Name: Farelerde parabiyoz: Detaylı Bir Protokol (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2013-10-06T21:30:00.000+00:00
Duration: 7 min 56 s
Description: Keşfedin farelerde parabiyoz cerrahisiyle paylaşılan dolaşım sistemini inceleme yöntemini. Bu teknik, uzun süreli kan kimerizmi gözlemleri için immünosupresyon gerektirmeden uygulanabilir.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Yazarlar cerrahi tekniği ile yardım için Adriane Mosley ve Libuse Jeřábek (Stanford) teşekkür etmek istiyorum.

Tüm hayvan çalışmaları, Laboratuvar Hayvanlarının Bakımı ve Kullanımı için UCLA hayvan bakımı ve kullanımı komitesi kuralları ve Sağlık Rehberi, National Institutes göre yapılmıştır. , Aşağıda tarif edilen prosedüre süresi başından sonuna kadar yaklaşık olarak 45-60 dk. 1.. Cerrahi Alan Hazırlık <ol><li> Temiz bir hayvan ameliyathane prosedürü uygulayın. </li><li> Ekipman: izofluran Vaporizer, ısıtma pedi ile Gaymer T Pompa. </li><li> Steril aletler: iki kavisli forseps, ince makas, iğne tutucu. </li><li> Steril eldiven tüm işlem sırasında kullanılmalıdır. </li></ol> 2. Hayvanların hazırlanması <ol><li> Aynı kafese benzer ağırlık ve boyut aynı genetik kökenli iki erkek veya dişi fareler, koyun ve uyumlu yaşamasını sağlamak için en az iki hafta boyunca monitör. Erkek fareler nedeniyle daha az agresif davranışa tercih edilir. </li><li> Tarafından hayvanların anestezisiizofluran buharlaştırıcı kullanılmıştır. Bir Posi-Seal İndüksiyon Odası Yeri fareler izofluran buharlaştırıcı (4-5% v / v) bağlı. Anestezinin sonra, izofluran (% 1.5-2 v / v) bağlı bir burun konisi ile işlem boyunca anestezi kürk traş alanına hayvan transferi ve korumak. Kuru göz önlemek için bir Q-ucu ile oftalmik merhem sürün. </li><li> Sırtüstü pozisyonda üzerindeki hayvan yerleştirin. Iyice doğru yaklaşık 1 cm 1 cm diz altında dirseğin başlayarak yerleştirilir ve sol fare sağ tarafına yerleştirilmiş fare sol tarafını tıraş. </li><li> Aseptik iyice alkol mendil ardından Betadinede batırılmış mendil ile (2-3x) silerek traş alanlar hazırlamak. Steril bir ped ile kaplı bir ısıtılmış yüzey üzerinde fareler yerleştirin. </li><li> Analjezi için, sırasıyla, 10 mg / kg ve 0.1 mg / kg &#39;lık bir dozda, karın içinden ya da deri altından Carprofen Buprenorfin ve yönetmek. </li><li> Bir ile, arka arkaya, kendi taraflarında hayvanları yerleştirinyukarı bakacak şekilde traş alanları djacent. Cerrahi alanın herhangi bir bulaşmayı önlemek için, sadece operasyon bölgesini açıkta bir steril örtü ile fareler kapağı. Ameliyatı yaparken steril kalmak için küçük bir örtü açılış oluşturun. Biz videoya sırasında daha iyi bir görüş için drape pencere büyük yaptı. </li></ol> 3. Parabiyoz <ol><li> Keskin bir makas kullanılarak, dirsek üzerinde 0.5 cm, her hayvan başlayan traş yanlarına diz ekleminin altında 0.5 cm (Şekil 1) tüm şekilde uzunlamasına cilt insizyonu gerçekleştirin. Kesi ardından, hafifçe kavisli bir forseps bir çift ile cildi tutarak deri altı fasya cildi ayırmak ve ücretsiz cilt 0,5 cm oluşturmak için ikinci bir çift ile fasya ayrı. Tüm kesi boyunca bu ayrımı gerçekleştirin. </li><li> Diğer doğru olekranon bir hayvanın sol likasyon olarak, olekranon takarak birleştirme başlayın. Olecranons ve diz eklemleri hem de açıkça ayırt şu th vardıre cilt kesisi. Katılmadan kolaylaştırmak için, ilk fare dirsek eğmek ve olekranonun altında emilemeyen 3-0 dikiş iğnesi. Benzer şekilde, ikinci fare dirsek eğmek ve bunun altında aynı dikiş geçmek. Bir çift cerrahi düğüm tarafından sıkıca eklemleri takın. </li><li> Aynı prosedür izlenerek, diz eklemleri bağlayın. </li><li> Eklemlerin eki sonra, sürekli bir emilebilir 5-0 Vicryl dikiş diz doğru dirsek ventral başlayan iki hayvanların deri bağlayın. Cilt yırtılması ve ayrılmasını önlemek için, dirsek ve diz çevresindeki alanda cildin sıkı bir dikiş tekniği gerçekleştirin. Ventral deri eki tamamlandıktan sonra, bir çift cerrahi düğüm gerçekleştirin. Yüzüstü pozisyonda fareler yerleştirin ve çift cerrahi düğüm ile biten dikiş Dorsalinden devam ediyor. Dikiş sürekliliğini doğrulama ve açıklıklar eksikliğini onaylamak. </li><li> DEHY önlemek için deri altından her bir farenin% 0.9 NaCl, 0.5 ml yönetmedration. </li></ol> 4. Ameliyat sonrası Kurtarma <ol><li> Kurtarma kadar ısıtılmış pad üzerinde hayvan tutun. </li><li> Kurtarma sonra, analjezikler karprofen ve buprenorfin sağlar. (Adım 2.5) yukarıda tarif edilen ile aynı dozlarda, 48 saat boyunca, sırasıyla periton içine ya da deri altından her 24 ve 12 saat tekrarlayın. Gibi sallayarak olarak ağrı ve sıkıntı belirtileri için hayvan izleyin, kuyruk uyuşukluk, çiğneme, vb bakım eksikliği, iki hafta boyunca günde geri kemerli. </li><li> Profilaktik, 2 mg sülfa / ml 0,4 mg bakteriyel enfeksiyonları önlemek için 10 gün boyunca / ml Döşeme onların su şişesi sulfamethoxazole / Trimetoprim oral süspansiyon ile fareler tedavi. </li><li> Evin yatak malzemesi aspirasyonu önlemek için monolitik yatak malzeme (örn. kağıt havlu ya da emici steril ped) ile temiz bir kafes içinde her Parabiyotik çifti. Onların baş up ile sternum yatma korumak mümkün olduğunda bir yatak dolu kafes hayvanları dönün. Gerginlik en aza indirmek içinParabiyotik varlığına ayarlanması sırasında gıda ulaşma, kafes katta nemlendirilmiş gıda pelet yerleştirin. Yuvalama malzeme sağlayın. 1-2 hafta içinde Parabiyotik farenin cerrahi eşleştirilmiş ön ve hind-bacaklarda gezinmeye yeteneği var. </li><li> Kan kimerizmi ameliyatı takiben 10-14 gün oluşur. </li></ol> 5. Onay ve Ters Prosedürü <ol><li> Iki hafta kan şimerizmi (Şekil 3) Onaylamak için akış sitometri analizi için her bir fare kuyruk damarlar kan çizdikten sonra. </li><li> Akış sitometrik analizi için kan işleme: 10 mM EDTA, 500 ul kan 2-3 damla seyreltilir. (PBS içinde seyreltilmiş)% 2 dekstran 500 ul ekleyin, iyice karıştırın ve 30 dakika boyunca 37 ° C&#39;de inkübe edin. 5 dakika için 1200 rpm&#39;de bir yeni bir tüp, bir dönüş olarak süpernatant aktarın ve akış sitometrik analiz için PBS içinde pelet hücreleri (ya da diğer tamponu) yeniden süspanse edin. </li><li> Deneysel tasarım bağlı olarak, Parabiyotik çifti ayrılabilensonraki zaman puan t. Bizim deneyim, biz herhangi bir komplikasyon olmadan 9 ay boyunca parabiosed çiftleri korumuştur. </li><li> Steril cerrahi yüzeyde ters prosedürü uygulayın. (Adım 2.2) yukarıda tarif edildiği gibi, bir buharlaştırıcı izofluran (% 4-5) bağlı olan ve% 1.5-2 izofluran ile anestezi bakımı bir indüksiyon odasına yerleştirerek fareler anestezi. </li><li> (2.3, 2.4 adım) ilk dikiş çevreleyen alandan saç çıkarın ve aseptik olarak yukarıda tarif edildiği gibi traş alanları hazırlar. </li><li> Analjezi için, sırasıyla, 10 mg / kg ve 0.1 mg / kg &#39;lık bir dozda, karın içinden ya da deri altından Carprofen Buprenorfin ve yönetmek. </li><li> (Adım 2.6) yukarıda tarif edildiği gibi steril bir örtü ile cerrahi alanı kapsamaktadır. </li><li> Keskin bir makas kullanarak, yanal sütür boyunca uzunlamasına bir kesi yoluyla fareler ayırmak ve hafifçe kavisli bir forseps bir çift ile iki farelerin arasında yeni oluşturulan fasya ayırmak. Eklemleri ayırmak için, ameliyat dikiş ipliğinin knot kesilmişOnları bağlayan. Pürüzsüz yüzeyler elde ve emilebilir sürekli 5-0 kaplanmış vicryl ile cilt yeniden takmak için kesi boyunca cildi keserek. </li><li> Kaybını önlemek için, her fareye deri altından% 0.9 NaCl, 0.5 ml yönetmek. Kurtarma kadar ısıtılmış pad üzerinde hayvan tutun. </li><li> Çıktıktan sonra, 48 saat süre ile, her 12 saat analjezik uygulama, karprofen (10 mg / kg), her 24 saat ve buprenorfin (0.1 mg / kg) ile tekrar edin. </li><li> Bakteriyel enfeksiyonlar 10 gün boyunca kendi su şişesi içinde sulfamethoxazole / Trimetoprim oral süspansiyon (2 mg sülfamidler / ml 0,4 mg / ml Döşeme) ile fare tedavi önlemek için. </li></ol>

<ol><li>Bert, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Exp%C3%A9riences+et+consid%C3%A9rations+sur+la+greffe+animale%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+de+l%27Anatomie+et+de+la+Physiologie%22%5BJournal%5D)">Expériences et considérations sur la greffe animale.</a> Journal de l'Anatomie et de la Physiologie. 1, 69-87 Forthcoming.</li>
<li>Bunster, E., Meyer, R. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Improved+methods+of+parabiosis%5BTitle%5D)+AND+%22Anat.+Rec%22%5BJournal%5D)">Improved methods of parabiosis.</a> Anat. Rec. 57, 339-380 (1933).</li>
<li>Waskow, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Generation+of+parabiotic+mice+for+the+study+of+DC+and+DC+precursor+circulation%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol.+Biol%22%5BJournal%5D)">Generation of parabiotic mice for the study of DC and DC precursor circulation.</a> Methods Mol. Biol. 595, 413-428 (2010).</li>
<li>Finerty, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Parabiosis+in+physiological+studies%5BTitle%5D)+AND+%22Physiol.+Rev%22%5BJournal%5D)">Parabiosis in physiological studies.</a> Physiol. Rev. 32, 277-302 (1952).</li>
<li>Aicher, A., Heeschen, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nonbone+marrow-derived+endothelial+progenitor+cells%3A+what+is+their+exact+location%5BTitle%5D)+AND+%22Circ.+Res%22%5BJournal%5D)">Nonbone marrow-derived endothelial progenitor cells: what is their exact location.</a> Circ. Res. 101, e102(2007).</li>
<li>Abe, S., Boyer, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cells+derived+from+the+circulation+contribute+to+the+repair+of+lung+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Respir.+Crit.+Care+Med%22%5BJournal%5D)">Cells derived from the circulation contribute to the repair of lung injury.</a> Am. J. Respir. Crit. Care Med. 170, 1158-1163 (2004).</li>
<li>Donskoy, E., Goldschneider, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Thymocytopoiesis+is+maintained+by+blood-borne+precursors+throughout+postnatal+life.+A+study+in+parabiotic+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Immunol%22%5BJournal%5D)">Thymocytopoiesis is maintained by blood-borne precursors throughout postnatal life. A study in parabiotic mice.</a> J. Immunol. 148, 1604-1612 (1992).</li>
<li>Powell, A. E., Anderson, E. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fusion+between+Intestinal+epithelial+cells+and+macrophages+in+a+cancer+context+results+in+nuclear+reprogramming%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Fusion between Intestinal epithelial cells and macrophages in a cancer context results in nuclear reprogramming.</a> Cancer Res. 71, 1497-1505 (2011).</li>
<li>Duyverman, A. M., Kohno, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+transient+parabiosis+skin+transplantation+model+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Protoc%22%5BJournal%5D)">A transient parabiosis skin transplantation model in mice.</a> Nat. Protoc. 7, 763-770 (2012).</li>
<li>Ajami, B., Bennett, J. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Local+self-renewal+can+sustain+CNS+microglia+maintenance+and+function+throughout+adult+life%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Local self-renewal can sustain CNS microglia maintenance and function throughout adult life.</a> Nat. Neurosci. 10, 1538-1543 (2007).</li>
<li>Weissman, I. L., Jerabek, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tolerance+and+the+H-Y+antigen%3A+Requirement+for+male+T+cells%2C+but+not+B+cells%2C+to+induce+tolerance+in+neonatal+female+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Transplantation%22%5BJournal%5D)">Tolerance and the H-Y antigen: Requirement for male T cells, but not B cells, to induce tolerance in neonatal female mice.</a> Transplantation. 37, 3-6 (1984).</li>
</ol>

Yazarlar herhangi bir maddi çıkarları var.

Burada tartışılan parabiyoz yöntem, düşük mortalite oranları asgari teknik zorluklar ve sonuçlar sunar. Ve dirsek, diz eklem bağlanma Bunster ve Meyer tekniğin önemli bir gelişmedir. Bununla birlikte, bu prosedür, böylece ameliyat boyunca steril koşullar bakım şarttır invaziv kalır. Ayrıca cerrahi bölgenin enfeksiyonu önlemek için, bu parabiosed hayvanların antibiyotik kombinasyonu almak ve düzenli olarak takip edilmesi önemlidir. Sağlam bir destek sağlamak ve ağrıyı önlemek için, dirsekler ve dizler bağlayan dikiş yeri...

Parabiyoz, cerrahi iki organizmaların katılmadan, ilk paylaşılan dolaşım sistemlerini incelemek için bir model geliştirmek için bir yol olarak Paul Bert tarafından 1864 yılında tanımlanan ve iki sıçanların 1 deri ve kas duvarların katılma oluşuyordu. Parabiyoz 3 inflamasyon bölgesinde mikro-damar oluşumunu teşvik eder ve bu, hipofiz bezi ve yumurtalıklar hem de hipertansiyon 4 böbreğin rolü arasındaki hormonal iletişim gibi fizyolojik çalışmalarda çeşitli uygulamalar, etti. Ayrıca, bu da neovaskülarizasyon 5, 6, hematopoetik kök hücre göçü ve lenfosit trafiği 7, hem de tümör metastazı 8,9 iltihaplı ya da kök hücreler dolaşımdaki rolü ve kinetik progenitör hücrelerin toplanmasını ve entegrasyon araştırmak için istihdam edilmiştir ve nörodejeneratif hastalıklar 10. Parabiyoz yalanlar önemli bir avantajıolması ile ortak hayvan bir bağışıklık tepkisini tetikleme olmadan hücre göçü ve neovaskülarizasyonu sağlayan ortak dolaşım antijenleri paylaşır. Daha da önemlisi, Weissman et al. Erkek ve dişi fareler arasındaki parabiyoz göstermiştir 11, antikor anti-HY oluşumuna yol açmaz. Paul Bert tarafından tarif edilen orijinal protokole olarak iki hayvan, deri ve kas duvar 1 arasında bir bağlantı aracılığıyla birbirine katıldı. Bu yöntem, bununla birlikte, hayvanlar için önemli bir yük sebep nedeniyle yaranın enfeksiyona yüksek ölüm oranı ile sonuçlanmıştır. O zamandan beri parabiyoz tekniği en baskın 1933 2 Bunster ve Meyer tarafından önerilen protokol olmak üzere çeşitli gruplar tarafından revize edilmiştir. Onların yöntem hayvanlar için daha iyi destek ve daha az ağrı izin, skapula eklem, vücut boşluklarına ve cilt birleştirme dahil. Aynı zamanda, yeni bir yöntem minimal post-operatif bakım ve uygulamasına önemli sonuçlandırasyon ölüm oranları azalmıştır. Burada tarif edilen protokol daha az invaziv ve sıkı bir birleştirme sağlayan Bunster ve Meyer teknik bir modifikasyonudur. Yani, fareler, dirsek ve diz eklemleri gibi deri yoluyla bağlanır. Bu nedenle, birleştirme önler deri uzatma ve daha az ağrı ve komplikasyonlara neden olabilir. Burada fare ifade, yapısal GFP için vahşi tip (WT) yetişkin fare birleştirilmesi tarif eder. Biz ameliyattan iki hafta sonra paylaşılan bir dolaşım sistemi oluşturmak için bu cerrahi yöntemin etkinliğini gösteren kan kimerizmin% 50 elde edebilirsiniz olduğunu göstermektedir.

<table><tbody><tr><td>Isoflurane-Phoenix</td><td>Clipper</td><td>NDC 57319-559-06</td><td></td></tr><tr><td>Posi-Seal İndüksiyon Odası</td><td>Moleküler Görüntüleme Ürünleri</td><td>AS-01-0530-SM</td><td></td></tr><tr><td>Portatif Anestezi Sistemi</td><td>Moleküler Görüntüleme Ürünleri</td><td>AS-01-0007</td><td></td></tr><tr><td>Gaymer T Pompası</td><td>Gaymar Industries, Inc</td><td>TP650</td><td></td></tr><tr><td>Isıtıcı Battaniye (Isıtma yastığı)</td><td>Kent Scientific Corp</td><td>TP-22G</td><td></td></tr><tr><td>Kavisli forseps</td><td>Roboz</td><td>RS-5101</td><td></td></tr><tr><td>Makas</td><td>Güzel Bilim Araçları (FST)</td><td>FST 14063-09</td><td></td></tr><tr><td>İğne tutucu</td><td>FST</td><td>FST 12501-13</td><td></td></tr><tr><td>Elektrikli tıraş makinesi</td><td>Oster</td><td>Golden A5</td><td></td></tr></tbody></table>

farelerde parabiyoz: detaylı bir protokol

Parabiosis in Mice: A Detailed Protocol

Parabiyoz kan dolaşımı paylaşımı sağlayan iki organizmanın bir cerrahi birliği. İki hayvan cildi takılması iltihap bölgesinde de mikro-damar oluşumunu teşvik eder. Parabiyotik ortakları dolaşan antijenleri paylaşmak ve böylece olumsuz bağışıklık reaksiyonu ücretsizdir. İlk 1864 1 Paul Bert tarafından açıklanan, parabiyoz cerrahi hayvan hayatta 2 geliştirmek için 1933 yılında Bunster ve Meyer tarafından rafine oldu. Mevcut protokolde, iki farenin cerrahi Bunster ve Meyer teknik bir modifikasyonu takip birleştirilir. Hayvanlar dikildi deride gerginliği önler sağlam destek sağlayan deri eki ardından dirsek ve diz eklemleri vasıtasıyla bağlanır. Burada, ayrıntılı olarak, vahşi tip (WT) fare fare için her yerde bulunan bir GFP ifade eden bir birleştirme Parabiyotik açıklar. Kan dolaşımdaki iki hafta işleminden sonra, çift ayrılır ve GFP pozitif hücrelerin akış sitometrik analizi ile tespit edilebilirWT fare iyon. Kan kimerizmi Bir diğer bir hayvandan elde dolaşan hücrelerin katkısını incelemek sağlar.

İki organizmaların parabiyoz beklenen sonucu ortak bir kan dolaşımı için her hayvanın dolaşım sisteminin eşit katkısı (Şekil 2). Bir kolaylıkla akış sitometrik analizi ile parabiosed WT ve GFP pozitif farelerin kan başarılı dengede doğrulayabilir. Burada, venöz kan ameliyattan sonraki 2 hafta içinde, her iki parabionts kuyrukları elde edilmiştir ve (eritrositler hariç), periferal kan hücreleri için damıtılır. Parçalanmış hematopoetik kaynaklı hücre fraksiyonu, daha sonra GFP pozitif ve WT hücrelerin var...

Iki organizmanın Parabiyotik birleştiren ortak bir dolaşım sisteminin gelişmesine yol açar. Bu protokol, bir vahşi tip fare ve bir kurucu GFP-ifade eden fare arasında bir Parabiyotik bir bağlantı oluşturmak üzere cerrahi adımları açıklar.

Farelerde parabiyoz: Detaylı Bir Protokol

Parabiosis is a surgical union of two organisms allowing sharing of the blood circulation. Attaching the skin of two animals promotes formation of ...

Bu prosedürün genel amacı, ortak bir dolaşım sistemini incelemek için iki fareye parabiyotik birleştirme işlemi gerçekleştirmektir. Bu işlem, öncelikle hayvanların bitişik bölgelerine bir insizyon yapılarak gerçekleştirilir. Fasyalar ayrıldıktan sonra, iki fare dirsek ve diz eklemlerinden sıkıca birbirine bağlanır.Son adım, iki hayvanın derisini sürekli bir sütürle birleştirmektir. Nihayetinde, akış sitometrik analiz, prosedürden sonraki 10 ila 14 gün içinde kan kimerizmini gösterebilir. Bu tekniğin, kemik iliği transplantasyonu veya hücre enjeksiyonu gibi mevcut yöntemlere göre temel avantajı, immünsüpresyon gerektirmemesi ve ayrıca CX dolaşımının uzun süre boyunca sürdürülmesine olanak tanımasıdır.Prosedür, punctu jaw üzerinde gösterilecektir. Laboratuvarımdaki hayvan cerrahı, en az iki hafta önceden, aynı cinsiyetten (tercihen dişi), aynı genetiğe sahip, benzer boyut ve ağırlıktaki fare çiftlerinden oluşan birkaç kafes hazırladı. Uyumlu bir çift seçildikten sonra, parabiyoz işlemi temiz bir hayvan cerrahisi odasında gerçekleştirilir.Tüm temas yüzeylerinin, aletlerin ve eldivenlerin steril olduğundan emin olun. Fareleri, izofluran vaporizerına bağlı bir PAI mühür indüksiyon odasında anesteziye alın. Anestezi sağlandıktan sonra, işlem boyunca bunu sürdürün.Bir burun konisi kullanarak daha düşük konsantrasyonda isofloran uygularken, karın bölgesindeki tüyleri karşı taraflardan tıraş edin ve oftalmik pomad sürün. Ardından, tıraş edilen bölgeleri önce betadine emdirilmiş mendillerle, ardından alkollü mendillerle iyice silerek aseptik olarak hazırlayın.Ardından, fareleri steril bir pedle kaplanmış ısıtıcı bir pedin üzerine aktarın. Analjezi için karprofen ve buprenorfin kullanın. Fareleri, tıraş edilen bölgeleri yukarı bakacak şekilde, sırt sırta gelecek biçimde yan tarafları üzerine konumlandırın.Ardından, sadece operasyon alanını açıkta bırakacak şekilde farelerin üzerini steril bir örtüyle örtün. Keskin bir makas kullanarak, her hayvanın yan kısımlarına, diz ekleminin yarım santimetre altından başlayıp dirseğin yarım santimetre üzerinde bitecek şekilde boyuna cilt kesileri yapın. Kesiyi takiben, cildi kavisli bir pens yardımıyla yukarı kaldırıp fasyayı ikinci bir pensle ayırarak, cildi subkütan fasyadan nazikçe ayırın.Yarım santimetre boş deri oluşturmak için, LEC'ler ve diz eklemleri net bir şekilde ayırt edilebilir. Cilt insizyonunun ardından, sol ve sağ LEC'leri birleştirmeye başlayın. İlk olarak ilk farenin dirseğini bükün ve 3.0 süturun iğnesini Theon'un altından geçirin.İkinci olarak, ikinci farenin dirseğini bükün ve aynı sütürü altından geçirin. Eklemleri çift cerrahi düğümle sıkıca bağlayın. Ardından, aynı prosedürü izleyerek diz eklemlerini bağlayın.Eklemlerin sabitlenmesinin ardından, iki hayvanın derisini sürekli emilebilir 5-0 Vicryl sütürle birleştirin. Deri yırtılması ve ayrılmasını önlemek için dirsekten ventral olarak başlayın.Dirsek ve diz çevresindeki bölgelerde ciltte sık sütür kapatmaları gerçekleştirin. Cilt parçalarının birbirine bağlanması, bu prosedürün kritik bir adımıdır. Cerrahi işlem sonrası yırtılma ve ayrılmayı önlemek için farelerin sıkıca birleştirildiğinden emin olmak önemlidir.Bu nedenle, her dört ila beş ayda bir, derinin sıkıca birleştiğini teyit ediyoruz. Ventral deri eklemesi tamamlandıktan sonra, fareleri yüzüstü pozisyona getirin ve dikişe dorsal tarafta çift cerrahi düğümle son vererek devam edin. Dikişin sürekliliğini doğrulayın ve herhangi bir açıklık bulunmadığından emin olun.Dehidrasyonu önlemek için her bir hayvana cilt altına yarım mililitre 0.9% Sodyum klorür uygulayarak cerrahi işlemi tamamlayın. Hayvanlar kendilerine gelene kadar ısıtmalı ped üzerinde tutun. Parabiyotik yaşama alışma sürecinde yemeğe ulaşma zorluğunu en aza indirmek için her parabiyotik çifti, nemlendirilmiş yem peletlerinin bulunduğu temiz bir kafeste barındırın.Yem peletlerini kafes tabanına yerleştirin. Ayrıca, ameliyat sonrası ilk 48 saat boyunca yuvalama malzemesi sağladığınızdan emin olun. İki hafta boyunca her 24 saatte bir karprofen ve her 12 saatte bir buprenorfin uygulayın.Hayvanları titreme, letarji, kuyruk kemirme, kamburluk, bakım eksikliği ve benzeri ağrı ve stres belirtileri açısından izleyin. Ameliyat sonrası ilk 10 gün boyunca bakteriyel enfeksiyonları önlemek için fareleri, içme suyu şişelerine eklenen sülfametoksazol ve trimetoprim oral süspansiyonu ile tedavi edin. Kan alımı, cerrahi işlemden 10 ila 14 gün sonra gerçekleştirilecektir.İki hafta sonra, bunun gerçekleştiğini doğrulamak için kuyruk venlerinden kan alın. Kanı analiz etmek için akış sitometrisi kullanın. İki ila üç damlayı 500 µL 10 mM EDTA içinde seyreltin.Ardından seyreltiyi, PBS içinde %2 Dekstrin'in 500 µL'si ile iyice karıştırın. Kan karışımını 37 °C'de 30 dakika boyunca inkübe edin ve ardından süpernatantı toplamak için santrifüjleyin. Uygulama için.Probiyotik çiftler dokuz ay boyunca birlikte tutulabilir ve herhangi bir komplikasyon olmaksızın ayrılabilir. Ters prosedürü steril bir cerrahi yüzeyde uygulayın. Daha önce açıklanan anestezi protokolünün aynısını kullanın ve ilk sütürün etrafındaki bölgedeki tüyleri temizleyin.Tüyleri temizlenmiş cilt aseptik olarak hazırlandıktan sonra, analjezikleri uygulayın ve cerrahi alanı keskin bir makas kullanarak örtüyle kapatın. Eklemleri ayırmak için yan dikiş boyunca boylamsal bir insizyonla fareleri ayırın ve her farede onları birbirine bağlayan dikiş düğümlerini kesin. Kenarları düzeltmek için insizyon boyunca cildi kırpın.Ardından,dehidrasyonu önlemek için emilebilir sürekli 5-0 kaplı Vicryl sütür ile deriyi yeniden dikin, deri altına 0,5 mL %0,9 sodyum klorür uygulayın ve hayvanlar anesteziden çıkana kadar ısıtmalı bir ped üzerinde tutun. Daha önce açıklanan analjezik ve antibakteriyel postoperatif tedavilerin aynısını uygulayın; iki organizmanın parabiyozunda beklenen sonuç, her bir hayvan dolaşım sisteminin ortak bir kan dolaşımına eşit katkı sağlamasıdır. Parabiyozdur wild type ve GFP pozitif farelerden gelen kanın dengelenmesi, önceki çalışmalarla tutarlı olarak akış sitometrik analizle incelenmiştir.Yaban tipi fareden alınan kan, yaklaşık yarısının GFP pozitif ve yarısının yaban tipi kan hücreleri olmasıyla belirtilen kimerizmin varlığını ortaya koymuştur. Bu teknik, yeterli deneyim kazanıldıktan sonra, doğru şekilde uygulandığında 45 ila 60 dakika içinde tamamlanabilir.

Research

JoVE Journal

Medicine

Tıp

Bu protokol, erkeklerin testislerde sperm açılan ve daha sonra dişi farelerin döllemeden yöntemleri göstermektedir. Bu prosedür de transgenik çalışma olarak gelişim çalışmalarında hassas zaman gerekli olduğunda yararlıdır.

Farelerin Hasat Sperm ve Suni Tohumlama

Bu protokol, farklı genetik geçmişlere sahip parabiyotik zebra balığı embriyolarının nasıl oluşturulacağına dair adım adım talimat sağlar. Zebra balığı embriyosunun benzersiz görüntüleme yetenekleriyle birleştirildiğinde, bu yöntem, ilgilenilen aday genler için hücre özerk ve hücre özerk olmayan işlevleri araştırmak için benzersiz derecede güçlü bir araç sağlar.

Blastulae Gelişmekte Cerrahi Fusion tarafından Parabiyotik balığı Embriyolar Üretimi

Meni الرسالة sperm seminal jel--dan özgür olmak için gereklidir. Bu çalışma yordamları kadın üreme sistemi sonrası cinsel birleşme sperm toplama ve meni الرسالة Süre ölçümünü sağlar.

Meni kadın üreme sistemi ve meni الرسالة farelerde ölçümü sonrası çiftleşme koleksiyonu

Bu protokol mekanizmaları ameliyat sonrası neuroinflammation ve davranış değişiklikleri ve doku rejenerasyonu yaşlanma sırasında çalışmaya parabiosis, birlikte çalışma için kullanılan ortopedik cerrahi bir fare modeli açıklar.

Ameliyat sonrası bilişsel işlev bozukluğu ve doku rejenerasyonu çalışmaya ortopedik cerrahi bir fare modeli

Burada, lentiviral bir vektör perivitelline alanda bir döllenmiş yumurta, basit bir iğne ile transgene entegrasyon ve kurucusu transgenik fareler ile yüksek etkinlik üretimini teşvik için bir protokol mevcut.

Lentiviral aracılı transgenik fareler üretimi: doğrudan eğitim kurucuları basit ve son derece etkili bir yöntem

Burada, en az hasara neden olan ve parabiontlar için ölümcül olmayan bir kaudal ven enjeksiyonu ile iki parabiontun ortak kan dolaşımının başarılı bir şekilde kurulmasını saptamak için yeni bir yöntem açıklıyoruz.

Ködal Ven Glukoz Enjeksiyonu ile Parabiyotik Farelerde Ortak Kan Akımının Saptanmasına Neden

Bu makale, yarı klonlanmış embriyoların yapımında sperm yerine partenogenetik haploid embriyonik kök hücrelerin kullanımını göstermeyi amaçlamaktadır.

Sperm Yerine Fare Partenogenetik Haploid Embriyonik Kök Hücrelerin Uygulanması

Sunulan servikal manipülasyon yöntemi, vazektomize erkeklerle üreme dişilerine gerek kalmadan farelerde yalancı gebeliği indükleyebilir. Yalancı gebelik indüksiyonu, her ikisi de sunulan ameliyatsız embriyo transferi ve ameliyatsız suni tohumlamanın başarısı için gereklidir.

Cerrahi olmayan embriyo transferi veya suni tohumlamadan önce vazektomize erkeklere ihtiyaç duymadan dişi farelerde yalancı gebeliğin indüklenmesi

Burada kültürde spesifik hipotalamik hücre alt tiplerini büyütmek için bir protokol sunuyoruz. Hücreler, uygun/benzersiz membran belirteçlerine göre seçilebilir ve immünofloresan, elektrofizyolojik ve biyokimyasal testler dahil olmak üzere birçok uygulamada kullanılabilir.

Hormonal, Metabolik ve Elektriksel Düzenleme Çalışmaları için Hedeflenen Hipotalamik Nöronların İzolasyonu

Bu makale, tek hücrelerin ve çekirdeklerin dizilimi için gastrulasyon yapan fare embriyolarının yüksek kaliteli tek hücreli ve çekirdek süspansiyonları için bir boru hattı oluşturur.

Mutant Bütün Fare Embriyolarının Tek Hücreli RNA Dizilimi: Epiblasttan Gastrulasyonun Sonuna Kadar

Keşfedin farelerde parabiyoz cerrahisiyle paylaşılan dolaşım sistemini inceleme yöntemini. Bu teknik, uzun süreli kan kimerizmi gözlemleri için immünosupresyon gerektirmeden uygulanabilir.

Farelerde parabiyoz: Detaylı Bir Protokol

Daha fazla video keşfet