Name: Küçük Moleküler CLT1 Peptide Hedefli Kontrast Agent ile Prostat Kanseri MR Moleküler Görüntüleme (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2013-09-03T12:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 54 s
Description: Keşfedin, farelerde CLT1 peptid hedefli MRI kontrast ajanı kullanarak prostat kanserinin moleküler görüntülemesini. Bu yöntem, tümör stromasındaki pıhtılaşmış plazma proteinlerini hedefleyerek spesifik tümör tespiti sağlar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Bu çalışma, Amerikan Kalp Derneği GRA Bahar 09 Doktora Sonrası Bursu (09POST2250268) ve NIH R01 CA097465 tarafından kısmen desteklenmektedir. Biz çok tümör implantasyonu üzerine ona yardım için Dr Wen Li ve Dr Vikas Gulani MRG protokolü test ve kurulum için, ve Bayan Yvonne Parker teşekkür ederiz.

Protokol Bir önceki çalışmada 11 uyarlanmıştır. 1.. CLT1 Peptide Gd-DOTA Konjügasyon <ol><li> Standart katı-faz peptid sentezi kullanılarak, bir 2-klorotritil klorür reçinesi (1.0 mmol) üzerine, Fmoc-korumalı amino asitlerden CLT1 peptid (CGLIIQKNEC) sentezler. </li><li> Nihai amino asit ilave edildikten sonra, 2 saat boyunca 0 ° C&#39;de DMF içerisinde talyum (III) trifloroasetat (1.09 g, 2.0 mmol, 2 eşdeğer) ile reçine lineer peptid (20 mi) dönüşür. </li><li> Daha sonra, PEG konjugatı ve Fmoc-NH-PEG-COOH (3.0 mmol), Fmoc-Lys (Fmoc)-OH (3.0 mmol) ile arka arkaya reaksiyona sokulması ile reçine üzerinde CLT1 peptid (1.0 mmol) of N-terminaline lisin sekans, ve Fmoc-Lys (Fmoc)-OH, (6 mmol) ihtiva eden bir ikinci parti. </li><li> Piperidin ile Fmoc çıkarın. DOTA-tris (t-Bu) (4.58 g, her bir amino grubuna 8.0 mmol, 2 eşdeğer), 2 saat için reçine üzerindeki lizin dendrimer üzerindeki dört serbest aminler ile reaksiyona ekle. </li><li> Son olarak, ayrılması ve ürünün korumasını kaldırmaktrifloroasetik asit, su, ve oda sıcaklığında 8 saat boyunca triisobutylsilane (TBS) (20 mi, 95/2.5/2.5) bir kokteyli ile muamele etmek suretiyle reçineden. Trifluoroasetik asit (TFA) ile yıkanarak, ardından süzme ile reçine çıkarın. Birleştirilen süzüntüler soğuk etil eter (200 mi), damla damla ekleme ile santrifüj ve etil eter ile 4x yıkayın. Renksiz bir katı (1.99 g,% 61 verim) vermek üzere vakum altında kurutun. </li><li> 10 dakika boyunca Çözücü A içinde 20 dakika ve% 40-90 çözücü B için% 0-40 çözücü B bir gradyan çözücü içinde asetonitril (% 0.1 TFA) (% 0.1 TFA sulu solüsyon) kullanılarak hazırlayıcı HPLC ile ham ürün saflaştırarak . </li><li> CLT1-dL-(DOTA) DI su içinde 4 (250 mg, 0.077 mmol) (15 mi) çözülür ve 1 M NaOH ile pH&#39;ı 6&#39;ya ayarlayın. Gd (OAc) 3 .4 H 2 O ekleyin (472 mg, 0.462 mmol, DOTA monoamid 1.5 eşdeğer) çözeltisine, kısımlar halinde, 1 M NaOH ile pH 6 olarak muhafaza edilirken. 48 saat için oda sıcaklığında reaksiyon çözeltisi ilave edin. </li><li> Kompleks e kalıntı Gd (III)thylenediaminetetraacetic asit (EDTA) (90 mg, 0.31 mmol) eklendi ve nihai ürüne CLT1-dL-(Gd-DOTA) 4 (169 mg,% 57) vermek üzere bir ebat eksklüzyon kolonu ile ham ürünü temizler. </li></ol> 2. Kontrast Ajanları karakterizasyonu <ol><li> Indüktif eşleşmiş plazma optik emisyon spektroskopisi ile Gd (III) içeriği ölçün. </li><li> Bir matris olarak 2,5-dihidroksibenzoik asit (2,5-DHB) ile doğrusal modda matris destekli lazer desorpsiyon / iyonizasyon time-of-flight (MALDI-TOF) kütle spektrumları elde edin. </li><li> Bir relaxometer ile CLT1-dL-(Gd-DOTA) 4&#39;ün kontrast ajanları ve nontargeted kontrol maddesi 60 MHz (1.5 T) farklı konsantrasyonları ile sCLT1-dL-(Gd-DOTA) 4 sulu çözeltinin gevşeme süreleri ölçmek 37 ° C&#39;de T 2 ölçmek için 500 yankıları ile T 1 ve Carr-Purcell-Meiboom-Gill dizisi ölçmek için bir inversiyon-kurtarma darbe dizisi kullanın. T 1 ve T inci 2 relaksivitelerine hesaplayınGd konsantrasyonlara karşılık 1 / T 1 ve 1 / T 2 araziler yamaçlarından e ajanlar. </li></ol> 3. Ortotopik PC3 prostat tümörü ile Hayvan Hücre Kültürü Modeli Geliştirme <ol><li> / Ul PBS 2.5 x 10 4 hücre yoğunluğunda,% 5 fetal sığır serumu ve penisilin / streptomisin / fungizon, tripsinizasyon ile hasat ve tekrar süspansiyon ile desteklenmiş RPMI ortamı içinde, yeşil floresan proteini (GFP) yapısal ifadesi ile kültür PC3 prostat kanseri hücreleri. </li><li> CWRU Kurumsal Hayvan Bakım ve Kullanım Kurulu tarafından onaylanmış bir hayvan protokole göre Atimik Hayvan Core Tesisleri&#39;nde, Case Western Reserve Üniversitesi (CWRU) at (4-5 haftalık) erkek NIH atımık çıplak fareler koruyun. </li><li> Cerrahi yüzeyler% 2 klorheksidin çözeltisi püskürtüldü ve daha sonra emici perdeler ile örtülmüştür. Steril cerrahi eldiven işlem sırasında giyilirdi. Hayvan Ameliyattan önce, ip anesthetiz için Avertin (250 mg / kg) enjektefareler e. Seçenek olarak ise, ketamin / ksilazin / asepromazin 50/5/1 mg / kg &#39;lik bir konsantrasyonda kullanılabilir. Oftalmik merhem anestezi sırasında yeterli nemi korumak için fareye uygulanmıştır. </li><li> Steril bir bisturi bıçağını kullanarak, yaklaşık 1 cm&#39;lik bir uzunluğa da alt orta hat boyunca deri ve periton içinden küçük bir insizyon keserek ameliyat başlayın. Bir steril cerrahi örtü hayatta kalma ameliyatları sırasında insizyon etrafında kaplıydı. </li><li> Yavaşça exteriorize ve prostat maruz prostat dorsal lobları stabilize. Bir 30 gauge iğne ile prostatın içine PBS (20 ul) in-GFP PC3 hücrelerinin süspansiyon enjekte edilir. Nihayet 12 AutoClip yara ile kesi kapatın. </li><li> Post-prosedür izlenmesi için, 1 hafta boyunca günde iki kez hayvanları izlemek. Hastalığın belirtileri yeme eksikliği, üretra çevresindeki koyu idrar toplama ve zımba içinde mesane enfeksiyonu veya tıkanıklığına işaret olabilir kararsız yürüyüş içerir. </li><li> 10 gün sonra, t kaldırmako zımba zımba sökücü kullanıyor. Tümör büyüklüğünü ve bu kilo kaybı, davranış sapmaları, ve motor kusurlar gibi ağrı herhangi bir kanıt değerlendirmek için günlük hayvan izleyin. Tümör büyüme sırasında ağrı etik izin verilen sınırı veya delil aşan bir tümör büyüklüğünü gösterdi hayvanları Euthanize. </li></ol> 4. Floresan Görüntüleme ve Histoloji ile peptidlerin tümör bağlanma özelliğinin teyidi <ol><li> Tümör hücrelerinin aşılanmasından sonra tümör büyümesinin yaklaşık 4 hafta görüntüleme ile başlamadan önce izin verir. Önceki peptid sondaların enjeksiyon, tümör varlığını doğrulamak için bir floresan kamera üzerinde canlı farelerde ile GFP floresan görüntü kazanır. </li><li> IV Texas Red 10 nmol / fare &#39;lik bir dozda taşıyan farelerin tümör etiketli peptidleri enjekte edilir. </li><li> Servikal dislokasyon ile daha sonra fareler 2 saat Kurban, tümör ve önemli organları toplamak ve bir floresan kamera üzerinde hemen görüntü. GFP (uyarma için yeşil ışık filtreleri kullanın: 444-490 nm; emisyon: 515 nm uzun-pass filtre, satın alma ayarları: 500-720 10 nm adım) ve Texas Red (uyarma için kırmızı ışık filtreleri: 576-621 nm; emisyon: 635 nm uzun geçiş filtresi; edinimi ayarları: 630-800 10 nm adım). GFP ve Texas Red için 150 msn 10 msn maruz kalma süresi. </li><li> Hemen bütün doku floresan ölçümünden sonra, tümör dokuları toplamak formalin ile düzeltmek ve cryosection 5 mikron dilimler halinde. </li><li> PBS ile yıkandıktan sonra, hemen konfokal lazer tarama mikroskobu 4 içeren bir montaj orta 1 damla &#39;,6-diamidino-2-fenilindol (DAPI), görüntü ile monte edilir. </li></ol> 5. Manyetik Rezonans Görüntüleme (MRI) <ol><li> Yaklaşık 4 hafta, tümör hücresi aşılamasından sonra tümörler çapı 0,3-0,6 cm kadar büyümeye olanak sağlar. MRG çalışma için bir hacim radyo frekansı (RF) bobini ile 7 T MR tarayıcı kullanın. </li><li> Izofluran indüksiyon odası içinde bir% 2 izofluran-oksijen karışımı ile fare anestezisi. Ophthalmic merhem anestezi sırasında yeterli nemi korumak için fare uygulanmıştır. </li><li> Heparinize tuzlu su ile dolu bir 1.0 m uzunluğunda bir boru içine bir 30 gog iğne takın. Fare kuyruk damarı içinde kendi kendine yapılan kateter yerleştirin. </li><li> Mıknatıs içine fare koyun ve bir burun konisi üzerinden% 1.5 izofluran-oksijen inhalasyon anestezi altında tutmak. </li><li> Hızı ve solunum derinliği izlemek için karın üzerinde bir izleme sistemine bağlı bir solunum sensörü yerleştirin. Bir geri besleme kontrol sistemi vasıtasıyla mıknatıs içine sıcak havanın üflenmesi ile 37 ° C &#39;de vücut ısısını korumak. </li><li> Tümör konumunu (TR / TE = 200/3.7 msn, FOV = tanımlamak için bir lokalizasyon dizisi kullanarak sagital kesit görüntüleri ile Başlayan 3.0 cm, kesit kalınlığı = 2.2 mm, dilim sayısı = 16, ortalama = 2, çevirme açısı = 45 °, matriks = 128 x 128). </li><li> CE-MR (TR / TE = 151.2/1.9 msn, FOV = 3.0 cm x 3.0 cm, 2D eksenel görüntüler elde etmek için bir 2D T1-ağırlıklı gradient yağ baskılama sırasını kullanabilirsiniz sbitleri kalınlığı = 1.2 mm, dilim sayısı = 12, ortalama = 1 flip açısı = 80 °, matriks = 128 x 128). </li><li> Enjeksiyon öncesi taban çizgisi MR Görüntü alındıktan sonra, 200 ul serum fizyolojik ile yıkanarak 0.03 mmol Gd / kg &#39;lik bir dozda hedef madde veya kontrol maddesi enjekte başlar. </li><li> Kadar 30 dakika boyunca farklı zaman noktalarında CE-MRI görüntüleri elde etmek için devam edin. </li></ol> 6. Görüntü İşleme ve Analizi <ol><li> Görüntü analizi için görüntüleme yazılımı kullanın. </li><li> Iki boyutlu görüntüleme düzlemde bütün tümör üzerinde faiz (ROI) ve bölgeleri ve böbrekler çizin ve ortalama sinyal yoğunluğunu ölçmek. </li><li> (S 0 - ΔSNR = (S t / σ t): CE-MRG verileri ölçmek için, aşağıdaki denklem kullanılarak kontrast öncesi SNR aşırı kontrast sonrası SNR&#39;de artışın hesaplanmasında ile tümör veya böbrek kontrast (ΔSNR) ölçmek / σ 0), S 0 ve S t varolmadığı iddiası sinyalini göstermek neredeya da ya da böbrek önce ve kontrastı ve σ 0 ve σ t sonra kontrast önce ve sonra arka plan havadan ölçülen gürültü standart sapmadır. </li><li> P &lt;0.05 istatistiksel anlamlılık varsayarak, öğrencinin iki yönlü t-testi kullanılarak p değerlerini hesaplayın. </li></ol>

<ol><li>Brown, M. A., Semelka, R. C. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aBrown%2C+MA+%22MRI+Basic+Principles+and+Applications%22">MRI Basic Principles and Applications</a>. , 3rd, John Wiley & Sons, Inc. Hoboken, New Jersey. (2003).</li>
<li>Artemov, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+magnetic+resonance+imaging+with+targeted+contrast+agents%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Cell.+Biochem%22%5BJournal%5D)">Molecular magnetic resonance imaging with targeted contrast agents.</a> J. Cell. Biochem. 90, 518-524 (2003).</li>
<li>Kalber, T. L., Kamaly, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+low+molecular+weight+folate+receptor+targeted+contrast+agent+for+magnetic+resonance+tumor+imaging%5BTitle%5D)+AND+%22Mol.+Imaging+Biol%22%5BJournal%5D)">A low molecular weight folate receptor targeted contrast agent for magnetic resonance tumor imaging.</a> Mol. Imaging Biol. 13, 653-662 (2011).</li>
<li>Schmieder, A. H., Winter, P. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+MR+imaging+of+melanoma+angiogenesis+with+alphanubeta3-targeted+paramagnetic+nanoparticles%5BTitle%5D)+AND+%22Magn.+Reson.+Med%22%5BJournal%5D)">Molecular MR imaging of melanoma angiogenesis with alphanubeta3-targeted paramagnetic nanoparticles.</a> Magn. Reson. Med. 53, 621-627 (2005).</li>
<li>Mulder, W. J., Strijkers, G. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((MR+molecular+imaging+and+fluorescence+microscopy+for+identification+of+activated+tumor+endothelium+using+a+bimodal+lipidic+nanoparticle%5BTitle%5D)+AND+%22FASEB+J%22%5BJournal%5D)">MR molecular imaging and fluorescence microscopy for identification of activated tumor endothelium using a bimodal lipidic nanoparticle.</a> FASEB J. 19, 2008-2010 (2005).</li>
<li>Wang, S. J., Brechbiel, M., Wiener, E. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characteristics+of+a+new+MRI+contrast+agent+prepared+from+polypropyleneimine+dendrimers%2C+generation+2%5BTitle%5D)+AND+%22Invest.+Radiol%22%5BJournal%5D)">Characteristics of a new MRI contrast agent prepared from polypropyleneimine dendrimers, generation 2.</a> Invest. Radiol. 38, 662-668 (2003).</li>
<li>Amirbekian, V., Aguinaldo, J. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Atherosclerosis+and+matrix+metalloproteinases%3A+experimental+molecular+MR+imaging+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Radiology%22%5BJournal%5D)">Atherosclerosis and matrix metalloproteinases: experimental molecular MR imaging in vivo.</a> Radiology. 251, 429-438 (2009).</li>
<li>Overoye-Chan, K., Koerner, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((EP-2104R%3A+a+fibrin-specific+gadolinium-Based+MRI+contrast+agent+for+detection+of+thrombus%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Am.+Chem.+Soc%22%5BJournal%5D)">EP-2104R: a fibrin-specific gadolinium-Based MRI contrast agent for detection of thrombus.</a> J. Am. Chem. Soc. 130, 6025-6039 (2008).</li>
<li>Pilch, J., Brown, D. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Peptides+selected+for+binding+to+clotted+plasma+accumulate+in+tumor+stroma+and+wounds%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci.+U.S.A%22%5BJournal%5D)">Peptides selected for binding to clotted plasma accumulate in tumor stroma and wounds.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 103, 2800-2804 (2006).</li>
<li>Rohrer, M., Bauer, H., Mintorovitch, J., Requardt, M., Weinmann, H. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+magnetic+properties+of+MRI+contrast+media+solutions+at+different+magnetic+field+strengths%5BTitle%5D)+AND+%22Invest.+Radiol%22%5BJournal%5D)">Comparison of magnetic properties of MRI contrast media solutions at different magnetic field strengths.</a> Invest. Radiol. 40, 715-724 (2005).</li>
<li>Wu, X., Burden-Gulley, S. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Synthesis+and+evaluation+of+a+peptide+targeted+small+molecular+Gd-DOTA+monoamide+conjugate+for+MR+molecular+imaging+of+prostate+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Bioconjugate+Chem%22%5BJournal%5D)">Synthesis and evaluation of a peptide targeted small molecular Gd-DOTA monoamide conjugate for MR molecular imaging of prostate cancer.</a> Bioconjugate Chem. 23, 1548-1556 (2012).</li>
<li>Burden-Gulley, S. M., Gates, T. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+molecular+diagnostic+of+glioblastomas%3A+detection+of+an+extracellular+fragment+of+protein+tyrosine+phosphatase+mu%5BTitle%5D)+AND+%22Neoplasia%22%5BJournal%5D)">A novel molecular diagnostic of glioblastomas: detection of an extracellular fragment of protein tyrosine phosphatase mu.</a> Neoplasia. 12, 305-316 (2010).</li>
<li>McBride, J. 	D., Birgit, H., Leatherbarrow, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Resin-coupled+cyclic+peptides+as+proteinase+inhibitors%5BTitle%5D)+AND+%22Protein+and+Peptide%22%5BJournal%5D)">Resin-coupled cyclic peptides as proteinase inhibitors.</a> Protein and Peptide. 3 (3), 193-198 (1996).</li>
<li>Cline, D. J., Thorpe, C., Schneider, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((General+method+for+facile+intramolecular+disulfide+formation+in+synthetic+peptides%5BTitle%5D)+AND+%22Anal.+Biochem%22%5BJournal%5D)">General method for facile intramolecular disulfide formation in synthetic peptides.</a> Anal. Biochem. 335 (1), 168-170 (2004).</li>
</ol>

Çıkar çatışması ilan etti.

Kritik Adımlar Uygun Biyomarker ve küçük peptid Hedefleme Seçimi Başarılı küçük boyutu ile bir hedef kontrast madde geliştirmek için, iki önemli noktaları dikkate alınması gerekir. İlk olarak, normal dokularda çok az varlığı ile hastalıklı dokuda bol miktarda mevcut olan, uygun moleküler belirteçler seçmek önemlidir. Bizim seçilmiş kanserle ilgili belirteçler, pıhtılaşmış plazma proteinleri, bu gereksinimi karşılar. Yeterli kontrast maddeler yeterli...

Kanseri ile ilgili moleküler hedeflerin etkili görüntüleme erken kanser teşhis ve tanıyı doğruluğunu artırmak için büyük önem taşıyor. Manyetik rezonans görüntüleme (MRG) yüksek uzaysal çözünürlük ve hiçbir iyonizasyon radyasyon 1 ile güçlü bir klinik görüntüleme yöntemidir. Ancak, hedeflenen kontrast ajan klinik MR kanser moleküler görüntüleme için kullanılabilir. Hedeflenen MRG kontrast maddelerin Yenilikçi tasarımı ve gelişimi büyük ölçüde MR kanser moleküler görüntüleme uygulamasını ilerlemek olacaktır. Önemli çabalar, kanser hücrelerinin yüzeyi üzerinde ifade edilen biyolojik MR görüntüleme için hedeflenmiş kontrast maddelerin geliştirilmesi için girişimlerde bulunulmuştur. Nedeniyle MRG ve bu biyolojik düşük konsantrasyonda nispeten düşük duyarlılığı, küçük moleküler hedefli kontrast maddeleri 2,3 kullanarak etkili MR moleküler görüntüleme için yeterli kontrast oluşturmak için bir meydan okumadır. Yeterli donanım elde edilmesi amacıyla, çeşitli iletim sistemleri sucparamanyetik Gd (III) şelatları yüksek bir yük ile, lipozomlar, nano partiküller ve polimer birleşiklerinin olarak h, hedef merkezler 4,5 kontrast maddelerin lokal konsantrasyonunu artırmak için hazırlanmıştır. Bu iletim sistemleri, hayvan modellerinde önemli tümör geliştirme elde etmek mümkün olmasına rağmen, bunların büyük boyutlarda ciddi bir güvenlik kaygıları 6 neden olabilir toksik Gd (III) iyonları, uzun süreli birikimi ile sonuçlanan, vücuttan yavaş ve eksik ortadan kaldırılması ile sonuçlanmıştır. Son zamanlarda, bazı çalışmalar, moleküler görüntüleme için MR sınırlamaları lezyonlarında yüksek lokal bir ifade ile, uygun belirteçler molekül seçilerek ve kolayca 7,8 atılır olabilir küçük moleküler maddeler kullanılarak aşılabilir göstermiştir. Bu ajanların en önemli özelliği normal dokularda çok az varlığı ile hastalıklı dokuda bol miktarda moleküler işaretçileri hedef olmasıdır. Kontrast maddelerin yüksek bir konsantrasyonu ile sonuçlanır yeterliyken, bu hedeflere bağlanabiliretkili MR moleküler görüntüleme için cient kontrast. Boyutları renal filtrasyon eşik değerinden daha küçük olduğu için, bağlanmamış kontrast maddeleri hali hazırda düşük arka plan gürültüsü ile vücuttan atılır. Biz bol tümör stroma var evrensel kanserle ilgili biyogöstergesini, pıhtılaşmış plazma proteinleri, seçilmiş ve normal dokularda 9 nadiren mevcuttur var. Biz güçlü PC3 prostat tümörü modeli 10 bağlanabilen spesifik ve dört Gd-DOTA monoamid çelatlar gösteren küçük bir hedef peptit CGLIIQKNEC (CLT1), ihtiva eden bir hedef kontrast ajanı sentezlendi. Burada, farelerde tümörleri tespit etmek için MR Kanser, moleküler görüntüleme için bir yöntem sağlar.

<table><tbody><tr><td colspan="4">REAGENTS</td></tr><tr><td>Fmoc korumalı amino asitler</td><td>EMD Chemicals Inc</td><td></td><td></td></tr><tr><td>DOTA-tris ( t-Bu)</td> <td>TCI America</td><td></td><td></td></tr><tr><td>PyBOP, HOBt, HBTU</td><td>Nova Biochem</td><td></td><td></td></tr><tr><td>DIPEA, Talyum (III) trifloroasetat, TIS</td><td>Sigma-Aldrich Corp.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Texas Red, süksinimidil ester, tek izomer</td><td>Invitrogen</td><td>T20175</td><td></td></tr><tr><td colspan="4">EQUIPMENTS</strong</td></tr><tr><td>>Agilent 1100 HPLC sistemi</td><td>Agilent</td><td></td><td></td></tr><tr><td>ZORBAX 300SB-C18 PrepHT sütunu</td><td>Agilent</td><td></td><td></td></tr><tr><td>ICP-&#8211; S Optima 3100XL</td><td>Perkin-Elmer</td><td></td><td></td></tr><tr><td>MALDI-TOF kütle spektrometresi</td><td>Bruker</td><td>AutoflexTM Speed</td><td></td></tr><tr><td>Maestro FLEX In Vivo Görüntüleme Sistemi</td><td>Cambridge Research Instrumentation, Inc.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Biospec 7T MRI tarayıcı</td><td>Bruker</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

küçük moleküler clt1 peptide hedefli kontrast agent ile prostat kanseri mr moleküler görüntüleme

MR Molecular Imaging of Prostate Cancer with a Small Molecular CLT1 Peptide Targeted Contrast Agent

Tümör hücre dışı matris Kanser, moleküler görüntüleme için biyolojik olarak kullanılabilir kanseri ile ilgili proteinlerin bol miktarda vardır. Bu çalışmada, tümör stromasında pıhtılaşmış plazma proteinlerine özel bir hedef MRI kontrast madde olarak Gd-DOTA monoamid kompleksi hedefleyen küçük bir molekül peptit ile etkili MR kanser moleküler görüntüleme gösterdi. Biz bir fare orthotopic PC-3 prostat kanseri modelinde MRG ile prostat tümör non-invaziv tespiti için ajanın etkinliğini değerlendirmek deney gerçekleştirdi. Hedeflenen kontrast maddesi Gd 0.03 mmol / kg &#39;lik düşük bir dozda anlamlı tümör kontrast üretmek için etkilidir. MRI kontrast ajanı hedeflenen peptit prostat tümörünün MR moleküler görüntüleme için umut vericidir.

Şekil 1, bu hedef kontrast madde CLT1-dL-(Gd-DOTA) 4 ve deney genel düzeni sentezini tasvir etmektedir. Klinik Gd-DOTA (Tablo 1) &#39;den CLT1-dL-(Gd-DOTA) Şekil 4, çok daha yüksek relaksivitesi. 1.5 T de, PBS içinde CLT1-dL-(Gd-DOTA) 4 (pH 7.4) gadolinyum başına T 1 relaksivitesi Gd-DOTA 10 daha yaklaşık 3 kat daha fazladır. Spesifik olmayan (sCLT1-TR) (Şekil 2) bağlama çok az bir tümör göstermektedir peptidi karıştırılmış ise Maes...

Fare prostat kanseri modelinde tümör stroma içinde pıhtılaşmış plazma proteinlerine özel bir MRT-kontrast maddesi hedefleyen küçük peptid ile MR kanser moleküler görüntüleme göstermek için.

Küçük Moleküler CLT1 Peptide Hedefli Kontrast Agent ile Prostat Kanseri MR Moleküler Görüntüleme

Tumor extracellular  matrix has abundance of cancer related proteins that can be used as biomarkers  for cancer molecular imaging. In this work,  we ...

Bu prosedürün genel amacı, manyetik rezonans veya MR ile güvenli ve etkili bir peptid kontrast maddesi kullanarak farelerde prostat kanserinin moleküler görüntülemesini gerçekleştirmektir. Öncelikle, prostat tümörü fare modelinde ortotopik prostat tümörlerinin başarılı gelişimi ve uygun boyutu doğrulanır. Ardından, peptidinin tümöre bağlanma özgüllüğü, fare ortotopik prostat kanseri modelinde floresan görüntüleme ve histoloji ile onaylanır.Ardından, ön enjeksiyon bazal MR görüntüleme işleminin ardından hedeflenmiş veya kontrol ajanı enjekte edilir. Son olarak, 30 dakikaya kadar farklı zaman noktalarında kontrast takviyeli MR görüntüler alınır. Nihayetinde, CLT one peptid hedeflenmiş RI kontrast ajanının, MR moleküler görüntüleme teknikleri aracılığıyla prostat tümörlerinin spesifik tespiti için etkili olabileceğini gösteren sonuçlar elde edilebilir.Hedeflenmiş MI kontrast maddeleriyle yapılan moleküler MRI'ın, MRI ve klinik kontrast maddeleriyle yapılan PET MRI gibi mevcut teknolojilere göre temel avantajı, bu teknolojinin tek bir görüntüleme modalitesi olarak prostat tümörlerinin yüksek çözünürlüklü, etkili ve geliştirilmiş görüntülerini sağlayabilmesidir. Bunu burada göstereceğiz. Prostat tümörünün etkili moleküler MRI görüntülemesi, tümör hücre dışı matrisinde bol bulunan biyobelirteçlerin seçilmesi ve küçük moleküllü hedeflenmiş MI kontrast maddelerinin kullanılmasıyla gerçekleştirilebilir. Tümörlerin yüksek kaliteli MRR görüntülerini elde etmek için hayvanların tutulması, kuyruk kanülasyonu ve MRI konularında iyi becerilere sahip olmak da kritiktir. Standart katı faz peptit sentezi kullanarak, burada gösterildiği gibi GD DOTA monoamid komplekslerini sentezleyin ve ardından karakterize edin; metin protokolüne uygun olarak PC 3G FP prostat tümörü hayvan modeli oluşturulduktan sonra, fareleri bir indüksiyon odasında oksijen içinde %2 izofloran ile anestezi edin ve sedasyonu doğrulamak için kuyruk sıkıştırma testi uygulayın.Ardından, farelerde tümörlerin varlığını doğrulamak için bir floresan görüntüleme cihazı kullanın. Tümör taşıyan farelere, fare başına 10 mol Texas red işaretli peptit enjekte edin. İki saat sonra, fareleri servikal dislokasyon yoluyla sakrifiye ettikten sonra tümörü ve ana organları toplayın ve vakit kaybetmeden bir floresan görüntüleme cihazı ile görüntüleyin.Ardından, tümör dokuları formalin ile tespit edilip beş mikrometrelik dilimler halinde kriyoseksiyona alındıktan sonra, dokuyu monte etmek için DPI içeren montaj ortamından bir damla kullanın. Daha sonra, konfokal lazer tarama mikroskopi yöntemini kullanarak lamların görüntülemesini yapın. İnokülasyondan yaklaşık dört hafta sonra, tümörlerin çapı 0,3 ile 0,6 santimetre arasında büyümüş olmalıdır. Fareyi bir indüksiyon kabininde oksijen içinde %2 izoflorin ile anesteziye aldıktan sonra, farenin gözlerinde nemi korumak için oftalmik pomad uygulayın ve sedasyonun gerçekleştiğini doğrulamak için kuyruk sıkıştırma testi yapın.Ardından, heparinli salinle doldurulmuş bir metre uzunluğundaki bir tüpün içine 30 gauge bir iğne yerleştirin. Daha sonra, hacimsel radyo frekans bobinine sahip bir 70 MRI tarayıcı kullanarak, kendi yapımınız olan kateteri farenin kuyruk venine yerleştirin. Fareyi mıknatısa yerleştirin, ardından bir burun konisi takın ve solunum hızını ve derinliğini izlemek için oksijen içinde %1,5 izofloran uygulayın.Bir izleme sistemine bağlı bir solunum sensörünü hayvanın karnına yerleştirin. Mıknatısa sabit sıcak hava beslemesi yaparak hayvanın vücut sıcaklığını 37 °C'de tutun. Şimdi, tümör konumunu belirlemek için hayvanı MRI cihazına yerleştirin.Yer belirleme sekansı kullanarak sagital kesit görüntüleri ile başlayın. Ardından, kontrastlı veya CE MRI için 2D aksiyel görüntüler elde etmek amacıyla iki DT bir ağırlıklı gradyan yağ baskılama sekansı kullanın. Tümörün bazal görüntülerini elde ettikten sonra, kilogram başına 0.03 millimol gadolinium dozunda hedefli ajanı veya kontrol ajanını enjekte etmeye başlayın.Tüm tümörü tamamen kapsamak ve görüntülerini almak için 30 dakikaya kadar farklı zaman noktalarında CE MRI görüntüleri almaya devam edin. Görüntüleme tamamlandıktan sonra 12 kesit toplayın, hayvanı karbondioksit ile ötanize edin ve görüntüleri burada gösterildiği gibi metin protokolüne göre analiz edip işleyin; Maestro görüntüleme, Texas red işaretli CLT one'ın GFP PC three tümörüne güçlü ve spesifik bağlandığını, normal organ ve dokulara ise çok az bağlandığını doğrular. Buna karşılık, spesifik olmayan karıştırılmış (scrambled) peptit çok az tümör bağlanması gösterir.Bu şekil, tipik enjeksiyon öncesi ve sonrası kontrastla güçlendirilmiş T1 ağırlıklı görüntüleri göstermektedir. Hedeflenmiş ajan, hedeflenmemiş karışık ajanlara kıyasla tümör dokusunda daha güçlü ve daha uzun süreli bir güçlenme sağlamaktadır. İdrar torbasındaki kontrast güçlenmesinin zamanla kademeli olarak artması, kontrast ajanların renal filtrasyon yoluyla atıldığını göstermektedir.Kantitatif sinyal analizi, hedefli ajanın tümör dokusunda 30 dakikaya kadar kontrol ajanına göre daha belirgin sinyal artışı sağladığını ortaya koymaktadır. Biyodağılım çalışması, ajanın enjeksiyondan iki gün sonra ana organlarda ve dokularda minimum gadolinyum tutulumuna sahip olduğunu göstermektedir. Ön çalışmamız, CLT bir hedefli MRI kontrast ajanlarının nispeten düşük bir dozla tümöre spesifik olarak iletilebileceğini göstermektedir.Evet, burada tümör mikroçevresinde bulunan uygun ve bol miktarda biomarker seçilerek ve küçük moleküllü hedefli bir MRI kontrast ajanı kullanılarak prostat kanserinin etkili bir şekilde moleküler MRI'ının gerçekleştirilebileceğini göstermiş olduk. Bu videoyu izledikten sonra, hedefli bir MRI kontrast ajanı kullanarak hayvan modellerindeki küçük malign tümörler için etkili bir moleküler MRI tekniğinin nasıl geliştirileceği konusunda iyi bir anlayışa sahip olmalısınız.

mr-molecular-imaging-prostate-cancer-with-small-molecular-clt1

Research

JoVE Journal

Medicine

Tıp

Diffüz floresans tomografi preklinik için yüksek boyunca nispeten düşük maliyetli ve potansiyel bir yaklaşım...

Kanser BİYOMARKÖRLERİN Yerelleştirme Küçük Hayvanlarda Bilgisayarlı Tomografi eşliğinde Zaman alanı Diffüz Floresans Tomografi

Bu video, bir fare modelinde bir tümörün in vivo görüntülenmesi için bir radyoimmünokonjugatı içeren bir tekniği göstermektedir. Radyoimmünokonjugatın enjeksiyonu üzerine, konjugatın antikorları kanser hücreleri üzerindeki spesifik bir membran antijenine bağlanır. Konjugatın radyoizleyicisi, tümörün bir görüntüsünü oluşturmak için bir pozitron emisyon tomografisi (PET) tarayıcısı tarafından tespit edilen enerji üretmek için komşu elektronlarla etkileşime giren pozitronlar yayar.

Radyoaktif İşaretli Antikorlar Kullanarak Bir Murin Modelindeki Tümörleri Tespit Etmek için İn Vivo PET Görüntüleme Tekniği

Biyoortogonal ters elektron talebi Diels-Alder sikloilavesi, kanser için etkili ve modüler önceden hedeflenmiş bir PET görüntüleme stratejisi oluşturmak için kullanılmıştır. Bu protokolde, bu metodolojinin adımları, kolorektal kanser hedefli antikor huA33 ve 64Cu etiketli bir radyoligand kullanan bir model sistem bağlamında açıklanmaktadır.

Pretargeted PET Görüntüleme Bioorthogonal Ters Elektron Talep Diels-Alder Katılma Harnessing

İmmünohistokimya, dokulardaki protein lokalizasyonunu ve ekspresyonunu değerlendirmek için güçlü bir laboratuvar tekniğidir. Kantitasyon için mevcut yarı otomatik yöntemler öznelliği ortaya çıkarır ve çoğu zaman tekrarlanamaz sonuçlar yaratır. Burada, multispektral görüntüleme kullanılarak çoğullanmış immünohistokimya ve protein ekspresyonunun objektif kantitasyonu ve ko-lokalizasyonu için yöntemler tanımlanmıştır.

Çoklanmış Immuno-histokimyasal boyanması ve Multispektral Görüntüleme kullanma Protein Ekspresyonu ve Co-lokalizasyon Kantifikasyonu

Dinamik nükleer polarizasyon ve ardından numune çözünmesi, biyolojik sistemlerde gerçek zamanlı metabolizma çalışmalarını mümkün kılmıştır. Hiperpolarize [1-13C] piruvat, in vitro bir prostat karsinomu hücre hattında laktat dehidrojenaz aktivitesini incelemek için kullanıldı.

hyperpolarized 13 C Metabolik Manyetik Rezonans Spektroskopisi ve Görüntüleme

Bu iletişim kuralı, prostat kanseri hücreleri, sonraki kastrasyon içi Prostatik enjeksiyon göstermek için hedeftir. Orthotopic önceden klinik androjen bağlı ve kısırlaştırma dayanıklı prostat kanseri hastalığı klinik tümör microenvironment ve immün bir ana bilgisayar bağlamında incelemek için kritik modellerdir.

Kollarındaki ve floresan Orthotopic Syngeneic fare modeli androjen bağlı ve kısırlaştırma dayanıklı prostat kanseri

Bu makale, yeni bir radyoaktif işaretli probun (yani, 68Ga etiketli nanobody NM-02) radyosentezini, formülasyonunu, kalite kontrolünü ve bir ksenogreft modelinde küçük hayvan PET/BT görüntülemesi için kullanımını açıklamaktadır.

68Ga Etiketli Nano Molekülün Radyosentezi, Kalite Kontrolü ve Küçük Hayvan Pozitron Emisyon Tomografisi Görüntülemesi

Prostat biyopsisi, prostat kanseri için altın standart tanı yöntemidir. Transrektal ultrasonu önceden ölçülmüş MRG parametreleriyle birleştiren bilişsel füzyon kılavuzluğunda prostat biyopsisi, biyopsi doğruluğunu artırır ve klinik olarak anlamlı prostat kanserinin tespit oranını artırır.

Multiparametrik Manyetik Rezonans Görüntüleme ve Transrektal Ultrason Kullanılarak Kognitif Füzyon Kılavuzluğunda Prostat Biyopsisi

Aşırı tedavi genellikle düşük riskli prostat kanseri olan hastalara uygulanır; Süper aktif gözetim, bu tür aşırı muameleden kaçınmaya yardımcı olabilir.

Düşük Riskli Prostat Kanserini Tedavi Etmek İçin Yeni Bir Teknik—Süper Aktif Sürveyans

Bu araştırma, fibroblast aktivasyon proteininin PET görüntülemesi için GAIA V2 sentezleyici ile [68Ga] Ga-3BP-3940 üretimi için otomatik süreci açıklamaktadır. Üç test partisi üzerinde gerçekleştirilen kalite kontrol testlerinin sonuçları da sunulmaktadır.

Tümör Mikroçevresinin PET Görüntülemesi için Bir Sentez Modülünde [68Ga] Ga-3BP-3940'ın Otomatik Hazırlanması

Keşfedin, farelerde CLT1 peptid hedefli MRI kontrast ajanı kullanarak prostat kanserinin moleküler görüntülemesini. Bu yöntem, tümör stromasındaki pıhtılaşmış plazma proteinlerini hedefleyerek spesifik tümör tespiti sağlar.

Küçük Moleküler CLT1 Peptide Hedefli Kontrast Agent ile Prostat Kanseri MR Moleküler Görüntüleme

Daha fazla video keşfet