleme tabi tutulmuş larvalarda da kullanılabilir. Yöntem daha sonra kas hastalığı modellerini karakterize etmek ve tedavileri değerlendirmek veya kas gelişimini, yaralanmasını ya da kimyasal toksisiteyi incelemek için kullanılabilir. İlk adım, larvaları yerinde tutmak için kullanılacak dikiş halkalarını hazırlamaktır.Kuvvet testi sırasında, steril olmayan sütürü üç ayrı şeride ayırmak için pens kullanın. Ayırma işlemi tamamlandıktan sonra, şeritlerden birinde çift el düğümü atmaya başlayın, ancak küçük bir ilmek oluşturmak için düğümü tamamen sıkmadan önce durun. İlmeği tamamlamak yerine, uçlardaki fazla sütürü kesmek için makas kullanın.İlmekle beraber yapışkan not kağıdının yapışkan yüzeyine, daha sonra kullanmak üzere yerleştirin. Test edilecek her larva için iki adet dikiş ilmeği hazırlayın. Öncelikle, test düzeneğini bir stereo mikroskobun tablasına yerleştirin.Ardından, kuvvet transdüseri ve uzunluk kontrolörü kablolarını test cihazına bağlayın. Kuvvet transdüseri ile uzunluk kontrolörünü açın ve uzunluk kontrolörünün ön kısmındaki anahtarı çevirin. Bu işlem, uzunluk kontrolörü tüpünün tek kullanımlık bir transfer pipeti ile köprülenmesini sağlar.Deney odasını test çözeltisiyle doldurun. Sütür halkasını, tutamak olarak uçlarından birini kullanarak forsepsle kaldırın. Kavisli kısımdaki halka, sütürün bükülmesine ve sonraki adımlar sırasında kopmasına neden olabilir.Bir halkayı kuvvet transdüsere tüpüne, diğerini ise uzunluk kontrol cihazına asın. Tek kullanımlık bir transfer pipeti ile bir zebra balığı larvasını test çözeltisiyle dolu küçük bir Petri kabına aktarın. Anestezi etkisini gösterdiğinde, dokunmaya bağlı yüzme davranışının ortadan kalktığını doğrulamak için kuyruğunu nazikçe dürtün. Ardından, larvayı bir cam pipet ve pens yardımıyla deney haznesine aktarın.Sütür döngüsünün her iki ucını tutarak, larvanın ön kısmını kuvvet dönüştürücü tüp üzerindeki sütür döngüsünden nazikçe geçirin. Döngüyü, hava kesesinin veya yüzme kesesinin arkasında sıkılaştırmak için her iki ucu pensle aynı anda çekin. Sütür uçlarından birini tutup çekerek, larvanın yan tarafı yukarı bakana kadar tüp etrafında 90 derece dönmesini sağlayın.Uzunluk kontrolörüne bağlı olan X, Y, Z konumlandırma cihazını kullanarak, uzunluk kontrolörü tüpünü x ekseni boyunca larvaların gövdesi ve kuyruğunun altına hareket ettirin. Uzunluk kontrolörü tüpünün uçları ile kuvvet transduseri tüpü arasında boşluk bırakın. Ardından, sütür halkasını larvaların kuyruğunun üzerinden geçirin ve sütür halkasını sıkın.Daha önce gösterildiği gibi, larvaların lateral tarafı yukarı bakacak şekilde posterior kısmını döndürmeniz gerekebilir. Yerleştikten sonra, sütur döngü uçlarını kesin. Tüpler haznenin tabanına değene kadar onları yavaşça indirmek için XY ve Z konumlandırma cihazlarını kullanın.Ardından larvaları hazne tabanından uygun bir mesafeye kaldırın. Bu mesafe, daha sonra kullanılacak olan ters mikroskop objektifinin çalışma mesafesi içinde olmalıdır. Son olarak, larvanın uzun eksenini kuvvet dönüştürücü tüpünün uzun ekseniyle hizalamak için uzunluk kontrol tüpünü ayarlayın.Başlamak için, test düzeneğini ters mikroskobun tablasına yerleştirin. Ardından, su banyosu sirkülatör termometresini ve sıcaklık kontrol cihazını test düzeneğine bağlayın. Gerekli bileşenleri çalıştırın ve sıcaklık kontrol cihazındaki ayarı istenen değere getirin.Kabloları stimülatörden test cihazına bağlayın. Stimülatörün gücünü açın, ancak bu aşamada larvaları stimüle etmeyin. Larvanın hazne tabanına paralel olduğunu kontrol etmek için larvaların tüplerin uçları arasında kalan kısmını inceleyin.Paralel ise, gerektiğinde larvaların her iki ucu da odakta olacaktır. Her iki uç odakta olana ve larva paralel hale gelene kadar kuvvet transdüser tüpünü ayarlayın. Video sarkomer uzunluğu sistemini açın ve video kamerasını, çizgilenmeler video çerçevesinin kenarlarına paralel olacak şekilde döndürün.Striasyon aralığı, sarkomer uzunluğunun bir göstergesi olarak kullanılır. Mikroskobu periferik liflere odaklanacak şekilde ayarlayın ve belirtilen sarkomer uzunluğunu not edin. Gerekiyorsa, kasılma kuvvetini optimize etmek için sarkomer uzunluğu optimal değerin altına düşene kadar larva boyunu kısaltmak amacıyla uzunluk kontrol cihazını ayarlayın.Öncelikle, stimülatördeki çıkış akımını düşük bir değere ayarlayın ve ardından özel yazılımı 0,2 milisaniye süreli akım darbeleri verecek şekilde programlayın. İlk darbeyi uygulayın ve peak twitch kuvvetini ölçmek için osiloskop kullanın.Akımı 50 miliamperlik artışlarla yükseltin ve her yeni akım seviyesinde pik seğirme kuvvetini ölçün. Stimülasyon akımı arttıkça yorgunluğu önlemek için seğirmeler arasında 30 saniye bekleyin. Pik seğirme kuvveti genellikle bir maksimuma kadar artar ve ardından larvanın ürettiği akım düzeyinde kademeli olarak azalır.En büyük kuvvet, optimal stimülasyon akımı belirlendikten sonra elde edilir; akım genliğini optimal stimülasyon akımına ayarlayın ve maksimum seğirme kuvvetini ortaya çıkarmak için larvaların uzunluğunu düzenleyin. Son olarak, larva kaslarında bir seğirme meydana getirin. Kuvvet yanıtını kaydetmek için osiloskop kullanın ve kaydı sonraki analizler için saklayın.Kas yapısı boyutlarını ölçmek için test düzeneğini tekrar stereo mikroskoba taşıyın. IP ölçeğini kullanarak, yan taraftan bakıldığında kas yapısının yüksekliğini ölçün. Ölçümleri anatomik bir referans noktasından alın.Örneğin, burada kırmızıyla işaretlenmiş olan ürogenital açıklık. Ardından, larvaların boyunu değiştirmemeye dikkat edin. Larvaları alttan görebilmek için sütür döngü kuyruklarını kullanarak 90 derece döndürün.Kas yapısının genişliğini alttan bakıldığında ölçün. Son olarak, larvaları test ekipmanından çıkarmak için sütür halkalarını bir mikro bıçakla kesin; sağlıklı vahşi tip zebra balığı larvalarında kas lifleri, aralarında büyük boşluklar olmaksızın birbirine paralel olmalı ve belirgin çizgilenmeler göstermelidir; bu özellikleri göstermeyen veya burada görüldüğü gibi ayrılmış lifler gibi belirgin hasarları olan vahşi tip zebra balığı larvaları elenmelidir. Tek bir zebra balığı larvası için uyaran akımına karşı tepe seyirme kuvveti grafiğe aktarılmıştır.Optimal stimülasyon akımı tipik olarak 400 ile 600 miliamper arasındadır. Tek bir larvanın maksimal seyirme kasılması sırasında toplanan temsili bir kuvvet yanıtı burada gösterilmiştir. Farklı yaşlardaki vahşi tip larvalardan elde edilen pik kuvvet değerlerinin 0,9 ile 1,7 arasında değiştiği görülmektedir.Yaşlı larvaların daha genç larvalara kıyasla daha fazla kuvvet ürettiği milli newton cinsinden değerler elde edilmiştir. Pik kuvvetler, kasın kesit alanına normalize edildikten sonra bile yaşlı larvalar genç larvalardan daha fazla kuvvet üretmektedir. Bu prosedürü uygularken, larvaların kuvvet dönüştürücü ve uzunluk kontrol tüpleri etrafında kolayca dönememeleri için sütür halkalarının yeterince sıkılması önemlidir.Sütür halkaları çok gevşek olursa, larva tarafından üretilen kuvvet kuvvet transduserine tam olarak iletilmeyecek ve maksimum seğirme kuvveti olduğundan düşük tahmin edilecektir.

force-measurement-during-contraction-to-assess-muscle-function

Research

JoVE Journal

Biology

Biyoloji

Burada sunulan yöntem, yüksek enerjili lazer darbeleri ve zamanla bu yaralanmalar ve kurtarma ileri analizi ile canlı zebrafish embriyo kesin hasar oluşur. Ayrıca genetik olarak tek etiketli veya iskelet kas hücre gruplarının sırasında ve lazer ışık kaynaklı hasar sonrası takip edilebilir göstermek.

Zebra balığı Embriyonik İskelet Kası Lazer-yaralama

Zebra balığı iskelet kası bozuklukları insan modellemek için ortaya çıkan bir sistemdir. Biz embriyonik ve larva zebrafish iskelet kası myofibers izole etmek için hızlı ve etkili bir yöntem açıklanmaktadır. Bu yöntem, tek bir iskelet kas lifi morfolojisi çalışma için uygun olan yüksek yoğunluklu miyofiberde oluşan hazırlama, protein hücre içi lokalizasyonu ve kas fizyolojisi verir.

Disosiye Müstahzarlar gelen Embriyonik ve larval Zebra balığı İskelet myofibers Analizi

Zebra balığı artık kas distrofilerini, konjenital miyopatileri ve ilgili nöromüsküler hastalıkları modellemek için yerleşik ve güçlü bir araçtır. Çift kırılma ve dokunma ile uyarılmış kaçış davranışı, zebra balığı embriyolarının erken gelişim sırasında kas düzensizliği ve lokomotif bozukluğunun derecesini belirlemek için kullanılan iki yaygın noninvaziv testtir.

Larva Zebra Balıklarında İskelet Kası Defektlerinin Bikırılma ve Dokunma-Uyandırma Kaçış Yanıtı Deneyleri ile Analizi

Bu çalışmada, zebra balığı larvaları üzerinde Evans Mavi Boya (EBD) analizi yapmak için basit bir yöntem açıklıyoruz.  Bu teknik, iskelet kası bütünlüğünün karakterizasyonu ve zebra balığı kas distrofisi modellerinin tanımlanması için güçlü bir araçtır ve yeni terapötiklerin geliştirilmesi için değerli bir yöntemdir.

Evans Blue Dye ile Zebra balığı Larva İskelet Kası Bütünlüğü Analizi

Zebra balığı, kas fonksiyonlarını ve hastalıklarını incelemek için mükemmel bir modeldir. Erken embriyogenez sırasında zebra balığı düzenli kas kasılmalarına başlar ve ritmik yüzme davranışı üretir ve bu da kas bozulduğunda değişir. Burada, yüzme performansını kas fonksiyonunun bir ölçüsü olarak incelemek için dokunma ile uyarılmış bir tepki ve hareket testini açıklıyoruz.

Dokunmatik uyarılmış Yanıt ve Hareket Deneyleri kullanarak Zebra balığı kas Performans ve fonksiyonunu değerlendirmek için

Sonlu Elemanlar Analizi, yapıların yük altındaki mekanik performansını araştırmak için sıkça kullanılan bir araçtır. Burada, zebra balığı çenesinin biyomekaniğini modellemek için kullanımını uyguluyoruz.

Zebra balığı Çeneli Biyomekanik Araştırma Sonlu Elemanlar Modelleri Bina

İskelet kas rejenerasyonu, kas distrofisi gibi birçok kas hastalığında bozulan doku yerleşik kas kök hücreleri tarafından yönlendirilir ve bu da kasın yenilenememesi ile sonuçlanır. Burada, kas hastalığının zebra balığı modellerinde kas yenilenmesinin incelenmesini sağlayan bir protokol açıklıyoruz.

Kas Hastalığının Zebra Balığı Modellerinde Kas Yenilenmesinin İncelenmesi

Optik berraklık, zebra balıklarında hücre biyolojik ve fizyolojik çalışmaları için önemli bir avantajdır. Bireysel hayvanlarda hücre büyümesinin ölçülmesi için sağlam yöntemler, iskelet kasının ve komşu dokuların büyümesinin tüm vücut büyümesiyle nasıl bütünleştiğine dair yeni bilgiler sağlayan tanımlanmıştır.

Değiştirilmiş elektriksel aktiviteye maruz kalan bireysel canlı zebra balıklarında iskelet kası büyümesinin gerçek zamanlı ve tekrarlanan ölçümü

Bu protokol, zebra balığı larvalarında kardiyak kasılma fonksiyonunu araştırmak ve hücre izleme ve etkileşimli analiz yoluyla kalp mekaniği hakkında bilgi edinmek için ışık tabakası görüntülemeyi kullanır.

Zebra Balığı Kardiyak Kasılmasının 4D Işık Sayfası Görüntüleme

Bu video makalede, istikrarlı ve denetlenebilir geometrileri odorant degradelerin inşaat sağlayan yeni bir yöntem açıklanmaktadır. Biz kısaca bu gradyanlar koku alma kusurları (tam ve kısmi anosmi) ekrana nasıl kullanılabileceğini göstermek ve daha ince kemotaksis davranış özelliklerini incelemek için.

Yüksek çözünürlüklü Ölçüm Drosophila Larva Koku-Driven Davranış

Keşfedin zebra balığı larva gövde kasında maksimum kasılma sırasında kuvvet ölçümü yöntemini. Bu teknik, kas fonksiyonu ve sağlığını değerlendirmek için geliştirme, yaralanma ve kimyasal maruziyet çalışmalarında kullanılabilir.

Zebra balığı Larva kas fonksiyonu değerlendirmek için daralma sırasında Kuvvet Ölçümü

Daha fazla video keşfet