Name: MTT deneyi ile sentez ve Sitotoksisite Değerlendirilmesi: Anticancer Metal Kompleksleri (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2013-11-10T21:00:00.000+00:00
Duration: 11 min 14 s
Description: Keşfedin titanyum ve vanadyum bazlı antikanser metal komplekslerinin sentezi ve MTT deneyi ile sitotoksisite değerlendirmesini. Bu yöntem, yeni metallo ilaçların etkinliğini belirlemek için araştırmacılara yardımcı olur.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Finansman Avrupa Topluluğu Yedinci Çerçeve Programı (FP7/2007-2013) kapsamında Avrupa Araştırma Konseyi alındı ​​/ ERC Hibe sözleşmesi hiçbir [239603]

<ol><li> V hazırlanması (V) kompleksi (Şekil 2); 18 davranış bir eldiven kutu içinde 1,1-1,4 adımları, bir eldiven kutusu mevcut değilse, alternatif atlayın 2 (2,1-2,6) adım. <ol><li> Ligandların 0,42 mmol, kuru THF H 2 L çözülür ve THF içinde VO eşdeğer miktarda eden karıştırılan bir çözeltiye (O i Pr) 3 ekleyin. </li><li> 15 dakika boyunca oda sıcaklığında reaksiyon karışımını karıştırın ve vakum altında uçucu maddeler uzaklaştırılmıştır. </li><li> Soğuk hekzan ekleyin ve vakum altında çıkarın. Koyu mor renkli bir toz kantitatif bir verimle elde edilmelidir. </li><li> Bir Eppendorf şişede elde edilen bileşik 8 mg tartılır. 3. adıma atlayın. </li></ol></li><li> Bir Schlenk hat kullanılarak V (V) kompleksi hazırlayın. <ol><li> Bir septum kapak ile kuru bir Schlenk şişesine kuru THF içinde ligand L 2, H, 0.42 mmol çözülür, bir Schlenk hattına eklemek ve vakum / inert gaz (N2 veya Ar) ortamlarda dönüşümlü uygulanır; üç s uygulanması önerilirmermi uch ve vakum sahnelerinde 2-5 dakika bekleyin. </li><li> Septum kapak ile, şırınga ile kuru THF ekleyin. </li><li> VO (O i Pr) eşdeğer miktarda ekleme, hattına uygun bir kuru bir Schlenk şişesi çengel eylemsiz bir ortam uygulanması ve bu için vanadyum çözeltiden, bir şırınga vasıtasıyla, reaktiflerin eklenmesi ile benzer bir şekilde hazırlanmış olan bir THF çözeltisine, 3 ligand. </li><li> 15 dakika boyunca oda sıcaklığında reaksiyon karışımını karıştırın ve vakum altında uçucu maddelerin ayrılması, kararsız bir ürün endişe ise, atıl bir atmosfer altında uçucu Schlenk tipi damıtma yerine, ön-kurutma edilmiş gerekli cam takmak için atıl gaz akışının kullanımı . </li><li> Soğuk hekzan ekleyin ve vakum altında çıkarın. Koyu mor renkli bir toz kantitatif bir verimle elde edilmelidir. </li><li> Bir Eppendorf şişede elde edilen bileşik 8 mg tartılır. </li></ol></li><li> Ti hazırlanması (IV) kompleksi (Şekil 2); 28 </skadar&gt; davranış bir eldiven kutu içinde 3,1-3,3 adımları, bir eldiven kutusu mevcut değilse, bunun yerine bir Schlenk çizgi istihdam vanadyum analog (adım 2) için tartışılan alternatif adımları ayarlayın. <ol><li> , Kuru THF içindeki bir ligand L 2, H 0.35 mmol, THF içinde çözülür ve Ti (O Pr i) 4 eşdeğer miktarlarının bir karıştırılan çözeltisine ekleyin. </li><li> 2 saat boyunca oda sıcaklığında reaksiyon karışımını karıştırdıktan. Kantitatif verimle sarı bir ürün vermek üzere vakum altında uçucu maddeler uzaklaştırılmıştır. </li><li> Eppendorf şişede elde edilen bileşik 8 mg tartılır. </li></ol></li><li> HT-29 hücreleri, 96 oyuklu plaka hazırlanması <ol><li> % 1 penisilin / streptomisin antibiyotik,% 1 L-glutamin, ve 37 ° C&#39;de% 10 fetal sığır serumu (FBS),% 5 CO2 ile birlikte içeren RPMI-1640 ortamıyla, 75 cm 2 şişede Culture HT-29 hücreleri, . </li><li> HT-29 hücreleri (altkültür olmadan her 3-4 gün 90-100%) maksimal confluency ulaştığınızda ortamı çıkarın. 1 ml &#39;si ile yıkayınıztripsin (% 0.25) / EDTA (% 0.05) çözümü ve çıkarın. </li><li> Tripsin 1 ml (% 0.25) / EDTA (% 0.05) çözeltisi ilave edin ve 5 dakika boyunca inkübe edin. </li><li> Şişeden HT-29 hücreleri ayırın ve tripsin aktivitesi devre dışı bırakmak için ortam 10 ml ekleyin. Bir tübe hücreler karışımın 5 ml aktarın. </li><li> Sayaç haznesine hücreler karışımın birkaç damla aktarmak için pipet kullanın. Sayaç odası 5 x 5 kare içerir. </li><li> Köşelerde 4 kare ve ortasında bir: bir mikroskop kullanılarak 5 temsilci meydanlarda hücreleri saymak. </li><li> Mevcut hücre tahmini miktarını hesaplayın. 5 temsilci meydanlarda hücreleri toplamak ve 20&#39;ye bölün. </li><li> Adım 4.7 sonuçla 0.6 bölün. Alınan plaka başına gereken hücre karışımı miktarıdır. Bu hesaplama, 0.6 x 10 6 hücre (oyuk başına 9,000 hücre) içeren bir plaka ile ilgilidir. </li><li> P başına gereken hücre karışımının miktarını aktarmak için pipet kullanınGeç (bölüm 4.8 hesaplanan) ve orta 13.2 ml ekleyin (kuyunun × 66 kuyu başına 200 ul). </li><li> 11 kanallı bir pipet (oyuk başına 200 ul, 6 hatları, toplam 66 kuyu) ile 96 oyuklu plakaya karışımı ekleyin. Her satırın biri de boş kontrolü için boş kalmalıdır. </li><li> Hücreler plaka takmak için izin vermek için 24 saat boyunca% 5 CO2 ile 37 ° C&#39;de inkübe edin. </li></ol></li><li> Bileşiklerin Ekleme <ol><li> Aşama 1.4 (ya da 2.6) ve 3.3 &#39;de tarif edildiği gibi her bir bileşiğin 8 mg kuru THF içinde (arzu edilen konsantrasyon aralığı uygun olarak ya da farklı miktarda) 200 ul ekle tartılır. Da, ligand L 2, H 8 mg tartılır. </li><li> 9 farklı Eppendorf şişelere THF içinde 60 ul ekleyerek ayrıca her bileşik çözeltisi ile seyreltilir. </li><li> 10 farklı konsantrasyonları o kadar çok ilk Eppendorf şişe, tekrar süspansiyon ve bir sonraki şişeye transferi 60 ul, ve Bölüm 5.1 &#39;de karışımdan bir pipet 60 ul transfer(bölüm 5.1 ana karışıma dahil) btained. </li><li> Ortamın 180 ul THF içinde her bir konsantrasyonu 20 ul seyreltin. </li><li> Sadece THF ile bir kontrol çözelti hazırlayın, her ölçüm ortamı 180 ul THF içinde 20 ul. </li><li> Zaten konsantrasyon aralığı olabilir (en fazla 200 mg / L bileşiğinin son konsantrasyonları vermek üzere ortam içinde hücrelerin belirtilen çözeltisi içeren 200 ul her bir oyuğuna, (THF kontrolü dahil) elde edilen çözeltiden 10 ul ekle ) Bileşik aktivitesine göre değiştirilebilir. </li><li> Bu bileşiğin çözünürlüğüne bağlı olarak, uygulanan en yüksek konsantrasyonda bir çökeltme görülebilir. </li><li> Bileşik 3x (aynı bileşiğin plakasında hat 3) her bir ölçüm tekrar, her bir çizgi içerir: 10 farklı konsantrasyonda, iyi boş için hücreler olmaksızın sadece kontrol ve 1 çözücüsü ile işlemden geçirildi 1 de içeren hücrelerde, bileşik ile muamele edilmiş hücrelerin kontrolü. </li><li> CO2 atmosfer,% 5 37 ° C&#39;de 3 gün için yüklenen plaka inkübe edin. </li></ol></li><li> MTT tahlili kullanılarak sitotoksisite ölçümü <ol><li> Fenol kırmızısı olmadan RPMI-1640 ortamı içinde 200 ml&#39;lik bir solüsyona MTT tozu, 1 g ekleyerek MTT çözeltisi hazırlayın. Stok çözelti, 15 ml tüplere bölünmüştür ve -20 ° C&#39;de saklanabilir </li><li> (Adım 4.10 arasındaki hücreleri olmadan boş kontrol çukurları hariç) her bir kullanan 11 kanallı pipet MTT çözeltisinin 20 ul ve ilave 3 saat boyunca inkübe edin. </li><li> Her bir ikinci ortam çözeltisini çıkarın. </li><li> Formazan&#39;ın çözülmesi için her bir oyuğa 200 ul izopropanol ekleyin. Homojenliğine ulaşıncaya kadar 0.5 saat için plaka karıştırın. </li><li> Bir mikro-plaka okuyucu spektrofotometre ile yukarıda sözü edilen solüsyon 200 ul için 550 nm&#39;deki absorbansı ölçülür. </li><li> 3 farklı günlerde (ki 3 tekrarlar içeren, adım 5.8) her ölçümü tekrarlayın. </li><li> T hesaplamakTHF çözücü kontrol değerinin absorbans ile bölünmesi sonucu, ölçülen değer arasındaki boş kontrol absorbans değerinin düşülmesi ve% 100 ile çarpılması suretiyle hücre canlılığının o yüzdesi. </li><li> GraphPad Prism yazılımı (ya da eşdeğeri) kullanılarak IC50 değerleri hesaplanır. </li><li> Başka IC 50, en az üç farklı günlerde toplanan bütün IC50 değerlerinin ortalama ve hata değeri standart sapmasıdır. </li></ol></li></ol>

<ol><li>Niles, A. L., Moravec, R. A., Riss, T. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Update+on+in+vitro+cytotoxicity+assays+for+drug+development%5BTitle%5D)+AND+%22Expert+Opinion+on+Drug+Discovery%22%5BJournal%5D)">Update on in vitro cytotoxicity assays for drug development.</a> Expert Opinion on Drug Discovery. 3, 655-669 (2008).</li>
<li>Hatok, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vitro+assays+for+the+evaluation+of+drug+resistance+in+tumor+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+and+Experimental+Medicine%22%5BJournal%5D)">In vitro assays for the evaluation of drug resistance in tumor cells.</a> Clinical and Experimental Medicine. 9, 1-7 (2009).</li>
<li>Wang, D., Lippard, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cellular+processing+of+platinum+anticancer+drugs%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews+Drug+Discovery%22%5BJournal%5D)">Cellular processing of platinum anticancer drugs.</a> Nature Reviews Drug Discovery. 4, 307-320 (2005).</li>
<li>Muggia, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Platinum+compounds+30+years+after+the+introduction+of+cisplatin%3A+Implications+for+the+treatment+of+ovarian+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Gynecologic+Oncology%22%5BJournal%5D)">Platinum compounds 30 years after the introduction of cisplatin: Implications for the treatment of ovarian cancer.</a> Gynecologic Oncology. 112, 275-281 (2009).</li>
<li>Bruijnincx, P. C., Sadler, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((New+trends+for+metal+complexes+with+anticancer+activity%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Opinion+in+Chemical+Biology%22%5BJournal%5D)">New trends for metal complexes with anticancer activity.</a> Current Opinion in Chemical Biology. 12, 197-206 (2008).</li>
<li>Ott, I., Gust, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Non+platinum+metal+complexes+as+anti-cancer+drugs%5BTitle%5D)+AND+%22Archiv+der+Pharmazie+%28Weinheim%22%5BJournal%5D)">Non platinum metal complexes as anti-cancer drugs.</a> Archiv der Pharmazie (Weinheim. 340, 117-126 (2007).</li>
<li>Desoize, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Metals+and+metal+compounds+in+cancer+treatment%5BTitle%5D)+AND+%22Anticancer+Research%22%5BJournal%5D)">Metals and metal compounds in cancer treatment.</a> Anticancer Research. 24, 1529-1544 (2004).</li>
<li>Jakupec, M. A., Galanski, M., Arion, V. B., Hartinger, C. G., Keppler, B. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antitumour+metal+compounds%3A+more+than+theme+and+variations%5BTitle%5D)+AND+%22Dalton+Transactions%22%5BJournal%5D)">Antitumour metal compounds: more than theme and variations.</a> Dalton Transactions. , 183-194 (2008).</li>
<li>Meléndez, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Titanium+complexes+in+cancer+treatment%5BTitle%5D)+AND+%22Critical+Reviews+in+Oncology%2FHematology%22%5BJournal%5D)">Titanium complexes in cancer treatment.</a> Critical Reviews in Oncology/Hematology. 42, 309-315 (2002).</li>
<li>Evangelou, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Vanadium+in+cancer+treatment%5BTitle%5D)+AND+%22Critical+Reviews+in+Oncology%2FHematology%22%5BJournal%5D)">Vanadium in cancer treatment.</a> Critical Reviews in Oncology/Hematology. 42, 249-265 (2002).</li>
<li>Djordjevic, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antitumor+activity+of+vanadium+compounds%5BTitle%5D)+AND+%22Metal+ions+in+biological+systems%22%5BJournal%5D)">Antitumor activity of vanadium compounds.</a> Metal ions in biological systems. 31, 595-616 (1995).</li>
<li>Caruso, F., Rossi, M., Pettinari, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Anticancer+titanium+agents%5BTitle%5D)+AND+%22Expert+Opinion+on+Therapeutic+Patents%22%5BJournal%5D)">Anticancer titanium agents.</a> Expert Opinion on Therapeutic Patents. 11, 969-979 (2001).</li>
<li>Caruso, F., Rossi, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antitumor+titanium+compounds%5BTitle%5D)+AND+%22Mini-Review+in+Medicinal+Chemistry%22%5BJournal%5D)">Antitumor titanium compounds.</a> Mini-Review in Medicinal Chemistry. 4, 49-60 (2004).</li>
<li>Kostova, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Titanium+and+vanadium+complexes+as+anticancer+agents%5BTitle%5D)+AND+%22Anti-Cancer+Agents+in+Medicinal+Chemistry%22%5BJournal%5D)">Titanium and vanadium complexes as anticancer agents.</a> Anti-Cancer Agents in Medicinal Chemistry. 9, 827-842 (2009).</li>
<li>Tshuva, E. Y., Ashenhurst, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cytotoxic+Titanium%28IV%29+Complexes%3A+Renaissance%5BTitle%5D)+AND+%22European+Journal+of+Inorganic+Chemistry%22%5BJournal%5D)">Cytotoxic Titanium(IV) Complexes: Renaissance.</a> European Journal of Inorganic Chemistry. , 2203-2218 (2009).</li>
<li>Buettner, K. M., Valentine, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bioinorganic+Chemistry+of+Titanium%5BTitle%5D)+AND+%22Chemical+Reviews%22%5BJournal%5D)">Bioinorganic Chemistry of Titanium.</a> Chemical Reviews. 112, 1863-1881 (2012).</li>
<li>Meker, S., Margulis-Goshen, K., Weiss, E., Magdassi, S., Tshuva, E. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High+antitumor+activity+of+highly+resistant+salan-titanium%28IV%29+complexes+in+nanoparticles%3A+an+identified+active+species%5BTitle%5D)+AND+%22Angewandte+Chemie+International+Edition+in+English%22%5BJournal%5D)">High antitumor activity of highly resistant salan-titanium(IV) complexes in nanoparticles: an identified active species.</a> Angewandte Chemie International Edition in English. 51, 10515-10517 (2012).</li>
<li>Reytman, L., Braitbard, O., Tshuva, E. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Highly+cytotoxic+vanadium%28V%29+complexes+of+salan+ligands%3B+insights+on+the+role+of+hydrolysis%5BTitle%5D)+AND+%22Dalton+Transactions%22%5BJournal%5D)">Highly cytotoxic vanadium(V) complexes of salan ligands; insights on the role of hydrolysis.</a> Dalton Transactions. 41, 5241-5247 (2012).</li>
<li>Tzubery, A., Tshuva, E. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cytotoxicity+and+Hydrolysis+of+trans-Ti%28IV%29+Complexes+of+Salen+Ligands%3A+Structure-Activity+Relationship+Studies%5BTitle%5D)+AND+%22Inorganic+Chemistry%22%5BJournal%5D)">Cytotoxicity and Hydrolysis of trans-Ti(IV) Complexes of Salen Ligands: Structure-Activity Relationship Studies.</a> Inorganic Chemistry. 51, 1796-1804 (2012).</li>
<li>Tshuva, E. Y., Peri, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Modern+cytotoxic+titanium%28IV%29+complexes%3B+Insights+on+the+enigmatic+involvement+of+hydrolysis%5BTitle%5D)+AND+%22Coordination+Chemistry+Reviews%22%5BJournal%5D)">Modern cytotoxic titanium(IV) complexes; Insights on the enigmatic involvement of hydrolysis.</a> Coordination Chemistry Reviews. 253, 2098-2115 (2009).</li>
<li>Shavit, M., Peri, D., Manna, C. M., Alexander, J. S., Tshuva, E. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Active+cytotoxic+reagents+based+on+non-metallocene+non-diketonato+well-defined+C-2-symmetrical+titanium+complexes+of+tetradentate+bis%28phenolato%29+ligands%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+the+American+Chemical+Society%22%5BJournal%5D)">Active cytotoxic reagents based on non-metallocene non-diketonato well-defined C-2-symmetrical titanium complexes of tetradentate bis(phenolato) ligands.</a> Journal of the American Chemical Society. 129, 12098-12099 (2007).</li>
<li>Mosmann, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rapid+Colorimetric+Assay+for+Cellular+Growth+and+Survival+-+Application+to+Proliferation+and+Cyto-Toxicity+Assays%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Immunological+Methods%22%5BJournal%5D)">Rapid Colorimetric Assay for Cellular Growth and Survival - Application to Proliferation and Cyto-Toxicity Assays.</a> Journal of Immunological Methods. 65 (83), 55-63 (1983).</li>
<li>Ahmadian, S., Barar, J., Saei, A. A., Fakhree, M. A. A., Omidi, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cellular+Toxicity+of+Nanogenomedicine+in+MCF-7+Cell+Line%3A+MTT+assay%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Cellular Toxicity of Nanogenomedicine in MCF-7 Cell Line: MTT assay.</a> Journal of Visualized Experiments. (26), e1191(2009).</li>
<li>Gonzalez, R. J., Tarloff, J. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evaluation+of+hepatic+subcellular+fractions+for+Alamar+blue+and+MTT+reductase+activity%5BTitle%5D)+AND+%22Toxicology+in+Vitro%22%5BJournal%5D)">Evaluation of hepatic subcellular fractions for Alamar blue and MTT reductase activity.</a> Toxicology in Vitro. 15, 257-259 (2001).</li>
<li>Denizot, F., Lang, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rapid+Colorimetric+Assay+for+Cell-Growth+and+Survival+-+Modifications+to+the+Tetrazolium+Dye+Procedure+Giving+Improved+Sensitivity+and+Reliability%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Immunological+Methods%22%5BJournal%5D)">Rapid Colorimetric Assay for Cell-Growth and Survival - Modifications to the Tetrazolium Dye Procedure Giving Improved Sensitivity and Reliability.</a> Journal of Immunological Methods. 89, 271-277 (1986).</li>
<li>Alley, M. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Feasibility+of+drug+screening+with+panels+of+human+tumor+cell+lines+using+a+microculture+tetrazolium+assay%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Research%22%5BJournal%5D)">Feasibility of drug screening with panels of human tumor cell lines using a microculture tetrazolium assay.</a> Cancer Research. 48, 589-601 (1988).</li>
<li>Weyermann, J., Lochmann, D., Zimmer, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+practical+note+on+the+use+of+cytotoxicity+assays%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Pharmaceutics%22%5BJournal%5D)">A practical note on the use of cytotoxicity assays.</a> International Journal of Pharmaceutics. 288, 369-376 (2005).</li>
<li>Chmura, A. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Group+4+complexes+with+aminebisphenolate+ligands+and+their+application+for+the+ring+opening+polymerization+of+cyclic+esters%5BTitle%5D)+AND+%22Macromolecules%22%5BJournal%5D)">Group 4 complexes with aminebisphenolate ligands and their application for the ring opening polymerization of cyclic esters.</a> Macromolecules. 39, 7250-7257 (2006).</li>
<li>Sebaugh, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Guidelines+for+accurate+EC50%2FIC50+estimation%5BTitle%5D)+AND+%22Pharmaceutical+Statistics%22%5BJournal%5D)">Guidelines for accurate EC50/IC50 estimation.</a> Pharmaceutical Statistics. 10, 128-134 (2011).</li>
<li>Yung, W. K. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vitro+Chemosensitivity+Testing+and+its+Clinical-Application+in+Human+Gliomas%5BTitle%5D)+AND+%22Neurosurgical+Review%22%5BJournal%5D)">In vitro Chemosensitivity Testing and its Clinical-Application in Human Gliomas.</a> Neurosurgical Review. 12, 197-203 (1989).</li>
<li>McCarthy, N. J., Evan, G. I. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aMcCarthy%2C+NJ+%22Current+Topics+in+Developmental+Biology%22">Current Topics in Developmental Biology</a>. 36, 259-278 (1997).</li>
</ol>

Yazarlar, hiçbir rakip mali çıkarları var beyan.

Bu yazıda tarif edildiği gibi bir yöntem, biyolojik hücre canlılığı deneyi ile, kimyasal sentez birleştirir. Canlı hücreler ile ilgili herhangi bir biyolojik yöntemlerle olduğu gibi, laminar bir kaput çalışma ve steril organik çözücülerin kullanılması dahil olmak üzere steril koşullar korumak için çok önemlidir. Ayrıca, hidrolitik olarak stabil olmayan metal bazlı ilaçların hazırlanması ve depolanması için olan bir eldiven kutusu ya da bir Schlenk hat teknikleri kullanılması gerekmektedir, atıl koşullar altında gerçekle...

Kemoterapi hala çeşitli kanser hastalıkları için klinikte kullanılan tedavilerin temel derslerden biridir ve araştırma böylece büyük miktarda yeni ve geliştirilmiş antikanser ilaçlar geliştirmek amacı ile dünya çapında yapılır. Bu tür çalışmalar, daha çok in vitro sitotoksik biyolojik özelliklerinin değerlendirilmesi ardından bileşiklerin tasarımı ve hazırlığı ile, kimyasal düzeyinde başlar. Hücre canlılığı, hücresel aktivite 1-2 ile ilgili bilgi sağlayacak çeşitli deneyleri ile değerlendirilebilir. Cisplatin yaygın olarak testis ve yumurtalık kanserlerinde 3-4 için ağırlıklı olarak etkili bir tedavi olarak kabul edilir bir kemoterapötik ajan olarak kullanılan bir platin kompleksi bir örnektir. Bununla birlikte, dar bir aktivite yelpazesi ve ciddi yan etkiler diğer kuvvetli geçiş metali komplekslerinin 5-8 çalışmaları tetikler. Diğerlerinin arasında, titanyum (IV) ve vanadyum (V) kompleksleri, yüksek aktivite ümit verici sonuçlar göstermiştir ve azaltılmıştoksisite 9-16. Ti (IV) kompleksleri nedeniyle bu özelliklerinden sisplatin sonrasında klinik denemeler girmek için ilk idi, ancak onlar yüzünden formülasyon zorluklar ve hidrolitik istikrarsızlığa denemeler başarısız olmuştur. Su direnci 15,17-21 yüksek anti-kanser aktivitesi birleşebilmektedir, bu metal komplekslerinin gelişmiş türevlerini geliştirmek için geçerli bir ihtiyaç vardır. Ti (IV) ve V hazırlanmasında bir sorun (V) kompleksleri öncü reaktifleri hidrolitik kararsızlık anlamına gelir ve bu nedenle, atıl bir atmosfer muhafaza edilmelidir. Ti (IV) ve V (V) bileşiklerinin hazırlanması Bir eldiven kutusu ya da bir Schlenk hat teknikleri kullanılarak N, 2 veya Ar koşullar altında gerçekleştirilmektedir. Tahlil - anti-kanser etkinliğinin değerlendirilmesi için yaygın bir yöntem, MTT ((4,5-Dimetiltiazolil) -2,5-difeniltetrazolyum bromür 3) üzerine dayanmaktadır. Bu deney, Mosmann 1983 sunulan bir kolorimetrik canlılık deneyidir22. Bu, son derece iyi çalışılmış ve karakterize edici özelliği, ve nedeniyle hassas, hız ve hücre çizgilerinin çeşitliliği uygulanacak yeteneği yeni sitotoksik bileşiklerin etkinliğini değerlendirmek zaman yüksek verimli olarak kabul edilir. Bu deney, bu canlılığı yaşayabilir hücrelerin maruz kaldığı MTT molekülün renk değişikliğine dayanmaktadır. Canlı hücre sayısı ile orantılıdır emme, ve muamele edilmemiş kontroller ile karşılaştırıldığında ölçülmesi, test edilen bileşiğin, hücre büyüme inhibisyonu yetenekleri değerlendirilmesini sağlar. MTT kolorimetrik deneyi, 96 kuyucuklu bir plaka biçiminde 23 olarak gerçekleştirilmiştir. Hücreler, test edilen ilaç eklenmesinden önce kuyularda, bir ön kuluçka gerektirebilir. Inkübasyon saatleri hücre hattı özelliklerine bağlı olarak 0-24 saat arasında değişebilir. Hücreler, genellikle, ilaç aktivitesine bağlı olarak 24-96 saat boyunca ilaca maruz kalmaktadır. MTT çözeltisi daha sonra bağırma muamele edilmiş hücrelere ilave edilirow MTT (Şekil 1) 24 canlı hücrelerde işlevsel olan mitokondrial ve sitosolik enzimlerin çeşitli mor formazan indirgenir. MTT molekül ölü hücre ya da kırmızı kan hücrelerinin (metabolik açıdan aktif olmayan hücre), dalak hücreleri (dinlenme hücreleri) ve konkanavalin A ile uyarılan lenfosit (aktif hücreler) 22 ile azaltılmaz. MTT formazan çökeltiler ile inkübasyon 3-4 saat sonra. Formazan oluşumu inkübasyon 0.5 saat sonra başlar, ama en iyi sonuçlar için en az 3 saat 22 boyunca MTT hücreleri ortaya çıkarmak için en iyisidir. Sonuç olarak, yetiştirme ortamı çıkarıldı ve DMSO da 26 kullanılabilir olmasına rağmen, formazan, organik bir çözücü, tercihen de 25 izopropanol içinde eritilir. Ortamın ortadan kaldırılması büyüme ortamı içinde çok yaygın olan fenol kırmızı, bu yana doğru sonuçlar elde etmek, ve proteinler absorbans ölçümü 25 engelleyebilir çökeltilmesi için çok önemlidir. Ne zaman formazan çözelti, çözeltinin absorbansı, bir mikro-plaka okuyucu spektrofotometre kullanılarak ölçülmüştür, homojen ulaşır. 550 nm&#39;de absorbans, oyuk başına 200-50.000 hücre aralığındaki hücre sayısı ile doğru orantılıdır ve bu nedenle hücre çok küçük miktarlarda 22 tespit edilebilir. Absorbans ilaç ile tedavi sonrasında kalan canlı hücre miktarı belirtir ve ilaca maruz bırakılmamış kontrol hücreler absorbans ile karşılaştırılır. Uygun yazılım ile sonuçların analizi IC 50 (inhibisyon konsantrasyon,% 50) içerir ve bunların değerlerinin istatistiksel hatalar ölçümün kaç kez tekrar göre. MTT deneyi doğruluğu ve göreli basitliği nedeniyle yeni antikanser bileşikleri, taranması için sitotoksisite çalışmalarında yaygın olarak yaygındır. Enzimatik reaksiyon bağlı olan MTT tahlili kullanarak, ancak, bir çeşitli enzim inhibitörleri MTT An indirgenmesini etkileyebilir dikkat edilmesi gereken hususlaryanlış sonuçlara yol 27 d. Buna ek olarak, MTT deneyi, ilacın 2 sitotoksik aktivitesinin moleküler mekanizma hakkında herhangi bir bilgi sağlamaz.

<table><tbody><tr><td colspan="4"><güçlü>Reaktif/Malzeme</güçlü></td></tr><tr><td>fetal sığır serumu (FBS)</td><td>Biyolojik Endüstriler</td><td>04-007-1A</td><td></td></tr><tr><td>Hekzan AR</td><td>Gadot</td><td>830122313</td><td>Bir solvent kurutma sistemi kullanılarak kurutulmuştur</td></tr><tr><td>HT-29 hücre hattı</td><td>ATCC</td><td>HTB-38</td><td></td></tr><tr><td>İzopropanol AR</td><td>Gadot</td><td>830111370</td><td></td></tr><tr><td>L-glutamin</td><td>Biyolojik Endüstriler</td><td>03-020-1B</td><td></td></tr><tr><td>MTT</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>M5655-1G</td><td></td></tr><tr><td>Penisilin / streptomisin antibiyotikler</td><td>Biyolojik Endüstriler</td><td>03-031-1B</td><td></td></tr><tr><td>RPMI-1640 fenol kırmızısı ile L-glutamin</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>R8758</td><td></td></tr><tr><td>RPMI fenol kırmızısı olmadan</td><td>Biyolojik Endüstriler</td><td>01-103-1A</td><td></td></tr><tr><td>Tetrahidrofuran (THF) AR</td><td>Gadot</td><td>830156391</td><td>bir solvent kurutma sistemi kullanılarak kurutulur</td></tr><tr><td>Ti(OiPr)4</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>205273-500ML</td><td>neme duyarlı</td></tr><tr><td>Tripsin/EDTA</td><td>Biyolojik Endüstriler</td><td>03-052-1B</td><td></td></tr><tr><td>VO(OiPr)3</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>404926-10G</td><td>nem sensitive</td></tr><tr><td colspan="4">equipment</strong</td></tr><tr><td>>12 kanallı pipet 30-300 & mu; l</td><td>Thermo Scientific</td><td></td><td></td></tr><tr><td>12 kanallı pipet 5-50 &mu; l</td><td>Finnpipet</td><td></td><td></td></tr><tr><td>75 cm 2 şişesi</td><td>NUNC</td><td>156472</td><td></td></tr><tr><td>kapaklı 96 oyuklu plaka (düz tabanlı)</td> <td>NUNC</td><td>167008</td><td></td></tr><tr><td>CO2 İnkübatör</td><td>Bağlayıcı</td><td>APT.line C150</td><td></td></tr><tr><td>Sayaç odası</td><td>Marienfeld-Superior</td><td>650030</td><td></td></tr><tr><td>Eppendorf şişesi</td><td>KARTELL</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Torpido gözü</td><td>M. Braun</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Laminer akış başlığı</td><td>ADS LAMINAIRE</td><td>OPTIMALE 12</td><td></td></tr><tr><td>Mikroplaka okuyucu spektrofotometresi</td><td>Bio-Tek</td><td>El-800</td><td></td></tr><tr><td>Mikroskop</td><td>Nikon</td><td>Eclipse TS100</td><td></td></tr><tr><td>Pipet 20-200 &mu; l</td><td>Finnpipette</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Pipet 5-50 &mu; l</td><td>Finnpipet</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

mtt deneyi ile sentez ve sitotoksisite değerlendirilmesi: anticancer metal kompleksleri

Anticancer Metal Complexes: Synthesis and Cytotoxicity Evaluation by the MTT Assay

Titanyum (IV) ve vanadyum (V) komplekslerinin yüksek ölçüde kuvvetli anti-kanser ajanlardır. Bunların sentezinde bir meydan okuma hidrolitik kararsızlık anlamına gelir, bu nedenle bunların hazırlanması bir inert atmosfer altında yapılmalıdır. Bu komplekslerin Antikanser aktivitesinin değerlendirilmesi MTT deneyi ile elde edilebilir. MTT deneyi, bu canlı hücreler maruz kaldığı zaman formazan MTT molekülün enzimatik azalma dayanan kolorimetrik canlılık deneyidir. Indirgeme sonucu, MTT molekülünün bir renk değişimdir. Bir kontrole göre emme ölçümleri bileşik, anti-kanser aktivitesi ve IC50 değerlerine çevrilmiştir bir test edilen bileşiğin, değişen konsantrasyonları ile tedavi sonrası canlı kalan kanser hücrelerinin yüzdesini belirlemek. MTT deneyi doğruluğu, hız ve nispi basitliği nedeniyle sitotoksisite çalışmalarda yaygın olarak yaygındır. Burada biz preHücre plakaların hazırlanması hücreleri ile inkübe bileşiklerin dahil olmak üzere hava duyarlı metal bazlı ilaç ve hücre canlılığı ölçümlerin sentezi için ayrıntılı bir protokol gönderilen, MTT deneyi ve IC50 değerlerinin tayini kullanılarak canlılığı ölçümleri.

Bu kompleksler, yerleşik prosedürlere 18,28 ve saflığı NMR ve element analizi ile değerlendirilebilir göre hazırlanmıştır. MTT deneyi alınan veriler, bileşiğin 18,21 sitotoksisitesini değerlendirmek için analiz edilir. İlk olarak, tüm diğer değerleri işlenmemiş kontrol absorbans değerinin çıkarılması gerçekleştirilir. İkinci olarak, çözücü THF kontrol değeri bileşiği herhangi bir büyüme inhibe edici olarak ilave edildi,% 100 canlılığı ayarlanır. Diğer tüm değerler kontr...

Havaya duyarlı bir titanyum ve vanadyum anti-kanser ajanlarının sentezi için bir yöntem olup, MTT testi ile insan kanser hücre çizgisi karşı sitotoksik aktivitenin değerlendirilmesi ile birlikte tarif edilmiştir.

MTT deneyi ile sentez ve Sitotoksisite Değerlendirilmesi: Anticancer Metal Kompleksleri

Titanium (IV) and vanadium (V) complexes are highly potent anticancer agents. A challenge in their synthesis refers to their hydrolytic instability; ...

Bu prosedürün genel amacı, antikanser metalilaçlar hazırlamak ve bunların sitotoksisitesini MTT analizi ile değerlendirmektir. Bu işlem, öncelikle metal bazlı antikanser bileşiklerin sentezlenmesiyle gerçekleştirilir. İkinci adım ise kanser hücrelerinden oluşan 96 kuyucuklu plakaların hazırlanmasıdır.Ardından, metal tabanlı anti-kanser bileşikleri kanser hücrelerine aktarılır. Son adım, hücre canlılığının MTT testi ile ölçülmesidir; bu testte MTT'nin mitokondriyal ve sitozolik enzimler tarafından indirgenerek formazan oluşturması ölçülür ve sonuç olarak anti-kanser aktivitesi ile yarı maksimum inhibitör konsantrasyonu veya bileşiklerin IC50 değerleri belirlenir.Genellikle bu yöntemde yeni olan kişiler, laboratuvar çalışanının tam dikkatini gerektiren ve sıkı bir zaman çizelgesine bağlı olan çok adımlı bir prosedür olması nedeniyle zorluk yaşayabilirler. Canlı hücrelerle çalışmak belirli kılavuzların takip edilmesini gerektirdiğinden, hücre plakası hazırlama işlemi basit olmadığından bu yöntemin görsel gösterimi kritik önem taşır. Bir glove box içerisinde, 0,42 millimole ligand öncülünü kuru THF içinde çözerek vanadyum beş kompleksini hazırlayın.Ardından, bunu THF içindeki eş miktar

anticancer-metal-complexes-synthesis-cytotoxicity-evaluation-mtt

Research

JoVE Journal

Chemistry

Kimya

MTT testi sarı MTT azaltılması ve suda çözünmeyen mor formazan üretimine dayalı hücre canlılığının değerlendirilmesi için kolay ve tekrarlanabilir kolorimetrik assay. Burada, nanogenomedicine tedavi üzerine MCF-7 hücre canlılığı değerlendirildi.

MCF-7 Hücre Line Nanogenomedicine Hücresel Toksisite: MTT assay

Bu videoda, kanser hücrelerinde ilaca bağlı sitotoksisiteyi ölçmek ve metabolik aktivitelerini belirlemek için kolorimetrik test, metil tiyazol tetrazolyum (MTT) testi açıklanmaktadır. Bu tahlil, tetrazolyum tuzlarının, hücrelerin mitokondriyal aktivitesini yansıtan renkli ürünlere metabolik dönüşümüne dayanmaktadır.

Metil tiyazolil tetrazolyum veya MTT testi: kanser hücrelerinde metabolik aktivitenin belirlenmesi yoluyla ilaç direncini ölçmek için kolorimetrik bir test

Burada, tümör hücresi metabolizmasının gerçek zamanlı izlenmesi, in vivo tavuk embriyosu koryo-allantoik membran (CAM) metastaz modeli ile birleştirildiğinde, tümör hücrelerini DNA'ya zarar veren kemoterapötiklere duyarlı hale getirme yetenekleri açısından yeni anti-kanser hedeflerini/ajanlarını değerlendirmek için kullanılır.

Kanser İlaç Duyarlılık Etkinliğinin Değerlendirilmesi<em&gt; İn Vitro</em&gt; Ve<em&gt; İn Vivo</em

Bu iletişim kuralı, antikanser bir antikor ve antineoplastic ilaçlar içinde Preklinik modelleri arasında synergism Chou ve Talalay birlikte Dizin denklemi kullanarak değerlendirmek açıklar.

Antikanser antikor etkinliğinin Antineoplastic uyuşturucu tarafından kullanılmasının muhtemelen: antikor-uyuşturucu Synergism kombinasyon Dizin denklem kullanılarak tespiti

Protokol, hücresel canlılığı verimli bir şekilde belirlemek için hızlı, yüksek verimli, güvenilir, ucuz ve tarafsız bir testi tanımlar. Bu tahlil özellikle hücrelerin mitokondrisi hasar gördüğünde yararlıdır, bu da diğer tahlilleri bozar. Hoechst 33342 ve propidium iyodür - Tsay iki nükleer boya ile boyanmış hücrelerin otomatik sayma kullanır.

Mitokan Sitotoksisitesinin Doğru Tayini için Otomatik Diferansiyel Nükleer Boyama Denemesi

Bu metodoloji, akış sitometrisi, RT-PCR, immünositokimya ve diğer hücresel ve moleküler biyoloji teknikleri dahil olmak üzere canlılık testleri ve fenotipik analizler kullanarak, çözünür ekstraktların hazırlanması yoluyla biyomateryal sitotoksisitesini değerlendirmeyi amaçlamaktadır.

Sitotoksisiteye Erişim ve Biyomateryallere Hücre Yanıtı

Burada, daha önce sentezlenmiş spirosiklik oksimleri test etmek için 3-(4′,5′-dimetiltiazol-2′-il)-2,5- difeniltetrazolyum bromür (MTT) kullanan bir biyotahlil tarif ediyoruz.

İşlevselleştirilmiş spirrosiklik heterosiklus sentezi ve sitotoksisite testi

Bu protokol, terapötik bir anti-HER-2 antikoru varlığında doğal öldürücü hücre aracılı meme kanseri hücresi öldürmeyi modüle eden bileşikleri tanımlamak için otomatik, görüntü tabanlı yüksek verimli bir teknik sunar.

Antikor Bağımlı Hücresel Sitotoksisiteyi Modifiye Eden Bileşiklerin Tanımlanması için Yüksek İçerikli Tarama Testi

İyon kanallarının farmakolojik olarak hedeflenmesi, solid tümörlerin tedavisinde umut verici bir yaklaşımdır. Kanser hücrelerinde iyon kanalı fonksiyonunu karakterize etmek ve iyon kanalı modülatörlerinin kanser canlılığı üzerindeki etkilerini test etmek için ayrıntılı protokoller sağlanmıştır.

Kanser Hücrelerinde İyon Kanallarının Taranması

Burada, antitümör antikorların önemli bir kanser hücresi öldürme mekanizması olan ADCC mekanizmasını modüle eden bileşikleri tanımlamak için bir yöntem sunuyoruz. NK hücrelerinin sitotoksik etkisi, Trastuzumab varlığında meme kanseri hücre sferoidlerinde ölçülür. Görüntü analizi, sferoidlerdeki canlı ve ölü öldürücü ve hedef hücreleri tanımlar.

Bir Tümör Sferoid Modelinde Antikora Bağımlı Hücresel Sitotoksisitenin Ölçülmesi: İlaç Keşfi Uygulaması

Burada, bir ADCC biyo-tahlil kiti kullanarak antikora bağımlı, hücre aracılı sitotoksisite (ADCC) testi için bir protokol sunuyoruz. Bu yöntem, ADCC mekanizmasını aydınlatmak ve kanser immünoterapisinde antikorların terapötik potansiyelini değerlendirmek için değerli bir araç sunmaktadır.

Antikora Bağımlı Hücre Aracılı Sitotoksisite Raportörü Biyotahlil Kullanılarak Kanser Hücrelerinde Antikora Bağımlı, Hücre Aracılı Sitotoksisitenin Değerlendirilmesi

Keşfedin titanyum ve vanadyum bazlı antikanser metal komplekslerinin sentezi ve MTT deneyi ile sitotoksisite değerlendirmesini. Bu yöntem, yeni metallo ilaçların etkinliğini belirlemek için araştırmacılara yardımcı olur.

MTT deneyi ile sentez ve Sitotoksisite Değerlendirilmesi: Anticancer Metal Kompleksleri

Daha fazla video keşfet