Name: Bir Kuş Türlerinin Sindirim Sistemi geçtikten sonra Bulaşıcı prions belirlenmesi için prosedürler (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2013-11-06T21:30:00.000+00:00
Duration: 12 min
Description: Öğrenin, Amerikan kargalarının sindirim sisteminden geçen bulaşıcı prionların dışkıda tespit edilmesi yöntemini. Fare biyobelirteci ve western blot analizi ile bulaşıcılığı doğrulayın.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Biz bu çalışmada ve USDA kullanılan kargalar sağlamak için S. Werner teşekkür etmek istiyorum, APHIS, hayvan bakımı ve izlenmesi için WS, NWRC hayvan bakım personeli. Mansiyon veya bir ürünün kullanımı USDA onaylandığı anlamına gelmez. Bu çalışma için fon USDA, APHIS, Veteriner Hizmetleri tarafından sağlanmıştır.

Bizim protokol daha önce 7 yayınlanmış bir uyarlanmıştır. Hayvanları içeren tüm işlemler Amerika Birleşik Devletleri Tarım Bakanlığı (USDA), Hayvan ve Bitki Sağlığı Denetim Servisi (Aphis), Yaban Hayatı Hizmetleri (WS), Ulusal Yaban Hayatı Araştırma Merkezi (NWRC) Kurumsal Hayvan Bakım ve Kullanım Kurulu tarafından kabul edildi. 1.. Crow Gavaging <ol><li> Amerikan karga sindirim sistemi yoluyla &#39;sahte beyin malzemenin&#39; geçişi zamanı tahmin. <ol><li> Pişmiş ve (Şekil 1) gavaj iğne bir 2 kullanarak mavi boya ve sonda 1 karga ile tam pişmiş yumurta 5 ml karıştırın. </li><li> Mavi / yeşil-lekeli dışkı atılır ediliyor artık kadar Crow her 30 dakikada bir kontrol edin. </li></ol></li><li> Bulaşmamış ve ölümcül hasta RML (Chandler suşu) enfekte C57BL / 6 fare beyinleri edinin. </li><li> 1x bir kurşun blender homojenleştiricide normal bir% 20 ağırlık / hacim ve enfekte fare beyin Homojenat oluşturmakfosfat tamponlu tuzlu su (PBS) ve cam boncuklar, daha sonra daha büyük bir parçacık maddenin ayrılması için 1 dakika için 3000 x g &#39;de santrifüj. Süpernatantı ve steril PBS içinde bir% 10 ağırlık / hacim üretmek için 1x PBS eşit hacmi ile seyreltilir. Ihtiyaç kadar -80 ° C&#39;de dondurun. </li><li> Önce sonda 17 saat karga kalemler dışında, su değil gıda kaldırmak, ancak. </li><li> , Tedavi gruplarına rastgele tahsis karga ve oral gavaj iğnesi bir 2 kullanılarak, normal ya da enfekte ya da fare beyin homojenatının, 5 ml her karga sonda. </li><li> Transferi bireysel kafeslere kargalar ve 4 saat sonrası gavaj (Şekil 2) için her bir kafes içinde tüm dışkısını toplamak ve havuz. </li><li> Homojen bir doku elde edene kadar cam boncuk ile bir mermi blender homojenleştiricisinde her karga için toplandı dışkı homojenize. * Crow dışkı daha çok sıvı ve kolayca karıştırılabilir. </li><li> Her karga için, 10 ml&#39;lik toplam hacim 9.5 ml 1 x PBS içine dışkı homojenat 500 ul seyreltik. </li><li> Fekal homogena santrifüj1,400 x g&#39;de 15 dakika boyunca te ve süpernatant ekstrakte edin. </li><li> , Ikinci bir mikrobiyal enfeksiyon tehlikesini en aza indirmek homojenat 100 ul başına 100 birim 1 ul / ml penisilin ve 100 ug / ml streptomisin (Invitrogen, NY) ile tedavi edilmesi için daha sonra süpernatant azaltmak için 20 dakika boyunca oda sıcaklığında, UV ışığı altında yer viral ve bakteriyel kontaminasyon riski. UV maruz kaldıktan sonra, herhangi bir geri kalan mikropların membran bozulması için 30 saniye boyunca 70 ayar bir 3000 Mp sonikatör sonikasyon örnekleri. </li></ol> 2. Fare aşılama <ol><li> Şu tedavi gruplarında (Tablo 1) için fareler tahsis: <ol><li> Grup 1 - Tedavi ile farenin ağızdan 5 ml enfekte Fare beyinleri ile zorla ağız yolundan verilmiştir karga dışkı homojenat, 1 ml (IP) intraperitonal olarak aşılandı. </li><li> Grup 2 - negatif bir tedavi farenin ağızdan 5 ml normal fare beyinleri ile zorla ağız yolundan verilmiştir karga dışkı Homojenat 1 ml IP aşılandı. </li><li> Enfeksiyonlandı sulandırmak1:100 w / v 1x PBS için Grup 3 ve 4 için d ve normal fare beyni homojenatı. </li><li> Grup 3 - pozitif kontrol fareleri enfekte fare beyni homojenatından 1 ml IP olarak aşılanmıştır. </li><li> Grup 4 - Negatif kontrol fareleri, normal fare beyni homojenatından 1 ml IP olarak aşılanmıştır. </li></ol></li></ol><table border="1"><tbody><tr><td></td><td> Tedavi Grubu </td><td> Hayvanların sayısı </td></tr><tr><td> Grup 1 </td><td> Scrapie + Crow Dışkı </td><td> 100 </td></tr><tr><td> Grup 2 </td><td> Scrapie - Crow Dışkı </td><td> 25 </td></tr><tr><td> Grup 3 </td><td> Scrapie + Fare Beyin </td><td> 10 </td></tr><tr><td> Grup 4 </td><td> Scrapie - Fare Beyin </td><td> 5 </td></tr></tbody></table> . Tablo 1 Scrapie inokülumunun durumu (negatif pozitif +, -) ve hayvan sayısı 7 kullanılır. <ol start="2"><li> Periton fareyi aşılamak: <ol><li> Nazikçe Scruff başparmak ve işaret parmağı ile sırt boyun kürk fare ve ventral yüzü ortaya çıkarmak için döndürün. </li><li> Kafası biraz daha düşük, bu nedenle fare arka ucunu yükseltin. </li><li> 1 cm deri, orta hatta 1 cm lateraline aracılığıyla 25 G iğne yerleştirin ve 1-2 cm anterior sakroiliak eklem iğne kilitleme şırınga kullanarak. </li><li> 1 ml fare vücut boşluğuna yavaş inoküle enjekte edilir. </li></ol></li></ol> 3. Fare İzleme <ol><li> Onlar fare skrapinin klinik belirtilerini ifade kadar günlük fareler izleyin. Klinik bulgular içerebilir: kifoz, ataksi, sert kuyruk, bakım eksikliği, zayıflatma, ve uyuşukluk. </li><li> 0 görünür = yok, 1 = orta, 2 = şiddetli nerede görünür işaretler, belirgin olduğunda 6 klinik bulguların her biri için fareler skor. </li><li> Her oturum için günlük toplam puanları için 1 gün ≥ 8 ulaştığınızda fareler Euthanize, ≥ 6 sürekli olarak 3 gün boyunca, ya da 365 gün aşılama (dpi) göndermek. </li><li> Hasat beyinleri hemen aşağıdaki euthan-70 ° C&#39;de asya ve mağaza </li><li> , Bir scrapie teşhisi doğrulamak aşağıdaki gibi seyreltilmiş proteinaz-K çözeltisi (PK) içindeki bir 50 ug / ml &#39;lik 3 ul beyin örnekleri sindirimi için: 3.1. PK ul, 500 mM EDTA, 12.5 ul, pH 8, 45 ° C&#39;de 30 dakika boyunca 1x PBS 109,39 ul, daha sonra 8 ul yükleme tamponu ilave edildikten ve 5 dakika boyunca 95 ° C&#39;de inkübe edilerek örnekleri PK etkisiz hale getirirler. Bir% 12 SDS-PAGE jeli, Electrophorese ve oda sıcaklığında 1 saat boyunca PBS içerisinde% 0.2 Tween-20 içerisinde Immobilon PVDF membran ve% 5 yağsız süt ile bloğuna transfer üzerine yük örnekleri. Daha sonra, oda sıcaklığında 1 saat boyunca Superblock içerisinde seyreltilmiş Horseradish peroksidaz, konjuge edilmiş anti-PrP Bar224 monoklonal antikoru ile prob. PBS-% 0.2 Tween 20 ile, 1 saat boyunca membran durulayın. , Görselleştirmek bir G-box jel dokümantasyon sistemi üzerinde kemolüminesans ve görüntü ile Western Blot 5 dakika inkübe. </li></ol>

<ol><li>Prusiner, S. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Novel+proteinaceous+infectious+particles+cause+scrapie%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Novel proteinaceous infectious particles cause scrapie.</a> Science. 216 (4542), 136-144 (1982).</li>
<li>Miller, M. W., Williams, E. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Epizootiology+of+chronic+wasting+disease+in+free-ranging+cervids+in+Colorado+and+Wyoming%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Wildlife+Diseases%22%5BJournal%5D)">Epizootiology of chronic wasting disease in free-ranging cervids in Colorado and Wyoming.</a> Journal of Wildlife Diseases. 36 (4), 676-690 (2000).</li>
<li>Miller, M. W., Williams, E. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Horizontal+prion+transmission+in+mule+deer%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Horizontal prion transmission in mule deer.</a> Nature. 425 (6953), 35-36 (2003).</li>
<li>Sigurdson, C. J., Adriano, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chronic+Wasting+Disease%5BTitle%5D)+AND+%22Biochimica+et+Biophysica+Acta%22%5BJournal%5D)">Chronic Wasting Disease.</a> Biochimica et Biophysica Acta. 1772 (6), 610-618 (2007).</li>
<li>Miller, M. W., Williams, E. S., Hobbs, N. T., Wolfe, L. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Environmental+sources+of+prion+transmission+in+mule+deer%5BTitle%5D)+AND+%22Emerging+Infectious+Diseases%22%5BJournal%5D)">Environmental sources of prion transmission in mule deer.</a> Emerging Infectious Diseases. 10 (6), 1003-1006 (2004).</li>
<li>Mathiason, C. K., Hays, S. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Infectious+prions+in+pre-clinical+deer+and+transmission+of+chronic+wasting+disease+solely+by+environmental+exposure%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+ONE%22%5BJournal%5D)">Infectious prions in pre-clinical deer and transmission of chronic wasting disease solely by environmental exposure.</a> PLoS ONE. 4 (6), e5916(2009).</li>
<li>VerCauteren, K. C., Pilon, J. L., Nash, P. B., Phillips, G. E., Fischer, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prion+remains+infectious+after+passage+through+digestive+system+of+American+crows+%28Corvus+crachyrhunchos%29%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+ONE%22%5BJournal%5D)">Prion remains infectious after passage through digestive system of American crows (Corvus crachyrhunchos).</a> PLoS ONE. 7 (10), e45774(2012).</li>
<li>Imran, M., Mahmood, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+overview+of+animal+prion+diseases%5BTitle%5D)+AND+%22Virology+Journal%22%5BJournal%5D)">An overview of animal prion diseases.</a> Virology Journal. 8 (493), (2011).</li>
<li>Watts, J. C., Balachandran, A., Westaway, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+expanding+universe+of+prion+disease%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+PATHOGENS%22%5BJournal%5D)">The expanding universe of prion disease.</a> PLoS PATHOGENS. 2 (3), e26(2006).</li>
<li>Bruce, M. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transmissions+to+mice+indicate+that+%27new+variant%27+CJD+is+caused+by+the+BSE+agent%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Transmissions to mice indicate that 'new variant' CJD is caused by the BSE agent.</a> Nature. 389 (6650), 498-501 (1997).</li>
<li>Ryder, S., Dexter, G., Bellworty, S., Tongue, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Demonstration+of+lateral+transmission+of+scrapie+between+sheep+kept+under+natural+conditions+using+lymphoid+tissue+biopsy%5BTitle%5D)+AND+%22Research+in+Veterinary+Science%22%5BJournal%5D)">Demonstration of lateral transmission of scrapie between sheep kept under natural conditions using lymphoid tissue biopsy.</a> Research in Veterinary Science. 76 (2004), 211-217 (2004).</li>
<li>Collinge, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+risk+of+prion+zoonoses%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">The risk of prion zoonoses.</a> Science. 335 (6067), 411-413 (2012).</li>
<li>Beringue, V., Vilotte, J. L., Laude, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prion+agent+diversity+and+species+barrier%5BTitle%5D)+AND+%22Veterinary+Research%22%5BJournal%5D)">Prion agent diversity and species barrier.</a> Veterinary Research. 39 (47), (2008).</li>
<li>Harrington, R. D., Baszler, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+species+barrier+limits+transmission+of+chronic+wasting+disease+to+mink+%28Mustela+vison%29%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+General+Virology%22%5BJournal%5D)">A species barrier limits transmission of chronic wasting disease to mink (Mustela vison).</a> The Journal of General Virology. 89 (4), 1086-1096 (2008).</li>
<li>Wisniewski, H. M., Sigurdarson, S., Rubenstein, R., Kascsak, R. J., Carp, R. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mites+as+vectors+for+scrapie%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet%22%5BJournal%5D)">Mites as vectors for scrapie.</a> Lancet. 347 (9008), 1114(1996).</li>
<li>Post, K., Riesner, D., Walldorf, V., Mehlhorn, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fly+larvae+and+pupae+as+vectors+for+scrapie%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet%22%5BJournal%5D)">Fly larvae and pupae as vectors for scrapie.</a> Lancet. 354 (9194), 1969-1970 (1999).</li>
<li>Matthews, D., Cooke, B. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+potential+for+transmissible+spongiform+encephalopathies+in+non-ruminant+livestock+and+fish%5BTitle%5D)+AND+%22Revue+Scientifique+Et+Technique-Office+International+Des+Epizooties%22%5BJournal%5D)">The potential for transmissible spongiform encephalopathies in non-ruminant livestock and fish.</a> Revue Scientifique Et Technique-Office International Des Epizooties. 22 (1), 283-296 (2003).</li>
<li>Jennelle, C. S., Samuel, M. D., Nolden, C. A., Berkley EA, <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Deer+carcass+decomposition+and+potential+scavenger+exposure+to+chronic+wasting+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Wildlife+Management%22%5BJournal%5D)">Deer carcass decomposition and potential scavenger exposure to chronic wasting disease.</a> Journal of Wildlife Management. 73 (5), 655-662 (2009).</li>
<li>Scherbel, C., Pichner, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Degradation+of+scrapie+associated+prion+protein+%28PrPSc%29+by+the+gastrointestinal+microbiota+of+cattle%5BTitle%5D)+AND+%22Veterinary+Research%22%5BJournal%5D)">Degradation of scrapie associated prion protein (PrPSc) by the gastrointestinal microbiota of cattle.</a> Veterinary Research. 37 (5), 695-703 (2006).</li>
<li>Jeffrey, M., Gonzaález, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transportation+of+prion+protein+across+the+intestinal+mucosa+of+scrapie+susceptible+and+scrapie-resistant+sheep%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Pathology%22%5BJournal%5D)">Transportation of prion protein across the intestinal mucosa of scrapie susceptible and scrapie-resistant sheep.</a> Journal of Pathology. 209 (1), 4-14 (2006).</li>
<li>Nicholson, E. M., Richt, J. A., Rasmussen, M. A., Hamir, A. N., Lebepe-Mazur, S., Horst, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Exposure+of+sheep+scrapie+brain+homogenate+to+rumen-simulating+conditions+does+not+result+in+a+reduction+of+PrP%28Sc%29+levels%5BTitle%5D)+AND+%22Letters+in+Applied+Microbiology%22%5BJournal%5D)">Exposure of sheep scrapie brain homogenate to rumen-simulating conditions does not result in a reduction of PrP(Sc) levels.</a> Letters in Applied Microbiology. 44 (6), 631-636 (2007).</li>
<li>Motes C, M. aluquerde, Grassi, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Excretion+of+BSE+and+scrapie+prions+in+stools+from+murine+models%5BTitle%5D)+AND+%22Veterinary+Microbiology%22%5BJournal%5D)">Excretion of BSE and scrapie prions in stools from murine models.</a> Veterinary Microbiology. 131 (1-2), 205-211 (2008).</li>
<li>Kruger, D., Thomzig, A., Lenz, G., Kampf, K., McBride, P., Beekes, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Faecal+shedding%2C+alimentary+clearance+and+intestinal+spread+of+prions+in+hamsters+fed+with+scrapie%5BTitle%5D)+AND+%22Veterinary+Research%22%5BJournal%5D)">Faecal shedding, alimentary clearance and intestinal spread of prions in hamsters fed with scrapie.</a> Veterinary Research. 40 (1), 4(2009).</li>
<li>Mathiason, C. K., Nalls, A. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Susceptibility+of+domestic+cats+to+chronic+wasting+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Virology%22%5BJournal%5D)">Susceptibility of domestic cats to chronic wasting disease.</a> Journal of Virology. 87 (4), 1947-1956 (2013).</li>
<li>Bjorndal, K. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Flexibility+of+digestive+responses+in+two+generalist+herbivores%2C+the+tortoises+Geochelone+carbonaria+and+Geochelone+denticulate%5BTitle%5D)+AND+%22Oecologia%22%5BJournal%5D)">Flexibility of digestive responses in two generalist herbivores, the tortoises Geochelone carbonaria and Geochelone denticulate.</a> Oecologia. 78 (3), 317-321 (1989).</li>
<li>Clark, R. G., Gentle, G. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Estimates+of+grain+passage+time+in+captive+mallards%5BTitle%5D)+AND+%22Canadian+Journal+of+Zoology%22%5BJournal%5D)">Estimates of grain passage time in captive mallards.</a> Canadian Journal of Zoology. 68 (11), 2275-2279 (1990).</li>
<li>Dierenfeld, E. S., Koontz, F. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Feed+intake%2C+digestion+and+passage+of+proboscis+monkey+%28Nasalis+larvatus%29+in+captivity%5BTitle%5D)+AND+%22Primates%22%5BJournal%5D)">Feed intake, digestion and passage of proboscis monkey (Nasalis larvatus) in captivity.</a> Primates. 33 (3), 399-405 (1992).</li>
<li>Thompson, A. K., Samuel, M. D., Van Deelen, T. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Alternative+feeding+strategies+and+potential+disease+transmission+in+Wisconsin+white-tailed+deer%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Wildlife+Management%22%5BJournal%5D)">Alternative feeding strategies and potential disease transmission in Wisconsin white-tailed deer.</a> Journal of Wildlife Management. 72 (2), 416-421 (2008).</li>
<li>Pulford, B., Spraker, T. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Detection+of+PrPCWD+in+feces+from+naturally+exposed+Rocky+Mountain+elk+%28Cervus+elaphus+nelsoni%29+using+protein+misfolding+cyclic+amplification%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Wildlife+Diseases%22%5BJournal%5D)">Detection of PrPCWD in feces from naturally exposed Rocky Mountain elk (Cervus elaphus nelsoni) using protein misfolding cyclic amplification.</a> Journal of Wildlife Diseases. 48 (2), 425-433 (2012).</li>
<li>Hicks, R. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Guano+deposition+in+an+Oklahoma+crow+roost%5BTitle%5D)+AND+%22Condor%22%5BJournal%5D)">Guano deposition in an Oklahoma crow roost.</a> Condor. 81 (3), 247-250 (1979).</li>
<li>Aldous, S. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Winter+habits+of+crows+in+Oklahoma%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Wildlife+Management%22%5BJournal%5D)">Winter habits of crows in Oklahoma.</a> Journal of Wildlife Management. 73 (4), 290-295 (1944).</li>
</ol>

Çıkar çatışması ilan etti.

Biz karga sindirim sistemi yoluyla PrP Res malzemenin geçişini belgelemek için bir prosedür ortaya koymaktadır. Biz kargalar hastalıksız coğrafi bölgelere PrP Res malzeme translokasyonunda yeteneğine sahip olup olmadığını belirlemek için geleneksel yöntemleri kullanılır. Diğerleri bunu ortadan kaldırmak için başarısız ikisi de 19-21 ve kemirgen 22,23 sindirim sıvıları, geviş PrP Res direncini değerlendirdik. Onlar da potansiyel leş PrP Res malzeme karşıla...

Bulaşıcı Süngerimsi Ensefalopati (TSE) yaban hayatı etkileyen ölümcül bulaşıcı nörodejeneratif hastalıklar, evcil hayvanlar ve insanlar vardır. TSE hastalıkları, bulaşıcı madde prion proteinlerinin 1 yanlış katlanmış veya patojenik izoformu (PrP S) olduğu görülmektedir. Koyun ve keçilerde scrapie;; sığır süngersi ensefalopati (TSE Hayvan hastalıkları karaca (Odocoileus hemionus), beyaz kuyruklu geyik (Odocoileus virginianus), geyik (Cervus elaphus) ve geyik (Alces alces) kronik israf hastalığı (CWD) içerir yerli sığırlarda BSE); Yetiştirilmiş vizon transmissible vizon ensefalopati; kedilerde feline süngerimsi ensefalopati; primatlarla 8 ve süngerimsi ensefalopati; egzotik hayvanat bahçesinde egzotik toynaklı süngerimsi ensefalopati aile Bovidae ruminates. Tek bir insan TSE hastalığı, Creutzfeldt-Jakob hastalığı, nadir ve PrP Res-Kirlenmiş alıcı tarafından satın alınması için düşünülmüşated gıda 9. Kontamine sığır 10 tüketilen Benzer şekilde, eğer BSE insanları enfekte edebilir. Tüm TSE hastalıkları, scrapie ve CWD hayvandan hayvana 2,3,11 yanı sıra çevresel kaynaklardan 4-6 olduğu tahmin edilmektedir kendini idame ettiren ve salgın enfeksiyon kaynakları ile sadece iki tanesi. Araştırma çoğu TSE hastalıkları klinik bulguların tezahürü PrP Res malzemenin doğal maruz olaylardan önemli uzun kuluçka dönemleri gerektiren 2-4,6,8 ve belirgin tür engelleri en aza indirmek, ancak, türler arası iletim 12-14 potansiyelini ortadan kaldırmak olmadığını göstermektedir . Bulaşıcı prion (PrP Res) malzeme yayılması için mekanizmalar belirlenmesi TSE hastalıkları manzara karşısında nasıl hareket hakkında soruları yanıtlayan için son derece önemlidir. Deneysel araştırmalar 15,16, kümes hayvanları ve domuz 17, ve Amerikan kargaları (Corvus eşyaları böcekler düşündürmektedirhyrhynchos) 7,18 PrP Res malzemenin pasif taşıyıcılar veya dağıtıcılar bulunmaktadır. Karga sindirim sistemi yoluyla PrP Res malzemenin geçişi geçenlerde TSE hastalıkları 7 dağılması oynayabileceği rolü göstererek, belgelenmiştir. Bu sonuçlar, kargalar, bir çöpçü, karşılaşma olabilir o akla yatkın hale tüketmek, ve hastalıksız bölgelere, dışkı biriktirme yoluyla bulaşıcı malzeme taşımak. Burada göstermek prosedürler kargalar sindirim sistemi yoluyla PrP Res malzemenin geçişini belgelemek için kullanılan ve büyük ölçüde gelecekteki ilgili araştırmalarda diğer çöpçü ve etobur türe özgü modeller için bu yöntemlerin uygulanmasını kolaylaştıracaktır. Bu çalışmada, geleneksel yöntemler PrP Res malzemenin yayılması ve genel yüküne katkıda bulunabilecek PrP ​​Res malzeme kaçakçılığı bir alışılmamış araçlar araştırmak için kullanılmıştır.

<table><tbody><tr><td>RML Chandler suşu fareye uyarlanmış scrapie</td><td>Rocky Mountain Laboratories</td><td></td><td></td></tr><tr><td>RC57BL / 6 fareler</td><td>Hilltop Lab Hayvanları</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Amerikan kargaları</td><td>vahşi yakalandı</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Kalem / Strep</td><td>Invitrogen</td><td>15140-122</td><td></td></tr><tr><td>Fosfat tamponlu Salin</td><td>Invitrogen</td><td>70011-044</td><td></td></tr><tr><td>Sonikatör</td><td>Misonix</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Proteinaz-K çözeltisi</td><td>Roche</td><td>3115887001</td><td></td></tr><tr><td>Yükleme tamponu</td><td>Invitrogen</td><td>NP0007 ve 0009</td><td></td></tr><tr><td>Bis-tris SDS SAYFA% 12 jel</td><td>Invitrogen</td><td>NP0342</td><td></td></tr><tr><td>Immobilon PVDF membran</td><td>Millipore</td><td>1SEQ00010</td><td></td></tr><tr><td>Tween 20</td><td>Sigma Aldrich</td><td>P2287</td><td></td></tr><tr><td>Bullet blender homojenizatör</td><td>Braintree Scientific</td><td>BBX24B</td><td></td></tr><tr><td>2.3 mm Zirkonya/silika boncuk</td><td>BioSpec Ürünler</td><td>11079125Z</td><td></td></tr><tr><td>Bar224 anti-PrP monoklonal antikor</td><td>Cayman Chemical</td><td>10009035</td><td></td></tr><tr><td>Superblock</td><td>Thermo Scientific</td><td>37517</td><td></td></tr><tr><td>kemilüminesan substrat</td><td>Millipore WBKLS0500</td><td></td><td></td></tr><tr><td>G-box jel dokümantasyon sistemi</td><td>Syngene</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

bir kuş türlerinin sindirim sistemi geçtikten sonra bulaşıcı prions belirlenmesi için prosedürler

Procedures for Identifying Infectious Prions After Passage Through the Digestive System of an Avian Species

Bulaşıcı prion (PrP Res) malzeme olasılıkla ölümcül, nörodejeneratif Bulaşıcı süngerimsi ensefalopati (TSE) hastalıklar 1 nedenidir. Bu tür kronik halsizlik hastalığı (CWD) ve TSE hastalıkları, Transmission, hayvan 2,3 hayvana hem de çevresel kaynaklarından 4-6 olduğu tahmin edilmektedir. Süpürücüleri ve etobur tüketim ve CWD kirlenmiş leş boşaltım yoluyla PrP Res malzemeyi translokasyonunda potansiyele sahiptir. Son çalışma Amerikan kargalar sindirim sistemi (Corvus brachyrhynchos), ortak bir Kuzey Amerika çöpçü 7 ile PrP Res malzemenin geçişini belgelemiştir. Biz Amerikan kargalar aracılığıyla PrP Res malzemenin geçişini belgelemek için kullanılan prosedürleri açıklamaktadır. Kargalar RML-deformasyon fare adapte skrapili zorla ağız yolundan ve onların dışkı 4 saat sonrası sonda toplandı. Crow dışkı içine daha sonra bir araya getirilmiş ve periton içine enjekte edildiC57BL / 6 fareleri. Bu fare skrapinin klinik belirtileri ifade edilmiş ve daha sonra kurban edilmiştir kadar Fareler, günlük olarak izlendi. Asemptomatik fareler 365 gün Aşıdan kadar takip edildi. Western Blot analizi hastalık durumunu teyit etmek için yapılmıştır. Sonuçlar prionların testi farelerde hastalığa neden kargalar sindirim sistemi yoluyla seyahat sonra bulaşıcı kalır ve dışkı mevcut olduğunu ortaya çıkarmıştır.

Kullanılan prosedürler karga sindirim sistemi scrapie beyin homojenatı 7 arasında oral gavaj sonrası PrP Res enfekte 4 saat ortadan etmediğini göstermektedir. PrP Res malzeme ile zorla ağız yolundan verilmiştir olan tüm yirmi karga, daha sonra farelere dışkı yoluyla PrP Res malzeme aktarılır. Hastalıklı farelerin fare klinik işaretler ve scrapie hastalık onay Western blot analizi ile tamamlandı tezahürü ile belirlenmiştir. Karga tarafından yutulur ...

Süpürücüleri hastalıksız bölgelere kendi dışkılarıyla bulaşıcı bulaşıcı süngerimsi ensefalopati prionları translokasyonunda potansiyele sahiptir. Biz fare adapte skrapi prıonlar Amerikan kargalar sindirim sisteminde (Corvus brachyrhynchos), ölü hayvanların ortak bir tüketici olsa geçtikten sonra bulaşıcı kalırsa belirlemek için kullanılan ayrıntı yöntemleri.

Bir Kuş Türlerinin Sindirim Sistemi geçtikten sonra Bulaşıcı prions belirlenmesi için prosedürler

Infectious prion (PrPRes) material is likely the cause of fatal, neurodegenerative transmissible spongiform encephalopathy (TSE) diseases1. Transmission ...

Bu prosedürün genel amacı, enfeksiyöz PreOn materyalinin Amerikan Kargalarının sindirim sisteminden geçişini belgelemektir. Bu, ilk olarak kargaları bulaşıcı PreOn materyali ile ölçerek gerçekleştirilir. İkinci adım, karga dışkısını gavajdan sonraki dört saat boyunca toplamak ve farelere enjeksiyona hazırlamaktır.Daha sonraki fareler, bir mililitre karga dışkı homojenatı ile intraperitoneal olarak aşılanır. Son adım, farelerin klinik belirtilerini ifade edene kadar fareleri günlük olarak izlemektir. Sonuç olarak, fare modelinde enfeksiyöz PreOn'un varlığını doğrulamak ve hastalık bulaşmasını doğrulamak için western blot analizi kullanılır.Kargaların taşıyabileceği fikri. CWD bize bir kış günü, biraz araştırma yaptığımız ve yolda ölen geyiklerin kargalar tarafından beslendiğini gördüğümüz tutsak bir geyik tesisine gittikten sonra geldi ve o günün ilerleyen saatlerinde, kargalar gökyüzünden hiçbir yerden çıkmadı, bu yem oluklarına indi, geyiğin hemen yanında beslendi, geyiğin tükettiği tahılın üzerine dışkılama yaptı, literatürden elde edilen gözlemlerin üzerine çok şey söyledi. Colorado'da yaz, Wyoming'de kışın New Mexico'da yoğun bir bölgede kargalar, öyle oluyor ki New Mexico'daki

procedures-for-identifying-infectious-prions-after-passage-through

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

İmmünoloji ve Enfeksiyon

Burada hemen arındırıcı intraperitoneal aşılama ve floresan sonra enjeksiyon yerinde alımı ve hareket izleme ve bu olaylara aracılık eden hücreler karakterize enfekte beyin malzeme toplanan prion çubuklar etiketleme prion alımı ve ticareti bağışıklık hücreleri tarafından izlenmesi için yeni bir tahlil açıklar.

İntraperitoneal Enfeksiyon sonra Bağışıklık Hücreleri Ticareti Floresan Prion Çubuklar Saat İzlenmesi

Bu çalışmada, taşınabilir bir RRT-PCR sistemi kullanarak vahşi kuşlarda kuş gribi teşhisi açıklamaktadır. Bu yöntem, bir salgın senaryosunun tipik olmayan bir laboratuar ortamında yabani kuşlar, ekrana dondurularak kurutulmuş reaktifler yararlanır. Moleküler araçlarını kullanın, hızlı tanı için doğru ve hassas alternatifler sunuyor.

Yabani Kuşlar Kuş Gribi Virüsü Hızlı Teşhis: Alanında Taşınabilir RRT-PCR ve Dondurulmuş kuru Reaktifler Kullanımı

Kuş Gribi Virüsler RNA, korumak, tespit ve sıra için bir yöntem doğrulanmış ve kuşların doğal dışkı örnekleri kullanarak uzatıldı. Bu teknik, bir soğuk zincir ve bulaşıcı virüslerin taşıma sürdürmenin gerekliliğini ortadan kaldırır ve 96-iyi bir yüksek verimli kurulum yapılabilir.

Kuş FTA Kartları İnfluenza Sürveyans: Alan Yöntemleri, Biyogüvenlik ve Ulaşım Sorunları çözüldü

Source: Brauer, R. et al., Influenza Virus Propagation in Embryonated Chicken Eggs. J. Vis. Exp. (2015)This video demonstrates the synthesis and harvest of the influenza virus in fertilized chicken eggs. The virus is inoculated into the allantoic cavity, where it replicates in epithelial cells and buds into the allantoic fluid, which is then collected and stored for downstream applications.

Propagation and Harvest of Influenza Virus from a Fertilized Chicken Egg

Bu videoda, immünohistokimya kullanılarak beyin kesitlerinde yanlış katlanmış prion proteinini tespit etmek için kullanılan bir teknik gösterilmektedir. Prionları denatüre etmek ve enfeksiyon riskini en aza indirmek için beyin bölümünün formik asit ile muamele edilmesinin yanı sıra ısıya bağlı epitop alımı kullanılarak prion agregatlarının maskesi çıkarıldıktan sonra, kesitler yanlış katlanmış prion protein agregatları için immüno-etiketlenir ve mikroskop altında gözlemlenir.

Beyin Dokusundaki Anormal Prion Proteinlerinin İmmünohistokimya Kullanılarak Saptanması

Koyun ve keçilerde klasik ve atipik kazıyıcın tespitine yardımcı olmak için kısa bir klinik muayene protokolü sunulmaktadır.

Koyunlarda Atipik ve Klasik Sıyrık Tespit Etmek için Klinik Muayene Protokolü

Prion hastalıklarının türler arası bulaşmasının önündeki engeli ölçmek zordur ve tipik olarak hayvan zorluklarını veya biyokimyasal analizleri içerir. Burada, tür engellerini tahmin etme yeteneğine sahip bir in vitro prion protein dönüşüm testi sunuyoruz.

Bir ile Bulaşıcı Süngerimsi Ensefalopati Türler Engelleri değerlendirilmesi<em&gt; İn Vitro</em&gt; Prion Proteini Dönüştürme Deneyi

Burada, bir basit, hızlı ve verimli prion amplifikasyon tekniği, gerçek zamanlı dönüştürme (RT zlı) gökyüzünden kaynaklı yöntemi açıklamak için bir iletişim kuralı mevcut.

Gerçek zamanlı depremin dönüşüm tahlil CWD Prionlar fekal madde olarak algılanması için kaynaklı

Burada cerrahi olarak tavuk küçük bağırsaklarında 'bağırsak ve birleştirilmiş döngüler' oluşturmak için bir iletişim kuralı mevcut. Bu yordam, birden çok Clostridium perfringens suşları virülans in situ tek bir ana bilgisayar karşılaştırılması için verir. Bu yöntem belirgin tavuk genellikle benzer in vivo deneyler için gerekli sayısını azaltır.

Clostridium Perfringens virülans çalışmaya imzalat belirli patojen ücretsiz tavuk ve birleştirilmiş bağırsak döngü modelinde

İmmünohistokimya protokollerini kullanarak anormal prion proteininin immüno-etiketlemesi, spesifik numune ve anti-PrP antikor hazırlama metodolojileri gerektirir. Bu protokol, uygun PrP immün etiketlemesini sağlamak ve spesifik olmayan arka plan boyamasını en aza indirmek için epitop demasking işlemindeki temel adımları açıklamaktadır. Ayrıca, bu yaklaşım, prion ile enfekte olmuş dokularla immünohistokimya çalışmaları yaparken biyogüvenlik önlemlerini de göz önünde bulundurur.

İmmünohistokimya ile Anormal Prion Proteininin Saptanması

Prion kontaminasyonu ve etkili dekontaminasyon için laboratuvar ortamlarında yaygın olarak kullanılan alanları değerlendirmek için bir yöntem eksiktir. Burada açıklanan protokol, belirli laboratuvarların bireysel ihtiyaçlarını karşılamak için kolayca değiştirilebilen bir laboratuvar prion güvenlik kaydırma testinin uygulanması için temel temelleri sağlar.

Prion Güvenlik Laboratuvarı Kaydırma Testi

Öğrenin, Amerikan kargalarının sindirim sisteminden geçen bulaşıcı prionların dışkıda tespit edilmesi yöntemini. Fare biyobelirteci ve western blot analizi ile bulaşıcılığı doğrulayın.

Bir Kuş Türlerinin Sindirim Sistemi geçtikten sonra Bulaşıcı prions belirlenmesi için prosedürler

Daha fazla video keşfet