Name: Hücre Takip için vivo 19 F MRG (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2013-11-25T21:10:00.000+00:00
Duration: 10 min 5 s
Description: Öğrenin, 19F MRG kullanarak fare modelinde hücre takibi ve kantifikasyonu için invivo görüntüleme protokolü. Bu yöntem, hücre davranışlarını klinik ve preklinik ortamlarda inceler.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Biz onların değerli yardım için Nadine Henn ve Arend Heerschap kabul etmek istiyorum. Bu çalışma Rejeneratif Tıp Hollanda Enstitüsü (Nirm, FES0908), AB 7.ÇP programı ENCITE (SAĞLIK-F5-2008-201842) ve TargetBraIn (SAĞLIK-F2-2012-279017), Volkswagen Vakfı hibe (tarafından desteklenen I/83 443), Hollanda Bilimsel Araştırma Örgütü (VENI 700.10.409 ve Vidi 917.76.363), ERC (Advanced Grant 269.019), ve Radboud Üniversitesi Nijmegen Tıp Merkezi (AGIKO 2008-2-4).

Not: hayvanları içeren tüm deneyler ve işlemler, ilgili etik kurallara uygun olarak yürütülen ve standart hayvan bakımı ve insani gereklilikleri ile uyumlu olmalıdır. 1.. Hücre Etiketleme (Coincubation Standart Protokolü) <ol><li> (2 ml ortam içinde) 4 mg/10 6 hücre konsantrasyonunda olgunlaşmamış DC&#39;lerin 19 F etiket 8 ekleyin. Karıştırmak için hafifçe karıştırılır. </li><li> DH&#39;lerin olgunlaşma ve hasat için 3 gün önce etiketli hücreleri inkübe. </li><li> DH&#39;lerin toplayın ve PBS yıkama en az 3&#39;lü tarafından aşırı etiketi çıkarın. Hücreleri saymak. </li><li> Enjeksiyon ya da daha fazla test için PBS küçük bir hacmi içinde yeniden süspanse edin. </li></ol> Not: Bu protokol, bu özel DClerin ve etiket için geçerlidir. Bu protokolün odak görüntüleme üzerinde olduğundan prosedür, başka bir yayın 8 optimize edilmiş ve dahil burada görüntü için bir numune hazırlamak için sadece adım oldu. Hence, izolasyon, kültür ve belirli bir hücre tipi etiketleme için protokol literatürde bulunan veya araştırmacı tarafından optimize edilmesi gerekir ya. Literatürde kullanılmış olan diğer tüm 19F etiketlerin bir özeti başka 6 sunulmuştur. 2. 19F NMR kullanarak 19 F / hücre tayini <ol><li> Bir NMR tüpü içinde etiketlenmiş hücre bilinen bir dizi (tipik olarak en fazla 0.5 x 10 6, ya da yeterli sinyali ile sonuçlanan bir dizi) koyun. </li><li> % 5 trifloroasetik asit (TFA) 10 ul ekle. TFA rezonans frekansı etiket ile üst üste nedeniyle uygun değilse, tercihen tek bir 19 K rezonans ile, alternatif bir çözünür bir bileşik kullanımı. </li><li> Bir NMR spektrometresinde örnek yerleştirin ve 19 F spektrumu elde. Bant genişliği TFA (referans) ve ajanın her ikisi için yeterli olduğundan emin olun. </li></ol> Not: TR f için yeterince uzun olmalıdırull referans gevşeme ve örnek spin (tüp en uzun T 1 bileşenin yaklaşık 5 kat T 1 gevşeme süresi genellikle TR ~ 5-8 saniye). Bazı spektrometre bir frekans kilit sinyali için D 2 O gerektirir. Standart bir 19 F spektrum yeterlidir. Hücre sayıları düşük ise etiketin hücre alımı yetersiz ise veya geniş ortalama veya yüksek hücre sayıları gerekli olacaktır. Düzeltmeler kısmi uyarma için hesap yapılmadıkça spektrumu, referans ve ilgili etiket zirveleri arasında merkezli olmalıdır. <ol start="4"><li> Referans ve numune (ya da numune ana tepe noktası) tepe değeri altında bu alanlara göreli hesaplayın ve daha sonra numune 19 F&#39;nin / hücre ortalama sayısını hesaplamak. </li></ol> Not: Tüm işlem tekrarlandı ve istatistiksel anlamlılık ulaşmak için yeterli yoğun ortalama gerekir. Bu, MRI tarayıcı doğrudan spektroskopisi kullanılarak da yapılabilir. However, bu prosedür, hücrelerin geniş bir sayısı değil, hücreler arasındaki değişkenlik için yalnızca ortalama 19 F yükleme ortaya unutmayın. Hücre alımının kontrol edilmesi tekdüzelik 19 F maddenin bir floresan bileşeninin varlığını gerektirir, bu nedenle bu hücre alımı mikroskobu kullanarak ya da akış sitometrisi analiz edilebilir. 3. Hücre Enjeksiyonu - Deneysel Tasarım Hususlar Nedeniyle hücre takibi, hücreler, çok sayıda lokalize olacak bir hayvan modelinde boyunca 19 F MR nispeten zayıf hassasiyet vivo görüntüleme başarılı için gereklidir. Tipik duyarlılık değerleri 10 11 13 -10 flor atomu aralığında bir hücre yükleme ile, 1,000-100,000 cells/voxel/1 saat ikinci tarama süresini 6 arasında değişir. Bu anestezik seçimi etkiler gibi görüntüleme oturumları sayısı ve sıklığı dikkatle planlanmış olmalıdır. Isofloranın suitabl olmayabilir Not19 F MR için e izofluran 19 F rezonans frekansı kullanılan etiket bileşiğin buna yakın ise. görüntüleme oturumları önemli birikmesini önlemek için yeterince kısa ise izofluran hala uygun olabilir. Birçok alternatif anestezik literatürde 10,11 kullanılmaktadır, bir örnek görüntüleme protokolü dahildir. Anestezikler farklı fare suşları ve hastalık modelleri için optimize edilmesi gerekebilir. 4. Harici 19 F Referans tasarım <ol><li> 12 ölçümü için 19 F sinyalinin bilinen bir miktarını içeren bir dış başvuru kullanın. Konuyla beklenen kabaca karşılaştırılabilir olması için referans sinyal yoğunluğunu seçin. </li></ol> Not: referans bileşiği gevşeme parametreleri maç için, hücre etiket olarak aynı ise Genel olarak, basit,. Uzamsal lokalizasyonu olmayan spektroskopik sekansları veya dizilerinin kullanıldığı takdirde, o zaman acompound farklı kimyasal kayma ile gerekli olabilir. <ol start="2"><li> Faiz (ROI) bölgeye bağımlı gerekli yerleştirme, boyut ve başvuru şekli, değiştirin. Not: Bu başvuru için üniform kesitli tüpler genellikle kullanımı kolay değildir. </li></ol> 5. Görüntüleme ve Fare Hazırlık <ol><li> 10 mg / ml ketamin stok solüsyonları ve 2 mg / ml ksilazin elde etmek üzere fizyolojik tuzlu su ile ticari olarak temin edilebilir ketamin ve ksilazin 1:10 v / v seyreltin. </li><li> Fare görüntülü önce delik sıcak olacak sağlamak için tarayıcı (genellikle sıcak hava) ısıtma sistemi açın. </li><li> 100 mg / kg ketamin enjekte edilir ve 10 mg / kg xylazine intraperitoneal anestezi başlatmak için. Not: Bu dozlar CD1 (ICR) ve NU-Foxn1 nu 8 haftalık erkek fareler için test edilmiştir. Diğer suşlar ayrı deneyde optimize edilmelidir biraz farklı dozlar gerekebilir. Bu doz için anestezi fare tutacakmaçın 45 dk. Not: Hayvan bir ayak tutam herhangi bir tepki gösterirse anestezi derinliği normal olarak yeterlidir. </li><li> Anestezi sonra, bir hayvan beşiği hayvan koyun ve MRI sırasında hareket etmesini önlemek için hareketsiz. Gerekirse, yanındaki hayvana dış başvuru yerleştirin. Referans ile ROI (enjekte edilen hücrelerin beklenen konumu) Her iki bobinin merkezinde olmalıdır. Hayvan tarama sırasında fizyolojik izlenmesi için sıcaklık ve nefes kontrol bağlı olmalıdır. </li><li> Uzun görüntüleme oturumları sırasında kurumasını önlemek için steril göz merhemi ile fare gözlerini örtün. </li><li> Görüntüleme süresi 40 dakika geçerse hayvan uyanabilir önce ek ketamin / ksilizin enjeksiyon için ek kateterler hazırlamak. Ketamin ve ksilizin çalışma çözümleri ile pozisyon iki ayrı cilt altı kateter. Fareye ilk 40 dakika sonra, ketamin ek 2.5 mg, her 20 dakika vermek için bu kateter. Eğer gerekirse, bundan başka, ilk enjeksiyondan sonra, kateter yoluyla ek 0.5 mg ksilazin enjeksiyonu ile 100 dakika anestezi uzatır. Her durumda, deney süresi muhtemelen terminali anestezi altında 3 saat dışında, geçmemelidir. </li><li> Fare, ilk enjeksiyondan hemen sonra ısıtılmış ve 37 ° C vücut sıcaklığında muhafaza olduğundan emin olun. Bu protokol ile, &lt;% 80, kan oksijenlenme atmosfer havası nefes altında tespit edildi. , Indirdi kan oksijenlenme yan etkileri önlemek% 100 oksijen (0.3 L / dk) kullanın. Vücut sıcaklığı ve nefes bütün deney boyunca ve hayvanın tam iyileşme kadar kontrol edilmelidir. Ketamin / xylazine altında spontan solunum oranı (200-250/min) çok yüksek olduğunu unutmayın. Solunum model yerine, solunum oranı düzensizlikler, daha yüksek bir doz, uygun bir anestezi durumunu korumak için gerekli olduğunu gösterebilir. Fare nere 20-30 dakika içinde kendiliğinden uyanacakr anestezik son dozu. </li></ol> Not: Hücre takibi için, birden fazla aynı hayvan görüntü için gereklidir. Bu durumda, görüntüleme oturumları enstitü sistemi ve hayvan kullanımı kılavuzlardan anestezi temizlenmesi için gerekli süre dikkate alınarak planlanmalıdır. 6. Görüntüleme 1H ayarlamaları ve görüntüleme <ol><li> ROI farklı dilim yönelimleri ile düşük çözünürlüklü, anatomik tarama (a yerelleştirici) kullanarak İzomerkez olduğunu böylece tarayıcı içinde hayvan yerleştirin. </li><li> Örneğin bobin içindeki bütün hacmi üzerinde küresel altlıkla 1 H üzerinde düzenli layneri protokolünü kullanın. </li><li> Satıcı tarafından sağlanan ayar tarama kullanarak, Hermite 90 ° RF pulse 1 msn için dB olarak ölçülen verici gücü, yani referans darbe kazanç (RG), ayarlayın. </li></ol> Not: Bu ayar olacakRF bobin türüne göre değişir ve 19 F frekansta sinyal doğrudan ayarlamalar için genellikle çok düşük olduğu için 19 F MRI için gereklidir. Bunun bir sonucu olarak, RG bir tahmin 1H sinyali üzerinde ölçümler yapılmalıdır. Bir yüzey bobin ile RF iletim için, 1 H RG homojen B 1 profili ile bir hacim bobin için, faiz kısmından bobinine bir düzleme paralel ayarlanabilir olmalıdır, ayarı tam ayarları daha az önemlidir. <ol start="4"><li> 1H ve 19F RF iletim her ikisi de aynı (tek veya çift-ayarlı) RF bobini ile gerçekleştirilir sadece 19F referans nabız kazanç ayarlaması aşağıdaki protokol çalışır. Böyle bir görüntüleme kurulum için, 1 H üzerinde bobin profil (B 1 iletim alanı) sabit RG uygulanan 19 F bobin profili, orantılı olmalıdır, yani B 1,1 H = C * B 1,19 F bir pervane ileortionality sabit C. <ol><li> Bu bobin profilleri belirli bir kurulum için orantılıdır onaylamak için, 1 H ve 19 F fiske açısı haritayı kazanmak derece (1:1 v suda 19 F, örneğin TFA konsantre olan bir tüp (B 1 düzeltme üzerine aşağıdaki bölüme bakınız) / v) (Şekil 3) önceden,) özdeş alanlar-view (FOVs kullanarak. </li><li> Aynı RG kullanarak, her iki haritanın küresel faktörü C haricinde aynıdır kontrol </li><li> 1 H RG belirlendikten sonra, bu numarayı not. </li></ol></li><li> Yürütmek geleneksel 1H MR 19 F görüntüleme için bir anatomik referans olarak tarayın. Hücre marker 19 F frekans ayar sistemi ve 19 F MR tarama yürütmek. İdeal 19 F MRI taraması olacaktır aynı alan-görünümü ve 1H MR gibi dilim seçimi, genellikle daha düşük çözünürlüğe sahip olmasına rağmen. Hayvan kısa sürede IMAGI olarak canlandırıldı edilebilirng tamamlandı. Görüntü işleme sonra çevrimdışı yapılabilir. </li><li> Ilgili dB 19F = dB 1H yoluyla 19 F RG belirlemek -20 * 10 (C) log. Ayrı bir in vitro deneyde 19 F madde frekans tahmin. </li></ol> Not: in vivo, tam frekans farklı layneri koşulları nedeniyle deneme deney biraz değişebilir. Mümkünse tam frekans nedenle, 19 F MRS her deneyde tespit edilmelidir kimyasal kayma eserler önlemek için. Çok düşük 19 F sinyali için tipik bir tarama küresel (darbe edinin) spektroskopisi (TR = 200 msn, NEX = 3,000, TA = 10 dk, BW = 50 kHz) olacaktır. NEX, bu nedenle TA, önemli ölçüde yüksek 19F sinyali için azaltılabilir. 19 F madde frekans Fourier dönüşümü ve faz düzeltme sonra spektrumundan belirlenir. NEX uyarılmalar sayısını ifade eder, TA elde etme zamanı ve BW olduğubant genişliği. Not: Bir 11.7T/16 cm adanmış hayvan tarayıcıya Tipik görüntüleme parametreleri 9 şunlardır: Bir anatomik 1H görüntüleme bir turbo spin eko (TSE) dizi TR / etkili eko zamanı (TE eff) ile kullanarak tarama = 2.200 msec/42.8 msn, uyarma başına 8 yankıları, NEX = 2, 10 ardışık, 1 mm kalınlığında dilimler, FOV = 1.92 x 1.92 cm 2, 128 x 128 matris, yani 150 x 150 x 1.000 mikron 3, TA = 1 dak, BW = 50 çözünürlük kHz ve doğrusal bir faz kodlama düzeni. 19. F görüntüler aynı sırayla ve uygun geometri ile elde, ancak edildi alt düzlem çözünürlük ve düşük BW (NEX = 256, 48 x 48 matris, yani 400 x 400 x 1000 çözünürlüğe um 3, TA = 57 dakika, BW = 10 kHz). <ol start="7"><li> B 1 düzeltme Sinyal bağlıdır çünkü homojen olmayan B 1 profili, örneğin bir yüzey bobini ile RF bobini kullanılarak, 19 F veri miktarının engel olabilirsadece 19 F konsantrasyonuna hem de bobinden mesafe. Retrospektif doğru 19 F veri amacıyla 1H kanalda B 1 harita edinin. Bu, 1H ve 19F bobin profilleri orantılılık faktörü C haricinde aynı olduğu gerektirir ve yeterli 1H arka plan sinyali 19 F bölgelerde sağlanmaktadır 19 F spin eko dizisinin düzeltilmesi için bir örnek protokol 1 H ve 19 F hem de bir tek ayarlı Tx / Rx yüzey bobin ayarlanabilir kullanarak, sunulan ve oransal B 1 profil 13 ile almaktadır. <ol><li> Iki fiske açısı yöntemi 14 ile 1H çevirme açısı haritası edinin. Hemen altında 90 ° &#39;lik bir tahmini çevirme açısına sahip bir degrade yankı tarama ile çok uzun TR (&gt; 3 kez 1 HT 1) edinin. Bobinine kapatın. Bir RG ile ikinci bir gradyan eko taraması Edinme = dB 1H -6, yani iki kez kapakİlk tarama açısı. </li><li> 1H çevirme açısı hesaplayın, α, vokselin birinci ve ikinci gradiyent eko taramasından sinyal yoğunluklarının (SI) ile (x, y, z): α (x, y, z) = arcos (SI GE (1, x, y, z) / GE 2Si, 2 (x, y, z)) 14. 19 F fiske açısı nedeniyle oransal B 1 profiller için (faktör 1 / C hariç) aynıdır. Karşılıklılık 15, sinyal alımı sırasında spin eko sekansı (uyarma çevirme açısı α, sapma açısı 2α refocusing) 19 F sinyal yoğunluğu zayıflama Faraday ilkesine göre Rx (x, y, z) ~ α (x, y att olduğunu , z). Nedeniyle kusurlu uyarım zayıflama Tx (x, y, z) ~ 3 sin (α (x, y, z)) 16 bir att. Genel zayıflama att = attRx * attTx = α * günah 3 (α) / 90 ° olarak yazılır. Mükemmel 90 ° / 180 ° uyarma / odaklanma çevirmek açısı durumunda 1&#39;e normalize olduğunu unutmayın. B 1 düzeltilmiş19 F görüntü sinyal yoğunlukları SI 19F, 19F corr SI, corr (x, y, z) = SI 19F (x, y, z) / att (x, y, z) üzerinden hesaplanmaktadır. </li><li> Farklı deneylerden elde edilen sinyal yoğunluklarını karşılaştırmak görüş alanında tanımlanan F 19 konsantrasyonuna sahip bir referans tüpü yerleştirin ve referans ortalama sinyali SI 19F, corr normalleştirmek için. </li></ol></li></ol> Not: Diğer 1 HB 1 / flip açısı, haritalama yöntemleri kullanılabilir ve farklı 19 F darbe dizileri Tx, 19F att değişiklikler yapmak da gerekebilir. B1 düzeltme düzeni her türlü hücre miktar prosedüre ek hata tanıtacak. Doğru hücre miktar ana öncül ise, homojen B1 profili olan bir RF bobin protokol bu bölümü aşmak için kullanılabilir. 7. Görüntü İşleme <ol><li> 1 H ve 19 F bindirme görüntüleri Yapımı <ol><li> Resim verilerinison 1 H ve tarayıcıdan 19 F büyüklüğü görüntüler için. </li><li> Böyle ImageJ (ücretsiz, NIH) gibi bir görüntü işleme programında dosyaları açın. </li><li> Tüm görüntüler için aynı ayarlamaları tutarak gerekli (kırpma, parlaklık, kontrast) gibi görüntü ayarlamaları yapınız. 19 F görüntüler genellikle karşılık gelen 1 H görüntüleri maç için daha yüksek bir çözünürlüğe yükseltilmiş olması gerekir. </li><li> (Görüntü J &quot;görüntü&quot; menüsü altında, farklı bir görünüm tablosunu seçin) ve ardından sinyal lokalize amacıyla gelen 1 H görüntülerin üzerine bindirmek yanlış renkte 19 F görüntüleri Render. </li></ol></li><li> 19 F Kantitasyonu <ol><li> Ilgili hücreler ve görünür referans ile 19 F görüntüsü (büyüklüğü görüntü) seçin. </li><li> Gibi Image J gibi bir programda, ilgili hücreler, konu (gürültü) dışında referans ve bir bölge üzerinde İB&#39;leri çizin. </li><li> Komut analiz kullanınve sonra ölçün (veya basitçe Ctrl + M) bu bölgeler içinde ortalama piksel yoğunluğunu hesaplamak ve bunların alan. S (hücreler) hücrelerin üzerine ROI içindeki ortalama piksel yoğunluğunun bakınız olsun. Toplam sinyalini hesaplamak için hacim (= alan x dilim kalınlığı) ile çarpın. </li><li> SNR hesaplayın, formül SNR kullanarak, örneğin = 0.65 x S (hücre) / σ, burada σ (tipik olarak arka havada) herhangi bir kimyasal kayma dışlayıcı serbest olan örnek bir dış ROI içinde piksel yoğunluğunun standart sapmasıdır 17. SNR 5 altında ise, gürültü nedeniyle sinyal için bir düzeltme gerekli olabilir ve başka bir yerde 11, 10 tarif edildiği gibi gerçekleştirilebilir. </li><li> Aksi takdirde, referans 19 F konsantrasyonuna göre dilim kalınlığında (hacmi hesaplamak için) ile dilim referans alanı ile çarpılarak, referansa kıyasla ROI sinyal sorumlu 19 F toplam miktarının hesaplanması,bilinen ve homojen olduğu kabul edilmektedir. </li><li> Hücrelerin 19 F miktarını hesaplamak için, referansa kıyasla toplam sinyali ile bölünmesiyle hücreleri üzerinde ROI toplam sinyali, bu değeri çarpın. </li><li> Bölüm 2&#39;de hesaplanmıştır 19 F / hücre değeri tarafından bu sayı bölünerek hücre sayısını hesaplayın. </li></ol></li></ol>

<ol><li>Srinivas, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Imaging+of+cellular+therapies%5BTitle%5D)+AND+%22Adv.+Drug+Deliv.+Rev%22%5BJournal%5D)">Imaging of cellular therapies.</a> Adv. Drug Deliv. Rev. 62, 1080-1093 (2010).</li>
<li>de Vries, I. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Magnetic+resonance+tracking+of+dendritic+cells+in+melanoma+patients+for+monitoring+of+cellular+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">Magnetic resonance tracking of dendritic cells in melanoma patients for monitoring of cellular therapy.</a> Nat. Biotechnol. 23, 1407-1413 (2005).</li>
<li>Srinivas, M., Heerschap, A., Ahrens, E. T., Figdor, C. G., de Vries, I. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((MRI+for+quantitative+in+vivo+cell+tracking%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">MRI for quantitative in vivo cell tracking.</a> Trends Biotechnol. 28, 363-370 (2010).</li>
<li>Ruiz-Cabello, J., Barnett, B. P., Bottomley, P. A., Bulte, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fluorine+%2819F%29+MRS+and+MRI+in+biomedicine%5BTitle%5D)+AND+%22NMR+Biomed%22%5BJournal%5D)">Fluorine (19F) MRS and MRI in biomedicine.</a> NMR Biomed. 24, 114-129 (2011).</li>
<li>Stoll, G., Basse-Lusebrink, T., Weise, G., Jakob, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Visualization+of+inflammation+using+19F-magnetic+resonance+imaging+and+perfluorocarbons%5BTitle%5D)+AND+%22Wires+Nanomed.+Nanobiol%22%5BJournal%5D)">Visualization of inflammation using 19F-magnetic resonance imaging and perfluorocarbons.</a> Wires Nanomed. Nanobiol. 4, 438-447 (2012).</li>
<li>Srinivas, M., Boehm-Sturm, P., Figdor, C. G., de Vries, I. J., Hoehn, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Labeling+cells+for+in+vivo+tracking+using+%2819%29F%5BTitle%5D)+AND+%22MRI.+Biomaterials%22%5BJournal%5D)">Labeling cells for in vivo tracking using (19)F.</a> MRI. Biomaterials. 33, 8830-8840 (2012).</li>
<li>Ahrens, E. T., Flores, R., Xu, H., Morel, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+imaging+platform+for+tracking+immunotherapeutic+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">In vivo imaging platform for tracking immunotherapeutic cells.</a> Nat. Biotechnol. 23, 983-987 (2005).</li>
<li>Srinivas, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Customizable%2C+multi-functional+fluorocarbon+nanoparticles+for+quantitative+in+vivo+imaging+using+19F+MRI+and+optical+imaging%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">Customizable, multi-functional fluorocarbon nanoparticles for quantitative in vivo imaging using 19F MRI and optical imaging.</a> Biomaterials. 31, 7070-7077 (2010).</li>
<li>Boehm-Sturm, P., Mengler, L., Wecker, S., Hoehn, M., Kallur, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+tracking+of+human+neural+stem+cells+with+19F+magnetic+resonance+imaging%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">In vivo tracking of human neural stem cells with 19F magnetic resonance imaging.</a> PLoS One. 6, e29040(2011).</li>
<li>Srinivas, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+cytometry+of+antigen-specific+t+cells+using+%2819%29F%5BTitle%5D)+AND+%22MRI.+Magn.+Reson.+Med%22%5BJournal%5D)">In vivo cytometry of antigen-specific t cells using (19)F.</a> MRI. Magn. Reson. Med. , (2009).</li>
<li>Srinivas, M., Morel, P. A., Ernst, L. A., Laidlaw, D. H., Ahrens, E. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fluorine-19+MRI+for+visualization+and+quantification+of+cell+migration+in+a+diabetes+model%5BTitle%5D)+AND+%22Magn.+Reson.+Med%22%5BJournal%5D)">Fluorine-19 MRI for visualization and quantification of cell migration in a diabetes model.</a> Magn. Reson. Med. 58, 725-734 (2007).</li>
<li>Mangala Srinivas, E. T. A. Cellular labeling and quantification for nuclear magnetic resonance techniques. US patent. , 11787521 (2007).</li>
<li>Boehm-Sturm, P., Pracht, E. D., Aswendt, M., Henn, N., Hoehn, M. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aBoehm-Sturm%2C+P+%22Proceedings+of+the+International+Society+for+Magnetic+Resonance+in+Medicine%22">Proceedings of the International Society for Magnetic Resonance in Medicine</a>. , Melbourne, Australia. (2012).</li>
<li>Insko, E. K., Bolinger, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mapping+of+the+Radiofrequency+Field%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Magn.+Res.+A%22%5BJournal%5D)">Mapping of the Radiofrequency Field.</a> J. Magn. Res. A. 103, 82-85 (1993).</li>
<li>Haacke, E. M., Brown, R. W., Thompson, M. R. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aHaacke%2C+EM+%22Magnetic+resonance+imaging%3A+physical+principles+and+sequence+design%22">Magnetic resonance imaging: physical principles and sequence design</a>. , Wiley. (1999).</li>
<li>Scheffler, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+pictorial+description+of+steady-states+in+rapid+magnetic+resonance+imaging%5BTitle%5D)+AND+%22Concepts+Magn.+Res%22%5BJournal%5D)">A pictorial description of steady-states in rapid magnetic resonance imaging.</a> Concepts Magn. Res. 11, 291-304 (1999).</li>
<li>Firbank, M. J., Coulthard, A., Harrison, R. M., Williams, E. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+comparison+of+two+methods+for+measuring+the+signal+to+noise+ratio+on+MR+images%5BTitle%5D)+AND+%22Phys.+Med.+Biol%22%5BJournal%5D)">A comparison of two methods for measuring the signal to noise ratio on MR images.</a> Phys. Med. Biol. 44, 261-264 (1999).</li>
<li>de Chickera, S. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Labelling+dendritic+cells+with+SPIO+has+implications+for+their+subsequent+in+vivo+migration+as+assessed+with+cellular+MRI%5BTitle%5D)+AND+%22Contrast+Media+Mol.+Imaging%22%5BJournal%5D)">Labelling dendritic cells with SPIO has implications for their subsequent in vivo migration as assessed with cellular MRI.</a> Contrast Media Mol. Imaging. 6, 314-327 (2011).</li>
</ol>

Yazarlar ifşa etmek herhangi bir çıkar çatışmaları var.

Burada belirtilen protokol in vivo 19F MRI hücre takibi için genel prosedür açıklanmaktadır. Tarif edilen birlikte kuluçka yöntemi rağmen, 19F madde ile hücrelerin etiketlenmesi için çeşitli protokoller mevcuttur. Bununla birlikte, ko-inkubasyon en sık kullanılan ve daha fazla transfeksiyon ajanları 6 ilavesiyle, örneğin optimize edilebilir. Gerçek hücre etiketleme protokol, hücre tipine bağlı olacaktır. Sadece anahtar etiketleme adımları burada protokolde tarif edilmek...

Vivo hücre izleme hücresel tedavilerin 1 optimizasyonu ve izlenmesi için gereklidir. Nedeniyle invaziv olmayan doğası, görüntüleme in vivo hücreleri izlemek için mükemmel fırsatlar sunuyor. Manyetik Rezonans Görüntüleme (MRG) iyonizan radyasyon bağımsız ve üstün bir görüntü çözünürlüğü ve içsel yumuşak doku kontrast sağlar. MR-esaslı hücre izleme zaten melanom hastalarında 2 dendritik hücreler takip klinik olarak kullanılmıştır. Klasik klinik MRI dokularda mobil su içinde mevcut olan 1 H çekirdeği üzerinde gerçekleştirilir. Bu, örneğin 13 ° C, 19 23, F ve Na gibi diğer aktif çekirdekler, MRG gerçekleştirmek de mümkündür. Ancak, yalnızca 19 F MRI o 1 H. sonra en yüksek hassasiyeti sunuyor in vivo hücre izleme başarıyla uygulandı Dokularda tespit endojen MR-19 F olmaması için yüksek sinyal seçiciliğe izin verireksojen 19 F kontrast maddelerin tespiti ve olanak görüntü verileri doğrudan flor konsantrasyon ölçümü. 19 F MR ayrıntılı bir tartışma için, 3-5 bakın. 19 F MR ile önemli bir sorun birkaç etiketler modelli ajanları 6 yönünde bir eğilim ile, geliştirilmiş olmasına rağmen, uygun 19 F hücre etiketleri geliştirmek ve optimize etmek için ihtiyaçtır. Biz burada açıklamak protokol 10,11 izleme vivo niceliksel 19 F MR tabanlı hücre açıklanan ilk makalelerinde dahil olmak üzere grupları 7-9, tarafından yapılan çalışmalara dayanmaktadır. 19 F MRI kullanılarak hücre izleme genel prosedür, Şekil 1 &#39;de özetlenmiştir. Biz ısmarlama bir perflüorokarbon kontrast madde 8 kullanarak dendritik hücreler (DC) etiketleme ve görüntüleme için genel bir protokol açıklar. Görüntüleme protokol hücre tipleri, etiketler ve başka hayvan modelleri genel olarak uygulanabilir.Burada anlatılan hücre tipi ve hayvan modeli sadece bir örnek olarak alınmalı ve böylece hücre izolasyonu ve etiketleme ile ilgili ayrıntıları değil, görüntüleme protokolü odaklanmak değil. Değişiklikler, her etiket, hücre tipi, hayvan modeli ve görüntüleme kurulumu için gerekli olacaktır ve bu literatürde bulunabilir veya araştırmacılar tarafından optimize edilmesi gerekebilir. Bazı yaygın modifikasyonlar tartışma dahildir.

<table><tbody><tr><td colspan="4">REAGENTS</td></tr><tr><td>PBS</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>MFCD00131855</td><td></td></tr><tr><td>TFA</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>76-05-1</td><td></td></tr><tr><td>Ketamin (Ketavet)</td><td>Pfizer</td><td>778-551</td><td></td></tr><tr><td>Xylazine (Rompun)</td><td>Bayer</td><td>QN05 cm92</td><td></td></tr><tr><td>Ophtosan </td><td>Produlab Pharma</td><td>2702</td><td>göz merhemi</td></tr><tr><td colspan="4">Malzeme adı </td></tr><tr><td>MRI tarayıcı</td><td>Bruker Biospec</td><td></td><td></td></tr><tr><td>NMR spektrometresi</td><td>Bruker Biospec</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

hücre takip için vivo 19 f mrg

In vivo 19F MRI for Cell Tracking

19, in vivo olarak F MRI iyonlaştırıcı radyasyon kullanılmadan niceliksel hücre izleme sağlar. Bu insanlara uygulanabilen bir invazif olmayan bir tekniktir. Burada, biz cep etiketleme, görüntüleme ve görüntü işleme için genel bir protokol açıklar. Burada kemirgen bağışıklık hücrelerini izleme için tipik bir fare modeli üzerinde durulacak, ancak bu teknik, hücre tipleri ve çeşitli hayvan modelleri için de geçerlidir. Bu tüm modeller alakalı olarak hücre etiketleme için en önemli sorunlar, tarif edilmiştir. Ayrıntılar MRI sistemi ve bireysel özelliklerine bağlı olarak değişir, ancak Benzer bir şekilde, önemli bir görüntüleme parametreleri listelenmiştir. Son olarak, miktar tayini için bir görüntü işleme protokolü bulunmaktadır. Bu için Çeşitlemeler, ve diğer protokol kısımları, Tartışma bölümünde değerlendirilir. Burada açıklanan detaylar prosedüre göre, kullanıcı her özel hücre tipi, hücre etiket, hayvan modeli ve görüntüleme kurulum için protokol uyarlamak gerekir. Not potokol da sürece klinik sınırlamaları karşılandığı gibi, insan kullanımı için uyarlanabilir.

Burada bir lenf düğümüne güdümlü 19F-işaretli hücrelerin transferini içeren bir protokol için tipik sonuçları gösterir. Şekil 2, bir TFA referans kullanarak 10 6 etiketli hücre 19F NMR spektrumunu göstermektedir. Protokolü (Şekil 3) 'de tarif edildiği gibi görüntü ayar gerçekleştirilmiştir. In vivo görüntüleme için, fare ayakları arasına yerleştirilen hücreler için kullanılan aynı etiketin sızdırmaz şekilde kapalı bir silindir içeren bir referan...

Ex vivo olarak etiketlenmiş hücreler ile bir fare modelinde, MRI kullanılarak in vivo hücre takibi için genel bir protokol açıklar. Hücre etiketleme, görüntü alma ve işleme ölçümü için tipik bir protokol dahildir.

Hücre Takip için vivo 19 F MRG

In vivo 19F MRI allows quantitative cell tracking without the use of ionizing radiation. It is a noninvasive technique that can be applied to humans. ...

Bu prosedürün genel amacı, 19 FMRI kullanarak in vivo olarak 19 F etiketli hücrenin sayısını görüntülemek ve ölçmektir. Bu klinik veya klinik öncesi bir ortamda yapılabilir. Bu, ilk olarak hücrelerin uygun bir 19 F ajanı ile etiketlenmesiyle gerçekleştirilir.Bu çoğunlukla ex vivo olarak yapılır. İkinci adım, bilinen bir referansla 19 F ve MR kullanılarak yapılabilen hücre başına 19 F içeriğini ölçmektir. Hücre başına 19 F içeriğinin deney sırasında sabit kaldığı varsayılır, aksi takdirde düzeltme faktörlerinin hesaplanması gerekir.Daha sonra, konu, aktarılan etiketli hücreleri lokalize etmek için bir H ve 19 FMRI kullanılarak in vivo olarak görüntülenir. Görüntü verilerinden niceleme için bilinen bir referans ve uygun görüntüleme parametreleri gereklidir. Son adım, hücre sayısını hesaplamak için görüntü verilerini işlemektir.Mümkün olduğunda verileri doğrulamak için ex vivo histoloji veya diğer teknikler kullanılabilir. Sonuç olarak, in vivo hücre takibi için 19 FMRI, metinde belirtildiği gibi belirli varsayımlar göz önüne alındığında, aktarılan hücreleri ilgili süre boyunca lokalizasyonları ve sayıları açısından incelemek için kullanılabilir. Bu tekniğin, süper paramanyetik hücre

Research

JoVE Journal

Medicine

Tıp

Değerlendirilmesi için yeni kök hücre tedavileri ile enjekte edilen hücrelerin in vivo takip non-invaziv önemlidir. Bu video demir oksit bazlı kontrast ajanlar ile insan mezenkimal ve embriyonik kök hücreleri, in vivo sonraki MR, in vivo olarak nasıl etiketlemek için size gösterecektir.

Demir Oksit hESC ve hMSCs Etiketleme MR Görüntüleme in vivo Takip Non-Invasive Nanopartiküller

Bu çalışma, noninvaziv küçük hayvan MRG ve MRS temel prosedürler açıklanmaktadır.

Noninvaziv In Vivo Küçük Hayvan MRG ve MRS: Temel Deneysel Prosedürler

MRI kullanarak hücrelerin Takip geçmiş yıllarda kayda değer bir ilgi kazanmıştır. Bu protokol, flor ile dendritik hücrelerin etiketlenmesi açıklanmaktadır...

Kullanarak İzleme Dendritik Hücre Göç<sup&gt; 19</sup&gt; F /<sup&gt; 1</sup&gt; H Manyetik Rezonans Görüntüleme

Hematopoietik kök ve projenitör hücreler (HSPCs) ve kemik iliği niş arasındaki etkileşimin doğası tam olarak anlaşılamamıştır. Özel donanım modifikasyonları ve çok adımlı bir satın alma protokolü ex vivo görüntünün kemik iliği alanları içinde bağlantılı etiketli HSPCs, izleme etkileşimleri ve hareket için iki-foton ve konfokal mikroskopi kullanımına izin verir.

Yetişkin Fare Kalvaryal Kemik İliği içinde Hematopoietik kök hücrelerin Vivo 4-Boyutlu Takip

Monositler, doğuştan gelen bağışıklığın anahtar düzenleyicileridir ve periferik mononükleer fagositik sistemin yenilenmesinde ve iltihaplanma durumunda kritik bir rol oynarlar. Bu el yazması, monosit mobilizasyon mekanizmasını incelemek için fare kalvaria kemik iliğinin gerçek zamanlı görüntüleme prosedürünü açıklamaktadır.

Fare Kemik İliği monositlerin Takip<em&gt; İn Vivo</em

Sinirsel nüfus tarafından hızlandırılmış video mikroskobu esaslı bilgisayar yazılımı Post-processing takip izlemek için sağlam bir protokol açıklanmıştır. Bu yöntem canlı görüntüleme deneyler sırasında seçili bir popülasyondaki biyolojik olayları tanımlamak için güçlü bir araç temsil eder.

Tek hücreli Monitor hücre biyolojisi ve birden çok sinir nüfus Lineage ilerlemesini izleme ve ardından görüntüleme yaşamak

Biz kanseri metastaz preklinik vivo içinde takibi için bir iletişim kuralı tanımlamak. Non-invaziv [18F] tetrafluoroborate-evde beslenen hayvan ve aerodinamik ex vivo onay floresan bir protein tarafından algılanan sodyum iyodür simporter birleştiren bir radyonüklid Floresans muhabir dayanmaktadır. Preklinik in vivo hücre tümör biyolojisi izleme için uygun bir yöntemdir.

Kemirgen tümör modelleri ilerlemesinde tümör izlemek için Imaging radyonüklid Floresans muhabir gen

Orthotopic kafa içi enjeksiyon tümör hücrelerinin Beyin tümör biyolojisi, ilerleme, evrim ve terapötik yanıt çalışmaya kanser araştırmalarında kullanılmıştır. Burada gerçek zamanlı intravital görüntüleme ve miktar tümör preklinik glioblastoma modellerinde kitle sağlayan Floresans moleküler tomografi, tümör xenografts, mevcut.

Floresans moleküler tomografi Glioblastoma Xenografts in Vivo içinde görüntüleme için

Morfolojik değişiklikler, aktivasyon sonrasında bağışıklık duyarlı fibroblast hücrelerinde ortaya çıkar ve hücresel işe alma değişiklikleri teşvik. Genetik olarak tasarlanan fibroblast spesifik protein 1 (FSP1)-CRE ile birlikte 2-foton görüntülemenin kullanılması; tdtomato floxed-dur-floxed (TB/TB) fare hattı ve yeşil floresan etiketlenmiş lipopolisakkarid-fitc, biz dermal fibroblastlar ve morfolojik değişiklikler içinde lipopolisakkarid son derece spesifik alımı göstermek olabilir vivo.

İn vivo Iki renkli 2-foton görüntüleme genetiği etiketlenmiş Reporter hücrelerinin cilt içinde

Burada sunulan non-invaziv mezenkimal kök hücre için bir protokol (MSC) teslim ve travmatik beyin hasarı bir fare modeli nde izleme. Süperparamanyetik demir oksit nano partikülleri, msc etiketlemesi için manyetik rezonans görüntüleme (MRG) prob ve gerçek zamanlı MRG kullanılarak intranazal doğumdan sonra invaziv in vivo izleme için non-invaziv in vivo izleme olarak kullanılır.

Travmatik Beyin Hasarı Murine Modelinde İntranazal Doğum sonrası MRG kullanarak Süperparamanyetik Demir Oksit etiketli Mezenkimal Kök Hücrelerin Takibi

Hücre tedavisi, hasarlı dokuyu onarmak ve akciğer fonksiyonunu iyileştirmek için progenitör hücreleri kullanarak pulmoner fibroz için umut verici bir müdahale sunar. Görüntüleme, hücre entegrasyonunun izlenmesinde çok önemli bir rol oynadığından, burada, bir fare modelinde pulmoner fibroz için hücre tedavisinin manyetik parçacık görüntüleme kılavuzluğunda in vivo takibini açıklıyoruz.

Manyetik Parçacık Görüntüleme Kullanılarak Pulmoner Fibroz için Nakledilen Distal Akciğer Epitelyal Progenitör Hücrelerinin Görüntü Kılavuzluğunda In Vivo İzlenmesi

Öğrenin, 19F MRG kullanarak fare modelinde hücre takibi ve kantifikasyonu için invivo görüntüleme protokolü. Bu yöntem, hücre davranışlarını klinik ve preklinik ortamlarda inceler.

Hücre Takip için vivo ¹⁹ F MRG

Daha fazla video keşfet