Name: Sodyum Hyaluronat subretinal Enjeksiyon Kemirgenler Retina Dekolmanı Modeli (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2013-09-11T15:30:00.000+00:00
Duration: 5 min 58 s
Description: Öğrenin kemirgenlerde sodyum hyaluronat subretinal enjeksiyonu ile tutarlı retina dekolmanı modeli oluşturmayı. Bu yöntem fotoreseptör hücre ölümü mekanizmalarını ve tedavileri araştırmak için güvenilir bir model sunar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Biz eleştiri ona destek için Wendy Chao teşekkür ederim. Bu çalışma Körlük Vakfı (DGV), Lions Göz Araştırma Fonu (DGV) ve Yeatts aile (jwm cömert bir bağış önlemek için Bausch &amp; Lomb Vitreoretinal Kardeşliği (HM), Ulusal Göz Enstitüsü hibe EY014104 (jwm), Research tarafından desteklenmiştir ve DGV).

Tüm hayvanlar üzerinde deneyler Vizyon Araştırma Derneği ve Oftalmik ve Vizyon Araştırma Hayvanların Kullanım Oftalmoloji Bildirimi uyarınca gerçekleştirilen ve kurallar ve yönetmelikler Massachusetts Göz ve Kulak Hastanesi Hayvan Bakım Komitesi tarafından belirlenen edildi. 1.. Tedavi öncesi <ol><li> 60 mg bir intraperitoneal enjeksiyonu ile bir 8 haftalık bir fare anestezisi / ketamin ve 6 mg / kg ksilazin kg arasındadır. </li><li> Bıyıkları kesti. Onlar görselleştirme ve alet yerleştirme ile müdahale çünkü bu yapılır. </li><li> % 5 fenilefrin ve% 0.5 tropikamid ile öğrenci dilate. </li><li> Kirpikler kesti. Onlar görselleştirme ve alet yerleştirme ile müdahale çünkü bu da yapılır. </li><li> Topikal anestezi (% 0.5 proparacaine hidroklorür oftalmik solüsyon) uygulayın. </li></ol> 2. Mikroskop altında Cerrahi <ol><li> Lateral pos içinde fare ayarlayıncerrahın doğru burun ile ition. Bir ayak tutam cerrahi anestezi teyit etmek için yapılır ve steril eldiven önce ameliyat başlamadan donned. </li><li> Posterior limbusta zamansal konjonktiva kesilirken ve skleradan konjonktiva ayrı. Sklera nüfuz kaçının. Bu adımdan sonra, göz kontrolü için forseps ile limbusta konjonktiva kavramak. </li><li> Yapmak konik bir 30 G iğne ucu kullanarak kendi kendine kapanan skleral kesi işaret etti. Sklera yoluyla skleral tünel yapmak ve koroid içine sklera (Şekil 1) nüfuz. Retinayı nüfuz kaçının. Koroid kanama oluşur ve skleral yara yoluyla dışarı çıkarsa, kanama durana kadar bir cerrahi mızrakla bir astriction gerçekleştirin. Bu skleral yara kendinden contalı göz içi basıncı olacak. </li><li> Göz içi basıncını azaltmak için, bir 30 G iğne ile kornea delin. E sırasında iris ve lens yaralanmasına önlemek için iris için iğne paralel kullanınön odasına ntry. Göz içi basınç kendiliğinden sızdırmaz hale gelmesine, yaranın neden olur. </li><li> Konik (iç gözün doğru) aşağı işaret ile subretinal boşluğa Hamilton 10 ul şırınga bağlı bir 33 G iğne takın ve altta yatan RPE nörosensöriyel retina ayırmak için hafifçe 3.5 ul sodyum hialüronat enjekte. Retina nüfuz ise sodyum hiyaluronat vitreus alanı değil subretinal uzaya gidecek çünkü 33 G iğne ile retina nüfuz kaçının. Ayrıca, bir sözlü gözyaşı yaratacak çünkü hızlı enjeksiyon önlemek ve sodyum hiyaluronat ön odasına sızdırıyor. </li><li> Sulu mizah göziçi basıncını ayarlamak için forseps ile kornea delinmesi etrafında kornea iterek kornea delinmesi dışarı akmasına izin verin. </li><li> Bir cerrahi mızrak kullanarak skleral yara sızıntı olmadığını onaylayın. </li><li> Sodyum hiyaluronat sızıntı riskini azaltmak için, siyanakrilat cerrahi yapıştırıcı yerleştirebilirsinizskleral yara. </li><li> Siyanoakrilat cerrahi yapıştırıcı kullanılarak orijinal konumuna konjonktiva takın. Bu da sodyum hiyalüronat sızıntısı riskini azaltır. </li><li> Bir kapak camını kullanarak fundusunu kontrol ve subretinal kanama olmadan bir büllöz RD oluşturulmasını onaylayın. </li></ol> 3. Sonra Tedavi <ol><li> Enfeksiyon riskini azaltmak için göze basitrasin antibiyotik merhem uygulanır. </li><li> Düşük kan basıncı, düşük vücut ısısı sonraki neden olan anestezi (ketamin ve ksilazin karışımı) önlemek için bir ısıtma pedi üzerine fareler tutun. </li><li> Bunlar anestezi uyandırmak sonra geri hayvan kafesine fareler koyun. Komplikasyonlar için günlük fareler izleyin. Herhangi bir komplikasyon ortaya çıkması durumunda aşağıda tarif edildiği gibi fareler euthanize. </li></ol> 4. Kurban <ol><li> 100 mg intraperitoneal enjeksiyondan sonra servikal dislokasyon ile fareler Euthanize / sodyum pentobarbital ve enuclea kgHer deney için uygun zaman noktalarında gözleri te (gösterilmemiştir). Sodyum hiyaluronat dışarı sızabilir çünkü enükleasyon sırasında gözün üzerinde baskı uygulamaktan kaçının. Büllöz RDs en az 14 gün boyunca kalıcı olması gerekir. </li></ol>

<ol><li>Anderson, D. H., Guerin, C. J., Erickson, P. A., Stern, W. H., Fisher, S. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Morphological+recovery+in+the+reattached+retina%5BTitle%5D)+AND+%22Invest.+Ophthalmol.+Vis.+Sci%22%5BJournal%5D)">Morphological recovery in the reattached retina.</a> Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 27, 168-183 (1986).</li>
<li>Cook, B., Lewis, G. P., Fisher, S. K., Adler, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Apoptotic+photoreceptor+degeneration+in+experimental+retinal+detachment%5BTitle%5D)+AND+%22Invest.+Ophthalmol.+Vis.+Sci%22%5BJournal%5D)">Apoptotic photoreceptor degeneration in experimental retinal detachment.</a> Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 36, 990-996 (1995).</li>
<li>Zacks, D. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Caspase+Activation+in+an+Experimental+Model+of+Retinal+Detachment%5BTitle%5D)+AND+%22Invest.+Ophthalmol.+Vis.+Sci%22%5BJournal%5D)">Caspase Activation in an Experimental Model of Retinal Detachment.</a> Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 44, 1262-1267 (2003).</li>
<li>Zacks, D. N., Han, Y., Zeng, Y., Swaroop, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Activation+of+Signaling+Pathways+and+Stress-Response+Genes+in+an+Experimental+Model+of+Retinal+Detachment%5BTitle%5D)+AND+%22Invest.+Ophthalmol.+Vis.+Sci%22%5BJournal%5D)">Activation of Signaling Pathways and Stress-Response Genes in an Experimental Model of Retinal Detachment.</a> Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 47, 1691-1695 (2006).</li>
<li>Nakazawa, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+cytokine+responses+to+retinal+detachment+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Mol.+Vis%22%5BJournal%5D)">Characterization of cytokine responses to retinal detachment in rats.</a> Mol. Vis. 12, 867-878 (2006).</li>
<li>Nakazawa, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tumor+Necrosis+Factor-Mediates+Photoreceptor+Death+in+a+Rodent+Model+of+Retinal+Detachment%5BTitle%5D)+AND+%22Invest.+Ophthalmol.+Vis.+Sci%22%5BJournal%5D)">Tumor Necrosis Factor-Mediates Photoreceptor Death in a Rodent Model of Retinal Detachment.</a> Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 52, 1384-1391 (2011).</li>
<li>Hisatomi, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Relocalization+of+apoptosis-inducing+factor+in+photoreceptor+apoptosis+induced+by+retinal+detachment+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Pathol%22%5BJournal%5D)">Relocalization of apoptosis-inducing factor in photoreceptor apoptosis induced by retinal detachment in vivo.</a> Am. J. Pathol. 158, 1271-1278 (2001).</li>
<li>Hisatomi, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Critical+role+of+photoreceptor+apoptosis+in+functional+damage+after+retinal+detachment%5BTitle%5D)+AND+%22Curr.+Eye+Res%22%5BJournal%5D)">Critical role of photoreceptor apoptosis in functional damage after retinal detachment.</a> Curr. Eye Res. 24, 161-172 (2002).</li>
<li>Nakazawa, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Monocyte+chemoattractant+protein+1+mediates+retinal+detachment-induced+photoreceptor+apoptosis%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci%22%5BJournal%5D)">Monocyte chemoattractant protein 1 mediates retinal detachment-induced photoreceptor apoptosis.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. 104, 2425-2430 (2007).</li>
<li>Trichonas, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Receptor+interacting+protein+kinases+mediate+retinal+detachment-induced+photoreceptor+necrosis+and+compensate+for+inhibition+of+apoptosis%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci%22%5BJournal%5D)">Receptor interacting protein kinases mediate retinal detachment-induced photoreceptor necrosis and compensate for inhibition of apoptosis.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. 107, 21695-21700 (2010).</li>
<li>Roh, M. I., Murakami, Y., Thanos, A., Vavvas, D. G., Miller, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Edaravone%2C+an+ROS+Scavenger%2C+Ameliorates+Photoreceptor+Cell+Death+after+Experimental+Retinal+Detachment%5BTitle%5D)+AND+%22Invest.+Ophthalmol.+Vis.+Sci%22%5BJournal%5D)">Edaravone, an ROS Scavenger, Ameliorates Photoreceptor Cell Death after Experimental Retinal Detachment.</a> Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 52, 3825-3831 (2011).</li>
<li>Mantopoulos, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tauroursodeoxycholic+acid+%28TUDCA%29+protects+photoreceptors+from+cell+death+after+experimental+retinal+detachment%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Tauroursodeoxycholic acid (TUDCA) protects photoreceptors from cell death after experimental retinal detachment.</a> PLoS One. 6, e24245(2011).</li>
<li>Yang, L., Bula, D., Arroyo, J. G., Chen, D. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preventing+retinal+detachment-associated+photoreceptor+cell+loss+in+Bax-deficient+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Invest.+Ophthalmol.+Vis.+Sci%22%5BJournal%5D)">Preventing retinal detachment-associated photoreceptor cell loss in Bax-deficient mice.</a> Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 45, 648-654 (2004).</li>
<li>Cebulla, C. M., Ruggeri, M., Murray, T. G., Feuer, W. J., Hernandez, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spectral+domain+optical+coherence+tomography+in+a+murine+retinal+detachment+model%5BTitle%5D)+AND+%22Exp.+Eye+Res%22%5BJournal%5D)">Spectral domain optical coherence tomography in a murine retinal detachment model.</a> Exp. Eye Res. 90, 521-527 (2010).</li>
<li>Secondi, R., Kong, J., Blonska, A. M., Staurenghi, G., Sparrow, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fundus+Autofluorescence+Findings+in+a+Mouse+Model+of+Retinal+Detachment%5BTitle%5D)+AND+%22Invest.+Ophthalmol.+Vis.+Sci%22%5BJournal%5D)">Fundus Autofluorescence Findings in a Mouse Model of Retinal Detachment.</a> Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 53, 5190-5197 (2012).</li>
<li>Machemer, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Experimental+retinal+detachment+in+the+owl+monkey.+IV.+The+reattached+retina%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Ophthalmol%22%5BJournal%5D)">Experimental retinal detachment in the owl monkey. IV. The reattached retina.</a> Am. J. Ophthalmol. 66, 1075-1091 (1968).</li>
<li>Ross, W., Lavina, A., Russell, M., Maberley, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+correlation+between+height+of+macular+detachment+and+visual+outcome+in+macula-off+retinal+detachments+of+%3C+or+%3D+7+days%27+duration%5BTitle%5D)+AND+%22Ophthalmology%22%5BJournal%5D)">The correlation between height of macular detachment and visual outcome in macula-off retinal detachments of < or = 7 days' duration.</a> Ophthalmology. 112, 1213-1217 (2005).</li>
<li>Glatt, H., Machemer, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Experimental+subretinal+hemorrhage+in+rabbits%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Ophthalmol%22%5BJournal%5D)">Experimental subretinal hemorrhage in rabbits.</a> Am. J. Ophthalmol. 94, 762-773 (1982).</li>
<li>Toth, C. A., Morse, L. S., Hjelmeland, L. M., Landers, M. B. 3rd <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fibrin+directs+early+retinal+damage+after+experimental+subretinal+hemorrhage%5BTitle%5D)+AND+%22Arch.+Ophthalmol%22%5BJournal%5D)">Fibrin directs early retinal damage after experimental subretinal hemorrhage.</a> Arch. Ophthalmol. 109, 723-729 (1991).</li>
<li>Benner, J. D., Hay, A., Landers, M. B. 3rd, Hjelmeland, L. M., Morse, L. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fibrinolytic-assisted+removal+of+experimental+subretinal+hemorrhage+within+7+days+reduces+outer+retinal+degeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Ophthalmology%22%5BJournal%5D)">Fibrinolytic-assisted removal of experimental subretinal hemorrhage within 7 days reduces outer retinal degeneration.</a> Ophthalmology. , 101-672 (1994).</li>
<li>Bhisitkul, R. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neuroprotective+effect+of+intravitreal+triamcinolone+acetonide+against+photoreceptor+apoptosis+in+a+rabbit+model+of+subretinal+hemorrhage%5BTitle%5D)+AND+%22Invest.+Ophthalmol.+Vis.+Sci%22%5BJournal%5D)">Neuroprotective effect of intravitreal triamcinolone acetonide against photoreceptor apoptosis in a rabbit model of subretinal hemorrhage.</a> Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 49, 4071-4077 (2008).</li>
<li>Zeng, R., Zhang, Y., Shi, F., Kong, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+Novel+Experimental+Mouse+Model+of+Retinal+Detachment%3A+Complete+Functional+and+Histologic+Recovery+of+the+Retina%5BTitle%5D)+AND+%22Invest.+Ophthalmol.+Vis.+Sci%22%5BJournal%5D)">A Novel Experimental Mouse Model of Retinal Detachment: Complete Functional and Histologic Recovery of the Retina.</a> Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 53, 1685-1695 (2012).</li>
<li>Leon, S., Yin, Y., Nguyen, J., Irwin, N., Benowitz, L. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lens+injury+stimulates+axon+regeneration+in+the+mature+rat+optic+nerve%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Lens injury stimulates axon regeneration in the mature rat optic nerve.</a> J. Neurosci. 20, 4615-4626 (2000).</li>
<li>Murakami, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inhibition+of+choroidal+neovascularization+via+brief+subretinal+exposure+to+a+newly+developed+lentiviral+vector+pseudotyped+with+Sendai+viral+envelope+proteins%5BTitle%5D)+AND+%22Hum.+Gene+Ther%22%5BJournal%5D)">Inhibition of choroidal neovascularization via brief subretinal exposure to a newly developed lentiviral vector pseudotyped with Sendai viral envelope proteins.</a> Hum. Gene Ther. 21, 199-209 (2010).</li>
<li>Kong, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Self-complementary+AAV5+vector+facilitates+quicker+transgene+expression+in+photoreceptor+and+retinal+pigment+epithelial+cells+of+normal+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22Exp.+Eye+Res%22%5BJournal%5D)">Self-complementary AAV5 vector facilitates quicker transgene expression in photoreceptor and retinal pigment epithelial cells of normal mouse.</a> Exp. Eye Res. 90, 546-554 (2010).</li>
</ol>

Massachusetts Göz ve Kulak Hastanesi Verteporfin kullanımına yönelik üç ABD patentleri bir mülkiyet ilgi var. Buna ek olarak, Massachusetts göz ve kulak Hastanesi maküler dejenerasyon ve başka bozuklukların tedavisi için subretinal koroidal yeni damarların seçici yok edilmesine yönelik bazı patent başvurularında mülkiyet ilgi vardır. Massachusetts Göz ve Kulak Revir bu patent ve patent uygulamalarının bir sonucu olarak telif alır ve Dr Miller Massachusetts Göz ve telif paylaşım hükümler içeren Kulak revir kurumsal Patent Politikası ve Prosedürleri uyarınca aynı bir pay alır. Yazar, Dr Joan W. Miller, bir geçmiş yönetim kurulu üyesi ve Alcon, Inc eski hissedarı ve şu anda Alcon için bir danışman olarak hizmet vermektedir Imagen Biotech, Inc, ISIS Eczacılık; Kalvista Eczacılık; Regeneron Pharmaceuticals, Inc ve onl Therapeutics, LLC. Dr Demetrios G. Vavvas vermektedirRoche, Genentech, Kala İlaç için danışman olarak.

Kemirgen gözünde RD modeli oluşturmak için çeşitli yöntemler 3-15, 22, rapor edilmiştir. Genel olarak, insanlarda ameliyat sırasında kullanılan göz içi yapışkan bir madde olduğunu ve bilinen herhangi bir toksisite 1-15 ile ilişkili değildir, çünkü çoğu sodyum hiyalüronat subretinal enjeksiyon kullanmaktadır. Sodyum hiyaluronatın yerine normal tuzlu su ya da fosfat tamponlu tuzlu su (PBS), RD süresini arttırır. Bir transvitreal yaklaşım 3-6 veya transskleral yaklaşım 7-15: Natriumhyaluronat subretinal enjeksiyon yöntemleri iki yaklaşımdan birini kullanın. Her iki yöntem de fundus gözlem ile gerçekleştirilir. Transvitreal yaklaşımda, retina altı enjektör, bir retinotomi periferik retina oluşturulur, vitröz kavitesine sokulur ve sodyum hiyaluronat subretinal boşluğa enjekte edilir. Bu yöntemde, iki retina yırtıkları retina riskini artırır yapılır,l kanama olduğu subretinal uzaya gidebilir. Buna ek olarak, retinotomi oluşturulur lens yaralanma riski vardır. Skleral yaklaşım için çeşitli tadil edilmiş yöntem vardır. Bir ön kamara ponksiyonundan doğrudan, konjunktiva, sklera, koroid ve RPE ile retina altına yerleştirildiğinde, sodyum hiyaluronat ile doldurulmuş bir şırınga bağlı bir 30 G iğne ile, göz içi basıncını azaltmak sonra, bu yöntemlerin çoğunda 7-12. Sodyum hiyalüronat sonra retina altına enjekte edilir. Bu yöntemi kullanarak skleral retinal yırtılma ve lens yaralanma riskini transvitreal yaklaşım kullanılarak daha azdır. Bununla birlikte, bir 30 G iğne ile sklera yapılan delik, özellikle fare gözleri için, büyük, ve retina altına enjekte sodyum hiyaluronat kolayca skleral yara yoluyla göz dışarı sızar. Bu, daha düşük, daha az kalıcı RD ve daha değişken fotoreseptör hücre ölümüne yol açar. Dahası, koroid kanama oluşursa,göziçi basıncı önce subretinal hiyalüronat düşürüldü çünkü skleral perforasyon adım, kanama subretinal alana yayılacak. Çeşitli faktörler subretinal kanama ve yükseklik ve RD 16-21 sebat dahil olmak üzere, müstakil retina RD etkisini etkileyebilir. Artan RD 16, 17 yüksekliği ve fotoreseptör hücre hasarı ile fotoreseptör hücre ölümü artar, çünkü oksijen ve sığ RD kıyasla daha yüksek RD koryokapillaris gelen temel besin düşük difüzyon daha geniş olabilir. Ayrıca, alt retinal hemorhaj, fotoreseptör hücrelerinin 18-21 için toksik olan, müstakil retinada Bu toksisite olası mekanizmalar hipoksi ve retina altı kanama metabolik bozulmaya bir difüzyon bariyeri olarak ve (demir gibi) kan bileşenleri ile uyarılan doğrudan nörotoksisiteyi içerir. Reti üzerinde koruyucu etkisi olduğu rapor edilmiştir lens hasarı,nal ganglion hücrelerinin 23, ayrıca RD indüksiyonundan sonra fotoreseptör hücre ölümünü etkileyebilir. Giriş yarası sitesi kapalı değilse ek olarak, sodyum hiyaluronat enükleasyon sırasında göz manipülasyon ile dışarı sızabilir. Bu da, sonuçların yorumunu etkileyebilecek, sığ bir RD hatalı sınıflandırmasına yol açabilir. Biz RDS tekrar elde edilebilirliğini arttırmak ve subretinal kanama oranını azaltmak için Natriumhyaluronat subretinal enjeksiyon için transskleral yöntem değiştirilmiş. Bu protokolün kritik adım enjeksiyon sonrasında sodyum hiyalüronat sızmasını engelleyen bir 30 G iğne kullanılarak bir kendinden sızdırmaz skleral kesik yaratıyor. Daha fazla önem skleral yara ödenir böylece önceki yöntemlerden farklı olarak, bu protokol fundus gözlem olmaksızın gerçekleştirilir. Tutkal uygulaması, aynı zamanda, gözün dışarı sızmasını sodyum hyaluronat engeller. Bizim tecrübelerimize göre, bu protokol w ile subretinal kanama oranıönemli ölçüde diğer protokolleri ile daha az. Koroid kanama skleral kesi adımı sırasında ortaya çıkarsa bu adımı göz içi basıncını azaltarak önce gerçekleştirilir, çünkü skleral yara yoluyla göz çıkacaktır. Koroid kanama göz içi basıncı ve nörosensöriyel retina dekolmanı azalma sonra meydana gelirse, kan subretinal boşluğa teşrih edecek. Bu, diğer teknikler ile yaklaşık% 10-20 aksine vakaların yaklaşık% 5 bunun bulunmuştur. Bu hayvanlar analiz dışında tutulmalıdır. Bu teknik aynı zamanda, fotoreseptör ve RPE hücreleri 25, 24, hedef vektör-aracılı gen transferi retina altı enjeksiyon için kullanılabilir. Bu enjeksiyonlar için tipik bir araç (PBS, tuzlu su), sodyum hiyalüronat önemli ölçüde daha az yapışkan olduğu için, standart teknikler daha sızıntı boğulmuş bulunmaktadır. Burada anlatılan teknik, bu riskini azaltarak, vektör aktarma deneyleri daha tekrarlanabilir hale getirir vegüvenilir.

A correction was made to <a href="http://www.jove.com/video/50660/">Retinal Detachment Model in Rodents by Subretinal Injection of Sodium Hyaluronate</a>. The footnotes were removed from the abstract due to redundancy in the introduction.

Erratum: Retinal Detachment Model in Rodents by Subretinal Injection of Sodium Hyaluronate

Fotoreseptör temel retinal pigment epitel ayrıldığı zaman fotoreseptör hücre ölümü ve daha sonra görsel bir düşüş meydana gelir. Fotoreseptör fiziksel olarak ayrılması, yaşa bağlı maküler dejenerasyon (AMD), santral seröz korioretinopati, diyabetik retinopati, prematüre retinopati ve yanı sıra yırtıklıı (örneğin retina, bir çizikten) retina dekolmanı (dahil olmak üzere çeşitli retinal hastalıklar, görülür RD). Sodyum hiyalüronat subretinal enjeksiyon fotoreseptör dejenerasyonu 1-15 patofizyolojisine ilişkin bilgi veren, fotoreseptör hücre ölümüne yol açan bir RD oluşturmak için yaygın olarak kabul edilmiş bir modeldir. Ilk olarak 2001 yılında piyasaya 7 subretinal sodyum hiyalüronat enjeksiyonu ile indüklenen fotoreseptör dejenerasyonu, (hafta günü) makul bir zaman süresi avantajına sahiptir. Ancak, Anima hayvana fotoreseptör hücre kaybının önemli değişkenlik olabilir1) boy ve RD süresi ve subretinal kanama 2) oluşumu: nedeniyle RD sonra fotoreseptör hücre ölümünü etkileyen iki önemli faktör l. Her iki faktör katkıda yönteme dik bir teknik öğrenme eğrisi vardır. Fotoreseptör hücre dejenerasyonu RD yüksekliği ile artar, retinal pigment epitel arasındaki mesafe olarak (RPE) katmanı ve fotoreseptör 16-17 artırır. Bu raporlar ile tutarlı, önceki deneyler sığ RDS daha büllöz RDS fazla fotoreseptör ölüm gösterdi. Ayrıca, alt retinal hemorhaj, fotoreseptör hücreleri için toksik olan ve fotoreseptör hücre ölümü 18-21 etkilediği bildirilmiştir. Aynı şekilde, biz subretinal kanama olmadan RDS daha subretinal kanama ile RDS daha fotoreseptör ölüm gözlemledik. Bu nedenle, değişkenliği en aza indirmek için teknikler subretinal hemoraji kaçınarak RD tutarlı zirvelere ulaşmak odaklanmak zorunda. Bizim içinde değişik bir şekliducing RD subretinal kanama görülen, gözün aynı pozisyonda tekrarlanabilir büllü ve kalıcı RD yapabilirsiniz. Biz bunu diğer siteleri ile karşılaştırıldığında daha geniş bir operasyon sahasını ulaşmak daha kolaydır çünkü zamansal yaklaşım kullanılarak ameliyat gerçekleştirildi. Konjunktival kesildikten sonra, kendi kendine yapışan bir skleral kesik bir 30 G iğne kullanılarak yapılır. Bir skleral tünel, oluşturulan koroid içine sklera penetrasyon tarafından takip edilir. Koroid kanama bu adımda ortaya çıkarsa, kanama skleral yara yoluyla gözü çıkar ve kanama cerrahi mızrakla astriction durdurulabilir. Bir ön kamara lastik sonra göz içi basıncını azaltmak için, kornea gerçekleştirilir. Yalnız subretinal enjeksiyon çıkan retinal arter tıkanıklığı ve iç retina iskemi ile artmış göz içi basıncı yol açacaktır, çünkü bu önemli bir adımdır. Bir Hamilton 10 ul şırınga bağlanmış olan bir 33 G iğne daha sonra subretinal boşluğa sokulur ve 3,5 μ olan, L, sodyum hiyalüronat yavaşça temel RPE arasındaki duyu siniri retinasına ayırmak için enjekte edilir. Fundus gözlem altında gerçekleştirilir uyaran RD diğer yöntemlerin aksine, bu yöntem doğrudan gözlem altında gerçekleştirilir. Skleral yara kendinden sızdırmaz olduğundan, sodyum hiyalüronat sonra dışarı sızıntı olmayacak. Son olarak, tutkal skleral yara üzerine konur ve konjonktiva orijinal konumuna tutturulur. Bu adımlar da sodyum hiyaluronat sızıntı riskini azaltmak sürer. 3.5 ul sodyum hiyalüronat enjeksiyon 8 haftalık farelerin gözlerinde tekrarlanabilir RDS (retinanın% 50) oluşturur. Böylece tekrarlanabilir büllü ve kalıcı RDS sağlayan, gözün dışarı sızmasını enjekte sodyum hialüronat engeller nedeniyle kendi kendine kapanan bir yara oluşturmak bizim modifiye prosedüründe en önemli adımdır.

<table><tbody><tr><td>Ketaject</td><td>Phoenix</td><td>2010025</td><td></td></tr><tr><td>AnaSed</td><td>LLOYD</td><td>4004821</td><td></td></tr><tr><td>%5 Fenilefrin / %0.5 Tropicamide</td><td>Massachusetts Göz ve Kulak Eczanesi</td><td></td><td></td></tr><tr><td>%0.5 Proparakain Hidroklorür Oftalmik Çözelti</td><td>AKORN</td><td>17478-263-12</td><td></td></tr><tr><td>Provics</td><td>Alcon</td><td>8065183085</td><td></td></tr><tr><td>Webglue</td><td>Patterson Veteriner</td><td>07-8566128</td><td></td></tr><tr><td>Mikroskop</td><td>Leica</td><td>MG90</td><td></td></tr><tr><td>30G1 / 2 PrecisionGlide İğne</td><td>BD</td><td>305106</td><td></td></tr><tr><td>Weck-Cel Göz Mızrakları</td><td>Beaver-Visitec</td><td>0008685</td><td></td></tr><tr><td>10 Mikrolitre Şırınga</td><td>Hamilton</td><td>7635-01</td><td></td></tr><tr><td>33 ölçü, 0.5 inç iğne</td><td>Hamilton</td><td>7803-05</td><td></td></tr><tr><td>18x18mm Kapak Camı</td><td>Fisher Scientific</td><td>18-548A</td><td></td></tr></tbody></table>

sodyum hyaluronat subretinal enjeksiyon kemirgenler retina dekolmanı modeli

Retinal Detachment Model in Rodents by Subretinal Injection of Sodium Hyaluronate

Natriumhyaluronat subretinal enjeksiyon retina dekolmanı (RD) uyaran bir yaygın kabul gören bir yöntemdir. Ancak, RD veya subretinal kanama oluşma yüksekliği ve süresi müstakil retinada fotoreseptör hücre ölümünü etkileyebilir. Bu nedenle, fotoreseptör hücre ölümü değerlendirmek için retina altı kanama olmadan üretilebilir RDS oluşturmak için avantajlıdır. Biz subretinal kanama nadir rastlanılan bir tekrarlanabilir konumda büllü ve kalıcı RDS oluşturmak için önceden bildirilen yöntem değiştirdi. Modifiye edilmiş bu yöntemin önemli bir aşaması, subretinal boşluk içine enjeksiyondan sonra sodyum hiyalüronat sızmasını önlemek için kendi kendine yapışan bir skleral kesik, yaratılmasıdır. 30 G iğne ile koroid içine sklera penetrasyon ardından kendinden sızdırmazlık skleral kesi, bir skleral tünel oluşturulur yapmak. Koroid kanama Bu aşama sırasında meydana de, cerrahi bir mızrak ile astriction koroid etek hızını azaltanorrhage. Bu yöntem, bu tür regmatojen RD, prematüre, diyabetik retinopati, seröz santral korioretinopati, ve yaşla ilişkili maküler dejenerasyon (AMD) ve retinopati gibi RD kapsayan hastalıklarda fotoreseptör ölüm, daha güvenilir ve tekrarlanabilir bir model sağlar.

Bu protokol ile yapılan RD kalıcılığını değerlendirmek için, cryosections gün 3, 7 yapılmış ve RD indüksiyonundan sonra 14 edildi. Altı gözü Her bir zaman noktası kullanılmıştır. Hematoksilin ve eosin (HE) boyama bölümleri görselleştirmek için kullanılmıştır. Tüm bölümler lens (Şekil 2) yaklaşan bir büllöz RD gösterdi. Bir göz 7. gününde subretinal kanama gösterdi. Hiçbir gözleri enfeksiyon veya lens hasarının belirtisi gösterdi. <img src="/files/ftp_upload/50660/50660fig1.jpg" alt="Şekil 1" fo:content-width="4.5in" fo:src="/files/ftp_upload/50660/50660fig1highres.jpg" /> Şekil 1. Kendi kendine yapışan bir skleral kesik oluşturma. Bu şematik normal fare göz bir kesit görüntüsünü göstermektedir. Kırmızı çizgi kendinden sızdırmaz skleral kesi gösterir. Bir 30 G iğne ile koroid sklera içine nüfuz ardından bir skleral tünel kendi kendine yapışan bir skleral kesik oluşturur. Bu skleral yarakendinden contalı subretinal boşluğa enjeksiyon sonrası Natriumhyaluronat sızmasını önlemek ve kalıcı büllöz retina dekolmanı elde edebilirsiniz göz içi basıncı, olacak. <img src="/files/ftp_upload/50660/50660fig2.jpg" alt="Şekil 2," fo:content-width="5in" fo:src="/files/ftp_upload/50660/50660fig2highres.jpg" /> Şekil 2. Retina dekolmanı zaman tabii ki. Bu fundus fotoğraf ameliyattan hemen sonra subretinal kanama olmadan bir büllöz retina dekolmanı gösterir. En az 14 gün boyunca subretinal kanama olmadan hematoksilen ve eozin (HE) boyama gösterisi kalıcı büllöz retina dekolmanı ile kriyokesitler.

, Dekolmanı bir tekrarlanabilir ve sürekli yüksekliği ile deneysel retina dekolmanı oluşturma ve subretinal kanama olmadan retina hastalığında fotoreseptör hücre kaybı patofizyolojisi okuyan ve potansiyel terapötik müdahalelerin değerlendirilmesi için önemlidir. Burada ayrıntılı olarak, böyle bir yöntem sunulmaktadır.

Sodyum Hyaluronat subretinal Enjeksiyon Kemirgenler Retina Dekolmanı Modeli

Subretinal injection of sodium hyaluronate is a widely accepted method of inducing retinal detachment (RD). However, the height and duration of RD or the ...

Bu prosedürün genel amacı, subretinal kanama olmaksızın, tekrarlanabilir ve sürdürülebilir bir ayrılma yüksekliğine sahip deneysel retinal ayrılmalar oluşturmaktır. Bu işlem, öncelikle konjunktivayı skleradan ayırmak için posterior limbus düzeyinde temporal konjunktivanın insize edilmesiyle gerçekleştirilir. İkinci adımda, kendi kendini kapatan bir skleral insizyon ve kornea ponksiyonu yapmak için 30 gauge bir iğne ucu kullanılır.Ardından, nörosensoriyel retinayı altta bulunan retinal pigment epitelyumundan ayırmak için subretinal boşluğa sodyum hyaluronat enjekte edilir. Son adımda, sklera yarasının üzerine siyanoakrilat yapıştırıcı uygulanır ve sodyum hyaluronat sızıntısı riskini azaltmak için konjunktiva orijinal konumuna yeniden dikilir. Son olarak, subretinal hemoraji olmaksızın bolus retinal ayrılmanın gerçekleştiğini doğrulamak için bir lam cam kullanılarak fundus incelenir.Kemirgenlerde retinal dekolmanı azaltmaya yönelik mevcut yöntemler, retinal dekolmanın yüksekliği ve kalıcılığında değişkenliğe yol açarak ölçülen hücre ölüm oranlarının tutarsız olmasına neden olabilir. Bu teknik ile, subretinal hemoraji riski azaltılmış, tekrarlanabilir büllöz ve kalıcı retinal dekolmanlar oluşturulabilir; bu da kemirgenlerde güvenilir bir retinal dekolman modeline olanak tanır. Kemirgenlerde deneysel retinal dekolman uygulaması nispeten basittir, makul bir zaman sürecine sahiptir ve insan hastalığına oldukça benzerdir.Bu nedenle, fotoreseptör hücre ölümü mekanizmalarını ve görme kaybını önlemeye yönelik tedavileri incelemek için harika bir modeldir. Retinal dejeneratif bozukluklarda, ayrılmış retinada meydana gelen değişken fotoreseptör hücre ölümünü incelemek için, subretinal kanama olmaksızın tekrarlanabilir bir ayrılma oluşturmak avantajlıdır. Bunun nedeni, retinal ayrılmanın süresinin uzamasının veya subretinal kanama oluşumunun fotoreseptör hücre ölümünü etkileyebilmesidir.Sekiz haftalık bir fare anesteziye alındıktan sonra hayvanın bıyıklarını kısaltın, ardından cerrahi bir mikroskop altında %5 phenyl rine ve %0,5 tropic içeren bir solüsyonla pupillayı dilate edin. Hayvanın kirpiklerini kesin, topikal anestezi (%0,5 propane hydrochloride oftalmik solüsyon) uygulayın. Fareyi, burnu cerraha bakacak şekilde lateral pozisyona getirin ve ardından posterior limbus düzeyinde temporal konjunktivayı insize ederek, bir pens yardımıyla konjunktivayı skleradan ayırın.Gözü kontrol etmek için konjonktivayı limbus bölgesinden tutun. Ardından, eğik ucu yukarı bakacak şekilde 30 gauge bir iğne tutun. Retinayı delmeden, sklera üzerinden bir tünel oluşturup sklera boyunca koroid tabakasına nüfuz etmek için iğnenin ucunu kullanın.Ardından, 30 gauge iğneyi irise paralel tutarak, intraoküler basıncı düşürmek için korneayı delin. Şimdi eğimli ucu aşağıya doğru yönlendirerek, Hamilton 10 µL şırıngaya bağlı 33 gauge bir iğneyi subretinal boşluğa yerleştirin ve 3.5 µL sodyum urinat enjekte edin.Bu işlem, nörosensoriyel retinanın yaklaşık %50'sini alttaki retinal pigment epitelyumundan ayıracaktır. Pens kullanarak korneayı kornea ponksiyonu çevresinden itin ve akuöz hümörün kornea ponksiyonundan dışarı akmasını sağlayın; ardından, sodyum urinat sızıntısı riskini azaltmak için skleral yaradan sızıntı olmadığını doğrulamak amacıyla cerrahi bir selüloz mızrak kullanın. Skleral yaranın üzerine siyanoakrilat yapıştırıcı sürün ve ardından konjunktivayı orijinal konumuna yeniden tutturun.Fundusu kontrol etmek ve subretinal hemoraji olmaksızın bir bolus retinal detaman oluşumunu onaylamak için bir lamel cam kullanın. Son olarak, enfeksiyon riskini azaltmak için göze antibiyotikli pomad uygulayın. Vücut sıcaklığının düşmesini önlemek için fareyi bir ısıtıcı ped üzerinde tutun.Düşük kan basıncı takiben. Anesteziden uyandıktan sonra hayvanı kafesine geri koyun. Bu protokol ile oluşturulan retinal ayrılmanın kalıcılığını değerlendirmek için, ayrılmanın indüklenmesinden sonraki üçüncü, yedinci ve 14. günlerde kriyoseksiyonlar yapıldı.Her zaman noktası için altı göz kullanıldı; kesitlerin görüntülenmesi için hematoksilin ve eosin boyama yapıldı ve her birinde lense yaklaşan bir bolus retinal dekolman görüldü.Hiçbir gözde enfeksiyon veya lens yaralanması belirtisi görülmemiştir. Uzmanlaşıldığında, bu cerrahi işlem yaklaşık beş dakika içinde gerçekleştirilebilir. Bu prosedürü uygularken, ayrılmış retinadaki reseptör hücresi ölümünü etkileyebilecek sodyum sızıntısına, yüksek düzeyde subretinal hemorajiye veya lens yaralanmasına neden olmamak için her adımın nazikçe uygulanması önemlidir. Bu videoyu izledikten sonra, kemirgenlerde subretinal hemoraji oluşmadan, tekrarlanabilir ve sürdürülebilir bir ayrılma yüksekliğine sahip deneysel retinal ayrılmanın nasıl oluşturulacağı konusunda iyi bir anlayış kazanmış olmalısınız.

retinal-detachment-model-rodents-subretinal-injection-sodium

Research

JoVE Journal

Medicine

Tıp

Kaynak: Park, S. W., et al. Farelerde Gen Tedavisi için Viral Vektörlerin Limbal Yaklaşım-Subretinal Enjeksiyonu Retinal Pigment Epiteli. J. Vis. Uzm. (2015)Video, bir fare modelinde viral vektörlerin retina pigment epiteline (RPE) subretinal enjeksiyonu için yöntemi açıklamaktadır. Anestezi ve göz hazırlığından hassas lentiviral vektör dağıtımına kadar prosedürü detaylandırarak RPE'de gen entegrasyonunu ve ekspresyonunu sağlar.

Bir Fare Modelinde Viral Vektörlerin Retina Pigment Epiteline Subretinal Enjeksiyonu

Burada, sıçanlarda ve farelerde bir RPE hücresi bolusunu subretinal olarak enjekte etmek için multimedya formatında topluluk tarafından kabul edilen bir protokol sunuyoruz. Bu yaklaşım, retinal dejenerasyonun hayvan modellerinde implantasyon üzerine aşılanmış RPE hücrelerinin kurtarma potansiyellerini, güvenlik profillerini ve hayatta kalma kapasitelerini belirlemek için kullanılabilir.

Süspansiyon Retina pigment epiteli Hücreleri sunun Kemirgenler Subretinal Enjeksiyonları Sahne

Retina pigment epiteli (RPE) yedek stratejileri ve gen temelli tedavi birkaç retinal dejeneratif koşulları için kabul edilir. Klinik çeviri için, büyük göz hayvan modelleri hastalarda uygulanabilir cerrahi teknikleri incelemek gerekmektedir. Burada çok yönlü ve maliyet-etkin bir RPE transplantasyon, yönelikse subretinal cerrahi için bir tavşan modeli sunuyoruz.

Tavşanlarda Subretinal Cerrahi Adım Protokolle Bir Adım

Subretinal enjeksiyonlar, proteinler ve viral vektörler gibi büyük terapötik ajanları fotoreseptörlere ve retina pigment epiteline iletmek için en yaygın tekniktir. Farelerde, minimum ikincil hasar ve hızlı iyileşme süreleri ile subretinal boşluğu başarılı bir şekilde hedefleyen alternatif bir yöntem burada açıklanmaktadır.

Subretinal Space erişim için bir alternatif ve Onaylı Enjeksiyon Yöntemi<i&gt; yoluyla</i&gt; Bir transkleral Posterior Yaklaşım

Subretinal enjeksiyon kök hücre replasman tedavisi için yaşa bağlı makula dejenerasyonu preklinik çalışmalarda yaygın olarak uygulanmıştır. Görüntülenmeyecektir bu makalede, biz daha az riskli, tekrarlanabilir ve tam olarak değiştirilmiş subretinal enjeksiyon tekniğini hücrelerin sıçan gözlerinin içine sunmak için trans-scleral yaklaşım yoluyla tanımlamak.

Sıçan gözlerinin içine insan retina Pigment epitel hücrelerinin Trans-scleral Subretinal nakli için rafine bir protokol geliştirilmesi

Burada biz kendi alansal kapsama değerlendirmek ve photoreceptor canlılık karakterize subretinal boşluğa gen terapisi ajanların teslim yardımcı olmak üzere yüksek çözünürlüklü spektral alanlı optik koherens tomografi (HR-SD-Ekim) kullanarak yeni bir yaklaşım göstermek.

Ultrahigh çözünürlük fare optik koherens tomografi göz içi enjeksiyon Retina gen terapisi araştırma yardımcı olmak için

Retina pigment epitel hücreleri hücre-replasman tedavisi için Kuru yaşa bağlı makula dejenerasyonu gelişmiş form olarak hizmet verebilir. Bu iletişim kuralı coğrafi Atrofi büyük gözlü modeli ve hastalık bu modeline insan embriyonik kök hücre kaynaklı retina pigment epitel hücrelerinin nakli subretinal nesil açıklar.

Büyük gözlü manken coğrafi Atrofi, içine insan embriyonik kök hücre elde edilen retina Pigment epitel hücrelerinin subretinal nakli

İnsan olmayan primat (NHP), anatomik ve genetik benzerlikler nedeniyle insan retina hücresel terapötiklerini incelemek için ideal bir modeldir. Bu makalede, NHP gözündeki retina pigment epitel hücrelerinin submaküler nakli için bir yöntem ve makula manipülasyonu ile ilişkili intraoperatif komplikasyonları önleme stratejileri açıklanmaktadır.

Dejeneratif Retina Hastalıkları için İnsan Dışı Primat Modelinde Retina Pigment Epitel Transplantasyonu

Diyabetik retinopati körlüğün önde gelen nedenlerinden biridir. Histoloji, kan-retinal bariyer parçalanma testi ve floresan anjiyografi, retinanın patofizyolojisini anlamak için değerli tekniklerdir ve bu da diyabetik retinopatiye karşı etkili ilaç taramasını daha da artırabilir.

Sıçan Modelinde Retinal Patofizyolojik Değerlendirme

Bu makale, hem enjeksiyon bölgesini hem de retina dekolmanı alanını kontrol etmek için intraoperatif görselleştirmeyi kullanan sıçanlarda subretinal enjeksiyon yöntemlerini açıklamaktadır.

Sıçanlarda Subretinal Enjeksiyon ve Retina Dekolmanı İntraoperatif Görselleştirmesi

Öğrenin kemirgenlerde sodyum hyaluronat subretinal enjeksiyonu ile tutarlı retina dekolmanı modeli oluşturmayı. Bu yöntem fotoreseptör hücre ölümü mekanizmalarını ve tedavileri araştırmak için güvenilir bir model sunar.

Sodyum Hyaluronat subretinal Enjeksiyon Kemirgenler Retina Dekolmanı Modeli

Daha fazla video keşfet